CN111657263A - 一种动物精液稀释粉及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种动物精液稀释粉及其应用，属于动物繁殖技术领域，将所述动物精液稀释粉溶于PBS缓冲液配置猪精液稀释液；所述精液稀释液中各组分的浓度分别为：甘草苷0.1‑0.3g/L、谷氨酸钠1‑3g、L‑精氨酸0.5‑1.0g、N‑乙酰半胱氨酸0.1‑0.3g；果糖1‑3g、葡萄糖10‑15g、柠檬酸钾2‑4g、氯化钾0.5‑1g、EDTA 1‑2g、碳酸钠1‑2g和牛至油0.1‑0.3g。所述甘草苷还可替换成甘草次酸。所述动物精液稀释粉未采用任何抗生素，多种组份协同作用，可以明显提升精子保存后的时间和活率，提高顶体的完整率，提高稀释后的人工授精的受孕率。

Description

一种动物精液稀释粉及其应用
技术领域
本发明属于动物繁殖技术领域，具体地，涉及一种动物精液稀释粉及其应用。
背景技术
随着人口不断增加以及城镇化水平的提高，居民消费观念和生活方式的转变以及收入水平的提高，使猪肉消费不断增长。国家统计局数据显示，2009-2016年全国城镇居民家庭均猪肉消费量基本稳定在20.7kg/人左右。人工授精技术在世界范围内被广泛应用于牲畜家禽养殖生产中，其能达到与自然交配相似的繁殖结果。例如，目前，在大多数工业化国家，通过人工授精技术完成授精的母猪占到80％到98％。而且，这个比率在其他国家也是逐年递增。随着人工授精技术在我国推广应用，精液稀释剂的需求也越来越大。 但是国内稀释液配方种类繁多、效果不稳定。一般情况下，稀释后精液可以在体外保存3天仍具有受精能力，但是保存3天以上就很困难。直到报道称将牛血清白蛋白添加到稀释液中可以提高精子运动性能并且使精子和受精能力延长至4-5天。精液常温保存技术在人工授精技术中发挥着非常重要的作用，优良精液品质是人工授精技术成功的关键。大量的实践证明，精液常温保存更加有利，而且保存条件相对较低，操作简单，最重要的是对受胎率影响较小。所以，常温保存更适合于养殖场和基层改良站的生产发展。尽管精液稀释已经开展应用了很多年，但是实际生产中依然存在精子存活时间较短，精液保存效果差，人工授精后受胎率低等问题。
发明内容
为了解决现有技术中的不足，本发明的目的一在于提供一种动物精液稀释粉，目的二在于提供所述动物精液稀释粉在动物精液保存或稀释方面的应用。所述动物精液稀释粉未采用任何抗生素，多种组份协同作用，可以明显提升精子保存后的时间和活率，提高顶体的完整率，提高稀释后的人工授精的受孕率。
为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：
一种动物精液稀释粉，将所述精液稀释粉溶于PBS缓冲液配置精液稀释液；其特征在于：所述精液稀释液中各组分的浓度分别为：甘草苷 0.1-0.3g/L、谷氨酸钠1-3g、 L-精氨酸0.5-1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.1-0.3g；果糖1-3g、葡萄糖10-15g、柠檬酸钾2-4g、氯化钾0.5-1g、EDTA 1-2g、碳酸钠1-2g和牛至油0.1-0.3g。
作为对上述方案的进一步优化，所述精液稀释液的pH为6.8。
作为对上述方案的进一步优化，将所述甘草苷替换成甘草次酸。
本发明还进一步请求保护所述动物精液稀释粉在动物精液保存和稀释方面的应用。
有益效果：
1、本发明所述动物精液稀释粉采用粉剂形式，易于保存，现用现配，能够降低污染风险。采用所述动物精液稀释粉配置的精液稀释液，对动物精液的保存效果较好，精子活率、精子顶体完整率解冷藏后较高，能显著提高授精率。
2、本发明所述动物精液稀释粉，对动物精液有良好的增强活性的作用，增强其抗应激性，尤其是对抗氧化性有较强的效果，可以有效较少冷藏损伤，提高精子存活率以及顶体完整率。抗氧化应激方面甘草苷与牛至油可以协同作用，起到加性效应；甘草苷主要作用途径为：甘草苷能显著上调细胞活力值以及X连锁凋亡抑制蛋白、Bcl-2、Bax、超氧化物歧化酶、核因子NF-E2 相关因子Nrf2、抗氧化反应元件、谷胱甘肽过氧化物酶、儿茶酚-1含量，下调Bax、Caspase-3 水平，从而抑制细胞氧化损伤；另外，它还是一种有效的光化学预防候选物。而牛至油可以直接清除自由基，提高抗氧化能力。牛至油中含有多种化合物，起氧化作用的主要为酚酸类和萜类化合物。酚酸类化合物含有酚羟基，为抗氧化活性的基团，此类抗氧化剂在清除烷氧自由基过程中，主要是通过脱氢反应产生比较稳定的苯氧自由基来终止链式反应。这两种成分通过不同渠道清除自由基，具有加性效应，对精子的保护作用更好。
