CN115541794A - 一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法,包括以下步骤:将白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒进行提取,配制成供试品溶液;将白药子对照药材进行提取,配制成对照药材参照物溶液;将千金藤素和甲醇混合,配制成对照品参照物溶液;将供试品溶液、对照药材参照物溶液与对照品参照物溶液分别采用超高效液相色谱检测,得到白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒的特征图谱以及白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒中千金藤素的含量。本发明建立了统一的白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒的特征图谱测定方法,该方法可同时测定样品中千金藤素含量。
Description
技术领域
本发明属于中药鉴别技术领域,具体涉及一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法。
背景技术
白药子为防己科植物头花千金藤(金线吊乌龟,Stephania cepharantha Hayata)的干燥块根。其在我国的分布西至陕西汉中地区和四川东部和东南部,贵州东部和南部,东至浙江、江苏和台湾,南至广西和广东。
“白药子”之名见载于唐《新修本草》。宋《图经本草》载白药子,“江西出者,叶似乌桕,子如绿豆,至八月其子变赤色”。该描述与防己科头花千金藤基本相符。《本草纲目》中:“蔓及根并似土瓜,叶如钱,根似防己”的陈家白药亦与头花千金藤相似。《植物名实图考》中以通称的别名“金线吊乌龟”作为正名而收载,其描述亦与头花千金藤一致。白药子虽未记载入现行《中国药典》中,但在1977年版《中国药典》中已将防己科植物头花千金藤的干燥块根作为白药子正品收载。
白药子在我国多数省份常有临床应用,《北京市中药饮片炮制规范(2008年版)》、《贵州省中药材、民族药材质量标准(2003年版)》和《湖南省中药饮片炮制规范(2010年版)》均有收载,但只有简单的性状、理化鉴别,专属性不强,不能有效地控制白药子的质量。白药子味辛、温,无毒;主金疮、生肌,药效较为显著,故在中蒙医用药临床上广泛使用,且市场上还存在着以百合科植物黄精属Polygonatum的根茎充当白药子的伪品,因此,急需提高地方现行质量控制标准。
白药子所含化学成分主要为生物碱,可以分为7类,其中双苄基异喹啉型含量最高,药理作用也最丰富,包括抗癌作用、镇痛镇静作用、抗菌消炎作用、免疫系统作用、抗耐药作用、抗心律失常作用等。千金藤素作为双苄基异喹啉型生物碱,在白药子中发挥重要作用,目前有部分文献研究报道了白药子中千金藤素的测定方法以及质量控制方法。
例如:王应斌等(王应斌,穆仙丽.RP-HPLC法测定白药子中千金藤素的含量[J].中国民族医药杂志,2010,4(4):44-45.)通过RP-HPLC法,以甲醇-0.05%三乙胺溶液(75:25)进行等度洗脱,测定了白药子药材中的千金藤素含量,确定了千金藤素在282nm出有最大吸收。但是利用此方法得到的色谱图峰形差,色谱峰有明显的拖尾现象,并且只测定了白药子药材中千金藤素的含量,未对其特征峰进行规定。
张志同等(张志同,傅兴圣,朱琳,等.白药子质量标准研究[J].药学与临床研究,2019, 27(5):356-358.)通过性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、浸出物对白药子药材质量进行控制,同样采用甲醇-0.1%三乙胺(75:25)进行等度洗脱,测定了白药子药材中的千金藤素含量。利用此方法得到的色谱图峰形有所改善,但是除了含测指标千金藤素的色谱峰以外,其他色谱峰分离度不佳,也未对特征峰做出规定。因此该方法未能直接用来检测白药子药材的特征峰。
以上研究均是针对白药子药材建立的控制指标,而对于白药子标准汤剂,配方颗粒的质量控制方面未见报道。运用现代化技术生产的白药子配方颗粒已经失去了固有形态,现有的检测方法难以深入分析白药子药效基础物质在从原料到标准汤剂再到配方颗粒成品的传递情况,无法对比和分析整个工艺过程中关键环节样品的差异与变化,因此难以整体评价和控制白药子原料到配方颗粒成品工艺过程的内在质量。
因此如何提供一种白药子的分析方法,使其可以整体评价和控制白药子原料到配方颗粒成品工艺过程的内在质量,成为目前亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法。本发明建立了统一的白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒特征图谱测定方法,该方法可同时测定样品中千金藤素含量,有利于整体评价白药子相关工艺过程的科学性、合理性,更能有效控制白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒的内在质量。该检测方法准确、快捷、稳定性强,对保证产品的稳定性和临床有效性与安全性具有重要意义。
为达到此发明目的,本发明采用以下技术方案:
本发明提供一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法,所述质量控制方法包括以下步骤:
(1)将白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒进行提取,配制成供试品溶液;
将白药子对照药材进行提取,配制成对照药材参照物溶液;
将千金藤素和甲醇混合,配制成对照品参照物溶液;
(2)将步骤(1)得到的供试品溶液、对照药材参照物溶液与对照品参照物溶液分别采用超高效液相色谱检测,得到白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒的特征图谱以及白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒中千金藤素的含量。
本发明要解决的技术问题是目前报道中尚无一种检测方法适用于分析白药子药效基础物质在从原料到标准汤剂再到配方颗粒成品的传递情况,无法对比和分析整个工艺过程中关键环节样品图谱的差异与变化,因此难以整体评价和控制白药子原料到配方颗粒成品工艺过程的内在质量。本方法在能准确快速检测白药子及其制剂中千金藤素含量的同时可作为其特征图谱的检测方法,进一步丰富其相关信息,提高产品的质量标准。
在本发明中,步骤(1)中,所述供试品溶液的配制具体包括以下步骤:
