CN111450149A

CN111450149A - 一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺

Info

Publication number: CN111450149A
Application number: CN202010444179.5A
Authority: CN
Inventors: 李芸; 苗小楼; 杨秀娟; 马冬妮; 帖晓燕
Original assignee: Gansu University of Chinese Medicine
Current assignee: Gansu University of Chinese Medicine
Priority date: 2020-05-22
Filing date: 2020-05-22
Publication date: 2020-07-28

Abstract

本发明涉及一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺，包括以下步骤：（1）鲜大黄处理：将唐古特大黄鲜药材除尽杂质、刮去外皮，自然晾晒至含水量为原药材含水量的50%~60%或40℃~60℃下恒温干燥至含水量为原药材含水量的50%~60%；（2）切制：将上述处理后的唐古特大黄鲜药材切制成8~12mm的立方丁；（3）干燥：将切制后的唐古特大黄鲜药材自然晾干或烘干。本发明优选所得唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺稳定、合理、可行，操作性强，可用于指导实际生产，不仅能极大地降低企业成本，提高生产效率，实现药材资源的高效利用，还能有效避免主要有效成分的损失，生产出品质优良的饮片，为大黄饮片产地规范化生产及推广应用提供科学依据。

Description

一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺

技术领域

本发明属于中药材加工领域，涉及一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺。

背景技术

唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）是药典收载的正品大黄之一，也是甘肃五大宗优质道地药材之一，在甘肃甘南等地大面积栽培。在临床上和大黄的其它2个品种一样等同使用，具泻下攻积，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经，利湿退黄等功效，用于实热积滞便秘、湿热痢疾等。唐古特大黄一般于秋末茎叶枯萎或次春发芽前采收，并在产地进行初步加工，将鲜大黄除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。产地加工后将大黄原药材运送至饮片生产企业进一步炮制，经“二次闷润”，切制，再干燥得到传统大黄饮片。

大黄始载于《神农本草经》，列为下品，以根及根茎入药，以泻下、健胃著称于世，已被19个国家的药典列为植物性泻药。唐古特大黄鲜药材汁液丰富，主要含游离蒽醌、结合蒽醌、番泻苷A、B等主要成分。唐古特大黄饮片在采用传统方法炮制时，先通过产地加工将鲜大黄形成药材，再通过炮制将好不容易干燥的药材再软化切制形成饮片，分属2个完全独立的环节，且产地加工时大多仅凭药农的经验进行干燥处理，缺乏科学的产地加工技术规范，无法保证大黄干药材的质量。在大黄饮片生产时，需要反复闷润，易发霉变质，且费工费时，重复操作，过程繁杂，成本高，劳动强度大，制约大黄产业的高质量发展和资源的有效利用。此外，在产地对鲜大黄药材进行烘烤晾晒以及饮片生产时所进行的烘烤晾晒等干燥处理和反复闷润处理，均可导致其中所含蒽醌、番泻苷等成分大量流失。

发明内容

针对唐古特大黄存在的上述问题和弊端，本发明的目的是提供一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺，将唐古特大黄的产地加工与饮片的炮制生产工艺进行合并，提高了唐古特大黄有效成分的利用率，简化了加工程序，减少了重复操作，降低了劳动强度。

一、唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺

（1）鲜大黄处理：将唐古特大黄鲜药材除尽杂质、刮去外皮，自然晾晒至含水量为原药材含水量的50%~60%或40℃~60℃下恒温干燥至含水量为原药材含水量的50%~60%；

