CN1155377C

CN1155377C - 抗首过效应的化合物

Info

Publication number: CN1155377C
Application number: CNB988090988A
Authority: CN
Inventors: Jm; J·M·哈里斯
Original assignee: Bioavailability Systems LLC
Current assignee: Bioavailability Systems LLC
Priority date: 1997-08-26
Filing date: 1998-08-26
Publication date: 2004-06-30
Anticipated expiration: 2018-08-26
Also published as: NZ502767A; EP1019042A4; ES2199457T3; CN1270519A; OA11398A; DK1019042T3; AU9028898A; AP2000001746A0; EP1019042B1; SI1019042T1; BR9812002A; AU750224B2; CA2299503A1; CA2299503C; CZ295411B6; EP1019042A1; ATE238786T1; CN1537856A; WO1999009976A1; IL134408A0

Abstract

本发明提供了安全、有效的首过抑制性化合物。本发明还提供了含该化合物的制剂及其制备方法和抑制首过效应的方法。

Description

抗首过效应的化合物

本发明涉及抗首过效应的化合物、组合物以及它们使用、制备、合成和配制的方法。优选，本发明的化合物和组合物被提供作为饮食补剂或保健食品或其它一些类型的食品，或者作为药物或者药用或药物制剂，或者以其它一些物理形式。除了它们所具有的任何其它功能外，本发明的化合物和组合物还可起口服给药药物的首过效应抑制剂作用。本发明的受益者是需要受首过效应影响的药物等的动物、优选哺乳动物、特别是人。

口服给药药物的“首过效应”是指药物从最初摄取到在血液流中循环的药物转变期间药物降解的过程。通常说到“生物可利用性”，由于药物在摄取之后于患者体内发生降解，给需要口服给药的患者施用最终必需量5倍或者更大量的药物并不罕见。例如，抗组胺药特非那定的情况便可以反映首过效应的影响，其中通过口服用的药片的99.5％很快转变成代谢物；因此，特非那定的生物利用度为大约0.5％(D.Garteiz等，Arzneim-Forsch.，1982；32：1185-1190)。另一个实例是，给器官移植患者施用的环孢菌素A，具有大约30％的平均口服生物利用度，并且在患者之间其生物利用度大约为8-92％。由于每个个体间的环孢菌素生物利用度差异很大，因而治疗初期必需要时常监测血液浓度。

作为一般作用机理的特定异种生物代谢的抑制、以及特别是用化学试剂抑制首过效应为本领域所公知并且使用过一段时间。其实例包括用乙醇治疗甲醇(木醇)中毒和用酮康唑抑制环孢菌素的首先效应。例如参见First，R.M.et a1.，The Lancer，1198，189.11.18(引入作为参考)。

虽然对首过效应起作用的试剂、酶型、生物方法等没有被完全识别，但研究集中在能够抑制细胞色素P450系统的试剂。P450系统的抑制是体外测定体内生物利用度增强的模型。例如参见US专利5,478,723和5,567,592(均引入作为参考)关于450系统的较完整描述。正如Keogh等(N.Eng.J.Med.，Vol.333，No.10，p.628，1995)和S.Butman等(J.Heart LungTranspl.，Vol.10，No.3，p.351，1991)的报道，当环孢菌素与酮康唑共同施用时心脏移植患者所需要的环孢菌素剂量可以减少大约85％。从经济方面讲，两篇文献估计了节约的成本等于大约每年每位患者$5,000。其它受首过效应影响并且其生物利用性可通常通过给人的抑制剂来增加的药物包括咪达唑仑(K.Olakkola等，Clin.Pharmacol.Ther.，1993，53：298-305)、特非那定(Seldane)(P.Honig等，JAMA，Vol.269，No.12，1513)和三唑仑(Varhe，A.等，Clin.Pharmocol.Ther.，1994，56：601-7)。

除酮康唑，药物氟康唑、瑞惜洛韦(ritonavir)、依他康唑、咪康唑、红霉素和醋竹桃霉素，除了它们具有的任何药理学效应外，还被识别为是首过效应的抑制剂。但这些化合物是抗病毒、抗微生物或抗真菌剂。由于目前日益认识到过度使用这些试剂可以导致耐微生物菌株，因为大部分有效的抑制剂是抗微生物的，并且因为移植和HIV感染的患者具有受损免疫系统，所以使用这些首过效应抑制剂具有明显的缺陷，例如使用酮康唑的情况，因此，将这些抑制剂与易受首过效应影响的药物有意图的共同施用并没有得到广泛应用。事实上，在免疫受损患者中抗真菌药物抗性的出现早已为人所知(T.J.Walsh：“免疫受损患者中抗真菌药物抗性的出现”专题讨论，National Institutes of Health，1996.2.7；Geogopapadakou，N.H.等，Antimicrobial Agent and Chemotherapy，1996.2，p.279-291)。

基于天然分离原料的饮食补剂、药品、化合物、提取物等正越来越得到研究和可被消费者利用。由于获得对这些原料的专利保护变为常规，这种趋势很盛(例如参见US专利4,708,948；5,409,938；5,314,899；5,591,770和5,654,432，所有均引入作为参考)。令人并不意外，现在这种趋势发展到首过效应剂。

在1991年，Baily等报道了(Bailey，D.G.等，The Lancet，Vol.337，1991.2.2，p.268，引入作为参考)葡萄柚汁了增加非洛地平的生物利用性，并且指出细胞色素P450酶被生物黄酮素抑制解释了他们的发现。这种将生物黄酮素识别为葡萄柚汁中的活性成分受到了R.Chayen等的怀疑(The Lancet，Vol.337，1991.4.6，p.854)，他认为倍半萜类化合物是葡萄柚汁中起抑制首过效应作用的活性成分，而非类黄酮。虽然bailey和Edar获得了涉及通过共同施用类黄酮如柚苷来增加药剂生物利用性方法的专利权(US专利5,229,116，引入作为参考)，但他们自己的工作也公然出现了他们早期识别类黄酮为活性成分的正确性的问题。例如参见Bailey等的Clin，Pharmacokinet，26(2)：91-98，1994，特别是其第95和96页。也可参见Edwards.D.J.等的Life Sciences，Vol，59，No.13，pp.1025-1030，1996。

葡萄柚汁作为首过效应有效抑制剂的报道结果导致了很多关于葡萄柚汁对例如硝苯地平、尼群地平、尼索地平、环孢菌素A、咪达唑仑、三唑仑、香豆素和咖啡因的首过效应抑制的研究文章。随着这些结果更为公知，所谓“葡萄柚汁作用”成为报纸文章、时事通讯、公众医学课文的主题。例如参见“The Medical Letter”，Vol，37(issue 955)1995.8.18，The Peoples Pharmacy，第4章(St.Martin’s Press)1996，p41；1991.2.19纽约时报关于费乐地平和葡萄柚汁的文章(C版，第3页1栏)以及华盛顿邮报的最新文章(A版，p11，8/30/96)。

回顾关于证明葡萄柚汁作用的研究出版物，还看出葡萄柚汁作用的程度变化很大，并且本发明者怀疑这种变化可追溯于葡萄柚汁的来源。事实上，市售柑橘类汁的生产中包含了增加最终产品组成可变性的复杂系列因素。这些因素包括压榨技术、浓缩技术、汁的来源、采摘时水果的成熟度、来源和成熟度不同水果的混合、果汁和下脚料的混合等。由于葡萄柚汁中抑制首过效应的活性成分是未知的或者是错误识别的，科学家和消费者不可能选择葡萄柚汁制品并且依赖其效用来抑制首过效应。

