ES2199457T3 - Compuestos que inhiben el efecto del primer paso. - Google Patents

Abstract

Compuesto según las fórmulas I-IV:**fórmula** en el que, en cada una de las estructuras anteriores: R es, de forma independiente, H o un grupo (C1- C15)-alquilo opcionalmente sustituido; L es un grupo (C1-C15)-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno, HAr es un grupo (C6-C24)-aromático o grupo (C6- C24)-heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y P, y E es -OH, -COOH, -COOR, donde R es como se define más arriba, o un grupo (C1-C8)-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C3-C8)-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido, en el que los sustituyentes opcionales para los grupos R,L,HAr y E se seleccionan del grupo compuesto por un grupo (C1-C6)-alquilo lineal, ramificado o cíclico, -OH, halógeno, un grupo (C1-C5)-alcoxilo, un grupo (C1-C5)-alquil-carboniloxilo y un grupo (C1-C5)-alcoxi-carbonilo.

Description

Compuestos que inhiben el efecto del primer paso.

La presente invención se refiere a compuestos que inhiben el efecto del primer paso, a su utilización para la preparación de una composición farmacéutica y a composiciones. Los compuestos y las composiciones de la invención se suministran preferentemente como suplemento dietético o como producto dietético medicinal o algún otro tipo de producto alimenticio, o como medicamento, preparación farmacéutica o preparación medicinal, o en alguna otra forma física. Además de tener alguna otra función, los compuestos y las composiciones de la invención actúan como inhibidores del efecto del primer paso de medicamentos administrados por vía oral. Los beneficiados con esta invención son animales, preferentemente mamíferos y en particular humanos, que necesiten medicamentos, etc. sujetos al efecto del primer paso.

El ``efecto del primer paso'' de medicamentos administrados por vía oral se refiere al proceso de degradación del medicamento durante una transición del mismo desde la ingestión inicial hasta la circulación en la corriente sanguínea. Denominada a menudo ``biodisponibilidad'', no es raro que un medicamento administrado a un paciente por vía oral se administre en una cantidad 5 veces mayor, o más, que la finalmente necesaria, debido a la degradación que se produce en el cuerpo del paciente después de la toma. Por ejemplo, las consecuencias del efecto del primer paso pueden demostrarse con el caso del antihistamínico terfenadina, en el que el 99,5% de una pastilla administrada por vía oral se transforma rápidamente en metabolitos; por lo tanto, la biodisponibilidad de la terfenadina es de aproximadamente un 0,5% (D. Garteiz et al., Arzneim.-Forsch., 1982; 32:1185-1190). Como otro ejemplo, la ciclosporina A, administrada a pacientes de trasplante de órgano, tiene una biodisponibilidad oral media de aproximadamente un 30% y un rango de biodisponibilidad de aproximadamente un 8-92% entre los pacientes. Debido a esta gran variación de la biodisponibilidad de la ciclosporina entre individuos se hace necesario un control frecuente de las concentraciones sanguíneas durante la iniciación de la terapia.

La inhibición de un metabolismo xenobiótico en particular como un mecanismo de acción en general, así como la inhibición del efecto del primer paso con agentes químicos de forma específica, es ya bien conocida en el estado actual de la técnica desde hace tiempo. Entre los ejemplos se incluyen el tratamiento del envenenamiento por metanol (alcohol metílico) con etanol y la inhibición del efecto del primer paso de la ciclosporina con cetoconazoles. Véase, por ejemplo, First, R.M. et al., The Lancet, 1198, 18 de noviembre de 1989, que se incorpora aquí como referencia.

Aunque el o los agentes, el o los tipos de enzima, los procesos biológicos, etc. responsables del efecto del primer paso no se han identificado por completo, la investigación se ha orientado a agentes capaces de inhibir el sistema citocromo P450. La inhibición del sistema P450 es un modelo de la determinación in vitro del aumento de la biodisponibilidad in vivo. Véanse, por ejemplo, las patentes U.S. nº 5,478,723 y 5,567,592 para una descripción más detallada del sistema P450. Según lo comunicado por A. Keogh et al. (N. Eng. J. Med., vol. 333, nº 10, p. 628, 1995) y S. Butman et al. (J. Heart Lung Transpl., vol. 10, nº 3, p. 351, 1991), la dosis de ciclosporina requerida por los pacientes de trasplante de corazón podría reducirse en aproximadamente un 85% si la ciclosporina se administrase conjuntamente con cetoconazoles. En términos económicos, ambas referencias estimaban el ahorro de costes en aproximadamente 5.000

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al año por paciente. Entre otros medicamentos sujetos al efecto del primer paso y cuya biodisponibilidad se aumenta mediante inhibidores administrados comúnmente a humanos se incluye el midazolam (K. Olkkola et al., Clin. Pharmacol. Ther., 1993, 53:298-305), la terfenadina (Seldane®) (P. Honig et al., JAMA, vol. 269, nº 12, 1513, 1993) y el triazolam (Varhe, A. et al., Clin. Phannocol. Ther., 1994, 56:601-7).

Además de los cetoconazoles, los medicamentos fluconazol, ritonavir, itraconazol, miconazol, eritromicina y troleandomicina se han identificado como inhibidores del efecto del primer paso, adicionalmente a cualquier efecto farmacéutico que posean. Sin embargo, estos compuestos son agentes antivíricos, antimicrobianos o antifúngicos. Debido al conocimiento actualmente mayor del hecho de que el uso excesivo de tales agentes puede resultar en cepas microbianas resistentes, debido a que algunos de los inhibidores más eficaces son antimicrobianos y debido a que los pacientes de trasplante y los infectados con el HIV tienen sistemas inmunitarios comprometidos, la utilización de estos inhibidores del efecto del primer paso presenta notables desventajas y, por ejemplo en el caso del cetoconazol, la administración conjunta decidida de este inhibidor con medicamentos susceptibles del efecto del primer paso no se ha difundido. En realidad, la emergencia de la resistencia a los medicamentos antifúngicos en pacientes con inmunidad comprometida ya se conoce (T.J. Walsh: ``Emergence of Antifungal Drug Resistance in Immunocompromised Patients'' Seminar, National Institutes of Health, 7 de febrero de 1996; Georgopapadakou, N.H. et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, feb. 1996, p. 279-291).

Los suplementos dietéticos, las medicinas, los compuestos, los extractos, etc. que están basados en materiales aislados de la naturaleza se están estudiando y poniendo a disposición de los consumidores cada vez en mayor medida. Esta tendencia es debida en gran parte al hecho de que la obtención de la protección mediante patente de estos materiales se ha convertido en algo rutinario (véanse, por ejemplo, las patentes U.S. nº 4,708,948, 5,409,938, 5,314,899, 5,591,770 y 5,654,432). No es sorprendente que esta tendencia esté extendiéndose ahora a los agentes eficaces contra el primer paso.

En 1991, Bailey et al. (Bailey, D.G. et al., The Lancet, vol. 337, 2 de febrero de 1991, p. 268) comunicaron que el zumo de pomelo aumenta la biodisponibilidad del felodipina, e indicaron que la inhibición de las enzimas citocromo P450 mediante bioflavonoides podía explicar sus descubrimientos. Esta identificación de bioflavonoides como el ingrediente activo en el zumo de pomelo fue inmediatamente puesta en duda por R. Chayen et al. (The Lancet, vol. 337, 6 de abril de 1991, p. 854), quienes sugirieron que los ingredientes activos del zumo de pomelo responsables de la inhibición del efecto del primer paso eran más bien compuestos sesquiterpenoides que flavonoides. Aunque a Bailey y Edgar se les concedió una patente (patente U.S. nº 5,229,116) dirigida al método de aumentar la biodisponibilidad de un agente farmacéutico mediante la administración conjunta de un flavonoide como, por ejemplo, la naringina, su propio trabajo reciente ha puesto abiertamente en cuestión la precisión de su identificación inicial de los flavonoides como ingrediente activo. Véase, por ejemplo, Bailey et al., Clin. Pharmacokinet. 26 (2): 91-98, 1994, en particular las páginas 95 y 96 de dicho documento. Véase también Edwards, D.J. et al., Life Sciences, vol. 59, nº 13, páginas 1025-1030, 1996.

Los efectos comunicados del zumo de pomelo como un inhibidor eficaz del efecto del primer paso dieron lugar a numerosos artículos referentes a la inhibición del efecto del primer paso por el zumo de pomelo en, por ejemplo, nifedipina, nitrendipina, nisoldipina, ciclosporina A, midazolam, triazolam, cumarina y cafeína. Según se han ido conociendo mejor estos resultados, el así llamado ``efecto del zumo de pomelo'' se ha convertido en tema de artículos en periódicos, boletines y textos médicos destinados al público en general. Véase, por ejemplo, ``The Medical Letter'', vol. 37 (publicación 955) 18 de agosto de 1995, The Peoples Pharmacy, capítulo 4 (St. Martin's Press) 1996, p. 41, el artículo periodístico del 19 de febrero de 1991 referente al felodopino y el zumo de pomelo en el New York Times (sección C, página 3, columna 1) y un artículo reciente en el Washington Post (sección A, p. 11, 30/8/96).

Un análisis de los estudios publicados que demuestra el efecto del zumo de pomelo, demuestra también que la magnitud del efecto varía ampliamente, y el presente inventor sospecha que esta variación puede rastrearse hasta la fuente del zumo. En realidad, la producción de zumo de cítricos comercial implica una complicada serie de factores que aumentan la variabilidad de la composición final del producto. Entre estos factores se incluyen la técnica utilizada para exprimirlos, la técnica de concentración, el origen de la fruta, la madurez de la fruta en el momento de cosecharla, la mezcla de frutas de distinto origen y madurez, la mezcla de zumo y desechos de fruta, etc. Debido a que los agentes activos del zumo de pomelo que inhiben el efecto del primer paso eran desconocidos o habían sido mal identificados, los científicos y consumidores no podían elegir una preparación de zumo de pomelo y confiar en su utilidad para inhibir el efecto del primer paso.

Por otra parte, se sabe que el zumo de pomelo en particular y los productos cítricos en general contienen derivados de furanocumarina fototóxicos, entre los que se incluyen el psoraleno, la xantotoxina y el bergapteno. Aunque estos compuestos son útiles para el tratamiento clínico controlado de determinadas afecciones dermatológicas, entre las que se incluye el vitíligo, la psoriasis y la micosis fungoide, se sabe que también son tóxicos, en particular fototóxicos. La relación estructura-actividad para la fototoxicidad de las furanocumarinas se ha delineado claramente a partir de estudios en humanos (por ejemplo L. Musajo et al., Herba Hungarica, 1971, tom. 10, nº 2-3, páginas 79-94), y estos estudios demuestran que la actividad de fotosensibilización se elimina mediante una hidroxilación de anillo o aumentando la longitud de la cadena de alquilo de los sustituyentes de éter.