（2）切制：将步骤（1）处理后的唐古特大黄鲜药材切制成8~12mm的立方丁；

（3）干燥：将切制后的唐古特大黄鲜药材自然晾干或烘干。

步骤（3）中，所述烘干温度为40℃~60℃。

所述唐古特大黄鲜药材是生长3~5年的唐古特大黄。

二、大黄丁产地加工与炮制一体化工艺优选

1、蒽醌类、番泻苷类以及水溶性浸出物的测定

大黄所含的蒽醌苷类、番泻苷类成分是其发挥攻积导滞、荡涤肠胃的主要物质基础，蒽醌类衍生物通过增加肠道黏膜蠕动，抑制肠内水分吸收，从而促进排便；醌甙进入大肠后通过抑制肠细胞膜上Na^＋-K^＋-ATP酶过程的产生，降低 Na^＋转运吸收程度，加大肠腔容积，使大肠内渗透压增高，保留大量水份，促进肠蠕动而排便。《中国药典》（2015年版）也以蒽醌类（游离蒽醌和总蒽醌）成分含量作为大黄药材质量控制指标。唐古特大黄出口日本仅以番泻苷A含量为控制指标（《日本药局方》规定，不得低于0.25%），因此，本发明选取了蒽醌类、番泻苷(A+B)作为优选一体化工艺的评价指标。

1.1水溶性浸出物的测定

按《中国药典》2015年版，水溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，结果见表6。

1.2 蒽醌衍生物含量测定

1.2.1 总蒽醌含量测定

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素对照品8.08mg、大黄酸对照品8.84mg、大黄素对照品8.16mg、大黄酚对照品7.84mg、大黄素甲醚对照品7.92mg，置100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成每1mL含芦荟大黄素80.8μg、大黄酸88.4μg、大黄素81.6μg、大黄酚78.4μg、大黄素甲醚79.2μg的混合对照品溶液。

供试品溶液的制备：取大黄样品粉末（过四号筛）各0.15g，精密称定，按《中国药典》（2015年版）一部大黄项下总蒽醌供试品溶液的制备方法处理样品，作为供试品溶液。

色谱条件：色谱柱：Eclipse XDB-C₁₈ (4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇－0.1%磷酸溶液（85:15）；流速：1mL/min；检测波长：254nm；柱温：30℃；进样量：10μL。在此色谱条件下5种组分分离良好。

1.2.2 游离蒽醌含量测定

对照品溶液的制备：取总蒽醌含量测定项下的对照品溶液，即得。

供试品溶液的制备：取大黄样品粉末（过四号筛）各0.5g，精密称定，按《中国药典》（2015年版）一部大黄项下游离蒽醌供试品溶液的制备方法处理样品，作为供试品溶液。

色谱条件：同总蒽醌项下色谱条件。

1.2.3样品含量测定

分别精密吸取总蒽醌项下的对照品溶液与总蒽醌含量测定项下及游离蒽醌含量测定项下的供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，计算含量，对照品及样品色谱图见图1、图2、图3，其中，1 芦荟大黄素；2 大黄酸；3 大黄素；4 大黄酚；5 大黄素甲醚。计算结果见表6。

1.3番泻苷A、B的含量测定

1.3.1 对照品溶液的制备

分别精密称取减压干燥至恒定质量的番泻苷A对照品5.25mg，番泻苷B对照品3.55mg，置50mL容量瓶中，加入质量分数为0.1%的碳酸氢钠溶液使溶解，定容至刻度，配制成含番泻苷A 105.0 μg/ mL，番泻苷B 71.0 μg/mL的混合对照品溶液。

1.3.2 供试品溶液的制备

精密称取大黄样品粉末（过四号筛）0.25g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50mL，密塞，称定重量，超声45分钟，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液，平行制备三份样品。

1.3.3 色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C₁₈ (4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈－0.4%甲酸（梯度洗脱程序见表1）；流速：0.8mL/min；检测波长：340nm；柱温：30℃ ；进样量：10μL。在此色谱条件下番泻苷A和番泻苷B分离度良好，对照品及样品色谱图见图4、图5。

