CN115505020B

CN115505020B - 乌苏酸皂苷及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN115505020B
Application number: CN202110694590.2A
Authority: CN
Inventors: 李宁; 刘洋; 程卯生; 陈刚; 周地
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2021-06-23
Filing date: 2021-06-23
Publication date: 2023-09-12
Anticipated expiration: 2041-06-23
Also published as: CN115505020A

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及具有新颖结构的乌苏酸苷及其衍生物，制备方法和对炎症性肠病的治疗作用，在制备炎症性肠病治疗药物方面具有潜在应用。乌苏酸皂苷为3β,19α,23‑三羟基‑乌苏酸‑28‑O‑β‑D‑吡喃半乳糖苷(A1)或3β,19α,23‑三羟基‑乌苏酸‑28‑O‑α‑L‑吡喃阿拉伯糖苷(A2)，结构如下所示，本发明所述化合物及其药物组合和制剂是源于传统药物所含天然产物的结构修饰物，因而该类成分与临床治疗炎症性肠病药物如柳氮磺吡啶相比，本发明所涉及化合物不会干扰人体免疫系统。同时，本发明所述化合物及其药物组合和制剂能够靶向炎症性肠病关键靶标miR‑31‑5p从而起到疾病特异性的(炎症性肠病)治疗及癌变预防功效。

Description

乌苏酸皂苷及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及具有新颖结构的乌苏酸苷及其衍生物，制备方法和对炎症性肠病的治疗作用，在制备炎症性肠病治疗药物方面具有潜在应用。

背景技术

炎症性肠病包括溃疡性结肠炎及克罗恩病，其发病机制发杂且该疾病不能被治愈，会终生复发。目前临床治疗炎症性肠病多采用柳氮磺吡啶等抗炎药物来控制症状，然而长期的服用该类对免疫系统具有干扰治愈的药物具有较高的风险。同时，炎症性肠病病程较长，在病程长达10年以上的患者当中具有较高的发生肠道不典型增生及癌变的风险。因而，对于炎症性肠病开发具有长期服用安全性高、改善临床症状显著且能够抑制结直肠不典型增生发生的新颖药物具有广阔的临床需求。目前临床治疗炎症性肠病多采用抗炎药物进行治疗疾病症状，如柳氮磺吡啶等。由于炎症性肠病具有复杂的发病机制，因而服用抗炎药物无法针对疾病本身的病因进行治疗。因此服用抗炎药物除改善疾病症状外对基本本身的康复并无针对性的治疗作用。同时，抗炎药物多会对免疫系统具有干扰作用，因而长期服用具有一定的风险(包括药物性肝肾毒性和肿瘤)。乌苏酸类成分作为天然界一类重要的天然产物，经体外研究多具有多方面的活性，但未见其针对炎症性肠病发病机制进行治疗的研究报道。因而，发现具有针对炎症性肠病发病机制的新颖药物将具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于设计与合成结构新颖的乌苏酸苷及其衍生物，和制备方法和对炎症性肠病关键靶点的调节功效及对炎症性肠病的治疗作用，在制备炎症性肠病治疗药物方面具有潜在应用。

为了完成本发明之目的，可采用如下技术方案：

一种乌苏酸皂苷，乌苏酸皂苷为3β,19α,23-三羟基-乌苏酸-28-O-β-D-吡喃半乳糖苷(A1)或3β,19α,23-三羟基-乌苏酸-28-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(A2)，结构如下所示：

乌苏酸皂苷的制备方法，合成方法如下：以半乳糖或阿拉伯糖为原料，以吡啶作为溶剂、乙酸酐作为酰化剂、DMAP作为催化剂，常温反应得到全乙酰化糖中间体2，之后在HBr-AcOH的条件下，以二氯甲烷为溶剂反应得到端基溴代糖给体3；

以救必应酸4为起始原料，以吡啶作为溶剂，乙酸酐作为酰化剂，DMAP作为催化剂，常温下反应制得救必应酸3β位和23位羟基乙酰化中间体5；5与溴代糖给体3在水-氯仿混合溶剂体系中，碳酸钾为碱，四丁基溴化铵为相转移催化剂，反应制得糖脂中间体6，最后在1mol/L MeOH/MeONa条件下脱除全部乙酰基得到化合物A1-A2。

