CN115463166A - 一种高纯度三七冻干粉的制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明属于三七粉深加工领域，公开了一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，包括以下步骤：1)采收、2)切片、3)粉碎、4)一次酶解、5)二次酶解、6)蒸发干燥、7)醇提、8)旋转蒸发干燥、9)真空干燥、10)预冻、11)冷冻干燥、12)收料；本发明所述的制备工艺，结合了酶解，醇提以及冻干工艺，对三七粉进行深加工，最高处理温度不超过60℃，最大限度的浓缩和保留有效成分，获得了高纯度三七冻干粉，有效成分中人参皂苷Rb1不少于18.2％，人参皂苷Rg1不少于25.6％，三七皂苷R1不少于9.2％，远高于国家标准，能够直接用于制备高质量的保健品或者药品。

Description

一种高纯度三七冻干粉的制备工艺
技术领域
本发明属于三七粉深加工领域，公开了一种高纯度三七冻干粉的制备工艺。
背景技术
三七(学名：Panaxnotoginseng(Burkill)F.H.Chen ex C.H.)是五加科、人参属多年生直立草本植物，高可达60厘米。主根肉质，呈纺锤形。茎暗绿色，指状复叶，轮生茎顶。三七以根部入药，其性温，味辛，具有显著的活血化瘀、消肿定痛功效，三七主治咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛。传统的三七加工是清洗，自然暴晒，切片，磨粉，但是传统的三七加工比较粗糙，有效成分含量低，长期保存容易腐败霉变，并且加工过程漫长，效率低。
冻干粉是采用冷冻干燥机的真空冷冻干燥法预先将药液里面的水分冻结，然后在真空无菌的环境下将药液里面被冻结的水分升华，从而得到冷冻干燥而成。简而言之，在低温环境下抽干药液里面的水份，保留其原有的药物作用。对于干燥热敏性制品和需要保持生物活性的物质，冻干是一种有效的方法。此法是将需要干燥的制品在低温下使其所含的水分冻结，然后放在真空的环境下干燥，让水分由固体状态直接升华为水蒸气并从制品中排除而使制品活性干燥。该方法有效地防止了制品理化及生物特性的改变，对生物组织和细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，有效保护了许多热敏性药物生物制品有效成份的稳定性。如蛋白质、微生物类不会发生变性和丢失其生物活性；其次，冻干制品在干燥后形态疏松、颜色基本不发生改变，加水后能够快速溶解并恢复原有水溶液的理化特性和生物活性。第三，由于干燥在真空条件下进行，对于一些易氧化的物质具有很好的保护作用。第四，制品经过冻干后水份含量非常低，使制品的稳定性提高，受污染的机会减小，这不仅方便了运输还延长了制品保存期限。
目前已经由很多关于三七冻干的专利报道，如CN201810933720.1公开了三七干燥工艺和三七粉制备工艺及其得到的冻干三七和三七粉，但是其仅仅是采用了通用的冻干步骤，可提高三七的保存期限，但是并未对三七的有效成分进行进一步提取和浓缩，并不能获得高质量的三七粉。CN201510255374.2公开了一种用于降血糖的白背三七冻干粉、制备方法及其应用，上述专利采用真空冷冻干燥技术，将新鲜洁净的白背三七地上部分茎叶直接冻干，粉碎成粉末，得到一种白背三七冻干粉，与现有的用水提、醇或酯提等提取方法相比，由于采用了真空冷冻干燥技术处理白背三七茎叶的技术方案，保留了植物本身的理化性质和生理活性，避免了加工过程带来的药用成份丢失或活性成份失活。但是上述专利，依然只是对于三七进行了粗加工，并没有能够浓缩有效成分，只能获得三七冻干粉粗品。因此有必要对获得高品质三七冻干粉的工艺进行进一步的研究。
发明内容
为了解决上述问题，本发明公开了一种高纯度三七冻干粉的制备工艺。
本发明的技术方案如下：
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，包括以下步骤：
1)采收：取生长在西南部海拔1500米～1800米，北纬23.5°±5°的地带的三七根茎，清水洗净泥土，剪去芦头、支根和须根，剩下头子，进入下一步处理；
2)切片：将头子用切片机切成1-3mm厚度的三七片，烘干至水分小于20％；
3)粉碎：将三七片放入粉碎机粉碎，过100-300目筛，得到原料A；
