CN115558011B

CN115558011B - 一种蒽酮类化合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN115558011B
Application number: CN202211128674.0A
Authority: CN
Inventors: 李勇军; 杨建平; 薛靖怡; 汪洋; 孙佳; 马雪; 黄勇; 潘洁; 陆苑; 杨畅; 陈帅帅
Original assignee: Guizhou Medical University
Current assignee: Guizhou Medical University
Priority date: 2022-09-16
Filing date: 2022-09-16
Publication date: 2024-07-26
Anticipated expiration: 2042-09-16
Also published as: CN115558011A

Abstract

本发明公开了从金丝梅果实内分离出的蒽酮类化合物，其制备方法包括从金丝梅鲜果中醇提并经过树脂吸附分离和柱层析分离的步骤。本发明公开的化合物可以用于制备治疗炎症疾病的药物，以及制备具有抗炎活性的保健品和食品。

Description

一种蒽酮类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，具体涉及从金丝梅果实内提取分离的蒽酮类化合物、其制备方法和用途。

背景技术

金丝梅为藤黄科金丝桃属植物金丝梅(Hypericum patulum Thunb.ex Murray)的新鲜成熟果实，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2019年版中，在《中华本草》(苗药卷)、《苗族医学》也有收载，又名芒种花、云南连翘等。生于400～2000m的山坡、草地、路旁阳处、林下或灌丛中。根及果实入药。根具清肝利湿、解毒散瘀功效；用于急、慢性黄疸型肝炎泌尿道感染，风湿疼痛，跌打损伤，外治刀枪伤，毒蛇咬伤。果实用于肺病，百日咳。氧杂蒽酮是一种广泛存在于藤黄科、龙胆科等科属植物中的二苯并γ-吡喃酮类天然化合物，氧杂蒽酮也算是一类特殊的黄酮结构，称之为酮。

20世纪90年代，Ishiguro等日本学者发表多篇文章，就从金丝梅的组织培养物中分离鉴定了一系列氧杂蒽酮类化合物。本发明从金丝梅中分离得到的四个新化合物，都属于氧杂蒽酮类，氧杂蒽酮类化合物有多种生物活性，如抗炎、抗肿瘤、抗氧化及对多种细菌具有抗菌活性，还具有细胞和生物毒性、酶抑制活性、抗病毒活性、杀伤癌细胞等作用，是有一定前景的一类化合物。

目前，对金丝梅药材的化学成分有一定的研究，但其研究主要是在化学成分的初步探索和通过仪器鉴定上，其主要有Ishiguro等日本学者从金丝梅的组织培养物中分离鉴定了一系列氧杂蒽酮类化合物；李恩超等学者从金丝梅正丁醇部位分离鉴定了13个化合物；吴忠南等学者从金丝梅枝叶中分离鉴定了23个化合物；周福佳等学者通过GC-MS技术从金丝梅石油醚提取物中鉴定出24个化合物；段静雨等学者通过GC-MS技术从金丝梅药渣高温甲醇解聚液化产物中共鉴定出116个化合物等。

金丝梅作为传统中药，药理功效多种多样，具有抗抑郁、抑菌活性、抗氧化活性、抗炎镇痛活性等，进一步研究金丝梅中活性成分的化学物质基础，可为苗药金丝梅在医药、保健品、食品等方面的开发及应用提供参考依据。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种从金丝梅鲜果提取的蒽酮类化合物，本发明的另外一个目的在于提供从金丝梅鲜果中获取有效化学成分的方法。

