CN102526190A - 生产优质稳定丹参药材的方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域,具体为一种生产优质丹参药材的方法,并提供该药材在制备丹参提取物和丹参制剂中的应用。本发明采用快速烘干干燥或晾晒、阴干与冻干、快速烘干组合干燥的方法,促进丹酚酸B和丹参酮IIA等活性成分的形成与提高,从而获得有效成分含量高、质量稳定可控的优质丹参药材,并且利用该方法所获得的优质丹参原料,用于制备丹参总酚酸提取物、丹参总酮提取物,丹酚酸B和丹参酮IIA等活性医药中间体,及其各种丹参制剂。本发明可以大幅提高丹参药材及相关产品的质量和稳定性,提高资源利用率和经济效益。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体为一种生产优质丹参药材的方法,并提供该丹参药材在制备丹参提取物和丹参制剂中的应用。
背景技术
丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根和根茎,具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的作用,中医临床上广泛用于胸壁心痛、腕腹胁痛、月经不调、痛经经闭等症。其活性成分主要为水溶性的丹酚酸类化合物和脂溶性的丹参酮类化合物。前者主要包括丹参素(danshensu)、原儿茶酸 (protocatechuic acid)、原儿茶醛 (protocatechualdehyde)、咖啡酸 (caffeic acid)、迷迭香酸 (rosmarinic acid)、紫草酸 (lithospermic acid)、丹酚酸B (salvianolic acid B)、丹酚酸A (salvianolic acid A)、丹酚酸C (salvianolic acid C)等,其中以丹酚酸B 为主要成分;后者主要包括二氢丹参酮Ⅰ(dihydrotanshinoneⅠ)、隐丹参酮 (cryptotanshinone)、丹参酮Ⅰ (tanshinoneⅠ)、丹参酮ⅡA (tanshinoneⅡA)等,其中以丹参酮ⅡA含量最高。目前以脂溶性丹参酮ⅡA为主要成分的制剂如冠心丹参滴丸、复方丹参片,和以水溶性丹酚酸B为主要成分的制剂如复方丹参滴丸、丹参注射液、丹参冻干粉、丹参酚酸盐等也已在临床上广泛应用。按照2010年版《中国药典》,丹参药材中丹酚酸B和丹参酮ⅡA 的含量分别不低于3.0% 和0.2%。但目前市场上丹参药材的质量良莠不齐,成为影响丹参药材和相关制剂的质量和临床疗效的最重要原因。为获得有效成分高,质量稳定的丹参药材,目前要求按照中药材GAP(Good Agricultural Practices)生产的规程,从生产基地、种子、栽培技术、田间管理和采收加工各方面进行全程监控。由于影响丹参药材质量的因素多,关键环节不明,药材质量迄今仍难以有效控制。此外,由于丹参酮类和丹酚酸类都是丹参的化学成分,在制剂过程中需要对其进行有效分离;丹酚酸类,尤其是其主要成分丹酚酸B,在存储和制剂过程中均易发生水解,也为相关制剂的质量控制造成了极大困难和解决成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简单方便、易于实际操作的提高丹参质量的方法,即生产优质丹参药材的方法(GAP生产方法(Good Agricultural Practice))。
本发明的再一个目的在于提供采用上述方法所获得的优质丹参原料及其在制备各种丹参提取物和丹参制剂中的应用。
长期以来,丹参药材与其它大多数中药材一样,其采收后主要干燥方法为日晒,且以晒干程度即药材中水份含量为唯一判别指标,中国药典规定其标准为不高于13.0%。对于干燥过程中丹参药材中各种活性成分的动态变化规律,未见研究报道,由于晒干过程花费时间长,常导致丹参有效成分含量的严重下降甚至霉变。
