CN115645369A - 一种肺精准靶向的脂质体纳米粒复合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及一种肺精准靶向的脂质体纳米粒复合物及其制备方法和应用。本发明经过研究发现氯化二亚苯基碘鎓、脂质体磷脂、胆固醇混合制备的脂质纳米材料系统可以把编码正常基因mRNA特异性地递送到肺部巨噬细胞以及内皮细胞用于肺部疾病尤其肺纤维化的干预治疗。该递送体系组织特异性高，为治疗肺部疾病的“难以成药”的靶点提供了潜在的机会。在治疗包括特发性肺纤维化在内的多种呼吸系统疾病方面有效降低药物治疗对其他组织的毒副作用，表现出巨大的临床应用前景，因此具有良好的潜在应用之价值。

Description

一种肺精准靶向的脂质体纳米粒复合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及一种肺精准靶向的脂质体纳米粒复合物及其制备方法和应用。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

感染性肺疾病是呼吸系统疾病中最为广泛的一类疾病，一般分为原发性感和继发性感染性肺病。许多基础疾病，例如肺囊性纤维化、哮喘等均可激发肺部感染。抗生素治疗是感染性肺疾病的常规治疗手段，但存在药物利用率低、部分药物易发生耐药的缺陷，一些药物需静脉滴注或者雾化给药，患者依从性差。既往研究表明，纳米药物递送系统在提高递送效率、降低机体耐药性和药物毒性、简化给药方式等方面具有独特优势。

近年来随着药物递送体系的不断发展，脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles，LNPs)是脂质载体给药系统中的重要技术之一，已成为基于寡核苷酸治疗药物的一个重要进展。封装在脂质纳米颗粒中的寡核苷酸在传递过程中受到保护，不受酶降解，并有效地传递到细胞中，在细胞中载体颗粒中的内容物被释放并被翻译为治疗蛋白。mRNA、siRNA和pDNA是常见的寡核苷酸内容药物。含有mRNA的LNPs也是目前开发应用的几种COVID-19疫苗的基础。因此LNPs对基于寡核苷酸的治疗具有巨大的革命性潜力，新一波研究人员正在追求基于LNPs更有针对性的应用。选择性器官靶向(SORT)的策略应用于多种类型的脂质纳米颗粒系统的改造，通过添加辅助的SORT分子来专门编辑肝外组织。靶向肺、脾和肝的SORT脂质纳米颗粒被设计成选择性编辑治疗相关的细胞类型，包括上皮细胞、内皮细胞、B细胞、T细胞和肝细胞。SORT可兼容多种基因编辑技术，包括mRNA、Cas9mRNA/single guide RNA和Cas9核糖核蛋白复合物，有利于开发在靶组织中的蛋白质替代和基因校正疗法。脂质纳米颗粒(LNP)作为运送载体将遗传信息递送到肝脏的研究已经表现出良好的效果。然而，将包装的“货物”精准递送到肝脏以外的组织中尤其肺部组织仍然是一个需要解决的挑战。

随着肺部药物递送系统领域的研究进展迅猛发展，目前用于肺部感染性疾病治疗的纳米药物递送系统(DDSs)的研究仍集中于所包覆的核心药物的改进和纳米载体的表面修饰。例如近年获批上市的脂质体药物-阿米卡星脂质体，该药物是仅有的少数几种被批准上市并且具有确切临床疗效的纳米药物制剂，是肺部纳米药物递送系统的重要突破，但其仅可用于鸟分枝杆菌复合群肺病(MAC)的治疗，并且具有潜在的临床风险，需要进一步评估。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种肺精准靶向的脂质体纳米粒复合物及其制备方法和应用。本发明研究发现，氯化二亚苯基碘鎓作为辅助选择性器官靶向(SORT)分子用于纳米颗粒制备可以精准实现肺部靶向定位。通过使用质谱成像，小鼠体内荧光成像等技术手段证实该纳米脂质颗粒系统可以特异性的实现肺部靶向递送，并且稳定表达荧光素蛋白，维持mRNA的稳定性保证其实现肺部组织特异性的表达。从而为临床肺部疾病的治疗提供了一种简单、安全、有效的药物递送方法。基于上述研究成果，从而完成本发明。

为了实现上述技术目的，本发明提供的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供氯化二亚苯基碘鎓(DPI)作为肺靶向定位分子在制备药物中的应用。

