CN115474668A - 一种山黧豆酵素及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种山黧豆酵素及其制备方法和用途,属于酵素技术领域。包括:S1.山黧豆的预处理;S2.脱毒处理;S3.培养基的制备;S4.种子培养;S5.发酵。本发明制备方法简单,制得的山黧豆酵素口感佳,营养价值高,山黧豆毒素含量极低,能脱除大量的抗营养因子,还能够通过改变肠道菌群的组成和含量,促进人体新陈代谢,进而达到减脂和减肥的效果,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及酵素技术领域,具体涉及一种山黧豆酵素及其制备方法和用途。
背景技术
肥胖是一种严重危害人群健康的公共卫生问题。当前全世界范围内约有大于三分之一的成年人(18岁以上)患有肥胖或者超重。肥胖的危害之处在于它是各种疾病的危险因子,如心脑血管疾病、糖尿病、脂肪肝、肿瘤等。针对肥胖,常规的处理手段:干预生活习惯,限制饮食摄入、增加能量消耗等;服用减肥药物,抑制食欲或减少肠道食糜中脂类物质的吸收等;实施减肥手术,减小胃的容量、加快胃的排空等。虽说手段多种多样,但受到各种因素的作用,最终减肥效果不佳,或多或少存在一定的弊端,如停止干预后易出现体重反弹、药物带来的副反应、手术结束后出现的并发症等。因此,当前找寻一些安全、更加有效的抗击肥胖新途径是非常有必要的。
山黧豆为豆科山黧豆属植物,分布于朝鲜、日本和俄罗斯远东地区,在中国普遍分布于东北、华北、陕西、甘肃南部、青海东部。山黧豆多生于山坡、林缘、路旁、草甸等处,最高可到海拔2500米的地方生存,粗生,喜温暖湿润环境。山黧豆种子中蛋白质含量约为25%-28%,淀粉含量约为55%-61%,是比较理想的高蛋白豆科作物,也是良好的植物淀粉资源。但由于山黧豆中含有山黧豆毒素(ODAP),其神经毒素含量未达到安全食用水平,这使得山黧豆未得到广泛应用,然而这无疑会造成山黧豆资源的巨大浪费,因此,如何脱除山黧豆中的毒素,提高山黧豆的生物活性成分,从而开发富有减肥功效的相关产品将成为一大研究热点。
发明内容
本发明的目的在于提出一种山黧豆酵素及其制备方法和用途,制备方法简单,制得的山黧豆酵素口感佳,营养价值高,山黧豆毒素含量极低,能脱除大量的抗营养因子,还能够通过改变肠道菌群的组成和含量,促进人体新陈代谢,进而达到减脂和减肥的效果,具有广阔的应用前景。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供一种山黧豆酵素的制备方法,包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到热水中,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,将混合液装入容器中,将步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热,蒸汽处理,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将碳源、氮源、无机盐溶于水中,调节溶液pH值为7.0-7.2,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中进行培养,得到种子液;
S5.发酵:将步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入水中,高温灭菌,冷却后加入步骤S4中制得的植物乳杆菌种子液和红曲霉种子液,发酵培养,高温灭菌,得到山黧豆酵素。
作为本发明的进一步改进,步骤S1中所述热水的温度为80-90℃,浸泡时间为3-5h或过夜。
作为本发明的进一步改进,步骤S2中所述混合液中乙醇含量为15-20wt%,所述乙酸含量为12-17wt%;所述加热温度为90-100℃,蒸汽处理时间为2-4h。
作为本发明的进一步改进,步骤S3中所述氮源选自蛋白胨、牛肉膏、氨基酸、氨水、尿素、铵盐、硝酸盐中的至一种;所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯氨酸中的一种或几种混合;所述碳源选自葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖、淀粉、糖蜜中的至少一种;所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中至少一种;所述碳源、氮源、无机盐和水的质量比为(5-12):(3-6):(0.2-0.7):50。
作为本发明的进一步改进,步骤S4中所述植物乳杆菌和红曲霉的接种量分别为2-4%(v/v)和1-3%(v/v);所述培养条件为35-40℃培养15-20h;所述种子液的含菌量为107-108cfu/mL。
作为本发明的进一步改进,步骤S5中所述高温灭菌条件为110-115℃灭菌15-20min;所述脱毒山黧豆粉、水、植物乳杆菌种子液和红曲霉种子液的质量比为50:(60-100):(15-20):(10-15);所述发酵培养条件为35-40℃培养3-5d。
