CN115536746A - 抗crtam抗体及其应用 - Google Patents

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CN115536746A CN202210765395.9A CN202210765395A CN115536746A CN 115536746 A CN115536746 A CN 115536746A CN 202210765395 A CN202210765395 A CN 202210765395A CN 115536746 A CN115536746 A CN 115536746A
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蒋美玲
李婷婷
赵立文
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Abstract

本发明涉及抗体药物技术领域，尤其涉及抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，包含抗CRTAM抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及它们的应用。本发明的抗CRTAM抗体具有显著的抗肿瘤活性，可在制备抗肿瘤的药物中应用。

Description

抗CRTAM抗体及其应用
技术领域
本发明涉及抗体药物技术领域，尤其涉及一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，包含抗CRTAM抗体或其抗原结合片段的药物组合物以及它们的应用。
背景技术
CRTAM(Class-I MHC-restricted T cell associated molecule)为免疫球蛋白超家族(IgSF)的一员，是主要表达于激活后的CD8+T细胞和NK细胞上的共刺激性靶点，它的配体是Nectin-like 2(Necl-2)。CRTAM的表达严格受到TCR(T cell receptor)激活的调控，仅表达于激活的免疫细胞上。在健康人的PBMC(Peripheral blood mononuclear cell)中表达量很低，在哮喘病人的PBMC中高表达。CRTAM的启动子和IL-2一样受到AP-1转录因子的调控。CRTAM激活后会刺激CD8+T细胞分泌IFN-γ以及增强CD8+T细胞和NK细胞的杀伤能力。同时，有文献报道CRTAM能够影响CD4+T细胞的极化，在MHC和TCR结合激活后，促进CD4+T细胞的进一步分化，提高IFN-γ、IL-17、IL-22等细胞因子的分泌能力。CRTAM的配体Necl-2又被称为TSLC1(The tumor suppressor in lung cancer-1)和CADM1，是Necl家族的一员，nectin和necl是非钙离子依赖的细胞粘附分子，Necl-2与CRTAM结合能够激活T细胞、NK细胞产生杀伤作用。在肿瘤细胞上Necl-2的表达会逐渐减少至沉默，这被认为是另一条肿瘤逃逸的机制。
文献表明，Necl-2在肿瘤细胞的表达会抑制肿瘤细胞的生长和侵袭；同时Necl-2与CRTAM结合能够进一步激活CD8+T细胞和NK细胞，提高免疫细胞的杀伤能力。Necl-2和CRTAM通路与PD1-PDL1通路不重合且具备互补的作用。肿瘤细胞会通过下调Necl-2蛋白的表达达到免疫逃逸的目的。
CRTAM是一个全新、安全的免疫共刺激分子，具有潜在的实体瘤治疗能力，因此研究开发CRTAM激动性抗体具有重要的意义。
发明内容
本发明一方面提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中所述重链可变区包含重链可变区的互补决定区1(HCDR1)、重链可变区的互补决定区2(HCDR2)和/或重链可变区的互补决定区3(HCDR3)，所述轻链可变区包含轻链可变区的互补决定区1(LCDR1)、轻链可变区的互补决定区2(LCDR2)和/或轻链可变区的互补决定区3(LCDR3)。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中：
(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
(a1)如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；
(a2)如SEQ ID NO:8、9和10所示的氨基酸序列；
(a3)如SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列；
(a4)如SEQ ID NO:16、17和18所示的氨基酸序列；
(a5)如SEQ ID NO:22、23和24所示的氨基酸序列；
(a6)如SEQ ID NO:22、25和24所示的氨基酸序列；和
(a7)与(a1)、(a2)、(a3)、(a4)、(a5)或(a6)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；和/或
(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(b1)如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列；
(b2)如SEQ ID NO:7、5和6所示的氨基酸序列；
(b3)如SEQ ID NO:12、13和14所示的氨基酸序列；
(b4)如SEQ ID NO:15、13和14所示的氨基酸序列；
(b5)如SEQ ID NO:19、20和21所示的氨基酸序列；
(b6)如SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列；
(b7)与(b1)、(b2)、(b3)、(b4)、(b5)或(b6)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一个具体的实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ IDNO:1、2和3或与SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:4、5和6、SEQ ID NO:7、5和6或与SEQ ID NO:4、5和6或SEQ ID NO:7、5和6所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、9和10、SEQ ID NO:8、11和10或与SEQ ID NO:8、9和10或SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:15、13和14或与SEQ ID NO:12、13和14或SEQ ID NO:15、13和14所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:16、17和18或与SEQ ID NO:16、17和18所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:19、20和21或与SEQ ID NO:19、20和21所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:22、23和24、SEQ ID NO:22、25和24或与SEQ ID NO:22、23和24或SEQ ID NO:22、25和24所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:26、27和28或与SEQ IDNO:26、27和28所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQID NO:91和SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQID NO:91或SEQ ID NO:92具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:80经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:80功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:80具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:81，SEQ ID NO:81经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:81功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91，SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:91经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:88、SEQID NO:89、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:91功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:91具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:90，SEQ ID NO:90经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:90功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:92经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:92功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:92具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ IDNO:54具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQID NO:66和SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:45经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:46经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:106，SEQ ID NO:106经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:106功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:46经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:50、SEQID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:51经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:51功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:66经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:66功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:66具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:51经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:51功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ IDNO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:68、SEQID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79，SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ IDNO:78或SEQ ID NO:79经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:68经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:68功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:69经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:69功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:69具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79，SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:76、SEQID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:75经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:75功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:75具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:77，SEQ ID NO:77经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:77功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ IDNO:54具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQID NO:66和SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:45经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:46经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:106，SEQ ID NO:106经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:106功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:46经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:50、SEQID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:51经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:51功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:66经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:66功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:66具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:51经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:51功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQID NO:100和SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ IDNO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQID NO:105，SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:93，SEQ ID