CN115463142A

CN115463142A - 柚皮苷二氢查尔酮在制备治疗肺纤维化药物中的应用

Info

Publication number: CN115463142A
Application number: CN202211262591.0A
Authority: CN
Inventors: 关文; 姚宏亮; 曾芷筠; 李刚; 张亚莉
Original assignee: Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Current assignee: Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Priority date: 2022-10-14
Filing date: 2022-10-14
Publication date: 2022-12-13
Anticipated expiration: 2042-10-14
Also published as: CN115463142B

Abstract

本发明公开了柚皮苷二氢查尔酮在制备治疗肺纤维化药物中的应用。本发明人通过建立PM2.5诱导小鼠的肺纤维化模型，用不同浓度柚皮苷类似物ND干预肺纤维化模型，从小鼠一般状况、肺功能、SOD活力、肺组织病理学、肺泡灌洗液蛋白浓度和细胞总数等方面考察柚皮苷类似物ND对肺纤维化的缓解作用。结果表明，ND低、高剂量组可改善DPM诱导的肺纤维化模型小鼠的肺组织病理形态学变化，在一定程度上提高肺组织内SOD水平以及减低BALF内细胞总数、总蛋白水平，减轻肺组织损伤；ND低、高剂量组显著改善模型小鼠肺气管周围胶原蛋白的沉积，缓解肺部纤维化，表明ND对DPM诱导的小鼠肺纤维化模型具有很好的保护作用。

Description

柚皮苷二氢查尔酮在制备治疗肺纤维化药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及柚皮苷二氢查尔酮在治疗肺纤维化药物中的应用。

背景技术

PM2.5是空气动力学直径≤2.5μm的颗粒物，其体积细小，能穿过呼吸道进入肺泡中，对肺组织造成损伤，长期暴露在PM2.5的环境中，会增加慢阻肺性疾病(COPD)、哮喘、肺间质纤维化、肺癌、心力衰竭、冠心病等呼吸系统疾病和心血管疾病发病的风险。柴油颗粒物(Diesel oil particulate matter,DPM)是PM2.5的重要来源，经国内外多项研究表明，DPM也能引起呼吸系统的氧化应激以及炎症反应。

柚皮苷二氢查尔酮(Naringin Dihydrochalcone，ND)是由柑橘类水果中提取的黄酮类化合物，具有一定的抗氧化活性，在食品、化妆品等领域具有广泛的应用。

结构如下所示：

发明内容

本发明的目的是提供柚皮苷二氢查尔酮在制备治疗肺纤维化药物中的应用。

所述的治疗肺纤维化药物含有有效剂量的柚皮苷二氢查尔酮。

所述的药物的剂型可以为液体剂型或固体剂型。

所述的液体剂型为注射剂、溶液剂、混悬剂、乳剂或气雾剂。

所述的固体剂型为片剂、胶囊、丸剂、粉针剂或缓释制剂。

本发明还提供了一种治疗肺纤维化药物，其含有有效剂量的柚皮苷二氢查尔酮。

本发明人通过建立PM2.5诱导小鼠的肺纤维化模型，用不同浓度柚皮苷类似物ND干预肺纤维化模型，从小鼠一般状况、肺功能、SOD活力、肺组织病理学、肺泡灌洗液蛋白浓度和细胞总数等方面考察柚皮苷类似物ND对肺纤维化的缓解作用。结果表明，ND低、高剂量组可改善DPM诱导的肺纤维化模型小鼠的肺组织病理形态学变化，在一定程度上提高肺组织内SOD水平以及减低BALF内细胞总数、总蛋白水平，减轻肺组织损伤；ND低、高剂量组显著改善模型小鼠肺气管周围胶原蛋白的沉积，缓解肺部纤维化，表明ND对DPM诱导的小鼠肺纤维化模型具有很好的保护作用。

附图说明

图1为各组小鼠肺组织HE染色，注：A1空白对照组(×100)；A2空白对照组(×200)；B1模型组(×100)；B2(×200)；C1 ND低剂量组(×100)；C2 ND低剂量组(×200)；D1 ND高剂量组(×100)；D2 ND高剂量组(×200)；E1地塞米松阳性组(×100)；E2地塞米松阳性组(×200)；黄色箭头标示组织出血或充血，蓝色箭头标示蛋白质渗出液或水肿液，黑色箭头标示肺泡塌陷，红色箭头标示炎症细胞。