反应式如下：

一种乌苏酸皂苷结构的衍生物，乌苏酸皂苷结构的衍生物为19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C1)、19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C2)、19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C3)、19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C4)或19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4-三-O-乙酰基-6-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C5)；结构如下所示：

乌苏酸皂苷结构的衍生物的制备方法：

以各种单糖为起始原料，以吡啶作为溶剂、乙酸酐作为酰化剂、DMAP作为催化剂，常温反应得到全乙酰化糖中间体13，之后在HBr-AcOH的条件下，以二氯甲烷为溶剂反应得到端基溴代糖给体14，然后在氯仿中与叠氮化钠反应得到端基叠氮基糖给体15；

以救必应酸4为起始原料，以吡啶作为溶剂，乙酸酐作为酰化剂，DMAP作为催化剂，常温下反应制得救必应酸3β位和23位羟基乙酰化中间体5，然后与3-溴丙炔在水-氯仿混合溶剂体系中，碳酸钾为碱，四丁基溴化铵为相转移催化剂，反应制得端基炔中间体16；

中间体16和糖给体15在乙腈溶剂中，经碘化亚铜催化，发生点击化学反应制得化合物C1-C5。

反应式如下：

所述糖为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖或葡萄糖醛酸甲酯。

一种药物组合物，包含所述乌苏酸皂苷或所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，及其各自的光学活性体，非对映异构体，与药学上可接受的载体组合。

一种药物制剂，制剂为活性成分和药学上可接受的助剂组成，其中，活性成分占制剂质量的0.1-99％，所述活性成分包含所述乌苏酸皂苷或所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，及其各自的光学活性体，非对映异构体，或所述的药物组合物。

一种应用，所述乌苏酸皂苷或所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，及其各自的光学活性体，非对映异构体，或所述药物组合物或所述的药物制剂在制备炎症性肠病治疗药物中的应用。

所述乌苏酸皂苷或所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，及其各自的光学活性体，非对映异构体，或所述药物组合物或所述的药物制剂在制备预防或治疗结直肠不典型增生药物中的应用。

所述乌苏酸皂苷或所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，及其各自的光学活性体，非对映异构体，或所述药物组合物或所述的药物制剂在制备预防或治疗由炎症性肠病引起的结直肠不典型增生药物中的应用。

本发明所具有的优点：

本发明所述化合物及其药物组合和制剂是源于传统药物所含天然产物的结构修饰物，因而该类成分与临床治疗炎症性肠病药物如柳氮磺吡啶相比，本发明所涉及化合物不会干扰人体免疫系统。同时，本发明所述化合物及其药物组合和制剂能够靶向炎症性肠病关键靶标miR-31-5p(Gastroenterology,2019,156:2281-2296)从而起到疾病特异性的(炎症性肠病)治疗及癌变预防功效(预防/治疗炎症性肠病引起的肠道不典型增生)。

附图说明：

图1本发明的合成产物的药理研究过程图。

具体实施方案

以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。

实施例1：3β,19α,23-三羟基-乌苏酸-28-O-β-D-吡喃半乳糖苷(A1)

将半乳糖(1)(2.0g，11.1mmol)加入到250mL茄形瓶中，加入10mL吡啶对其溶解，后缓慢加入乙酸酐(5.2mL，55.5mmol)室温搅拌反应3h。TLC监测反应完全，反应液加入水后，以二氯甲烷(100mL×3)萃取，合并有机层，再用稀盐酸洗两次，饱和NaHCO₃溶液洗一次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩后，得到化合物2(淡黄色糖浆状液体4.8g)，产率95.62％。

将化合物2置于250mL茄形瓶中加入20mL二氯甲烷使其溶解，在0℃条件下，以滴液漏斗缓慢滴加HBr-AcOH(11.7mL，11.1mmol)，滴加完毕后，室温搅拌反应3h，TLC监测反应完全，反应液加50mL水，以二氯甲烷(100mL×3)萃取，合并有机层，饱和NaHCO₃溶液洗一次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩后，硅胶柱层析[石油醚:乙酸乙酯＝5:1(v/v)]，得化合物3(白色固体3.56g)，产率78.19％。