取白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒,与甲醇水溶液进行混合,超声,过滤,得到所述供试品溶液。
优选地,所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为50%-80%(例如可以是50%、53%、56%、 59%、63%、66%、69%、73%、76%、79%、80%等)。
优选地,所述白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒,与甲醇水溶液的固液比为0.25:(15-50)g/mL(其中,“15-50”可以是15、20、25、30、35、40、45、50等)。
优选地,所述超声的功率为240-260W(例如可以是240W、243W、246W、249W、 253W、256W、259W、260W等),所述超声的频率为30-50kHz(例如可以是30kHz、33kHz、35kHz、38kHz、40kHz、43kHz、46kHz、49kHz、50kHz等),所述超声的时间为20-50min (例如可以是20min、23min、26min、29min、35min、40min、43min、47min、50min 等)。
在本发明中,步骤(1)中,所述对照药材参照物溶液的配制具体包括以下步骤:
将白药子对照药材和水混合,进行煎煮,得到所述对照药材参照物溶液。
优选地,所述白药子对照药材和水的质量比为1:(25-35)(其中,“25-35”可以是25、26、 27、28、29、30、31、32、33、34、35等)。
优选地,所述煎煮的时间为10-40min(例如可以是10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min等)。
优选地,步骤(1)中,所述对照品参照物溶液的配制具体包括以下步骤:将千金藤素和甲醇混合,得到所述对照品参照物溶液。
优选地,所述千金藤素和甲醇的固液比为(20-30):1μg/mL(其中,“20-30”可以是20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30等)。
在本发明中,所述标准汤剂冻干粉的制备方法包括以下步骤:
采用水煎煮法从白药子饮片中提取白药子,得到白药子标准汤剂;将白药子标准汤剂进行减压浓缩,冷冻干燥,得到白药子标准汤剂冻干粉;
其中,所述水煎煮法包括依次进行地一煎和二煎,所述一煎的加水重量为白药子饮片重量的5-8倍(例如可以是5倍、6倍、7倍、8倍等),煎煮时间为10-30min(例如可以是10min、13min、16min、19min、23min、26min、29min、30min等);所述一煎前还进行浸泡处理,所述浸泡的时间为20-40min(例如可以是20min、23min、26min、29min、33min、 36min、39min、40min等);所述二煎的加水重量为白药子饮片重量的4-8倍(例如可以是 4倍、5倍、6倍、7倍、8倍等),煎煮时间为10-30min(例如可以是10min、13min、16min、 19min、23min、26min、29min、30min等)。
优选地,所述减压浓缩的温度为60-70℃(例如可以是60℃、62℃、64℃、66℃、68℃、 70℃等)。
在本发明中,所述冷冻干燥包括10个阶段,所述冷冻干燥的具体过程如下表所示:
在本发明中,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中色谱柱采用的填充剂包括C18 键合硅胶。
优选地,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中色谱柱采用的色谱柱包括WatersXBridge C18、Waters XBridge Shield RP18或Agilent ZORBAX Extend C18中的任意一种。
优选地,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中柱温为28-32℃(例如可以是28℃、 29℃、30℃、31℃、32℃等)。
在本发明中,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中流动相的流速为0.9-1.1mL/min (例如可以是0.9mL/min、0.93mL/min、0.96mL/min、0.99mL/min、1.03mL/min、1.06mL/min、 1.09mL/min、1.1mL/min等)。
在本发明中,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中检测波长为282nm。
优选地,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中进样量为8-12μL(例如可以是8μL、 9μL、10μL、11μL、12μL等)。
在本发明中,所述超高效液相色谱检测中以甲醇为流动相A,以0.05%-0.15%(例如可以是0.05%、0.07%、0.09%、0.11%、0.13%、0.15%等)三乙胺水溶液为流动相B,按照下表进行梯度洗脱:
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~10 | 40→47 | 60→53 |
10~18 | 47→58 | 53→42 |
18~24 | 58 | 42 |
24~30 | 58→75 | 42→25 |
30~40 | 75 | 25 |
40~60 | 75→90 | 25→10 |
在本发明中,所述白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒共有4个特征峰,按照出峰时间由短至长依次为峰1、峰2、峰3和峰4,以峰4为S峰,峰1-3的相对保留时间在规定值的±10%之内,所述规定值分别为:0.51、0.80和0.93;其中峰4为千金藤素。
相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:
本研究建立了统一的白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒的特征图谱测定方法,该方法可同时测定样品中千金藤素含量,有利于整体评价白药子相关工艺过程的科学性、合理性,更能有效控制白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒的内在质量。该检测方法准确、快捷、稳定性强,对保证产品的稳定性和临床有效性与安全性具有重要意义,能够进一步补充完善白药子及其相关制剂的质量评价体系。
