CN115531404B - 具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物及其用途，涉及皮肤外用品技术领域；本发明采用异荭草素和水仙苷进行复配，能对紫外光进行有效吸收，可有效阻隔紫外光，从而削弱了紫外光对皮肤的伤害，保护皮肤免受紫外线辐射影响；还能够有效下调AP‑1和NF‑κB的表达，从而降低紫外光照射的光老化HaCaT细胞分泌MMP‑1和IL‑6、TNF‑α，保护I型胶原蛋白的不被降解并一定程度上刺激Ⅰ型胶原的产生，逆转光老化状态，从而预防或者修复紫外线辐射引起的皮肤光老化问题。

Description

具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物及其用途
技术领域
本发明涉及皮肤外用品技术领域，具体涉及一种具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物及其用途。
背景技术
紫外线可以被人体的皮肤吸收，并形成一定的生理效应。紫外线的高能幅射，有合成分子和破坏分子的双重效应，它可促进维生素D的合成、杀菌、进行光合作用。但同时也会造成皮肤损害、降低免疫功能，短时的紫外光损伤还可引起皮下血管的扩张、皮肤变红、生成红斑、DNA损伤，形成皮炎等症状；长期的紫外线辐射或者过量的紫外辐射，因长期的MMPs过量生成或活性处于活跃状态，会引起皮肤的光老化以及皮肤结构的坍塌性衰老。
近年来,由于大气臭氧层受到破坏,到达地面的紫外线随之增加,对人体的危害明显增大。因此，如何有效的预防紫外线辐射引起的皮肤光损伤、光老化、皮肤衰老、皮肤癌变等皮肤疾病，逐渐成为人们生活品质的基本要求。紫外线辐射引起的皮肤问题应该有针对性地预防以及治疗。紫外线辐射引起的皮肤问题中，最常见、最普遍的是皮肤光老化，即紫外线通过多条信号通路上调皮肤角质形成细胞和成纤维细胞中基质金属蛋白酶的表达，主要的信号通路是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)和核转录因子NF-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)信号通路，进而破坏皮肤细胞外基质和刺激皮肤角质形成细胞释放炎症因子，导致皮肤光老化的问题最为常见。
皮肤光老化的形成，一方面，紫外线先激活皮肤细胞表面生长因子受体，再通过MAPK信号通路进行受体偶联信号转导，诱导激活蛋白1，AP-1上调基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)，MMP-1先启动纤维胶原蛋白的切割，MMP-3和MMP-9再进一步分解胶原纤维片段，破坏细胞外基质，导致皮肤出现皱纹等光老化特征。
另一方面，紫外线也可激活转录因子NF-κB，诱导IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α等炎症因子的表达，这些炎症因子会激活细胞表面受体AP-1和NF-κB，进一步加重皮肤光老化作用，此外，炎症因子IL-6会诱导MMPs的产生，加速皮肤胶原的过度降解，使皮肤出现皱纹增多、松弛、粗糙等光老化特征。
因此，需要提供一种能抑制MAPK及NF-κB信号通路的表达，控制胶原蛋白降解及细胞炎症反应的抗紫外辐射组合物，以解决上述问题。
发明内容
为克服现有的技术缺陷，本发明提供了一种具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物及其用途。本发明的组合物具有良好的紫外吸收效果，同时兼具MAPK和NF-κB信号通路的抑制作用。
为了解决上述问题，本发明提出以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物，所述皮肤外用组合物包括异荭草素和水仙苷的组合；
其中，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:5。
本发明中所述的皮肤外用组合物包括但不限于药物组合物和化妆品组合物，优选为化妆品组合物，更优选为护肤化妆品组合物。
本发明中采用的异荭草素(isoorientin),又称为3’,4’,5,7-四羟基-6-C-吡喃葡萄糖基黄酮或者木犀草素6-C-葡萄糖苷,是一种木犀草素糖苷类黄酮化合物,具有清除自由基,抵御氧化损伤导致的细胞活力损失的作用,而且对多种疾病具有防治效果,如改善糖尿病相关指征、抑制炎性疾病、弱化肝纤维化发展、诱导肝癌细胞凋亡、抗病毒以及其他多种效应。异荭草素的结构式如下所示：
本发明采用的水仙苷，其化学结构式如下所示：
本发明通过实验得出，采用异荭草素和水仙苷进行复配，具有显著的抗紫外辐射功效。具体表现为：一方面，上述组合能提供主动的光防护作用，本发明的组合物应用到皮肤上，当紫外光照射皮肤时，组合物能对紫外光进行有效吸收，可有效阻隔紫外光，从而削弱了紫外光对皮肤的伤害，保护皮肤免受紫外线辐射影响。上述作用的原理为：异荭草素和水仙苷结构中含有不饱和的共轭体系，在紫外区具有较强的吸收能力，上述组合在受到紫外线照射时，可通过共轭体系中的电子转移消耗能量，将高能紫外光转化为无害的光波或热能释放，达到防紫外光的效果。
另一方面，上述组合具有较强的体外抑制AP-1和NF-κB活性作用，能够有效下调AP-1和NF-κB的表达，从而降低紫外光照射的光老化HaCaT细胞分泌MMP-1和IL-6、TNF-α，保护I型胶原蛋白的不被降解并一定程度上刺激Ⅰ型胶原的产生，逆转光老化状态，从而预防或者修复紫外线辐射引起的皮肤光老化或皮肤癌变等皮肤问题。同时本发明的组合物经细胞实验，表现出较好的安全性、低毒性且副作用少。上述作用的原理为：组合物能与MAPK信号通路的AP-1蛋白以及NF-κB通路的NF-κB蛋白有较好结合，能下调MMP-1的表达和分泌，并且组合物能与MAPK信号通路和NF-κB信号通路共同调节MMP-1蛋白的含量和活性，避免MMP-1降解皮肤细胞外基质成分。此外，组合物与AP-1、NF-κB和MMP-1蛋白均有较好的结合效果。
本发明还通过实验对比得出，异荭草素和水仙苷的结合效果优于日化领域常用于抗皮肤光老化的维生素C，说明组合物具有优异的保护皮肤免受紫外辐射作用，并且通过调控MAPK和NF-κB信号通路发挥保护皮肤免受紫外线辐射引起的皮肤光老化并逆转光老化的作用。
进一步地，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:4，优选为1:1-1:2，更优选为1:1。
