CN115607554B - 羽扇豆酮在制备预防和治疗心、肝、脾脏损伤制品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供前述羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤制品中的应用，为防治三高人群心、肝、脾脏损伤药物的研发提供新的思路，还包括羽扇豆酮制备防治心、肝、脾脏病变保健品的应用，羽扇豆酮易得，可带动药材资源的充分开发和利用。具体的是羽扇豆酮可降低模型大鼠血清中LDH、CK‑MB、ALT、AST和ANG‑Ⅱ的含量，还能改善大、小鼠心肌组织损伤，减轻心肌细胞坏死溶解；改善肝细胞水肿及肝血窦内炎性；减轻脾脏白髓异常增生。对心、肝、脾组织病变具有保护和修复的作用。
Description
技术领域
本发明涉及羽扇豆酮的新用途，具体为羽扇豆酮在制备预防和治疗心、肝、脾脏损伤制品中的应用。
背景技术
三高是高血脂、高血压、高血糖的总称，研究表明这三者临床疾病的聚集并非偶然。1988年美国著名内分泌专家Reaven将高血糖中的胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖耐量异常，高血脂中的高甘油三脂血症和高血压统称为“X综合征”，即医学界一般说的代谢综合征。
随着肥胖和代谢综合征患病率的迅速增长，非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）已成为我国第一大慢性肝病，其发病常与胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、向心性肥胖、2型糖尿病及血脂异常等多种因素相关。长期糖脂代谢紊乱、血脂异常还易并发心脏、血管、肾脏及神经等多个器官组织病变。此外，肥胖也是罹患心血管疾病的重大危险因素，肥胖会导致机体出现系统性、低水平慢性炎症，从而发生心肌缺血、心肌细胞坏死、心室重塑、心肌纤维化形成及心肌收缩功能减低，最终导致肥胖心肌损伤。2型糖尿病多被认为其病位在肺、脾及肾。2型糖尿病患者过多的糖源和脂类物质堆积会引起肝脏的变性，导致肝脏结构和功能的异常。因此，寻找能同时防治心、肝、脾脏病变的药物是医学科学者普遍关注的热点问题。
目前，现有专利（专利号：CN102716135B）只有报道了羽扇豆酮能够预防治疗糖尿病，改善糖耐量的作用，但并无报道羽扇豆酮具有治疗心、肝、脾脏损伤的作用，特别是三高人群心、肝、脾脏损伤的作用。
发明内容
本发明的目的在于，提供羽扇豆酮在制备预防和治疗心、肝、脾脏损伤制品中的应用，为三高人群心、肝、脾脏损伤防治药物的研发提供新的思路，羽扇豆酮易得，可带动药材资源的充分开发和利用。为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
羽扇豆酮在制备预防和治疗心、肝、脾脏损伤制品中的应用。
羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤制品中的应用。
前述羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤制品中的应用，所述损伤包括：改善心肌组织损伤，减轻心肌细胞坏死溶解；改善肝细胞水肿及肝血窦内炎性；减轻脾脏白髓异常增生，降低血清中LDH、CK-MB、ALT、AST和ANG-Ⅱ 的含量。
具体的说，前述羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤制品中的应用，所述羽扇豆酮的分子式为：C30H48O，分子量为：424，结构式为：
一种制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤的制品，所述药物原料中包含羽扇豆酮。
一种制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤的制品，所述药物主要由羽扇豆酮制备而成。
前述预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤制品的制备方法，取羽扇豆酮与药物中可接受的辅料进行组合，按照常规方法进行加工，制成相应的药物。
所述药物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或丸剂。