De una interpretación cuidadosa de la bibliografía se deduce que el psoraleno y ciertas furanocumarinas sustituidas con éter y de bajo índice de carbono que se administran a humanos en dosis grandes inhiben el citocromo P450. Véase, por ejemplo, D. Bickers et al., J. Investigative Dermatology, 79:201-205, 1982, M. Tinel et al., Biochemical Pharmacology, vol. 36, nº 6, 951-955, 1987, H. Fouin-Fortunet et al., J. Pharm. Experimental Therapeutics, vol. 236, nº 1, 237-247, 1986, y D. Mays et al., Clin. Pharmacol. Ther., 42:621-626, 1987. Así pues, y debido a que los inhibidores del efecto del primer paso conocidos y eficaces inhiben por lo general el citocromo P450, una conclusión tentadora, particularmente considerando las recientes rectificaciones de Bailey, et al., es que estas furanocumarinas de bajo peso molecular presentes en los cítricos sean los inhibidores activos del primer paso en el zumo de pomelo. En realidad, según se explicará más abajo con mayor detalle con respecto a la presente invención, el presente inventor ha descubierto que no es éste el caso. Gracias a que el presente inventor ha descubierto compuestos específicos que inhiben el efecto del primer paso, ahora es posible producir una composición fiable y segura que no sólo inhibe el efecto del primer paso, sino que también, si se desea, está basada en cítricos o procede de cítricos y que no contiene furanocumarinas fototóxicas de bajo peso molecular o contiene cantidades reducidas de las mismas.

La figura 1 muestra resultados de inhibición para diversos inhibidores.

La figura 2 muestra resultados de inhibición para diversos inhibidores.

Uno de los objetos de esta invención es proporcionar compuestos químicos y composiciones que inhiban el efecto del primer paso y presenten una forma, concentración, pureza, etc. distinta a la que se puede hallarse en la naturaleza o comercialmente.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar un producto fiable y seguro basado en cítricos o procedente de cítricos que contenga uno o más compuestos de la invención en cantidades que no se presenten en la naturaleza o comercialmente e inhiba el efecto del primer paso y que, opcionalmente, esté libre, o contenga una cantidad reducida (en comparación con una cantidad que pueda hallarse en la naturaleza o comercialmente), de furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas y, opcionalmente, no inhibidoras del primer paso, que pueda utilizarse como suplemento alimenticio o dietético, producto farmacéutico, medicamento, etc.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición que contenga uno o más compuestos de la invención y sea eficaz contra el efecto del primer paso.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición que contenga uno o más de los compuestos de la invención y ninguna cantidad, o cantidades reducidas en comparación con las cantidades que pueden hallarse en la naturaleza o comercialmente, de furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas. Otro objeto de la presente invención es proporcionar una composición que contenga, como mínimo, un compuesto de la invención y proporcione una actividad inhibidora del primer paso constante y fiable. Otro objeto de la presente invención es proporcionar los compuestos y composiciones arriba descritos como un componente de productos y mezclas que suministren ingredientes activos, agentes terapéuticos, medicamentos, etc. u otras sustancias sujetos/as al efecto del primer paso en humanos.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar compuestos inhibidores del efecto del primer paso, también denominados aquí biointensificadores e inhibidores, en formas que no se hallen en la naturaleza o comercialmente.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar mezclas de uno o más compuestos inhibidores del efecto del primer paso de la invención con diversos agentes terapéuticos, agentes activos, medicamentos u otras sustancias (denominadas en lo sucesivo ``medicamentos'') sujetos/as al efecto del primer paso.

También se describe la utilización de los compuestos arriba mencionados para inhibir el efecto del primer paso en pacientes humanos, animales, etc. que tomen medicamentos que presenten el efecto del primer paso. Otro objeto de la presente invención es un método para preparar las composiciones, los compuestos, las mezclas, etc. arriba descritos/as.

Otro objeto de la presente invención es proporcionar y utilizar compuestos y composiciones eficaces contra el primer paso que contengan una cantidad eficaz contra el primer paso (en conjunto o individualmente) de, como mínimo, un compuesto de la invención en forma aislada y/o en forma libre de pirógenos y/o en forma estéril y/o en forma sustancialmente pura y/o en forma farmacéutica y/o en forma químicamente pura y/o en una forma que comprenda una mayor concentración o pureza de compuestos de la invención que la que puede hallarse tanto en la naturaleza como comercialmente. A los efectos de esta invención, ``comercialmente'' significa productos producidos y vendidos local, nacional e internacionalmente, especialmente por la industria procesadora de cítricos. Estas formas, como indican sus nombres, son distintas de los compuestos de la invención tal y como se presentan naturalmente en, por ejemplo, cítricos comerciales y productos cítricos como el zumo, aceites de prensado en frío, zumos concentrados, aceites, etc.

Éstos y otros objetos se harán evidentes para los técnicos en la materia mediante una apreciación global de la invención según lo descrito más abajo con respecto a las formas de realización preferidas.

El presente inventor ha descubierto compuestos químicos que inhiben el efecto del primer paso de medicamentos administrados por vía oral en humanos. El presente inventor ha descubierto también que las furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas y ciertas furanocumarinas sustituidas con éter presentes por naturaleza en extractos, zumos, subproductos de cítricos, etc. pueden eliminarse de los mismos o reducirse en concentración sin destruir los compuestos inhibidores del efecto del primer paso que se hallan en los mismos. El presente inventor ha descubierto también un método para preparar composiciones basadas en cítricos utilizando sólo reactivos aceptables por FDA o USP. La presente invención se ha completado sobre la base de estos descubrimientos y se describe más abajo con mayor detalle.

Los compuestos químicos de la invención que inhiben el efecto del primer paso en animales, incluidos humanos, son, en una forma de realización preferida, compuestos según las siguientes fórmulas I-IV:

1

2

En cada una de las estructuras anteriores:

R

es, de forma independiente, H o un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido,

L

es un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de azufre y oxígeno no adyacentes y opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno,

HAr

es un grupo (C_{6}-C_{24})-aromático o grupo (C_{6}-C_{24}) -heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y P, y

E

es -OH, -COOH, -COOR (donde R es como se define más arriba) o un grupo (C_{1}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C_{3}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido.

Es preferible que los compuestos de las fórmulas I-IV, así como los descritos más abajo, no contengan un grupo peróxido (O-O). Los grupos disulfuro (S-S) no se prefieren, pero pueden estar presentes. E es preferentemente un radical epóxido o dihidroxilo como por ejemplo -CH(OH)_{2}. E puede ser también un grupo epóxido de apertura ácida.

Los compuestos de la invención, según lo abajo descrito, no tienen limitaciones en lo que se refiere a la estereoquímica, incluido el isomerismo E-Z y todas las posibilidades. Se incluyen las mezclas racémicas, así como todos y cada uno de los enantiómeros y diastereómeros. Las preferencias en estereoquímica se indican más adelante.

Los grupos R, L, HAr y E pueden estar opcionalmente sustituidos con un grupo (C_{1}-C_{6})-alquilo lineal, ramificado o cíclico, -OH, un átomo halógeno, un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxilo, un grupo (C_{1}-C_{5})-alquil -carboniloxilo, un grupo
(C_{1}-C_{5})-alcoxi-carbonilo, etc. Tales sustituyentes pueden estar también opcionalmente sustituidos de forma directa en las estructuras anulares de las fórmulas I-IV, sin tener en cuenta si aparecen dichos sustituyentes o R, L, HAr o E.

Una segunda forma de realización preferida de los compuestos químicos de la presente invención que inhiben el efecto del primer paso se describe mediante las fórmulas V-X:

3

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6

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Al igual que lo arriba indicado para las fórmulas I-IV, las fórmulas V-X no tienen limitaciones en lo que se refiere a la estereoquímica, el isomerismo E-Z, etc.

Los compuestos inhibidores del efecto del primer paso según la presente invención preferidos en mayor medida son los que corresponden a la segunda forma de realización anterior y presentan la siguiente estereoquímica (fórmulas XI-XVI):

10

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Las composiciones de la presente invención contienen, como mínimo, un compuesto químico eficaz contra el primer paso, preferentemente en una cantidad eficaz contra el primer paso. Las composiciones basadas en cítricos contienen además un extracto, concentrado, cáscara, zumo, aceite, subproducto, etc. derivado de cítricos, (denominado en lo sucesivo sustancia derivada de cítricos), que puede suministrarse mediante cualquier combinación de estas formas y derivarse de más de una fruta cítrica. Entre las frutas cítricas aquí empleables se incluyen pomelo, limón, lima y, preferentemente, cualquier fruta cítrica que contenga por naturaleza un compuesto inhibidor del efecto del primer paso de la invención o una mezcla de tales compuestos. Los trabajos anteriores en este campo indicaban que un tipo común de naranja (Citrus sinensis) no inhibe el efecto del primer paso. Las frutas cítricas que contienen una o más sustancias que inhiben el efecto del primer paso están incluidas en la invención, incluyendo todos los cruces, etc., y se denominan en el presente documento ``cítricos de primer paso''. Una fruta cítrica preferida empleable en la presente invención es el pomelo.

Los compuestos, las sustancias y las composiciones eficaces contra el primer paso aquí descritos/as son materiales que impiden o retrasan la degradación de medicamentos administrados por vía oral en el cuerpo. Los materiales eficaces contra el primer paso de la invención, incluyendo composiciones y compuestos, aumentan preferentemente la biodisponibilidad de los medicamentos como mínimo en un 1%, preferentemente en más de un 5% y con la máxima preferencia en más de un 15%, incluyendo un 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 150, 200, 250, 300, etc. por ciento, medido por el método del área bajo la curva (AUC). Véase patente U.S. nº 5,567,592, incorporada aquí como referencia. Con la presente invención no es raro lograr una biodisponibilidad varias veces mayor, incluyendo 5, 10, 15, 20 veces mayor (es decir, varios cientos o miles por ciento de aumento del AUC). La eficacia contra el primer paso de los compuestos y composiciones de la invención puede medirse también mediante, y preferentemente cumplir los criterios de, los métodos y caracterizaciones descritos en los documentos WO 97/15269, U.S. 5,665,386 y PCT/US96/09607, todos ellos incorporados aquí como referencia.

Entre las sustancias derivadas de cítricos preferidas presentes en las composiciones de la invención se incluyen aceite de cítrico prensado en frío, en particular pomelo, lima, limón, etc. prensados en frío, aceite, y subproductos de cítricos, incluyendo desechos de plantas de envasado de cítricos/zumo de cítricos. Los aceites de cítricos prensados en frío, incluyendo aceite de naranja (excepto Citrus sinensis), pomelo, lima y limón prensados en frío, son productos primarios y se describen, por ejemplo, en el Food Chemicals Codex, cuarta edición, National Academy Press, Washington, D.C. 1996, incorporada aquí como referencia. Entre otras sustancias derivadas de cítricos empleables aquí se incluyen los otros diversos aceites de cítricos (destilados, esenciales, de tipo desértico, etc.), aceites amargos prensados en frío, etc. El origen geográfico de los cítricos que proporcionan la sustancia derivada de cítricos carece aquí de importancia. También pueden utilizarse zumos o cáscaras (cortezas) de cítricos, así como cualquier porción de un cítrico de primer paso sólida, semisólida o líquida eficaz contra el primer paso. Pueden utilizarse mezclas.