4)一次酶解：将原料A加入带有搅拌和超声装置的酶解罐中，加入0.05-0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液得到混合液B，使得固态物占比保持在350-450g/L，投入山梨醇至终浓度0.05％-0.2％wt，调节pH至4.0-5.5；投入1000-3000U/L组合酶A进行搅拌酶解，所述组合酶A包括纤维素酶和果胶酶；搅拌与超声间歇进行,酶解温度为45-55℃，酶解时间为24-48h，得酶解液A；
5)二次酶解：调节pH至8-9，再加入5000-10000U/L组合酶B进行搅拌酶解，所述组合酶B包括胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶；搅拌速度50-100rpm，酶解温度为30-40℃，酶解时间为16-48h，得酶解液B；
6)蒸发干燥：对酶解液B进行蒸发，随后进行真空干燥得到提取物A；
7)醇提：提取物A加入4-8℃的40-60％/wt的乙醇提取液中,冷浸法过夜，过滤得到提取液；
8)旋转蒸发干燥：将提取液加入旋转蒸发装置，加热旋转蒸发至固形物含量为30-60wt％，得到提取物B；
9)真空干燥：将提取物B放入真空干燥箱中，低温真空干燥至含水量低于10％，得到提取物C；
10)预冻：将提取物C平铺，厚度为1cm以下，放入冷冻装置，以5-8℃/min的降温速度，快速降温至-30℃以下，得到提取物D；
11)冷冻干燥：在提取物D中加入最终含量5-10wt％冷冻干燥保护剂，均匀混合后，放入冻干机冷冻干燥，进行以下S1-S4冷冻干燥循环2-4次得到提取物D：
S1:-35～-45℃，压强1000-2000Pa，冻干30-60min；
S2：-45～-55℃，压强500-1000Pa,冻干60-90min；
S3：-55～-65℃，压强200-500Pa,冻干30-50min；
S4：-65～-80℃，压强100-200Pa,冻干50-100min；
12)收料：将提取物D缓慢升温至常温，收料，得到所述高纯度三七冻干粉。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，所述步骤4)中搅拌的速度为100-250rpm，超声功率400-600W，搅拌10S，超声2S，循环。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，所述步骤4)中，纤维素酶和果胶酶的酶活力单位比为1-2:1。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，所述步骤5)中，胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶的酶活力单位比为1-2:1：1-2。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，所述步骤6)和步骤9)中的真空干燥的参数为真空度压力小于133Pa,温度为40-60℃。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，所述冷冻干燥保护剂选自甘油、甘露糖、海藻糖中的一种。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，所述海藻糖为改性海藻糖，由以下步骤制备获得：
I.称取海藻糖原料投入含有质量分数为1-3％氢氧化钠的溶液中超声波清洗10-20min，过滤溶液后，放入质量分数0.5-1％的冰醋酸溶液中，对上述溶液进行抽滤，然后用95％以上乙醇沉淀洗涤，干燥，获得预处理海藻糖；
II.将预处理海藻糖与质量分数5-10％醋酸溶液加入反应容器，所述海藻糖原料与所述醋酸溶液的质量体积比为1g：5-10mL；冰水浴控制反应温度在0～5℃；在搅拌的状态下加入羟化卵磷脂；滴加完毕后撤去冰水浴，在室温下持续搅拌反应2～4h；经静置、沉淀、抽滤、干燥、重结晶得到改性海藻糖；其中所述预处理海藻糖与羟化卵磷脂的质量比为1：(0.3～0.5)。