将救必应酸(4)(50mg，0.10mmol)加入到50mL茄形瓶中，以3mL吡啶溶解，后加入乙酸酐(48.3μL，0.50mmol)，室温反应2h，TLC监测反应完全，反应液加入水后，以二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机层，稀盐酸洗两次，饱和NaHCO₃溶液洗一次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩，得到化合物5(泡沫状固体67mg)，产率62.52％。

将化合物5(0.10mmol)、化合物3(0.30mmol)、TBAB(10mg，0.03mmol)加入到50mL茄形瓶中，以10mL氯仿溶解后，加入K₂CO₃/H₂O(0.3g/3mL)，50℃条件下搅拌反应5h，TLC监测反应完全，反应液加入水，以氯仿(10mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩后得化合物6(淡黄色固体0.102g)，产率81.76％。

将化合物6以DCM/MeOH(2:1)6mL溶解，加入1mol/L MeOH/MeONa(0.5mL)，在0℃条件下搅拌反应过夜，TLC监测反应完全，加入阳离子交换树脂，调节pH＝7，甲醇洗涤，蒸干浓缩，硅胶柱层析[二氯甲烷:甲醇＝20:1(v/v))]，得到A1白色固体，产率94.72％。

¹H NMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 6.21(d,J＝7.6Hz,1H),5.08(s,1H),4.64(d,J＝6.8Hz,2H),4.52-4.44(m,1H),4.38(s,1H),4.27-4.09(m,4H),3.67(s,1H),3.01(t,J＝10.4Hz,1H),2.90(s,1H),2.41(t,J＝10.1Hz,1H),2.14-1.63(m,11H),1.60(s,3H),1.54-1.40(m,3H),1.36(s,3H),1.32-1.25(m,3H),1.21(s,3H),1.09-0.97(m,9H),0.95-0.82(m,2H)；¹³C NMR(150MHz,Pyridine-d₅)δ_C 176.8,139.0,128.2,96.1,77.5,75.5,73.3,72.4,71.1,69.7,67.6,61.6,54.2,48.36,47.57,42.6,41.9,40.3,40.3,38.7,37.5,37.0,33.0,29.7,29.7,29.0,27.5,26.7,26.4,25.8,24.3,24.3,23.9,23.8,18.6,17.2,17.2,16.4,15.9,12.9；ESI-MS(m/z):673.3[M+Na]⁺。

实施例2：3β,19α,23-三羟基-乌苏酸-28-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(A2)

实施例2的化合物制备方法同实施例1，只是使用阿拉伯糖代替半乳糖，得到白色固体A2，产率78.87％。

¹H NMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 6.28(d,J＝6.1Hz,1H),4.66(t,J＝6.7Hz,1H),4.47(s,1H),4.44-4.37(m,2H),4.26-4.17(m,2H),3.95(d,J＝11.8Hz,2H),3.72(d,J＝10.1Hz,2H),2.99(s,1H),2.37(s,1H),2.13(s,1H),2.01(s,3H),1.92(s,1H),1.65(s,3H),1.55(d,J＝11.8Hz,2H),1.40(s,4H),1.29(d,J＝8.9Hz,13H),1.19(s,3H),1.08(d,J＝2.7Hz,3H),1.07(s,2H),1.04(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Pyridine-d₅)δ_C 176.9,139.2,128.2,95.7,73.9,73.3,72.4,71.1,68.1,67.7,66.2,64.6,54.1,48.6,48.3,47.6,42.7,41.9,41.9,40.3,38.7,37.7,37.0,33.0,29.8,29.1,27.5,26.7,26.5,25.7,24.3,18.5,17.2,16.5,15.9,12.9；ESI-MS(m/z):643.3[M+Na]⁺。

实施例3：3β,19α-二羟基-23-乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C1)

按照实施例1记载合成化合物2的过程中，只是用葡萄糖代替半乳糖，得到化合物13，收率96.28％。

按照实施例1记载合成化合物3的过程中，将上述获得化合物13代替化合物2，得到化合物14，产率83.76％。

将化合物14(1.0g，2.43mmol)加入到100mL茄形瓶中，在加入10mL DMF对其溶解，溶解后加入NaN₃(0.63g，9.72mmol)，室温搅拌反应3.5h，TLC监测反应完全，反应液加入水后，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机层，以饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩后，硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1(v/v))，得白色固体(化合物15)0.73g，产率80.43％。