图2为各组小鼠Masson三色染色(×100)，注：从A-E分别为：空白组、模型组、ND低剂量组、ND高剂量组和地塞米松阳性对照组；图中被染为蓝色的是胶原纤维蛋白。

图3为各组小鼠肺组织SOD活力，注：从A-E分别为：空白对照组、模型组、ND低剂量组、ND高剂量组和地塞米松阳性对照组；与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，^△P<0.05；^△△P<0.01。

图4为各组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数，注：从A-E分别为：空白对照组、模型组、ND低剂量组、ND高剂量组和地塞米松阳性对照组；与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，^△P<0.05；^△△P<0.01。

图5为各组小鼠肺泡灌洗液中总蛋白浓度，注：从A-E分别为：空白对照组、模型组、ND低剂量组、ND高剂量组和地塞米松阳性对照组；与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，^△P<0.05；^△△P<0.01。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1.方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物

Balb/c雄性小鼠，40只，周龄：6-7周；体重：18-22g。

1.1.2实验试剂

柴油微粒物质(DPM 2975)购于美国NIST；柚皮苷二氢查尔酮ND；BCA试剂盒、SOD试剂盒购于碧云天公司；Masson三色染色液试剂盒购于索莱宝公司等。

1.1.3实验仪器

加热搅拌器、石蜡切片机、显微镜、相机、注射器、酶标仪、天平、烘箱、冷冻离心机等。

1.2动物分组以及造模

将小鼠随机分为5组：空白对照组、模型组(10μg/只DPM)、ND低剂量组(50mg/kgBW)、ND高剂量组(100mg/kg BW)、地塞米松阳性对照组(2mg/kg BW)，每组8只。ND低剂量组和ND高剂量组开始灌胃给药柚皮苷类似物ND记为第1天，连续给药14天，给药体积为250μl，其中模型组给予等量生理盐水。模型组、ND低剂量组、ND高剂量组、地塞米松阳性对照组在每次滴注DPM前2小时灌胃给药。

小鼠造模方法和剂量参考姚玥等(姚玥,沈颖芝,李伟,李昶,蒋福升,金丽霞,周芳美,丁志山.白及提取物对PM2.5致小鼠亚急性肺损伤的干预作用研究[J].中华中医药学刊,2021,39(12):33-36+276-277)的方法稍作修改。在第7天、第10天、第13天，模型组、ND低剂量组、ND高剂量组、地塞米松阳性对照组气管滴注50μl的2mg/ml DPM悬浊液，空白对照组气管滴注50μl生理盐水。

1.3 ND对小鼠肺功能的影响

在最后一次气管滴注24h后，每组随机挑选4只小鼠，对其进行肺功能检测。首先对肺功能仪进行校准调试，调试完成后对小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg BW)，待其麻醉后，剪开颈部皮肤，手术分离气道，在气管部剪大约1mm切口，将肺功能检测仪的插管接头插入气管，用棉线固定住，将小鼠转移至肺功能检测仪，插管另一端连接肺功能检测仪接口，测量小鼠MV(每分钟静息通气量)、TV(潮气量)、Cdyn(动态顺应性)和PEF(用力最大呼气流速)等肺功能指标。

1.4小鼠取材

测定小鼠肺功能后，颈椎脱臼处死，采用手术分离气道，用细棉线结扎左肺，用生理盐水灌洗右肺，收集灌洗液，灌洗2次，每次0.6ml，在1000r/min离心5min后，收集上清液，即为肺泡灌洗液(BALF)，并置于-80℃保存，离心后细胞体保存待测。在右心耳切开一小口，用灌流针刺入左心室，注入生理盐水进行灌流，洗去肺脏中的血液。取左肺一部分用4％多聚甲醛固定，后续用于制作切片；一部分用于SOD检测，剩下左右肺叶分别剪下保存于-80℃。