进一步的，上述一种高纯度三七冻干粉的制备工艺制备获得的三七冻干粉。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：本发明公开了一种高纯度三七冻干粉的制备工艺结合了二次酶解，分批加入了纤维素酶和果胶酶；以及胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶依次酶解，最高处理温度不超过60℃，将有效成分最大程度的提取出来，再结合醇提以及冻干工艺，对三七粉进行深加工，最大限度的浓缩和保留有效成分，获得了高纯度三七冻干粉，有效成分中人参皂苷Rb1不少于18.2％，人参皂苷Rg1不少于25.6％，三七皂苷R1不少于9.2％，远高于国家标准，能够直接用于制备高质量的保健品或者药品。
附图说明
图1为本发明所述的高纯度三七冻干粉的制备工艺流程；
图2为测试例中三七冻干粉的重量比较；
图3为测试例中三七冻干粉的人参皂苷Rb1的含量比较；
图4为测试例中三七冻干粉的人参皂苷Rg1的含量比较；
图5为测试例中三七冻干粉的三七皂苷R1的含量比较。
具体实施方式
如图1所示一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，包括以下步骤：
1)采收：取生长在西南部海拔1500米～1800米，北纬23.5°±5°的地带的三七根茎，清水洗净泥土，剪去芦头、支根和须根，剩下头子，进入下一步处理；
2)切片：将头子用切片机切成1-3mm厚度的三七片，烘干至水分小于20％；
3)粉碎：将三七片放入粉碎机粉碎，过100-300目筛，得到原料A；
4)一次酶解：将原料A加入带有搅拌和超声装置的酶解罐中，加入0.05-0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液得到混合液B，使得固态物占比保持在350-450g/L，投入山梨醇至终浓度0.05％-0.2％wt，调节pH至4.0-5.5；投入1000-3000U/L组合酶A进行搅拌酶解，所述组合酶A包括纤维素酶和果胶酶；搅拌与超声间歇进行,酶解温度为45-55℃，酶解时间为24-48h，得酶解液A；
5)二次酶解：调节pH至8-9，再加入5000-10000U/L组合酶B进行搅拌酶解，所述组合酶B包括胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶；搅拌速度50-100rpm，酶解温度为30-40℃，酶解时间为16-48h，得酶解液B；
6)蒸发干燥：对酶解液B进行蒸发，温度不超过50℃，随后进行真空干燥得到提取物A；
7)醇提：提取物A加入4-8℃的40-60％/wt的乙醇提取液中,冷浸法过夜，过滤得到提取液；
8)旋转蒸发干燥：将提取液加入旋转蒸发装置，加热温度不超过50℃，旋转蒸发至固形物含量为30-60wt％，得到提取物B；
9)真空干燥：将提取物B放入真空干燥箱中，低温真空干燥至含水量低于10％，得到提取物C；
10)预冻：将提取物C平铺，厚度为1cm以下，放入冷冻装置，以5-8℃/min的降温速度，快速降温至-30℃以下，得到提取物D；
11)冷冻干燥：在提取物D中加入最终含量5-10wt％冷冻干燥保护剂，均匀混合后，放入冻干机冷冻干燥，进行以下S1-S4冷冻干燥循环2-4次得到提取物D：
S1:-35～-45℃，压强1000-2000Pa，冻干30-60min；
S2：-45～-55℃，压强500-1000Pa,冻干60-90min；
S3：-55～-65℃，压强200-500Pa,冻干30-50min；
S4：-65～-80℃，压强100-200Pa,冻干50-100min；
12)收料：将提取物D缓慢升温至常温，收料，得到所述高纯度三七冻干粉。
所述步骤4)中搅拌的速度为100-250rpm，超声功率400-600W，搅拌10S，超声2S，循环；
所述步骤4)中，纤维素酶和果胶酶的酶活力单位比为1-2:1；
所述步骤5)中，胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶的酶活力单位比为1-2:1：1-2；
所述步骤6)和步骤9)中的真空干燥的参数为真空度压力小于133Pa,温度为40-60℃；
所述冷冻干燥保护剂选自甘油、甘露糖、海藻糖中的一种；
所述海藻糖为改性海藻糖，由以下步骤制备获得：
I.称取海藻糖原料投入含有质量分数为1-3％氢氧化钠的溶液中超声波清洗10-20min，过滤溶液后，放入质量分数0.5-1％的冰醋酸溶液中，对上述溶液进行抽滤，然后用95％以上乙醇沉淀洗涤，干燥，获得预处理海藻糖；