将化合物5(0.10mmol)，3-溴丙炔(0.30mmol)，TBAB(10mg，0.03mmol)加入到50mL茄形瓶中，以10mL氯仿溶解后，加入K₂CO₃/H₂O(0.3g/3mL)，50℃条件下搅拌反应4h，TLC监测反应完全。反应液加入5mL水，以氯仿(10mL×3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩后得淡黄色固体(化合物16)85mg，产率72.63％。

将化合物16(0.10mmol)，化合物15(0.15mmol)以6mL乙腈溶解，加入CuI(54.0mg，0.28mmol)，三乙胺(0.06mL，0.42mmol)，室温搅拌反应1h，TLC监测反应完全，反应液加入5mL水后，二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干浓缩，硅胶柱层析[石油醚:乙酸乙酯＝4:1(v/v)]，得到C1白色固体，产率82.93％。¹H NMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 8.81(s,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,3H),6.08(t,J＝5.6Hz,3H),5.57-5.51(m,5H),5.16(d,J＝11.1Hz,2H),4.38(t,J＝6.6Hz,2H),4.05-3.99(m,4H),2.04(t,J＝4.0Hz,16H),1.91(t,J＝6.1Hz,11H),1.68(d,J＝7.0Hz,6H),1.37(d,J＝4.4Hz,7H),1.01(s,3H),0.98(s,3H),0.91(d,J＝7.0Hz,6H),0.89(s,3H),0.84(s,3H)；¹³CNMR(150MHz,Pyridine-d₅)δ_C 175.0,167.9,166.7,141.8,136.7,130.4,128.8,126.6,125.6,83.7,72.0,71.7,69.9,69.0,66.2,65.6,65.4,63.0,59.3,55.5,55.1,51.7,46.2,45.7,45.0,39.2,38.2,35.3,34.3,30.3,28.1,26.3,24.2,24.0,23.2,21.8,21.2,20.7,18.4,18.0,17.7,17.5,16.7,14.6,14.3,14.0,13.3,11.1,10.6；ESI-MS(m/z):1007.1[M+Na]⁺。

实施例4：3β,19α-二羟基-23-乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C2)

化合物C2合成方法同C1，只是用半乳糖代替葡萄糖，得白色固体，产率83.42％。¹HNMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 8.81(s,1H),6.81(d,J＝12.7Hz,2H),6.08(s,2H),5.58-5.50(m,4H),5.16(d,J＝11.1Hz,1H),4.88(s,5H),4.37(d,J＝6.6Hz,1H),4.04(s,2H),2.87(d,J＝14.2Hz,1H),2.23-2.11(m,6H),2.04(t,J＝4.0Hz,11H),1.98(d,J＝4.4Hz,6H),1.91(t,J＝6.1Hz,8H),1.68(d,J＝7.0Hz,5H),1.37(d,J＝4.4Hz,8H),1.06(t,J＝6.8Hz,4H),0.99(d,J＝14.4Hz,4H),0.91(d,J＝7.0Hz,4H),0.89(s,3H),0.84(d,J＝6.2Hz,3H)；¹³CNMR(150MHz,Pyridine-d₅)δ_C 175.0,167.9,166.7,141.8,136.7,130.4,128.8,126.6,125.6,83.7,72.0,71.7,69.9,69.0,66.2,65.6,65.4,63.0,59.3,55.5,55.1,51.7,46.2,45.7,45.0,39.2,38.2,35.3,34.3,30.3,28.1,26.3,24.2,24.0,23.2,21.8,21.2,20.7,18.4,18.0,17.7,17.1,16.7,14.6,14.3,14.0,13.3,11.1,10.6；ESI-MS(m/z):1007.1[M+Na]+。

实施例5：3β,19α-二羟基-23-乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C3)