NO:93经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:93功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:93具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:94，SEQ ID NO:94经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:94功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:94具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:100，SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105，SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ IDNO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:99，SEQ ID NO:99经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:99功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:104经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:104功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:101经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:101功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:101具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ IDNO:104，SEQ ID NO:104经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:104功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ IDNO:1、2和3，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:4、5和6，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:80经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:80功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:80具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:81，SEQ ID NO:81经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:81功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ IDNO:1、2和3，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:4、5和6，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87，SEQID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90和SEQ IDNO:91，SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:91经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:91功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:91具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:1、2和3，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:4、5和6，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:87，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:90。
在一些具体的实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ IDNO:1、2和3，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:7、5和6，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:92经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:92功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:92具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:7、5和6所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、9和10，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:45经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:8、9和10所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:46经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:12、13和14所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、11和10，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:106，SEQ ID NO:106经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:106功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQID NO:46，SEQ ID NO:46经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:12、13和14所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、11和10，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:50、SEQID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ IDNO:53或SEQ ID NO:54具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:55、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ IDNO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:55、SEQID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:55、SEQID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:12、13和14所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、11和10，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:51，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:66。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、11和10，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:15、13和14，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:51经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:51功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:15、13和14所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:16、17、18，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:19、20、21，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:68，SEQ ID NO:68经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:68功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:16、17、18所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:69，SEQ ID NO:69经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:69功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:69具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:19、20、21所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:16、17、18，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:19、20、21，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75，SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:16、17、18所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ IDNO:79，SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:19、20、21所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:16、17、18，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:19、20、21，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:75经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:75功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:75具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:16、17、18所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:77，SEQ ID NO:77经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:77功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:19、20、21所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:22、23和24，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:26、27和28，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:93，SEQ ID NO:93经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:93功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:93具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:22、23和24所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:94，SEQ ID NO:94经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:94功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:94具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:22、23和24，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:26、27和28，所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:100，SEQID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:100具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:22、23和24所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105，SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQID NO:104或SEQ ID NO:105具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQID NO:26、27和28所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:22、23和24，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:26、27和28，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:99，SEQ ID NO:99经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:99功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:22、23和24所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:104经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:104功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:22、25和24，所述轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:26、27和28，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:101经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:101功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:101具有至少85％序列同一性且所述HCDR1、HCDR2和HCDR3如SEQ ID NO:22、25和24所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:104经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:104功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少85％序列同一性且所述LCDR1、LCDR2和LCDR3如SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，本发明提供抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是鼠源单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或完全人抗体。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的抗CRTAM抗体为鼠源抗体，其还含有鼠源的IgG1、IgG2a、、IgG2b、IgG2c、IgG3或其变体的重链恒定区，和鼠源的κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