La sustancia derivada de cítricos presente en las composiciones de la invención puede suponer la totalidad de la composición basada en cítricos o puede ser sólo una parte de la misma. Así pues, si la sustancia basada en cítricos se prepara de modo que contenga uno o más compuestos según las fórmulas I-XVI en una cantidad eficaz contra el primer paso, no será necesario añadir ningún otro compuesto. Si se desea pueden añadirse diluyentes, excipientes, portadores, etc. de calidad apropiada para alimentos o aceptables desde un punto de vista farmacéutico.

La sustancia derivada de cítricos de la composición de la presente invención se trata preferentemente de modo que se reduzca la cantidad de furanocumarinas fototóxicas y, opcionalmente, no eficaces contra el primer paso presentes en ella por naturaleza. Estas furanocumarinas se eliminan preferentemente por completo, lo que significa que se eliminan en una medida tal que su presencia sea indetectable mediante cromatografía en fase líquida y, preferentemente, en fase gaseosa.

El método para eliminar furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas de componentes derivados de cítricos comprende preferentemente la eliminación opcional de componentes volátiles (componentes eliminados después de 12-48 h a una presión de 10^{-2}-10^{-3} Torr) y la extracción con mezclas de, como mínimo, un (C_{1}-C_{10})-alcohol (preferentemente etanol) y agua, opcionalmente en presencia de una base. En ciertas situaciones es preferible no eliminar componentes volátiles tales como los terpenos presentes por naturaleza, sino más bien utilizar estos volátiles esencialmente como disolventes en el tratamiento ulterior. La mezcla de extracción de alcohol y agua puede desecharse y lo que queda utilizarse en este método. Se prefieren también los (C_{2}-C_{5})-alcoholes, al igual que los C_{2} y C_{3} y C_{4}-alcoholes. El alcohol (etanol) puede ser 100% alcohol o puede suministrarse y utilizarse convenientemente en diluciones alcohol-agua comúnmente disponibles (por ejemplo 95% de etanol/5% de agua, etc.). En todos los casos el reactivo de alcohol (etanol) es preferentemente de calidad U.S.P. o mejor. El agua utilizada aquí para extraer la sustancia (el componente) derivada de cítricos de la invención es preferentemente agua destilada, y también preferentemente de calidad U.S.P. o mejor. Para la extracción puede utilizarse cualquier combinación de disolventes o un único disolvente. El o los disolventes son preferentemente aceptables por el FDA para la fabricación de alimentos y medicamentos.

El método para eliminar furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas puede incluir sucesivas extracciones con mezclas de alcohol (etanol)/agua, y las sucesivas mezclas de alcohol (etanol)/agua utilizadas pueden tener la misma relación volumétrica o distintas relaciones volumétricas. Las relaciones volumétricas alcohol (etanol):agua preferidas oscilan entre 1:10-10:1 y con mayor preferencia son 1:1 (\pm3%, 5%, 8% ó 10%) y pueden ser 20-80 ó 45-60% de alcohol (etanol) en una base volumen/volumen, incluyendo 2:1, 3:1, 1:2, 1:3, etc, así como 55/45, 60/40, 65/35, 70/30, 10/90, 15/85, 20/80, 25/75, 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 40/60, 35/65, 30/70, etc. de alcohol/agua. Las extracciones pueden realizarse por cualquier método conocido en la técnica actual, incluyendo la extracción líquido-líquido, la extracción líquido-sólido, la extracción continua, etc.

Si la materia prima utilizada para preparar el extracto derivado de cítricos es, por ejemplo, un aceite, la mezcla de alcohol (etanol)/agua utilizada para la extracción puede simplemente añadirse al mismo, agitarse juntamente con él y separarse de forma natural o con la ayuda de una centrífuga. Las extracciones repetidas son útiles, al igual que los métodos de extracción continua como la extracción en contracorriente, etc.

Como se ha indicado más arriba, preferentemente se utiliza una base para la eliminación de furanocumarinas fototóxicas, que puede añadirse al agua o al alcohol o a ambos. Las bases preferidas son los óxidos e hidróxidos alcalinos y alcalinotérreos y las preferidas en mayor medida son el hidróxido sódico y el hidróxido potásico. La base está presente por lo general en cantidades de 0,01-80 gramos por litro de mezcla de alcohol/agua. El método para la eliminación de furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas disminuye preferentemente de un modo significativo, y preferentemente elimina por completo más allá de los límites de detección de una cromatografía en fase líquida y, preferentemente, en fase gaseosa, las furanocumarinas lineales y angulares sustituidas con metoxilo, incluyendo la xantotoxina (8-metoxi-psoraleno), el bergapteno (5-metoxi-psoraleno), el isobergapteno, la isopimpinelina, etc., y las furanocumarinas lineales y angulares no sustituidas (psoraleno, angelicina, etc.). Las furanocumarinas que, según lo aquí comprobado, son ineficaces contra el efecto del primer paso también pueden eliminarse, si se desea. Entre estos compuestos se incluyen la bergamotina, el psoraleno, la angelicina, la isopimpinelina, la marmina, la 6'-7'-dihidroxi-bergamotina y la imperatorina.

Las composiciones de la invención contienen preferentemente una cantidad eficaz contra el primer paso de, como mínimo, un compuesto eficaz contra el primer paso según las fórmulas I-XVI anteriores. Como alternativa pueden estar presentes varios compuestos según las fórmulas I-XVI, cada uno de ellos en cantidades no eficaces contra el primer paso, proporcionando la suma de las concentraciones de dichos compuestos eficacia contra el primer paso.

Además de lo arriba explicado, es posible sustituir uno o varios de los átomos de hidrógeno representados en dichas fórmulas (es decir fórmulas I-XVI) por uno o cualquier combinación de dos o más de los siguientes: hidroxilo, halógeno, (C_{1}-C_{40})-hidrocarburo lineal o ramificado, (C_{1}-C_{40})-éter lineal o ramificado (-OR, siendo R un hidrocarburo lineal o ramificado), (C_{1}-C_{40})-alquil-hidroxilo (-ROH, siendo R un hidrocarburo lineal o ramificado y estando OH ligado a un carbono primario, secundario o terciario), etc. A los efectos de esta invención, ``hidrocarburo'' significa alquilo ramificado y lineal y alquenilo ramificado y lineal. Alquenilo es cualquier hidrocarburo con como mínimo un enlace doble, pero que incluye múltiples dobles enlaces conjugados y no conjugados. Se incluyen también todas las sales, en particular las sales aceptables desde un punto de vista farmacéutico, y los estereoisómeros, las formas físicas, etc. Los compuestos descritos en las fórmulas I-XVI pueden sintetizarse mediante cualquier técnica general ya conocida, y su síntesis está dentro de las capacidades del técnico medio en este campo. Ahora que han sido identificados, también pueden aislarse de una sustancia derivada de cítricos según se muestra en este documento.

Entre los métodos preferidos para preparar los compuestos de la invención según las fórmulas I-XVI se incluyen los siguientes esquemas:

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Las reacciones de este tipo están dentro de las capacidades del técnico medio en la materia. Véase, por ejemplo, Chemistry Letters, 2019-2022, 1990, Can. J. Chem., 63:2673-2678, 1985, Australian Journal of Chemistry, 42: 1235-1248, 1989, patente de Alemania Oriental DD 275687 y patente de la Unión Soviética SU 1397449, todos ellos incorporados aquí como referencia. Aunque todos los esquemas de reacción arriba mostrados proporcionan las fórmulas I+II o bien las fórmulas III+IV, todos los métodos pueden proporcionar las fórmulas I-IV si se utilizan los reactivos apropiados. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención contienen, como mínimo, un compuesto según las fórmulas I-XVI anteriores. Pueden utilizarse mezclas.

La utilización de las composiciones y los compuestos de la presente invención no está limitada, pudiendo administrarse preferentemente en cantidades de 2 nanogramos-2 gramos y más por paciente por día para aumentar la biodisponibilidad de medicamentos tomados por vía oral por un paciente. Las composiciones de la invención pueden contener, preferentemente, más compuestos de la invención que los presentes por naturaleza en productos de cítricos. Las dosis pueden ser determinadas por un técnico medio en la materia y dependen de la medida en que, por ejemplo, un agente activo (medicamento) esté sujeto al efecto del primer paso, etc. Entre las formas de dosificación se incluyen formas de administración orales, formas de administración tópicas, formas de administración por inyección. Los compuestos y las composiciones de la invención pueden opcionalmente formar parte de, o añadirse a, una composición basada en cítricos u otro material comestible, el cual es preferentemente un aroma enmascarador de sabor, un zumo, etc.

Las composiciones y los compuestos de la invención inhiben el efecto del primer paso de medicamentos tomados por vía oral por humanos y otros animales. Una ``cantidad eficaz contra el primer paso'' de un material de la invención es toda cantidad que aumente la biodisponibilidad oral de cualquier sustancia en una medida cualquiera (por ejemplo, 1%, 5%, 10%, etc.; véase más arriba, en la parte en que se describe el método AUC, incluyendo todos los valores y rangos entre dichos valores) en relación con un caso en que no se haya administrado material de la invención en una situación de este tipo. Una composición o un compuesto de la invención ``eficaz contra el primer paso'' es un material que inhibe el efecto del primer paso observado de, como mínimo, un medicamento en un animal, preferentemente un humano y preferentemente el efecto del primer paso causado por el sistema citocromo P450. En este documento no referimos a ello también como actividad inhibidora del primer paso. La administración es preferentemente una administración conjunta, lo que significa justo antes, justo después o con el medicamento, agente activo, agente terapéutico, producto dietético medicinal, etc. sujeto al efecto del primer paso. ``Justo antes'' y ``justo después'' abarcan todos los momentos en que el material de la invención produce un beneficio mediante la inhibición del efecto del primer paso. Las formas preferidas de la invención comprenden los compuestos y las composiciones de la invención dentro de, por ejemplo, una cápsula de gel, o formulados conjuntamente con aglutinantes, diluyentes, etc. de calidad apropiada para alimentos o aceptables desde un punto de vista farmacéutico. Por ejemplo, en las patentes U.S. nº 5,576,448, 5,576,446, 5,576,437, 5,576,439, 5,576,435, 5,576,337, 5,576,339 y 5,576,336, todas ellas incorporadas aquí como referencia, pueden hallarse formas de dosificación (sal o base, pastilla o chicle, etc.), así como aglutinantes, formas de sal, excipientes, etc. utilizables. Las composiciones y los compuestos de la invención se suministran preferentemente en una cantidad que proporcione una potencia constante y fiable de lote a lote sin tener en cuenta la forma en la que se suministra.

La palabra ``medicamento'' se utiliza aquí con el significado de un producto químico apto para su administración a un organismo y que modifica o altera la fisiología del organismo. Con mayor preferencia, la palabra ``medicamento'' se utiliza aquí con el significado de cualquier sustancia destinada al uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades, en particular para humanos. Entre los medicamentos se incluyen toxinas de origen sintético y natural y sustancias bioafectadoras, así como productos farmacéuticos admitidos, tales como los incluidos en Merck Index, duodécima edición, Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1996, ``The Physicians Desk Reference'', 47ª edición, 1993, páginas 101-321; ``Goodman and Gilman's The Pahrmacological Basis of Therapeutics'' 8ª edición (1990), páginas 84-1614 y 1655-1715; y ``The United States Pharmacopeia, The National Formulary'', USP XXII NF XVII (1990), incorporándose aquí como referencia los compuestos de estas referencias.

