CN115606578A - 一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液 - Google Patents

Abstract

一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，本发明属于动物胚胎工程技术领域，具体涉及一种用于体外保存牛卵巢的保存液。本发明的目的是要解决现有体外保存牛卵巢的保存液的保存时间短，导致卵巢组织容易被微生物污染，不仅无法获取优质的卵母细胞，甚至会污染实验室环境的问题。一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液包含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液。优点：添加生物保鲜剂，在低温下，能提高牛卵巢的保存时间至8h，卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率没有发生明显变化。本发明主要用于制备延长牛卵巢体外保存时间的保存液。

Description

一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液

技术领域

本发明属于动物胚胎工程技术领域，具体涉及一种用于体外保存牛卵巢的保存液。

背景技术

随着哺乳动物胚胎工程技术迅速发展，哺乳动物卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)、转基因及体细胞核移植(SCNT)技术等日趋完善，对卵母细胞及胚胎的需求量大大增加。如何稳定获得高质量成熟卵母细胞成为该领域中一个极其重要的问题。卵母细胞虽然可以通过超数排卵、活体采卵等方式获得，但其成本高昂，无法广泛开展。因此目前采用的方法主要是通过屠宰场废弃的卵巢来获取体外成熟的卵母细胞，而卵巢的保存方法及保存时间对卵母细胞的体外成熟影响很大。理论上，牛屠宰后立即采集卵巢并回收卵母细胞进行体外培养，卵母细胞的成熟和发育最好。实际上，屠宰场与实验室存在一定的距离，卵巢的收集和运输需要较长时间，送到实验室时间往往达到4h～6h，甚至更长时间，同时屠宰时间大多数都在夜间进行，给后续的实验带来诸多不便；因此卵巢的保存方法和保存时间是目前面临的难题。如能建立良好的卵巢保存体系，使其在一定时间内的储存不对卵母细胞的体外成熟和后期发育造成不利影响，就会为相应的研究工作和生产应用带来极大的便利。而由于牛宰后受到屠宰、加工、流通等环境因素的影响，且现有体外保存牛卵巢的保存液的保存时间短(保存时间一般为2h～3h)，导致卵巢组织容易被微生物污染而携带病菌，甚至污染整个实验室环境，给实验室工作带来巨大损失；并且采集的牛卵巢缺乏血液循环以至于缺氧和产生一些有毒的代谢物质，对卵母细胞会产生不良影响，如果方法不当或时间过长，卵母细胞的成熟率和发育率都明显下降。

发明内容

本发明的目的是要解决现有体外保存牛卵巢的保存液的保存时间短，导致卵巢组织容易被微生物污染，不仅无法获取优质的卵母细胞，甚至会污染实验室环境的问题，而提供一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液。

一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，它包含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中生物保鲜营养液的体积分数为20％～30％，抗菌液的体积分数为1％～2％，余量为基础液。

本发明优点：本发明延长牛卵巢体外保存时间的保存液中添加生物保鲜剂，生物保鲜剂是指从动植物、微生物中提取的天然的或利用生物工程技术改造而获得的对人体安全的保鲜剂。生物保鲜剂主要分为三大类，一是微生物代谢产物，包括乳酸链球菌素、ε-聚赖氨酸和枯草杆菌素等；二是生物酶，包括溶菌酶、葡萄糖氧化酶和谷氨酰胺转氨酶等；三是生物天然提取物，包括茶多酚、壳聚糖和鱼精蛋白等。生物保鲜剂通过改变细胞通透性与核酸分子结构，使其细胞壁受损，抑制酶的活性与核酸合成，影响代谢过程等。其中，不同的生物保鲜剂其抑菌机理也不同，如壳聚糖能吸附在微生物细胞表面，形成一层高分子膜，阻止了营养物质向细胞内运输，从而起到杀菌和抑菌作用；茶多酚能降低细菌的黏着性，破坏细胞膜；溶菌酶能水解细胞壁中的糖苷键，影响细胞壁结构，使细胞壁出现部分缺失，形成L型细菌，失去对细胞的保护作用，细胞质解体出现空腔，同时溶菌酶还能渗入细胞内部，吸附细胞内带有阴离子的细胞质，使其发生絮凝，扰乱细胞正常的生理活动，进而杀灭细菌。本发明延长牛卵巢体外保存时间的保存液在低温(温度为4℃左右)下，能提高牛卵巢的保存时间至8h，卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率没有发生明显变化。所以本发明延长牛卵巢体外保存时间的保存液可以延长牛卵巢体外保存时间，对于哺乳动物胚胎工程技术的发展具有重要意义。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式是一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，它包含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中生物保鲜营养液的体积分数为20％～30％，抗菌液的体积分数为1％～2％，余量为基础液。