在一些优选的实施方案中，所述的抗CRTAM嵌合抗体或其抗原结合片段的抗体重链进一步包含鼠源IgG1、IgG2a、、IgG2b、IgG2c、IgG3或其突变序列的重链恒定区，优选包含人源IgG1或IgG2重链恒定区，或者使用氨基酸突变后显著降低ADCC(抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)毒性的IgG4恒定区。
在一些实施方案中，本发明提供一种抗CRTAM人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述重链包含人源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区，所述轻链包含人源的κ、λ链或其变体的轻链恒定区。
在一些优选的实施方案中，本发明的抗CRTAM人源化抗体或其抗原结合片段还包含人源IgG1或IgG2或其变体的重链恒定区，和人源κ链或其变体的轻链恒定区。
在一些实施方案中，所述抗CRTAM抗体或抗原结合片段是Fc沉默的工程化IgG1抗体或抗原结合片段，所述Fc沉默的工程化IgG1抗体或抗原结合片段具有降低的与Fc受体结合或者不与Fc受体结合。在另一个实施方案中，所述抗体是IgG4抗体。
在一些实施方案中，所述抗CRTAM抗体或抗原结合片段是介导T细胞细胞毒性和/或NK细胞细胞毒性的双特异性抗体或抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述抗CRTAM抗体或抗原结合片段能够诱导和/或增强免疫细胞的活化。在一个优选的实施方案中，所述免疫细胞是T细胞。在另一优选的实施方案中，所述免疫细胞是NK细胞。
在一些实施方案中，所述抗CRTAM抗体或抗原结合片段是双特异性或多特异性抗体或抗原结合片段，其与CRTAM蛋白结合并且与一个或多个另外的结合靶结合，优选地所述另外的结合靶是一种或多种肿瘤抗原。在一些具体的实施方案中，所述一个或多个另外的结合靶是免疫调节分子。
在一些实施方案中，本发明提供抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗原结合片段为Fab、、Fab'、Fv、scFv、F(ab')2、F(ab)2、dAb或单结构域抗体。
本发明的另一方面提供一种分离的核酸，其编码根据本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ IDNO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的核苷酸序列。
在一些优选的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:80的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:81的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:87的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:92的核苷酸序列。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ IDNO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ IDNO:66或SEQ ID NO:67的核苷酸序列。
在一些优选的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:106的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:46的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:51的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67的核苷酸序列。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ IDNO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79的核苷酸序列。
在一些优选的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:68的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:69的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:75的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:77的核苷酸序列。
在一些具体的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:94、SEQID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105的核苷酸序列。
在一些优选的实施方案中，根据本发明的分离的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:93的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:94的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:101的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:104的核苷酸序列。
本发明的另一方面提供一种表达载体，其表达本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段。根据本发明的表达载体其包含本发明的分离的核酸分子。
本发明的另一方面提供一种嵌合抗原受体(CAR)融合蛋白，其包含本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体融合蛋白包含本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其为针对CRTAM抗原的VH和VL的单链可变片段(scFv)。所述针对CRTAM抗原的VH和VL的scFv具有以上实施方案中描述的重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3和轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
本发明的另一方面提供一种如上所述的表达载体转化的宿主细胞。
在一些实施方案中，根据本发明的宿主细胞选自原核细胞和真核细胞。在一些实施方案中，所述的宿主细胞为细菌，优选为大肠杆菌。在另一个优选的实施方案中，所述的宿主细胞为哺乳动物细胞。
本发明的另一方面提供制备本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段的方法，包括在所述宿主细胞中表达抗体以及从宿主细胞中分离所述抗体的步骤。
本发明的另一方面提供一种药物组合物，其包含本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段和药学可接受的载体。在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，还包含其他活性组分，如其他抗体、靶向药物等。在一些实施方案中，所述药学可接受的载体选自抗氧化剂、多肽、蛋白质、亲水性聚合物、氨基酸、糖、螯合剂、糖醇、离子和表面活性剂。在一个具体的实施方案中，所述药学可接受的载体为缓冲水溶液。在另一个具体的实施方案中，所述药学可接受的载体为脂质体的形式。
可以将本发明的抗CRTAM人源化抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合制备成药物制剂，以适合于经口或胃肠外给药。给药方法包括，但不限于经口、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、脑内、眼内、气管内、皮下、鼻内途径。所述制剂可以通过任何途径施用，例如通过输注或推注，通过经上皮或皮肤粘膜(例如口腔粘膜或直肠等)吸收的途径施用。给药可以是全身的或局部的。所述制剂可通过本领域已知的方法制备，且包含药物制剂领域常规使用的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的另一方面提供治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的个体施用本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物。
本发明的另一方面提供本发明的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。在一些实施方案中，所述肿瘤选自肺癌、白血病、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、睾丸癌、甲状腺癌、骨癌、宫颈癌、子宫癌、肾癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤、皮肤癌、前列腺癌、鼻咽癌、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤、肉瘤和神经内分泌肿瘤。在一些实施方案中，所述肿瘤选自小细胞肺癌、非小细胞肺癌、黑素瘤、肝细胞癌、血液系统恶性肿瘤、淋巴瘤、乳腺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌和神经胶质瘤。
本发明提供的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段具有显著的抗肿瘤作用，不影响CRTAM与其配体的结合，不影响其正常功能，同时人源化后的抗体免疫原性大大降低，有效消除人体免疫系统对外源性单抗的排异反应，可在制备用于治疗各类肿瘤疾病的药物中应用，具有广阔的市场前景。
定义
除非另有定义，本文中使用的科学和技术术语的含义是本领域技术人员所通常理解的含义。本文中所述的细胞和组织培养、分子生物学以及蛋白质和寡或多核苷酸化学及杂交中使用的命名和技术是本领域公知且普遍使用的。对于重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养与转化(如电穿孔、脂质转染)，使用了标准技术。酶促反应和纯化技术根据生产商的说明书或本领域普遍使用或本文所述的方法进行。前述技术和方法通常根据本领域公知且本说明书中引用和讨论的多部综合和较具体的文献中描述的那样使用。参见例如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual)(第2版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，纽约冷泉港(1989))。本文所述的分析化学、合成有机化学以及医学和药学化学中使用的命名以及实验室方法和技术是本领域公知且普遍使用的。
在本发明中，术语“至少80％序列同一性”是指至少80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％的序列同一性。在本发明中，术语“至少85％序列同一性”是指至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％的序列同一性。在一些优选的实施方案中，本发明所述的序列同一性可以至少为90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％。两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过National Center For Biotechnology Instutute网站上的BLASTN/BLASTP算法来进行。
在抗体分子中，轻链的三个高变区和重链的三个高变区在三维空间中以相对彼此的位置排列以形成抗原结合表面。抗原结合表面与所结合抗原的三维表面互补，且每条重链和轻链的三个高变区均被称作“互补决定区”或“CDR”。氨基酸向每个结构域的分配是根据Kabat《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》(国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达(1987和1991))或Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987)，Chothia等，Nature 342:878-883(1989)定义。
本发明的“抗体”是指特异性地识别并结合抗原的多肽或多肽复合物。抗体可以是完整抗体和其任何抗原结合片段或单链。本发明的“抗体”包括含有Ig分子的具有结合抗原的生物活性的至少一部分的任何蛋白质或肽。本发明“抗体”的实例包括但不限于重链或轻链的CDR或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架区或其任何部分。
本发明所述的“抗原结合片段”是指具有抗原结合活性的Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段及与人CRTAM结合的Fv片段、scFv片段。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体或单链Fv(scFv)。本发明的抗CRTAM抗体可以是单链可变区片段(scFv)，其源自抗体的单链多肽，保留了结合抗原的能力。scFv的实例包括通过重组DNA技术形成的抗体多肽，其中免疫球蛋白重链(H链)和轻链(L链)片段的Fv区经由间隔序列连接。制备scFv的各种方法是本领域技术人员所熟知的。
本发明所述的抗体指免疫球蛋白分子或其免疫活性部分，即包含特异性结合抗原(与其免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”指抗体与抗原的一种或多种抗原决定簇反应而不与其他多肽反应或以很低的亲和性(Kd>10-6)结合其他多肽。抗体包括但不限于多克隆、单克隆、嵌合、dAb(结构域抗体)、单链、Fab、Fab’和F(ab’)2片段、Fv、scFv及Fab表达文库。单克隆抗体(mAb)是由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的、原核的或噬菌体的克隆细胞株。单克隆抗体或抗原结合片段可以用如杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术及合成技术如CDR grafting或其它现有技术进行重组得到。
本发明所述的“鼠源抗体”为根据本领域知识和技能制备的对人CRTAM的单克隆抗体。制备时用hCRTAM抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。
本发明所述的“嵌合抗体”是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。
本发明所述的“人源化抗体”也称为CDR移植抗体，是将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架(FR)中产生的抗体。此类可变区框架序列可以从公共的DNA数据库或公开的参考文献获得，例如从ImMunoGeneTics(IMGT)网站http://imgt.cines.fr得到或从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。