此外，具体的葡萄柚汁及通常的柑橘类产品中已知含有光毒性呋喃并香豆素衍生物，包括补骨脂素、氧化补骨脂素和佛手内酯。当这些化合物对控制、临床治疗所选择的皮肤疾病(包括白癜风、牛皮癣和蕈样真菌病)有效时，它们还已知是毒性的，具体说是光毒性的。从人的研究中清楚描述出呋喃并香豆素光毒性的结构-活性关系(例如L.Musajo等，Herba Hungarica，1971，Tom.10，No.2-3，pp；79-94)，并且这些研究表明光敏感活性可通过环羟基化或通过加长醚取代基的长度来消除。

仔细评价文献看出给人以大剂量的补骨脂素和某些低碳数醚取代的呋喃并香豆素确实可抑制细胞色素P450。例如参见D.Bickers等的J.Investigative Dermatology，79：2-1-205，1982；M.Tinel等的Biochemical Therapeutics，Vol.36，No.6，951-955，1987；H.Fouin-Fortunet等的J.Pharm.Experiment Therapeutics，Vol.236，No.1，237-247，1986以及D.Mays等的Clin.Pharmacol.Ther.，42：621-626，1987。因此，并且因为首过效应的已知成功的抑制剂通常抑制细胞色素P450，一个诱人的结论，特别是考虑到Bailey近来的放弃以及其它，是柑橘类中存在的低分子量呋喃并香豆素是葡萄柚汁中活性首过抑制剂。事实上，并且正如以下关于本发明的较完整的描述，本发明者发现情况不是这样。由于本发明者发现了抑制首过效应的特定化合物，因此现在可以生产一种可靠、安全的组合物，该组合物既可抑制首过效应，并且如果需要也可是以柑橘类为基料的或来源柑橘类的，并且该组合物不含或者含少量的低分子量光毒性呋喃并香豆素。

附图简述

图1显示了各种抑制剂的抑制剂结果。

图2显示了各种抑制剂的抑制剂结果。

本发明的一个目的是提供一种首过效应的化学化合物和组合物，并且所说的化合物和组合物的形式、浓度、纯度等不同于天然或市售产品。

本发明的另一个目的是提供可靠、安全的以柑橘类为基料或柑橘类源的产品，该产品含有一种或多种本发明的非天然和非市售存在量的抑制首过效应的化合物，并且所说的化合物选择性不含或含少量(与天然或市售产品中存在的量相比)的光毒性，和选择性不含或含少量非首过效应抑制性的低分子量呋喃并香豆素，该产品可有效用作食品或饮食补剂、药品、药物等。

本发明的另一个目的是提供含一种或多种本发明化合物的组合物，其中所说的本发明的化合物是抗首过效应有效的。

本发明的另一个目的是提供含一种或多种本发明化合物并且不含或含比天然或市售产品中存在量少的光毒性低分子量呋喃并香豆素的组合物。

本发明的另一个目的是提供含至少一种本发明化合物并且提供始终和可靠首过抑制活性的组合物。

本发明的另一个目的是提供上述化合物和组合物，作为提供活性成分、治疗剂、药物等或其它受人首过效应影响之物质的产品或混合物的组分。

本发明的另一个目的是提供非天然和非市售产品存在形式的首过效应抑制性化合物，这里也称作生物增强剂和抑制剂。

本发明的另一个目的是提供一种或多种本发明首过效应抑制性化合物与各种治疗剂、活性剂、药物或其它受首过效应影响之物质(以下称“药物”)的混合物。

本发明的另一个目的是用具首过效应的药物抑制病人、动物等的首过效应的方法。

本发明的另一个目的是制备上述化合物、组合物、混合物等的方法。

本发明的另一个目的是制备以柑橘类为基料或柑橘源的组合物的方法，其中所说的组合物中不含或含比天然和市售产品存在量少的光毒性和非首过抑制性呋喃并香豆素，优选使用美国食品和药物署认可食品或药物制造使用的试剂，包括GRAS原料(本申请中，“非首过抑制”包括根据以下C或C’方案由2000nM佛手素(bergamottin)或戊烯氧呋豆素提供的首过活性)。

本发明的另一个目的是提供和使用首过效应化合物和含至少一种首过有效量(合计或单计)本发明化合物的组合物，其中本发明的化合物是以分离的形式和/或无热原形式和/或无菌形式和/或基本上纯的形式和/或药品形式和/或化学纯的形式和/或比天然和市售产品含更高浓度或纯度本发明化合物的形式。这里“市售产品”是指地区、国家和跨国生产和销售的产品，特别是由柑橘类加工工业生产的产品。正如它们的名称说明的，这些形式不同于本发明的化合物，它们天然存在于例如市售柑橘和柑橘制品如汁、冷榨油、浓缩汁等中。

本发明的另一个目的是提供通过给人施用至少一种本发明的化合物、组合物等来抑制首过效应的方法。

根据以下描述的关于本发明的完整解释并结合优选实施方案，上述这些和其它目的对本领域技术人员来说将是显而易见的。

本发明者发现了能够抑制人口服施用药物的首过效应的化学化合物。本发明者还发现了天然存在于柑橘类提取物、果汁、副产品等中的光毒性的低分子量呋喃并香豆素和某些醚取代的呋喃并香豆素可以从中除去，或者浓度被减少，并且不破坏其中的首过效应抑制性化合物。本发明者还发现了仅使用FDA或USP认可的试剂来制备以柑橘类为基料的组合物的方法。基于这些发现完成了本发明并且下面将作较详细的描述。

在一个优选的实施方案中，本发明的抑制动物(包括人)首过效应的化学化合物是以下20种式I-IV的化合物：

上述各个结构中，R独立是H或取代或未取代的C₁-C₁₅烷基，

L是取代或未取代的C₁-C₁₅直链或支链、饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位硫或氧原子，并且链端选择性地由一个或两个氧结尾，

HAr是取代或未取代的C₆-C₂₄芳基或杂芳基，其中选择性包含一个或多个选自N、O、S和P的成环原子，并且E是-OH、-COOH、-COOR(其中R如上定义)或取代或未取代C₁-C₈直链或支链、饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位氧或硫原子，或者E是C₃-C₈选择性取代的环状饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位氧或硫原子，或者E是选择性取代的HAr。优选，式I-IV的化合物以及以下描述的化合物不含过氧基团(O-O)。二硫基团(S-S)不优选，但可以存在。优选E是环氧或二羟基基团，例如-CH(OH)₂。E还可以是酸打开的环氧基。

如上所述的本发明的化合物不受立体化学、E-Z异构的限制，包括所有可能的异构体。包括外消旋混合物，为每种和各个对映体和非对映体。优选的立体化学后面说明。

R、L、HAr和E可以选择性被C₁-C₆直链、支链或环状烷基、-OH、卤原子、C₁-C₅烷基、C₁-C₅烷基羰基氧基、C₁-C₅烷氧基羰基等取代。这些取代基还可以选择性被直接取代到式I-IV的环状结构上，无论这些取代基是否出现在R、L、HAr和E上。

本发明第二个优选实施方案的抑制首过效应的化学化合物为式V-X所示：

如上述式I-IV所说的，式V-X不受立体化学、E-Z异构的限制。

本发明首选的抑制首过效应的化合物是根据上述第二个实施方案并且具有以下立体化学的化合物(式XI-XVI)：

本发明的组合物包含至少一种本发明的首过有效化学化合物，优选首过有效量的。本发明以柑橘类为原料的组合物还包含得自柑橘类的提取物、浓缩物、皮、汁、油、副产物等(以下称为得自柑橘类的物质)，并且可以由这些物质的任何组合形式提供并且可以得自一种以上的柑橘类水果。适用于这里的柑橘类水果包括葡萄柚、柠檬、莱姆酸橙，优选含有本发明首过效应抑制性化合物或这些化合物之混合物的任何柑橘类水果。本领域现有技术指出普通类型的橙(Citrus sinensis)不能抑制首过效应。含有一种或多种抑制水果效应的柑橘类水果均包含于本发明中，包括所有的杂交种等，并且在这里称作“首过柑橘类”。适合本发明的优选的柑橘类水果是葡萄柚。