发明人经过反复试验得出，本发明的组合物中，当异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:4时，上述抗紫外辐射功效明显；当异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:2时，组合物的抗紫外辐射功效更优；当异荭草素和水仙苷的重量比为1:1时，组合物的抗紫外辐射功效最优。
进一步地，所述皮肤外用组合物中，所述异荭草素和水仙苷的总浓度为0.625-5μM，优选为1.25μM。
发明人经过反复试验得出，本发明的组合物中，异荭草素和水仙苷的总浓度为0.625-5μM时，组合物的抗紫外辐射功效明显；当异荭草素和水仙苷的总浓度为1.25μM时，组合物的抗紫外辐射功效最优。
进一步地，所述异荭草素和水仙苷的总含量为0.00001-10％，基于所述皮肤外用组合物的总重量。
应当理解，上述总含量为异荭草素与水仙苷两者的含量之和。
当本发明的皮肤外用组合物为化妆品组合物，本发明除了上述组分外，本发明的皮肤外用组合物还可以任选地包含化妆品组合物的常用成分，常用成分中包括媒介物、表面活性剂、护肤活性成分和化妆品辅料等本领域已知的任何成分，且可根据具体需要选择其类型和用量。通常，常用成分的含量为1-95％重量，基于所述皮肤外用组合物的总重量计。
本发明中，所述媒介物是本领域已知的，所述媒介物包括但不限于稀释剂、分散剂或载体等，其包括但不限于乙醇、丁二醇、双丙甘醇等。本领域技术人员可根据实际需要选择其类型和用量。通常，在本发明的皮肤外用组合物中，所述媒介物占所述常用成分总重量的1-20％。
所述表面活性剂是常用于化妆品的任何类型的表面活性剂，其用于降低界面的表面张力，表面活性剂可达到清洁、乳化、稳定体系之目的。所述表面活性剂包括但不限于脂肪酸皂(如月桂酸钠、棕榈酸钠等)、高级烷基硫酸盐(如月桂基硫酸钠等)、月桂基二甲氨基乙酸甜菜碱、烷基甜菜碱、酰氨基甜菜碱、脱水山梨糖醇脂肪酸酯类(如脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单异硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯)、PEG-烷基醚类(如PEG-2-辛基十二烷基醚等)、蔗糖脂肪酸酯等中的一种或多种组合物。对于具体的表面活性剂，本领域技术人员可以根据所需选择其类型及用量。通常，在本发明的皮肤外用组合物中，所述表面活性剂占所述常用成分总重量的1-45％。
所述护肤活性成分是本领域已知的，其包括但不限于保湿剂、皮肤调理剂、润肤剂等。所述保湿剂包括但不限于甘油、海藻糖、蔗糖、丙二醇、1,2-戊二醇、甘露醇、甘油聚醚-26、鼠李糖、棉子糖、赤藓醇、聚乙二醇-8、聚乙二醇-32、甲基葡糖醇聚醚-10、聚谷氨酸钠、木糖醇、尿素、水解小核菌胶、聚谷氨酸钠、甘油葡糖苷、PPG-10甲基葡糖醚、出芽短梗酶多糖、银耳多糖等中的一种或多种组合。通常，在本发明的皮肤外用组合物中，所述保湿剂占所述常用成分总重量的1-30％。
所述皮肤调理剂可用于保湿、抗皱、祛斑、祛痘、控油等功效。所述皮肤调理剂包括但不限于植物甾醇/辛基十二醇月桂酰谷氨酸酯、姜黄根提取物、神经酰胺2、神经酰胺3、水解透明质酸钠、乙酰植物鞘氨醇、胆甾醇、尿囊素、白桦树皮提取物、氢化卵磷脂、乙酰植物鞘氨醇、花榈木树皮提取物、毛喉鞘蕊花根提取物、红没药醇、胡椒籽提取物、泛醌、吡哆素二棕榈酸酯、吡哆素二辛酸酯、燕麦仁提取物等中的一种或多种组合。通常，在本发明的皮肤外用组合物中，所述皮肤调理剂占所述常用成分总重量的0.05-50％。
所述润肤剂包括但不限于甘油三(乙基己酸)酯、月桂酰肌氨酸异丙酯、辛酸/癸酸甘油三酯、葡萄籽油、白池花籽油、牛油果树果脂、鲸蜡醇、聚二甲基硅氧烷、胡莫柳酯、角鲨烷、硬脂醇、肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻醇、氢化聚癸烯、毛瑞榈果油、向日葵籽油、异十六烷、霍霍巴油、羊毛脂、石蜡、微晶蜡、蜂蜡等中的一种或多种组合。通常，在本发明的皮肤外用组合物中，所述润肤剂占所述常用成分总重量的0.05-45％。
所述化妆品辅料包括但不限于乳化剂、增稠剂、防腐剂、香料等。
所述乳化剂包括但不限于山梨坦橄榄油酸酯、硬脂醇聚醚-21、PEG-60氢化蓖麻油、甘油硬脂酸酯/PEG-100硬脂酸酯、PPG-13-癸基十四醇聚醚-24、鲸蜡硬脂基葡糖苷、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、鲸蜡硬脂基葡糖苷、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-10二油酸酯等中的一种或多种组合。本领域技术人员可根据需要具体选择其类型和用量。
所述增稠剂包括但不限于羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆、黄原胶、阿拉伯胶等中的一种或多种组合。
所述防腐剂包括但不限于羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇、苯甲醇、苯乙醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、氯苯甘醚等中的一种或多种。通常，在本发明的皮肤外用组合物中，所述防腐剂占所述常用成分总重量的0.01-3％。
当本发明的皮肤外用组合物为药物组合物，本发明除了上述组分外，本发明的皮肤外用组合物还可以任选地包含药物组合物的常用成分，常用成分中包括药物活性成分等本领域已知的任何成分，且可根据具体需要选择其类型和用量。所述药物活性成分是本领域已知的用于化妆及护肤的成分。
本发明的皮肤外用组合物制备可以通过本领域已知的任何合适的方法制备。例如，可使用本领域中常用的溶解槽、乳化锅、分散器、输送泵等容器来制备。制备时，先将水溶性物质投入水相溶解釜，将油溶性物质投入油相溶解釜，分别将两个釜的温度加热至75-80℃左右，其中对于易结块的原料，可先用分散器将其预分散。待溶解完成后将油相和水相输送至乳化锅中，均质乳化约5-30分钟。乳化完成后将料体温度降至常温，任选加入香精(如有需要)、防腐剂等。相关检测指标都合格后方可灌装出货。
以上制备方法可根据剂型要求进行删减或调整。可根据需要制备液体、乳液、膏、霜或凝胶等各种剂型的药物组合物或者化妆品组合物。
本发明的组合物的使用方法为：取适量本产品，涂抹至全身肌肤，尤其是脸部及手部皮肤，按摩至完全吸收即可。
第二方面，本发明提供了一种提高皮肤外用组合物抗紫外辐射功效的方法，将异荭草素和水仙苷的组合加入到皮肤外用组合物中；其中，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:5。