化合物C3合成方法同C1，只是用阿拉伯糖代替葡萄糖，得白色固体，产率61.36％。¹H NMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 8.81(s,1H),6.81(d,J＝12.7Hz,2H),6.08(s,2H),5.58–5.50(m,4H),5.16(d,J＝11.1Hz,1H),4.88(s,5H),4.37(d,J＝6.6Hz,1H),4.04(s,2H),2.87(d,J＝14.2Hz,1H),2.15(d,J＝6.8Hz,4H),2.04(t,J＝4.0Hz,11H),1.98(d,J＝4.4Hz,6H),1.91(t,J＝6.1Hz,8H),1.68(d,J＝7.0Hz,4H),1.37(d,J＝4.4Hz,6H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(d,J＝14.4Hz,4H),0.91(d,J＝7.0Hz,4H),0.89(s,3H),0.84(d,J＝6.2Hz,3H)；¹³C NMR(150MHz,Pyridine-d₅)δ_C 175.0,167.9,166.7,141.8,136.7,130.4,128.8,126.6,125.6,83.7,72.0,69.9,69.0,66.2,65.6,65.4,63.0,59.3,55.5,55.1,51.7,46.2,45.9,45.7,45.0,39.2,38.2,37.6,35.3,34.3,30.3,28.1,26.3,24.2,24.0,21.8,21.2,20.7,18.4,17.7,17.5,16.7,14.6,14.3,14.0,13.3,11.1,10.6.ESI-MS(m/z):935.1[M+Na]⁺。

实施例6：3β,19α-二羟基-23-乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C4)

化合物C4合成方法同C1，只是用木糖代替葡萄糖，得白色固体，产率61.36％。¹HNMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 8.81(s,1H),6.81(d,J＝12.7Hz,2H),6.08(s,2H),5.58-5.50(m,4H),5.16(d,J＝11.1Hz,1H),4.88(s,5H),4.37(d,J＝6.6Hz,1H),4.04(s,2H),2.87(d,J＝14.2Hz,1H),2.15(d,J＝7.8Hz,4H),2.04(t,J＝4.0Hz,11H),1.98(d,J＝4.4Hz,6H),1.91(t,J＝6.1Hz,8H),1.68(d,J＝7.0Hz,4H),1.37(d,J＝4.4Hz,6H),1.06(d,J＝6.8Hz,3H),0.99(d,J＝14.4Hz,4H),0.91(d,J＝7.0Hz,4H),0.89(s,3H),0.84(d,J＝6.2Hz,3H)；¹³C NMR(150MHz,Pyridine-d₅)δ_C 175.0,167.9,166.7,141.8,136.7,130.4,128.8,126.6,125.6,83.7,72.0,69.9,69.0,66.2,65.6,65.4,63.0,59.3,55.5,55.1,51.7,46.2,45.9,45.7,45.0,39.2,38.2,37.6,35.3,34.3,30.3,28.1,26.3,24.2,24.0,21.8,21.2,20.7,18.4,17.7,17.5,16.7,14.6,14.3,14.0,13.3,11.1,10.6.ESI-MS(m/z):935.1[M+Na]⁺。

实施例7：3β,19α-二羟基-23-乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯(C5)

化合物C5合成方法同C1，只是用葡萄糖醛酸甲酯代替葡萄糖，得白色固体，产率81.67％。¹H NMR(600MHz,Pyridine-d₅)δ_H 8.81(s,1H),6.81(d,J＝12.7Hz,2H),6.08(s,2H),5.58-5.50(m,4H),5.16(d,J＝11.1Hz,1H),4.88(s,5H),4.37(d,J＝6.6Hz,1H),4.04(s,2H),2.87(d,J＝14.2Hz,1H),2.15(d,J＝6.9Hz,4H),2.04(t,J＝4.0Hz,11H),1.98(d,J＝4.4Hz,6H),1.91(t,J＝6.1Hz,8H),1.68(d,J＝7.0Hz,4H),1.37(d,J＝4.4Hz,8H),1.06(d,J＝6.8Hz,4H),0.99(d,J＝14.4Hz,4H),0.92(s,4H),0.89(s,3H),0.84(d,J＝6.2Hz,3H)；¹³C NMR(150MHz,Pyridine-d₅)δ_C 175.0,167.9,166.7,141.8,136.7,130.4,128.8,126.6,125.6,83.7,72.0,71.7,69.9,69.0,66.2,65.4,63.0,59.3,55.5,55.1,51.7,46.2,45.7,45.0,39.2,38.2,35.3,34.3,30.3,28.1,26.3,24.2,24.0,23.2,21.8,21.2,20.7,18.4,18.0,17.7,17.5,16.7,14.6,14.3,14.0,13.3,11.1,10.6；ESI-MS(m/z):993.1[M+Na]⁺。