根据本发明的一个方面，从金丝梅果实内分离出的蒽酮类化合物，其特征在于，所述化合物具有如式1-4所示的结构。

根据本发明的另外一个方面，本发明提供了前述蒽酮类化合物的制备方法，包括如下步骤：

金丝梅鲜果经醇提获取第一醇提物，所述第一醇提物经大孔树脂进行吸附后经醇洗脱获得第一洗脱液，洗脱液后经柱层析分离获得化合物1-4。

在本发明的一个实施例中，所述第一醇提物的制备方法包括如下步骤：

所述金丝梅鲜果经干燥和粉碎处理后使用乙醇溶液回流提取获得第一滤液，所述第一滤液经浓缩获得第一醇提物。

在本发明的一个实施例中，使用乙醇溶液，优选25％-50％体积浓度的乙醇水溶液对金丝梅鲜果进行处理，更优选30％体积浓度的乙醇水溶液对金丝梅鲜果进行处理。

更为优选地，所述金丝梅鲜果经过干燥和粉碎处理。

在本发明的一个实施例中，所述第一醇提物的制备方法包括：

在本发明的一个实施例中，步骤1中，采用25％-45％乙醇回流提取2-4次获得第一醇提物。

在本发明的一个实施例中，所述大孔树脂为D101大孔吸附树脂，所述洗脱为使用水和醇溶液进行洗脱。优选地，所述洗脱为使用水和75％-85％乙醇溶液进行洗脱，更优选使用税和80％乙醇溶液。

为更好地表述本发明的制备方法，约定S为洗脱液，其下标代表了洗脱液的分组。

在本发明的一个实施例中，所述柱层析使用正相柱、反相柱和凝胶色谱进行，所述从洗脱液中获得化合物1-4的过程包括：

对所述洗脱液进行一次正相柱层析，使用薄层色谱检测并对洗脱液进行合并，得到按序收集的11组洗脱液S₁-S₁₁，收集第7组洗脱组分S₇；

对洗脱液S₇经浓缩后使用正相柱层析，使用薄层色谱检测并对洗脱液进行合并，得到按序收集的8组洗脱液S_7，1-S_7，8，收集其中第6组洗脱液S_7，6；

洗脱液S_7，6经浓缩后使用正相柱层析，使用薄层色谱检测并对洗脱液进行合并，得到按序收集的3组洗脱液S_7，6，1-S_7，6，3，收集其中第2组洗脱液S_7，6，2；

洗脱液S_7，6，2经凝胶柱层析分离，获得2个组分S_{7，6，2，1}和S_{7，6，2，2}；

洗脱液S_{7，6，2，1}经凝胶柱层析和反向柱层析分离获得化合物1、化合物3和化合物4。

在本发明的一个实施例中，进一步包括步骤：

洗脱液S_{7，6，2，2}经正相柱层析和凝胶色谱分离获得化合物2。

在本发明的一个实施例中，所述的柱层析为正相柱层析时，使用100-300目的硅胶作为填料。

在本发明的一个实施例中，所述的柱层析包括使用Sephadex LH-20，ToyopearlHW-40F柱色谱进行分离纯化。

在本发明的一个实施例中，所述的柱层析为正相柱层析时，使用氯仿-甲醇、石油醚-乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯-甲醇、二氯甲烷-甲醇作为淋洗液。

根据本发明的第三方面，本发明公开了所述的蒽酮类化合物在制备治疗炎症疾病药物中的应用。优选地，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、滴丸剂、口服液、输液、冻干粉针剂、软膏剂、凝胶剂或喷雾剂。

根据本发明的第四方面，本发明公开了所述的蒽酮类化合物在制备具有抗炎活性的保健品或食品中的应用。

与现有技术相比，本发明的优势在于：

本发明从金丝梅鲜果中分离提取得到式1-4的蒽酮类化合物，该化合物的纯度为88％～96％。经实验检测，所述的化合物1-4具有显著优于白藜芦醇的抗炎作用。本发明的制备方法步骤简单、成本低、产率高且获得的化合物纯度高，促进了苗药金丝梅在医药、保健品、食品等方面的开发，并对推动行业的可持续发展起到重要意义。