基于第一方面的记载，通过将异荭草素和水仙苷的组合物添加到皮肤外用组合物中，使得本发明的皮肤外用组合物具有显著的抗紫外辐射功效。
进一步地，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:4，优选为1:1-1:2，更优选为1:1。
进一步地，所述皮肤外用组合物中，所述异荭草素和水仙苷的总浓度为0.625-5μM，优选为1.25μM。
进一步地，所述异荭草素和水仙苷的总含量为0.00001-10％，基于所述皮肤外用组合物的总重量。
第三方面，本发明提供了如第一方面所述的皮肤外用组合物在制备用于修复紫外辐射引起的皮肤损害的产品中的用途。
具体地，所述紫外辐射引起的皮肤损害包括皮肤光老化、皮肤光损伤、皮肤真皮衰老中的至少一种。具体地，所述产品的剂型为皮肤外用制剂，该皮肤外用制剂的剂型包括但不限于液体、乳液、膏、霜或凝胶。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明采用异荭草素和水仙苷进行复配，具有显著的抗紫外辐射功效。具体表现为：一方面，组合物能提供主动的光防护作用，本发明的组合物应用到皮肤上，当紫外光照射皮肤时，组合物能对紫外光进行有效吸收，可有效阻隔紫外光，从而削弱了紫外光对皮肤的伤害，保护皮肤免受紫外线辐射影响；另一方面，组合物具有较强的体外抑制AP-1和NF-κB活性作用，能够有效下调AP-1和NF-κB的表达，从而降低紫外光照射的光老化HaCaT细胞分泌MMP-1和IL-6、TNF-α，保护I型胶原蛋白的不被降解并一定程度上刺激Ⅰ型胶原的产生，逆转光老化状态，从而预防或者修复紫外线辐射引起的皮肤光老化或皮肤癌变等皮肤问题。
本发明附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，这些将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为实施例1中不同配比的异荭草素和水仙苷对紫外光的吸收结果；
图2为实施例2中不同浓度的异荭草素和水仙苷组合对HaCaT细胞存活率的影响结果；
图3为实施例3中不同药物对光老化模型HaCaT细胞活力的影响结果；
图4A为实施例4中不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞AP-1表达量的影响；
图4B为实施例4中不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞MMP-1分泌的影响；
图5A为实施例5中不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞NF-κB表达的影响；
图5B为实施例5中不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞IL-6分泌的影响；
图5C为实施例5中不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞TNF-α分泌的影响；
图6为实施例6中的不同药物对紫外光照射的光老化HaCaT细胞I型胶原分泌的影响。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例和附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，以下将描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中的实验试剂和实验仪器均可通过市售购得。
本发明将通过以下实施例对异荭草素和水仙苷复配后的抗紫外辐射效果进行验证。
实施例1
通过对紫外光的吸收度筛选异荭草素和水仙苷组合的比例
1.1实验仪器及试验试剂
1.1.1实验仪器：
紫外分光光度计(型号：UV-1500，上海美析仪器有限公司)；电子天平(型号：SQP，SECURA225D-CN，赛多利斯科学仪器有限公司)；移液枪(10μL，100μL，200μL，1000μL)；
1.1.2实验试剂：
PBS(批号：20210922，北京索莱宝科技有限公司)；无水乙醇(批号：2017110128，天津致远化学试剂有限公司)；乙酸乙酯(批号：L402035，CAS号：141-78-6，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；异荭草素(CAS：4261-42-1，98％，成都曼斯特生物科技有限公司，批号MUST-19091910)；水仙苷(CAS：604-80-8，98％，成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-19090407)；奥克立林(广东古莱特新材料科技有限公司，CAS号：6197-30-4)。
1.2实验步骤和实验结果
1.2.1紫外特征吸收曲线的测定
将异荭草素、水仙苷与阳性对照奥克立林用一定比例的水：乙醇配制成不同浓度的溶液(10μg/mL，20μg/mL，50μg/mL)，测定其在200-800nm的紫外吸收曲线，实验结果如表1及图1所示。
1.2.2实验结果
表1：异荭草素和水仙苷不同配比对紫外线吸收结果
注：上表中，Y为异荭草素，S为水仙苷，以下实施例同。
根据表1及图1的实验结果可得，异荭草素和水仙苷在200～467nmnm的波段内，对紫外吸收性能较好，在270-273nm处的吸光度达到最高，在350-360nm处随浓度增加吸收强度增加；奥克立林在200～379nm的波段内对紫外吸收性能较好，主要在301nm处的吸光度达到最高。由实验数据可知，异荭草素对紫外光在整个UVB(280～320nm)、UVA(320nm～400nm)区域拥有良好的紫外线吸收性能，整体的吸收强度优于行业公知的奥克立林，是抵抗整个UVB、UVA区域紫外辐射的良好紫外整理剂，甚至在部分的有害蓝光区域(385～445nm)也有较好的吸收。
50μg/mL的样品浓度时，组合物(Y:S＝1:1)能够增加总体的吸光度范围，同时总体的吸光度值有较好的协同相加作用，在258nm与358nm的紫外吸收在强度分别为2.240和2.0926，均明显大于奥克立林的吸收强度1.869，且紫外吸收曲线面积为251.251＞139.281(奥克立林紫外吸收曲线面积)，是奥克立林吸收面积的1.80倍。在相同浓度下，组合物(Y:S＝1:1)在紫外吸收波范围、吸收强度、吸收总面积方面均表现出协同相加作用，具有更优异的效果，表明组合物可作为潜在的抗紫外辐射剂的能力，可应用于皮肤抗紫外辐射剂中。