本发明的合成产物的药理研究

采用6-8周龄balb/c小鼠，适应性饲养一周后模型组腹腔注射致癌剂AOM 10mg/kg；正常组小鼠腹腔注射等量生理盐水代替，每组15只。一周后，模型组自由饮用含2.0％DSS的引用水一周，停用两周为一个循环，共三个循环建立结肠炎相关性结肠癌模型。第三周结束后开始灌胃给药(20mg/kg)即药物为上述实施例制备获得化合物A1、A2、C1-C5，直至实验结束。观察并记录实验炎症性肠病小鼠一般状态、便血和脱肛等症状。第10周后(从注射AOM后计算，完成3个DSS一周给药及2周康复期的循环)处死小鼠，采集样品，具体过程见图1。

参照经典评分系统方法进行疾病活性指数(DAI，disease activity index)评分(评分标准如下表1)并记录各组结直肠不典型增生程度分布情况及对炎症性肠病关键靶标miR-31-5p的调节作用，结果见表2。

表1 DAI评分标准

表2各组小鼠DAI评分表(n＝15)及结直肠不典型增生程度分布情况(以存活小鼠分布数量为统计指标)

实验结果表明，由本发明所获得的全新结构的化合物够增加炎症性肠病小鼠的存活数量，对炎症性肠病具有显著的治疗作用，且能抑制由炎症性肠病引起的肠道不典型增生的发生，其效果明显优于对照。同时，RT-Q-PCR结果显示本发明专利所得全新化合物对炎症性肠病关键靶点miR-31-5p具有显著的调节作用。由此体现出本发明所涉及化合物能够靶向于炎症性肠病关键靶标miR-31-5p从而起到炎症性肠病的治疗作用和肠道不典型增生的防治功效，具有开发为炎症性肠病治疗药物的潜力。

Claims

1.一种乌苏酸皂苷结构的衍生物，其特征在于：乌苏酸皂苷结构的衍生物为19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯（C1）、19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯（C2）、19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-L-吡喃阿拉伯糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯（C3）、19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃木糖基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯（C4）或19α-羟基-3,23-二乙酰氧基-乌苏酸-[1'-(2,3,4-三-O-乙酰基-6-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基)-1H-1',2',3'-三氮唑-4'-基]甲酯（C5）；结构如下所示：

。

2.一种权利要求1所述乌苏酸皂苷结构的衍生物的制备方法，其特征在于：

以糖为起始原料，经吡啶、乙酸酐反应得到全乙酰化糖中间体 13，在 HBr-AcOH 的条件下，反应得到端基溴代糖中间体 14，然后与叠氮化钠反应得到端基叠氮糖给体中间体15；再以救必应酸为原料，经吡啶、乙酸酐乙酰化反应得到救必应酸 3β 位和 23 位羟基双乙酰化中间体 5，然后与3-溴丙炔反应得到端基炔中间体 16，最后通过点击化学反应得到C1-C5；

反应式如下：

。

3.根据权利要求2所述乌苏酸皂苷结构的衍生物的制备方法，其特征在于：所述糖为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖或葡萄糖醛酸甲酯。

4.一种药物组合物，其特征在于：包含权利要求1所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，与药学上可接受的载体组合。

5.一种药物制剂，其特征在于：制剂为活性成分和药学上可接受的助剂组成，其中，活性成分占制剂质量的0.1-99%，所述活性成分包含权利要求1所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，或权利要求4所述的药物组合物。

6.一种应用，其特征在于：权利要求1所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，或权利要求4所述药物组合物或权利要求5所述的药物制剂在制备炎症性肠病治疗药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：权利要求1所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，或权利要求4所述药物组合物或权利要求5所述的药物制剂在制备预防或治疗结直肠不典型增生药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：权利要求1所述乌苏酸皂苷结构的衍生物，或权利要求4所述药物组合物或权利要求5所述的药物制剂在制备预防或治疗由炎症性肠病引起的结直肠不典型增生药物中的应用。