II.将预处理海藻糖与质量分数5-10％醋酸溶液加入反应容器，所述海藻糖原料与所述醋酸溶液的质量体积比为1g：5-10mL；冰水浴控制反应温度在0～5℃；在搅拌的状态下加入羟化卵磷脂；滴加完毕后撤去冰水浴，在室温下持续搅拌反应2～4h；经静置、沉淀、抽滤、干燥、重结晶得到改性海藻糖；其中所述预处理海藻糖与羟化卵磷脂的质量比为1：(0.3～0.5)。
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中使用的试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
所述三七采收自云南文山。
实施例1
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，包括以下步骤：
1)采收：取生长在西南部海拔1500米～1800米，北纬23.5°±5°的地带的三七根茎，清水洗净泥土，剪去芦头、支根和须根，剩下头子，进入下一步处理；
2)切片：将头子用切片机切成1-3mm厚度的三七片，烘干至水分小于20％；
3)粉碎：将三七片放入粉碎机粉碎，过100-300目筛，得到原料A；
4)一次酶解：将原料A 1000g加入带有搅拌和超声装置的酶解罐中，加入0.05-0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液得到混合液B，使得固态物占比保持在350-450g/L，投入山梨醇至终浓度0.05％wt，调节pH至4.0；投入1000U/L组合酶A进行搅拌酶解，所述组合酶A包括纤维素酶和果胶酶；搅拌与超声间歇进行,酶解温度为45℃，酶解时间为24h，得酶解液A；
5)二次酶解：调节pH至8-9，再加入5000U/L组合酶B进行搅拌酶解，所述组合酶B包括胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶；搅拌速度50-100rpm，酶解温度为32℃，酶解时间为16h，得酶解液B；
6)蒸发干燥：对酶解液B进行蒸发，加热不超过50℃，随后进行真空干燥得到提取物A；
7)醇提：提取物A加入4-8℃的40％/wt的乙醇提取液中,冷浸法过夜，过滤得到提取液；
8)旋转蒸发干燥：将提取液加入旋转蒸发装置，加热不超过50℃，旋转蒸发至固形物含量为30-60wt％，得到提取物B；
9)真空干燥：将提取物B放入真空干燥箱中，低温真空干燥至含水量低于10％，得到提取物C；
10)预冻：将提取物C平铺，厚度为1cm以下，放入冷冻装置，以5-8℃/min的降温速度，快速降温至-30℃以下，得到提取物D；
11)冷冻干燥：在提取物D中加入最终含量5wt％冷冻干燥保护剂，均匀混合后，放入冻干机冷冻干燥，进行以下S1-S4冷冻干燥循环2次得到提取物D：
S1:-35～-45℃，压强1000-2000Pa，冻干30-60min；
S2：-45～-55℃，压强500-1000Pa,冻干60-90min；
S3：-55～-65℃，压强200-500Pa,冻干30-50min；
S4：-65～-80℃，压强100-200Pa,冻干50-100min；
12)收料：将提取物D缓慢升温至常温，收料，得到所述高纯度三七冻干粉。
所述步骤4)中搅拌的速度为100-250rpm，超声功率400-600W，搅拌10S，超声2S，循环；
所述步骤4)中，纤维素酶和果胶酶的酶活力单位比为1:1；
所述步骤5)中，胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶的酶活力单位比为1:1：1；
所述步骤6)和步骤9)中的真空干燥的参数为真空度压力小于133Pa,温度为40-60℃；
所述冷冻干燥保护剂选自海藻糖；
所述海藻糖为改性海藻糖，由以下步骤制备获得：
I.称取海藻糖原料投入含有质量分数为1％氢氧化钠的溶液中超声波清洗10-20min，过滤溶液后，放入质量分数0.5％的冰醋酸溶液中，对上述溶液进行抽滤，然后用95％以上乙醇沉淀洗涤，干燥，获得预处理海藻糖；
I I.将预处理海藻糖与质量分数5％醋酸溶液加入反应容器，所述海藻糖原料与所述醋酸溶液的质量体积比为1g：5mL；冰水浴控制反应温度在0～5℃；在搅拌的状态下加入羟化卵磷脂；滴加完毕后撤去冰水浴，在室温下持续搅拌反应2～4h；经静置、沉淀、抽滤、干燥、重结晶得到改性海藻糖；其中所述预处理海藻糖与羟化卵磷脂的质量比为1：0.3。
实施例2
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，包括以下步骤：