附图说明
图1是抗CRTAM人源化抗体阻断人CRTAM结合CADM1活性实验结果(ELISA)，其中横坐标是抗体浓度(ng/mL)，纵坐标是OD450处的吸光值。
图2是抗CRTAM抗体HuC68-17与5A11竞争结合人CRTAM的实验结果(ELISA)，其中横坐标是抗体浓度(ng/mL)，纵坐标是OD450处的吸光值。
图3是抗CRTAM抗体HuC94-31与5A11竞争结合人CRTAM的实验结果(ELISA)，其中横坐标是抗体浓度(ng/mL)，纵坐标是OD450处的吸光值。
图4是抗CRTAM抗体HuC110-34与5A11竞争结合人CRTAM的实验结果(ELISA)，其中横坐标是抗体浓度(ng/mL)，纵坐标是OD450处的吸光值。
图5是抗CRTAM抗体HuC124-42与5A11竞争结合人CRTAM的实验结果(ELISA)，其中横坐标是抗体浓度(ng/mL)，纵坐标是OD450处的吸光值。
具体实施方式
下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。以下实施例中未注明条件的实验方法通常按照常规条件，如冷泉港的抗体技术实验手册、分子克隆手册等，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件进行。实施例中使用的材料、试剂如无特殊说明均为商购获得。
实施例1：CRTAM抗体相关抗原蛋白及阳性对照抗体的制备
1、抗原蛋白及阳性对照抗体的表达载体构建
(1)抗原蛋白的表达载体构建
合成编码人源CRTAM蛋白全长的基因片段，氨基酸序列设计如SEQ ID NO:29所示。将其核苷酸序列克隆至真核表达质粒pTargetT上，获得其表达质粒pT-hCRTAM。
合成编码猴源CRTAM蛋白全长的基因片段，氨基酸序列设计如SEQ ID NO:33所示。将其核苷酸序列克隆至真核表达质粒pTargetT上，获得其表达质粒pT-cCRTAM。
融合的人源CRTAM蛋白胞外区和mIgG1-Fc标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示。对人源CRTAM蛋白胞外区序列进行密码子优化后，合成带有标签的hCRTAM-mFc的核苷酸序列，并将克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-hCRTAM-mFc。
融合的人源CRTAM蛋白胞外区和hIgG1-Fc或His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32所示，对上述氨基酸序列进行密码子优化后合成带有标签的hCRTAM-hFc和hCRTAM-His的核苷酸序列，并将其分别克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-hCRTAM-hFc、pHR-hCRTAM-His。
融合的猴源CRTAM蛋白胞外区和mIgG1-Fc标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示。对猴源CRTAM蛋白胞外区序列进行密码子优化后，合成带有标签的cCRTAM-mFc的核苷酸序列，并将克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-cCRTAM-mFc。
融合的猴源CRTAM蛋白胞外区和hIgG1-Fc或His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示，对上述氨基酸序列进行密码子优化后合成带有标签的cCRTAM-hFc和cCRTAM-His的核苷酸序列，并将其分别克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-cCRTAM-hFc、pHR-cCRTAM-His。
融合的鼠源CRTAM蛋白胞外区和mIgG1-Fc标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示。对鼠源CRTAM蛋白胞外区序列进行密码子优化后，合成带有标签的mCRTAM-mFc的核苷酸序列，并将克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-mCRTAM-mFc。
融合的鼠源CRTAM蛋白胞外区和hIgG1-Fc或His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39所示，对上述氨基酸序列进行密码子优化后合成带有标签的mCRTAM-hFc和mCRTAM-His的核苷酸序列，并将其分别克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-mCRTAM-hFc、pHR-mCRTAM-His。
(2)配体蛋白的表达载体构建
融合的人源CADM1蛋白胞外区和mIgG1-Fc标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:40所示，对上述氨基酸序列进行密码子优化后合成带有标签的CADM1-mFc的核苷酸序列。将其克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-CADM1-mFc。
融合的人源CADM1蛋白胞外区和hIgG1-Fc或His标签的氨基酸序列如SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42所示，对上述氨基酸序列进行密码子优化后合成带有标签的CADM1-hFc和CADM1-His的核苷酸序列，并将其分别克隆至真核表达质粒pHR上，获得其表达质粒pHR-CADM1-hFc、pHR-CADM1-His。
(3)阳性对照抗体的表达载体构建
使用PCT申请WO2019/086878中公开的人源化抗体5A11(本文简称5A11)作为阳性对照抗体。参照WO2019/086878中公开的方法制备5A11。5A11的氨基酸序列如下所示：
5A11重链氨基酸序列：SEQ ID NO:43；
5A11轻链氨基酸序列：SEQ ID NO:44；
对5A11抗体所对应的氨基酸序列进行密码子人工优化，将其轻、重链基因片段分别克隆到真核表达质粒pHR上，获得5A11的重链真核表达质粒pHR-5A11-hG1m，轻链表达质粒pHR-5A11-hλ。
2、抗原蛋白的表达与纯化
(1)表达抗原蛋白的稳定转染细胞株构建
将真核表达质粒pT-hCRTAM在160V电压，15msec的方形脉冲下以电转的方式转染到CHO-K1细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所)，置于37℃，5％CO2浓度的培养箱中培养。24h后采用含1000μg/mL G418(Gibco，#10131-027)的培养基进行加压培养。转染16天后采用流式细胞术检测转染pool的阳性率，将阳性率较高的pool的细胞进行铺板(按照1×106个/mL的细胞密度，100μL/孔，铺96孔板)，采用5A11抗体和Goat pAb to Hu IgG(PE)(Abcam,ab98596)抗体与细胞孵育，以流式细胞仪(ACEABIO,Novocyte 2060R)检测392nm波长下mean值，使用GraphPad生成进行数据分析。将阳性细胞株进行亚克隆，挑选出高表达hCRTAM蛋白的克隆化的CHO-K1细胞株，命名为CHO-K1-hCRTAM。
将真核表达质粒pT-cCRTAM在160V电压，15msec的方形脉冲下以电转的方式转染到CHO-K1细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所)，置于37℃，5％CO2浓度的培养箱中培养。24h后采用含1000μg/mL G418(Gibco，#10131-027)的培养基进行加压培养。转染16天后采用流式细胞术检测转染pool的阳性率，将阳性率较高的pool的细胞进行铺板(按照1×106个/mL的细胞密度，100μL/孔，铺96孔板)，采用5A11抗体和Goat pAb to Hu IgG(PE)(Abcam,ab98596)抗体与细胞孵育，以流式细胞仪(ACEABIO,Novocyte 2060R)检测392nm波长下mean值，使用GraphPad生成进行数据分析。将阳性细胞株进行亚克隆，挑选出高表达cCRTAM蛋白的克隆化的CHO-K1细胞株，命名为CHO-K1-cCRTAM。
(2)标签抗原蛋白的表达
在1L细胞培养瓶中接种密度为1×106个/ml的293E细胞(来源于ATCC)，加入新鲜的预热的FreeStyle293培养基，使接种后总体积达到250mL，置37℃，8％CO2，加湿的细胞摇床中100rpm培养过夜。取7.5mL FreeStyle293培养基，加入1mg/mL的PEI溶液500μL，混合均匀，静置5min，同时取250μg待转染质粒加入8mL FreeStyle293培养基中，混合均匀，静置5min，其中标签抗原蛋白质粒pHR-hCRTAM-mFc、pHR-hCRTAM-hFc、pHR-hCRTAM-His、pHR-cCRTAM-mFc、pHR-cCRTAM-hFc、pHR-cCRTAM-His、pHR-mCRTAM-mFc、pHR-mCRTAM-hFc、pHR-mCRTAM-His、pHR-CADM1-mFc、pHR-CADM1-hFc、pHR-CADM1-His分别转染，阳性对照抗体5A11重链质粒pHR-5A11-hG1m和轻链质粒pHR-5A11-hλ按照质量比1.1：1共同转染。将PEI与FreeStyle293培养基的混合溶液加入到质粒中，混合均匀，室温静置20min，然后加入细胞培养物中，置37℃，8％CO2，加湿的细胞摇床中100rpm培养。在细胞转染后第1天和第3天对细胞进行补料，每瓶加入12.5mL的OPM-CHO PFF05(上海奥浦迈生物科技有限公司，F81279)、5mL的葡萄糖(母液浓度为180g/L)和2.5mL的谷氨酰胺(母液浓度为200mM)。当细胞活力降至75％时，收集细胞上清。将细胞培养物2000rpm离心5min，收集上清，再6000rpm离心20min，收集上清，分别使用0.45μm和0.22μm的滤杯过滤，收集滤液保存于4℃冰箱待纯化。
(3)亲和层析柱纯化
利用AKTA(GE，AKTA pure-150)根据蛋白性质采用亲和层析柱进行纯化(不同蛋白适配的亲和层析柱见表1)，具体纯化步骤如下：
表1不同蛋白适配的亲和层析柱
Figure BDA0003721928160000281
清洗：超纯水清洗设备及管路2min，流速10mL/min，后用0.1M NaOH清洗层析系统；
接柱：将层析柱接入层析设备，并用超纯水冲洗5min；后用0.1M NaOH冲洗30min，保留时间5min；
平衡：20mM PB+0.15M NaCl，pH 7.2平衡5个CV(柱体积)；
上样：将细胞表达上清上样，保留时间5min；
后平衡：20mM PB+0.15M NaCl，pH 7.2平衡5个CV；
洗脱：50mM醋酸，pH＝3.4洗脱，保留时间5min。UV280至50mAu左右时开始收集，降至50mAu左右时停止收集。用1M Tris-HCl，pH 9.0将样品pH调节至7.0；
再平衡：20mM PB+0.15M NaCl，pH 7.2平衡3个CV，保留时间5min；
在线清洗：0.1M NaOH清洗30min，保留时间5min；
清洗保存：纯化水清洗10min，后20％乙醇2个CV。
实施例2：抗CRTAM单克隆抗体的制备
1、杂交瘤单克隆的制备
(1)动物免疫
采用不同标签的hCRTAM抗原蛋白与佐剂共同免疫实验动物，或采用CHO-K1-hCRTAM细胞株进行细胞免疫。实验动物包括Balb/c品系小鼠、SJL品系小鼠和SD大鼠。蛋白免疫：小鼠免疫按照首次免疫50μg抗原免疫一只小鼠，后期均使用抗原蛋白25μg/只；SD大鼠免疫按照首次免疫100μg抗原免疫一只大鼠，后期均使用抗原蛋白50μg/只。免疫佐剂可以是弗氏佐剂(Sigma)或Quick Antibody-Mouse5W(Q5W，北京博奥龙免疫技术有限公司)。采用弗氏佐剂乳化抗原，将不同标签的hCRTAM抗原蛋白样品逐滴加入到佐剂溶液中，边滴加边涡旋以充分混合，佐剂使用剂量参考说明书进行。混合均匀形成油包水的乳状后免疫。采用Quick Antibody-Mouse5W作为佐剂，将不同标签的hCRTAM抗原蛋白样品与QuickAntibody-Mouse5W按照1:1的体积比进行混合，混匀后即采用肌肉注射的方式，免疫SD大鼠。细胞免疫：CHO-K1-hCRTAM细胞使用PBS重悬，小鼠免疫按照1×107个细胞/只；SD大鼠免疫按照2×107个细胞/只。免疫方案如表2所示。
表2动物免疫方案
Figure BDA0003721928160000291
Figure BDA0003721928160000301
*i.m.肌内注射；s.c.皮下注射；i.p.腹腔注射。
(2)杂交瘤融合
脾细胞的获取和制备：将加强免疫后的小鼠/大鼠处死后浸泡75％的酒精中，解剖取出脾脏，用研磨棒研磨后，经细胞筛网过滤后制备成单细胞悬液。将脾细胞悬液2000rpm离心5min，弃上清。加入2mL红细胞裂解液，室温裂解红细胞2min，加入PBS至20mL，1500rpm离心7min，弃上清，重悬后进行活细胞计数。收集培养瓶中的Sp2/0细胞，1000rpm离心5min后弃上清，重悬后进行活细胞计数。按脾细胞：Sp2/0细胞＝1.6：1的比例混合细胞，1500rpm离心7min后弃上清。用20mL电转缓冲液重悬细胞，1500rpm离心7min。弃上清，重复一次。分别用适量电转缓冲液重悬细胞，保证细胞浓度2×107个细胞/mL左右。把细胞悬液加入9mL电转融合槽中融合。融合后将细胞悬液转入到含有20％FBS的15mL RPMI 1640完全培养基中，室温放置20min。用含1×HAT、1×BIOMYC3、20％FBS的RPMI 1640培养基重悬融合细胞。按100μL/孔将细胞悬液加到若干块96孔细胞培养板中，保证每孔细胞量约为4×104个细胞/孔，置于37℃细胞培养箱中培养。5天后补加100μL/孔RPMI 1640完全培养基(含20％FBS，1×HAT，1×BIOMYC-3)。
(3)杂交瘤及亚克隆筛选
融合一周后，取杂交瘤母克隆的细胞培养上清，通过ELISA筛选结合hCRTAM蛋白和cCRTAM蛋白的杂交瘤母克隆，进一步通过流式细胞术筛选出能结合CHO-K1-hCRTAM细胞株的母克隆。
通过ELISA和FACS筛选出结合能力较强的母克隆，利用有限稀释法将阳性母克隆进行亚克隆，培养一周后利用ELISA检测亚克隆上清与hCRTAM蛋白的结合活性，进而获得分泌抗hCRTAM抗体的单克隆细胞株。获得多个较好的单克隆细胞株，分别标记为C68、C94、C110、C124。
2、单克隆抗体的制备
根据亚克隆上清活性分析结果确定单克隆抗体细胞株，将其扩大培养。培养条件是含有10％FBS、1×NAEE、1×丙酮酸钠、1％青链霉素双抗的1640培养基。待细胞汇合度大于>80％时，进将细胞传代扩培，待培养至约50mL时收集上清，纯化抗体。获得抗体经SDS-PAGE凝胶电泳确定纯度良好。
3、单克隆抗体测序
将经亚克隆操作的阳性杂交瘤细胞进行扩大培养，取适量细胞按RNeasy PlusMini Kit(Qiagen，74134)试剂盒说明书提取总RNA，利用Prime Script 1st strand cDNASynthesis Kit(Takara，6110A)反转录试剂盒合成cDNA第一条链。
根据抗体可变区两端保守序列设计通用引物(5’端含有用于与真核表达载体发生同源重组的同源臂序列)，以cDNA为模板进行抗体可变区基因的PCR扩增，从而分别获得鼠抗轻链与重链可变区的基因片段；设计引物(参考文献：1.Anke Krebber,SusanneBornhauser,Jorg Burmester et al.Reliable cloning of functional antibodyvariable domains from hybridomas and spleen cell repertoires employing areengineered phage display system.Journal of Immunological Methods,1997,201:35–55；2.Simon KorenMiha
Figure BDA0003721928160000312
AnjaColjaVenturinietal.Antibody variable-region sequencing as a method for hybridoma cell-line authentication,2008,78:1071–1078)，进行DNA测序获得序列。鼠抗测序结果见表3。