3、将甘草苷替换成甘草次酸，在抗氧化应激方面，甘草次酸与牛至油也可以协同作用，起到加性效应；甘草次酸主要的作用途径为：甘草次酸能通过磷酸肌醇3 激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）途径抑制细胞氧化应激。而牛至油可以直接清除自由基，提高抗氧化能力。
4、本发明采用植物精油代替传统抗生素，防止耐药性引起的细菌繁殖对精液的负面作用。同时，牛至油主要杀菌的效果，主要对细菌类致病性微生物有较好的抑制作用。牛至油中起抗菌作用主要成分为酚类及萜烯类，酚类物质可通过使细胞膜中的蛋白质变性而改变细胞膜的通透性，或与细胞膜中的磷脂反应，破坏了蛋白质的合成，使微生物细胞的生长受到抑制; 萜类物质也能影响细菌中的DNA 自我复制过程，从而抑制细菌的繁殖和生长过程，进而抑制菌体生长。甘草苷或甘草次酸主要对病毒类致病性微生物有较好的抑制作用。甘草苷异甘草素可下调趋化因子CXCL9、CXCL10、CXCL11和IL-6 炎症因子水平，其分子机制可能是通过抑制JAK1/STAT1、ERK/MAPK、JNK/MAPK、干扰素调节因子3/髓样分化因子（IRF3/MyD88）和Akt/PI3K信号通路来发挥抗炎作用的。甘草次酸可强有力地抑制曲霉蛋白酶诱导的炎症介质的表达这些抑制作用与线粒体活性氧/丝裂原活化蛋白激酶（ROS/MAPK）轴和解偶联蛋白-2（UCP-2）的表达调控有关，从而具有抗炎效果。这甘草苷（甘草次酸）和牛至油通过不同的机制杀灭致病性微生物，具有加性效应，对精子的保护作用更好。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
猪精液稀释粉，配方组成如下：甘草苷 0.1g、谷氨酸钠1.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.1g、果糖1g、葡萄糖10g、柠檬酸钾4g、氯化钾0.5g、EDTA 2g、碳酸钠2g、牛至油0.1g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
实施例2
猪精液稀释粉，配方组成如下：甘草苷 0.2g、谷氨酸钠2.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.2g、果糖2g、葡萄糖12g、柠檬酸钾3g、氯化钾1g、EDTA 2g、碳酸钠2g、牛至油0.2g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
实施例3
猪精液稀释粉，配方组成如下：甘草苷 0.3g、谷氨酸钠3.0g、 L-精氨酸0.5g、N-乙酰半胱氨酸0.3g、果糖3g、葡萄糖15g、柠檬酸钾2g、氯化钾1g、EDTA 1g、碳酸钠1g、牛至油0.3g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
实施例4
鸡精液稀释粉，配方组成如下：甘草次酸 0.1g、谷氨酸钠1.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.1g、果糖1g、葡萄糖10g、柠檬酸钾4g、氯化钾0.5g、EDTA 2g、碳酸钠2g、牛至油0.1g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
实施例5
鸡精液稀释粉，配方组成如下：甘草次酸 0.2g、谷氨酸钠2.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.2g、果糖2g、葡萄糖12g、柠檬酸钾3g、氯化钾1g、EDTA 2g、碳酸钠2g、牛至油0.2g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
实施例6
鸡精液稀释粉，配方组成如下：甘草次酸 0.3g、谷氨酸钠3.0g、 L-精氨酸0.5g、N-乙酰半胱氨酸0.3g、果糖3g、葡萄糖15g、柠檬酸钾2g、氯化钾1g、EDTA 1g、碳酸钠1g、牛至油0.3g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
