CN112675288A

CN112675288A - 一种中药酵素及其制备方法

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Publication number: CN112675288A
Application number: CN202110250714.8A
Authority: CN
Inventors: 吴东; 陈新滔; 李梦楚
Original assignee: Nanchang Yaolai Biotechnology Co ltd
Current assignee: Nanchang Yaolai Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-03-08
Filing date: 2021-03-08
Publication date: 2021-04-20

Abstract

本发明涉及中药领域，具体公开了一种中药酵素的制备方法，传统的中药产品的制备方法通常是将先提取后纯化，然后制剂的过程，中药提取液中或者中药浓缩液的有效成分多为大分子物质，药理活性低，不容易被人体吸收，起效慢，从而影响其药效的发挥，同时，中药提取液会有苦味或异味，不易被人们接受，本发明还提供了一种中药酵素，以葛根、黄芪、山药、枸杞、蔓菁、红景天、生姜、黑木耳、金雀花、珠肽粉、牛肽粉为原料，通过上述各中药之间的配伍，并在益生菌菌种的作用下使得所得到的中药酵素中的有效成分更容易被人体吸收，从而使其具有良好的保健功效，同时所得到的中药酵素口感良好，改善了现有的中药产品口感差、营养成分不易被吸收的缺陷。

Description

一种中药酵素及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体公开了一种中药酵素及其制备方法。

背景技术

中国已经步入了老龄化社会，老年人占比总人口的11%，从亚健康人群的年龄段分布来看，40岁以下青壮年占比达到75%，由此可见在我国大部分人都处在一种免疫力低下的状态。免疫系统一旦出现问题，都会给机体带来各类疾病。因此，研究开发安全有效的增强免疫力的功能性食品势在必行，同样也会拥有较为广阔的市场前景。

该款中药酵素蔓菁、葛根、黄芪、山药、枸杞、红景天、生姜、黑木耳、金雀花、珠肽粉、牛肽粉组成的复方，其中配方中的蔓菁是维吾尔医药常用药材，种子或根为其药用部分。中医认为，蔓菁味甘、辛、苦，性温，无毒；入胃、肝、肾三经；具有开胃消食，下气宽中，止咳化痰，利湿解毒，温和脾胃之功效。在《本草纲目》、《太平圣惠方》、《世医得效方》中早有记载，称其具有增强体质等功效。通过多层次、多环节、多靶点的综合调理，具有健脾益胃、益气补血、调节免疫功能，尤其适用于免疫力低下与术后身体虚弱的人群机体的康复，人体对中药的吸收有限，且部分中药中含有一些对人体有害的毒素，口感也较为不好。

发明内容

本发明针对上述现有技术的不足设计而提供一种中药酵素及其制备方法。

本发明为解决上述问题所采用的技术方案如下：

一种中药酵素，其组成成分包括，蔓菁30~40份、葛根5~8份、黄芪5~15份、山药8~15份、枸杞3~6份、生姜2~5份、黑木耳20～40份、金雀花8～10份、珠肽粉2.5份、牛肽粉2.5份、菌种2~10份。

进一步的，一种中药酵素，其组成成分还包括黄芪5~15份，红景天2~3份。

进一步的，所述菌种为可食用菌种；所述菌种包括嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、双乙酰乳链球菌、德氏乳杆菌、清酒乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、弯曲乳杆菌、产丙酸丙酸杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌中的一种以上。

本发明还提供了一种中药酵素的制备方法，具体步骤为：

S1：将所述蔓菁、所述葛根、所述黄芪、所述山药、所述枸杞、所述红景天、所述生姜、所述黑木耳以及所述金雀花加入5~15倍到水中浸泡30min，提取温度为100℃，提取两次，提取时间为2~3h，合并两次提取液，提取液中加入牛肽粉以及珠肽粉，提取液用200目以上滤布过滤，采用真空浓缩法对提取液进行浓缩，得到中药浓缩液；

S2：菌种置于冻干管或甘油管保存，接种前需要将菌种活化；

S3：向中药浓缩液中直接加入菌种进行接种发酵，得到中药酵素；

S4：将接种发酵后得到的发酵液进行煮沸15min进行灭菌。

进一步的，所述菌种活化的具体步骤为：

S1：液体试管中菌液在37℃恒温恒湿箱中培养16h，得到菌液再次接种中至液体培养基中，所述菌种环境的温度为37℃、静置培养24h，反复活化2~3次，得到活力较强的菌液备用；