附图说明

图1为化合物1的HR-ESI-MS图；

图2为化合物1的¹H-NMR图；

图3为化合物1的¹³C-NMR图；

图4为化合物1的HMQC图；

图5为化合物1的HMBC图；

图6为化合物2的HR-ESI-MS图；

图7为化合物2的1H-NMR图；

图8为化合物2的¹³C-NMR图；

图9为化合物2的HMQC图；

图10为化合物2的HMBC图；

图11为化合物3的HR-ESI-MS图；

图12为化合物3的¹H-NMR图；

图13为化合物3的核磁共振¹³C-NMR图；

图14为化合物3的核磁共振HMQC图；

图15为化合物3的核磁共振HMBC图；

图16为化合物4的核磁共振HR-ESI-MS图；

图17为化合物4的核磁共振¹H-NMR图；

图18为化合物4的核磁共振¹³C-NMR图；

图19为化合物4的核磁共振HMQC图；

图20为化合物4的核磁共振HMBC图；

具体实施方式

下面将结合实施例进一步详细说明本发明的实质内容。需说明的是，以下实施例仅是对本发明的进一步说明，而不能作为对本发明的限制。

实施例1

步骤1、取金丝梅鲜果药材(40kg)，用30％乙醇回流提取，重复提取3次，每次1.5小时，第一次用8倍量30％乙醇，第二次和第三次分别加入6倍量30％乙醇，醇提液滤过，合并滤液后减压回收乙醇，直接加热浓缩不断加水挥乙醇直到无明显乙醇味；

步骤2、将浸膏拌样后经D101大孔吸附树脂进行粗分，经大孔吸附树脂吸附，依次用水，80％乙醇洗脱浓缩，得到不同组分段(水段，80％乙醇段)；

步骤3、将80％乙醇段浸膏上正相硅胶柱，以氯仿-甲醇(10:0-6:4)梯度洗脱，经薄层色谱进行检测，显色，合并显色的洗脱部位，TLC检测合并，得到11个组分(S₁-S₁₁)将合并后的洗脱部位经减压浓缩至干，备用；

步骤4、将步骤3中S₇经正相硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯1:1至乙酸乙酯-甲醇7:3)梯度洗脱，薄层色谱(TLC)检测合并后浓缩得到8个组分(S_7.1-S_7.8)，其中Fr.7.6经正相硅胶柱色谱(石油醚-乙酸乙酯0.5:9.5至乙酸乙酯-甲醇9.5:0.5)梯度洗脱，薄层色谱(TLC)检测合并后浓缩得到3个组分(S_7.6.1-S_7.6.3)，其中S_7.6.2经Sephadex LH-20(甲醇)凝胶柱层析，薄层色谱(TLC)检测合并后浓缩得到2个组分(S_7.6.2.1-S_7.6.2.2)，其中S_7.6.2.1经ToyopearlHW-40F凝胶柱(甲醇)，反向ODS色谱柱，再反复经Toyopearl HW-40F凝胶柱(甲醇)，Sephadex LH-20凝胶柱(50％丙酮水)层析得到化合物1，化合物3，化合物4；

步骤5、将步骤3中S_7.6.2.2经正相硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇9.5:0.5)洗脱，再反复经Toyopearl HW-40F凝胶柱(甲醇)，Sephadex LH-20凝胶柱(50％丙酮水，ToyopearlHW-40F凝胶柱层析(甲醇)，得到化合物2；

本发明进行的TLC检识的条件：显色剂a：紫外灯(254nm，365nm，)下观察荧光；显色剂b：碘显色；显色剂c：10％硫酸乙醇；

结构鉴定：采用¹H NMR、¹³C NMR核磁谱、二维核磁谱、高分辨质谱对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。

化合物1为黄色粉末，分子式为：C₂₀H₂₀O₁₀；旋光度为：-55.4(c 0.58，MeOH)；IR(KBr)ν_max 3368(OH)，1657，1610，1497，1070cm^-1；HR-ESI-MS m/z:419.0980[M-H]^-，计算值为419.0973；通过光谱技术确定化合物为4-hydroxy-2-methoxy-3-β-D-glucopyranosylxanthone，其核磁数据见表1，表2。

化合物2为黄色粉末，分子式为：C₂₀H₂₀O₁₁；旋光度为：-58.8(c 0.69，MeOH)；IR(KBr)ν_max 3395(OH)，2923，1646，1609，1490，1072cm^-1；HR-ESI-MS m/z:435.0928[M-H]^-，计算值为435.0922；通过光谱技术确定化合物为4，8-dihydroxy-2-methoxy-3-β-D-glucopyranosyl xanthone，其核磁数据见表1，表2。