这里所述的首过有效化合物、物质和组合物是可防止和延迟口服施用药物在体内降解的物料。优选，本发明的首过有效物料(包括物质、组合物、混合物、本发明化合物等)可增加至少1％的药物生物利用度，优选增加5％以上，并且首选15％以上包括20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250、300％等，其中所说的百分比通过曲线下面积(AUC)法测定。参见US专利5,567,592(引入作为参考)。生物利用度增加几倍包括5、10、15、20倍(即AUC百分比增加几百或几千)对本发明并非不可能。本发明化合物、组合物、混合物、物料等的首过有效性也可以通过WO97/15269、US5,665,386和PCT/US96/09607中所述的方法和特征来测定(均引入作为参考)，并且优选符合其标准。

本发明的优选的得自柑橘类的物质包括柑橘类冷榨油，特别是葡萄柚、莱姆酸橙、柠檬等的冷榨油，和柑橘类副产品包括柑橘类包装/果汁厂的尾料。柑橘类冷榨油包括橙(除了Citrus sinensis)、葡萄柚、莱姆酸橙、柠檬等的冷榨油是商品并且在例如Food Chemicals Codex第4版，National Academy Press(Washington D.C.)1996中有所描述(引入作为参考)。其它适合本发明的得自柑橘类的物质包括各种其它柑橘类油(蒸馏的、精油、粗油(desert)型等)、苦冷榨油等。本发明提供得自柑橘类的物质的柑橘类的地理来源并不重要。还可以使用柑橘类的汁或皮(壳)，以及首过柑橘类的任何首过有效的固体、半固体或液体部分。可以使用混合物。

本发明组合物中存在的得自柑橘类的物质可以构成总的以柑橘类为基料的组合物，或者可以是其一部分。因此，如果所制备的以柑橘类为基料的物质为含有首过有效量的一种或多种根据式I-XVI的化合物，则不需要添加任何其它的化合物。如果需要，可以添加食用级或药用稀释剂、赋形剂、载体等。

优选处理本发明组合物的得自柑橘类的物质，以便减少其中天然存在的光毒性和选择性是非首过有效的呋喃并香豆素的量。优选，完全除去这些呋喃并香豆素，即将它们去除到它们的存在用液相和优选气相色谱无法检测到的程度。

本发明从柑橘类派生组分中去除光毒性低分子量呋喃并香豆素的方法优选包括选择性除去挥发组分(在10^-2-10^-3托压力下12-48小时之后除去的组分)，并且用至少一种C₁-C₁₀醇(优选乙醇)和水提取，选择性在碱的存在下。在某些情况下，优选不除去挥发组分如天然存在的萜烯，而是使用这些挥发物主要作为进一步加工的溶剂。醇和水的提取混合物可以丢弃并且剩余的物质为本发明有用的。C₂-C₅醇也是优选的，如C₂和C₃和C₄醇。醇(乙醇)可以是100％醇，也可以是常规提供的和使用的可普通获得的醇-水稀释液(如95％乙醇/5％水等)。无论哪种情况，醇(乙醇)试剂优选是U.S.P.级别或更好的。提取本发明柑橘派生物质(组分)所用的水优选是蒸馏水，并且还优选是U.S.P.级别或更好的。任何混合溶剂或单个溶剂都可以用于提取。溶剂优选是FDA认可食品和药物制造用的。

本发明去除光毒性低分子量呋喃并香豆素的方法可以包括用醇(乙醇)/水混合物连续提取，并且连续所用的醇(乙醇)/水混合物可以具有相同体积比或不同体积比。优选醇(乙醇)∶水体积比为1∶10-10∶1，更优选1∶1(±3％、5％、8％或10％)并且按体积/体积计可以是20-80或45-60％的醇(乙醇)，包括2∶1、3∶1、1∶2、1∶3等，以及55/45、60/40、65/35、70/30、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、40/60、35/65、30/70等的醇/水。提取可以通过任何本领域已知的方法完成，包括液液提取、液固萃取、连续提取等。当用来制备本发明柑橘类派生提取物的原料是例如油时，可以将提取用的醇(乙醇)/水混合物简单加入、摇动并且自然分离或借助于离心。重复提取是有益的，正如连续提取法例如逆流萃取等。

如上所述，碱在去除光毒性呋喃并香豆素中是优选使用的，并且可以添加到水或醇或者两者中。优选的碱是碱金属和碱土金属氢氧化物和氧化物，首选氢氧化钠和氢氧化钾。碱一般存在的量为0.01-80克每升醇/水混合物。

优选，本发明去除光毒性低分子量呋喃并香豆素的方法可将甲氧基取代的线形和角形呋喃并香豆素包括氧化补骨脂素(8-甲氧基补骨脂素)、佛手内酯(5-甲氧基补骨脂素)、异佛手内酯、异虎耳草素等、和未取代线形和角形呋喃并香豆素(补骨脂素、当归根素等)显著减少，优选完全除去超过液相优选气相色谱的检测限度。如果需要，还可以除去被测定为是无效首过效应呋喃并香豆素的呋喃并香豆素。这些化合物包括佛手素、补骨脂素、当归根素、异虎耳草素、吗咪(marmin)、6’，7-二羟基佛手素和戊烯氧呋豆素。

本发明得自柑橘类的物质、本发明组合物、本发明混合物、本发明药物组合物等优选含有首过有效量的至少一种上式I-XVI的首过有效化合物。或者，可以存在多种式I-XVI的化合物，其中每种为非首过有效量，所述化合物的浓度总和具有首过有效性。

除以上所述外，这些式(即式I-XVI)中的一个或多个氢原子可以被羟基、卤素、直链或支链C₁-C₄₀烃、C₁-C₄₀直链或支链醚(-OR，其中R是直链或支链烃)、C₁-C₄₀烷基羟基(-ROH，其中R是直链或支链烃而OH键合到伯、仲或叔碳上)等的一个或者两个或多个的任何组合所置换。这里所说的“烃”是指支链和直链烷基和支链和直链链烯基。链烯基是具有至少一个双键的任何烃，但包括多个共轭和非共轭双键。还包括所有的盐、特别是药用盐，和立体异构体、物理形式等。式I-XVI所述的化合物可以通过本领域已知的任何常规技术来合成，并且其合成属于本领域技术人员的知识。既然它们已经被识别，它们也可以从这里所示的得自柑橘类的物质中分离出来。

制备本发明式I-XVI化合物的优选方法包括以下线路：

这些反应属于本领域技术人员的知识。例如参见Chemisrty Letters，2019-2022，1990；Can.J.Chem.，63：2673-2678，1985；AustralianJournal of Chemistry，42：1235-1248，1989；东德专利DD 275687和独联体专利SU 1397449，所有均引入作为参考。虽然以上显示的各个反应线路获得式I+II或式III+IV，但如果使用适宜的反应剂各方法便可以得到式I-IV。本发明的化合物、得自柑橘类的物质、混合物、药物组合物等优选含有至少一种根据上式I-XVI的化合物。可以使用混合物。

本发明得自柑橘类的物质、组合物、混合物、抑制剂、化合物等的使用不受限制，并且可以优选以每位患者每天2纳克-2克和更多的量施用，以增加患者口服药物的生物利用性。本发明的组合物可以优选含有比柑橘类制品中天然存在的多的本发明化合物。剂量可由本领域技术人员确定并且取决于例如活性剂(药物)受首过效应的程度等。剂量形式包括口服给药形式、局部给药形式、注射形式。本发明的化合物、得自柑橘类的物质、组合物、混合物等中可以选择性是以柑橘类为基料的组合物或其它食用料的一部分，或者添加到其中，其中所说的其它食用料优选矫味剂、果汁等。