El término medicamento abarca también compuestos que tengan las propiedades indicadas que aún no hayan sido descubiertos o aún no estén disponibles en los EE.UU. El término medicamento abarca formas proactivas, activadas y metabolizadas de medicamentos. La presente invención puede utilizarse con medicamentos consistentes en especies cargadas, neutras, hidrófilas, iónicamente anfotéricas o hidrófobas, así como cualquier combinación de estas características físicas. Un medicamento hidrófobo se define como un medicamento que en su forma no ionizada es más soluble en lípidos o grasas que en agua. Un medicamento hidrófobo se define preferentemente como un medicamento más soluble en octanol que en agua. Véase la patente U.S. nº 5,567,592, incorporada aquí como referencia. La invención puede utilizarse con humanos y animales tales como mamíferos.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse conjuntamente con medicamentos, preferentemente medicamentos sujetos al efecto del primer paso. El medicamento tiene preferentemente una biodisponibilidad oral de un 92% o menos y con mayor preferencia de un 50% o menos. Entre los ejemplos se incluyen, además de los arriba incorporados como referencia, saquinavir, indinavir, L-deprenilo, tacrolimus, ciclosporina A (Sandimmune®), ciclosporina A (Neoral®), nelfinavir, VX-478/141W94, felodipina, nifedipina y sumatriptán. Dichas formulaciones conjuntas incluyen uno o más compuestos de la invención en cantidades arriba mencionadas con, normalmente, cantidades inferiores a las actualmente necesarias de ingredientes activos de medicamento sujetos al efecto del primer paso. También pueden añadirse aglutinantes, diluyentes, etc. aceptables para el uso farmacéutico. El técnico medio en la materia puede determinar la dosificación de los compuestos de la invención basándose en simples procedimientos de ensayo ya conocidos en la técnica actual, entre los que se incluyen experimentos farmacológicos que determinan la cantidad de medicamento en la corriente sanguínea durante cierto tiempo después de la administración.

Otros productos empleables aquí para la formulación conjunta son todos y cada uno de los medicamentos, productos dietéticos medicinales u otros productos que estén sujetos al efecto del primer paso. En el Merck Index, duodécima edición, Merck Research Laboratories, Whitehouse Station, NJ, 1996, incorporado aquí como referencia, se indican ejemplos de medicamentos. La determinación de si una sustancia está sujeta al efecto del primer paso entra dentro de las capacidades del técnico medio en este campo.

Es preferible que los materiales de la invención estén protegidos contra el ácido del estómago mediante, por ejemplo, un revestimiento. Tales revestimientos son ya conocidos en el estado actual de la técnica e incluyen revestimientos entéricos, etc. Véase la Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology, 3ª edición, vol. 17, p. 281 y siguientes, incorporada aquí como referencia. También pueden utilizarse otras formas farmacéuticas útiles, tales como formas de liberación retardada (revestimientos), cápsulas de gelatina de envolvente dura y blanda, etc.

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Ejemplos Síntesis de un espiro-orto-éster (fórmula XVII)

21

Se colocó éter bencil-6,7-epoxi-geranílico en una cámara, en la que se había hecho el vacío (0,1 torr), durante la noche con el fin de eliminar agua extraña de la muestra: se pesaron 190 mg (730 \mumoles). Se disolvieron tres equivalentes de 7-metoxi-cumarina (0,386 gr) en 3 mL de CH_{2}Cl_{2}, y este líquido se transfirió a un recipiente de vidrio cerrado. Se utilizó helio para purgar el sistema durante el período de reacción, el recipiente se mantuvo a 5-6ºC y la solución de reacción se agitó magnéticamente. Se añadieron cuarenta y tres \muL de una solución 1M de SnCl_{4} en CH_{2}Cl_{2} y 16 \mumoles de BF_{3}\medbulletEt_{2}O; pasaron 5 minutos, a continuación se añadió el epóxido, disuelto en 4 mL de CH_{2}Cl_{2}, en 4 porciones iguales: a cada porción le siguieron 4 \mumoles de BF_{3}\medbulletEt_{2}O. La reacción se mantuvo a 5-6ºC y se agitó durante 3,5 horas, y a continuación se desmontó el aparato de reacción. Inmediatamente se trató la mezcla de reacción de la siguiente manera: la mezcla contenía un total de 75 \mumoles de BF_{3} y SnCl_{4}, de modo que se añadieron 3 equivalentes de piridina (225 \mumoles) (mezcla de reacción mantenida a 5-6ºC, bajo agitación) para destruir los catalizadores ácidos Lewis. Después de 30 minutos de agitación se eliminó el disolvente y se disolvió el residuo en 3,16 mL de etanol al 95%; se añadieron 0,6 mL de KOH al 50% en agua (p/v) y la solución se mezcló enérgicamente. Se añadió agua (2,24 mL) y esta solución se colocó a continuación en un aparato Speed Vac durante la noche para eliminar el etanol. Quedó aproximadamente un 50% del volumen original. La solución acuosa se extrajo dos veces con 3 mL de CH_{2}Cl_{2} y el CH_{2}Cl_{2} reunido se extrajo dos veces con 10 mL de KOH al 5% en agua (p/v) y dos veces con 10 mL de NaCl al 5% en agua (p/v). El CH_{2}Cl_{2} se eliminó y el residuo se disolvió en aceto-nitrilo.

Esta solución de aceto-nitrilo puede utilizarse directamente para una purificación por HPLC (cromatografía líquida de alta presión) del producto de espiro-orto-éster mediante las condiciones preferidas indicadas a continuación. Para la elución se utilizaron gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, y el porcentaje de aceto-nitrilo presente en la fase móvil mixta, eran los siguientes: 0,55; 5,55; 10,90; 11,98; 17,98; 18,55; 22,55. La columna cromatográfica tenía unas dimensiones de 250 mm de longitud x 4,6 mm de diámetro interno, estaba llena de C18 ligado a partículas de sílice de 4 micras (9% de carga de carbono; YMC, Inc.), estaba protegida con una columna de 23 mm de longitud x 4 mm de diámetro interno que contenía el mismo material y con un filtro de 0,5 micras, y se mantenía a 40 \pm 0,2ºC. El caudal se mantuvo en 1,0 mL/min durante el ciclo de 22 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 10 \muL se controló a 259\pm2 y se fraccionó utilizando un colector robótico (Gilson). El tiempo de retención de la fórmula XVII en este sistema fue de 13,4 minutos. ^{1}H N.M.R. \delta (400 MHZ, CD_{3}OD) 1.15,s y 1.26,s y 1.39,s, 4'-Me (diastereómeros); 1.64,s,8'-Me; 1.6-1.9,m,H6',6'; 2.0-2.3,m,H7'; 3.70,s,7-OMe; 3.83,m y 4.20,t,H5' (diastereómeros); 4.01,d,H10'; 4.45,s,H12'; 5.39,t,H9'; 5.45,d,H3; 6.40,s,H8; 6.49,d,H6; 6.71,d,H4; 7.06,d,H5; 7.20-7.35,m,fenilo. Espectro de masa m/z (electroespray): MS, 437 (MH^{+}); MS/MS, 261, 177.153 (fragmentos de MH^{+}).

Tratamiento previo en bloque de aceite de pomelo prensado en frío para un subsiguiente fraccionamiento mediante HPLC de fase inversa

1.

Preparar 1:1 etanol:agua (v/v) con un contenido de 12,5 gr de KOH/L utilizando alcohol reactivo

\hbox{desnaturalizado.}

2.

Mezclar 1,0 L de aceite de pomelo prensado en frío y 330 mL de la solución etanólica básica en un embudo de decantación de 2 L durante 2,0 min.

3.

Esperar 5,0 min, a continuación eliminar la fase etanólica inferior del embudo.

4.

Repetir los pasos 2 y 3 cuatro veces, utilizando porciones de 330 mL frescas de la solución etanólica básica.

5.

Repetir los pasos 2 y 3 una vez utilizando una porción de 330 mL de 1:1 etanol:agua preparada sin KOH. Cuando el KOH no está presente se requiere una espera de varias horas (preferentemente durante la noche) para que las fases se separen claramente. Una valoración de la fase etanólica inferior con papel indicador de pH debería mostrar que el pH de la solución es casi neutro (\cong6, en la mayoría de los casos).

6.

Colocar la fase oleosa (la producción debería ser mayor que 0,9 L) en una cámara de vacío y poner el sistema bajo vacío (0,5 torr o mayor) durante 3-4 días. El proceso se ha completado cuando dando vueltas al líquido viscoso bajo vacío ya no inicia una ebullición.

7.

Lavar el material no volátil con porciones de aceto-nitrilo, hasta un total de 200 mL, y separar los materiales solubles en aceto-nitrilo de los insolubles mediante centrifugación (5 min a velocidad 50, IEC modelo K2).

8.

Eliminar el aceto-nitrilo de la fase soluble en aceto-nitrilo (paso 7) utilizando un aparato Speed Vac, y pesar el residuo (deberían ser 22-25 g).

9.

Añadir aceto-nitrilo al residuo de tal modo que cada porción de 5 mL contenga 1,5 gramos de residuo, y dividir la solución en porciones de 5 mL.

10.

Añadir 15 mL de isooctano a cada porción de 5 mL, cerrar, someter a una mezcla de vórtice, y centrifugar la mezcla (2 min. a velocidad 35). Desechar la fase de isooctano superior.

11.

Repetir el paso 10 nueve veces; ocasionalmente debería añadirse aceto-nitrilo para asegurarse de que el volumen de la fase inferior se aproxime a 5mL.

12.

Eliminar el aceto-nitrilo de la fase inferior (paso 11) utilizando un aparato Speed Vac, y pesar el residuo (debería ser aproximadamente un 20% del peso original (paso 8)).

13.

Disolver el residuo (paso 12) en aceto-nitrilo de tal modo que se constituya una solución de 0,25-0,30 gr/mL, filtrar la solución a través de un cartucho de teflón de 0,2 \mum y almacenar la solución a -20ºC.

Tratamiento previo en bloque de aceite de pomelo prensado en frío para un posterior uso como suplemento alimenticio dietético, medicamento, ingrediente de formulación conjunta, etc

1.

Preparar una solución 70:30 agua:etanol (v/v) que contenga un 5% de hidróxido potásico (p/v) utilizando un etanol de calidad USP, KOH de calidad NF/FCC y agua depurada.

2.

Mezclar la solución etanólica preparada en el paso 1 con un volumen equivalente (o un ligero exceso) de aceite de pomelo prensado en frío integral y sin tratar (calidad Food Chemicals Codex) y transferir la mezcla a un recipiente de calidad apropiada para alimentos resistente al calor y a la presión.

3.