1)采收：取生长在西南部海拔1500米～1800米，北纬23.5°±5°的地带的三七根茎，清水洗净泥土，剪去芦头、支根和须根，剩下头子，进入下一步处理；
2)切片：将头子用切片机切成1-3mm厚度的三七片，烘干至水分小于20％；
3)粉碎：将三七片放入粉碎机粉碎，过100-300目筛，得到原料A；
4)一次酶解：将原料A 1000g加入带有搅拌和超声装置的酶解罐中，加入0.07M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液得到混合液B，使得固态物占比保持在350-450g/L，投入山梨醇至终浓度0.1％wt，调节pH至5.0；投入2000U/L组合酶A进行搅拌酶解，所述组合酶A包括纤维素酶和果胶酶；搅拌与超声间歇进行,酶解温度为50℃，酶解时间为32h，得酶解液A；
5)二次酶解：调节pH至8-9，再加入7500U/L组合酶B进行搅拌酶解，所述组合酶B包括胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶；搅拌速度50-100rpm，酶解温度为35℃，酶解时间为32h，得酶解液B；
6)蒸发干燥：对酶解液B进行蒸发，温度不超过50℃，随后进行真空干燥得到提取物A；
7)醇提：提取物A加入4-8℃的40-60％/wt的乙醇提取液中,冷浸法过夜，过滤得到提取液；
8)旋转蒸发干燥：将提取液加入旋转蒸发装置，加热温度不超过50℃，旋转蒸发至固形物含量为30-60wt％，得到提取物B；
9)真空干燥：将提取物B放入真空干燥箱中，低温真空干燥至含水量低于10％，得到提取物C；
10)预冻：将提取物C平铺，厚度为1cm以下，放入冷冻装置，以5-8℃/min的降温速度，快速降温至-30℃以下，得到提取物D；
11)冷冻干燥：在提取物D中加入最终含量8wt％冷冻干燥保护剂，均匀混合后，放入冻干机冷冻干燥，进行以下S1-S4冷冻干燥循环3次得到提取物D：
S1:-35～-45℃，压强1000-2000Pa，冻干30-60min；
S2：-45～-55℃，压强500-1000Pa,冻干60-90min；
S3：-55～-65℃，压强200-500Pa,冻干30-50min；
S4：-65～-80℃，压强100-200Pa,冻干50-100min；
12)收料：将提取物D缓慢升温至常温，收料，得到所述高纯度三七冻干粉。
所述步骤4)中搅拌的速度为100-250rpm，超声功率400-600W，搅拌10S，超声2S，循环；
所述步骤4)中，纤维素酶和果胶酶的酶活力单位比为1.5:1；
所述步骤5)中，胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶的酶活力单位比为2:1：1；
所述步骤6)和步骤9)中的真空干燥的参数为真空度压力小于133Pa,温度为40-60℃；
所述冷冻干燥保护剂选自海藻糖；
所述海藻糖为改性海藻糖，由以下步骤制备获得：
I.称取海藻糖原料投入含有质量分数为2％氢氧化钠的溶液中超声波清洗15min，过滤溶液后，放入质量分数0.75％的冰醋酸溶液中，对上述溶液进行抽滤，然后用95％以上乙醇沉淀洗涤，干燥，获得预处理海藻糖；
I I.将预处理海藻糖与质量分数8％醋酸溶液加入反应容器，所述海藻糖原料与所述醋酸溶液的质量体积比为1g：8mL；冰水浴控制反应温度在0～5℃；在搅拌的状态下加入羟化卵磷脂；滴加完毕后撤去冰水浴，在室温下持续搅拌反应2～4h；经静置、沉淀、抽滤、干燥、重结晶得到改性海藻糖；其中所述预处理海藻糖与羟化卵磷脂的质量比为1：0.4。
实施例3
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，包括以下步骤：
1)采收：取生长在西南部海拔1500米～1800米，北纬23.5°±5°的地带的三七根茎，清水洗净泥土，剪去芦头、支根和须根，剩下头子，进入下一步处理；
2)切片：将头子用切片机切成1-3mm厚度的三七片，烘干至水分小于20％；
3)粉碎：将三七片放入粉碎机粉碎，过100-300目筛，得到原料A；