表3抗CRTAM鼠源单克隆抗体序列
Figure BDA0003721928160000311
实施例3：抗CRTAM嵌合抗体的构建
将纯化后(纯化步骤见实施例1)的小鼠抗体重链与轻链可变区基因片段分别与线性化的含有人抗体重链或轻链恒定区的真核表达质粒pHR-hG1m/pHR-hλ共转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。将混合液均匀涂布于含有氨苄抗生素的琼脂平板表面，于37℃恒温培养箱倒置过夜培养后分别挑取若干单菌落进行DNA测序。将测序正确的嵌合抗体分别标记为C68CHI、C94CHI、C110CHI、C124CHI。抗体C68CHI、C94CHI、C110CHI、C124CHI的重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列与相应的鼠源抗体C68、C94、C110、C124相同。
将嵌合抗体重轻链质粒共转染HEK293E细胞，表达纯化获得嵌合抗体，然后进行纯度检测、活性分析及亲和力测定。
利用定点突变的方法，将嵌合抗体C68CHI进行基因突变，以筛选更优的抗体。C68CHI重链可变区第53位N突变为S，抗体稳定性提高，标记为C68CHIm1。C68CHIm1的重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:106，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:46，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、11和10，LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14。嵌合抗体序列见表4。
表4抗CRTAM嵌合抗体序列表
Figure BDA0003721928160000321
实施例4：抗CRTAM人源化抗体的构建及生产
根据嵌合抗体的免疫活性分析，选择C68CHIm1、C94CHI、C110CHI、C124CHI等多个活性好的嵌合抗体进行人源化抗体改造。
抗体的人源化改造，首先是通过与免疫基因数据库(IMGT)中的小鼠抗体序列进行比对，确认C68CHIm1、C94CHI、C110CHI、C124CHI抗体可变区的鼠源种系，经过同源比对，C68CHIm1、C94CHI、C110CHI、C124CHI抗体的重链可变区序列的FR区分别与小鼠抗体种系基因(IGHV3-2*02、IGHV5-9-1*01、IGHV1-85*01、IGHV1-9*01)最为相似；抗体轻链可变区的FR序列则分别与小鼠抗体(IGKV1-110*01、IGKV10-96*01、IGKV1-110*01、IGKV5-48*01)最为相似。以C68CHIm1、C94CHI、C110CHI、C124CHI抗体框架区序列FR1-FR3作为模板，在人框架区库中寻找3D结构相似但是免疫原性较低的全人框架替代C68CHIm1、C94CHI、C110CHI、C124CHI的FR1-FR3序列，重链/轻链全长序列进行3D建模并和原抗体重链/轻链序列进行结构比对分析，综合考虑抗原性和3D结构相似度，最终选择C68CHIm1的5条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:50～54)和12条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:55～59、60～66)、C94CHI的4条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:72～75)和4条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:76～79)、C110CHI的4条人源化重链可变区(参见SEQ ID NO:84～87)和5条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:88～91)以及C124CHI的4条人源化重链可变区(参见SEQ IDNO:97～100)和4条人源化轻链可变区(参见SEQ ID NO:102～105)进行下一步优化。C68CHIm1、C94CHI、C110CHI、C124CHI的人源化抗体非CDR区序列均达到95％以上人源化。
挑选纯度、活性和亲和力均较好的人源化抗体，分别标记为HuC68-16、HuC94-31、HuC110-32、HuC124-22，序列见表5。
表5抗CRTAM人源化抗体序列
Figure BDA0003721928160000331
利用定点突变的方法，将人源化抗体HuC68-16、HuC110-32、HuC124-22进行基因突变，以筛选更优的抗体。HuC68-16轻链可变区第34位G突变为K(参见SEQ ID NO:67)，抗体稳定性提高，标记为HuC68-17。HuC110-32轻链可变区第34位G突变为K(参见SEQ ID NO:92)，抗体稳定性提高，标记为HuC110-34。HuC124-22重链可变区第62位G突变为A(参见SEQ IDNO:101)，抗体稳定性提高，标记为HuC124-42。优化后抗体序列见表6。
表6抗CRTAM人源化抗体优化后序列
Figure BDA0003721928160000332
考虑到抗体的功能与稳定性，选择合适的抗体亚型骨架与优化后的人源化抗体可变区进行匹配，构建完整的人源化抗体。将人源化抗体轻链与重链可变区氨基酸序列反转录成相对应的核苷酸序列，根据表达宿主进行密码子优化，并生成相邻片段之间含有互补序列的寡核苷酸片段，通过Overlap PCR将寡核苷酸片段退火后连接起来，再利用特异性引物(5’端含有用于与真核表达载体发生同源重组的同源臂序列)扩增出完整的轻链与重链可变区核苷酸片段；将纯化后的轻链可变区核苷酸片段与线性化的含有人κ轻链恒定区的真核表达质粒共转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，将纯化后的重链可变区核苷酸片段与人IgG重链恒定区的真核表达质粒共转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，分别将转化质粒的感受态细胞均匀涂布于含有氨苄抗生素的琼脂平板表面，于37℃恒温培养箱过夜培养后分别挑取若干单菌落进行DNA测序。
将测序正确的阳性克隆接种于含有氨苄抗生素的2×YT液体培养基中，于37℃振荡培养12小时以上，然后收集菌体进行质粒提取，从而获得人源化抗体轻链与重链表达质粒，使用核酸定量分析仪检测质粒的浓度与纯度。
将质粒转染HEK293E细胞，表达纯化获得大量抗体，进行纯度检测、活性分析及亲和力的检测。完整的人源化抗体序列见表7。
表7抗CRTAM人源化抗体完整序列
Figure BDA0003721928160000341
实施例5：抗CRTAM抗体与人CRTAM结合活性测定(ELISA)
采用ELISA分析抗体的结合活性。将hCRTAM-His蛋白(1.5μg/mL，50μL/孔，实施例1中制得)包被到96孔酶标板，于37℃孵育2h。用1x PBST清洗3次后用含5％脱脂牛奶的PBST37℃封闭2h。用1x PBST清洗3次后，本发明的抗CRTAM抗体作为一抗从10μg/mL开始，5倍梯度稀释加入酶标板(50μL/孔)，共8个浓度，浓度分别为10000ng/mL、2000ng/mL、400ng/mL、80ng/mL、16ng/mL、3.2ng/mL、0.64ng/mL、0.128ng/mL，37℃孵育1.5h，对照抗体为5A11(实施例1中制得)；用1x PBST清洗3次后拍干，二抗使用Anti-Human IgG HRP(Jackson，109-035-003，1:5000，50μL/孔)，37℃孵育1h。用1xPBST清洗5次后拍干，加入单组分TMB显色液(索莱宝，PR1200，50μL/孔)，避光显色约5min，加入2M硫酸(50μL/孔)终止，使用酶标仪(thermo，Multiskan FC)读取OD450值。使用GraphPad生成EC50，结果如表8所示。
表8抗CRTAM人源化抗体与人CRTAM结合活性
Figure BDA0003721928160000342
实验结果显示，本发明的抗CRTAM抗体具有较好的与人CRTAM结合的能力。
实施例6：抗CRTAM抗体与食蟹猴CRTAM结合活性测定(ELISA)
采用ELISA分析抗体的结合活性。将cCRTAM-His蛋白(2μg/mL，50μL/孔，实施例1中制得)包被到96孔酶标板，于37℃孵育2h。用1x PBST清洗3次后用含5％脱脂牛奶的PBST 37℃封闭2h。用1x PBST清洗3次后，本发明的抗CRTAM抗体作为一抗从10μg/mL开始，5倍梯度稀释加入酶标板(50μL/孔)，共8个浓度，浓度分别为10000ng/mL、2000ng/mL、400ng/mL、80ng/mL、16ng/mL、3.2ng/mL、0.64ng/mL、0.128ng/mL，37℃孵育1.5h，对照抗体为5A11(实施例1中制得)；用1x PBST清洗3次后拍干，二抗使用Anti-Human IgG HRP(Jackson，109-035-003，1:5000，50μL/孔)，37℃孵育1h。用1xPBST清洗5次后拍干，加入单组分TMB显色液(索莱宝，PR1200，50μL/孔)，避光显色约5min，加入2M硫酸(50μL/孔)终止，使用酶标仪(thermo，Multiskan FC)读取OD450值。使用GraphPad生成EC50，结果如表9所示。
表9抗CRTAM抗体与食蟹猴CRTAM结合活性
抗体名称 HuC94-31 HuC110-34 HuC124-42
EC50(ng/mL) 4.68 8.17 4.78
实验结果显示，本发明的抗CRTAM抗体具有较好的与食蟹猴CRTAM结合的能力。
实施例7：抗CRTAM抗体对CRTAM与其配体CADM1的阻断活性测定(ELISA)
采用ELISA法分析抗体对人CRTAM与其配体CADM1的阻断活性。将hCRTAM-His蛋白(1.5μg/mL，50μL/孔，实施例1中制得)包被到96孔酶标板，于37℃孵育2h。用1x PBST清洗3次后用含5％脱脂牛奶的PBST 37℃封闭2h。同时用biotin-NHS ester(biovsion，2347-50)标记配体蛋白hCADM1-His，标记好的配体命名为hCADM1-His-biotin。封闭好的酶标板用1xPBST清洗3次后，配置浓度为20μg/mL的hCADM1-His-biotin配体溶液，以上述配体溶液为稀释液稀释一抗，本发明的抗CRTAM抗体作为一抗从100μg/mL开始，3倍梯度稀释加入酶标板(50μL/孔)，共8个浓度，浓度分别为100000ng/mL、33333ng/mL、11111ng/mL、3704ng/mL、1235ng/mL、412ng/mL、137ng/mL、46ng/mL，37℃孵育1.5h，对照抗体为5A11(实施例1中制得)；用1x PBST清洗3次后拍干，二抗使用Streptavidin-HRP(BD，554066，1:10000，50μL/孔)，37℃孵育1h。用1xPBST清洗5次后拍干，加入单组分TMB显色液(索莱宝，PR1200，50μL/孔)，避光显色约5min，加入2M硫酸(50μL/孔)终止，使用酶标仪(thermo，Multiskan FC)读取OD450值。使用GraphPad生成IC50，结果如图1所示。
实验结果显示，本发明的抗CRTAM抗体优于对照抗体5A11，几乎不阻断人CRTAM与CADM1的结合，不影响其正常功能。
实施例8：抗CRTAM抗体与细胞表面人CRTAM结合活性测定(FACS)
采用FACS分析抗体与CHO-K1-hCRTAM细胞表面的hCRTAM的结合活性。CHO-K1-hCRTAM细胞消化后，用2％FBS-PBS的溶液重悬，计数。将上述细胞按照每孔1.5x105个细胞的方式铺细胞板，本发明的抗CRTAM抗体作为一抗从20μg/ml开始，5倍梯度稀释加入细胞板，共8个浓度，浓度分别为20000ng/mL、4000ng/mL、800ng/mL、160ng/mL、32ng/mL、6.4ng/mL、1.28ng/mL、0.26ng/mL，4℃条件下孵育1.5h，对照抗体为5A11；使用PBS清洗三次细胞后，二抗使用PE-Anti-Human IgG(Biolegend，Cat.No.409303，1.25μl/孔)4℃条件下孵育1h；PBS三次洗涤后使用流式细胞仪检测抗体与细胞表面结合产生的荧光强度，结果如表10所示。
表10抗CRTAM抗体与细胞表面hCRTAM结合活性
抗体名称 HuC110-34 5A11
EC50(ng/mL) 41.74 60.70
实验结果显示，本发明的人源化抗CRTAM抗体HuC110-34具有较好的与细胞表面hCRTAM结合能力。
实施例9：抗CRTAM抗体与细胞表面食蟹猴CRTAM结合活性测定(FACS)
采用FACS分析抗体与CHO-K1-cCRTAM细胞表面的cCRTAM的结合活性。CHO-K1-cCRTAM细胞消化后，用2％FBS-PBS的溶液重悬，计数。将上述细胞按照每孔1.5x105个细胞的方式铺细胞板，本发明的抗CRTAM抗体作为一抗从20μg/ml开始，5倍梯度稀释加入细胞板，共8个浓度，浓度分别为20000ng/mL、4000ng/mL、800ng/mL、160ng/mL、32ng/mL、6.4ng/mL、1.28ng/mL、0.26ng/mL，4℃条件下孵育1.5h；使用PBS清洗三次细胞后，二抗使用PE-Anti-Human IgG(Biolegend，Cat.No.409303，1.25μl/孔)4℃条件下孵育1h；PBS三次洗涤后使用流式细胞仪检测抗体与细胞表面结合产生的荧光强度，结果如表11所示。
表11抗CRTAM抗体与细胞表面食蟹猴CRTAM结合活性
抗体名称 HuC94-31 HuC110-34 HuC124-42
EC50(ng/mL) 35.02 50.69 90.38
实验结果显示，本发明的人源化抗CRTAM抗体具有较好的与细胞表面cCRTAM结合能力。
实施例10：抗CRTAM抗体与5A11对人CRTAM的表位竞争活性测定(ELISA)
采用ELISA法分析本发明的抗CRTAM抗体与5A11对人CRTAM的表位竞争活性。将hCRTAM-His蛋白(2μg/mL，50μL/孔，实施例1中制得)包被到96孔酶标板，于37℃孵育2h。用1x PBST清洗3次后用含5％脱脂牛奶的PBST37℃封闭2h。同时用Biotin-NHS esterTM(Biovsion公司，2347-50)标记本发明的抗CRTAM抗体，标记好的抗体分别命名为HuC68-17-biotin、HuC94-31-biotin、HuC110-34-biotin、HuC124-42-biotin。封闭好的酶标板用1xPBST清洗3次后，分别配置浓度为1μg/mL的HuC68-17-biotin、HuC94-31-biotin、HuC110-34-biotin、HuC124-42-biotin溶液，以上述溶液为稀释液分别稀释一抗，本发明的抗CRTAM抗体(竞争阳性对照)与5A11作为一抗从100μg/mL开始，5倍梯度稀释加入酶标板(50μL/孔)，共8个浓度，浓度分别为100000ng/mL、20000ng/mL、4000ng/mL、800ng/mL、160ng/mL、32ng/mL、6.4ng/mL、1.28ng/mL，37℃孵育1.5h；用1x PBST清洗3次后拍干，二抗使用Streptavidin-HRP(BD，554066，1:10000，50μL/孔)，37℃孵育1h。用1xPBST清洗5次后拍干，加入单组分TMB显色液(索莱宝，PR1200，50μL/孔)，避光显色约5min，加入2M硫酸(50μL/孔)终止，使用酶标仪(thermo，Multiskan FC)读取OD450值。使用GraphPad生成IC50，结果如图2～5所示。
实验结果显示，本发明的人源化抗CRTAM抗体HuC68-17、HuC94-31、HuC110-34、HuC124-42与5A11几乎不存在表位竞争，不阻断5A11与人CRTAM的结合，表明本发明的人源化抗CRTAM抗体与5A11对CRTAM的结合表位完全不同。
实施例11：抗CRTAM抗体与人CRTAM蛋白的亲和力测定
利用Fortebio Octet对本发明的人源化抗CRTAM抗体结合抗原hCRTAM-His(实施例1中制得)的亲和力进行测定。将抗CRTAM抗体用SD缓冲液(PBS+0.02％Tween20+0.1％BSA)稀释到浓度10μg/mL，抗原hCRTAM-His用SD缓冲液4倍浓度梯度稀释，使其浓度为12μg/mL、3μg/mL、0.75μg/mL、0μg/mL，选用AHC传感器固化抗体，按Fortebio Octet RED96的操作规程进行亲和力测定，具体参数及实验结果如表12所示。
表12抗CRTAM抗体与人CRTAM蛋白的亲和力测定
Figure BDA0003721928160000381
实验结果显示，本发明的人源化抗CRTAM抗体的亲和力显著优于5A11，显示出更持久的与人CRTAM蛋白结合能力。