S2:将活化好的菌种按10%的比例再分别接种于100mL的提取液中，所述菌种环境的温度37℃,静置培养48h。

进一步的，所述发酵液的发酵温度为30~45℃，发酵的时间为16~30h。

进一步的，所述发酵温度为34~37℃，所述发酵时间为25~30h。

综上所述，本发明有益效果：本发明提供了一种中药酵素的制备方法，传统的中药产品的制备方法通常是将先提取后纯化，然后制剂的过程。中药提取液中或者中药浓缩液的有效成分多为大分子物质，其药理活性低，不容易被人体吸收，起效慢，从而影响其药效的发挥。同时，中药提取液会有苦味或异味，不易被人们接受，本发明还提供了一种中药酵素，主要以葛根、黄芪、山药、枸杞、蔓菁、红景天、生姜、黑木耳、金雀花、珠肽粉、牛肽粉为原料，通过上述各中药之间的配伍，并在益生菌菌种的作用下使得所得到的中药酵素中的有效成分更容易被人体吸收，从而使其具有良好的保健功效，同时所得到的中药酵素口感良好，改善了现有的中药产品口感差、营养成分不易被吸收的缺陷。

附图说明

图1为本发明提出的一种中药酵素制备方法的流程图。

具体实施方式

下面具体阐明本发明的实施方式，不构成对本发明专利保护范围的限制。

本发明为解决上述问题所采用的技术方案如下：

一种中药酵素，其组成成分还包括黄芪5~15份，红景天2~3份。

本发明还提供了一种中药酵素的制备方法，具体步骤为：

S4：将接种发酵后得到的发酵液进行煮沸15min进行灭菌。

进一步的，所述菌种活化的具体步骤为：

进一步的，所述发酵温度为34~37℃，所述发酵时间为25~30h。

实验例1：

配方1：蔓菁30~40份、葛根5~8份、黄芪5~15份、山药8~15份、枸杞3~6份、生姜2~5份、黑木耳20～40份、金雀花8～10份、珠肽粉2.5份、牛肽粉2.5份、菌种2~10份。

仪器与试剂：

HC-3018R型离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、722分光光度计（让奇（上海）仪器科技有限公司）、恒温水浴箱（上海新苗医疗器械制造有限公司）、酶标仪（美国Bio-red公司）、显微镜（上海点应光学仪器厂）、SRBC、Hank’s、RPMI1640培养液、小牛血清、ConA、MTT、PBS缓冲液（PH7.2~7.4）、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-1细胞、乳酸钠、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲脂硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、2.5%Tritcn、印度墨汁、0.1%的碳酸钠、鸡红细胞、Giemsa染液等。

实验对象：

SPF级ICR雌性小鼠200只，体重18g~22g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，生产许可证号SCXK（湘）2019-003。

将已适应性饲养3天的小鼠随机分为五大组，每大组40只。每大组各设置对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每个剂量组各10只。分别为：免疫I组，进行碳廓清实验；免疫II组，进行小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞的活性测定实验；免疫III组，进行脏体比值测定、半数溶血值（HC50）的测定和抗体生成的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；免疫IV组，进行迟发型变态反应实验；免疫V组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。

据人体口服推荐量，中药酵素低剂量、中剂量、高剂量给小鼠灌胃，每天一次，连续灌胃30天，对照组灌胃予以等体积的蒸馏水。

采用SPSS13.0统计分析软件处理实验数据，各组实验数据用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析数据，以P<0.05为差异有统计学意义。

经数据统计分析可知，各免疫组中各剂量组动物体重与对照组相比较无显著差异且（P>0.05）；提示中药酵素对小鼠体重的影响较小，表明酵素不存在明显的副作用，结果见表1。

表1各剂量组实验末期小鼠体重( x±s,n=10)

组别	对照组	低剂量	中剂量	高剂量
					免疫I组	33.61±2.56	34.45±1.39	34.40±2.17	33.52±2.18
免疫II组	32.54±1.68	33.22±1.28	34.04±2.18	32.48±1.78
					免疫III组	33.03±0.83	32.60±1.32	33.33±2.46	34.00±1.68
免疫IV组	33.28±1.96	32.79±1.87	33.75±1.45	34.06±0.96
					免疫V组	33.25±1.71	32.81±1.71	32.10±1.26	32.60±0.85

注：与对照组想比较*p<0.05，**p<0.01

中药酵素对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

经数据统计分析可知，中药酵素各剂量组小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值与对照组相比较无显著差异（P>0.05）。提示中药酵素对小鼠的脾脏和胸腺无显著影响，结果见表2。