4)一次酶解：将原料A 1000g加入带有搅拌和超声装置的酶解罐中，加入0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液得到混合液B，使得固态物占比保持在350-450g/L，投入山梨醇至终浓度0.2％wt，调节pH至5.5；投入3000U/L组合酶A进行搅拌酶解，所述组合酶A包括纤维素酶和果胶酶；搅拌与超声间歇进行,酶解温度为55℃，酶解时间为48h，得酶解液A；
5)二次酶解：调节pH至8-9，再加入10000U/L组合酶B进行搅拌酶解，所述组合酶B包括胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶；搅拌速度50-100rpm，酶解温度为37℃，酶解时间为48h，得酶解液B；
6)蒸发干燥：对酶解液B进行蒸发，温度不超过50℃，随后进行真空干燥得到提取物A；
7)醇提：提取物A加入4-8℃的40-60％/wt的乙醇提取液中,冷浸法过夜，过滤得到提取液；
8)旋转蒸发干燥：将提取液加入旋转蒸发装置，加热温度不超过50℃，旋转蒸发至固形物含量为30-60wt％，得到提取物B；
9)真空干燥：将提取物B放入真空干燥箱中，低温真空干燥至含水量低于10％，得到提取物C；
10)预冻：将提取物C平铺，厚度为1cm以下，放入冷冻装置，以5-8℃/min的降温速度，快速降温至-30℃以下，得到提取物D；
11)冷冻干燥：在提取物D中加入最终含量10wt％冷冻干燥保护剂，均匀混合后，放入冻干机冷冻干燥，进行以下S1-S4冷冻干燥循环4次得到提取物D：
S1:-35～-45℃，压强1000-2000Pa，冻干30-60min；
S2：-45～-55℃，压强500-1000Pa,冻干60-90min；
S3：-55～-65℃，压强200-500Pa,冻干30-50min；
S4：-65～-80℃，压强100-200Pa,冻干50-100min；
12)收料：将提取物D缓慢升温至常温，收料，得到所述高纯度三七冻干粉。
所述步骤4)中搅拌的速度为100-250rpm，超声功率400-600W，搅拌10S，超声2S，循环；
所述步骤4)中，纤维素酶和果胶酶的酶活力单位比为2:1；
所述步骤5)中，胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶的酶活力单位比为2:1：2；
所述步骤6)和步骤9)中的真空干燥的参数为真空度压力小于133Pa,温度为40-60℃；
所述冷冻干燥保护剂选自海藻糖；
所述海藻糖为改性海藻糖，由以下步骤制备获得：
I.称取海藻糖原料投入含有质量分数为3％氢氧化钠的溶液中超声波清洗20min，过滤溶液后，放入质量分数1％的冰醋酸溶液中，对上述溶液进行抽滤，然后用95％以上乙醇沉淀洗涤，干燥，获得预处理海藻糖；
I I.将预处理海藻糖与质量分数10％醋酸溶液加入反应容器，所述海藻糖原料与所述醋酸溶液的质量体积比为1g：10mL；冰水浴控制反应温度在0～5℃；在搅拌的状态下加入羟化卵磷脂；滴加完毕后撤去冰水浴，在室温下持续搅拌反应2～4h；经静置、沉淀、抽滤、干燥、重结晶得到改性海藻糖；其中所述预处理海藻糖与羟化卵磷脂的质量比为1：0.5。
对比例1
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，未使用二次酶解，其他同实施例2对比例2
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，未使用二次酶解，使用冷冻干燥保护剂为甘油，其他同实施例2
对比例3
一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，未使用二次酶解，使用冷冻干燥保护剂为甘露糖，其他同实施例2。
测试例1
对权利要求1-3以及对比例1-3所制备的三七冻干粉进行测试，检测获得冻干粉的重量，以及其中的人参皂苷Rb1，人参皂苷Rg1，三七皂苷R1的含量。结果见表1和图2-5。
含量测定方法如下：
含量测定：照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI D)测定.
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以流动相A:乙腈,,流动相B:水,按下表进行梯度洗脱；流速每分钟为1.0m1；检测波长为203nm.理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于6000；人参皂苷Rg1峰和三七皂苷R1峰的分离度应大于2.0.