所述药物可以为用于预防和/或治疗呼吸系统(尤其是肺部)相关疾病的药物。

本发明的第二个方面，提供一种用于精准靶向肺组织的脂质纳米递药系统，所述脂质纳米递药系统至少包括氯化二亚苯基碘鎓(DPI)，其作为选择性器官靶向(SORT)分子参与脂质纳米体系；所述药物活性成分包括选自核酸、肽、蛋白质、脂质、化学化合物、其生物类似物、其生物优化物、其生物衍生物及其生物等效物中的至少一种；优选地，所述药物活性成分为核酸或核酸类似物；优选地，所述核酸或核酸类似物为siRNA、mRNA、shRNA、lncRNA、pDNA、poly IC、CpG或环状二核苷酸。

本发明通过研究发现，本发明脂质纳米递药系统组织特异性高，能够将药物活性成分特异性地递送到肺部巨噬细胞以及内皮细胞，用于呼吸系统，如肺部疾病尤其肺纤维化等相关疾病的干预治疗。

本发明的第三个方面，提供上述脂质纳米递药系统的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将DPI、脂质体所需辅料加入含有药物活性成分的乙酸钠-乙醇缓冲液中；

S2、步骤S1制得产物经透析后即得脂质纳米递药系统。

本发明的第四个方面，提供一种预防和/或治疗呼吸系统相关疾病的方法，所述方法包括：向受试者施用上述脂质纳米递药系统。

上述一个或多个技术方案的有益技术效果：

上述技术方案经过研究发现氯化二亚苯基碘鎓、脂质体磷脂、胆固醇混合制备的脂质纳米材料系统可以把编码正常基因mRNA特异性地递送到肺部巨噬细胞以及内皮细胞用于肺部疾病尤其肺纤维化的干预治疗。该递送体系组织特异性高，为治疗肺部疾病的“难以成药”的靶点提供了潜在的机会。在治疗包括特发性肺纤维化在内的多种呼吸系统疾病方面有效降低药物治疗对其他组织的毒副作用，表现出巨大的临床应用前景。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1为本发明实施例中DPI作为SORT分子在活体体内的器官组织定位分布图。A中左侧未加氯磷酸脂质体处理，右侧在巨噬细胞清除条件下，肺部未检测到DPI质谱响应信号；B为通过分离图A中对应的小鼠肺泡灌洗液分析氯磷酸脂质体清除巨噬细胞的效率；C为不同处理条件下的相对信号强度统计图。

图2为本发明实施例中Cy3荧光素标记的DPI(Cy3-DPI)在小鼠体内活体成像荧光定位。A为Cy3-DPI结构；B为不同处理条件下的荧光药物的分布情况；C为解剖小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器的荧光成像图；D为分离获得的相应细胞荧光成像图。

图3为本发明实施例中DPI作为选择性器官靶向(SORT)分子制备纳米粒复合物，包裹萤火虫荧光酶mRNA实现肺靶向精准递送表达。A为DPI靶向肺部示意图；B为不同处理条件下的小鼠活体成像图；C为解剖小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器的荧光成像图；D为分离获得的相应细胞荧光成像图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

现结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明的一个典型具体实施方式中，提供氯化二亚苯基碘鎓(DPI)作为肺靶向定位分子在制备药物中的应用。

所述药物可以为用于预防和/或治疗呼吸系统(尤其是肺部)相关疾病的药物，所述药物其活性成分可以选自核酸、肽、蛋白质、脂质、化学化合物、其生物类似物、其生物优化物、其生物衍生物及其生物等效物中的至少一种；进一步的，所述药物活性成分为核酸或核酸类似物；进一步的，所述核酸或核酸类似物为siRNA、mRNA、shRNA、lncRNA、pDNA、polyIC、CpG或环状二核苷酸；

所述药物还包括可药用载体。所述可药用载体可为病毒、微囊、脂质体或聚合物及其任意组合。所述可药用载体的递送载剂可为脂质体、生物相容性聚合物(包括天然聚合物和合成聚合物)、脂蛋白、多肽、多糖、脂多糖、人工病毒包膜、无机(包括金属)颗粒、以及细菌或病毒(如杆状病毒、腺病毒和逆转录病毒)、噬菌体、黏粒或质粒载体；进一步的，所述可药用载体为脂质体。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于精准靶向肺组织的脂质纳米递药系统，所述脂质纳米递药系统至少包括氯化二亚苯基碘鎓(DPI)，其作为选择性器官靶向(SORT)分子参与脂质纳米体系；所述药物活性成分包括选自核酸、肽、蛋白质、脂质、化学化合物、其生物类似物、其生物优化物、其生物衍生物及其生物等效物中的至少一种；优选地，所述药物活性成分为核酸或核酸类似物；优选地，所述核酸或核酸类似物为siRNA、mRNA、shRNA、lncRNA、pDNA、poly IC、CpG或环状二核苷酸。