本实施方式所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液的使用方法，先采用延长牛卵巢体外保存时间的保存液对牛卵巢清洗3～5次，再放入延长牛卵巢体外保存时间的保存液中于温度为4℃下低温保存。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：所述基础液为灭菌生理盐水。其他与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：所述抗菌液中抗菌剂为青霉素和链霉素，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中青霉素的加入量按照每1L基础液加入青霉素80000IU～100000IU，链霉素的加入量按照每1L基础液加入链霉素80000IU～100000IU。其他与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：所述生物保鲜营养液由生物保鲜剂和灭菌生理盐水混合而成，且所述生物保鲜剂为海藻糖、乳酸链球菌素、溶菌酶、茶多酚、壳聚糖、抗坏血酸和生姜汁的一种或几种。其他与具体实施方式一至三相同。

Nisin是由乳酸菌(包括乳酸链球菌、乳酸乳杆菌等)产生的乳酸菌素。Nisin对产芽孢杆菌(如肉毒杆菌)、耐热腐败菌(如嗜热脂肪芽孢杆菌)等革兰氏阳性菌的生长有较好的抑制作用。也可抑制沙门氏菌、大肠杆菌和放线杆菌等革兰氏阴性菌的生长。当Nisin与溶菌酶、茶多酚等联合作用时，其抗菌活性大大增加。其抑菌机制是：对营养细胞，是一种阳离子表面活性剂，通过干挠细胞膜来达到杀菌功能；对孢子直接杀死或使其“休克”。

溶菌酶又称胞壁质酶，是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶因其有溶菌作用，故命名为溶菌酶。溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白，化学性质非常稳定。利用细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性进行防腐保鲜。对于酵母、霉菌和革兰氏阴性菌等引起的腐败变质，溶菌酶不能起到防腐作用。但溶菌酶有良好的配伍性，与其他添加剂如Nisin、茶多酚、甘氨酸、聚合磷酸盐等复配使用，可大大提高其防腐保鲜的效果。

壳聚糖是α-氨基-D-葡胺糖通过β-1,4-苷键连结成的直链状多糖，是一种生物活性物质，由甲壳素通过脱乙酰制得。壳聚糖溶液具有抑菌和抗菌作用。壳聚糖防腐的机理，从物理化学角度分析，研究认为是壳聚糖类物质的正电荷与微生物细胞膜表面的负电荷作用造成蛋白质类物质及其他细胞内组成成分的流失而达到抑菌防腐的功能。

海藻糖是一种无毒低热值的二糖，广泛存在于自然界的动植物和微生物等各种生命体中，易溶于水、热的乙醇但不溶于乙醚。利用海藻糖对生物细胞及其生物分子具有保护作用的机制，从而实现了动物组织的长期保鲜。当海藻糖用于保存动物组织时，在常温下形成一种特殊的膜而将其密封，同时还会析出粘液将其粘结和滋润，以及将原有的细菌和随后沾染的细菌杀死。