上述实验结果的作用机理为：异荭草素和水仙苷结构中含有不饱和的共轭体系，在紫外区具有较强的吸收能力，上述组合在受到紫外线照射时，可通过共轭体系中的电子转移消耗能量，将高能紫外光转化为无害的光波或热能释放，达到防紫外光的效果。
基于实施例1的实验结果，进一步的研究组合物(Y:S＝1:1)对HaCaT角质形成细胞的作用，值得注意的是，以下实施例中所指组合物均指异荭草素：水仙苷＝1：1。
实施例2
进一步验证组合物(异荭草素：水仙苷＝1：1)对HaCaT角质形成细胞的毒性的影响
2.1实验仪器耗材
2.1.1主要仪器
HH·CP-01二氧化碳细胞培养箱(上海博讯实业有限公司)；IX73倒置荧光显微镜(日本Olympus公司)；SW-CJ-1F洁净工作台(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)；L420-A低速台式离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)；iMark酶标仪(美国BIO-RAD公司)；UV-340A路昌紫外线强度计(路昌电子有限公司)；DHG-9053A鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；BKQ-Z30I立式压力蒸汽灭菌器(山东博科消毒设备有限公司)；HH-S21-6电热恒温水浴锅(上海新苗医疗器械制造有限公司)；96孔细胞培养板(康宁公司)。
2.1.2实验试剂
本发明主要适用于皮肤外用药的研究，目前延缓皮肤衰老外用产品原料使用中，维生素C和乙酰基六肽-8是公认的具有较好的延缓皮肤衰老的成分，故实验以维生素C和乙酰基六肽-8作为阳性对照，考察光老化模型实验的有效性。
异荭草素(CAS：4261-42-1，98％，成都曼斯特生物科技有限公司，批号MUST-19091910)；水仙苷(CAS：604-80-8，98％，成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-19090407)；乙酰基六肽-8(厂家：汉肽生物医药集团有限公司，批号：A-2104001-4)；维生素C(上海麦克林生化科技有限公司，批号C12453039)；胰蛋白酶-EDTA(0.25％)(gibco by LifeTechnologies Corporation，批号25200072)；青霉素-链霉素(gibco by LifeTechnologies Corporation，批号15140122)；DMSO(苏州美仑生物科技有限公司，批号O1028A)；噻唑兰(上海麦克林生化科技有限公司，批号T6126)；胎牛血清(gibco by LifeTechnilogies Corporation，批号2177358)；DMEM培养基(北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司，批号8121107)；PBS缓冲液(赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司，批号8121023)；其余试剂均为分析纯，水为去离子水。
2.1.3细胞
HaCat人永生化表皮细胞(上海中乔新舟生物科技有限公司，批号ZQ0044)。
2.1.4统计数据分析
本实施例中所得数据采用graphpad prism8.0软件进行分析。各组数据均以表示，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.05表示为#，p-value＜0.01表示为##，p-value＜0.001表示为###，样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.05表示为*，p-value＜0.01表示为**。
2.2、实验步骤以及实验结果如下：
2.2.1储备液制备
采用DMSO作为溶剂制备组合物、槲皮素、白杨素、杨梅苷的药物储备液；用PBS制备阳性对照维生素C的储备液；采用水：甘油＝1:1的溶液制备乙酰基六胜肽-8储备液。
2.2.2配制5mg/ml的MTT溶液
精密避光称取50.00mg的MTT粉末，放入10mL离心管中，加10ml PBS(0.01M，PH7.4)使其完全溶解，用0.22μm孔径硝酸纤维素膜过滤除菌，分装，标明试剂名称以及配制日期等，-20℃避光冻存备用。
2.2.3细胞培养及给药
将HaCaT细胞(2.5万每孔)接种在96孔板中，放入培养箱中培养过夜，当HaCaT细胞达到约80％融合时，用DMED培养基将药物储备液稀释至浓度为0，0.625，1.25，2.5，5，10，20μM，吸弃旧培养基，每孔加入100μL含药培养基继续培养。
2.2.4MTT法检测药物的细胞毒性
培养24小时后，吸出含药培养基，PBS洗涤2次5mg/ml MTT用空白DMEM培养基稀释成0.5mg/ml，每个孔加100μL浓度为0.5mg/ml的MTT溶液，培养箱中培养3小时，小心吸出液体，每孔加入100μL的DMSO，充分溶解10分钟后用酶标仪在490nm处检测OD值。
2.2.5实验结果
实验结果如表2和图2所示。
表2：组合物不同浓度对HaCaT细胞存活率的影响结果
Control 0.625μM 1.25μM 2.5μM 5μM 10μM 20μM
异荭草素(％) 100.00 97.89 95.43 96.07 95.16 91.34 90.36
水仙苷(％) 100.00 92.73 91.34 85.81 85.46 85.53 85.02
组合物(％) 100.00 93.77 91.73 90.80 89.32 88.12 87.89
维生素C(％) 100.00 92.22 103.41 105.68 109.52 113.45 110.34
乙酰基六肽-8(％) 100.00 91.45 92.45 95.45 96.23 99.36 101.23
注：组合物为Y:S＝1:1，以下组合物均指此比例。
根据表2和图2的实验结果所示，维生素C、乙酰基六胜肽-8以及本发明提供的组合物在药物浓度0.625～20μM时，HaCaT细胞的存活率均＞85％，没有表现出对细胞的毒性作用，表现出较好的安全性。
基于实施例2的实验结果，因本发明的组合物表现出对细胞的高度温和安全性，对组合物干预的紫外光老化模型HaCaT细胞作用进行进一步研究。
实施例3
进一步验证组合物(异荭草素：水仙苷＝1：1)对光老化模型HACaT细胞活力的影响
3.1实验仪器耗材
3.1.1主要仪器
同实施例2中2.1.1主要仪器。
3.1.2实验试剂
同实施例2中2.1.2实验试剂。
3.1.3细胞
同实施例2中2.1.3细胞。
3.1.4统计数据分析