本发明的又一具体实施方式中，所述脂质纳米递药系统还包括形成脂质体所需辅料，包括但不限于胆固醇、二油酰基卵磷脂(DOPC)、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(mPEG2000-DMG)等；所述脂质体所需辅料与药物活性成分的质量比为20:(1～10)。

本发明的又一具体实施方式中，所述氯化二亚苯基碘鎓、胆固醇、二油酰基卵磷脂(DOPC)、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(mPEG2000-DMG)其质量比为(1～10):30:10:(1～5)。

本发明通过研究发现，本发明脂质纳米递药系统组织特异性高，能够将药物活性成分特异性地递送到肺部巨噬细胞以及内皮细胞，用于呼吸系统，如肺部疾病尤其肺纤维化等相关疾病的干预治疗。

本发明的又一具体实施方式中，提供上述脂质纳米递药系统的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将DPI、脂质体所需辅料加入含有药物活性成分的乙酸钠-乙醇缓冲液；

S2、步骤S1制得产物经透析后即得脂质纳米递药系统。

其中，所述步骤S1中，所述脂质体所需辅料包括但不限于胆固醇、二油酰基卵磷脂(DOPC)和1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(mPEG2000-DMG)；所述氯化二亚苯基碘鎓、胆固醇、二油酰基卵磷脂(DOPC)、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(mPEG2000-DMG)其质量比为(1～10):30:10:(1～5)；优选为10:30:10:2；所述脂质体所需辅料与药物活性成分的质量比为20:(1～10)；

所述步骤S2中，透析中使用透析袋的截留分子量为3000-4000MWCO(优选为3500MWCO)，透析过程中使用的溶液体系为PBS缓冲液(10mM，pH 7.4)，透析过夜即得，从而保证大分子量的LNP保留在袋内。

本发明的又一具体实施方式中，提供一种预防和/或治疗呼吸系统相关疾病的方法，所述方法包括：向受试者施用上述脂质纳米递药系统。

所述呼吸系统相关疾病尤指肺部相关疾病，包括肺部慢性炎症性疾病(如慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘)；肺部感染性疾病(如细菌性肺炎、真菌性肺炎和病毒性肺炎)；肺结核；肺部肿瘤；支气管扩张；间质性肺病(如特发性肺纤维化)。

所述受试者是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选指哺乳动物，最优选指人。

以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中为注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件进行。实施例中使用材料部分展示如下：

1.C57BL/6小鼠(北京维通利华)

2.1,2-二碘苯(上海毕得医药科技有限公司)

3.4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸乙酯(南京娇子藤科学器材有限公司)

4.双三苯基磷二氯化钯(郑州艾克姆化工有限公司)

6.间氯过氧苯甲酸(安徽泽升科技有限公司)

7.三氟甲磺酸(天津希恩思奥普德科技有限公司)

8.荧光素(懋康生物)

9.氯磷酸脂质体(翌圣)

10.PBS(索莱宝)

11.红细胞裂解液(索莱宝)

12.DMEM高葡萄糖培养基(Gibco)

13.PECAM-1抗体(Abcam)

实施例

新型肺靶向的LNP合成：

使用微流体混合仪将DPI、胆固醇、二油酰基卵磷脂(DOPC)，1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(mPEG2000-DMG)分别按照质量比10:30:10:2加入含有萤火虫荧光素酶mRNA的乙醇钠-乙醇缓冲溶液(pH 5.2，25mM)中。活性类脂质与萤火虫荧光素酶mRNA的最终含量比设定为10：1(w/w)，制备的脂质纳米颗粒(LNP)进一步针对(PBS)(10mM，pH 7.4)使用截留分子量为3500MWCO的透析袋浸入磷酸盐缓冲溶液PBS中置于4℃下透析过夜，保证大分子量的LNP保留在袋内。

DPI-cy3合成：

S1.将1,2-二碘苯(2mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸乙酯(1mmol)、双三苯基磷二氯化钯(0.05mmol)和碳酸氢钠(3mmol)在四氢呋喃/水(3ml+3ml)的溶液中在70℃在氩气下搅拌过夜。将上述反应混合物用乙酸乙酯提取，用饱和氯化钠洗涤2次，有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，残余物通过柱色谱纯化。