生姜中含有姜醇、姜烯、甲基庚烯酮、姜辣素等，还含有多种氨基酸,如谷氨酸、天门冬氨酸、丝氨酸、甘氨酸等，具有良好的调味作用。生姜对细菌有抑制作用，鲜姜汁对细菌特别是G细菌中的金黄色葡萄球菌抑制能力最大，对枯草芽胞杆菌的抑制作用相对较弱；对G细菌中的伤寒沙门氏菌，大肠杆菌也有较强的抑制作用。但对霉菌中的黑曲霉、米根霉抑制作用甚弱，姜汁对部分真菌没有抑制或杀灭的作用。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：所述生物保鲜剂由海藻糖、乳酸链球菌素和溶菌酶组成；且所述生物保鲜营养液中海藻糖的浓度为(1～10)g/L，乳酸链球菌素的浓度为(0.3～1)g/L，溶菌酶的浓度为(0.2～0.8)g/L。其他与具体实施方式四相同。

本实施方式所述生物保鲜剂为复合生物保鲜剂，由海藻糖、乳酸链球菌素和溶菌酶组成；复合生物保鲜剂是将具有不同功能的生物保鲜剂协同使用，形成一种高效的复合保鲜剂，以提高保鲜效果。由于任何一种保鲜剂都不具有能有效抑制和杀灭所有微生物的功能。因此不同生物保鲜剂综合利用，使其充分发挥各自的协同效应，不仅可以增强其抑菌效果，而且可减少单一保鲜剂的使用量，降低成本。因此，复合生物保鲜剂是当前生物保鲜剂的主要应用方向。Nisin与溶菌酶等组成的复合生物保鲜剂结合冷藏保鲜缢蛏，结果发现，其保鲜效果均明显优于普通冷藏。采用溶菌酶、Nisin及其二者的混合物对贻贝进行保鲜冷藏处理，发现Nisin作用缓慢，溶菌酶的前期作用强，其混合物能很好结合二者的优点，到第11天仍能保持贻贝风味不变。冷藏条件下用Nisin与溶菌酶等几种复合生物保鲜剂对三角帆蚌的保鲜效果，结果表明，Nisin和溶菌酶混合添加具有明显的保鲜作用；在其他条件相同的情况下，复合保鲜剂可延长三角帆蚌的保鲜期约1倍。采用复合配方(壳聚糖、茶多酚与溶菌酶)配制的天然防腐保鲜剂，保鲜剂处理组牡蛎的货架期为19d，与未经保鲜剂处理对照组的10d相比，货架期延长了近1倍。在水产品保鲜方面，用脱乙酰率70％的壳聚糖和抗坏血酸按0.7％～2.0％比例混合，效果较好。而且将乳酸链球菌素(Nisin)、二胺四乙酸(EDTA)和纳他霉素复合使用，可扩大抗菌谱，抑制革兰氏阴性菌；将红曲霉与衣康酸复合使用，防腐效果显著增强；也有研究表明可以利用壳聚糖具有成膜特性，将其与溶菌酶复合从而抑制乳酸菌和大肠杆菌的生长。乳酸链球菌素(Nisin)是由乳酸菌(包括乳酸链球菌、乳酸乳杆菌等)产生的乳酸菌素。Nisin对产芽孢杆菌(如肉毒杆菌)、耐热腐败菌(如嗜热脂肪芽孢杆菌)等革兰氏阳性菌的生长有较好的抑制作用。也可抑制沙门氏菌、大肠杆菌和放线杆菌等革兰氏阴性菌的生长。

本实施方式将Nisin和溶菌酶联合使用，其抗菌活性大大增加。其抑菌机制是：对营养细胞，是一种阳离子表面活性剂，通过干挠细胞膜来达到杀菌功能；对孢子直接杀死或使其“休克”；并且在复合生物保鲜剂还添加海藻糖，海藻糖是一种无毒低热值的二糖，广泛存在于自然界的动植物和微生物等各种生命体中，易溶于水、热的乙醇但不溶于乙醚。利用海藻糖对生物细胞及其生物分子具有保护作用的机制，从而实现了动物组织的长期保鲜。当海藻糖用于保存动物组织时，在常温下形成一种特殊的膜而将其密封，同时还会析出粘液将其粘结和滋润，以及将原有的细菌和随后沾染的细菌杀死。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式五的不同点是：所述生物保鲜营养液中海藻糖的浓度为5g/L，乳酸链球菌素的浓度为0.5g/L，溶菌酶的浓度为0.5g/L。其他与具体实施方式五相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：所述生物保鲜剂由茶多酚、乳酸链球菌素和壳聚糖组成；且所述生物保鲜营养液中茶多酚的浓度为(0.5～10)g/L，乳酸链球菌素的浓度为(0.3～1)g/L，壳聚糖的浓度为(5～30)g/L。其他与具体实施方式四相同。