作为本发明的进一步改进,具体包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到80-90℃的热水中3-5h,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,其中,乙醇含量为15-20wt%,乙酸含量为12-17wt%,将混合液装入容器中,将步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热至90-100℃,蒸汽处理2-4h,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将5-12重量份碳源、3-6重量份氮源、0.2-0.7重量份无机盐溶于50重量份水中,调节溶液pH值为7.0-7.2,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中,接种量分别为2-4%(v/v)和1-3%(v/v),35-40℃培养15-20h,得到种子液,含菌量为107-108cfu/mL;
S5.发酵:将50重量份步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入60-100重量份水中,110-115℃灭菌15-20min,冷却后加入步骤S4中制得的15-20重量份植物乳杆菌种子液和10-15重量份红曲霉种子液,35-40℃发酵培养3-5d,110-115℃灭菌15-20min,得到山黧豆酵素。
本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的山黧豆酵素。
本发明进一步保护一种上述山黧豆酵素在制备减肥产品中的应用。
本发明进一步保护一种减肥组合物,包含0.1-99wt%的上述的山黧豆酵素。
本发明具有如下有益效果:本发明首先采用热水浸泡的方法处理山黧豆粉,可以将其含有的大量的有毒的β-ODAP溶解并转化为无毒的α-ODAP,从而经过预处理后,大部分的山黧豆毒素得到脱除;进一步,通过采用了化学溶剂+物理蒸汽结合法进行进一步脱毒处理,在高温下以及乙醇和乙酸蒸汽的处理下,将山黧豆中大部分抗营养因子,包括淀粉酶抑制剂,胰蛋白酶抑制素等通过溶于带有化学溶剂的高温蒸汽中,部分高温分解,产生可挥发性物质而随蒸气散失,部分与有机物质发生反应,从而起到有效脱毒、改善口感的效果;进一步,通过植物乳杆菌和红曲霉的发酵处理后,不仅可以使得99%以上的山黧豆毒素和抗营养因子得到脱除,同时,经过发酵后得到的山黧豆粉的营养成分明显增加,包括得到更多的氨基酸、短肽、低聚糖、寡糖等小分子易吸收物质,微生物利用自身代谢作用,可以产生香味物质或香味的前体物质从而提高山黧豆酵素的香味的口感;同时,产生大量的复合微生物群和大量的益生元,人体食用后进入肠道,通过改变肠道菌群的组成和含量,促进人体新陈代谢,进而达到减脂和减肥的效果。
本发明制备方法简单,制得的山黧豆酵素口感佳,营养价值高,还能够通过改变肠道菌群的组成和含量,促进人体新陈代谢,进而达到减脂和减肥的效果,具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为测试例2中对饮食诱导肥胖小鼠的体重的影响对比图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种山黧豆酵素的制备方法,具体包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将100重量份山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到200重量份80℃的热水中3h,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,其中,乙醇含量为15wt%,乙酸含量为12wt%,将100重量份混合液装入容器中,将70重量份步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热至90℃,蒸汽处理2h,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将5重量份糖蜜、2重量份牛肉膏、0.5重量份半胱氨酸、0.5重量份甲氨酸、0.1重量份氯化钾、0.05重量份硫酸镁、0.05重量份氯化铁溶于50重量份去离子水中,调节溶液pH值为7.0,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中,接种量分别为2%(v/v)和1%(v/v),35℃培养15h,得到种子液,含菌量为107cfu/mL;
S5.发酵:将50重量份步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入60重量份水中,110℃灭菌15min,冷却后加入步骤S4中制得的15重量份植物乳杆菌种子液和10重量份红曲霉种子液,35℃发酵培养3d,110℃灭菌15min,得到山黧豆酵素。
实施例2