化合物3为黄色粉末，分子式为：C₂₀H₂₀O₉；旋光度为：-63.9(c 0.77，MeOH)；IR(KBr)ν_max 3386(OH)，2941，1639，1620，1491，1069cm^-1；HR-ESI-MS m/z:449.1088[M+HCOO]^-，计算值为449.1078；通过光谱技术确定化合物为2-methoxy-5-β-D-glucopyranosyl xanthone，其核磁数据见表1，表2。

化合物4为黄色粉末，分子式为：C₂₀H₂₀O₁₀；旋光度为：-60.6(c 0.41，MeOH)；IR(KBr)ν_max 3436(OH)，1609，1490，1089cm^-1；HR-ESI-MS m/z:419.0983[M-H]^-，计算值为419.0973；通过光谱技术确定化合物为3-hydroxy-2-methoxy-4-β-D-glucopyranosylxanthone，其核磁数据见表1，表2，相应带有标号的化学式参见下式1A-4A。

表1：化合物1，2，3，4的¹H NMR数据(in DMSO-d₆ of 1，2，3，4)

表2：化合物1，2，3，4的¹³C NMR数据(in DMSO-d₆ of 1，2，3，4)

试验例1

为实现本发明的上述目的，确定四个新化合物的抗炎活性，具体步骤如下。

步骤1、抗炎活性测定：分别取化合物1-4用DMSO溶解，配制成浓度为50mol/L的供试品溶液，备用。

步骤2、细胞培养：复苏小鼠BV-2小胶质细胞，在37℃、5％CO2培养箱内，将细胞培养于RPMI-1640完全培养基(含10％胎牛血清和1％青霉素链霉素)，每天换液，隔天传代，备用。

步骤3、模型建立与分组：将处于对数生长期、状态良好的BV-2细胞接种于孔板，继续培养12h后用LPS(终浓度100ng/mL)刺激BV-2细胞12h。

实验分组：空白对照组、LPS模型组(100ng/mL)、阳性对照组(20μmol/L白藜芦醇)和单体组(20μmol/L)，每组重复进行三次。

步骤4、ELISA法检测细胞上清中促炎因子IL-6的水平：将BV-2细胞接种于24孔板，种板浓度为5x10⁴个/mL，每孔500μL，按照组别加入对应的供试品和LPS，每组3个复孔，继续培养12h后收集细胞上清液，于4℃离心机离心(12000rpm，5min)后取上清。按照ELISA试剂盒说明书进行操作，于450nm处测定吸光度(A)值，根据标准曲线计算各样品中IL-6的含量。结果见表3。

表3各化合物对IL-6的IC₅₀值

结果表明，经IL-6水平测定，化合物1-4抗炎活性的IC₅₀分别为22.03±2.07、23.97±1.67、25.74±0.45和26.74±0.72，而阳性对照组的IC₅₀为36.27±1.94，本发明化合物的抗炎效果明显优于白藜芦醇。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims

1.一种从金丝梅果实内提取的蒽酮类化合物，其特征在于，所述化合物具有如式1-4所示的结构：

。

2.如权利要求1中所述蒽酮类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

金丝梅鲜果经醇提获取第一醇提物，所述第一醇提物经大孔树脂进行吸附后经醇洗脱获得第一洗脱液，然后将洗脱液经柱层析分离获得化合物1-4；

所述柱层析使用正相柱、反相柱和凝胶柱进行，所述洗脱液经柱层析分离获得化合物1-4的步骤包括：

洗脱液S_{7，6，2，1}经凝胶柱层析和反向柱层析分离获得化合物1、化合物3和化合物4；

进一步包括步骤：

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一醇提物的制备方法包括如下步骤：

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述大孔树脂为D101大孔吸附树脂，所述洗脱为使用水和醇溶液进行洗脱。

5.如权利要求1所述的蒽酮类化合物在制备治疗炎症疾病药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、滴丸剂、口服液、输液、冻干粉针剂、软膏剂、凝胶剂或喷雾剂。