实施例12：抗CRTAM抗体的体外药效检测
采用SEB(葡萄球菌肠毒素B)刺激健康人PBMC的方法来检测抗CRTAM抗体的体外药效。
按所需细胞量复苏PBMC，加到8-9ml的IMDM完全培养基中，900g离心10min，弃上清；用适量培养基重悬，用血球计数板计数，并重悬为1M/mL，100μL/孔加入96孔板中；按4倍浓度(即40μg/mL)，50μL/孔，用IMDM完全培养基配制待检测抗体和Isotype，做好标记，涡旋；将抗体溶液加入96孔板中，对照组加入50μL/孔的培养基，96孔板置于37℃孵箱中，细胞和抗体孵育1h；按4倍浓度(即200ng/mL)用IMDM完全培养基配制SEB溶液，50μL/孔加入对应孔中；96孔板置于37℃，5％CO2孵箱中孵育72h后，收集无细胞上清150μL，按一定比例稀释后，按照hIFN-γELISA检测试剂盒(R&D
Figure BDA0003721928160000382
ELISA试剂盒，R&D system Cat：DY285B)说明书检测上清中IFN-γ的浓度，结果如表13所示。表13抗CRTAM抗体促进PBMC释放IFN-γ
Figure BDA0003721928160000383
实验结果显示，与5A11相比，本发明的抗CRTAM抗体具有更好地促IFN-γ释放能力。
实施例13：HCC827(del19)人非小细胞肺癌细胞PBMC重建模型抗肿瘤实验
1、实验材料
(1)实验细胞及动物
HCC827(del19)细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；
NSG小鼠，雌性，6-8周龄，体重18-20克，购自百奥赛图(江苏)基因生物技术有限公司；
(2)供试品及对照品
对照品5A11由实施例1制得，用作阳性对照；对照品PBS用作阴性对照；试验前，将本发明的抗CRTAM抗体用PBS配制为1mg/mL。
2、实验方法
HCC827(del19)人非小细胞肺癌细胞PBMC重建模型
将含有1×107个HCC827(del19)细胞的50μL PBS与50μL基质胶混合后接种于小鼠的右后肢皮下，待肿瘤生长至平均体积达100mm3时开始分组。PBMC来自健康献血者的新鲜血液，于DAY1分组后给抗体前1小时进行尾静脉注射(每只小鼠注射10M的PBMC细胞)。尾静脉给药每周2次，每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径，计算相对肿瘤增殖率(T/C)。肿瘤生长抑制率用下列公式计算:TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100,其中Ti为某一天某给药组的平均肿瘤体积，T0为此给药组在开始给药时的平均肿瘤体积；Vi为某一天(与Ti同一天)溶媒对照组的平均肿瘤体积，V0为溶媒对照组在给开始药时的平均肿瘤体积。记录连续给药22天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线。在实验结束后检测肿瘤重量，并计算各组的肿瘤抑制率(TGI)％，结果如表14所示。
表14 HCC827(del19)人非小细胞肺癌细胞PBMC重建模型抗肿瘤结果
Figure BDA0003721928160000391
实验结果显示，相比于5A11，本发明的抗CRTAM抗体能够更好地抑制HCC827(del19)人非小细胞肺癌肿瘤生长。
实施例14：NUGC-4人胃癌细胞PBMC重建模型抗肿瘤实验
1、实验材料
(1)实验细胞及动物
NUGC-4人胃癌细胞购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)；
NSG小鼠，雌性，6-8周龄，体重18-20克，购自百奥赛图(江苏)基因生物技术有限公司；
(2)供试品及对照品
对照品为PBS，用作阴性对照；试验前，将本发明的抗CRTAM抗体用PBS配制为1mg/mL。
2、实验方法
NUGC-4人胃癌细胞PBMC重建模型
将含有5×106个NUGC-4(del19)细胞的100μL PBS与100μL基质胶混合后接种于小鼠的右后肢皮下，待肿瘤生长至平均体积达110mm3时开始分组。PBMC来自健康献血者的新鲜血液，于DAY1分组后给抗体前1小时进行尾静脉注射(每只小鼠注射10M的PBMC细胞)。尾静脉给药每周2次，每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径，计算肿瘤体积，肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径，计算相对肿瘤增殖率(T/C)。肿瘤生长抑制率用下列公式计算:TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100,其中Ti为某一天某给药组的平均肿瘤体积，T0为此给药组在开始给药时的平均肿瘤体积；Vi为某一天(与Ti同一天)溶媒对照组的平均肿瘤体积，V0为溶媒对照组在给开始药时的平均肿瘤体积。记录连续给药21天测量的肿瘤体积，用GraphPad Prism绘制瘤体积生长曲线。在实验结束后检测肿瘤重量，并计算各组的肿瘤抑制率(TGI)％，结果如表15所示。
表15 NUGC-4人胃癌细胞PBMC重建模型抗肿瘤结果
Figure BDA0003721928160000401
实验结果显示，本发明的抗CRTAM抗体能够较好地抑制NUGC-4人胃癌细胞生长。
以上实施例证明本发明提供的抗CRTAM抗体具有显著的抗肿瘤作用，可明显抑制肿瘤增长，提示这些抗体可在制备抗肿瘤药物中应用，具有好的市场前景。
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。
序列表
<110> 南京圣和药业股份有限公司
<120> 抗CRTAM抗体及其应用
<150> 2021107335167
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<212> PRT
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Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn Asp Ile Asn
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<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<220>
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<400> 2
Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Arg
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Gly
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<213> 鼠源(Mus musculus)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Leu Ser Ile Thr Val Pro Asn Val Thr Leu Gln Asp Glu Gly Val Tyr
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Arg Lys Gln Asn Gly Glu Glu His Val Val Leu Met Cys Ser Thr Met
130 135 140
Arg Ser Lys Pro Pro Pro Gln Ile Thr Trp Leu Leu Gly Asn Ser Met
145 150 155 160
Glu Val Ser Gly Gly Thr Leu His Glu Phe Glu Thr Asp Gly Lys Lys
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Cys Asn Thr Thr Ser Thr Leu Ile Ile His Thr Tyr Gly Lys Asn Ser
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Thr Val Asp Cys Ile Ile Arg His Arg Gly Leu Gln Gly Arg Lys Leu
195 200 205
Val Ala Pro Phe Arg Phe Glu Asp Leu Val Thr Asp Glu Glu Thr Ala
210 215 220
Ser Asp Ala Leu Glu Arg Asn Ser Leu Ser Ser Gln Asp Pro Gln Gln
225 230 235 240
Pro Thr Ser Thr Val Ser Val Thr Glu Asp Ser Ser Thr Ser Glu Ile
245 250 255
Asp Lys Glu Glu Lys Glu Gln Thr Thr Gln Asp Pro Asp Leu Thr Thr
260 265 270
Glu Ala Asn Pro Gln Tyr Leu Gly Leu Ala Arg Lys Lys Ser Gly Ile
275 280 285
Leu Leu Leu Thr Leu Val Ser Phe Leu Ile Phe Ile Leu Phe Ile Ile
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Val Gln Leu Phe Ile Met Lys Leu Arg Lys Ala His Val Ile Trp Lys
305 310 315 320
Lys Glu Asn Glu Val Ser Glu His Thr Leu Glu Ser Tyr Arg Ser Arg
325 330 335
Ser Asn Asn Glu Glu Thr Ser Ser Glu Glu Lys Asn Gly Gln Ser Ser
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His Pro Met Arg Cys Met Asn Tyr Ile Thr Lys Leu Tyr Ser Glu Ala
355 360 365
Lys Thr Lys Arg Lys Glu Asn Val Gln His Ser Lys Leu Glu Glu Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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180 185 190
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Gln Gln Pro Thr Ser Thr Val Ser Val Thr Glu Asp Ser Ser Thr Ser
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Arg Pro Leu Lys Asp Ser Arg Phe Gln Leu Leu Asn Phe Ser Ser Ser
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275 280 285
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Lys
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<220>
<223> 5A11抗体的轻链
<400> 44
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Val Leu Ser Lys Arg Tyr Ala
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<210> 45
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
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<211> 218
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<220>
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Ser Ser
<210> 51
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 51
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1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
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Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 52
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1 5 10 15
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<220>
<223> 重链可变区
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<220>
<223> 重链可变区
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<220>
<223> 轻链可变区
<400> 57
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<220>
<223> 轻链可变区
<400> 58
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<220>
<223> 轻链可变区
<400> 59
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Gly His Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 61
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1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Gly His Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Gly His Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 63
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Gly His Ser
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<220>
<223> 轻链可变区
<400> 64
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Gly His Ser
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 65
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 66
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<220>
<223> 轻链可变区
<400> 67
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
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<220>
<223> 重链可变区
<400> 68
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 69
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1 5 10 15
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 70
Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
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115 120 125
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Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 71
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 71
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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100 105 110
Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala
115 120 125
Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala
130 135 140
Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val
145 150 155 160
Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr
180 185 190
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195 200 205
Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 72
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 72
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
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<210> 73
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 73
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
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100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 74
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
20 25 30
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35 40 45
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100 105 110
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<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 75
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
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20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 77
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 77
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 78
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 78
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 79
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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100 105
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 80
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Ser Ser
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<211> 112
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 81
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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85 90 95
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100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 82
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1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn
20 25 30
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35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Val His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
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Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
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<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 83
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Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
130 135 140
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
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165 170 175
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
180 185 190
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195 200 205
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn
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Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Ser Ser
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
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Ala Arg Gly Leu Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 86
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 86
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn
20 25 30
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35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 87
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn
20 25 30
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Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
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100 105 110
Ser Ser
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 88
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
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50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 89
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 89
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 90
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 90
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 91
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 91
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 92
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 92
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 93
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 93
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
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100 105 110
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115
<210> 94
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 94
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
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100 105
<210> 95
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 95
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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65 70 75 80
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225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Glu His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
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<210> 96
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 96
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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195 200 205
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210
<210> 97
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 97
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
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100 105 110
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115
<210> 98
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
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115
<210> 99
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 99
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Phe Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Asp Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 100
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Asp Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 101
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 101
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Asn Ala Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Phe Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Asp Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala
115
<210> 102
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 102
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 104
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 105
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 105
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 106
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链可变区
<400> 106