本实施例中所得数据采用graphpad prism8.0软件进行分析。各组数据均以表示，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****；组合物与异荭草素组比较，显著性以+表示，p-value＜0.01表示为++；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.0001表示为@@@@。
3.2实验步骤和实验结果如下：
根据实施例2的实验结果确定组合物低剂量、中剂量和高剂量的分别为0.625μM、1.25μM和5μM，采用MTT实验检测组合物对光老化HaCaT细胞活力的影响，具体实验步骤如下。
3.2.1分组
设置control组、UVA组、维生素C组(阳性药物组，根据实施例2的实验结果，维生素C浓度设置为5μM)、乙酰基六肽-8组(阳性药物组，根据实施例2的实验结果，乙酰基六肽-8浓度设置为5μM)、组合物低剂量组(0.625μM)、组合物中剂量组(1.25μM)和组合物高剂量组(5μM)，异荭草素、水仙苷组药物浓度根据实施例2设置为1.25μM，每组设置6个复孔。
3.2.2细胞培养与给药
将HaCaT细胞(2.5万每孔)接种在96孔板中，培养24小时，当HaCaT细胞约60％-70％融合度时给药，control组和UVA组每孔加100μL不含药物的DMEM培养基，用DMEM培养基稀释各组的药物，给药组每孔加100μL含药物的DMEM培养基，给药后继续培养6小时。
3.2.3用UVA建立光老化HaCaT细胞模型
培养结束，吸弃旧的培养基，PBS洗涤2次，每孔加100uL PBS覆盖细胞，control组用铝箔纸覆盖，进行UVA照射，灯管与细胞培养板的距离为9cm，照射剂量为12.5J/cm2。照射结束，吸出PBS，control组和UVA组每孔加入100μL不含药物的DMEM培养基，给药组每孔加100μL含药物的DMEM培养基，继续培养24小时。
3.2.4MTT实验具体步骤
培养结束，吸弃旧的DMEM培养基，PBS洗涤2次，用无血清DMEM培养基将5mg/mL的MTT稀释至0.5mg/ml，每孔加100μL浓度为0.5mg/mL的MTT溶液，放入培养箱培养3-4小时，小心吸出液体，每孔加入100μL的DMSO，充分溶解10分钟，用酶标仪在490nm处检测OD值，计算细胞活力。
3.2.5实验结果
实验结果如表3和图3所示。
表3：不同药物对光老化模型HaCaT细胞活力的影响结果
注：用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****；组合物与异荭草素组比较，显著性以+表示，p-value＜0.01表示为++；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.0001表示为@@@@。
采用MTT实验检测组合物对光老化细胞活力的影响，实验结果表3和图3所示。与UVA组相比，组合物低剂量组(0.625μM)、组合物中剂量组(1.25μM)、组合物高剂量组(5μM)均可显著提高光老化HaCaT细胞的活力(三组P值均＜0.0001****)。组合物低、中、高剂量组对光老化模型HACaT细胞存活率的上调率分别为68.11％、72.09.03％、63.98.81％，表现出对光老化HaCaT细胞保护与逆转作用。与维生素C组(阳性药物组)或乙酰基六肽-8组(阳性药物组)相比，组合物低、中剂量组提高光老化HaCaT细胞的活力没有显著性差异(P＞0.5)。组合物的中剂量组与异荭草素比较，其对细胞存活率有显著性差异(P＜0.01++)；组合物中剂量组与水仙苷比较，对细胞的存活率有极显著性差异(P＜0.0001@@@@)。
上述实验结果表明，组合物中剂量组浓度为1.25μM时，与同浓度的异荭草素组和水仙苷组比较具有显著性，表现出很好的协同相加作用，能够很好的保护与逆转紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞。
基于实施例3的实验结果，进一步研究组合物对光老化模型HaCaT细胞AP-1通路的影响。
实施例4
紫外光老化直接原因是长期的紫外照射，MMPs分泌过量或MMP-1活性状态，导致胶原蛋白等胞外基质降解或胶原断裂，从而引起了真皮结构的坍塌，而靶蛋白AP-1作为MMP-1的上游调节蛋白，抑制AP-1活性可下调MMP-1的表达。因此，测定AP-1的表达量与下游的MMP-1含量
实验仪器耗材
4.1.1主要仪器
同实施例2中2.1.1主要仪器。
4.1.2实验试剂
同实施例2中2.1.2实验试剂。
其中，转录因子(AP-1)酶联免疫试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，货号YJ037205,06/2022)
人基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号ml038199)；
4.1.3细胞
同实施例2中2.1.3细胞。
4.1.4统计数据分析
本实施例中所得数据采用graphpad prism8.0软件进行分析。各组数据均以表示，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****；组合物与异荭草素组比较，显著性以+表示，p-value＜0.01表示为++；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.0001表示为@@@@。
4.2实验步骤和实验结果如下：
根据实施例2的实验结果确定组合物低剂量、中剂量和高剂量的分别为0.625μM、1.25μM和5μM，采用酶联免疫法检测组合物对光老化HaCaT细胞AP-1通路的影响，具体实验步骤如下。
4.2.1分组
设置control组、UVA组、维生素C组(阳性药物组，根据实施例2的实验结果，维生素C浓度设置为5μM)、乙酰基六肽-8组(阳性药物组，根据实施例2的实验结果，乙酰基六肽-8浓度设置为5μM)、组合物低剂量组(0.625μM)、组合物中剂量组(1.25μM)和组合物高剂量组(5μM)，异荭草素、水仙苷组药物浓度根据实施例2设置为1.25μM，每组设置6个复孔。
4.2.2细胞培养与给药
将HaCaT细胞(2.5万每孔)接种在96孔板中，培养24小时，当HaCaT细胞约60％-70％融合度时给药，control组和UVA组每孔加100μL不含药物的DMEM培养基，用DMEM培养基稀释各组的药物，给药组每孔加100μL含药物的DMEM培养基，给药后继续培养6小时。
4.2.3用UVA建立光老化HaCaT细胞模型