本发明的得自柑橘类的物质、混合物、组合物和本发明的化合物可抑制人和其它动物口服摄取的药物的首过效应。本发明物料的“首过有效量”是指使任何物质的口服生物利用度与此情形下不施用本发明物料的情况相比增加了任何程度(如1％、5％、10％等；参见描述AUC法的部分，包括这些值之间的所有数值和范围)的任何量。“首过有效”的本发明得自柑橘类的物质、混合物、组合物或化合物是指抑制动物(优选人)中至少一种药物觉察到的首过效应(优选由细胞色素P450系统仪器的首过效应)的物料。这里还称为抗首过活性。给药优选共同给药，即在受首过效应影响的药物、活性剂、治疗剂、保健食物等的不久之前、不久之后、或与其一起。“不久之前”和“不久之后”包括所有的其中本发明物料通过抑制首过效应提供有益作用的时间。本发明的优选给药形式包括本发明的化合物、得自柑橘类的物质、混合物、组合物等，包含在例如凝胶胶囊中，或与食用级或药用粘合剂、稀释剂等的共配制。有用的剂量形式(盐或碱、片剂或树胶等)以及粘合剂、盐形式、赋形剂等可见例如US专利5,576,448；5,576,446；5,576,437；5,576,439；5,576,438；5,576,337；5,576,339和5,576,336中，所有均引入作为参考。优选以能够逐批提供始终、可靠效能的量提供本发明的得自柑橘类的物质、混合物、组合物和化合物，无论所提供的形式。

这里所说的术语“药物”定义为能够施用给生物改进或改变生物体生理机能的化学物质。更优选，这里所说的术语“药物”定义为欲用于治疗或防止疾病(特别是对人而言)的任何物质。药物包括合成的和天然存在的毒素和生物影响性物质以及被认可的药品，例如Merck Index.第12版，Merck Research Laboratories，Whitehouse Station，NJ，1996；“The Physicians Desk Reference”第47版，1993，p101-321；“Goodmanand Gilamn’s The Pharmacologicai Basis of Therapeutics”第8版(1990)p84-1614和1655-1715；以及“The United States Pharmacoperia，The National Formulary”，USP XXII NF XVII(1990)中列出的药品，这些文献中的化合物引入作为参考。术语药物还包括尚未被发现或者不能在US获得的具有指定特性的化合物。术语药物包括药物的前体活性、活化的和代谢的形式。本发明可以带电、未带电、亲水、两性离子、或疏水种类、以及这些物理性质的任何组合组成的药物使用。疏水药物定义为在脂类或脂肪中溶解性比在水中高的以其非离子化形式的药物。优选，疏水药物定义为在辛醇中的溶解性比在水中高的药物。参见US专利5,567,592，引入作为参考。本发明还用于人和动物例如哺乳动物。

本发明的化合物和得自柑橘类的物质可以与药物、优选受首过效应影响的药物共同配制。优选，药物的口服生物利用度为92％或更低，更优选50％或更低。除上述引入参考的药物外，其实例还包括噻喹努佛、印达洛韦(indinavir)、L-地帕尼(L-deprenyl)、他克莫司、环孢菌素A(Sandimmune)、环孢菌素A(Neoral)、那非洛韦(nelfinavir)、VX-478/141 W94、非洛地平、硝苯地平和舒马曲坦。这种共同制剂包括以上提及量的本发明的得自柑橘类的物质和/或一种或多种化合物，一般来说其量比受首过效应影响的药物活性成分当前所必需的量要少。还可以加入药用粘合剂、稀释剂等。本领域技术人员根据本领域公知的简单试验过程(包括测定给药后一定时期内血液流中药物量的药理学实验)能够确定本发明化合物的剂量。

适合共同配制的其它产品是任何和所有的药物、保健食品或其它受首过效应影响的制品。药物的实例列于Merck Index.第12版，MerckResearch Laboratories，Whitehouse Station，NJ，1996中(引入作为参考)。确定物质是否受首过效应的影响是本领域普通技术人员的知识。

优选本发明的物料得到保护不受胃酸影响，例如通过包衣。包衣为本领域公知的，并且包括肠包衣等。参见Kirk-Othmer Encyclopedia ofChemical Technology第3版，Vol.17，p.281 ff，引入作为参考。也可以使用其它适宜的药品形式，如缓释形式(包衣)、硬壳和软壳明胶胶囊等。

实施例

螺环原酸酯(式XVII)的合成：

将苄基6，7-环氧香叶草基醚放入真空室(0.1托)中过夜，以便从样品中除去外来水分；称重190mg(730μmol)。将三当量的7-甲氧基香豆素(0.386g)溶解于3mL CH₂Cl₂中，并且将该溶液移至密封玻璃容器中。反应期间用氦气吹扫系统，容器保持在5-6℃，并且将反应溶液磁力搅拌。加入43μL SnCl₄的1M CH₂Cl₂溶液和16μmol BF₃·Et₂O；经过5分钟，然后将溶解于4ml CH₂Cl₂的环氧化物分4等份加入；每份之后加入4μmolBF₃·Et₂O。将反应保持于5-6℃下并且搅拌3.5小时，然后拆开反应装置。立即如下处理反应混合物：混合物含有总共75μmol的BF₃和SnCl₄，所以加入(反应混合物保持在5-6℃同时搅拌)3当量的吡啶(225mol)以破坏路易斯酸催化剂。搅拌30分钟之后，除去溶剂，并且将剩余物溶解于3.16mL95％乙醇；加入0.6mL 50％的KOH水溶液(w/v)，并且剧烈搅拌溶液。加入水(2.24mL)，然后将该溶液放入加速真空(Speed Vac)装置中过夜，以除去乙醇。剩余大约50％的原体积。水溶液用3mL CH₂Cl₂提取两次，并且将合并的CH₂Cl₂用10mL 5％KOH水溶液(w/v)提取两次并用10mL 5％的NaCl水溶液(w/v)提取两次。除去CH₂Cl₂，并将剩余物溶于乙腈。

可以将该乙腈溶液直接用于螺环原酸酯产品的HPLC纯化，通过如下优选的条件。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：Hewlett Packard)。洗脱时间(以分钟计)以及混合流动相中存在的乙腈百分含量如下：0，55；5，55；10，90；11，98；17，98；18，55；22，55。色谱柱的尺寸为250nm长×4.6mm内径，带有结合到4微米硅颗粒的C18(9％碳载荷；YMC公司)，用包含相同物料的23mm长×4mm内径柱子和0.5微米滤器保护，并且保持在40±0.2℃。将流速保持为1.0mL/min，进行22分钟的运行周期。在259±2下检测每10μL的柱洗脱液，并且使用自动收集器(Gilson)分级。式XVII化合物在该系统中的停留时间为13.4分钟。¹H N.M.R.δ(400MHZ，CD₃OD)1.15，s和1.26，s和1.39，s，4’-Me(非对映体)；1.64，s，8’-Me；1.6-1.9，m，H6’，6’；2.0-2.3，m，H7’；3.70，s，7-OMe；3.83，m和4.20，t，H5’(非对映体)；4.01，d，H10’；4.45，s，H12’；5.39，t，H9’；5.45，d，H3；6.40，s，H8；6.49，d，H6；6.71，d H4；7.06，d，H5；7.02-7.35，m，苯基。质谱m/z(电喷)：MS，437(MH⁺)；MS/MS，261，177，153(MH⁺的片断)。

用于此后反相HPLC分级的冷榨葡萄柚油的批量预处理，

1、使用变性试剂醇制备含12.5g KOH/L的1∶1乙醇∶水(v/v)溶液。

2、在2L分液漏斗中混合1.0L冷榨葡萄柚油和330mL碱性乙醇溶液2.0分钟。

3、等待5.0分钟，然后从漏斗中除去底部乙醇相。

4、使用新的330mL碱性乙醇溶液重复步骤2和3四次。

5、使用330mL不含KOH的1∶1乙醇∶水(v/v)溶液重复步骤2和3一次。当没有KOH时，需要等待数小时(优选过夜)以便相明显分离。底部乙醇用pH试纸测试相应当显示溶液接近中性(大部分情况下约等于6)。