附图说明
图1为白药子对照药材参照物特征图谱,其中峰4为千金藤素。
图2为实施例1中白药子标准汤剂冻干粉供试品特征图谱,其中峰4为千金藤素。
图3为实施例1中白药子配方颗粒供试品特征图谱,其中峰4为千金藤素。
图4为白药子标准汤剂冻干粉延迟性色谱图。
图5为白药子标准汤剂冻干粉、白药子对照药材参照物和千金藤素对照品参照物的相关性研究对比图;
其中,S1为白药子标准汤剂冻干粉,S2为白药子对照药材参照物,S3为千金藤素对照品参照物,峰4为千金藤素。
图6为15批白药子标准汤剂冻干粉的特征图谱;
其中S1-S15分别为YP202106-10-1~YP202106-10-15,R为对照图谱,峰4为千金藤素。
图7为不同提取溶剂白药子标准汤剂冻干粉的特征谱图,其中峰4为千金藤素。
图8为千金藤素的标准曲线图。
图9为15批白药子药材的特征图谱;
其中R为对照图谱,S1-S15分别为202106-10-1~202106-10-15,峰4为千金藤素。
图10为3批白药子配方颗粒的特征图谱;
其中,S1为KL202106-10-1,S2为KL 202106-10-9,S3为KL202106-10-14,R为对照图谱,峰4为千金藤素。
图11为白药子YP202106-10-1生产验证特征图谱;
其中,S1为白药子标准汤剂冻干粉对照图谱,S2为白药子药材图谱,S3为提取液图谱, S4为浓缩液图谱,S5为浸膏粉图谱,S6为白药子配方颗粒图谱,峰4为千金藤素。
图12为白药子YP202106-10-9生产验证特征图谱;
其中,S1为白药子标准汤剂冻干粉对照图谱,S2为白药子药材图谱,S3为提取液图谱, S4为浓缩液图谱,S5为浸膏粉图谱,S6为白药子配方颗粒图谱,峰4为千金藤素。
图13为白药子YP202106-10-14生产验证特征图谱;
其中,S1为白药子标准汤剂冻干粉对照图谱,S2为白药子药材图谱,S3为提取液图谱, S4为浓缩液图谱,S5为浸膏粉图谱,S6为白药子配方颗粒图谱,峰4为千金藤素。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了,所述实施例仅仅是帮助理解本发明,不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中仪器、试剂及试药来源如下:
试药:千金藤素(批号为:111647-200301,纯度100%,中国食品药品检定研究院)
白药子对照药材:批号:202106-10-3;
白药子药材:批号:202106-10-1;202106-10-2;202106-10-3;202106-10-4;202106-10-5;202106-10-6;202106-10-7;202106-10-8;202106-10-9;202106-10-10;202106-10-11;202106-10-12;202106-10-13;202106-10-14;202106-10-15;
白药子饮片:批号:yp202106-10-1;yp 202106-10-2;yp 202106-10-3;yp202106-10-4;yp202106-10-5;yp202106-10-6;yp202106-10-7;yp202106-10-8;yp202106-10-9;yp202106-10-10;yp202106-10-11;yp202106-10-12;yp202106-10-13;yp202106-10-14;yp202106-10-15;
白药子标准汤剂冻干粉:批号:YP202106-10-1;YP202106-10-2;YP202106-10-3;YP202106-10-4;YP202106-10-5;YP202106-10-6;YP202106-10-7;YP202106-10-8;YP202106-10-9;YP202106-10-10;YP202106-10-11;YP202106-10-12;YP202106-10-13;YP202106-10-14;YP202106-10-15;
白药子配方颗粒:批号:KL202106-10-1;KL202106-10-9;KL202106-10-14。
试剂:甲醇(默克)为色谱纯;三乙胺(色谱纯,赛默飞);水为蒸馏水(屈臣氏);其它试剂均为分析纯。
仪器:百分之一天平(型号:JA1002,厂家:上海浦春计量仪器有限公司);
万分之一天平(型号:ML204T,厂家:梅特勒·托利多仪器(上海)有限公司);
电子天平(型号:MSA6 6S-OCE-DM,厂家:赛多利斯科学仪器(北京)有限公司);
超快速液相色谱仪(型号:Waters UPLC Arc(UV),厂家:沃特世科技(上海)有限公司);
高效液相色谱仪(型号:Thermo Ultimate 3000,厂家:赛默飞世尔科技(中国)有限公司);
数控超声波清洗器(型号:KQ-100DE,厂家:昆山市超声仪器有限公司);
恒温水浴振荡器(型号:THZ-82,厂家:金坛市精达仪器制造有限公司);
冷冻干燥机(型号:BL-4000FD,厂家:上海比朗仪器制造有限公司);
色谱柱:Waters XBridge C18(4.6×250mm,5μm);
Waters XBridge Shield RP18(4.6mm×250mm,5μm);
Agilent ZORBAX Extend C18(4.6×250mm,5μm)。
以下实施例中保留时间均为分钟(min)计。
制备例1
本制备例提供一种白药子标准汤剂冻干粉,所述白药子标准汤剂冻干粉的制备方法包括以下步骤:
取白药子饮片,置于砂锅中,浸泡30分钟,一煎加入饮片量7倍水,武火煮沸后,文火煎煮20分钟,趁热过滤,迅速冷却,备用;二煎加饮片量6倍水,武火煮沸后,文火煎煮 15分钟,趁热过滤,迅速冷却备用;合并滤液,即得标准汤剂。标准汤剂于65℃下减压浓缩,然后冷冻干燥,即得白药子标准汤剂冻干粉。
冷冻干燥的具体步骤如下所示:
阶段 | 温度设定(℃) | 维持时间(h) |
1 | -40 | 4 |
2 | -30 | 4 |
3 | -20 | 4 |
4 | -10 | 6 |
5 | -5 | 6 |
6 | 0 | 10 |
7 | 10 | 6 |
8 | 20 | 6 |
9 | 30 | 6 |
10 | 35 | 15 |
实施例1
本实施例提供一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法,所述质量控制方法具体包括以下步骤:
对照品参照物溶液的制备:取千金藤素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含 25μg的溶液,作为对照品参照物溶液。