El recipiente sellado se mantiene a 95-100ºC durante 1 hora. Se enfría el recipiente, se elimina la fase etanólica (fase inferior del sistema de dos fases) y se añade una porción fresca de solución etanólica (equivalente al volumen utilizado en el paso 2).

4.

Repetir el ciclo de ebullición (paso 3) hasta lograr el grado de pureza deseado en la muestra. Diez ciclos eliminarán >99% de furanocumarinas y cumarinas polares, eliminarán >90% de furanocumarinas y cumarinas apolares prominentes (es decir epoxiaurapteno, epoxibergamotina) y no disminuirán de forma apreciable el contenido de los espiro-orto-ésteres inhibidores.

5.

Lavar el aceite con agua depurada hasta que el pH del agua de lavado desechada se haga neutro.

6.

Poner la fase oleosa bajo vacío (0,1-0,3 torr) hasta que ya no se eliminen materiales volátiles de la muestra (valorado mediante, por ejemplo, inspección de un separador en línea vacío mantenido a una temperatura de -60 a -90ºC). En este paso se eliminará por lo general aproximadamente un 95% del volumen de la muestra.

7.

Mezclar el producto del paso 6 con un volumen equivalente de etanol USP y centrifugar la mezcla. Repetir hasta que la fase inferior esté sustancialmente libre de inhibidores de espiro-orto-éster. Este método elimina los materiales insolubles en etanol de la preparación no volátil de aceite.

8.

Opcionalmente, pero también preferentemente, poner los extractos de etanol reunidos del paso 7 bajo vacío hasta que el etanol se haya eliminado sustancialmente (por ejemplo un 99%) o se haya reducido (por ejemplo un 10%).

Debido a la ya conocida adulteración de las materias primas en las industrias de alimentos, aromas y fragancias, los componentes derivados de cítricos, incluidos los aceites de cítricos prensados en frío, deberían preferentemente valorarse antes de utilizarlos en la producción posterior de, por ejemplo, composiciones de suplementos dietéticos que contengan una cantidad eficaz contra el primer paso de un compuesto según las fórmulas I-XVI o de una mezcla de los mismos. Una estrategia consiste en la preparación de muestras (protocolo A; protocolo A'), seguida de una cromatografía (protocolo B; protocolo B'; protocolo B''), para concluir con comparaciones con estándares históricos. Dicha valoración puede proporcionar lotes coherentes.

Los protocolos siguientes se utilizan para preparar diversas formas de realización de la invención.

Protocolo A

Preparación de aceites de cítricos para un posterior tratamiento cromatográfico o para la administración a humanos mediante la eliminación de furanocumarinas de bajo peso molecular tóxicas

Se transfirió a un recipiente cierto volumen de aceite de cítrico prensado en frío (calidad Food Chemicals Codex) y se eliminaron todos los materiales volátiles. Aunque existen diversos métodos para eliminar los volátiles (por ejemplo, destilación, destilación bajo presión reducida, evaporación en condiciones ambientales), el método preferido utiliza concentradores Speed Vac (Savant Instruments; el proceso requiere 12-24 h y presiones de 10^{-2}-10^{-3} torr, y el sistema se hace funcionar sin calor añadido), dado que este método es moderado y ventajoso. El producto no volátil obtenido es por lo general entre 0,04 y 0,1 veces el volumen inicial y es un líquido viscoso.

Se eliminaron las furanocumarinas de bajo peso molecular fototóxicas de la preparación no volátil mediante una extracción líquido-líquido: se añadió a la preparación no volátil 16 veces el volumen de líquido viscoso de 1:1 etanol:agua (v/v; ambos de calidad U.S.P.), se cerró el recipiente, se mezcló la solución enérgicamente, se centrifugó el recipiente (International Equipment Company, modelo K-2, 5 min en la posición 35), y se desechó la fase etanólica superior. La extracción se repitió dos veces. El agua extraña y el etanol pueden eliminarse de la preparación si se desea mediante la utilización de, por ejemplo, un aparato Speed Vac. El producto de este proceso puede utilizarse para la administración a humanos en, por ejemplo, cápsulas rellenas.

Protocolo A'

Tratamiento previo de aceites de cítricos antes de la cromatografía.

La mayoría de los aceites de cítricos no son inmediatamente adecuados para una cromatografía líquida de alta presión preparativa a largo plazo, debido a la presencia sustancial de materiales que presentan una baja solubilidad en los sistemas de fase móvil preferidos. Por lo tanto, antes de la cromatografía se aplica el protocolo de preparación de muestras siguiente.

Se transfiere aceite de cítrico prensado en frío (calidad Food Chemicals Codex) a un recipiente adecuado y se eliminan todos los materiales volátiles bajo presión reducida (10^{-2}-10^{-3} torr, 3-4 días). El producto no volátil obtenido es por lo general sólo un 5-10% del volumen original. Los materiales no volátiles de cítricos se mezclan con aceto-nitrilo en una relación de 2:1 (p/p), la mezcla se centrifuga (International Equipment Company, modelo K-2, 5 min en posición 35) y la fase superior con contenido en aceto-nitrilo se elimina. La extracción con aceto-nitrilo se repite una vez, se desecha la fase inferior, se reúnen la primera y la segunda fase de aceto-nitrilo y se elimina el aceto-nitrilo utilizando concentradores Speed Vac (Savant Instruments; 12 h a 10^{-2}-10^{-3} torr, sin calor añadido). El material no volátil se mezcla con base etanólica (1:1 etanol:agua {v/v; ambos de calidad U.S.P.} que contiene 12,5 gr de hidróxido potásico/L) en una relación de 1:4 (p/v), la mezcla se centrifuga durante 5 min en la posición 35 y la fase etanólica superior se elimina y desecha. El material no volátil se lava nueve veces más con base etanólica y, a continuación, una vez con 1:1 etanol:agua (v/v). El residuo que queda se extrae dos veces con volúmenes suficientes de aceto-nitrilo, de tal modo que se elimine todo el material de color. La solución de aceto-nitrilo se lava seis veces con dos volúmenes de hexano o isooctano, eliminando y desechando todos los extractos de hexano (capa superior), y la solución de aceto-nitrilo resultante se filtra a través de una membrana de Teflon® de 0,2 micras y se evapora a sequedad utilizando un concentrador Speed Vac.

El producto final del proceso anterior debería presentarse como un aceite viscoso de color rojo intenso, pero al parecer las variaciones estacionales en la materia prima (aceites de cítricos) pueden cambiar la calidad y la apariencia del producto del proceso anterior. Por lo tanto, si un material cristalino naranja abundante contamina el aceite de color rojo intenso, el número de lavados adicionales con base etanólica debería aumentarse de nueve a diecinueve.

Protocolo B

Métodos cromatográficos para aceites de cítricos elaborados

El producto del protocolo A anterior no es adecuado para una cromatografía líquida de alta presión debido a la presencia sustancial de materiales no solubles en los sistemas de fase móvil preferidos. Por lo tanto, antes de la cromatografía se aplica el protocolo de preparación de muestras siguiente. Se mezcla un volumen del producto del protocolo A con cuatro volúmenes de aceto-nitrilo, se cierra el recipiente, se mezcla la solución enérgicamente, se centrifuga el recipiente (5 min en posición 35) y la capa de aceto-nitrilo superior se filtra a través de una membrana de Teflon® de 0,22 micras. La solución filtrada se guarda en un recipiente cerrado a -20ºC durante 2 días o más y a continuación se pasa a través de papel filtro en frío para eliminar un precipitado abundante. El paso de precipitación y filtración se repite una vez. Se anota el volumen de la solución de aceto-nitrilo y el aceto-nitrilo se elimina utilizando un aparato Speed Vac. El residuo se disuelve en la mitad del volumen original de aceto-nitrilo, teniendo cuidado de no agitar ningún precipitado cristalino, con lo que la solución queda lista para su utilización en la valoración por HPLC.

Si se desea un fraccionamiento preparatorio de la porción no volátil lavada de aceite de cítrico, son preferibles las condiciones de HPLC abajo indicadas. Para la elución se utilizan gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, y el porcentaje de aceto-nitrilo presente en la fase móvil mixta, son los siguientes: 0,75; 5,75; 10,90; 11,98; 17,98; 18,75; 22,75. La columna cromatográfica tiene unas dimensiones de 250 mm de longitud x 4,6 mm de diámetro interno, está llena de C18 ligado a partículas de sílice de 4 micras (9% de carga de carbono; ODS-L80, YMC, Inc.), está protegida con una columna de 23 mm de longitud x 4 mm de diámetro interno que contiene el mismo material y con un filtro de 0,5 micras, y se mantiene a 40 \pm 0,2ºC. El caudal se mantiene en 1,0 mL/min durante el ciclo de 22 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 25 \muL se controla a 400 +/- 200 nm y a 310 +/-2 nm y se fracciona utilizando un colector robótico (Gilson).

Si se desean valoraciones cualitativas o cuantitativas de aceite de cítricos, fracciones de los mismos, o estándares de referencia, son preferibles las condiciones de HPLC abajo indicadas. Para la elución se utilizan gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, y el porcentaje de aceto-nitrilo presente en la fase móvil mixta, son los siguientes: 0,10; 5,10; 30,80; 40,80; 41,95; 50,95; 53,10; 60,10. La columna cromatográfica tiene unas dimensiones de 150 mm de longitud x 2,0 mm de diámetro interno, está llena de C18 ligado a partículas de sílice de 4 micras (14% de carga de carbono; ODS-M80, YMC, Inc.), está protegida con una columna de 2 mm de diámetro interno llena de un material patentado (Prism, Keystone Scientific, Inc.) y con un filtro de PTFE (teflón), y se mantiene a 35 \pm 0,2ºC. El caudal se mantiene en 0,20 mL/min durante el ciclo de 60 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 10 \muL se controla en cuanto a la absorbencia a 400 +/- 200 nm y a 310 +/-2 nm y en cuanto a la fluorescencia con excitación a 229 nm, emisión a 450 nm y filtración de banda a 370 nm.

Protocolo B'

Métodos cromatográficos para aceites de cítricos elaborados

Si se desea un fraccionamiento preparatorio de la porción no volátil lavada de aceite de cítrico (producto de protocolo A), son preferibles las condiciones de HPLC abajo indicadas. Para la elución se utilizan gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, y el porcentaje de aceto-nitrilo presente en la fase móvil mixta, son los siguientes: 0,75; 5,75; 10,90; 11,98; 17,98; 18,75; 22,75. La columna cromatográfica tiene unas dimensiones de 250 mm de longitud x 4,6 mm de diámetro interno, está llena de C18 ligado a partículas de sílice de 4 micras (9% de carga de carbono; ODS-L80, YMC, Inc.), está protegida con una columna de 23 mm de longitud x 4 mm de diámetro interno que contiene el mismo material y con un filtro de 0,5 micras, y se mantiene a 40 \pm 0,2ºC. El caudal se mantiene en 1,0 mL/min durante el ciclo de 22 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 25 \muL de solución de aceto-nitrilo obtenido por el protocolo A' se controla a 400 +/- 200 nm y a 310 +/-2 nm y se fracciona utilizando un colector robótico (Gilson).