表2样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响(x±s,n=10)

组别	给药剂量（g/kg）	动物数（只）	脾脏/体重（%）	胸腺/体重（%）
					对照组	-	10	0.476±0.043	0.339±0.024
低剂量组	0.15	10	0.499±0.038	0.342±0.025
					中剂量组	0.30	10	0.522±0.064	0.346±0.018
高剂量组	0.60	10	0.530±0.049	0.358±0.048

注：与对照组想比较*p<0.05，**p<0.01

中药酵素对小鼠细胞免疫功能的影响

中药酵素对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响

经数据统计分析可知，中剂量组、高剂量组小鼠注射后24h足跖肿胀度与对照组比较相比较存在显著性差异（P<0.05）。提示中剂量组、高剂量组的中药酵素对小鼠的迟发型变态反应能力有显著影响，说明其对小鼠有一定的免疫调节促进作用，结果见表3。

表3样品对小鼠迟发型变态反应（DTH）的影响(x±s,n=10)

组别	给药剂量(g/kg.bw)	动物数（只）	注射后24h足趾肿胀度（mm）
				对照组	-	10	0.20±0.10
低剂量组	0.15	10	0.26±0.13
				中剂量组	0.30	10	0.34±0.12*
高剂量组	0.60	10	0.35±0.10*

注：与对照组想比较*p<0.05，**p<0.01

中药酵素对体液免疫的影响

中药酵素对小鼠抗体生成细胞数的影响

经数据统计分析可知，中剂量组、高剂量组小鼠溶血空斑数与对照组间比较存在显著性差异（P<0.05）提示中药酵素能促进小鼠体内抗体生成细胞数，对小鼠机体的免疫力有一定促进作用，结果见表4。

表4样品对小鼠抗体生成细胞数的影响( x±s,n=10)

组别	给药剂量(g/kg.bw)	动物数（只）	溶血空斑数（个/106个脾细胞）
				对照组	-	10	106±41
低剂量组	0.15	10	145±38
				中剂量组	0.30	10	180±47*
高剂量组	0.60	10	183±65*

注：与对照组想比较*p<0.05，**p<0.01

中药酵素样品对小鼠NK细胞活性的影响

经数据统计分析可知，中剂量组、高剂量组小鼠NK细胞活性平方根反正弦转换值与对照组间相比较存在显著性差异（P<0.05）。提示中药酵素能够增强小鼠NK细胞的活性，对提高小鼠的机体免疫力有一定的促进作用。结果见表5。

表5样品对小鼠NK细胞活性的影响( x±s,n=10)

组别	给药剂量(g/kg.bw)	动物数（只）	NK细胞活性	NK 细胞活性平方根反正弦转换值
					对照组	-	10	21.51±7.06	27.04±4.86
低剂量组	0.15	10	25.86±11.18	29.77±7.17
					中剂量组	0.30	10	33.24±9.56	34.58±5.84*
高剂量组	0.60	10	38.45±10.04	37.77±5.85**

注：与对照组想比较*p<0.05，**p<0.01

实验结论：

通过测定小鼠脾脏指数、胸腺指数、迟发型变态反应、小鼠ConA诱导淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、半数溶血值、小鼠单核-巨噬细胞碳廓清实验、小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、小鼠NK细胞活性等多项指标，结果显示与阴性对照组比较，该款中药酵素配方安全无毒，且具有增强免疫力的作用。

实验例2：

配方2：蔓菁30~40份、葛根5~8份、黄芪5~15份、山药8~15份、枸杞3~6份、生姜2~5份、黑木耳20～40份、金雀花8～10份、珠肽粉2.5份、牛肽粉2.5份、菌种2~10份。

仪器与材料：

酶标仪：MolecularDevices，SpectraMax®i3、CO2培养箱：SANYO，MCO-20AIC；超净工作台：SANYO，MCV-131BNS(T)、高压灭菌锅：SHINVA，山东新华医疗器械股份有限公司、RPMI1640：Solarbio，批号：20171017；PBS：TRANSGENBIOTECH，L60413；ConA：SIGMA，批号：SLBS3295V；红细胞裂解液：CWBIO，03844/50125；胎牛血清：Hyclone；无菌滤头：BIOFIL，170919-052；96孔板：JETBIOFIL，171021-078；细胞筛：JETBIOFIL，170325-300；印度墨汁；碳酸氢钠。