本实施例提供一种山黧豆酵素的制备方法,具体包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将100重量份山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到200重量份90℃的热水中5h,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,其中,乙醇含量为20wt%,乙酸含量为17wt%,将100重量份混合液装入容器中,将70重量份步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热至100℃,蒸汽处理4h,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将6重量份蔗糖、6重量份果糖、2重量份尿素、4重量份蛋白胨、0.4重量份氯化钠、0.1重量份硫酸镁、0.1重量份氯化铁、0.1重量份硫酸锌溶于50重量份水中,调节溶液pH值为7.2,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中,接种量分别为4%(v/v)和3%(v/v),40℃培养20h,得到种子液,含菌量为108cfu/mL;
S5.发酵:将50重量份步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入100重量份水中,115℃灭菌20min,冷却后加入步骤S4中制得的20重量份植物乳杆菌种子液和15重量份红曲霉种子液,40℃发酵培养5d,115℃灭菌20min,得到山黧豆酵素。
实施例3
本实施例提供一种山黧豆酵素的制备方法,具体包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将100重量份山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到200重量份85℃的热水中4h,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,其中,乙醇含量为17wt%,乙酸含量为15wt%,将100重量份混合液装入容器中,将70重量份步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热至95℃,蒸汽处理3h,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将8重量份葡萄糖、2.5重量份蛋白胨、2重量份牛肉膏、0.5重量份氯化钠溶于50重量份水中,调节溶液pH值为7.1,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中,接种量分别为3%(v/v)和2%(v/v),37℃培养17h,得到种子液,含菌量为108cfu/mL;
S5.发酵:将50重量份步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入80重量份水中,115℃灭菌17min,冷却后加入步骤S4中制得的17重量份植物乳杆菌种子液和12重量份红曲霉种子液,37℃发酵培养4d,115℃灭菌17min,得到山黧豆酵素。
对比例1
与实施例3相比,步骤S5中仅仅加入了植物乳杆菌种子液,其他条件均不改变。
对比例2
与实施例3相比,步骤S5中仅仅加入了红曲霉种子液,其他条件均不改变。
对比例3
与实施例3相比,步骤S1中未进行热水浸泡操作,其他条件均不改变。
对比例4
与实施例3相比,未进行步骤S2操作,其他条件均不改变。
对比例5
与实施例3相比,未进行步骤S3、S4、S5,其他条件均不改变。
测试例1成分测定
将本发明实施例1-3和对比例1-5制得的山黧豆酵素进行成分测定,结果见表1。
β-ODAP的含量测定方法参照文献方法:赵文秀,李志孝,等.两步固态法发酵降解山薰豆毒素的研究[J].食品与发酵工业,2007,33(6):37-40.
采用凯氏定氮仪测定蛋白质含量。
胰蛋白酶抑制剂活性:GB/T21498-2008;
采用液相色谱仪测定氨基酸含量。
表1
由上表可知,本发明方法制得的山黧豆酵素抗营养因子含量明显下降,山黧豆毒素β-ODAP降解率大于99%,且含有丰富的蛋白质及氨基酸。
测试例2对肥胖小鼠的减肥降脂作用
测试对象:本发明实施例1-3和对比例1-5制得的山黧豆酵素。
试验方法:选取120只清洁级昆明系雄性小鼠,适应性喂养7天后,将小鼠随机分为2组,其中正常对照组10只,饲喂基础饲料,其余小鼠饲喂高脂饲料,每天称取小鼠体重。第4周造模成功后,按照体重剔除不合格小鼠,选择90只高脂小鼠,随机分为9组,每组10只,分别为模型组、实施例1-3组、对比例1-5组,给药组按照不同的剂量进行灌胃,剂量为50mg/kg·d,正常对照组和模型组给予一定量的生理盐水,给药期间正常对照组继续饲喂基础饲料,其余各组饲喂高脂饲料。给药10周后,称量每组小鼠体重,计算平均体重,然后小鼠禁食12h,摘眼球取血,离心,分离上层血清,按照试剂盒说明书测定血清中LDL-C、HDL-C含量。
结果:其中,与正常对照组相比,*表示P<0.05;与模型组相比,#表示P<0.05。
对体重影响的结果见图1。
血清中LDL-C、HDL-C含量结果见表2。
表2
组别 | LDL-C | HDL-C |
正常对照组 | 0.82 | 1.15 |
模型组 | 2.78<sup>*</sup> | 1.02<sup>*</sup> |
实施例1 | 0.92<sup>#</sup> | 1.10<sup>#</sup> |
实施例2 | 0.87<sup>#</sup> | 1.12<sup>#</sup> |
实施例3 | 0.86<sup>#</sup> | 1.13<sup>#</sup> |
对比例1 | 1.12 | 1.09 |
对比例2 | 1.07 | 1.07 |
对比例3 | 1.42 | 1.08 |