培养结束，吸弃旧的培养基，PBS洗涤2次，每孔加100uL PBS覆盖细胞，control组用铝箔纸覆盖，进行UVA照射，灯管与细胞培养板的距离为9cm，照射剂量为12.5J/cm2。照射结束，吸出PBS，control组和UVA组每孔加入100μL不含药物的DMEM培养基，给药组每孔加100μL含药物的DMEM培养基，继续培养24小时。
4.2.4检测药物对光老化HaCaT细胞AP-1表达的影响及分泌MMP-1的影响
培养结束后，用离心管收集每组的细胞，破碎，离心后保留上清作为转录因子(AP-1)待测样品。
培养结束后，用离心管收集每组的细胞培养上清液，细胞上清液离心后保留上清作为人基质金属蛋白酶1(MMP-1)待测样品。
按照转录因子(AP-1)酶联免疫试剂盒、人基质金属蛋白酶1(MMP-1)ELISA试剂盒说明书操作，最后用酶标仪在450nm处检测OD值。
4.2.5实验结果
实验结果如表4、表5、图4A和图4B所示。
表4：不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞转录因子AP-1表达的影响
表5：不同药物对紫外光照射光老化模型HaCaT细胞分泌MMP-1的影响
注：用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****；组合物与异荭草素组比较，显著性以+表示，p-value＜0.1表示为+；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.01表示为@@。
研究不同药物对光老化HaCaT细胞AP-1通路的影响，结果见表4、表5、图4A和图4B所示，由实验结果可得，与Control组比较，模型组的AP-1含量差异具有极显著性差异(p-value＜0.0001表示为####)，表明建模成功；与模型组相比，组合物低、中、高剂量组可有效抑制光老化HaCaT细胞中的AP-1表达量，具有显著性差异(P＜0.0001)，其中组合物中剂量组AP-1下调率达到25.85％＞17.60％(异荭草素组下调率)，与异荭草素组、水仙苷组的下调率比较具有由显著性(P＜0.01)，表现出了组合物具有较好的协同相加作用，与维生素C、乙酰基六胜肽-8相比，本发明的组合物无显著性差异。
与Control组比较，MMP-1含量差异具有极显著性差异(p-value＜0.001表示为###)，表明建模成功；与模型组相比，组合物低、中、高剂量组可有效抑制光老化HaCaT细胞分泌MMP-1，具有显著性差异(P＜0.001)，其中组合物中剂量组MMP-1下调率达到22.69％，与异荭草素组、水仙苷组比较，组合物具有较好的协同相加作用，能够显著降低MMP-1的分泌量，结果具有显著性(P＜0.1)。与维生素C、乙酰基六胜肽-8相比，本发明的组合物无显著性差异。
基于表4、表5、图4A和图4B的实验结果可得，本发明的组合物能够较好的抑制AP-1表达，效果优于单独的异荭草素组、水仙苷组和阳性对照维生素C，而靶蛋白AP-1作为MMP-1的上游调节蛋白，抑制AP-1活性可下调MMP-1的表达。实验结果表明，本发明的组合物可显著降低光老化HaCaT细胞AP-1表达量，通过下调MMP-1的表达，减少MMP-1含量，从而逆转紫外线辐射引起的细胞损害。
组合物中剂量组对AP-1、MMP-1下调率高于阳性对照维生素C和乙酰基六胜肽-8，这提示组合物具有更大的潜力与AP-1蛋白结合并抑制AP-1通路的活性，进而减少因紫外光照射产生过量MMP-1对胶原蛋白等皮肤细胞外基质的降解，从而保护细胞免受紫外照射的伤害。
基于实施例3和实施例4的实验结果，进一步研究组合物对光老化模型HaCaT细胞NF-κB通路的影响。
实施例5
5.1实验仪器耗材
5.1.1主要仪器
同实施例2中2.1.1主要仪器。
5.1.2实验试剂
同实施例2中2.1.2实验试剂。
核因子κB(NF-κB)酶联免疫试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，06/2022，货号YJ063331)；
人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号ml058097)；
人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号ml077385)。
5.1.3细胞
同实施例2中2.1.3细胞。
5.1.4统计数据分析
本实施例中所得数据采用graphpad prism8.0软件进行分析。各组数据均以表示，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.05表示为#，p-value＜0.01表示为##，p-value＜0.001表示为###，样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.05表示为*，p-value＜0.01表示为**。
5.2实验步骤和实验结果如下：
根据实施例2的实验结果确定组合物低剂量、中剂量和高剂量的分别为0.625μM、1.25μM和5μM，采用酶联免疫法检测组合物对光老化HaCaT细胞NF-κB通路的影响，具体实验步骤如下。
5.2.1分组
设置control组、UVA组、维生素C组(阳性药物组，根据实施例2的实验结果，维生素C浓度设置为5μM)、乙酰基六肽-8组(阳性药物组，根据实施例2的实验结果，乙酰基六肽-8浓度设置为5μM)、组合物低剂量组(0.625μM)、组合物中剂量组(1.25μM)和组合物高剂量组(5μM)，异荭草素、水仙苷组药物浓度根据实施例2设置为1.25μM，每组设置6个复孔。
5.2.2细胞培养与给药
将HaCaT细胞(2.5万每孔)接种在96孔板中，培养24小时，当HaCaT细胞约60％-70％融合度时给药，control组和UVA组每孔加100μL不含药物的DMEM培养基，用DMEM培养基稀释各组的药物，给药组每孔加100μL含药物的DMEM培养基，给药后继续培养6小时。
5.2.3用UVA建立光老化HaCaT细胞模型
培养结束，吸弃旧的培养基，PBS洗涤2次，每孔加100uL PBS覆盖细胞，control组用铝箔纸覆盖，进行UVA照射，灯管与细胞培养板的距离为9cm，照射剂量为12.5J/cm2。照射结束，吸出PBS，control组和UVA组每孔加入100μL不含药物的DMEM培养基，给药组每孔加100μL含药物的DMEM培养基，继续培养24小时。
5.2.4检测药物对光老化HaCaT细胞NF-κ-B表达以及细胞分泌IL-6、TNF-α的影响。
培养结束后，用离心管收集每组的细胞，破碎，离心后保留上清作为光老化HaCaT细胞NF-κ-B表达待测样品。