1.5 ND对小鼠肺组织病理形态学的影响

1.5.1 HE染色

小鼠处死后，立即取出小鼠右肺中叶，用4℃预冷的PBS冲洗后置于4％多聚甲醛中固定，24h后流水冲洗过夜，梯度乙醇脱水，二甲苯透明(I和II各15min)，浸蜡(石蜡I和II各1h)，石蜡包埋、切片，HE染色，在光镜下观察肺组织病理学改变并拍摄记录。

1.5.2 Masson染色

采用1.5.1中的制备的蜡块，进行切片，并根据Masson试剂盒对切片进行染色，在光镜下观察肺组织病理学改变并拍摄记录。

1.6 ND对小鼠肺组织中SOD水平的影响

准确称量肺组织重量，按重量(g)：体积(ml)＝1：9的比例，往组织中加入9倍体积的4℃生理盐水，并在3500r/min、冰水浴的条件下机械匀浆，离心10分钟，取上清液，即获得10％的肺匀浆，于-20℃中冻存备用。根据碧云天SOD试剂盒的方法，采用酶标仪测定超氧化物岐化酶SOD的活力(WST-1法)。

1.7 ND对小鼠BALF中的总细胞数量以及总蛋白水平影响

对BALF离心后的细胞体数量进行测定，并根据BCA试剂盒的方法对BALF中的总蛋白进行测定。

2.结果

2.1 ND对小鼠肺功能的影响

各组小鼠肺功能指标结果见表1。与空白对照组比较，模型组的每分钟静息通气量(MV)、潮气量(TV)以及动态顺应性(Cdyn)显著降低；与模型组比较，ND高剂量组、地塞米松阳性组均能显著增加；而用力最大呼气流速(PEF)在各组之间均没有显著差异。

表1各组小鼠肺功能指标变化比较

注：与空白对照组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，^△P<0.05；^△△P<0.01。

2.2 ND对小鼠肺组织病理形态学的影响

2.2.1 HE染色

小鼠肺组织HE染色结果如图1。与空白对照组比较，模型组肺泡塌陷且肺泡壁增厚，细胞间隙存在大量炎症细胞浸润；与模型组相比，ND低、高剂量组以及地塞米松阳性对照组可在一定程度上改善肺泡壁增厚，并能减少炎症细胞浸润。

2.2.2 Masson染色

小鼠肺组织Masson染色结果如图2。与空白对照组比较，模型组气管周围可见大量胶原纤维蛋白(图中蓝色结构)堆积；与模型组相比，ND低、高剂量组以及地塞米松阳性对照组可在不同程度上，减轻胶原纤维蛋白的沉积。

2.3 ND对小鼠肺组织中SOD水平的影响

小鼠肺组织中SOD水平结果如图3。与空白对照组比较，模型组肺组织中SOD水平显著降低；与模型组比较，ND高剂量组显著增加。

2.4 ND对小鼠BALF中的总细胞数量以及总蛋白水平影响

小鼠BALF中的总细胞数量结果如图4。与空白对照组比较，模型组肺组织中细胞总数显著升高；与模型组比较，ND高剂量组细胞总数显著减少。

小鼠BALF中的总蛋白水平结果如图5。与空白对照组比较，模型组肺组织中总蛋白水平显著升高；与模型组比较，ND高剂量组总蛋白水平显著减少。

3.讨论

本文实验结果表明，ND低、高剂量组可改善DPM诱导的肺纤维化模型小鼠的肺组织病理形态学变化，在一定程度上提高肺组织内SOD水平以及减低BALF内细胞总数、总蛋白水平，减轻肺组织损伤；ND低、高剂量组显著改善模型小鼠肺气管周围胶原蛋白的沉积，缓解肺部纤维化，表明ND对DPM诱导的小鼠肺纤维化模型具有很好的保护作用。

Claims

1.柚皮苷二氢查尔酮在制备治疗肺纤维化药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗肺纤维化药物含有有效剂量的柚皮苷二氢查尔酮。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的药物的剂型为液体剂型或固体剂型。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的液体剂型为注射剂、溶液剂、混悬剂、乳剂或气雾剂。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的固体剂型为片剂、胶囊、丸剂、粉针剂或缓释制剂。

6.一种治疗肺纤维化药物，其特征在于，含有有效剂量的柚皮苷二氢查尔酮。