6、将油相(产量应当大于0.9L)放入真空容器中，并且将系统置于真空下(0.5托或更低)3-4天。当旋转粘性溶液同时在真空下不再引起沸腾时过程完成。

7、用一部分乙腈洗涤非挥发物质，达到总共200mL，并且离心分离乙腈可溶物和乙腈不溶物(5分钟，速度50，IEC型号K2)。

8、使用加速真空(Speed Vac)装置从乙腈可溶相(步骤7)中除去乙腈，并且称重剩余物(预计22-25g)。

9、向剩余物添加乙腈，以致每5mL中含有1.5g剩余物，并且将溶液分成5mL的部分。

10、向每个5mL部分添加15mL异辛烷，封盖，涡流混合，并且离心混合物(2分钟，速度35)。抛弃顶部异辛烷相。

11、重复步骤10九次；应当不时添加乙腈以保证底部相体积为大约5mL。

12、使用加速真空(Speed Vac)装置从底部相(步骤11)中除去乙腈，并且称重剩余物(预计为原重量(步骤8)的大约20％)。

13、将剩余物(步骤12)溶于乙腈，以便制成0.25-0.30g/mL溶液，通过0.2μm聚四氟乙烯树脂(塔夫纶)滤筒过滤溶液，并且溶液储藏于-20℃。

用于进一步作为饮食补剂、药物、共同制剂成分等使用的冷榨葡萄柚油的批量预处理

1、使用USP级乙醇、NF/FCC级KOH和纯化水制备含5％氢氧化钾(w/v)的70∶30水∶乙醇(v/v)溶液。

2、将步骤1制备的乙醇溶液与等体积(或稍微过量)的整个、未处理冷榨葡萄柚油(Food Chemicals Codex级)混合，并且将混合物移至耐热耐压食用级容器中。

3、密封容器，在95-100℃下保持1小时。冷却容器，除去乙醇相(两相体系中的较低相)，并且添加一部分新的乙醇溶液(等于步骤2所用的体积)。

4、重复沸腾周期(步骤3)直至样品纯度达到所需程度。进行十次循环将除去＞99％的极性香豆素和呋喃并香豆素，除去＞90％主要的非极性香豆素和呋喃并香豆素(如环氧橙皮油素、环氧佛手素)，并且不会明显降低抑制性螺状原酸酯的含量。

5、用纯化水洗涤油，直至丢弃的洗涤用水的pH变成中性。

6、将油相置于真空(0.1-0.3托)直至样品中不再产生挥发物(例如通过检验保持于-60至-90℃下相连的排空捕集器来估计)。一般来说，该步骤将除去样品的大约95％体积。

7、将步骤6的产物与等体积USP乙醇混合，并且离心混合物。重复直至底部相基本上不含螺状原酸酯为止。该方法从油非挥发制备中去除醇不溶性物质。

8、选择性地，但优选，将合并的步骤7的乙醇提取物置于真空下，直至乙醇基本上被除去(例如99％)或减少(例如10％)。

由于食品、调味剂和香料工业中已知原料的掺杂，本发明的柑橘类派生组分(包括柑橘类冷榨油)应当优选在其进一步使用之前对其进行估价，例如在用来生产含首过有效量式的一种I-XVI化合物或其混合物的饮食补剂组合物之前。一种策略包括样品制备(方案A、方案A’)，接下来色谱(方案B、方案B’、方案B”)，最后与先前的标准比较。这种评价可以提供一致性。

以下方案在准备本发明各种实施方案中是有用的。

方案A：通过除去毒性低分子量呋喃并香豆素制备用于进一步色谱处理或用于人施用的柑橘类油

将一定体积的柑橘类冷榨油(Food Chemicals Codex级)移至容器中，并且除去所有的挥发性物质。虽然现有数种除去挥发物的方法(例如，蒸馏，减压蒸馏、大气条件蒸发)，优选的方法使用加速真空(Speed Vac)浓缩器(Savant仪器，过程需要12-24小时和10^-2-10^-3托压力，并且体系运行无需添加热量)，因为该方法温和且方便。非挥发产物的产量一般为原体积的0.04-0.1倍，并且是粘性液体。

通过液液萃取从非挥发性制品中除去低分子量光毒性呋喃并香豆素：向非挥发物添加16倍体积的1∶1乙醇∶水(v/v，USP级)粘液体，将容器封盖，剧烈混合溶液，离心容器(International Equipment公司，型号K2-5，设定35，5分钟)，并且丢弃顶部乙醇相。重复萃取两次。如果需要可以通过使用如加速真空(Speed Vac)装置从制品中除去外来水分和乙醇。该过程的产物可以用于人施用，例如以填充胶囊的形式。

方案A’：色谱前柑橘类油的预处理

由于在优选的流动相体系中存在溶解性差的物料，大部分柑橘类油不适合直接用于长时间制备高压液相色谱。因此在色谱之前施用以下的样品制备方案。

将柑橘类冷榨油(Food Chemicals Codex级)移至适宜容器中，并且减压除去所有的挥发性物质(10^-2-10^-3托，3-4天)。非挥发性产物的产量一般仅为原体积的5-10％。将柑橘类非挥发物与乙腈按2∶1(w/w)混合，离心混合物(International Equipment公司，型号K2-5，设定35，5分钟)，并且除去上层含乙腈的相。用乙腈重复萃取一次，抛弃底层相，将第一和第二乙腈相合并，并且使用加速真空(Speed Vac)浓缩器除去乙腈(Savant仪器，10^-2-10^-3托，12小时，无需添加热量)。将非挥发性物质与乙醇碱液(含12.5g氢氧化钾/L的1∶1乙醇∶水(v/v，USP级))按1∶4(w/v)混合，将混合物离心5分钟(速度设定为35)，除去和丢弃上层乙醇相。将非挥发性物质用乙醇碱液再洗涤九次，然后用1∶1乙醇∶水(v/v)洗涤一次。剩余物用足够体积的乙腈提取两次，以便所有的带色物料被除去。用两体积的己烷或异辛烷洗涤乙腈溶液6次，每次都将己烷提取物(上层)除去和丢弃，并且所得的乙腈溶液通过0.2微米塔夫纶膜过滤并且使用加速真空(Speed Vac)浓缩器挥发至干。

方案B：经过加工的柑橘类油的色谱方法

由于在优选的流动相体系中存在着不溶性的物料，上述方案A的产品不适合用于任何高压液相色谱。因此在色谱之前施用以下的样品制备方案。将1体积方案A的产品与4体积的乙腈混合，将容器封盖，剧烈混合溶液，离心容器(5分钟，设定为35)，并且通过0.2微米塔夫纶膜过滤滤掉顶部乙腈层。将过滤的溶液储放在密封容器中于-20℃下2天或更长，然后边冷冻边通过滤纸，以除去其中大量的沉淀。重复进行一次沉淀和过滤步骤。记下乙腈溶液的体积，并且施用加速真空(Speed Vac)装置除去乙腈。将剩余物溶于原体积一半的乙腈，注意不要破坏后面的晶体沉淀，现在的溶液可以用于HPLC评价了。

如果期望制备分级柑橘类油经洗涤的非挥发性部分，则优选以下HPLC条件。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：Hewlett Packard)。洗脱时间(以分钟计)以及混合流动相中存在的乙腈百分含量如下：0，75；5，75；10，90；11，98；17，98；18，75；22，75。色谱柱的尺寸为250nm长×4.6mm内径，带有结合到4微米硅颗粒的C18(9％碳载荷；ODS-L80，YMC公司)，用包含相同物料的23mm长×4mm内径柱子和0.5微米滤器保护，并且保持在40+/-0.2℃。将流速保持为1.0mL/min，进行22分钟的运行周期。在400+/-200nm和210+/-2nm下检测每注射25μL的柱洗脱液，并且使用自动收集器(Gilson)分级。