培养结束后，用离心管收集每组的细胞培养上清液，细胞上清液离心后保留上清作为细胞分泌IL-6、TNF-α待测样品。
按照核因子κB(NF-κB)酶联免疫试剂盒、人白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒、人肿瘤坏死因子α(TNF-α)说明书操作，最后用酶标仪在450nm处检测OD值。
5.2.5实验结果
实验结果如表6、表7、表8、图5A、图5B和图5C所示。
表6：不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞NF-κB表达的影响
注：表6中，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****；组合物与异荭草素组比较，显著性以+表示，p-value＜0.001表示为+++；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.0001表示为@@@@
表7：不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞分泌IL-6的影响
注：表7中，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****，p-value＜0.001表示为***，p-value＜0.01表示为**；组合物与异荭草素组比较，显著性以+表示，p-value＜0.1表示为+；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.01表示为@@。
表8：不同药物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞分泌TNF-α的影响
注：表8中，用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.0001表示为####，样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****。
研究不同药物对紫外光照射的光老化HaCaT细胞NF-κB通路影响，结果分别见表6和图5A、表7和图5B以及表8和图5C。由表6可知，与Control组比较，模型组NF-κB的表达量差异具有极显著性差异(P＜0.01)，表明实验模型造模成功；样品组与模型组相比，组合物低、中、高剂量组能抑制光老化HaCaT细胞NF-κB表达量，差异具有极显著性差异(P＜0.001)。样品组与维生素C相比，组合物中剂量组对光老化HaCaT细胞NF-κB表达下调率分别为25.89％，优于异荭草素组、水仙苷组，呈现协同增效的抑制光老化HaCaT细胞NF-κB表达。
与Control组比较，模型组IL-6、TNF-α的分泌量差异具有极显著性差异(P＜0.0001)，表明实验模型造模成功；样品组与模型组相比，组合物低、中、高剂量组能抑制光老化HaCaT细胞分泌IL-6、TNF-α，差异具有极显著性差异(P＜0.0001)。样品组与维生素C相比，组合物中剂量组对光老化HaCaT细胞分泌IL-6下调率分别为21.35％，18.77％，优于异荭草素组、水仙苷组；表明组合物能好地抑制光老化HaCaT细胞分泌IL-6、TNF-α。
本发明组合物中剂量组对NF-κB的抑制效果优于阳性对照维生素C，而靶蛋白NF-κB作为IL-6、TNF-α的上游调节蛋白，组合物能够很好地下调NF-κB靶蛋白表达，从而下调IL-6和TNF-α的表达。进一步，减少炎症因子刺激AP-1和NF-κB受体活化的负反馈发生，从而进一步产生MMP-1，减少胞外基质的降解，从而延缓或修复或逆转光老化。
综上所述，本发明的组合物具有潜在抑制光老化模型HaCaT细胞AP-1和NF-κB通路的作用，进而减少MMP-1以及切断炎症因子诱导的AP-1和NF-κB受体活化的负反馈，发挥保护并逆转光老化模型HaCaT细胞免受紫外辐射的损害。
胶原蛋白使皮肤具有弹性和强度，是人体皮肤结构的重要成分，其中主要是Ⅰ型胶原(80-90％)和Ⅲ型胶原(10-15％)组成。致皮肤真皮结构改变的原因有很多种，其中，皮肤受紫外线辐射损害后，激活体内的基质金属蛋白酶(MMPs)，可导致皮肤真皮中支撑皮肤结构的胶原蛋白和弹性蛋白被过度降解，从而使皮肤出现皱缩、无弹性等皮肤结构坍塌症状。基于此，本发明在上述实施例的基础上进一步验证本发明的组合物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞Ⅰ型胶原的影响。
实施例6
组合物对紫外光照射的光老化模型HaCaT细胞Ⅰ型胶原的影响
6.1实验仪器耗材
6.1.1主要仪器
同实施例2中2.1.1主要仪器。
6.1.2实验试剂
同实施例2中2.1.2实验试剂。
人Ⅰ型胶原蛋白(Col I)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号：12/2020)；乙酰基六肽-8(厂家：汉肽生物医药集团有限公司，批号：A-2104001-4)
6.1.3细胞
同实施例1中2.1.3细胞。
6.1.4统计数据分析
本实施例中所得数据采用graphpad prism8.0软件进行分析。各组数据均以表示，用one-wayANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.01表示为##，样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.001表示为***，阳性药组与样品组比较，显著性以+表示，p-value＜0.001表示为+++。
6.2、实验步骤和实验结果
6.2.1细胞培养及给药
将HaCaT细胞(2.5万每孔)接种在96孔板中，放入培养箱中培养过夜，当HaCaT细胞达到约60％融合时，用DMED培养基将药物储备液稀释至浓度分别为1.25μM、5μM和20μM。设置模型组、空白对照组、阳性对照组和药物组，每组设置6个复孔。吸弃旧培养基，模型组和空白对照组加入不含药物的细胞培养基，阳性对照组加入含维生素C的细胞培养基，给药组每孔加入100μL含不同浓度药物的细胞培养基，继续培养6小时。
6.2.2用UVA建立光老化HaCaT细胞模型
吸弃旧培养基，PBS洗1次，每孔加100uL PBS覆盖细胞，UVA照射，照射剂量为12.5J/cm2，其中空白对照组用锡箔纸覆盖。照射结束，吸出PBS，模型组和空白对照组加入不含药物的细胞培养基，阳性对照组加入含维生素C、乙酰基六肽-8的细胞培养基，给药组每孔加入100μL含不同浓度药物的细胞培养基，放回培养箱继续培养24h。