S2.将S1(1mmol)溶解在四氢呋喃(3ml)中，然后加入3M氢氧化钠溶液，在50℃下剧烈搅拌混合物，直到所有S1被消耗。然后用3M盐酸溶液中和混合物并用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和氯化钠洗涤、用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。

S3.在含S2(0.1mmol)的二氯甲烷(1mL)的悬浮液中加入间氯过氧苯甲酸(1.5mmol)和三氟甲磺酸(3mmol)，将混合物在室温下搅拌2小时。然后将反应混合物在真空中干燥。将残留物重新悬浮在干燥的乙醚中，过滤收集固体并用乙醚洗涤。

质谱成像

S1.制备质谱成像器官切片：取新鲜收集的小鼠组织(脑，心，肺，肝，肾和脾脏)并用OCT冰冻切片包埋剂速冻包埋起来，使用冷冻切片机将器官切割成10μm厚度薄片并贴附于载玻片上。将制备好的载玻片冻存于-80℃过夜。次日，将切片干燥1小时，随后进行IMS检测。

S2.使用AFADESI离子源(AFAI-MSI，北京维克托)和Q-轨道拉普质谱仪(QExactive，赛默飞，德国)进行IMS分析。喷雾溶剂为乙腈和水的混合物(4：1，v/v)，流速5μL/min，单向扫描速度200μm/s。m/z范围100-600，质量分辨率70，000。图像分析使用质量成像仪1.0进行。

小鼠活体荧光成像

取适宜浓度的Luc mRNA-LNPs经尾静脉注射进入C57BL/6小鼠体内，6h后，采用美国PerkinElmer公司的小动物活体三维光学成像分析系统观测。观测前使用35mg/kg戊巴比妥钠麻醉小鼠，使用脱毛膏脱去小鼠腹部毛发，按150mg/kg体重的量尾静脉注射D-荧光素，10min后，进行活体成像，观察Luc mRNA-LNPs分布情况。

小鼠肺泡灌洗液中巨噬细胞的分离

在小鼠处死后，解剖颈部以暴露气管。静脉留置针沿向心方向穿刺进入气管，用1mL注射器吸取0.8mL PBS缓冲液，通过静脉留滞针缓慢推入肺部，再缓慢回抽，反复冲洗3遍，将收集到的肺部灌洗液500g 4℃离心10分钟，弃去上清，裂解红细胞，用1mL含有1％BSA的PBS重悬细胞沉淀，获得原代肺巨噬细胞。

小鼠内皮细胞的分离

在小鼠安乐死后，将小鼠浸没在70％乙醇中，解剖，将肺组织储存在5mL DMEM高葡萄糖培养基中。将器官移到培养皿中，清除脂肪或多余的组织。将切碎的器官转移到含有5mL胶原酶的10mL离心管中，并在37℃水浴中孵育1小时。使用70μm一次性细胞过滤器过滤，离心，将沉淀重新悬浮在1mL 0.1％BSA中，使用PECAM-1抗体通过免疫沉淀分离得到肺内皮细胞。

试验结果

图1显示DPI在m/z 278.9665下[M+H]+离子的光学和质谱图像。适宜浓度DPI经尾静脉注射进入小鼠体内6h后，取脏器做质谱成像。小鼠在DPI注射前用氯磷酸脂质体处理72h以清除体内巨噬细胞。A左侧未加氯磷酸脂质体处理，图像显示DPI集中分布在肺部巨噬细胞，其他脏器未有分布。右侧在巨噬细胞清除条件下，肺部未检测到DPI质谱响应信号，B通过分离A中对应的小鼠肺泡灌洗液分析氯磷酸脂质体清除巨噬细胞的效率，结果表明氯磷酸脂质体预先处理72h可以成功去除肺泡中80％以上的巨噬细胞。图1证明DPI在小鼠体内特异性靶向分布肺部巨噬细胞。

图2为Cy3荧光素标记的DPI在小鼠体内活体成像荧光定位。首先合成Cy3-DPI分子(A)，并且使用适宜浓度Cy3-DPI经尾静脉注射进入小鼠体内，注射6h后给小鼠腹腔注射麻醉药物。将其俯卧位平放于小动物多光谱活体成像系统的记录暗箱中，记录动物在体内发射荧光的成像图片，分析荧光药物的分布情况(B)。记录结束后迅速解剖小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，进行成像(C)，之后分离细胞同样进行细胞成像(D)。图A显示Cy3-DPI分子结构，B显示Cy3-DPI在小鼠肺部特异性分布。C与D进一步证明Cy3-DPI在小鼠体内特异性靶向分布肺部巨噬细胞；