如果期望定性或定量评价柑橘类油、其级分、或对照标准，则优选以下HPLC条件。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：Hewlett Packard)。洗脱时间(以分钟计)以及混合流动相中存在的乙腈百分含量如下：0，10；5，10；30，80；40，80；41，95；50，95；53，10；60，10。色谱柱的具有150nm长×2.0mm内径的直径，带有结合到4微米硅颗粒的C18(14％碳载荷；ODS-L80，YMC公司)，用填充专有材料(Prism，KeystoneScientific公司)的2mm内径柱和PTFE滤器保护，并且保持在35+/-0.2℃。将流速保持为0.20mL/min，进行60分钟的运行周期。在400+/-200nm和210+/-2nm下检测每注射10μL的柱洗脱液的吸光度和荧光性，在229nm下激发，450nm发射，370nm带滤(bandpassfiltration)。

方案B’：加工柑橘类油的色谱方法

如果期望制备分级柑橘类油经洗涤的非挥发性部分(方案A’的产品)，则优选以下HPLC条件。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：HewlettPackard)。洗脱时间(以分钟计)以及混合流动相中存在的乙腈百分含量如下：0，75；5，75；10，90；11，98；17，98；18，75；22，75。色谱柱具有250nm长×4.6mm内径的直径，带有结合到4微米硅颗粒的C18(9％碳载荷；ODS-L80，YMC公司)，用包含相同物料的23mm长×4mm内径柱子和0.5微米滤器保护，并且保持在40+/-0.2℃。将流速保持为1.0mL/min，进行22分钟的运行周期。在400+/-200nm和310+/-2nm下检测每注射25μL方案A’所得乙腈溶液的柱洗脱液，并且使用自动收集器(Gilson)分级。

如果期望定性或定量评价柑橘类油、其级分、或对照标准，则优选以下HPLC条件。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：Hewlett Packard)。洗脱时间(以分钟计)以及混合流动相中存在的乙腈百分含量如下：0，10；5，10；30，80；40，80；41，95；50，95；53，10；60，10。色谱柱具有250nm长×2.0mm内径的直径，带有结合到4微米硅颗粒的C18(14％碳载荷；ODS-L80，YMC公司)，用填充专有材料(Prism，Keystone Scientific公司)的2mm内径柱和PTFE滤器保护，并且保持在35+/-0.2℃。将流速保持为0.20mL/min，进行60分钟的运行周期。在400+/-200nm和310+/-2nm下检测每注射10μL的柱洗脱液的吸光度和荧光性，在229nm下激发，450nm发射，370nm带滤。

方案B”：使用手性HPLC柱纯化本发明的化合物

将11-12.5分钟区域(方案B或B’)分级获得并除去溶剂(Speed Vac，无需添加热量)的残余物合并，进行手性液相色谱。使用等度洗脱(流动相由3.4L异辛烷、0.6L 95％乙醇(剩余是水)和0.2L异丙醇组成)，以便在小于34分钟内从柱(250×4.6mm，Keystone Scientific公司，手性DNB{S})中洗脱抑制剂XI-XVI(仪器：Hewlett Packard)。将流速保持为1.0mL/min，进行22分钟的运行周期。在400+/-200nm和310+/-2nm下检测每注射25μL(剩余物溶于流动相)的柱洗脱液，并且使用自动收集器(Gilson)分级。

方案C：评价人细胞色素P450介导的生物转化

通过室温下将10μL乙醇或含抑制剂的乙醇溶液与100μL溶于反应缓冲剂的100mg/mL牛血清白蛋白(Sigma)混合，开始制备培养混合物。反应缓冲剂由0.10M磷酸钠、1.0mM乙二胺四乙酸和5.0mM氯化镁组成，pH7.4(所有试剂：Fisher Scientific)。所用的抑制性化学物质是酮康唑(Research Diagnostic公司)、咪康唑、佛手内酯、甲氧呋豆素(以上三种均来自Sigma)、佛手素、戊烯氧呋豆素、异虎耳草素、补骨脂素、当归根素(前面五种来自Indofine化学公司)、以及方案A、A’、B、B’或B”所得的级分或沉淀。如可能，最终抑制剂浓度表示为体积摩尔浓度，其通过从称重原料中计算或通过由对照原料制备的HPLC校准曲线内推；或者，浓度表示为重量/体积。将反应试管放在冰上准备进行如下操作。添加足够的反应缓冲剂以便每个试管的最终体积为500μL，加入5μL产生降低的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐的100倍浓缩物(以便整个反应混合物中含有1.0mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐、1U/mL葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶、和10mM葡萄糖-6-磷酸盐；均来自Sigma)，然后将人肝脏S9(Anatomic Gift Foundation)解冻并且以足够的量加入，以造成容易检测量的代谢物将在对照反应中形成(各个反应所需的量不同，一般为10μL)。将反应在Dubnoff型水浴中37℃下预保温3分钟，通过添加10μL溶于1∶1乙腈∶水的10μM特非那定(Sigma)并且通过轻微混合完成反应混合物，将样品在37℃下保温15分钟，并且通过将试管放在冰上并且添加2.5mL溶于乙腈的300nM特非那定相关化合物A(内标，US药典)来停止反应。

使用如下方案将上述制备的样品用于HPLC评价。将各试管涡流混合并且离心10分钟(设定为35)，将所得上清液移至干净试管，并且使用加速真空(Speed Vac)装置蒸发液体。将各个试管的剩余物首先溶于40μL1∶1乙腈∶水中，加入2.5mL乙腈，并且重复刚才描述的离心-转移-蒸发步骤。

可以使用以下所述的HPLC法分析由上述实验和样品制备方案获得的干剩余物中的特非那定代谢物，并且还可以用于定量测定向反应添加的抑制性化学物质(参见方案B和B’)。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由0.025％(v/v)甲酸/乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：Hewlett Packard)。洗脱时间(以分钟计)、混合流动相中存在的流动相B的百分含量、以及流速(mL/min)如下：0，10，0.10；2，10，0.10；3.5，10，0.20；4，10，0.25；5，10，0.25；30，55，0.25；32，98，0.25；33，98，0.40；39.8，98，0.40；40，98，0.25；45，10，0.25；45.25，10，0.20；50，10，0.20；50.25，10，0.10。色谱柱的尺寸为150nm长×2.1mm内径，填充专有材料(Prism，KeystoneScientific公司)，用含相同材料的2mm内径柱和PTFE滤器保护，并且保持在35+/-0.2℃。在每进行50.25分钟运行周期不久之前，将干样品剩余物与60μL 1∶1乙腈∶水混合，接着加入40μL水。检测每注射10μL的柱洗脱液的荧光性，在228nm下激发，291nm发射，和280nm带滤。在这些条件下，特非那定醇代谢物、特非那定羧酸代谢物和内标的停留时间分别为16.2、17.4和22.2分钟。