Si se desean valoraciones cualitativas o cuantitativas de aceite de cítricos, fracciones de los mismos, o estándares de referencia, son preferibles las condiciones de HPLC abajo indicadas. Para la elución se utilizan gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, y el porcentaje de aceto-nitrilo presente en la fase móvil mixta, son los siguientes: 0,10; 5,10; 30,80; 40,80; 41,95; 50,95; 53,10; 60,10. La columna cromatográfica tiene unas dimensiones de 150 mm de longitud x 2,0 mm de diámetro interno, está llena de C18 ligado a partículas de sílice de 4 micras (14% de carga de carbono; ODS-M80, YMC, Inc.), está protegida con una precolumna de 2 mm de diámetro interno llena de un material patentado (Prism, Keystone Scientific, Inc.) y con un filtro de PTFE (teflón), y se mantiene a 35 \pm 0,2ºC. El caudal se mantiene en 0,20 mL/min durante el ciclo de 60 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 10 \muL se controla en cuanto a la absorbencia a 400 +/- 200 nm y a 310 +/-2 nm y en cuanto a la fluorescencia con excitación a 229 nm, emisión a 450 nm y filtración de banda a 370 nm.

Protocolo B''

Purificación de compuestos de la invención utilizando una columna de HPLC quiral

El conjunto de los residuos resultantes del fraccionamiento de la región 11-12,5 min (protocolo B o B') y la eliminación del disolvente (Speed Vac, sin calor añadido) se someten a una cromatografía líquida quiral. Se emplea una elución isocrática (fase móvil compuesta de 3,4 L de isooctano, 0,6 L de etanol al 95% {el resto es agua}, y 0,2 L de isopropanol) para eluir los inhibidores XI-XVI de la columna (250 x 4,6 mm, Keystone Scientific, Inc., Chiral DNB {S}) en menos de 34 min (instrumento: Hewlett Packard). El caudal se mantiene en 1,0 mL/min y la columna se mantiene a 40 +/- 0,2ºC. El eluato de columna de cada inyección de 25 \muL (el residuo se disuelve en fase móvil) se controla a 400 +/- 200 nm y a 310 +/-2 nm y se fracciona utilizando un colector robótico (Gilson).

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Protocolo C

Valoración de biotransformación mediada por citocromo P450 humano

El proceso de preparación de mezclas de incubación comienza por la mezcla de 10 \muL de etanol o una solución etanólica que contiene un inhibidor con 100 \muL de albúmina de suero bovino 100 mg/mL (Sigma) disueltos en tampón de reacción a temperatura ambiente. El tampón de reacción se compone de fosfato sódico 0,10 M, ácido etilén-diamín-tetracético 1,0 mM y cloruro magnésico 5,0 mM, pH 7,4 (todos los reactivos: Fisher Scientific). Las sustancias químicas inhibidoras utilizadas fueron cetoconazol (Research Diagnostics, Inc.), miconazol, bergapteno, xantotoxina (los tres anteriores de Sigma), bergamotina, imperatorina, isopimpinelina, psoraleno, angelicina (los cinco anteriores de Indofine Chemical Company, Inc.) y fracciones o precipitados resultantes de los protocolos A, A', B, B' o B'' anteriores. Cuando fue posible, las concentraciones finales de inhibidor se expresaron en molaridad mediante un cálculo del material pesado o mediante interpolación a partir de curvas de calibración de HPLC preparadas con los materiales de referencia; en los demás casos, las concentraciones se expresan en peso por volumen. Se colocan tubos de reacción en hielo como preparativo para las manipulaciones subsiguientes. Se añade suficiente tampón de reacción para que el volumen final de cada tubo sea 500 \muL, se añaden 5 \muL de un producto de concentración céntupla para generar dinucleótido fosfato de nicotín-amida y adenina reducido (de tal modo que la mezcla de reacción completada contenga dinucleótido fosfato de nicotín-amida y adenina 1,0 mM, 1 U/ml de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, y glucosa-6-fosfato 10 mM; todos de Sigma) y a continuación se descongela y se añade S9 hepático humano (Anatomic Gift Foundation) en cantidades suficientes para ocasionar la formación de cantidades fácilmente detectables de metabolitos en reacciones de control (la cantidad necesaria varía entre los individuos, pero lo normal es 10 \muL). Las reacciones se someten a una incubación previa durante 3 min a 37ºC en un baño de agua tipo Dubnoff, la mezcla de reacción se completa mediante la adición de 10 \muL de terfenadina 100 \muM (Sigma) disuelta en 1:1 aceto-nitrilo : agua y mediante una agitación suave, las muestras se incuban durante 15 min a 37ºC y la reacción se interrumpe colocando el tubo en hielo y añadiendo 2,5 mL de compuesto A con relación a terfenadina 300 nM (estándar interno; U. S. Pharmacopeia) disuelto en aceto-nitrilo.

Las muestras antes preparadas se preparan para una valoración por HPLC utilizando el protocolo siguiente. Cada tubo se somete a una mezcla de vórtice y se centrifuga durante 10 minutos en la posición 35, el sobrenadante resultante se transfiere a un tubo limpio y el líquido se evapora utilizando un aparato Speed Vac. El residuo de cada tubo se disuelve en primer lugar en 40 \muL de 1:1 aceto-nitrilo : agua, se añaden 2,5 mL de aceto-nitrilo y se repite el paso de centrifugación-transferencia-evaporación que acaba de describirse.

El residuo seco resultante de los experimentos y el protocolo de preparación de muestras arriba descritos puede analizarse en cuanto a los metabolitos de terfenadina utilizando el método de HPLC abajo descrito y puede utilizarse también para cuantificar las sustancias químicas inhibidoras que se añadieron a la reacción (véanse protocolos B y B'). Para la elución se utilizan gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de ácido fórmico al 0,025% (v/v) en aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, el porcentaje de fase móvil B presente en la fase móvil mixta, y el caudal (mL/min) son los siguientes: 0, 10, 0,10; 2, 10, 0,10; 3,5, 10, 0,20; 4, 10, 0,25; 5, 10, 0,25; 30, 55, 0,25; 32, 98, 0,25; 33, 98, 0,40; 39,8, 98, 0,40; 40, 98, 0,25; 45, 10, 0,25; 45,25, 10, 0,20; 50, 10, 0,20; 50,25, 10, 0,10. La columna cromatográfica tiene unas dimensiones de 150 mm de longitud x 2,1 mm de diámetro interno, está llena de un material patentado (Prism, Keystone Scientific, Inc.), está protegida con una columna de 2 mm de diámetro interno que contiene el mismo material y con un filtro de PTFE (teflón), y se mantiene a 35 \pm 0,2ºC. El residuo de muestra seco se mezcla con 60 \muL de 1:1 aceto-nitrilo : agua, seguidos de 40 \muL de agua justo antes de cada ciclo de 50,25 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 10 \muL se controla en cuanto a la fluorescencia con excitación a 228 nm, emisión a 291 nm y filtración de banda a 280 nm. En estas condiciones, los tiempos de retención de metabolito de alcohol de terfenadina, metabolito de ácido carboxílico de terfenadina y el estándar interno son 16,2 min, 17,4 min y 22,2 min respectivamente.

Protocolo C'

Valoración de biotransformación mediada por citocromo P450 humano

El proceso de preparación de mezclas de incubación comienza por la mezcla de 10 \muL de etanol (reacciones de control) o una solución etanólica que contiene un inhibidor con 100 \muL de albúmina de suero bovino 100 mg/mL (Sigma) disueltos en tampón de reacción a temperatura ambiente. El tampón de reacción se compone de fosfato sódico 0,10 M, ácido etilén-diamín-tetracético 1,0 mM y cloruro magnésico 5,0 mM, pH 7,4 (todos los reactivos: Fisher Scientific). Las sustancias químicas inhibidoras utilizadas son cetoconazol (Research Diagnostics, Inc.), ritonavir (Norvir™, Abbott Laboratories), las sustancias químicas inhibidoras descritas en el protocolo C y fracciones resultantes del protocolo B'' anterior. Las concentraciones finales de inhibidor se expresaron en molaridad mediante un cálculo del material pesado o mediante la utilización de la ley de Beer. Se colocan tubos de reacción en hielo como preparativo para las manipulaciones subsiguientes. Se añade suficiente tampón de reacción para que el volumen final de cada tubo sea 500 \muL, se añaden 5 \muL de un producto de concentración céntupla para generar dinucleótido fosfato de nicotín-amida y adenina reducido (de tal modo que la mezcla de reacción completada contenga dinucleótido fosfato de nicotín-amida y adenina 1,0 mM, 1 U/ml de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, y glucosa-6-fosfato 10 mM; todos de Sigma) y a continuación se descongela y se añade S9 hepático humano (Anatomic Gift Foundation) en cantidades suficientes para ocasionar la formación de cantidades fácilmente detectables de metabolitos en reacciones de control (la cantidad necesaria varía entre los individuos, pero lo normal es 10 \muL). Las reacciones se someten a una incubación previa durante 3 min a 37ºC en un baño de agua tipo Dubnoff, la mezcla de reacción se completa mediante la adición de 10 \muL de saquinavir 500 \muM (Invirase™, Roche Laboratories) disuelto en 1:1 etanol:agua y mediante una agitación suave, las muestras se incuban durante 15 min a 37ºC y la reacción se interrumpe colocando el tubo en hielo y añadiendo 2,5 mL de aceto-nitrilo.

Las muestras antes preparadas se preparan para una valoración por HPLC utilizando el protocolo siguiente. Cada tubo se somete a una mezcla de vórtice y se centrifuga durante 10 minutos en la posición 35, el sobrenadante resultante se transfiere a un tubo limpio y el líquido se evapora utilizando un aparato Speed Vac. El residuo de cada tubo se disuelve en primer lugar en 40 \muL de 1:1 aceto-nitrilo : agua, se añaden 2,5 mL de aceto-nitrilo y se repite el paso de centrifugación-transferencia-evaporación que acaba de describirse. El residuo seco resultante de los experimentos y el protocolo de preparación de muestras arriba descritos puede analizarse en cuanto al saquinavir y los metabolitos de saquinavir utilizando el método de HPLC abajo descrito y puede utilizarse también para cuantificar las sustancias químicas inhibidoras que se añadieron a la reacción (véanse protocolos B y B'). Para la elución se utilizan gradientes lineales, producidos mediante una mezcla de una fase móvil A compuesta de agua con una fase móvil B compuesta de aceto-nitrilo (instrumento: Hewlett Packard). El tiempo de elución, en minutos, y el porcentaje de fase móvil B presente en la fase móvil mixta, son los siguientes: 0, 10; 5, 10; 30, 80; 31, 95; 40, 95; 43, 10; 48, 10. El caudal es de 0,2 mL/min durante todo el proceso. La columna cromatográfica tiene unas dimensiones de 150 mm de longitud x 2,1 mm de diámetro interno, está llena de un material patentado (Prism, Keystone Scientific, Inc.), está protegida con una columna de 2 mm de diámetro interno que contiene el mismo material y con un filtro de PTFE (teflón), y se mantiene a 35 \pm 0,2ºC. Con el fin de reducir al mínimo la degradación de los analizados, el residuo de muestra seco se mezcla con 50 \muL de 1:1 aceto-nitrilo : agua justo antes de cada ciclo de 48 min de duración. El eluato de columna de cada inyección de 10 \muL se controla en cuanto a la absorbencia a 239 +/- 2 nm. En estas condiciones, los tiempos de retención de metabolito principal de saquinavir A, metabolito principal de saquinavir B y saquinavir son 24,2 min, 26,0 min y 30,0 min, respectivamente.