对比例1猪精液稀释粉，配方组成如下：谷氨酸钠2.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.2g、果糖2g、葡萄糖12g、柠檬酸钾3g、氯化钾1g、EDTA 2g、碳酸钠2g、牛至油0.2g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。。
对比例2猪精液稀释粉，配方组成如下：谷氨酸钠2.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.2g、果糖2g、葡萄糖12g、柠檬酸钾3g、氯化钾1g、EDTA 2g、碳酸钠2g、青霉素100万IU、链霉素100万IU，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
对比例3鸡精液稀释粉，配方组成如下：谷氨酸钠2.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.2g、果糖2g、葡萄糖12g、柠檬酸钾3g、氯化钾1g、EDTA 2g、碳酸钠2g、牛至油0.2g，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。。
对比例4鸡精液稀释粉，配方组成如下：谷氨酸钠2.0g、 L-精氨酸1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.2g、果糖2g、葡萄糖12g、柠檬酸钾3g、氯化钾1g、EDTA 2g、碳酸钠2g、青霉素100万IU、链霉素100万IU，该配方稀释粉与PBS缓冲液配制成1L的稀释液，调pH值到6.8。
将上述实施例1-3，对比例1-2进行猪精液的冷藏(4℃) ，观察冷藏9天的前后精子活率及顶体完整率，结果见表1、表2。
表1： 冷藏9天各组精子活率变化情况（%）
Figure 994824DEST_PATH_IMAGE001
表2： 冷藏9天各组精子精子顶体完整率变化情况（%）
Figure 443123DEST_PATH_IMAGE002
由上表可以看出在本发明配方工艺之内的实施例1-3的精子活率、精子顶体完整率解冷藏后较高，尤其以实施例3为最佳，冷藏第9天后的活率达到67.37、顶体完整率达到77.20，说明本发明采用的该配方作用效果显著。在本发明配方范围之外的实施，效果差很多。
将上述实施例4-6，对比例3-4进行鸡精液的冷藏(4℃) ，观察冷藏9天的活率变化，前后精子活率及顶体完整率，结果见表3、表4。
表3：冷藏9天各组精子活率变化情况（%）
Figure 488439DEST_PATH_IMAGE003
表4：冷藏9天各组精子精子顶体完整率变化情况（%）
Figure DEST_PATH_IMAGE005
由上表可以看出在本发明配方工艺之内的实施例4-6的精子活率、精子顶体完整率解冷藏后较高，尤其以实施例6为最佳，冷藏第9天后的活率达到65.27、顶体完整率达到74.79，说明本发明采用的该配方作用效果显著。在本发明配方范围之外的实施，效果差很多。
需要说明的是，以上所述的实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对本发明作出的一些非本质的改进和调整仍属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种动物精液稀释粉，将所述精液稀释粉溶于PBS缓冲液配置精液稀释液；其特征在于：所述精液稀释液中各组分的浓度分别为：甘草苷 0.1-0.3g/L、谷氨酸钠1-3g、 L-精氨酸0.5-1.0g、N-乙酰半胱氨酸0.1-0.3g；果糖1-3g、葡萄糖10-15g、柠檬酸钾2-4g、氯化钾0.5-1g、EDTA 1-2g、碳酸钠1-2g和牛至油0.1-0.3g。
2.根据权利要求1所述的一种动物精液稀释粉，其特征在于：所述精液稀释液的pH为6.8。
3.根据权利要求1所述的一种动物精液稀释粉，其特征在于：将所述甘草苷替换成甘草次酸。
4.根据权利要求1-3任意一种所述的动物精液稀释粉在动物精液保存和稀释方面的应用。
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