1.3.4方法学考察

1.3.4.1线性关系考察

精密吸取上述混合对照品溶液2mL、4mL、6mL、8mL、10mL置10mL容量瓶中，加0.1%碳酸氢钠溶液稀释至刻度，摇匀，制成不同浓度的番泻苷A和番泻苷B混合溶液，各进样10μL，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图。以对照品的峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归，得到番泻苷A的回归方程为：Y=11.328X-0.7326，r=0.9997；得到番泻苷B的回归方程为：Y=11.903X+0.1918，r=0.9996；结果表明：番泻苷A在21.0～105μg/mL范围内线性关系良好，番泻苷B在14.2～71μg/mL范围内线性关系良好。

1.3.4.2精密度试验

精密吸取同一番泻苷A和B混合对照品溶液10μL，按照“1.3.3”项下进行测定，重复进样6次，记录两种对照品峰面积积分值。测得番泻苷A、番泻苷B峰面积的RSD值分别为0.17%和0.11%。结果表明，仪器的精密度良好。

1.3.4.3重复性试验

取唐古特大黄同一批号样品，按“1.3.2”项下制备供试品溶液，平行处理6份，分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，测得样品中番泻苷A和番泻苷B的含量分别为0.5697%、0.3272%。测得结果的RSD值分别为2.78%、2.19%，结果表明本试验方法有较好的重复性。

1.3.4.4稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h各进样一次，测定两种成分峰面积积分值，结果测得番泻苷A、番泻苷B峰面积的RSD值分别为0.14%、0.48%，结果表明样品在24小时内有较好的稳定性。

1.3.4.5 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（番泻苷A含量0.5697%，番泻苷B含量0.3272%）0.125g，平行称取6份，分别精密加入混合对照品溶液（混合对照品溶液中番泻苷A 浓度为 0.15 mg/mL、番泻苷B 为 0.08 mg/m L）5mL，再按“1.3.2”项下供试品溶液的制备方法进行制备，依法测定，计算得番泻苷A、番泻苷B的加样回收率分别为98.33%、97.35%，RSD分别为2.86%、2.64%，结果见表2。

1.3.5 样品含量测定

按“1.3.2”项下供试品溶液的制备方法对各样品进行制备，按“1.3.3”项下色谱条件进样，结果见表6。

2、大黄丁产地加工与炮制一体化工艺研究

《中国药典》（2015年版）规定，大黄切“片或块”，为了适应市场实际需求，使临床调配方便、快捷、以及便于实现机械化调配，本发明在调研甘南百草生物科技开发有限公司的基础上选择5 mm和10mm 立方丁两种常见大黄出口切制规格；在参考相关文献的基础上（唐文文,李国琴,宋平顺,等.大黄干燥方法研究[J].中草药,2013,44(3): 424-429；刘何春,周国英,聂秀青,等.唐古特大黄药材干燥方法研究[J].天然产物研究与开发,2017,29(10):1658-1665+1687；胡会娟,刘佳,刘金玉,等.不同干燥方法对大黄9种活性成分含量的影响研究[J].中国现代中药,2016,18(07):899-902+928），选择了自然晾晒和45℃恒温烘干两种最为常见及适宜的干燥方式；采用正交设计试验，以多指标综合评价法对大黄丁的一体化加工工艺进行了优选。

2.1 鲜切程度的控制（含水量范围的选择）

取适量唐古特大黄鲜药材，除尽杂质、刮去外皮，一份在45℃下进行恒温干燥，一份进行自然晾晒，分别在不同的时间点进行取样，将样品切制成10mm的立方丁，对样品含水量进行测定，通过考察切丁的效果（切丁的难易程度、干燥后片型的平整度及切制过程中是否有碎片）确定适宜切制时大黄药材的含水量范围。结果见表3、表4。