方案C’：评价人细胞色素P450介异的生物转化

通过室温下将10μL乙醇(对照反应)或含抑制剂的乙醇溶液与100μL溶于反应缓冲剂的100mg/mL牛血清白蛋白(Sigma)混合，开始制备培育混合物。反应缓冲剂由0.10M磷酸钠、1.0mM乙二胺四乙酸和5.0mM氯化镁组成，pH7.4(所有试剂：Fisher Scientific)。所用的抑制性化学物质是酮康唑(Research Diagnostic公司)、瑞惜洛韦(NorvirTM，AbbottLaboratories)、方案C所述的抑制性化学物质、和方案B”中所得的级分。如可能，最终抑制剂浓度表示为体积摩尔浓度，其通过从称重原料中计算或通过使用比尔定律；或者，浓度表示为重量/体积。将反应试管放在冰上准备进行如下操作。添加足够的反应缓冲剂以便每个试管的最终体积为500μL，加入5μL产生降低的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐的100倍浓缩物(以便整个反应混合物中含有1.0mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐、1U/mL葡萄糖-6-磷酸盐脱氢酶、和10mM葡萄糖-6-磷酸盐；均来自Sigma)，然后将人肝脏S9(Anatomic Gift Foundation)解冻并且以足够的量加入，以造成容易检测量的代谢物将在对照反应中形成(各个反应所需的量不同，一般为10μL)。将反应在Dubnoff型水浴中37℃下预保温3分钟，通过添加10μL溶于1∶1乙醇∶水的噻喹努佛(Invirase^TM，Roche Laboratories)并且通过轻微混合完成反应混合物，将样品在37℃下保温15分钟，并且通过将试管放在冰上并且添加2.5mL乙腈来停止反应。

使用如下方案将上述制备的样品用于HPLC评价。将各试管涡流混合并且离心10分钟(设定为35)，将所得上清液移至干净试管，并且使用加速真空(Speed Vac)装置蒸发液体。将各个试管的剩余物首先溶于40μL1∶1乙腈∶水中，加入2.5mL乙腈，并且重复刚才描述的离心-转移-蒸发步骤。可以使用以下所述的HPLC法分析由上述实验和样品制备方案获得的干剩余物中的噻喹努佛和噻喹努佛代谢物，并且还可以用于定量测定向反应添加的抑制性化学物质(参见方案B和B’)。使用线性梯度洗脱，并且通过将由水组成的流动相A与由乙腈组成的流动相B混合形成线性梯度(仪器：Hewlett Packard)。洗脱时间(以分钟计)、以及混合流动相中存在的流动相B的百分含量如下：0，10；5，10；30，80；31，95；40，95；43，10；48，10。整个运行中流速为0.2mL/min。色谱柱的尺寸为150nm长×2.1mm内径，填充专有材料(Prism，Keystone Scientific公司)，用含相同材料的2mm内径柱和PTFE滤器保护，并且保持在35+/-0.2℃。为了减小分析物的降解，在每进行48分钟运行之前的不久之前，将干样品剩余物与50μL 1∶1乙腈∶水混合。检测每注射10μL的柱洗脱液的吸光度。在这些条件下，噻喹努佛主要代谢物A、噻喹努佛主要代谢物B和噻喹努佛的停留时间分别为24.2、26.0和30.0分钟。

有效性的证明

为证明本发明的首过有效性，按照方案C’对本发明化合物和本发明的得自柑橘类的物质进行实验，其中在各种浓度的抑制剂的存在下测定噻喹努佛代谢物的产生。按照方案A’、B’和B”制备本发明的得自柑橘类的物质，并且与已知的抑制剂酮康唑比较。图1显示了本发明式XI和XIII化合物的结果，还显示了佛手素和戊烯氧呋豆素是基本上无效的首过抑制剂。图2显示了本发明化合物与已知抑制剂Ritonavir和酮康唑比较的情况。

在本发明的化合物中，优选呋喃并香豆素环的呋喃环位置根本没有取代。

关于纯化和加工的方法，优选以下实施方案：

A、加工柑橘类并从首过有效的得自柑橘类的物质中选择去除光毒性呋喃并香豆素的方法，包括用至少一种C₂-C₄醇、水和可选性的碱的混合物提取所说的得自柑橘类的物质，经过所说的提取之后，所说的首过有效的得自柑橘类的物质保持抗首过活性。

B、实施方案A的方法，其中所说的得自柑橘类的物质是柑橘类冷榨油。

C、实施方案A的方法，其中所说的醇和水的混合物是乙醇和水的30/70体积/体积混合物，其中还选择性含有1-10％的氢氧化钾(W/V)。

其它优选的实施方案包括：

D、用至少一种C₂-C₄醇、水的混合物提取的首过有效的得自柑橘类的物质，以便减少其中的光毒性呋喃并香豆素的量。

E、实施方案D的得自柑橘类的物质，其中所说的得自柑橘类的物质是柑橘类冷榨油。

F、实施方案D的得自柑橘类的物质，其是用乙醇和水的30/70体积/体积混合物提取的，其中还选择性含有1-10％的氢氧化钾(W/V)。

G、抑制患者口服摄取的受首过效应影响的物质之首过效应的方法，包括给所说的患者共同施用实施方案A和D的首过有效的得自柑橘类的物质。

本发明的组合物优选包含本发明的抑制剂物质(化合物等)(例如，单独含有，与药物、和/或稀释剂和/或载体等混合)，从而它们遵照方案C’抑制噻喹努佛的生物转化，好于纯酮康唑(基于相等的摩尔浓度(优选)或重量浓度)。或者，本发明的化合物、组合物、混合物、制剂等(物质)优选在方案C’中提供小于0.5的Y轴值(见图1)，优选0.45、0.4、0.35、0.3、0.25、0.22、0.2、0.18、0.15、0.12、0.1、0.08、0.05或0.03或更小，当将0.01-0.25mg(包括0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.12、0.14、0.16、0.18、0.2、0.22和0.24，以及所有值之间的范围)的本发明物质稀释或溶解成1升时。

一种含本发明化合物的市售形式的柑橘类是冷榨葡萄柚油，其中式XI-XVI化合物的总浓度可能达到0.15-0.25mg/ml。这六种化合物的分布如下：XI+XII+XIII+XIV等于大约50％，剩余为XV和XVI。对XI-XIV，分布大约是3∶2∶2∶1，并且XV∶XVI约为2∶1。在一个实施方案中本发明的组合物优选含有比天然和市售形式的柑橘类中所存在的浓度高的本发明化合物(即所有本发明化合物的总和)。这些浓度被称为“浓量”。例如，优选的浓度包括大于0.25mg/ml、0.3、0.8、1、2、5、8、32、128、200mg/ml等。关于本发明的化合物，一个实施方案中本发明化合物的形式因纯度而不同于天然或市售产品中存在的形式。术语“基本上纯的”和“基本上纯的形式”指本发明化合物的纯度大于市售产品和天然中存在的化合物纯度。这些浓度和形式对本领域技术人员来说是容易测定的，既然本发明者识别了造成“葡萄柚作用”的活性化合物。在以下授予US政府和其它的专利中可以找到适合描述本发明实施方案并将其专利性区别或与天然或市售存在形式相区别的其它语言、词组等：US专利4,708,948；5,409,938；5,455,251；4,977,244；5,462,956；5,314,899；5,104,977；5,484,889；5,591,770；5,599,839；5,672,607；5,674,900；5,648,354；5,691,386；5,681,829和5,564,432(引入作为参考)。关于本发明以多少量可以施用和怎样施用的另一种描述见US5,665,386、WO97/15269和WO96/40192(引入作为参考)。

以下专利申请、临时专利引入作为参考：60/056,382；60/048,183；60/043,878；08/764,081和08/673,800(Attorney Docket号7552-001-99；7552-004-99；7552-005-99；7552-006-99和7552-007-99)和AttorneyDocket号7552-008-99；申请系列号08/997,259(1997.12.23递交)。

下式描述本发明有用的其它化合物，其中R、L、E和HAr如上所述。针对上述化合物，这些化合物包括所有的立体异构体、E-Z异构体等。针对天然或市售产品，这些化合物优选是上述关于纯度、浓度等的形式。这些化合物可以选择性按照式I-XVI化合物的情形被取代。