本发明研究发现,丹参药材的主要水溶性活性成分丹酚酸B在新鲜药材中仅含微量(<0.1%),采用烘干或晒干方法干燥后其含量才大量增加(>3.0%) (图1)。事实上不仅是丹酚酸B,几乎所有丹酚酸类水溶性成分都是在干燥过程中伴随着丹酚酸B的产生而大量形成的(图1)。无论是晒干,还是烘箱烘干,丹酚酸B的含量均随干燥时间的延长而呈现先增加后下降趋势 (图2,图6)。在50-130℃范围内,丹酚酸B的含量随烘干温度的升高,增长幅度越大也越迅速;达到最高值后,其含量急剧下降(图2,图3)。进一步优化发现采用130℃,干燥40分钟丹酚酸B达到最大值(图3)。在各温度干燥过程中,均可发现一个丹酚酸B及总酚酸的最高值,并且出现该值时丹参样品中水份的含量一般均未达到药典标准(即通常高于13%),换言之当水份含量达到药典标准时,药材中丹酚酸B及总丹酚酸的含量均已有较大幅度下降(图3)。
本发明研究同时发现,丹参药材的脂溶性活性成分二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA等,在采收后干燥过程中也呈现先升高后下降的趋势(图4,图5),其含量也随干燥温度的升高和干燥时间延长下降更显著。与丹酚酸类不同的是,丹参酮类在新鲜材料中已有较大含量的积累,但在采后干燥过程中明显增加一倍以上(图4,图5)。
基于以上研究,本发明提供一种提高丹参质量的方法,其步骤为:将新鲜采集的丹参的根或根茎,通过烘箱快速烘干;或通过晾晒、阴干与冷冻干燥和烘箱快速烘干组合进行干燥。当采用烘箱快速烘干时,在 100℃—150℃ 温度下将丹参整根或2-3mm薄片烘干 30--60 分钟;当采用晾晒、阴干与冷冻干燥或烘箱烘干的组合进行干燥时,先将丹参整根晾晒或阴干 3-7天,然后再切片,用冷冻干燥和烘箱烘干继续干燥至药典标准。经过本方法干燥处理的丹参药材,原料中丹酚酸B的质量含量≥3.0%;丹参酮IIA的质量含量≥0.2%;水份重量≦ 13%,并且质量均匀、稳定,是一种优质丹参药材原料。即本发明实际上提供了优质丹参药材的生产方法。
本发明中,所述新鲜采集的丹参原料可为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)。
本发明采用干燥的方法,并通过干燥过程的条件控制,促进丹酚酸B等酚酸类成分的形成和积累,大大提高了丹参的品质。
本发明还提供高含量、高产量丹参总酚酸提取物的制备方法,其步骤为:将新鲜采集的丹参根或根茎,晾晒或阴干 3-7 天,当样品水份含量(重量比计)约为 30-15% 时,切碎,用于提取;或将前述经过干燥处理的获得的优质丹参药材原料切片,直接进行提取。所述提取的方法为:将经过处理的丹参用体积浓度为30-90%(与水体积比)溶剂(如丙酮、乙醇或甲醇)提取2-3次,合并提取液,回收溶剂,过滤,滤液用 D101 大孔吸附树脂吸附,再用体积浓度为的 20-50%(与水体积比)乙醇或甲醇洗脱,收集 20-50%乙醇或甲醇洗脱液,再经浓缩、冻干,即得到高含量、高产量丹参总酚酸提取物。提取物中丹酚酸B的质量含量≥80%。
本发明还提供高含量、高产量丹参总酮提取物的制备方法,其步骤为:将新鲜采集的丹参根或根茎,晾晒或阴干 3-7 天,当样品水份含量(重量比计)约为 30-15% 时,切碎,用于提取;或将前述经过干燥处理的获得的优质丹参药材原料切片,直接进行提取。所述提取的方法为:将经过处理的丹参用体积浓度为30-90%(与水体积比) 的溶剂(如丙酮、乙醇或甲醇)提取2-3次,合并提取液,回收溶剂,过滤,滤液用 D101 大孔吸附树脂吸附,再用体积浓度为的 20-50%(与水体积比)乙醇或甲醇洗脱,收集 20-50%乙醇或甲醇洗脱液,获得总酚酸提取物;柱床再用体积浓度为40-95% (与水体积比)乙醇或甲醇洗脱,收集 40-95% 乙醇或甲醇洗脱部分,浓缩、冻干,即得高含量、高产量丹参总酮提取物。提取物中二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA 四种丹参酮的含量总和不低于70%。