表3表明：唐古特大黄鲜药材自然晾晒2~3天左右(药材的含水量为52%~58%之间时)，易切制且片型的平整度较好。

表4表明：唐古特大黄鲜药材在45℃下恒温烘制约5~7h左右（药材的含水量为55%~59%），易切制且片型的平整度较好。

2.2一体化工艺研究

大黄饮片的炮制受切制、干燥等多种因素的影响，本实验以鲜大黄处理方式、切制规格（mm）、饮片干燥方式为考察因素，每个因素设置2个水平，因素水平表编制如表5。以水溶性浸出物、游离蒽醌、总蒽醌、番泻苷A、B的含量为考察指标，将采收期的唐古特大黄鲜药材采集后，除尽泥沙、刮去外皮，选用自然晾晒和45℃恒温烘制两种处理方式，分别干燥至含水量为其原始含水量的52%~ 58%和55% ~ 59%时，分别切制成5mm、10mm的立方丁，所得饮片分别选用自然晾干和45℃烘干两种干燥方式进行干燥，共制得8份唐古特大黄的饮片样品，实验过程中制得样品见图6、图7。按 L₈（2⁴）正交设计试验表安排试验，采用综合加权评分法，对实验结果进行评价。按指标隶属度=测定值/最大测定值，计算各指标的隶属度，0 ≤ 指标隶属度 ≤ 1；具体权重系数分配为：水溶性浸出物30%，总蒽醌+游离蒽醌35%，番泻苷（A+B）35%，按综合评分=水溶性浸出物的隶属度×100×30%+（游离蒽醌+总蒽醌）的隶属度×100×35%+番泻苷（A+B）的隶属度×100×35%，满分为100，计算8份样品的综合评分。试验安排与结果见表6，方差分析见表7。

综合表6、7分析可知，影响唐古特大黄丁趁鲜切制工艺的因素主次依次为切制规格B > 饮片干燥方式C > 鲜大黄处理方式A，其中切制规格的大小对其炮制工艺影响显著。所得唐古特大黄丁产地加工与炮制一体化的最佳工艺为A₁B₂C₁，即鲜大黄“自然晾晒”至相当于原药材含水量的52%~58%时，切制成10mm立方丁，“自然晾干”。在大黄丁实际生产加工过程中若遇冰冻、雨雪等天气的影响亦可选用45℃烘干

2.3工艺验证

取大小均匀的唐古特大黄鲜药材，按照所优选的最佳工艺：鲜大黄自然晾晒至相当于原药材含水量的52%~58%，切制成10mm立方丁，自然晾干，处理大黄样品，验证三批。结果，水溶性浸出物、游离蒽醌+总蒽醌、番泻苷A+B质量分数平均值分别为：37.63%， 5.9502%，1.3430%，与正交试验最好的结果相当。结果表明优选所得大黄丁一体化加工工艺切实可行，可操作性强且能保证饮片质量，结果见表8。

相比于传统炮制饮片，一方面，大黄丁一体化饮片中水溶性浸出物（37.63%）、游离蒽醌+总蒽醌（5.9502%）、番泻苷A+B（1.3430%）成分含量略低，（传统饮片各指标分别为：水溶性浸出物 41.23%，游离蒽醌+总蒽醌 6.2531%，番泻苷A+B 1.3204% ）但仍远高于药典要求；另一方面，一体化饮片的泻下作用与传统工艺所得饮片相比，没有显著差异（p >0.05）（传统炮制所得大黄丁高剂量组、低剂量组炭墨推进率分别为：71.09±7.62、81.18±7.75；一体化所得大黄丁高剂量组、低剂量组炭墨推进率分别为：77.85±6.72、82.00±10.72）。这就表明一体化工艺无论在内在质量还是在药理活性方面，均与传统饮片相当且其药理活性有增强趋势。表明采用产地加工与饮片炮制一体化工艺生产大黄丁，不仅能极大地降低企业成本，提高生产效率，实现药材资源的高效利用，还能有效避免主要有效成分的损失，生产出品质优良的饮片，就企业大黄干燥问题的解决提供一定的思路和参考。