前述的应用，所述制品包括药品或保健品。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明公开了前述羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群心、肝、脾脏损伤制品中的应用，本发明实验证明，羽扇豆酮能改善模型大鼠心肌组织损伤，减轻心肌细胞坏死溶解；改善肝细胞水肿及肝血窦内炎性；减轻脾脏白髓异常增生，还能明显降低血清中LDH、CK-MB、ALT、AST和ANG-Ⅱ 的含量（见表1、表2、表3），表明羽扇豆酮对心、肝及脾脏损伤有明显的改善作用。
实验例
一、羽扇豆酮对大鼠心、肝及脾脏组织病理形态学的影响
1.1试药试剂
羽扇豆酮（贵州中医药大学药物分析实验室制备，纯度≥98 %）；厄贝沙坦（赛诺菲制药有限公司，国药准字号J20171089，批号：8A424）；盐酸二甲双胍片（中美上海施贵宝制药有限公司，批号：ABY4026）；STZ(链脲佐菌素)购自Sigma公司（批号：90718）；苏木素（批号：BA4097）、伊红（批号：BA4099）由珠海贝索生物科技有限公司提供；无水乙醇（批号：100092683）、二甲苯（批号：1330-20-7）、中性树胶（批号：10004160）由国药集团化学试剂有限公司提供；盐酸（南京化学试剂有限公司，批号：7647-01-0）氨水（上海凌峰化学试剂有限公司，批号：1336-21-6）；血管紧张素Ⅱ（Rat Angiotensin II ELISA kit，货号：CSB-E04494r，cusabio）；肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)测定试剂盒（批号：142622001）、乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（批号：142721008）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒（批号：140222001）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（批号：140122002）由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供。
1.2仪器
血液生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：BS-240VET）；组织脱水机（型号：PQT-A）、组织包埋机（型号：PBM-A）、组织摊片机（PHY-Ⅲ）由常州普瑞斯星医疗器械有限公司提供；病理切片机（型号：RM2235）由上海徕卡仪器有限公司提供；显微镜（型号：Nikon H550S）由日本尼康提供。
供试药物的准备
1.3.1受试药物的制备：配制羽扇豆酮溶液，羽扇豆酮高剂量(8mg/kg)、羽扇豆酮中剂量(4mg/kg)、羽扇豆酮低剂量组(2mg/kg)，给药体积为0.5mL/100g。
1.3.2厄贝沙坦阳性药物的制备：厄贝沙坦片，取1片约0.15g与适量水配制成溶液，给药剂量为50mg/kg。
1.3.3盐酸二甲双胍阳性药物的制备：盐酸二甲双胍片，取一片约0.5g与适量的水配制成溶液，给药剂量为200mg/kg。
1.4造模方法
雄性SD大鼠，体重220g左右，在饲养观察室里适应性饲养7d后，取10只作为正常对照组，喂以基础饲料，其余大鼠喂以高糖高脂饲料，连续喂养6周，禁食不禁水12 h后，第1次以35 mg/kg的剂量腹腔注射STZ溶液，正常对照组腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。次日，禁食不禁水12 h后，第2次以30 mg/kg的剂量腹腔注射STZ溶液，正常对照组腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。一周后，禁食不禁水12 h，尾静脉采血，检测空腹血糖，选择空腹血糖≥11.1 mmol/L的大鼠确定为模型大鼠。
分组
取造模成功的大鼠按随机原则分成7组：模型对照组、盐酸二甲双胍组、厄贝沙坦组、羽扇豆酮高剂量组、羽扇豆酮中剂量组、羽扇豆酮低剂量组、加上正常对照组共为7组，分别灌胃给药6周(正常对照组和模型对照组给予同体积的蒸馏水，盐酸二甲双胍组和厄贝沙坦组给予阳性药物)。
检测和结果
1.6.1乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）