对比例4 | 1.65 | 1.05 |
对比例5 | 1.89 | 1.03 |
由图1和上表可知,本发明制得的山黧豆酵素能明显降低肥胖小鼠体重,以及血清中LDL-C含量,提高HDL-C含量,这可能与其本身具有很好的抗氧化的能力相关。即,本发明制得的山黧豆酵素能够减肥,降低高血脂风险。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到热水中,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,将混合液装入容器中,将步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热,蒸汽处理,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将碳源、氮源、无机盐溶于水中,调节溶液pH值为7.0-7.2,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中进行培养,得到种子液;
S5.发酵:将步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入水中,高温灭菌,冷却后加入步骤S4中制得的植物乳杆菌种子液和红曲霉种子液,发酵培养,高温灭菌,得到山黧豆酵素。
2.根据权利要求1所述山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述热水的温度为80-90℃,浸泡时间为3-5h。
3.根据权利要求1所述山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,步骤S2中所述混合液中乙醇含量为15-20wt%,所述乙酸含量为12-17wt%;所述加热温度为90-100℃,蒸汽处理时间为2-4h。
4.根据权利要求1所述山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述氮源选自蛋白胨、牛肉膏、氨基酸、氨水、尿素、铵盐、硝酸盐中的至一种;所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯氨酸中的一种或几种混合;所述碳源选自葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖、淀粉、糖蜜中的至少一种;所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、氯化铁、硫酸锌、硫酸铜、硫酸锰、氯化锌、氯化铜、氯化锰中至少一种;所述碳源、氮源、无机盐和水的质量比为(5-12):(3-6):(0.2-0.7):50。
5.根据权利要求1所述山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,步骤S4中所述植物乳杆菌和红曲霉的接种量分别为2-4%(v/v)和1-3%(v/v);所述培养条件为35-40℃培养15-20h;所述种子液的含菌量为107-108cfu/mL。
6.根据权利要求1所述山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,步骤S5中所述高温灭菌条件为110-115℃灭菌15-20min;所述脱毒山黧豆粉、水、植物乳杆菌种子液和红曲霉种子液的质量比为50:(60-100):(15-20):(10-15);所述发酵培养条件为35-40℃培养3-5d。
7.根据权利要求1所述山黧豆酵素的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
S1.山黧豆的预处理:将山黧豆洗净,干燥,粉碎,得到山黧豆,浸泡到80-90℃的热水中3-5h,过滤,干燥,得到预处理后的山黧豆粉;
S2.脱毒处理:将乙醇、乙酸溶于水中,得到混合液,其中,乙醇含量为15-20wt%,乙酸含量为12-17wt%,将混合液装入容器中,将步骤S1得到的预处理后的山黧豆粉放置于上层滤网上,加盖并安装冷凝管,加热至90-100℃,蒸汽处理2-4h,得到脱毒山黧豆粉;
S3.培养基的制备:将5-12重量份碳源、3-6重量份氮源、0.2-0.7重量份无机盐溶于50重量份水中,调节溶液pH值为7.0-7.2,紫外线灭菌,得到培养基;
S4.种子培养:将植物乳杆菌和红曲霉分别接种于两份步骤S3制得的培养基中,接种量分别为2-4%(v/v)和1-3%(v/v),35-40℃培养15-20h,得到种子液,含菌量为107-108cfu/mL;
S5.发酵:将50重量份步骤S2制得的脱毒山黧豆粉加入60-100重量份水中,110-115℃灭菌15-20min,冷却后加入步骤S4中制得的15-20重量份植物乳杆菌种子液和10-15重量份红曲霉种子液,35-40℃发酵培养3-5d,110-115℃灭菌15-20min,得到山黧豆酵素。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的山黧豆酵素。
9.一种如权利要求8所述山黧豆酵素在制备减肥产品中的应用。
10.一种减肥组合物,其特征在于,包含0.1-99wt%的权利要求8所述的山黧豆酵素。
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