3、中试生产

以实验室优选的大黄丁切制工艺为基础，在甘南百草生物科技开发有限公司GMP认证的中药饮片生产车间进行中试生产。将采收回来的鲜大黄500kg经翻整、抖动、剔除等方式除去附着在药材表面的泥土等杂质，做到基本干净，刮去外皮，自然晾晒至含水量为原药材含水量的52%~58%，切制成10mm立方丁，将鲜切大黄丁放置在阳光干燥棚进行干燥，通风排湿，每天进行翻动保证均匀干燥，防止底层霉变，控制阳光棚内的温度不超过45℃，天气好时也可以直接在太阳下晾晒，做好防雨雪、防冻伤。反复晾晒至水分达《中国药典》标准，共制备3批大黄饮片，测定结果见表9。结果表明，大黄丁一体化加工工艺所得大黄饮片质量稳定，工艺可行，适用于大黄饮片的大批量生产。

综上所述，本发明为提高唐古特大黄有效成分的利用率，简化加工程序，减少重复操作，降低劳动强度，将大黄的产地加工与饮片的炮制生产工艺进行合并，不再经过干药材的处理环节，将鲜药材经“干燥至适宜水分、切制、干燥”三道工序，可实现其饮片的产地炮制生产。本发明选择大黄中有效成分蒽醌类、番泻苷类以及水溶性浸出物作为评价指标，用正交设计法对唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化进行考察，优选最佳工艺参数，为唐古特大黄一体化饮片的实际生产及推广应用奠定坚实基础。

本发明优选所得唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺稳定、合理、可行，操作性强，可用于指导实际生产，不仅能极大地降低企业成本，提高生产效率，实现药材资源的高效利用，还能有效避免主要有效成分的损失，生产出品质优良的饮片，为大黄饮片产地规范化生产及推广应用提供科学依据。

附图说明

图1为用于总蒽醌及游离蒽醌测定的对照品溶液的HPLC色谱图。

图2为用于总蒽醌测定的供试品溶液的HPLC色谱图。

图3为用于游离蒽醌测定的供试品溶液的HPLC色谱图。

图4为用于番泻苷A、B的测定的混合对照品溶液HPLC色谱图。

图5为用于番泻苷A、B的测定的供试品溶液HPLC色谱图。

图6为唐古特大黄样品切制时的图片。

图7为唐古特大黄样品干燥后的图片。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

唐古特大黄鲜药材，采自甘南百草生物科技开发有限公司合作市卡加曼乡格村药材种植基地，5年生，经甘肃中医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定为蓼科植物唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）的干燥根及根茎。

（1）鲜大黄处理：将唐古特大黄鲜药材除尽杂质、刮去外皮，自然晾晒2~3至含水量为原药材含水量的52%~58%；

（2）切制：将步骤（1）处理后的唐古特大黄鲜药材切制成10mm的立方丁；

（3）干燥：将切制后的唐古特大黄鲜药材自然晾干。

测得干燥后唐古特大黄丁的水溶性浸出物、游离蒽醌+总蒽醌、番泻苷（A+B）的含量分别为39.58%、6.72%、1.3403%。

实施例2

（1）鲜大黄处理：将唐古特大黄鲜药材除尽杂质、刮去外皮，45℃下恒温干燥5~7h至含水量为原药材含水量的55%~59%；

（3）干燥：将切制后的唐古特大黄鲜药材自然晾干。

测得干燥后唐古特大黄丁的水溶性浸出物、游离蒽醌+总蒽醌、番泻苷（A+B）的含量分别为38.36%、5.23%、1.7685%。

Claims

1.一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺，包括以下步骤：

（3）干燥：将切制后的唐古特大黄鲜药材自然晾干或烘干。

2.根据权利要求1所述的一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺，其特征在于：步骤（3）中，所述烘干温度为40℃~60℃。

3.根据权利要求1所述的一种唐古特大黄丁产地加工与炮制生产一体化工艺，其特征在于：所述唐古特大黄鲜药材是生长3~5年的唐古特大黄。