本发明还提供高效、稳定和高质量丹参制剂的制备方法,其步骤为: 将经过前述干燥处理的优质丹参原料,经提取等步骤得到提取物,经纯化、浓缩等步骤,制成片剂、丸剂、滴丸、口服液、针剂或粉针剂等各种丹参制剂,用于预防和治疗冠心病、心绞痛、动脉硬化等多种心脑血管疾病。
本发明的一个重要意义在于,发现丹参药材中以丹酚酸B为主的水溶性丹酚酸类活性成分,并不是该植物生长期内至采挖前期形成和积累的,而是在丹参根采收后干燥过程中大量形成和产生的,因此可以通过优化和控制采收后干燥过程的工艺条件,获得高含量、高稳定性的丹参药材原料。利用该原料生产制备丹参总酚酸提取物,丹酚酸B和其他丹酚酸活性中间体,以及用于生产制备以水溶性丹酚酸类为主要活性成分的各种丹参制剂,可以大大提高相关产品的产量、质量、稳定性和经济效益。
本发明的另一个重要意义在于,发现丹参药材中的脂溶性丹参酮类活性成分,也可以通过优化和控制采收后干燥过程的工艺条件,提高相关成分的含量和稳定性,从获得高含量、高稳定性的丹参药材原料。利用该原料生产和制备丹参总酮提取物,丹参酮IIA和其它活性中间体,以及用于生产制备以脂溶性丹参酮类为主要活性成分的各种丹参制剂,可以大大提高相关产品的产量、质量、稳定性和经济效益。
依据本发明,可以通过丹参采挖后干燥过程环节的严格控制,达到提高和稳定丹参药材质量尤其是丹酚酸B含量的目的,而无需像以往所要求的那样,必须从丹参种质、栽培环境、栽培技术等各个方面,严格依照丹参栽培的SOP(Standard Operation Procedure,标准操作规程)进行全程监控,以其获得优质的丹参药材。事实上这样的规范和要求即费时(至少约一年半),也费大量人力物力,实际上也是难以实施的。本发明为丹参药材的GAP(Good Agricultural Practices,优质生产规范)生产,提供了一种高效、简便、易于实施的关键技术。
依据本发明,可以通过优化和控制采挖后丹参根的干燥条件和干燥过程,获得适当湿度的、具有较高含量丹酚酸B等水溶性活性成分的丹参药材原料,用于生产以丹酚酸B为主活性成分的总酚酸提取物、丹酚酸B和其它活性中间体,以及相关制剂,从而最大限度地提高相关产品的产量、质量、稳定性和经济效益。
依据本发明,也可以通过优化和控制采挖后丹参根的干燥条件和干燥过程,获得适当湿度的、具有较高含量丹参酮IIA等脂溶性活性成分的丹参药材原料,用于生产丹参总酮提取物、丹参酮IIA或隐丹参酮等活性中间体,以及相关制剂,从而最大限度地提高相关产品的产量、质量、稳定性和经济效益。
附图说明
图1为丹参鲜药材130℃烘干过程中丹酚酸B及其它成分变化色谱图。
图2为不同温度烘干过程中丹酚酸B的含量变化趋势图。
图3为不同干燥温度丹酚酸B最高值和水分达标时的标准值。
图4为干燥过程中丹酚酸B和丹参酮类成分变化色谱图。
图5为干燥过程中丹参酮类成分变化趋势图。
图6为新鲜丹参根晾晒过程中丹酚酸B等 13 种活性成分的动态变化。
图7为新鲜和采用优化工艺晒干的丹参药材中丹酚酸B的含量。
具体实施方式
以下以具体实施实例更具体地说明本发明内容:
实施例1.显著提高丹酚酸B和丹参酮类活性成分含量的优质丹参药材的快速烘干方法
材料与方法:新鲜丹参药材2008年11月份采于山东临朐。采集的新鲜药材于两天内带回实验室,除去泥沙后切成1~2mm的薄片,混合均匀,放入-20℃冰箱保存,分批取出用于烘干工艺优化研究。样品中水分含量测定按照《中国药典》(一部)附录IX H 第一法(烘干法)进行测定;样品中丹酚酸B、二氢丹参酮I;隐丹参酮;丹参酮I和丹参酮IIA 5种主要有效成分的含量测定采用HPLC方法。