对照药材参照物溶液的制备:取白药子药材(批号:202106-10-3)约1.0g,置烧杯中,加水30mL,沸腾后煎煮30分钟,放冷,滤过,取续滤液,作为对照药材参照物溶液。
白药子药材供试品溶液的制备:取白药子药材适量,研细,取约0.25g,精密称定,置锥形瓶中,精密加70%甲醇水溶液25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,得到白药子药材供试品溶液。
白药子饮片供试品溶液的配制:与白药子药材供试品溶液的区别仅在于,将白药子药材替换为同等质量的白药子饮片。
白药子标准汤剂冻干粉供试品溶液的配制:与白药子药材供试品溶液的区别仅在于,将白药子药材替换为同等质量的白药子标准汤剂冻干粉。
白药子配方颗粒供试品溶液的配制:与白药子药材供试品溶液的区别仅在于,将白药子药材替换为同等质量的白药子配方颗粒。
采用超高效液相色谱对对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、白药子药材供试品溶液、白药子饮片供试品溶液、白药子标准汤剂冻干粉供试品溶液和白药子配方颗粒供试品溶液进行检测;
色谱条件:采用Waters XBridge Shield RP18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;以甲醇为流动相A,以0.1%三乙胺为流动相B,按下表进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0mL;柱温为30℃;检测波长为282nm;进样量为10μL。理论板数按千金藤素峰计算应不低于3000,洗脱梯度如下所示:
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~10 | 40→47 | 60→53 |
10~18 | 47→58 | 53→42 |
18~24 | 58 | 42 |
24~30 | 58→75 | 42→25 |
30~40 | 75 | 25 |
40~60 | 75→90 | 25→10 |
如图1、图2和图3所示,白药子标准汤剂冻干粉(批号为YP202106-10-1)供试品与白药子配方颗粒(批号为KL202106-10-1)供试品呈现4个特征峰,并应与白药子对照药材参照物色谱峰中的4个特征峰相对应,其中峰4与对照品参照物(千金藤素)保留时间一致,以4号峰为S峰,计算特征峰1~3的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±10%之内。规定值为0.51(峰1)、0.80(峰2)、0.93(峰3)、1.00(峰4S)。
(一)白药子标准汤剂冻干粉特征图谱的构建
实验例1延迟性实验
取白药子标准汤剂冻干粉供试品溶液(实施例1提供),按实施例1提供的方法进行超高效液相色谱测定,记录2倍流动相洗脱时间的色谱图,测试结果如图4所示,延迟性结果表明,在60分钟之后没有明显的滞后峰出现,判断本发明提供的色谱方法符合分析要求。
实验例2系统适用性实验
按实施例1提供的方法对白药子标准汤剂冻干粉供试品溶液(实施例1提供)进行超高效液相色谱测定,以千金藤素峰为参照,进行系统适用性试验,测试结果如下表1所示:
表1
测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(%) |
理论板数 | 152730 | 153863 | 156274 | 154883 | 155488 | 154648 | 0.9 |
拖尾因子 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 0.0 |
峰面积 | 135283 | 135525 | 136263 | 134382 | 134832 | 135257 | 0.5 |
系统适用性结果符合《中国药典》2020版0512高效液相色谱相关要求。
实验例3方法学验证
3.1专属性
按实施例1提供的方法对白药子标准汤剂冻干粉(批号:YP202106-10-03)、白药子对照药材参照物和千金藤素的图谱进行超高效液相色谱测定。
测试结果如图5所示,从图中可以看出,白药子标准汤剂冻干粉、白药子对照药材参照物和千金藤素对照品参照物溶液的图谱无干扰,说明本发明提供的方法专属性良好。
3.2精密度
3.2.1重复性
取白药子标准汤剂冻干粉(批号:YP202106-10-3)6份,按实施例1提供的方法进行超高效液相色谱测定,获得其特征图谱,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间和相对峰面积,并计算RSD值。
重复性保留时间及相对保留时间结果如下表2所示:
表2
重复性峰面积及相对峰面积如下表3所示:
表3
重复性考察结果表明,各特征峰的相对保留时间RSD在0.01%~0.13%范围内,各特征峰的相对峰面积RSD在1.55%~2.66%范围内,表明该特征图谱方法的重复性较好。
3.2.2中间精密度
取白药子标准汤剂冻干粉(YP202106-10-3),不同分析人员在不同时间利用另一台赛默飞高效液相色谱仪进行中间精密度试验(型号:Ultimate3000),按实施例1提供的方法进行超高效液相色谱测定,获得其特征图谱,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间和相对峰面积,结果与重复性考察的结果计算不同仪器的RSD值。
中间精密度考察保留时间及相对保留时间如下表4所示:
表4
中间精密度考察峰面积及相对峰面积如下表5所示:
表5
各特征峰的相对保留时间RSD在0.01%~0.09%范围内,不同仪器间相对保留时间RSD 范围是0.20%~0.58%,表明该分析方法实验结果比较稳定;不同仪器间各峰相对峰面积的RSD 值较大,因此不对相对峰面积范围进行限定。
3.3耐用性
3.3.1稳定性考察
取白药子标准汤剂冻干粉(YP202106-10-3),按实施例1提供的方法制备供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h按实施例1提供的方法进行测定,获得其特征图谱,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间和相对峰面积,并计算RSD值。
稳定性考察保留时间及相对保留时间如下表6所示:
表6
稳定性考察峰面积及相对峰面积如下表7所示:
表7
稳定性实验结果可知,样品溶液中特征成分在24小时内稳定,各特征峰的相对保留时间 RSD在0.02%~0.24%范围内,相对峰面积的RSD在2.60%~3.89%范围内。