实验动物：

ICR小鼠，雄性，16~18g，许可证号：SCXK（湘）2019-0004

实验结论：

在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核－巨噬细胞功能及NK细胞功能检测中，如有两个以上(含两个)功能检测结果阳性，即可判定该受试物具有免疫调节作用。

对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响：

结果显示，各剂量组体重，小鼠淋巴细胞增殖能力和免疫脏器胸腺、脾脏指数与对照组比较无显著性差异，详见表6~7。

表6受试药对小鼠淋巴细胞增殖能力和免疫脏器指数的影响（SD±MEAN）

组别	剂量mL/kg	淋巴细胞增殖能力	胸腺指数	脾脏指数
					对照组	/	0.477±0.044	0.141±0.021	0.252±0.030
高剂量组	40	0.534±0.058	0.135±0.019	0.251±0.022
					中剂量组	20	0.535±0.038	0.120±0.016	0.278±0.028
低剂量组	10	0.533±0.075	0.111±0.038	0.272±0.020

表7受试药对小鼠体重的影响（SD±MEAN）

注：与对照组比较，*p<0.05

对小鼠碳廓清的影响：

结果显示，低剂量组吞噬指数明显增加，与对照组比较有显著性差异（p<0.05），各组小鼠的免疫脏器脾脏指数和体重与对照组比较无显著性差异，详见8~9。

表8受试药对小鼠吞噬功能的影响（SD±MEAN）

组别	剂量mL/kg	吞噬指数	脾脏指数
				对照组	/	3.00±0.95	0.240±0.023
高剂量组	40	2.93±0.67	0.252±0.073
				中剂量组	20	3.20±1.16	0.250±0.048
低剂量组	10	3.93±0.81*	0.239±0.038

注：与对照组比较，*p<0.05

表9受试药对小鼠体重的影响（SD±MEAN）

注：与对照组比较，*p<0.05

实验结论：

受试药口服给药30d，对体重无明显影响，低剂量可明显提高小鼠淋巴细胞增殖能力，表明受试药对小鼠细胞免疫功能有明显影响；低剂量可明显提高小鼠吞噬指数，各组对免疫脏器脾指数无明显影响，表明受试药可提高小鼠碳廓清能力，可增强小鼠单核-巨噬细胞功能。因此，通过实验研究在单核－巨噬细胞功能和细胞免疫功能实验，实验结果为阳性，可判定配方2具有增强免疫力的作用。

本发明提供了一种中药酵素的制备方法，传统的中药产品的制备方法通常是将先提取后纯化，然后制剂的过程。中药提取液中或者中药浓缩液的有效成分多为大分子物质，其药理活性低，不容易被人体吸收，起效慢，从而影响其药效的发挥。同时，中药提取液会有苦味或异味，不易被人们接受，本发明还提供了一种中药酵素，主要以葛根、黄芪、山药、枸杞、蔓菁、红景天、生姜、黑木耳、金雀花、珠肽粉、牛肽粉为原料，通过上述各中药之间的配伍，并在益生菌菌种的作用下使得所得到的中药酵素中的有效成分更容易被人体吸收，从而使其具有良好的保健功效，同时所得到的中药酵素口感良好，改善了现有的中药产品口感差、营养成分不易被吸收的缺陷。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未违背本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包括在本发明的保护范围。

Claims

1.一种中药酵素，其特征在于，其组成成分包括，蔓菁30~40份、葛根5~8份、黄芪5~15份、山药8~15份、枸杞3~6份、生姜2~5份、黑木耳20～40份、金雀花8～10份、珠肽粉2.5份、牛肽粉2.5份、菌种2~10份。

2.根据权利要求1所述的一种中药酵素，其特征在于，其组成成分还包括黄芪5~15份，红景天2~3份。

3.根据权利要求1所述的一种中药酵素，其特征在于，所述菌种为可食用菌种；所述菌种包括嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、双乙酰乳链球菌、德氏乳杆菌、清酒乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、弯曲乳杆菌、产丙酸丙酸杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌中的至少一种。

4.一种中药酵素的制备方法，其特征在于，具体步骤为：

S4：将接种发酵后得到的发酵液进行煮沸15min进行灭菌。

5.根据权利要求4所述的一种中药酵素的制备方法，其特征在于，

所述菌种活化的具体步骤为：

6.根据权利要求4所述的一种中药酵素的制备方法，其特征在于，所述S3中，所述发酵液的发酵温度为30~45℃，发酵的时间为16~30h。

7.根据权利要求6所述的一种中药酵素的制备方法，其特征在于，所述发酵温度为34~37℃，所述发酵时间为25~30h。