Demostración de la eficacia

Para demostrar la eficacia contra el primer paso de la presente invención, se realizaron experimentos con compuestos de la invención y sustancias derivadas de cítricos según el protocolo C' anterior, en el que se medía la generación de metabolitos de saquinavir en presencia de diversas concentraciones de inhibidor. Las sustancias derivadas de cítricos se prepararon según los protocolos A', B' y B'' anteriores y se compararon con el inhibidor ya conocido cetoconazol. La figura 1 muestra los resultados para compuestos de la invención según las fórmulas XI y XIII y también muestra que la bergamotina y la imperatorina son esencialmente ineficaces como inhibidores del primer paso. La figura 2 muestra una comparación de los compuestos de la invención con los inhibidores ya conocidos ritonavir y cetoconazol. En los compuestos de la invención es preferible que la posición de anillo de furano de los anillos de furanocumarina esté completamente libre de sustitución.

Las composiciones de la invención contienen preferentemente material inhibidor de la invención (compuesto, etc.) (por ejemplo, solo, mezclado con medicamento(s) y/o diluyente(s) y/o portador(es), etc.) de modo que inhiban la biotransformación de saquinavir según el protocolo C' anterior mejor que el cetoconazol puro, sobre la misma base molar (preferible) o de concentración en peso. Como alternativa, los compuestos, las composiciones, mezclas, formulaciones, etc. (materiales) de la invención proporcionan preferentemente un valor de eje Y en el protocolo C' (véase figura 1) inferior a 0,5, preferentemente 0,45, 0,4, 0,35, 0,3, 0,25, 0,22, 0,2, 0,18, 0,15, 0,12, 0,1, 0,08, 0,05 ó 0,03 o menor cuando se diluyen o disuelven hasta alcanzar un litro 0,01-25 mg, incluyendo 0,02, 0,04, 0,06, 0,08, 0,1, 0,12, 0,14, 0,16, 0,18, 0,2, 0,22 y 0,24 y todos los rangos entre todos los valores, de material de la invención.

Una forma comercial de compuestos de la invención que contienen cítrico es aceite de pomelo prensado en frío, que tiene una concentración total de compuestos según la fórmulas XI-XVI dentro de un rango de, quizá, hasta 0,15-0,25 mg/ml. Los seis compuestos se distribuyen de la siguiente manera: XI + XII + XIII + XIV igual a aproximadamente un 50%, siendo el resto XV y XVI. Para XI-XIV, la distribución es aproximadamente 3:2:2:1, respectivamente, y de aproximadamente 2:1 para XV:XVI. Así pues, en una forma de realización, las composiciones según la invención contienen preferentemente concentraciones de compuestos de la invención (es decir, concentración total de todos los compuestos de la invención que contienen) mayores que las que pueden hallarse en la naturaleza y en forma comerciales de cítricos. Estas concentraciones se denominan ``cantidades concentradas''. Entre los ejemplos de concentraciones preferidas se incluyen las concentraciones mayores que 0,25 mg/ml, 0,3, 0,8, 1, 2, 5, 8, 32, 128, 200 mg/ml, etc. Con respecto a los compuestos de la invención, en una forma de realización de la invención los compuestos se presentan en una forma distinta a la que puede hallarse en la naturaleza o comercialmente debido a la pureza. Los términos ``sustancialmente puro'' y ``forma sustancialmente pura'' se refieren a una pureza mayor que la que puede hallarse comercialmente y en la naturaleza para los compuestos de la invención. Estas concentraciones y formas son fácilmente determinables por el técnico medio en la materia, ahora que el presente inventor ha identificado los compuestos activos responsables del ``efecto del pomelo''. En las patentes siguientes, asignadas al gobierno de los EE.UU y a otros, pueden hallarse otro lenguaje, otras expresiones, etc. útiles para describir las formas de realización de la presente invención y distinguirlas mediante patente o de otro modo de las formas que pueden hallarse en la naturaleza o comercialmente: patentes U.S. nº 4,708,948, 5,409,938, 5,455,251, 4,977,244, 5,462,956, 5,314,899, 5,104,977, 5,484,889, 5,591,770, 5,599,839, 5,672,607, 5,674,900, 5,648,354, 5,691,386, 5,681,829 y 5,654,432. Otra descripción de cómo puede utilizarse la presente invención, en qué cantidades y cómo administrarla aparece en los documentos U.S. 5,665,386, WO 97/15269 y WO 96/40192.

Mediante las fórmulas siguientes, en las que R, L, E y HAr tienen el significado arriba indicado, se describen otros compuestos aquí empleables. Al igual que en el caso de los compuestos anteriores, estos compuestos incluyen todos los estereoisómeros, isómeros E-Z, etc. En los casos en que se presentan de forma natural o comercial, estos compuestos se hallan preferentemente en las formas arriba descritas en cuanto a pureza, concentración, etc. Estos compuestos pueden estar opcionalmente sustituidos igual que lo están los compuestos según las fórmulas I-XVI.

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En los compuestos de la invención, un grupo preferido de sustituyentes, opcional y de otro modo, comprende los siguientes: hidrógeno, (C_{1}-C_{4})-alquilo, -S((C_{1}-C_{4})-alquilo), -O((C_{1}-C_{4})-alquilo), -NH_{2}, -NH((C_{1}-C_{4})-alquilo) -N((C_{1}-C_{2})-alquilo) ((C_{1}-C_{4})-alquilo), hidroxilo, -O((C_{1}-C_{2})-alquilo), fluoro, (C_{1}-C_{6})-alquilo, cloro, bromo, iodo, (C_{1}-C_{4})-alcoxilo, -CF_{3}, -C(=O)O-(C_{1}-C_{4})-alquilo, -OC(=O)((C_{1}-C_{4})-alquilo), -OC(=O)N((C_{1}-C_{4})-alquilo) ((C_{1}-C_{2})-alquilo),
-NHCO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -COOH, -COO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -CONH((C_{1}-C_{4})-alquilo), -CON((C_{1}-C_{4})-alquilo) ((C_{1}-C_{2})-alquilo), -S((C_{1}-C_{4})-alquilo), -CN, -NO_{2}, -SO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO_{2}((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO_{2}NH((C_{1}-C_{4})-alquilo) y -SO_{2}N((C_{1}-C_{4})-alquil)-((C_{1}-C_{2})-alquilo).

Otro grupo de sustituyentes preferidos, opcional y de otro modo, comprende: (C_{1}-C_{12})-alquilo, arilo, ((C_{1}-C_{4})-alquileno) arilo, fenilo, naftilo, tienilo, benzotienilo, piridilo, quinolilo, piracinilo, pirimidinilo, imidazolilo, furanilo, benzofuranilo, benzotiazolilo, isotiazolilo, pirazolilo, pirrolilo, indolilo, pirrolopiridilo, oxazolilo y benzoxazolilo, (C_{3}-C_{8})-cicloalquilo o ((C_{1}-C_{6})-alquilén)-((C_{3}-C_{8})-cicloalquilo), (C_{1}-C_{4})-alquilo, bencilo, (C_{1}-C_{4})-alcanoilo, (C_{1}-C_{6})-alcoxilo, -OC(=O) ((C_{1}-C_{6})-alquilo), -OC(=O) N(C_{1}-C_{4})-alquil)-((C_{1}-C_{2})-alquilo), -S((C_{1}-C_{6})-alquilo), amino,
-NH((C_{1}-C_{2})-alquilo), -N((C_{1}-C_{2})-alquil)-((C_{1}-C_{4})-alquilo), -N((C_{1}-C_{4})-alquilo) -CO-((C_{1}-C_{4})-alquilo), -NHCO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -COOH, -COO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -CONH((C_{1}-C_{4})-alquilo), -CON((C_{1}-C_{4})-alquil)-((C_{1}-C_{2})-alquilo),
-SH, -SO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO_{2}((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO_{2}NH((C_{1}-C_{4})-alquilo) y -SO_{2}N((C_{1}-C_{4})-alquil)-((C_{1}-C_{2})-alquilo).

Un tercer grupo de sustituyentes preferidos, opcional y de otro modo, comprende: -S((C_{1}-C_{4})-alquilo) o -SO_{2}((C_{1}-C_{4})-alquil)-((C_{1}-C_{6})-alquilo), -N((C_{1}-C_{4})-alquil)-((C_{1}-C_{2})-alquilo), -S((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO((C_{1}-C_{4})-alquilo), -CO
((C_{1}-C_{4})-alquilo), -C(=O)H, -C(=O)O-((C_{1}-C_{4})-alquilo), (C_{1}-C_{3})-alcoxilo, dimetil-amino, metil-amino, etil-amino,
-NHC(=O)CH_{3}, (C_{1}-C_{3})-tioalquilo, -COOH, -C(=O) O((C_{1}-C_{4})-alquilo), -C(=O)O((C_{1}-C_{4})-alquilo), -NO_{2}, fenilo, naftilo, tienilo, benzotienilo, piridilo, quinolilo, piracinilo, furanilo, benzofuranilo, benzotiazolilo, benzo-isotiazolilo, benzo-isoxazolilo, bencimidazolilo, indolilo, benzoxazolilo o (C_{3}-C_{8})-cicloalquilo, cloro, (C_{1}-C_{6})-alquilo, -O((C_{1}-C_{6})-alquilo), bromo, iodo, formilo, -CN, -CF_{3}, -NO_{2}, -NH_{2}, -NH((C_{1}-C_{4})-alquilo), -N((C_{1}-C_{2})-alquil)-((C_{1}-C_{6})-alquilo), -C(=O)O((C_{1}-C_{4})-alquilo), -C(=O)((C_{1}-C_{4})-alquilo), -COOH, -SO_{2}NH((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO_{2}N((C_{1}-C_{2})-alquil)-((C_{1}-C_{4})-alquilo), -SO_{2}NH_{2}, -NHSO_{2}((C_{1}-C_{4})-alquilo), -S((C_{1}-C_{6})-alquilo) y -SO_{2}((C_{1}-C_{6})-alquilo), fluoro, hidroxilo, amino, metil-amino, dimetil-amino, acetilo, hidrógeno, (C_{1}-C_{4})-alquilo, halo (por ejemplo} cloro, fluoro, iodo o bromo), hidroxilo, -O((C_{1}-C_{4})-alquilo), -C(=O)((C_{1}-C_{4})-alquilo), -C(=O)O((C_{1}-C_{4})-alquilo), -OCF_{3}, -CF_{3}, -CH_{2}OH o -CH_{2}O((C_{1}-C_{2})-alquilo) hidroxilo, metoxilo y fluoro.