末次给药后，模型对照组、盐酸二甲双胍组、羽扇豆酮高剂量组、羽扇豆酮中剂量组、羽扇豆酮低剂量组、加上正常对照组大鼠用4 %的戊巴比妥经腹腔注射麻醉后，腹主动脉采血，置于采血管内，离心，取上层血清进行检测。
使用血液生化分析仪检测血清中肌酸磷化酶-同功酶MB（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）水平（结果见表1、表2）：
表1 各组大鼠血清中LDH和CK-MB含量（`X±S，n=8）
| 组别 | LDH（U/L） | CK-MB（U/L） |
| 正常对照组 | 863.025±165.44 | 468.39±39.40 |
| 模型对照组 | 1408.85±318.57△△ | 702.71±134.42△△ |
| 盐酸二甲双胍组 | 972.14±162.48** | 510.34±93.12** |
| 羽扇豆酮高剂量组 | 1094.58±200.44** | 511.94±99.21** |
| 羽扇豆酮中剂量组 | 904.58±256.04** | 539.48±175.28** |
| 羽扇豆酮低剂量组 | 824.61±211.40** | 489.39±120.57** |
注：与正常对照组比较：∆∆表示P<0.01；与模型对照组比较：**表示P<0.01
由表1结果可知，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中LDH含量和CK-MB含量水平极显著升高（P<0.01）。与模型对照组比较，羽扇豆酮高、中、低剂量组大鼠血清中LDH含量和CK-MB含量极显著性降低（P<0.01），结果表明羽扇豆酮可降低大鼠血清中LDH和CK-MB的含量。
表2 各组大鼠血清中ALT和AST含量（`X±S，n=8）
| 组别 | ALT（U/L） | AST（U/L） |
| 正常对照组 | 27.73±5.02 | 108.80±11.29 |
| 模型对照组 | 78.03±17.11△△ | 153.36±37.24△△ |
| 盐酸二甲双胍组 | 61.43±10.07** | 114.63±20.16** |
| 羽扇豆酮高剂量组 | 56.48±11.19** | 111.89±16.06** |
| 羽扇豆酮中剂量组 | 61.46±8.86** | 112.71±17.99** |
| 羽扇豆酮低剂量组 | 53.96±7.43** | 109.50±14.51** |
注：与正常对照组比较：∆∆表示P<0.01；与模型对照组比较：**表示P<0.01
由表2可知，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中ALT、AST含量水平极显著升高（P<0.01）。与模型对照组比较，羽扇豆酮高、中、低剂量组大鼠血清中ALT、AST含量极显著性降低（P<0.01），结果表明羽扇豆酮可降低大鼠血清中ALT和AST的含量。
血管紧张素Ⅱ（ANG-Ⅱ）水平
末次给药后，模型对照组、厄贝沙坦组、羽扇豆酮高剂量组、羽扇豆酮中剂量组、羽扇豆酮低剂量组、加上正常对照组大鼠用4 %的戊巴比妥经腹腔注射麻醉后，腹主动脉采血，置于采血管内，离心，取上层血清进行检测。采用酶联免疫吸附法（Elisa）测定样本中血管紧张素Ⅱ（ANG-Ⅱ）水平（结果见表3）。
表3 各组大鼠血清中ANG-Ⅱ含量（`X±S，n=8）
| 组别 | ANG-Ⅱ（pg/ml） |
| 正常对照组 | 55.06±9.87△△ |
| 模型对照组 | 199.09±21.16** |
| 厄贝沙坦组 | 97.27±17.91** |
| 羽扇豆酮高剂量组 | 140.26±20.75** |
| 羽扇豆酮中剂量组 | 132.66±17.02** |
| 羽扇豆酮低剂量组 | 177.05±22.50* |
注：与正常对照组比较：∆∆表示P<0.01；与模型对照组比较：*表示P＜0.05，**表示P<0.01
由表3可知，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中ANG-Ⅱ含量水平极显著升高（P<0.01）。与模型对照组比较，羽扇豆酮高、中剂量组大鼠血清中ANG-Ⅱ含量极显著性降低（P<0.01）；羽扇豆酮低剂量组大鼠血清中ANG-Ⅱ含量显著性降低（P＜0.05）。结果表明羽扇豆酮可降低大鼠血清中ANG-Ⅱ的含量。
羽扇豆酮对大鼠心、肝及脾脏组织病理形态学的影响