对照品溶液的制备分别精密称取60℃减压干燥2小时的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 R1对照品适量，加90％甲醇制成每1m1含人参皂苷Rb11.5mg、人参皂苷Rg11.5mg、三七皂苷R10.4mg的混合溶液,即得。
供式品溶液的制备取本品0.2g,精密称定,置10mL量瓶中,加90％甲醇超声处理15分钟,放冷，继续加90％甲酵稀释至刻度,摇匀,即得。
表1冻干粉重量及有效成分含量
Figure BDA0003908038410000121
由表1的数据可知，实施例1-3公开了一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，结合了二次酶解，分批加入了纤维素酶和果胶酶；以及胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶依次酶解，将有效成分最大程度的提取出来，再结合醇提以及冻干工艺，对三七粉进行深加工，最大限度的浓缩和保留有效成分，获得了高纯度三七冻干粉，有效成分中人参皂苷Rb1不少于18.2％，人参皂苷Rg1不少于25.6％，三七皂苷R1不少于9.2％，远高于国家标准，能够直接用于制备高质量的保健品或者药品。而相比未采用2次酶解的对比例1，其最终的冻干粉的得率，皂苷含量，均大为降低，而未采用2次酶解以及未采用改性海藻糖的对比例2和3其质量更为的下降。
上述实施例只是本发明的有限几种优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
1)采收：取生长在西南部海拔1500米～1800米，北纬23.5°±5°的地带的三七根茎，清水洗净泥土，剪去芦头、支根和须根，剩下头子，进入下一步处理；
2)切片：将头子用切片机切成1-3mm厚度的三七片，烘干至水分小于20％；
3)粉碎：将三七片放入粉碎机粉碎，过100-300目筛，得到原料A；
4)一次酶解：将原料A加入带有搅拌和超声装置的酶解罐中，加入0.05-0.1M的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液得到混合液B，使得固态物占比保持在350-450g/L，投入山梨醇至终浓度0.05％-0.2％wt，调节pH至4.0-5.5；投入1000-3000U/L组合酶A进行搅拌酶解，所述组合酶A包括纤维素酶和果胶酶；搅拌与超声间歇进行,酶解温度为45-55℃，酶解时间为24-48h，得酶解液A；
5)二次酶解：调节pH至8-9，再加入5000-10000U/L组合酶B进行搅拌酶解，所述组合酶B包括胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶；搅拌速度50-100rpm，酶解温度为30-40℃，酶解时间为16-48h，得酶解液B；
6)蒸发干燥：对酶解液B进行蒸发，随后进行真空干燥得到提取物A；
7)醇提：提取物A加入4-8℃的40-60％/wt的乙醇提取液中,冷浸法过夜，过滤得到提取液；
8)旋转蒸发干燥：将提取液加入旋转蒸发装置，加热旋转蒸发至固形物含量为30-60wt％，得到提取物B；
9)真空干燥：将提取物B放入真空干燥箱中，低温真空干燥至含水量低于10％，得到提取物C；
10)预冻：将提取物C平铺，厚度为1cm以下，放入冷冻装置，以5-8℃/min的降温速度，快速降温至-30℃以下，得到提取物D；
11)冷冻干燥：在提取物D中加入最终含量5-10wt％冷冻干燥保护剂，均匀混合后，放入冻干机冷冻干燥，进行以下S1-S4冷冻干燥循环2-4次得到提取物D：
S1:-35～-45℃，压强1000-2000Pa，冻干30-60min；
S2：-45～-55℃，压强500-1000Pa,冻干60-90min；
S3：-55～-65℃，压强200-500Pa,冻干30-50min；
S4：-65～-80℃，压强100-200Pa,冻干50-100min；
12)收料：将提取物D缓慢升温至常温，收料，得到所述高纯度三七冻干粉。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述步骤4)中搅拌的速度为100-250rpm，超声功率400-600W，搅拌10S，超声2S，循环。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述步骤4)中，纤维素酶和果胶酶的酶活力单位比为1-2:1。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述步骤5)中，胰蛋白酶、β-葡萄糖苷酶和α-甘露糖苷酶的酶活力单位比为1-2:1：1-2。
5.据权利要求1所述的一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述步骤6)和步骤9)中的真空干燥的参数为真空度压力小于133Pa,温度为40-60℃。
6.据权利要求1所述的一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述冷冻干燥保护剂选自甘油、甘露糖、海藻糖中的一种。
7.据权利要求1所述的一种高纯度三七冻干粉的制备工艺，其特征在于，所述海藻糖为改性海藻糖，由以下步骤制备获得：
I.称取海藻糖原料投入含有质量分数为1-3％氢氧化钠的溶液中超声波清洗10-20min，过滤溶液后，放入质量分数0.5-1％的冰醋酸溶液中，对上述溶液进行抽滤，然后用95％以上乙醇沉淀洗涤，干燥，获得预处理海藻糖；
II.将预处理海藻糖与质量分数5-10％醋酸溶液加入反应容器，所述海藻糖原料与所述醋酸溶液的质量体积比为1g：5-10mL；冰水浴控制反应温度在0～5℃；在搅拌的状态下加入羟化卵磷脂；滴加完毕后撤去冰水浴，在室温下持续搅拌反应2～4h；经静置、沉淀、抽滤、干燥、重结晶得到改性海藻糖；其中所述预处理海藻糖与羟化卵磷脂的质量比为1：(0.3～0.5)。
8.由权利要求1-7任一项所述的高纯度三七冻干粉的制备工艺制备获得的三七冻干粉。
9.如权利要求8所述的三七冻干粉在制备保健品/药品中的用途。
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