本实施方式将Nisin和茶多酚联合使用，其抗菌活性大大增加。其抑菌机制是：对营养细胞，是一种阳离子表面活性剂，通过干挠细胞膜来达到杀菌功能；对孢子直接杀死或使其“休克”；并且在复合生物保鲜剂还添加壳聚糖，壳聚糖是α-氨基-D-葡胺糖通过β-1,4-苷键连结成的直链状多糖，是一种生物活性物质，由甲壳素通过脱乙酰制得。壳聚糖溶液具有抑菌和抗菌作用。壳聚糖防腐的机理，从物理化学角度分析，研究认为是壳聚糖类物质的正电荷与微生物细胞膜表面的负电荷作用造成蛋白质类物质及其他细胞内组成成分的流失而达到抑菌防腐的功能。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七的不同点是：所述生物保鲜营养液中茶多酚的浓度为1g/L，乳酸链球菌素的浓度为0.8g/L，壳聚糖的浓度为10g/L。其他与具体实施方式七相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式四的不同点是：所述生物保鲜剂由抗坏血酸、茶多酚和生姜汁组成；且所述生物保鲜营养液中抗坏血酸的浓度为(0.1～1)g/L，茶多酚的浓度为(1～10)g/L，所述生物保鲜营养液中生姜汁的质量分数为10％～30％。其他与具体实施方式四相同。

茶多酚是茶叶的酸丙酯等，又称茶单宁、茶鞣酸、茶鞣质，是茶叶中多酚类物质的总称，主要由儿茶素、黄酮及黄酮醇类、花白素及花青素、酚酸类和缩酚酸类等成分组成，其中儿茶素类含量最多，约占茶多酚总量的60％～80％。具有良好的抗氧化能力，其抗氧效价比维生素E的抗氧效价高10～20倍，是一种理想的无毒的天然抗氧化剂。茶多酚单独添加时有抗氧化作用，将茶多酚与抗坏血酸(VC)联用具有协同增效的抗氧化作用。茶多酚对假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、热死环丝菌和乳酸菌均有很强的抑制作用。

抗坏血酸，别名VC，是白色至浅黄色结晶性粉末，无臭，有酸味，受光照后逐渐变成褐色。干燥状态时在空气中相当稳定，在水溶液中则其含量迅速降低。易溶于水，乙醇，不溶于氯仿、乙醚等有机溶剂。有还原性，易被氧化成脱氢抗坏血酸。抗坏血酸作为抗氧化剂有消除氧，抑制对氧敏感的组织成分氧化的作用。

在复合生物保鲜剂还添加生姜汁，生姜中含有姜醇、姜烯、甲基庚烯酮、姜辣素等，还含有多种氨基酸，如谷氨酸、天门冬氨酸、丝氨酸、甘氨酸等，具有良好的调味作用。生姜对细菌有抑制作用，鲜姜汁对细菌特别是G细菌中的金黄色葡萄球菌抑制能力最大，对枯草芽胞杆菌的抑制作用相对较弱；对G细菌中的伤寒沙门氏菌，大肠杆菌也有较强的抑制作用。但对霉菌中的黑曲霉、米根霉抑制作用甚弱，姜汁对部分真菌没有抑制或杀灭的作用。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式九的不同点是：所述生物保鲜营养液中抗坏血酸的浓度为0.3g/L，茶多酚的浓度为5.7g/L，所述生物保鲜营养液中生姜汁的质量分数为25％。其他与具体实施方式九相同。