Dentro de estos tres grupos, los sustituyentes preferidos son también ejemplos específicos de HAr (es decir, grupos (C_{6}-C_{24})-aromáticos o grupos heteroaromáticos).

En la presente invención se incluyen los profármacos y metabolitos activos de los compuestos, composiciones, etc. de la invención. Dichos profármacos son compuestos que dan origen a un compuesto de la invención al administrarse a un mamífero, como por ejemplo un humano. Los metabolitos activos son compuestos formados con la administración de un compuesto, composición, etc. de la invención a un mamífero, preferentemente un humano, que son eficaces contra el primer paso. Entre los ejemplos de medicamentos y metabolitos de la invención se incluyen:

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Los compuestos, metabolitos, profármacos, etc. de la invención pueden preferentemente estar sustituidos con deuterio y/o flúor para aumentar el tiempo de permanencia en el paciente/animal/etc. El técnico en la materia conoce ya portadores, diluyentes, excipientes, etc. farmacéuticos. En varias de las patentes y publicaciones arriba indicadas se proporcionan ejemplos.

Un método preferido de extracción se ilustra en la sección de ejemplos anterior, en la que se describe el tratamiento previo en bloque de aceite de pomelo prensado en frío para la posterior utilización como suplemento alimenticio dietético, medicamento, etc. En tales situaciones es preferible eliminar las furanocumarinas y cumarinas polares (véase supra) tanto con calor como con una base, aunque ambos son opcionales. También es preferible utilizar más agua que (C_{2}-C_{4})-alcohol, prefiriéndose especialmente una relación 70:30 (V/V) de agua:etanol. Además, es preferible no eliminar los volátiles presentes en la sustancia derivada de cítricos eficaz contra el primer paso (una sustancia derivada de cítricos que contiene, como mínimo, un compuesto, metabolito, profármaco, etc. de la invención) durante la extracción inicial. Una sustancia derivada de cítricos preferida es aceite de pomelo prensado en frío.

Si se utiliza calentamiento, es preferible una temperatura de 40-120ºC, con mayor preferencia de 60-110ºC y con la máxima preferencia de 80-105ºC, incluyendo 80, 85, 90, 95, 100 y 105ºC. En la extracción, la mezcla de alcohol/agua entra en contacto con la sustancia derivada de cítricos eficaz contra el primer paso una o más veces de un modo ya conocido en la técnica actual, opcionalmente bajo calentamiento (es decir temperatura elevada). Como base puede utilizarse por ejemplo NaOH, KOH, o cualquier otra base que se disuelva en mezclas de alcohol/agua, en cantidades de un 1-15%, preferentemente un 3-10% y con mayor preferencia un 4, 5, 6, 7, 8 ó 9% (P/V), en relación con el volumen total de agua y alcohol.

Un modo de determinar si el producto extraído está listo para su utilización es controlar el pH de un lavado, preferentemente utilizando sólo agua. Son preferibles los valores próximos al neutro (6-7,5). Pueden utilizarse reguladores de pH tales como ácidos aceptables desde un punto de vista farmacéutico y de calidad apropiada para alimentos. La medida de la eliminación de furanocumarinas, cumarinas, etc. puede controlarse como se ha indicado arriba con HPLC, GC, etc.

Un modo de asegurarse de que no haya presentes materiales insolubles en alcohol en el extracto purificado es mezclar el extracto con alcohol y después centrifugar para eliminar los materiales insolubles.

Claims (42)

1. Compuesto según las fórmulas I-IV:

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en el que, en cada una de las estructuras anteriores:

R

es, de forma independiente, H o un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido;

L

es un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno,

HAr

es un grupo (C_{6}-C_{24})-aromático o grupo (C_{6}-C_{24})-heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y P, y

E

es -OH, -COOH, -COOR, donde R es como se define más arriba, o un grupo (C_{1}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C_{3}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido,

en el que los sustituyentes opcionales para los grupos R, L, HAr y E se seleccionan del grupo compuesto por un grupo (C_{1}-C_{6})-alquilo lineal, ramificado o cíclico, -OH, halógeno, un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxilo, un grupo (C_{1}-C_{5})-alquil-carboniloxilo y un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxi-carbonilo.

2. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta una estructura según la fórmula I.

3. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta una estructura según la fórmula II.

4. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta una estructura según la fórmula III.

5. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta una estructura según la fórmula IV.

6. Utilización de un compuesto según la reivindicación 1 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el efecto del primer paso en un medicamento tomado por vía oral por un humano mediante la administración oral conjunta de un medicamento sujeto al efecto del primer paso y un compuesto de la reivindicación 1 a un humano.

7. Compuesto de fórmula:

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en el que:

R

es, de forma independiente, H o un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido,

L

es un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno;

HAr

es un grupo (C_{6}-C_{24})-aromático o grupo (C_{6}-C_{24})-heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y P;

y

E

es -OH, -COOH, -COOR, donde R es como se define más arriba, o un grupo (C_{1}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C_{1}-C_{3})-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido;

en el que los sustituyentes opcionales para los grupos R, L, HAr y E se seleccionan del grupo compuesto por un grupo (C_{1}-C_{6})-alquilo lineal, ramificado o cíclico, -OH, halógeno, un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxilo, un grupo (C_{1}-C_{5})-alquil-carboniloxilo y un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxi-carbonilo.

8. Utilización de un compuesto según la reivindicación 7 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el efecto del primer paso en un medicamento tomado por vía oral por un humano, mediante la administración oral conjunta de un medicamento sujeto al efecto del primer paso y un compuesto de la reivindicación 7 a un humano.

9. Compuesto de fórmula:

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en el que:

R

es, de forma independiente, H o un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido,

L

es un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno;

HAr

es un grupo (C_{6}-C_{24})-aromático o grupo (C_{6}-C_{24})-heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y P;

y

E

es -OH, -COOH, -COOR, donde R es como se define más arriba, o un grupo (C_{1}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C_{3}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido;

en el que los sustituyentes opcionales para los grupos R, L, HAr y E se seleccionan del grupo compuesto por un grupo (C_{1}-C_{6})-alquilo lineal, ramificado o cíclico, -OH, halógeno, un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxilo, un grupo (C_{1}-C_{5})-alquil-carboniloxilo y un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxi-carbonilo.

10. Utilización de un compuesto según la reivindicación 9 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el efecto del primer paso de un medicamento tomado por vía oral por un humano, mediante la administración oral conjunta de un medicamento sujeto al efecto del primer paso y un compuesto de la reivindicación 9 a un humano.

11. Compuesto de fórmula:

36

en el que:

R

es, de forma independiente, H o un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido,

L

es un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno;

HAr

es un grupo (C_{6}-C_{24})-aromático o grupo (C_{6}-C_{24})-heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y P;

y

E

es -OH, -COOH, -COOR, donde R es como se define más arriba, o un grupo (C_{1}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C_{3}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido;

en el que los sustituyentes opcionales para los grupos R, L, HAr y E se seleccionan del grupo compuesto por un grupo (C_{1}-C_{6})-alquilo lineal, ramificado o cíclico, -OH, halógeno, un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxilo, un grupo (C_{1}-C_{5})-alquil-carboniloxilo y un grupo (C_{1}-C_{5})-alcoxi-carbonilo.

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12. Utilización de un compuesto según la reivindicación 11 para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el efecto del primer paso de un medicamento tomado por vía oral por un humano, mediante la administración oral conjunta de un medicamento sujeto al efecto del primer paso y un compuesto de la reivindicación 11 a un humano.

13. Compuesto según las fórmulas I-IV:

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38

en las que, en cada una de las estructuras anteriores,

R

es, de forma independiente, H o un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido;

L

es un grupo (C_{1}-C_{15})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de azufre u oxígeno no adyacentes y opcionalmente terminado en uno o ambos extremos con oxígeno;

HAr

es un grupo (C_{6}-C_{24})-aromático o grupo (C_{6}-C_{24})-heteroaromático opcionalmente sustituido, que opcionalmente contiene uno o varios átomos de anillo seleccionados del grupo compuesto por N, O, S y

\hbox{P, y}

E

es -OH, -COOH, -COOR (donde R es como se define más arriba) o un grupo (C_{1}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido, lineal o ramificado, saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es un grupo (C_{3}-C_{8})-alquilo opcionalmente sustituido cíclico saturado, monoinsaturado o poliinsaturado opcionalmente interrumpido por uno o varios átomos de oxígeno o azufre no adyacentes, o E es HAr opcionalmente sustituido.

14. Compuesto según la reivindicación 13, que presenta la fórmula:

39

15. Compuesto según la reivindicación 13, que presenta la fórmula:

40

16. Compuesto según la reivindicación 13, que presenta la fórmula:

41

17. Compuesto según la reivindicación 13, que presenta la fórmula:

42

18. Compuesto según la reivindicación 13, que presenta la fórmula:

43

19. Compuesto según la reivindicación 13, que presenta la fórmula:

44

20. Utilización de un compuesto seleccionado del grupo consistente en los compuestos según las fórmulas V-X

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para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el efecto del primer paso de un medicamento tomado por vía oral por un humano, mediante la administración oral conjunta de un medicamento sujeto al efecto del primer paso y un compuesto seleccionado del grupo consistente en los compuestos según las fórmulas V-X a un humano.

21. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula V.

22. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula VI.

23. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula VII.

24. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula VIII.

25. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula IX.

26. Utilización según la reivindicación 20, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula X.

27. Composición eficaz contra el primer paso que comprende, como mínimo, un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 14-19 y un portador aceptable desde un punto de vista farmacéutico.

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28. Compuesto seleccionado del grupo consistente en los compuestos según las fórmulas XI-XVI:

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29. Compuesto según la reivindicación 28, que presenta la fórmula XI.

30. Compuesto según la reivindicación 28, que presenta la fórmula XII.

31. Compuesto según la reivindicación 28, que presenta la fórmula XIII.

32. Compuesto según la reivindicación 28, que presenta la fórmula XIV.

33. Compuesto según la reivindicación 28, que presenta la fórmula XV.

34. Compuesto según la reivindicación 28, que presenta la fórmula XVI.

35. Composición eficaz contra el primer paso que comprende, como mínimo, un compuesto de la reivindicación 28 y un portador aceptable desde un punto de vista farmacéutico.

36. Utilización de un compuesto seleccionado del grupo consistente en los compuestos según las fórmulas XI-XVI

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para la preparación de una composición farmacéutica para inhibir el efecto del primer paso de un medicamento tomado por vía oral por un humano, mediante la administración oral conjunta de un medicamento sujeto al efecto del primer paso y un compuesto seleccionado del grupo consistente en los compuestos según las fórmulas XI-XVI a un humano.

37. Utilización según la reivindicación 36, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula XI.

38. Utilización según la reivindicación 36, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula XII.

39. Utilización según la reivindicación 36, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula XIII.

40. Utilización según la reivindicación 36, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula XIV.

41. Utilización según la reivindicación 36, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula XV.

42. Utilización según la reivindicación 36, en la que dicho compuesto es un compuesto de fórmula XVI.