实验结果:如图1,图2所示,新鲜丹参根丹酚酸类和丹参酮类在不同温度烘干过程中均有较大幅度增加,其中最显著的是丹酚酸B,其含量由新鲜药材中的不足0.1%增加至最高3.9%,增长近 40倍。在设定实验条件下,其最佳烘干条件为:130℃烘干40分钟,此时样品水分含量达到药典标准,丹酚酸B含量达最大值,丹参酮IIA等成分含量也达较高水平(图4,图5)。但这一优化烘干条件可随烘箱体积、丹参样品量及丹参切片厚薄的不同而有所变化,在实际应用中需作适当调整。
实施例2. 显著提高丹酚酸B和丹参酮类活性成分的优质丹参药材的组合干燥工艺
材料与方法:新鲜丹参药材2010年10月中旬采于山东临朐县。采集的新鲜药材于两天内带回实验室,除去泥沙后,整体置于-20℃冰箱保存。预实验取约 3Kg 整体样品置于水泥地面上晾晒,每天下午五点左右收集约 100g,立即切片、粉碎,分别测定样品中水分含量和丹酚酸B等13种有效成分含量。然后依据测定结果,制定最优丹参药材干燥工艺组合。样品中水分含量测定按照《中国药典》(一部)附录IX H 第一法(烘干法)进行测定;样品中丹酚酸B等13种主要有效成分的含量测定采用HPLC方法。
实验结果:预实验如图6所示,新鲜丹参整根在晾晒 3-6天 时样品中丹酚酸B等活性成分的含量中均有较大幅度增加,其中最显著的是丹酚酸B,其含量由新鲜药材中的不足0.1%增加至最高6.5%,增长近 65 倍。依据本预实验结果,确定生产优质丹参药材最佳组合干燥工艺为:先将新鲜丹参药材在通风处晾晒 3-7 天,当丹参中水份含量按重量比计为 30-15% 时,再切片,采用冻干法或快速烘干法将药材充分干燥。按照此优化工艺获得的丹参药材产品丹酚酸B的含量如图7。但这一优化组合干燥条件可随丹参样品量、通风及阳光条件,及丹参切片厚薄等不同而有所变化,在实际应用中需作适当调整。
实施例3.有效提高丹酚酸B含量和得率、显著降低生产成本的丹参总酚酸提取物的制备方法
材料与方法:新鲜丹参药材2010年10月中旬采于山东临朐县。采集的新鲜药材于两天内带回实验室。取约2Kg整体样品置于水泥地面上晾晒3天后,将药材切成2~3mm薄片,得620g湿度约20-15% 的丹参药材原料。将该原料切成2~3mm薄片,分别用 70% 丙酮6.0Kg提取二次,过滤,合并提取液,回收丙酮。浓缩的水提取液加 3倍原体积的去离子水进行稀释,过滤,澄清滤液通过内装1.0Kg D101大孔吸附树脂的树脂柱进行吸附。待全部吸附完成后,采用4倍柱床体积的去离子水冲洗一次,然后再用4倍柱体积30% 的乙醇进行洗脱。合并30%乙醇洗脱液,减压浓缩至无醇味,冻干,即的丹参总酚酸提取物。
实验结果:获得丹参总酚酸提取物 41.5g, 折合成干药材得率为6.7%。HPLC法测得提取物中丹酚酸B含量为87%,其它含少量迷迭香酸、紫草酸等。
实施例4. 有效提高丹参酮IIA含量和得率、显著降低生产成本的丹参总酮提取物的制备方法
材料与方法:新鲜丹参药材2010年10月中旬采于山东临朐县。采集的新鲜药材于两天内带回实验室。取约2Kg整体样品置于水泥地面上晾晒3天后,将药材切成2~3mm薄片,得 620g 湿度约15-20% 的丹参药材原料。将该切片分别用 70% 丙酮 6.0Kg 提取二次,过滤,合并提取液,回收丙酮。浓缩的水提取液加 3 倍原体积的去离子水进行稀释,过滤,澄清滤液通过内装 1.0Kg D101大孔吸附树脂的树脂柱进行吸附。待全部吸附完成后,采用4倍柱床体积的去离子水冲洗一次,然后再用4倍柱体积30% 的乙醇进行洗脱。合并30%乙醇洗脱液得丹酚酸部分。最后再采用4倍柱体积70%乙醇进行洗脱,合并 70% 乙醇洗脱液,减压浓缩至无醇味,冻干,即得丹参总酮提取物。