本发明的化合物中，一组优选的可选择的取代基包括：氢、C₁-C₄烷基、-S(C₁-C₄烷基)、-O(C₁-C₄烷基)、-NH₂、-NH(C₁-C₄烷基)-N(C₁-C₂烷基)(C₁-₄)烷基、羟基、-O(C₁-C₂烷基)、氟、C₁-C₆烷基、氯、溴、碘、C₁-C₄烷氧基、-CF₃、-C(＝O)O-(C₁-C₄烷基)、-OC(＝O)(C₁-C₄烷基)、-OC(＝O)N(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)、-NHCO(C₁-C₄烷基)、-COOH、-COO(C₁-C₄烷基)、-CONH(C₁-C₄烷基)、-CON(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)、-S(C₁-C₄烷基)、-CN、-NO₂、-SO(C₁-C₄烷基)、-SO₂(C₁-C₄烷基)、-SO₂NH(C₁-C₄烷基)、和-SO₂N(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)。

另一组优选的可选择的取代基包括：C₁-C₁₂烷基、芳基、(C₁-C₄亚烷基)芳基、苯基、萘基、噻吩基、苯并噻吩基、吡啶基、喹啉基、吡嗪基、嘧啶基、咪唑基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、异噻唑基、吡唑基、吡咯基、吲哚基、吡咯并吡啶基、噁唑基和苯并噁唑基、C₃-C₈环烷基或(C₁-C₆亚烷基)(C₃-C₈环烷基)、C₁-C₄烷基、苄基、C₁-C₄链烷醇基、C₁-C₆烷氧基、-OC(＝O)(C₁-C₆烷基)、-OC(＝O)N(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)、-S(C₁-C₆烷基)、氨基、-NH(C₁-C₂烷基)、-N(C₁-C₂烷基)(C₁-C₄烷基)、-N(C₁-C₄烷基)-CO-(C₁-C₄烷基)、-NHCO(C₁-C₄烷基)、-COOH、-COO(C₁-C₄烷基)、-CONH(C₁-C₄烷基)、-CON(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)、SH、SO(C₁-C₄烷基)、-SO₂(C₁-C₄烷基)、-SO₂NH(C₁-C₄烷基)、和-SO₂N(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)。

第三组优选的可选择的取代基包括：-S(C₁-C₄烷基)或-SO₂(C₁-C₄烷基)(C₁-C₆烷基)、-N(C₁-C₄烷基)(C₁-C₂烷基)、-S(C₁-C₄烷基)、-SO(C₁-C₄烷基)、-CO(C₁-C₄烷基)、-C(＝O)H、-C(＝O)O(C₁-C₄烷基)、C₁-C₃烷氧基、二甲基氨基、甲基氨基、乙基氨基、-NHC(＝O)CH₃、C₁-C₃硫代烷基、-COOH、-C(＝O)O(C₁-C₄烷基)、-C(＝O)O(C₁-C₄烷基)、-NO₂、苯基、萘基、噻吩基、苯并噻吩基、吡啶基、喹啉基、吡嗪基、呋喃基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、吲哚基、苯并噁唑基或C₃-C₈环烷基、氯、C₁-C₆烷基、-O(C₁-C₆烷基)溴、碘、甲酰基、-CN、-CF₃、-NO₂、-NH₂、-NH(C₁-C₄烷基)、-N(C₁-C₂烷基)(C₁-C₆烷基)、-C(＝O)O(C₁-C₄烷基)、-C(＝O)(C₁-C₄烷基)、-COOH、-SO₂NH(C₁-C₄烷基)、-SO₂N(C₁-C₂烷基)(C₁-C₄烷基)、-SO₂NH₂、-NHSO₂(C₁-C₄烷基)、-S(C₁-C₆烷基)和-SO₂(C₁-C₆烷基)、氟代、羟基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙酰基、氢、C₁-C₄烷基、卤素(例如，氯、氟、碘或溴)、羟基、-O(C₁-C₄烷基)、-C(＝O)(C₁-C₄烷基)、-C(＝O)O(C₁-C₄烷基)、-OCF₃、-CF₃、-CH₂OH或-CH₂O(C₁-C₂烷基)羟基、甲氧基和氟。

这三组优选取代基中，HAr(即，C₆-C₂₄芳族基或杂芳族基)也是具体的实例。

本发明还包括本发明化合物、组合物的前体药物和活性代谢物。前体药物是当施用给哺乳动物如人时产生本发明化合物的化合物。活性代谢物是当施用本发明化合物、组合物等给哺乳动物(优选人)时形成的首过有效的化合物。本发明前体药物和代谢物的一些实例包括：

本发明的化合物、代谢物、前体药物等可以优选被氘和/或氟取代，以便增加在患者/动物/等中的停留时间。

药用载体、稀释剂、赋形剂等为本领域技术人员所已知。例如上述专利和公开出版物中所提及的几种。

在上述“用于进一步作为饮食补剂、药物等使用的冷榨葡萄柚油的预处理”的实施例部分中，示例说明了优选的方法。在此情况中，优选用热和碱的方式除去极性香豆素和呋喃并香豆素(见上)，但两种方式是选择性的。还优选含更多水分的C₃-C₄醇，更优选70∶30(V/V)水∶乙醇。此外，在初期提取阶段，优选不除去首过有效的得自柑橘类的物质中(含至少一种本发明化合物、代谢物、前体药物等的得自柑橘类的物质)的挥发物。优选的得自柑橘类的物质是冷榨葡萄柚油。

如果使用加热，优选40-120，更优选60-110℃，首选80-105℃包括80、85、90、95、100和105℃。在提取时，醇/水混合物与首过有效的得自柑橘类的物质以本领域已知的任何方式接触一次或者一次以上，选择性通过加热(即升高温度)。可以使用基于水和醇总体积1-15％、优选3-10％、更优选4、5、6、7、8或9(w/v)的碱，例如NaOH、KOH或可溶解醇/水混合物的任何其它碱。

如果准备使用提取产物，则一种测定的方式是检测洗液的pH，优选单独使用水。优选接近中性值(6-7.5)。pH调节剂可以使用例如药用或食用级的酸。呋喃并香豆素、香豆素等的被去除程度可以按照上面用HPLC、GC等检测。

确保本发明纯化的提取物中不存在醇溶性物质的一种方式是将提取物与醇混合，接着离心除去不溶物质。

Claims

1.式I-IV的基本上纯的化合物

其中上述各个结构中，R独立是H或取代或未取代的C₁-C₁₅烷基，

L是取代或未取代的C₁-C₁₅直链或支链、饱和、单不饱和或多不饱和烷基，并且链端选择性有一个或两个氧末端，

HAr是选择性取代或未取代的C₆-C₂₄芳基或杂芳基，其中选择性包含一个或多个选自N、O、S和P的成环原子，并且E是-OH、-COOH、-COOR，其中R如上定义，或取代或不取代C₁-C₈直链或支链、饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位氧或硫原子，或者E是C₃-C₈选择性取代的环状饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位氧或硫原子，或者E是选择性取代的HAr，

其中R，L，HAr和E的选择性取代基选自C₁-C₆直链、支链或环状烷基，-OH，卤素，C₁-C₅烷氧基，C₁-C₅羰氧基和C₁-C₅烷氧羰基。

2.权利要求1的化合物，其具有式I结构。

3.权利要求1的化合物，其具有式II结构。

4.权利要求1的化合物，其具有式III结构。

5.权利要求1的化合物，其具有式IV结构。

6.下式基本纯的化合物

7.式I-IV基本纯的化合物，

L是取代或未取代的C₁-C₁₅直链或支链、饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位硫或氧原子，并且链端选择性有一个或两个氧末端，

HAr是选择性取代或未取代的C₆-C₂₄芳基或杂芳基，其中选择性包含一个或多个选自N、O、S和P的成环原子，并且E是-OH、-COOH、-COOR，其中R如上定义，或取代或不取代C₁-C₈直链或支链、饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位氧或硫原子，或者E是C₃-C₈选择性取代的环状饱和、单不饱和或多不饱和烷基，其中选择性掺杂一个或多个非邻位氧或硫原子，或者E是选择性取代的HAr。

8.权利要求7的化合物，具有下式

9.权利要求7的化合物，具有下式