CN110734449B - 胡芦巴中紫檀素类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种胡芦巴中紫檀素类化合物及其制备方法和应用。具体涉及从胡芦巴地上部分(不包含种子)中分离纯化得到的紫檀素类化合物及其制备方法和在制备抗氧化、抗炎药物中的应用。该紫檀素类化合物在制备抗氧化剂、抗炎药物时，可单独或联合使用，用于制备散剂、丸剂、胶囊剂、片剂、膜剂、膏剂、颗粒剂、气雾剂或凝胶剂等剂型。本发明为开发新的抗氧化剂以及抗炎药物提供了备选化合物，对药用植物资源的开发利用具有非常重要的意义。

Description

胡芦巴中紫檀素类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体是指一种胡芦巴中紫檀素类化合物及其制备方法和应用

背景技术

胡芦巴(Trigonella foenum-graecum Linn.)是豆科胡芦巴属植物，又名苦豆、胡巴、香草等，为豆科植物，原产于欧洲及西亚，在中东、伊朗高原、地中海东岸及喜马拉雅地区等世界多个地区均有种植。在我国为药食同源植物，胡芦巴其全草具有特殊的香味，可以用作饲料，幼苗可以作为蔬菜，种子多作为香料食用。除食用价值外，胡芦巴的叶子和种子均可入药。其种子作为传统中药材，有温肾助阳、祛寒止痛的功效，常用于肾虚腰酸、腹泻胀满等病症，其叶也可入药，用于治疗肝炎、风寒感冒等。目前对胡芦巴地上部分(不包含种子)的研究较少，并且，仅有极少数学者对胡芦巴地上部分(不包含种子)中的紫檀素类成分进行了研究。

氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用，并被认为是导致衰老和疾病的一个重要因素。从传统中草药尤其是药食同源的植物中寻找天然的、无毒副作用的抗氧化剂已成为了研究热点。

炎症是机体对于刺激的一种防御反应，但较为长期的炎症反应，会引起心血管方面的以及与衰老相关的一些疾病，如类风湿性关节炎、动脉粥样硬化等。而从传统中草药中寻找更多结构新颖、具有高效低毒的抗炎化合物已经成为当前的研究热点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种胡芦巴中紫檀素类化合物及其制备方法和应用

为实现上述目的，本发明第一方面提供的胡芦巴中紫檀素类化合物，其特征在于：其结构式如下：

化合物1：

或者，

化合物2：

或者，

化合物3：

或者，

化合物4：

本发明第二方面提供一种制备如上述胡芦巴中紫檀素类化合物的方法，其特征在于：所述胡芦巴中紫檀素类化合物是从胡芦巴地上部分中分离得到的，其中胡芦巴地上部分不包含种子；包括如下步骤：

S1.将胡芦巴地上部分粉碎，所述胡芦巴地上部分不包含种子，用体积浓度95％乙醇提取，减压浓缩回收乙醇后，得到浸膏；

S2.将S1所得浸膏经柱色谱分离，得到如权利要求1中所述化合物1、化合物2、化合物3或化合物4中任一种或任二种以上的组合；所述柱色谱分离方法包括硅胶柱色谱、大孔树脂柱色谱、凝胶柱色谱或反相柱色谱中任一种。

作为优选方案，所述柱色谱用以下任何两种溶剂组成的混合溶剂进行梯度洗脱：水、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚或二氯甲烷。

本发明第三方面提供一种如上述的胡芦巴中紫檀素类化合物在制备抗氧化剂或抗炎药物中的应用，其特征在于：所述胡芦巴中紫檀素类化合物在制备抗氧化剂或抗炎药物时，可单独使用、联合使用或作为药物组合物使用；可制备为散剂、丸剂、胶囊剂、片剂、膜剂、膏剂、颗粒剂、气雾剂或凝胶剂中任一种剂型。

本发明的优点及有益效果如下：

在对该植物进行活性筛选的过程中，发现该植物提取物具有显著的抗氧化和抗炎活性。在抗氧化和抗炎活性的指导下，对胡芦巴地上部分(不包含种子)的抗氧化、抗炎活性成分进行了系统研究，分离得到了化合物1、2、3和4。通过对分离得到的化合物进行抗氧化和抗炎活性研究，发现化合物1、2和3均具有明显的抗炎活性，化合物2、3和4具有显著的抗氧化活性。而关于这些化合物的抗氧化、抗炎活性之前未见报道。

本发明涉及胡芦巴地上部分(不包含种子)中相关紫檀素类化合物的分离制备以及其具有的抗氧化、抗炎活性。可以预期发展成为抗氧化剂和抗炎药物。由此完成了本发明。本发明所提供的化合物具有显著的抗氧化和抗炎活性。