3.3.2不同柱温的考察
取白药子标煎冻干粉(批号:YP202106-10-3),按实施例1提供的供试品溶液制备方法制备成供试品溶液,分别于不同柱温(28℃、30℃及32℃)按实施例1提供的色谱条件进行测定获得其特征图谱,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间,并计算RSD 值。
不同柱温考察保留时间及相对保留时间如下表8所示:
表8
分别考察不同柱温(28℃、30℃及32℃),特征峰的相对保留时间RSD在0.24%~0.40%范围内,表明该方法对柱温具有较好的耐用性。
3.3.3不同流速的考察
取白药子标煎冻干粉(批号:YP202106-10-3),按实施例1提供的供试品溶液制备方法制备成供试品溶液,分别于不同流速下(0.9mL/min、1.0mL/min及1.1mL/min)按实施例1 提供的色谱条件进行测定获得其特征图谱,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间,并计算RSD值。
不同流速考察保留时间及相对保留时间如下表9所示:
表9
分别考察不同流速下(0.9mL/min、1.0mL/min及1.1mL/min),特征峰的相对保留时间 RSD在0.51%~1.86%范围内,表明该方法对不同流速具有较好的耐用性。
3.3.4不同品牌型号色谱柱的考察
取白药子标煎冻干粉(批号:YP202106-10-3)按实施例1提供的方法制备供试品溶液,采用不同型号色谱柱按实施例1提供的方法进行测定获得其特征图谱,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间,并计算RSD值。
色谱柱1:Waters XBridge C18(4.6*250mm,5.0μm);
色谱柱2:Waters XBridge Shield RP18(4.6*250mm,5.0μm);
色谱柱3:Agilent ZORBAX Extend C18(4.6*250mm,5.0μm);
不同色谱柱考察保留时间及相对保留时间如下表10所示:
表10
分别考察不同色谱柱,特征峰的相对保留时间RSD在2.20%~3.53%范围内,表明该方法对不同色谱柱具有较好的耐用性。
实验例4样品检测及数据处理
利用建立的特征图谱方法(实施例1提供的测试方法),测定15批白药子标准汤剂样品的特征图谱,使用《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012.1版本),对共有峰进行标识,并以S1为参照图谱,按中位数计算,得出对照图谱,并计算各批次白药子标准汤剂图谱与对照图谱的相似度,确定相似度的可接受范围。并根据各色谱峰的特点及白药子中活性成分的情况,以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间和相对峰面积,对各共有峰进行相对保留时间和相对峰面积进行统计,并明确各共有峰的相对保留时间的可接受度。
白药子标准汤剂冻干粉(15批)的特征图谱如下图6所示,15批白药子标准汤剂冻干粉特征图谱的相似度如下表11所示:
表11
15批白药子标准汤剂冻干粉特征图谱保留时间及相对保留时间如下表12所示:
表12
15批白药子标准汤剂冻干粉特征图谱峰面积及相对峰面积如下表13所示:
表13
利用《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012.1版本)生成的白药子标准汤剂冻干粉的特征图谱有4个共有峰,其中4号峰作为参照峰S,以S峰计算1~3号峰相对保留时间和相对峰面积。各特征峰相对保留时间差异较小,均在均值±10%范围内,符合质量控制要求,选择相对保留时间的平均值作为规定值:0.51(峰1)、0.80(峰2)、0.93(峰3),允许误差:±10%。而各批次间特征峰相对峰面积的差异较大,其RSD值为9.48%~17.85%,不适合作为质量控制要求,因此不将相对峰面积收入标准中。
(二)白药子标准汤剂冻干粉中千金藤素含量的测定
实验例5系统适用性实验
按实施例1提供的方法对白药子标准汤剂冻干粉供试品溶液(实施例1提供)进行超高效液相色谱测定,以千金藤素峰为参照,进行系统适用性试验,测试结果如下表14所示:
表14
测定次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD(%) |
理论板数 | 152730 | 153863 | 156274 | 154883 | 155488 | 154648 | 0.89 |
拖尾因子 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 1.1 | 0.00 |
重复性 | 35243 | 35838 | 35993 | 35499 | 36494 | 35813 | 1.34 |
系统适用性结果符合《中国药典》2020版0512高效液相色谱相关要求。
实验例6供试品溶液的制备
6.1提取溶剂的选择
分别取白药子标准汤剂冻干粉(批号:YP202106-10-3),平行称取0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入适当溶剂(甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇、水)25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,分别用相应溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过作为供试品溶液。按实施例1提供的色谱条件测定,计算千金藤素含量,结果见下表15。
表15
采用不同提取溶剂得到的白药子标准汤剂冻干粉的特征谱图如图7所示,其中峰4为千金藤素。
由上述结果可知,不同提取溶剂对千金藤素的提取能力不同,其中采用50%甲醇水溶液、 70%甲醇水溶液、甲醇作为提取溶剂,千金藤素含量相对较高,同时综合考虑不同提取溶剂特征图谱中各特征峰的峰形及分离情况相近,所以最终确定提取溶剂为70%甲醇水溶液。
6.2提取溶剂剂量的考察
分别取白药子标准汤剂冻干粉(批号:YP202106-10-3),平行称取0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入溶剂70%甲醇水溶剂15mL、25mL、50mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,分别用相应溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过作为供试品溶液。按正文色谱条件测定,计算千金藤素含量,测试结果如下表16所示:
表16
由上述结果可知,不同提取溶剂量对千金藤素的提取能力有差别,其中采用25mL和50 mL提取千金藤素含量相对较高,同时出于成本及操作方面的考虑,选择提取溶剂量为25mL。
6.3提取方式的考察
分别取白药子标准汤剂冻干粉(批号:YP202106-10-3),平行称取0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入适量70%甲醇水溶液25mL密塞,称定重量,分别超声处理 (功率250W,频率40kHz)、回流提取30分钟,取出,放冷,再称定重量,分别用相应溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过,作为供试品溶液,按实施例1提供的色谱条件测定,计算千金藤素的含量,结果见下表17。
表17
以上结果表明,不同提取方式所获得的供试品溶液中千金藤素的含量差异不大,从实验操作的简单性考虑,确定采用超声处理作为供试品溶液制备的提取方式。
6.4提取时间的考察
分别取白药子标准汤剂冻干粉(批号:YP202106-10-3),平行称取0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入溶剂70%甲醇水溶液25mL,密塞,称定重量,分别超声处理(功率250W,频率40kHz)20分钟、30分钟、40分钟,取出,放冷,再称定重量,分别用相应溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过作为供试品溶液。按实施例1提供的色谱条件测定,计算千金藤素含量,结果见下表18。
表18
由上述结果可知,不同提取时间对千金藤素的提取能力略有差别,其中采用40分钟提取千金藤素含量相对较高,因此选择提取时间为40分钟。
供试品溶液的制备方法为,取供试品(白药子标准汤剂冻干粉)0.25g,精密称定,置锥形瓶中,精密加70%甲醇水溶液25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz) 40分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇水溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
实验例7方法学验证
7.1线性
取千金藤素对照品适量,精密称定,加70%甲醇水溶液制成每1mL含千金藤素60.10μg 的对照品溶液,作为千金藤素对照品母液⑤;再精密吸取千金藤素对照品溶液⑤1mL于25 mL棕色容量瓶中,加入70%甲醇水溶液稀释至刻度,作为千金藤素对照品溶液①。再精密吸取千金藤素对照品溶液⑤5mL于100mL棕色容量瓶中,加入70%甲醇水溶液稀释至刻度,作为千金藤素对照品溶液②。再精密吸取千金藤素对照品溶液⑤10mL于100mL棕色容量瓶中,加入70%甲醇水溶液稀释至刻度,作为千金藤素对照品溶液③。再精密吸取千金藤素对照品溶液⑤5mL于25mL棕色容量瓶中,加入70%甲醇水溶液稀释至刻度,作为千金藤素对照品溶液④。分别取上述千金藤素对照品溶液①~⑤滤过,精密吸取上述续滤液10μL,注入超高效液相色谱仪,按实施例1提供的方法测定千金藤素色谱峰峰面积,以千金藤素色谱峰的峰面积为纵坐标,千金藤素的浓度为横坐标,绘制标准曲线,以最小二乘法进行线性回归,求得千金藤素回归方程为Y=5667.31X–1850.12,R2=1.000,其线性范围为 2.4040-60.1000μg/mL。结果见下表19。
表19
图8为千金藤素的标准曲线图,由表19和图8可知,采用本发明提供的方法,千金藤素的线性关系良好。
7.2精密度
7.2.1重复性
取白药子标准汤剂冻干粉供试品(批号:YP202106-10-3)6份,按实施例1提供的方法测定,计算样品中千金藤素含量,结果见下表20。
表20
重复性试验所测得千金藤素平均含量为0.66mg/g,其RSD为1.62%,符合方法学验证重复性要求。
7.2.2中间精密度
不同分析人员在不同时间利用另一台赛默飞Ultimate3000高效液相色谱仪(TUV检测器) 进行中间精密度试验。取白药子标准汤剂冻干粉供试品(批号:YP202106-10-03)6份,按实施例1提供的方法进行测定,结果见下表21。
表21
中间精密度试验所测得千金藤素平均含量为0.70mg/g,RSD值为3.31%,与重复性试验的检测结果的RSD为3.84%,符合方法学验证精密度要求。
7.3准确度
取千金藤素对照品适量,精密称定,加入70%甲醇水溶液制成每1mL含60.10μg的溶液。取重复性项下已知含量的白药子标准汤剂冻干粉供试品(批号:YP202106-10-03)9份,每份约1g,精密称定,分别精密加入含有千金藤素0.0751mg、0.1503mg、0.2254mg的对照品溶液,余下操作同实施例1提供的方法,按照下式计算回收率,结果见下表22。
表22
回收率试验所测得的回收率范围为95.50%~103.37%,平均回收率为99.1%,RSD值为 2.73%,符合方法学验证回收率要求,表明利用该方法测得的结果准确。
7.4耐用性
7.4.1稳定性考察
取白药子标准汤剂冻干粉供试品适量(批号:YP202106-10-3),按实施例1提供的方法制备供试品溶液,分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h按实施例1提供的方法进行测定,记录千金藤素峰面积的变化情况,结果见下表23。
表23
由以上数据可知,24小时内千金藤素的峰面积RSD值为3.93%,符合系统适用性试验要求,表明24小时内样品中千金藤素的稳定性较好。
7.4.2不同柱温考察
取白药子标准汤剂冻干粉供试品(批号:YP202106-10-3),按实施例1提供的供试品溶液制备方法制备成供试品溶液,分别于不同柱温(28℃、30℃及32℃)按实施例1提供的方法进行测定,考察实验方法对于柱温的耐用性。结果见下表24所示。
表24
不同柱温下测得千金藤素含量的RSD值为2.56%,符合系统适用性要求。表明该方法对柱温耐用性较好。
7.4.3不同流速考察
取白药子标准汤剂冻干粉供试品(批号:YP202106-10-3),按实施例1提供的供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液,分别采用不同流速(0.9mL/min、1.0mL/min及1.1mL/min) 按实施例1提供的方法进行测定,考察实验方法对于流速的耐用性。结果如下表25所示。