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu His Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Phe Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Arg Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Ser Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 107
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 107
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Thr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Phe Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 108
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 108
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Gly His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ala
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Phe Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Phe Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 109
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 109
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ser
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Asp Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Asn Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Leu Gly Tyr Asp Glu Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 110
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 110
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Phe Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 111
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 111
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Asn
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Ala Thr Ile Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys
115 120 125
Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 112
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 112
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Lys Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 113
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重链
<400> 113
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Val Pro Thr Ile Tyr Tyr Asn Ala Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Phe Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Asp Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 114
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 轻链
<400> 114
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Leu His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (12)

1.一种抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(1)所述重链可变区包含选自如下组的HCDR1、HCDR2和HCDR3：
(a1)如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；
(a2)如SEQ ID NO:8、9和10所示的氨基酸序列；
(a3)如SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列；
(a4)如SEQ ID NO:16、17和18所示的氨基酸序列；
(a5)如SEQ ID NO:22、23和24所示的氨基酸序列；
(a6)如SEQ ID NO:22、25和24所示的氨基酸序列；和
(a7)与(a1)、(a2)、(a3)、(a4)、(a5)或(a6)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；和
(2)所述轻链可变区包含选自如下组的LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(b1)如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列；
(b2)如SEQ ID NO:7、5和6所示的氨基酸序列；
(b3)如SEQ ID NO:12、13和14所示的氨基酸序列；
(b4)如SEQ ID NO:15、13和14所示的氨基酸序列；
(b5)如SEQ ID NO:19、20和21所示的氨基酸序列；
(b6)如SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列；
(b7)与(b1)、(b2)、(b3)、(b4)、(b5)或(b6)所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其具有：
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:1、2和3或与SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQID NO:4、5和6、SEQ ID NO:7、5和6或与SEQ ID NO:4、5和6或SEQ ID NO:7、5和6所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:8、9和10、SEQ ID NO:8、11和10或与SEQID NO:8、9和10或SEQ ID NO:8、11和10所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:12、13和14、SEQ ID NO:15、13和14或与SEQ ID NO:12、13和14或SEQ ID NO:15、13和14所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:16、17和18或与SEQ ID NO:16、17和18所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:19、20和21或与SEQ ID NO:19、20和21所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或
所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别为SEQ ID NO:22、23和24、SEQ ID NO:22、25和24或与SEQ ID NO:22、23和24或SEQ ID NO:22、25和24所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，和所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别为SEQ ID NO:26、27和28或与SEQ IDNO:26、27和28所示的氨基酸序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中：
所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQID NO:86和SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:80、SEQ IDNO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列，以及与SEQID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQID NO:91或SEQ ID NO:92功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ IDNO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:67具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQID NO:74和SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:68、SEQ IDNO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75功能相同的氨基酸序列，以及与SEQID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:75具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79，SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQID NO:99、SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101，SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104和SEQ ID NO:105，SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ IDNO:104或SEQ ID NO:105经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105功能相同的氨基酸序列，以及与SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求1-3之任一项所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:80，SEQ ID NO:80经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:80功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:80具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:81，SEQID NO:81经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:81功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:90，SEQID NO:90经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:90功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少85％序列同一性的氨基酸序列；或者
所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:87经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:87功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:87具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:92，SEQID NO:92经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的且与SEQ ID NO:92功能相同的氨基酸序列或与SEQ ID NO:92具有至少85％序列同一性的氨基酸序列。
5.如权利要求1-4之任一项所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是鼠源单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或完全人抗体。
6.一种分离的核酸，其编码如权利要求1-5之任一项所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段。
7.如权利要求6所述的核酸，其包含：
编码重链可变区如SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86或SEQID NO:87的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:51、SEQID NO:52，SEQ ID NO:53或SEQ ID NO:54的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ IDNO:66或SEQ ID NO:67的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74或SEQID NO:75的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79的核苷酸序列；或者
编码重链可变区如SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:97、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:99、SEQID NO:100或SEQ ID NO:101的核苷酸序列；和编码轻链可变区如SEQ ID NO:94、SEQ IDNO:102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO:105的核苷酸序列。
8.一种表达载体，其包含如权利要求6或7所述的核酸。
9.一种宿主细胞，其转化如权利要求8所述的表达载体，所述宿主细胞选自原核细胞和真核细胞，优先为哺乳动物细胞。
10.制备权利要求1-5之任一项所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段的方法，包括在如权利要求9所述的宿主细胞中表达抗体或其抗原结合片段，以及从宿主细胞中分离所述抗体或其抗原结合片段的步骤。
11.一种药物组合物，其包含权利要求1-5之任一项所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段和药学可接受的载体。
12.如权利要求1-5之任一项所述的抗CRTAM抗体或其抗原结合片段或如权利要求11的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
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