6.2.3检测药物对光老化HaCaT细胞Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响
培养结束后，用离心管收集每组的细胞培养上清液，细胞上清液离心后保留上清作为待测样品。按照人Ⅰ型胶原蛋白(Col I)ELISA试剂盒说明书操作，最后用酶标仪在450nm处检测OD值。
6.2.4实验结果
实验结果如表9和图6所示。
表9：不同药物对光老化HaCaT细胞分泌Ⅰ型胶原蛋白的影响
注：用one-way ANOVA方法进行统计分析时，Control组与模型组相比，显著性以#表示，p-value＜0.001表示为###；样品组与模型组相比，显著性以*表示，p-value＜0.0001表示为****，p-value＜0.001表示为***，p-value＜0.01表示为**；组合物与水仙苷组比较，显著性以@表示，p-value＜0.01表示为@@。
研究不同药物对光老化HaCaT细胞人Ⅰ型胶原蛋白(Col I)分泌量的影响。实验结果见表9及图6由实验结果可得，与control组比较，模型组的Ⅰ型胶原蛋白显著性减少，显著性差异(P＜0.001)，表明造模成功；与模型组相比，组合物低、中剂量组能抑制光老化HaCaT细胞Ⅰ型胶原蛋白(Col I)的降解，差异具有极显著性差异(P＜0.01)，其中，组合物中剂量组对Ⅰ型胶原蛋白上调率达到23.22％。与异荭草素组、水仙苷组相比，本发明的组合物能更好地减少光老化HaCaT细胞Ⅰ型胶原蛋白的降解，表现出较好的协同相加作用，这提示一定剂量的组合物具有优于单一的异荭草素、水仙苷的减少Ⅰ型胶原蛋白降解的作用。
组合物与control组比较，无显著性差异，表明组合物具有较好的减少紫外线照射的HaCaT细胞Ⅰ型胶原蛋白降解作用，即对紫外损伤的HaCaT细胞，可有效保护细胞胶原蛋白，减少胶原蛋白的降解。且组合物中剂量组Ⅰ型胶原蛋白含量数值上略高于control组，表明一定剂量的组合物不仅有助于保护胶原蛋白的降解，还可以刺激HaCaT细胞生成一定量的胶原蛋白，从而逆转光老化症状。
综上所述，本发明的组合物能够通过抑制AP-1通路和NF-κB通路，从而减少炎症因子表达，抑制负反馈发生，减少MMP-1的产生或者抑制MMP-1的活性；同时，在减少胶原蛋白降解并且一定程度上刺激胶原蛋白的产生而保护胶原结构，共同作用下达到预防或者修复紫外线辐射引起的光老化、光损伤或皮肤衰老等皮肤问题。
基于实施例1-实施例6的实验结果，本发明进一步提供了包含异荭草素和水仙苷的组合的护肤品组合物。
实施例7
在本实施例中，分别制备了具有下述配方的护肤品组合物，具体组成如表10所示。
表10：组合物1-5的组分及用量(％)
组分 组合物1 组合物2 组合物3 组合物4 组合物5
异荭草素 0.000005 0.05 2 1 5
水仙苷 0.000005 0.05 5 4 5
精氨酸 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
1,2-己二醇 2 2 2 2 2
卡波姆 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
尿囊素 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
甘油 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
透明质酸钠 2 2 2 2 2
对羟基苯乙酮 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
水 余量 余量 余量 余量 余量
上述组合物1-5的制备方法，包括以下步骤：
1)将精氨酸、1,2-己二醇、尿囊素、甘油、透明质酸钠、对羟基苯乙酮和部分水加热到75-80℃，使其完全溶解；降温后，边搅拌边加入卡波姆，至卡波姆溶胀好；将异荭草素和水仙苷按实际比例加入，搅拌溶解；
2)溶解完全后加水补足，控制异荭草素和水仙苷的总浓度为0.625-5μM，优选为1.25μM，搅拌均匀出样，得到护肤品组合物1-5。
上述护肤品组合物的使用方法为：取适量本产品，涂抹至全身肌肤，尤其是脸部及手部皮肤，按摩至完全吸收即可。
本实施例提供的护肤品组合物1-5具有优异的抗紫外辐射功效。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (11)

1.一种具有抗紫外辐射功效的皮肤外用组合物，其特征在于，所述皮肤外用组合物包括异荭草素和水仙苷的组合；
其中，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:5。
2.根据权利要求1所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:4。
3.根据权利要求2所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1-1:2。
4.根据权利要求2所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述异荭草素和水仙苷的重量比为1:1。
5.根据权利要求2所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述异荭草素和水仙苷的总浓度为0.625-5μM。
6.根据权利要求5所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述异荭草素和水仙苷的总浓度为1.25μM。
7.根据权利要求1-6任一项所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述异荭草素和水仙苷的总含量为0.00001-10％，基于所述皮肤外用组合物的总重量。
8.根据权利要求1所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述皮肤外用组合物为药物组合物或化妆品组合物。
9.根据权利要求8所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述皮肤外用组合物为化妆品组合物。
10.根据权利要求9所述的皮肤外用组合物，其特征在于，所述皮肤外用组合物为护肤化妆品组合物。
11.根据权利要求1-10任一项所述的皮肤外用组合物在制备用于修复紫外辐射引起的皮肤损害的产品中的用途。
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