取“1.6.2”项下大鼠，处死大鼠，迅速取各组大鼠心、肝及脾脏组织固定于4%多聚甲醛24h以上，取心脏组织进行HE染色观察，结果如图1所示，空白组大鼠心肌细胞排列整齐，无心肌纤维的破坏，细胞间隙正常，未见水肿，细胞质染色均匀，细胞核完整。模型对照组大鼠心肌细胞排列紊乱，肌浆溶解，细胞间隙明显增宽，局部心肌细胞肌原纤维溶解消失坏死，细胞质颜色变浅。与模型对照组比较，羽扇豆酮高、中剂量组大鼠心肌组织病理损伤均明显改善，心肌细胞坏死溶解明显减轻；羽扇豆酮低剂量组大鼠部分心肌细胞存在水肿。
大鼠解剖后，取肝脏组织进行HE染色观察，结果如图2所示，空白组大鼠肝组织中肝细胞形态结构正常未见水肿、未见炎性灶。模型对照组大鼠肝细胞大量水肿，肝血窦内出现炎性灶。与模型对照组比较，羽扇豆酮高剂量组大鼠肝组织中肝细胞形态结构正常，明显改善水肿；羽扇豆酮中、低剂量组大鼠肝细胞水肿及肝血窦内炎性未得到改善。
大鼠解剖后，取脾脏组织进行HE染色观察，结果如图3所示，空白组大鼠脾脏结构正常，未见明显异常。模型对照组大鼠白髓异常增生。与模型对照组比较，羽扇豆酮高剂量组大鼠脾脏结构基本正常，未见明显异常；羽扇豆酮中、低剂量组大鼠脾脏部分白髓异常增生。
1.7结论：
羽扇豆酮能改善模型大鼠心肌组织损伤，减轻心肌细胞坏死溶解；改善肝细胞水肿及肝血窦内炎性；减轻脾脏白髓异常增生，还能降低血清中LDH、CK-MB、ALT、AST和ANG-Ⅱ的含量。展示羽扇豆酮对心、肝、脾脏病变具有防治作用。
二、羽扇豆酮对小鼠心、肝及脾脏组织病理形态学的影响
2.1试药试剂
羽扇豆酮（贵州中医药大学药物分析实验室制备，纯度≥98 %）；厄贝沙坦（赛诺菲制药有限公司，国药准字号J20171089，批号：8A424）；苏木素（批号：BA4097）、伊红（批号：BA4099）、油红染液（批号：BA4081）由珠海贝索生物科技有限公司提供；无水乙醇（批号：100092683）、二甲苯（批号：1330-20-7）、中性树胶（批号：10004160）由国药集团化学试剂有限公司提供；盐酸（南京化学试剂有限公司，批号：7647-01-0）氨水（上海凌峰化学试剂有限公司，批号：1336-21-6）。
仪器
组织脱水机（型号：PQT-A）、组织包埋机（型号：PBM-A）、组织摊片机（PHY-Ⅲ）由常州普瑞斯星医疗器械有限公司提供；病理切片机（型号：RM2235）由上海徕卡仪器有限公司提供；冰冻切片机（型号：CM1950）由LEICA提供；显微镜（型号：Nikon H550S）由日本尼康提供。
受试药物的制备：配制羽扇豆酮溶液，羽扇豆酮高剂量(24 mg/kg)、羽扇豆酮中剂量(12mg/kg)、羽扇豆酮低剂量组(6mg/kg)，给药体积为0.1mL/10g。
阳性药物的制备：厄贝沙坦片，取1片约0.15g与适量水配制成溶液，给药体积为40mg/kg。
造模方法
雄性db/db小鼠，体重50g左右，同背景的db/m小鼠，体重约20 g，以普通饲料喂养适应性喂养1周后，尾静脉采血，并检测其空腹血糖值，筛选出空腹血糖值≥16.7 mmol/L的db/db小鼠为动物模型。
分组与给药
取造模成功的db/db小鼠随机分为5组：模型对照组、厄贝沙坦组、羽扇豆酮高剂量组、羽扇豆酮中剂量组、羽扇豆酮低剂量组，db/m小鼠为正常对照组，共6组，每组分别6只。分别灌胃给药6周(正常对照组和模型对照组给予同体积的蒸馏水，厄贝沙坦组给予阳性药物)。末次给药后，处死小鼠，迅速取出各组小鼠心、肝及脾固定于4 %多聚甲醛24 h以上，以备病理切片检测。
羽扇豆酮对小鼠心、肝及脾脏组织病理形态学的影响结果
小鼠解剖后，取心脏组织进行HE染色观察，结果如图4所示，空白组小鼠心肌细胞排列整齐，无心肌纤维的破坏，细胞间隙正常，未见水肿，细胞质染色均匀，细胞核完整。模型对照组小鼠心肌细胞排列紊乱，肌浆溶解，细胞间隙明显增宽，局部心肌细胞肌原纤维溶解消失坏死，细胞质颜色变浅。与模型对照组比较，羽扇豆酮高、中剂量组小鼠心肌组织病理损伤均明显改善，心肌细胞坏死溶解明显减轻；羽扇豆酮低剂量组小鼠部分心肌细胞存在水肿。
小鼠解剖后，取肝脏组织进行油红O染色观察，结果如图5所示，空白组小鼠肝小叶排列整齐，结构正常，未见红染的脂肪滴。模型对照组小鼠肝脏组织病变明显，可见大量红染的空泡脂肪滴。与模型对照组比较，羽扇豆酮高剂量组脂肪滴明显减少；中剂量组脂肪滴略有减少；低剂量组未见明显差异。
小鼠解剖后，取脾脏组织进行HE染色观察，空白组小鼠脾脏结构正常，未见明显异常。模型对照组小鼠白髓异常增生。与模型对照组比较，羽扇豆酮高剂量组小鼠脾脏结构基本正常，未见明显异常；羽扇豆酮中、低剂量组小鼠部分白髓异常增生。