附图说明

图1为本发明中胡芦巴地上部分(不包含种子)的分离制备流程图。

具体实施方法

以下结合附图和具体实施例来对本发明作进一步地详细阐述。

实施例1

11b-hydroxy-11b,1-dihydrodemethylmedicarpin的分离制备

干燥的胡芦巴植株地上部分(8.65kg)粉碎后用25.00L 95％乙醇于室温下浸泡提取3次，每次7天。合并提取液回收溶剂后用1.0L水混悬，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚部位302.86g、乙酸乙酯部位105.19g、正丁醇部位113.95g、以及水部位359.99g。

乙酸乙酯部位用大孔树脂柱(30-100％)粗分，经TLC点板检测合并成6个组分(TA-TF)。TB组分经正相硅胶柱分成3个部分(TB.1、TB.2、TB.3)。TB.2部分经LH-20凝胶柱分离得到化合物1。分离流程如图1所示。

如式(1)所示化合物11b-hydroxy-11b,1-dihydrodemethylmedicarpin，对其进行高分辨质谱、紫外光谱、红外光谱、旋光、核磁共振等数据测试，从而确定化合物的结构。化合物1为新化合物。

化合物1：白色无定型粉末；

-4.95(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)257(4.08),282(3.85)nm；IR(KBr)νmax 3456,3414,2965,1617,1467,1384,1201,1182,1139,1098cm^-1；¹H和¹³C NMR数据,见表1；HRESIMS([M+H]⁺m/z 275.0909,calcd for C₁₅H₁₅O₅,275.0914).

表1.化合物1的¹H NMR(400MHz)和¹³C NMR(100MHz)数据(Recorded ininpyridine-d₅,δ:ppm)

实施例2

化合物1、2和3的抗炎活性测试。

抗炎试验：

采用Griess法对样品进行抗炎活性评估。将RAW264.7小鼠巨噬细胞接种于DMEM培养基(含10％FBS、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，置于5％CO₂培养箱中，于37℃下进行培养。预先用MTT试验测试样品对RAW 264.7的细胞毒性，并在样品对该细胞无毒性的最大浓度范围以内测试样品抗炎活性。用DMEM培养基稀释待测样品至适当浓度，用等体积的稀释过后样品溶液以及LPS溶液处理细胞，并将其置于CO₂培养箱中培养24小时。取反应过后的培养基加Griess试剂混合，于室温反应10分钟，在540nm下测得吸光度。试验设空白对照组、造模组以及加入吲哚美辛的阳性对照组，每个试验重复3次。其NO抑制率按如下公式计算：

NO抑制率＝(A_造模组-A_药物组)/(A_造模组-A_空白组)×100％

结果如表2所示：

表2.化合物1、2和3的抗炎活性

Data were expressed as mean±SD(n＝3).

实验结论：化合物1、2和3能够显著抑制由LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中NO的释放，其中2和3的活性优于阳性药，新化合物1的活性接近于阳性药，所试化合物具有明显的抗炎活性。实验结果表明化合物1、2和3具有开发为抗炎药物的潜力。

实施例3

化合物2、3和4的抗氧化活性测试。

抗氧化试验：

采用DPPH自由基清除试验来评样品的抗氧化活性。称取DPPH适量，加入无水乙醇配置成浓度为2×10^-4mol/L的溶液，置于低温避光的环境中保存备用。精确称取待测样品，配置成相应浓度梯度(粗提物：800、400、200、100、50、20μg/mL；化合物：50、25、10、5、2.5、0.5μg/mL)溶液。试验设样品组(100μL样品+100μL DPPH)、样参组(100μL样品+100μL无水乙醇)、空参组(100μL DPPH+100μL样品所用溶剂)以及溶剂组(100μL样品所用溶剂+100μL无水乙醇)四个试验组，采用96孔进行操作，每个样品浓度做3个平行。在96孔板中加入四个试验组的反应体系，混匀后立马置于37℃避光恒温箱中反应30分钟，然后将96孔板放于酶标仪中，于517nm下读取吸光度(A)。每个试验重复3次，以维生素C为阳性对照。试验结果按如下公式计算：

DPPH清除率(％)＝1-[(A_样品-A_样参)/(A_空参-A_溶剂)]×100

结果如表3所示：

表3.化合物2、3和4的DPPH自由基清除活性

Data were expressed as mean±SD(n＝3).

实验结论：化合物2、3和4具有显著的DPPH自由基清除活性，其中化合物4的清除活性优于阳性药，表明其抗氧化活性明显。且其抗氧化活性为首次报道。化合物2、3和4具有开发为抗氧化剂的潜力。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种胡芦巴中紫檀素类化合物，其特征在于：其结构式如下：

化合物1：

2.一种如权利要求1所述的胡芦巴中紫檀素类化合物在制备抗炎药物中的应用，其特征在于：所述胡芦巴中紫檀素类化合物在制备抗炎药物时，单独使用、联合使用或作为药物组合物使用；制备为散剂、丸剂、胶囊剂、片剂、膜剂、膏剂、颗粒剂、气雾剂或凝胶剂中任一种剂型。

Images