图3为DPI作为选择性器官靶向分子制备纳米粒复合物，包裹萤火虫荧光酶mRNA实现肺靶向精准递送表达。A为DPI靶向肺部示意图。LNPs制备过程中DPI、胆固醇、DOPC、mPEG2000-DMG之间的摩尔比为50:38.5:10:1.5。小鼠在LNPs注射前用氯磷酸脂质体处理72h以清除体内巨噬细胞。在注射后6小时，向小鼠尾静脉注射150mg/kg D-荧光素，10分钟后进行小鼠活体成像分析。与对照组相比，未加氯磷酸脂质体处理的小鼠图像显示LNPs集中分布在肺部，其他脏器未有分布。在巨噬细胞清除后，肺部未检测到LNPs质谱响应信号(B)。活体成像后，解剖小鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器，进行成像(C)。进一步，分离细胞，进行细胞成像(D)。未加氯磷酸脂质体处理的细胞图像显示LNPs有很强的荧光信号。巨噬细胞清除后，荧光信号消失。上述结果证明DPI纳米粒复合物在小鼠体内特异性靶向分布肺部巨噬细胞.

本发明未尽事宜为公知技术。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.氯化二亚苯基碘鎓作为肺靶向定位分子在制备药物中的应用；所述药物为用于预防和/或治疗呼吸系统(包括肺部)相关疾病的药物。

2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物其活性成分选自核酸、肽、蛋白质、脂质、化学化合物、其生物类似物、其生物优化物、其生物衍生物及其生物等效物中的至少一种；进一步的，所述药物活性成分为核酸或核酸类似物；进一步的，所述核酸或核酸类似物为siRNA、mRNA、shRNA、lncRNA、pDNA、poly IC、CpG或环状二核苷酸。

3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物还包括可药用载体；所述可药用载体为病毒、微囊、脂质体或聚合物及其任意组合。

4.一种用于精准靶向肺组织的脂质纳米递药系统，其特征在于，所述脂质纳米递药系统至少包括氯化二亚苯基碘鎓，其作为选择性器官靶向分子参与脂质纳米体系。

5.如权利要求4所述的脂质纳米递药系统，其特征在于，所述脂质纳米递药系统其药物其活性成分选自核酸、肽、蛋白质、脂质、化学化合物、其生物类似物、其生物优化物、其生物衍生物及其生物等效物中的至少一种；进一步的，所述药物活性成分为核酸或核酸类似物；进一步的，所述核酸或核酸类似物为siRNA、mRNA、shRNA、lncRNA、pDNA、poly IC、CpG或环状二核苷酸。

6.如权利要求4所述的脂质纳米递药系统，其特征在于，所述脂质纳米递药系统还包括形成脂质体所需辅料，包括胆固醇、二油酰基卵磷脂和1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000。

7.如权利要求6所述的脂质纳米递药系统，其特征在于，所述氯化二亚苯基碘鎓、胆固醇、二油酰基卵磷脂、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000其质量比为(1～10):30:10:(1～5)；所述脂质体所需辅料与药物活性成分的质量比为20:(1～10)。

8.权利要求4-7任一项所述脂质纳米递药系统的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

S1、将DPI、脂质体所需辅料加入含有药物活性成分的乙酸钠-乙醇缓冲液中；

S2、步骤S1制得产物经透析后即得脂质纳米递药系统。

9.如权利要求8所述制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述脂质体所需辅料包括胆固醇、二油酰基卵磷脂和1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000，所述氯化二亚苯基碘鎓、胆固醇、二油酰基卵磷脂(DOPC)、1,2-二肉豆蔻酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000其质量比为(1～10):30:10:(1～5)；所述脂质体所需辅料与药物活性成分的质量比为20:(1～10)；

所述步骤S2中，透析中使用透析袋的截留分子量为3000-4000MWCO，透析过程中使用的溶液体系为PBS缓冲液，透析过夜即得。

10.一种预防和/或治疗呼吸系统相关疾病的方法，其特征在于，所述方法包括：向受试者施用权利要求4-7任一项所述脂质纳米递药系统；

所述呼吸系统相关疾病包括肺部相关疾病，进一步包括肺部慢性炎症性疾病(包括慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘)；肺部感染性疾病(包括细菌性肺炎、真菌性肺炎和病毒性肺炎)；肺结核；肺部肿瘤；支气管扩张；间质性肺病(包括特发性肺纤维化)。

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