本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。

采用下述试验验证本发明效果：

实施例1：一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，它含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中生物保鲜营养液的体积分数为23.5％，抗菌液的体积分数为1.5％，余量为基础液。

实施例1所述基础液为灭菌生理盐水。

实施例1所述抗菌液中抗菌剂为青霉素和链霉素，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中青霉素的加入量按照每1L基础液加入青霉素90000IU，链霉素的加入量按照每1L基础液加入链霉素90000IU。

实施例1所述生物保鲜营养液由生物保鲜剂和灭菌生理盐水混合而成，且所述生物保鲜剂由海藻糖、乳酸链球菌素和溶菌酶组成；所述生物保鲜营养液中海藻糖的浓度为5g/L，乳酸链球菌素的浓度为0.5g/L，溶菌酶的浓度为0.5g/L。

实施例2：一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，它含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中生物保鲜营养液的体积分数为23.5％，抗菌液的体积分数为1.5％，余量为基础液。

实施例2所述基础液为灭菌生理盐水。

实施例2所述抗菌液中抗菌剂为青霉素和链霉素，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中青霉素的加入量按照每1L基础液加入青霉素90000IU，链霉素的加入量按照每1L基础液加入链霉素90000IU。

实施例2所述生物保鲜营养液由生物保鲜剂和灭菌生理盐水混合而成，且所述生物保鲜剂由茶多酚、乳酸链球菌素和壳聚糖组成；所述生物保鲜营养液中茶多酚的浓度为1g/L，乳酸链球菌素的浓度为0.8g/L，壳聚糖的浓度为10g/L。

实施例3：一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，它含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中生物保鲜营养液的体积分数为23.5％，抗菌液的体积分数为1.5％，余量为基础液。

实施例3所述基础液为灭菌生理盐水。

实施例3所述抗菌液中抗菌剂为青霉素和链霉素，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中青霉素的加入量按照每1L基础液加入青霉素90000IU，链霉素的加入量按照每1L基础液加入链霉素90000IU。

实施例3所述生物保鲜营养液由生物保鲜剂和灭菌生理盐水混合而成，且所述生物保鲜剂由抗坏血酸、茶多酚和生姜汁组成；所述生物保鲜营养液中抗坏血酸的浓度为0.3g/L，茶多酚的浓度为5.7g/L，所述生物保鲜营养液中生姜汁的质量分数为25％。

对比例1：不添加生物保鲜营养液对比例：

卵巢体外保存液含基础液和抗菌液，所述卵巢体外保存液中抗菌液的体积分数为1.5％，余量为基础液；所述基础液为灭菌生理盐水。所述抗菌液中抗菌剂为青霉素和链霉素，所述卵巢体外保存液中青霉素的加入量按照每1L基础液加入青霉素90000IU，链霉素的加入量按照每1L基础液加入链霉素90000IU。

牛卵巢保存效果检测：

依次采用实施例1至3制备的延长牛卵巢体外保存时间的保存液和对比例1制备的卵巢体外保存液作为牛卵巢体外保存液，先利用牛卵巢体外保存液对清洗牛卵巢4次，再放入牛卵巢体外保存液中于温度为4℃下低温保存8h。

分别在保存时间为0h、3h、6h和8h时，进行卵母细胞、成熟率、卵裂率和囊胚率的检测，具体操作如下：

牛卵母细胞的体外成熟培养(IVM)：用配有12号针头的10ml注射器抽取卵巢上5mm的卵泡，收集胞质均匀、卵丘细胞完整的卵丘细胞-卵母细胞复合体(COCs)，用成熟培养液洗涤COCs 4次，转入在培养箱中至少平衡2h的培养液滴内，成熟培养22h。

成熟COCs卵丘细胞的去除及成熟卵母细胞的挑选：成熟22h后，用含0.5％透明质酸酶的DPBS脱去卵球颗粒细胞，显微镜下挑选出含有第一极体的卵母细胞，认定为成熟的卵母细胞。