实验结果:获得丹参总酮提取物 4.8g, 得率为0.77%。HPLC法测得提取物中丹参酮IIA 含量为40.2%;隐丹参酮含量为32.0%;二氢丹参酮I含量为2.8%;丹参酮I含量为6.2%。
实施例5.显著提高有效成分含量、稳定性和得率的丹参注射液的生产和制备方法
新鲜丹参药材2010年10月中旬采于山东临朐县。采集的新鲜药材除去泥沙后,按实施例2所述组合干燥方法,先在通风处晾晒 6 天,然后再切片,采用冻干法将药材充分干燥,得优质丹参药材原料。取该原料 1Kg,加水煎煮三次,合并煎煮液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.3 (50-55℃),加入2倍量95%乙醇,充分搅拌,静置24小时后,滤过,滤液回收乙醇后,浓缩至相对密度为1.3 (50-55℃),加入注射用去离子水1.8L,NaOH调pH至10.0,煎煮 2小时,放冷,低温静置过液,过滤;滤液再加HCL调pH至3.0,充分搅拌,低温静置过夜,过滤。滤液再加NaOH调至pH7.0,加注射用去离子水调至2.0L,静滤,分装成20mL,灭菌,即得。
Claims (7)
1.一种生产优质稳定丹参药材的方法,其特征在于具体步骤为:将新鲜采集的丹参的根或根茎进行干燥处理,干燥处理的方式为通过烘箱快速烘干,或通过晾晒、阴干与冷冻干燥和烘箱快速烘干组合进行干燥;当采用烘箱快速烘干时,在 100℃—150℃ 温度下将丹参整根或2-3mm薄片烘干 30--60 分钟;当采用晾晒、阴干与冷冻干燥或烘箱烘干的组合进行干燥时,先将丹参整根晾晒或阴干 3-7天,当丹参中水份含量按重量比计为 30-15% 时,再切片,用冷冻干燥和烘箱烘干继续干燥至药典标准。
2.由权利要求1所述方法得到的丹参药材,其特征在于:丹参药材中丹酚酸B的含量≥3.0%;丹参酮IIA的含量≥0.2%;水份≦ 13% 。
3.一种丹参总酚酸提取物的制备方法,其特征在于具体步骤为:将新鲜采集的丹参根或根茎,晾晒或阴干 3-7 天,当丹参中水份含量按重量比计为 30-15% 时,切碎,用于提取;或将如权利要求2所述丹参药材原料切片,直接进行提取;所述提取的方法为:将经过处理的丹参用体积浓度为30-90%溶剂提取2-3次,合并提取液,回收溶剂,所述溶剂为丙酮、乙醇或甲醇;过滤,滤液用 D101 大孔吸附树脂吸附,再用体积浓度为的 20-50%乙醇或甲醇洗脱,收集 20-50%乙醇或甲醇洗脱液,再经浓缩、冻干,即得到高含量、高产量丹参总酚酸提取物。
4.由权利要求3所述制备方法得到的丹参总酚酸提取物,其特征在于:提取物中丹酚酸B的含量≥80%。
5.一种丹参总酮提取物的制备方法,其特征在于具体步骤为:将新鲜采集的丹参根或根茎,晾晒或阴干 3-7 天,当丹参中水份含量按重量比计为 30-15% 时,切碎,用于提取;或将如权利要求2所述丹参药材原料切片,直接进行提取;所述提取的方法为:将经过处理的丹参用体积浓度为30-90%的溶剂提取2-3次,合并提取液,回收溶剂,所述溶剂为丙酮、乙醇或甲醇;过滤,滤液用 D101 大孔吸附树脂吸附,再用体积浓度为的 20-50%乙醇或甲醇洗脱,收集 20-50%乙醇或甲醇洗脱液,获得总酚酸提取物;柱床再用体积浓度为40-95% 乙醇或甲醇洗脱,收集 40-95% 乙醇或甲醇洗脱部分,浓缩、冻干,即得高含量、高产量丹参总酮提取物。
6.由权利要求5所述制备方法得到的丹参总酮提取物,其特征在于:提取物中二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA 四种丹参酮的含量总和不低于70%。
7.由权利要求2所述的优质丹参药材、由权利要求4所述的丹参总酚酸提取物、由权利要求6所述的丹参总酮提取物在制备各种丹参制剂中的应用。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20120704 |