2.6结论：
羽扇豆酮能改善db/db小鼠心肌细胞的紊乱，减轻心肌细胞坏死；减轻肝脏组织中脂肪滴；减轻脾脏白髓的增生。展示羽扇豆酮对心、肝、脾脏病变具有防治作用。
附图说明
图1：各组大鼠心脏组织HE染色比较（×400）；
图2：各组大鼠肝脏组织HE染色比较（×400）；
图3：各组大鼠脾脏组织HE染色比较（×400）；
图4：各组小鼠心脏组织HE染色比较（×400）；
图5：各组小鼠肝组织油红O染色比较（×200）；
图6：各组小鼠脾脏组织HE染色比较（×400）。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例1。取羽扇豆酮(从市场上购买)，加适量的常规辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压片，制成片剂。每片含羽扇豆酮15mg。
用法用量：该制剂日服2次，每次1~4片。
治疗病症：用于防治三高人群心、肝、脾脏损伤。
实施例2。取羽扇豆酮(从市场上购买)，加入适量的常规辅料，混匀，烘干，灭菌，装入硬胶囊，包装，制成胶囊剂。每片含羽扇豆酮15mg。
用法用量：该制剂日服2次，每次1~4粒。
治疗病症：用于防治三高人群心、肝、脾脏损伤。
实施例3：取羽扇豆酮(从市场上购买)，加入适量常用辅料，制成颗粒，干燥，整粒，制成颗粒剂。颗粒剂5g/袋，颗粒剂中羽扇豆酮的含量为3mg/g。
用法用量：该制剂日服2次，每次1~4袋。
治疗病症：用于防治三高人群心、肝、脾脏损伤。
实施例4：取羽扇豆酮(从市场上购买)，加适量的增溶剂，研磨，加入少量水稀释，混匀，加入矫味剂和防腐剂，混匀，加水至规定量，过滤，混匀，分装，灭菌，制成口服液。口服液中羽扇豆酮的含量为1.5mg/ml。
用法用量：该制剂日服2次，每次10~40ml。
治疗病症：用于三高人群心、肝、脾脏损伤保健品。
实施例5：取羽扇豆酮(从市场上购买)，加入适量常用辅料，成丸，干燥，制成丸剂。每丸含羽扇豆酮15mg。
用法用量：该制剂日服2次，每次1~4丸。
治疗病症：用于防治三高人群心、肝、脾脏损伤。
实施例6：取羽扇豆酮(从市场上购买)，加入适量滴丸基质，混匀，滴制成丸，即得滴丸剂。每丸含羽扇豆酮15mg。
用法用量：该制剂日服2次，每次1~4丸。
治疗病症：用于三高人群心、肝、脾脏损伤保健品。
Claims (4)
1.羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群脾脏损伤制品中的应用。
2.如权利要求1所述羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群脾脏损伤制品中的应用，其特征在于：所述损伤包括：减轻脾脏白髓异常增生，降低血清中LDH、CK-MB、ALT、AST和ANG-Ⅱ的含量。
3.如权利要求1或2中所述羽扇豆酮在制备预防和治疗三高人群脾脏损伤制品中的应用，其特征在于：所述羽扇豆酮的分子式为：C30H48O，分子量为：424，结构式为：
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述制品为药品。
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| CN110448562A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-11-15 | 贵州中医药大学 | 羽扇豆酮在制备治疗肾损害药物中的应用 |
| CN110585216A (zh) * | 2019-09-03 | 2019-12-20 | 南方医科大学 | 羽扇豆醇在制备预防或治疗肝损伤药物中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 羽扇豆酮对 2 型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的一般情况、 葡萄糖耐量及胰岛素耐量的影响;吴红梅等;时珍国医国药;第28 卷(第5期);第1035-1037段 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116942679A (zh) | 2023-10-27 |
| CN115607554A (zh) | 2023-01-17 |
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