孤雌激活与胚胎体外培养(IVC)：成熟的卵母细胞在胚胎培养液中存放1.5-2h，以成熟培养时间计为0h，成熟培养24h激活。先用5umol/ml离子霉素激活4min，用胚胎培养液清洗4次，移入含有2umol/ml6-DMAP的培养液内继续激活4h。激活的胚胎用胚胎培养液清洗4次，放入含有0.5ml胚胎培养液的四孔板内培养。36h时统计卵裂率，7-8d统计囊胚率，重复3次，计算平均值记录于表1至4中，其中实施例1制备的延长牛卵巢体外保存时间的保存液的相关数据如表1所示，实施例2制备的延长牛卵巢体外保存时间的保存液的相关数据如表2所示，实施例3制备的延长牛卵巢体外保存时间的保存液的相关数据如表3所示；对比例1制备的卵巢体外保存液的相关数据如表4所示；

表1

表2

表3

表4

由表1至3和表4对比可知，本发明添加生物保鲜剂的延长牛卵巢体外保存时间的保存液存有较好的保存效果。在温度为4℃下保存牛卵巢8h，卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率均无明显变化。而不添加生物保鲜剂(对比例1)在4℃下保存8h，卵母细胞的成熟率、卵裂率和囊胚率则显著下降。由此可见，本发明制备的延长牛卵巢体外保存时间的保存液可稳定延长牛卵巢体外保存时间，而不影响其后期发育，对哺乳动物胚胎工程技术的发展具有重要意义。

Claims (10)

1.一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于延长牛卵巢体外保存时间的保存液包含基础液、生物保鲜营养液和抗菌液，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中生物保鲜营养液的体积分数为20％～30％，抗菌液的体积分数为1％～2％，余量为基础液。

2.根据权利要求1所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述基础液为灭菌生理盐水。

3.根据权利要求2所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述抗菌液中抗菌剂为青霉素和链霉素，所述延长牛卵巢体外保存时间的保存液中青霉素的加入量按照每1L基础液加入青霉素80000IU～100000IU，链霉素的加入量按照每1L基础液加入链霉素80000IU～100000IU。

4.根据权利要求3所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜营养液由生物保鲜剂和灭菌生理盐水混合而成，且所述生物保鲜剂为海藻糖、乳酸链球菌素、溶菌酶、茶多酚、壳聚糖、抗坏血酸和生姜汁的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜剂由海藻糖、乳酸链球菌素和溶菌酶组成；且所述生物保鲜营养液中海藻糖的浓度为(1～10)g/L，乳酸链球菌素的浓度为(0.3～1)g/L，溶菌酶的浓度为(0.2～0.8)g/L。

6.根据权利要求5所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜营养液中海藻糖的浓度为5g/L，乳酸链球菌素的浓度为0.5g/L，溶菌酶的浓度为0.5g/L。

7.根据权利要求4所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜剂由茶多酚、乳酸链球菌素和壳聚糖组成；且所述生物保鲜营养液中茶多酚的浓度为(0.5～10)g/L，乳酸链球菌素的浓度为(0.3～1)g/L，壳聚糖的浓度为(5～30)g/L。

8.根据权利要求7所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜营养液中茶多酚的浓度为1g/L，乳酸链球菌素的浓度为0.8g/L，壳聚糖的浓度为10g/L。

9.根据权利要求4所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜剂由抗坏血酸、茶多酚和生姜汁组成；且所述生物保鲜营养液中抗坏血酸的浓度为(0.1～1)g/L，茶多酚的浓度为(1～10)g/L，所述生物保鲜营养液中生姜汁的质量分数为10％～30％。

10.根据权利要求9所述的一种延长牛卵巢体外保存时间的保存液，其特征在于所述生物保鲜营养液中抗坏血酸的浓度为0.3g/L，茶多酚的浓度为5.7g/L，所述生物保鲜营养液中生姜汁的质量分数为25％。