表25
采用不同流速测得千金藤素含量的RSD值为4.80%,符合系统适用性要求。表明该方法对流速耐用性较好。
7.4.4不同色谱柱考察
取白药子标准汤剂冻干粉供试品(批号:YP202106-10-3)按实施例1提供的方法制备供试品溶液,采用不同型号色谱柱按实施例1提供的方法进行测定,考察实验方法对于不同色谱柱的耐用性。结果如下表26所示。
色谱柱1:Waters XBridge C18(4.6*250mm,5.0μm);
色谱柱2:Waters XBridge Shield RP18(4.6*250mm,5.0μm);
色谱柱3:Agilent ZORBAX Extend C18(4.6*250mm,5.0μm);
表26
采用不同色谱柱获得的色谱图,千金藤素峰的理论板数、拖尾因子、分离度均符合系统适用性要求;采用不同色谱柱测得千金藤素的含量RSD值为2.25%,符合系统适用性要求,表明该方法对不同色谱柱有较好的耐用性。
实验例8样品含量测定
分别取15批次白药子标准汤剂冻干粉,按照实施例1提供的方法进行测定标准汤剂冻干粉中千金藤素含量,结果如下表27所示。
表27
批号 | 千金藤素含量(mg/g) |
YP202106-10-1 | 0.81 |
YP202106-10-2 | 0.64 |
YP202106-10-3 | 0.64 |
YP202106-10-4 | 0.64 |
YP202106-10-5 | 0.54 |
YP202106-10-6 | 0.66 |
YP202106-10-7 | 0.55 |
YP202106-10-8 | 0.77 |
YP202106-10-9 | 0.65 |
YP202106-10-10 | 0.76 |
YP202106-10-11 | 0.59 |
YP202106-10-12 | 0.66 |
YP202106-10-13 | 0.69 |
YP202106-10-14 | 0.64 |
YP202106-10-15 | 0.78 |
(三)白药子药材特征图谱的检测
利用实施例1中建立的特征图谱方法,测定15批白药子药材样品的特征图谱,使用《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012.1版本),对共有峰进行标识,并以S1为参照图谱,按中位数计算,得出对照图谱,并计算各批次白药子标准汤剂图谱与对照图谱的相似度。以 4号峰千金藤素为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间和相对峰面积,对各共有峰相对保留时间进行统计,并明确各共有峰的相对保留时间的可接受度。
15批白药子药材的特征图谱如图9所示。
15批白药子药材特征图谱相似度结果如下表28所示。
表28
15批白药子药材特征图谱相对保留时间如下表29所示。
表29
利用《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2012.1版本)生成的白药子药材特征图谱有 4个共有峰,15批白药子药材与对照药材相似度均在95%以上,其中4号峰作为参照峰S,以S峰计算1~3号峰相对保留时间差异较小,均在标准汤剂规定值±10%范围内,因此可以沿用白药子标准汤剂特征图谱标准作为白药子药材的特征图谱质量标准。
(四)白药子药材中千金藤素含量的测定
分别取15批次白药子药材粗粉,按照实施例1提供的方法进行千金藤素含量测定,结果如下表30所示:
表30
(五)白药子饮片特征图谱的检测
白药子可趁鲜就地切片、切块,以利于干燥和加工炮制及运输。由于各地炮制规范中描述白药子药材只通过净制除杂即得到白药子饮片,因此两者的化学成分差异很小,特征图谱几乎相同,此处不再赘述。
(六)白药子饮片中千金藤素含量的测定
饮片炮制方法:净制,除杂。
分别取15批次白药子饮片,按照实施例1提供的方法进行千金藤素含量测定,结果如下表31所示:
表31
批号 | 千金藤素含量(mg/g) |
yp202106-10-1 | 1.9 |
yp202106-10-2 | 2.0 |
yp202106-10-3 | 2.3 |
yp202106-10-4 | 2.1 |
yp202106-10-5 | 1.9 |
yp202106-10-6 | 2.2 |
yp202106-10-7 | 2.1 |
yp202106-10-8 | 2.5 |
yp202106-10-9 | 1.7 |
yp202106-10-10 | 1.8 |
yp202106-10-11 | 2.2 |
yp202106-10-12 | 1.8 |
yp202106-10-13 | 2.3 |
yp202106-10-14 | 2.3 |
yp202106-10-15 | 2.1 |
(七)白药子配方颗粒特征图谱的检测
分别取3批白药子配方颗粒,按照实施例1提供的方法获得其液相图谱,使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版本),以S1液相图谱为参照图谱,按中位数计算,得出白药子颗粒对照图谱,并进行共有峰的标识。以4号峰为参照峰S,计算1~3号特征峰的相对保留时间和相对峰面积,对各共有峰进行相对保留时间和相对峰面积进行统计,并明确各共有峰的相对保留时间的可接受度,对三批颗粒进行验证。
3批白药子配方颗粒的特征图谱如图10所示,S1为KL202106-10-1,S2为KL202106-10-9, S3为KL202106-10-14,R为对照图谱。
白药子配方颗粒三批验证保留时间及相对保留时间如下表32所示:
表32
白药子配方颗粒三批生产验证的特征图谱相对保留时间与标准特征图谱的相对保留时间基本符合,特征图谱重现性较好,均在标准汤剂冻干粉规定值±10%范围内,因此可以沿用白药子标准汤剂冻干粉特征图谱标准作为白药子配方颗粒的特征图谱质量标准。
(八)白药子配方颗粒中千金藤素含量的测定
分别取3批次白药子配方颗粒,按照实施例1提供的方法进行千金藤素含量测定,结果如下表33所示:
表33
批号 | 千金藤素含量(mg/g) |
KL202106-10-1 | 1.00 |
KL202106-10-9 | 0.90 |
KL202106-10-14 | 0.95 |
(九)白药子配方颗粒生产过程中各特征峰成分的传递情况
采用本研究的质量控制方法可有效监控白药子配方颗粒生产过程中各特征峰成分的传递情况,能够实现对白药子生产原料、提取、浓缩、干燥、制剂各生产环节样品进行特征图谱检测,并与白药子标准汤剂冻干粉特征图谱进行比对。
白药子配方颗粒的制备方法包括以下步骤:
取白药子饮片适量,提取(100℃)2次,每次煎煮1.5h,一煎加10倍量水,二煎加9倍水,药液用150目滤布趁热过滤,合并滤液,得到提取液。将提取液减压浓缩(85℃),至相对密度为1.05~1.10(60℃)得到浓缩液。将浓缩液进行喷雾干燥,进风温度为180±5℃,收集喷雾干燥粉得到浸膏粉。将浸膏粉加入辅料适量,混匀,干法制粒,得到白药子配方颗粒。
图11为白药子YP202106-10-1生产验证特征图谱,白药子YP202106-10-1生产验证特征图谱比较结果如下表34所示:
表34
图12为白药子YP202106-10-9生产验证特征图谱,白药子YP202106-10-9生产验证特征图谱比较结果如下表35所示:
表35
编号 | 样品名 | 对照特征图谱 |
S1 | 标汤对照图谱 | 1.000 |
S2 | 药材 | 0.946 |
S3 | 提取液 | 0.991 |
S4 | 浓缩液 | 0.991 |
S5 | 浸膏粉 | 0.990 |
S6 | 颗粒 | 0.990 |
图13为白药子YP202106-10-14生产验证特征图谱,白药子YP202106-10-14生产验证特征图谱比较结果如下表36所示:
表36
编号 | 样品名 | 对照特征图谱 |
S1 | 标汤对照图谱 | 1.000 |
S2 | 药材 | 0.946 |
S3 | 提取液 | 0.989 |
S4 | 浓缩液 | 0.990 |
S5 | 浸膏粉 | 0.989 |
S6 | 颗粒 | 0.990 |
由图11-13图谱可见,白药子标准汤剂冻干粉特征图谱4个特征峰均能与生产工艺过程(提取、浓缩、干燥、制粒)和原料药材的特征峰一一对应,表明该4个特征峰均实现稳定传递;与白药子标汤冻干粉对照图谱比较相似度,各生产环节样品的图谱相似度均高于95%,表明生产过程中各环节样品基础物质与白药子标准汤剂保持一致。由此可见,本研究建立了统一的白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒特征图谱测定方法,该方法可同时测定样品中千金藤素含量,有利于整体评价白药子相关工艺过程的科学性、合理性,更能有效控制白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉、配方颗粒的内在质量。
申请人声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法,但本发明并不局限于上述工艺步骤,即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的质量控制方法,其特征在于,所述质量控制方法包括以下步骤:
(1)将白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒进行提取,配制成供试品溶液;
将白药子对照药材进行提取,配制成对照药材参照物溶液;
将千金藤素和甲醇混合,配制成对照品参照物溶液;
(2)将步骤(1)得到的供试品溶液、对照药材参照物溶液与对照品参照物溶液分别采用超高效液相色谱检测,得到白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒的特征图谱以及白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒中千金藤素的含量。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法,其特征在于,步骤(1)中,所述供试品溶液的配制具体包括以下步骤:
取白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒,与甲醇水溶液进行混合,超声,过滤,得到所述供试品溶液;
优选地,所述甲醇水溶液中甲醇的体积分数为50%-80%;
优选地,所述白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒,与甲醇水溶液的固液比为0.25:(15-50)g/mL;
优选地,所述超声的功率为240-260W,所述超声的频率为30-50kHz,所述超声的时间为20-50min。
3.根据权利要求1或2所述的质量控制方法,其特征在于,步骤(1)中,所述对照药材参照物溶液的配制具体包括以下步骤:
将白药子对照药材和水混合,进行煎煮,得到所述对照药材参照物溶液;
优选地,所述白药子对照药材和水的质量比为1:(25-35);
优选地,所述煎煮的时间为10-40min;
优选地,步骤(1)中,所述对照品参照物溶液的配制具体包括以下步骤:将千金藤素和甲醇混合,得到所述对照品参照物溶液;
优选地,所述千金藤素和甲醇的固液比为(20-30):1μg/mL。
4.根据权利要求1-3任一项所述的质量控制方法,其特征在于,所述标准汤剂冻干粉的制备方法包括以下步骤:
采用水煎煮法从白药子饮片中提取白药子,得到白药子标准汤剂;将白药子标准汤剂进行减压浓缩,冷冻干燥,得到白药子标准汤剂冻干粉;
其中,所述水煎煮法包括依次进行地一煎和二煎,所述一煎的加水重量为白药子饮片重量的5-8倍,煎煮时间为10-30min;所述一煎前还进行浸泡处理,所述浸泡的时间为20-40min;所述二煎的加水重量为白药子饮片重量的4-8倍,煎煮时间为10-30min;
优选地,所述减压浓缩的温度为60-70℃。
6.根据权利要求1-5任一项所述的质量控制方法,其特征在于,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中色谱柱采用的填充剂包括C18键合硅胶;
优选地,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中柱温为28-32℃。
7.根据权利要求1-6任一项所述的质量控制方法,其特征在于,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中流动相的流速为0.9-1.1mL/min。
8.根据权利要求1-7任一项所述的质量控制方法,其特征在于,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中检测波长为282nm;
优选地,步骤(2)中,所述超高效液相色谱检测中进样量为8-12μL。
10.根据权利要求1-9任一项所述的质量控制方法,其特征在于,所述白药子药材、饮片、标准汤剂冻干粉或配方颗粒共有4个特征峰,按照出峰时间由短至长依次为峰1、峰2、峰3和峰4,以峰4为S峰,峰1-3的相对保留时间在规定值的±10%之内,所述规定值分别为:0.51、0.80和0.93;其中峰4为千金藤素。
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