CN115433264A - 一种水稻抗病基因lbrw1、重组载体、重组工程菌及应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种水稻抗病基因LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用，涉及基因工程技术领域。该水稻抗病基因LBRW1具有如SEQ ID NO：1所述的编码区序列，如SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列。其CDS序列长3612bp，编码1203氨基酸的蛋白，且该蛋白包括NB‑ARC和RX‑CC结构域。本发明的水稻抗病基因LBRW1可弥补现有水稻抗稻瘟病基因的不足，将其应用于水稻中可提高水稻抗病性，尤其是由稻瘟菌引起的水稻稻瘟病抗性，因而可为通过抗性育种来绿色防控稻瘟病提供重要的基因资源。

Description

一种水稻抗病基因LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，且特别涉及一种水稻抗病基因 LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，全球超过1/2的人口以稻米为主食。在水稻生产过程中，由真菌引起的病害严重威胁水稻的安全生产，不仅降低了水稻产量种植，同时还增加了种植成本。其中，由稻瘟菌 (Magnaporthe grisea)引起的稻瘟病被称为水稻的癌症，其会导致水稻严重减产，甚至颗粒无收。稻瘟病菌可以在水稻的各个生长时期侵染水稻的所有地上器官，包括叶片、叶枕、节、茎秆、小穗，甚至可以侵染水稻根部。目前，在大面积种植抗病品种的情况下，由稻瘟病引起的水稻年产量损失仍能占到世界水稻年产量损失的10％～30％。

常用的防治稻瘟病的方法主要有使用杀菌剂、采取农艺措施以及培育抗性品种。但是，过度使用杀虫剂来控制植物病害已经使全球环境受到严重污染，因此，培育和推广抗性品种成为最经济、最安全、最有效的防治手段。但稻瘟病菌菌株变异快，常常导致新推广的抗性品种在应用数年后抗性降低或者抗性丧失。

目前，已有37个水稻抗稻瘟病基因被克隆，但多数抗性基因的抗谱较窄，只能专一的对稻瘟菌的个别生理小种具有一定的抗性，而稻瘟菌常常发生变异，容易导致抗性品种抗性丧失。因此，新的广谱抗病基因，尤其是抗稻瘟病基因亟待发掘，从而可为通过抗性育种来绿色防控稻瘟病提供重要的基因资源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水稻抗病基因LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用，以弥补现有水稻抗稻瘟病基因的不足，将其应用于水稻中可提高水稻抗病性，尤其是由稻瘟菌引起的水稻稻瘟病抗性，因而可为通过抗性育种来绿色防控稻瘟病提供重要的基因资源。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明提出一种水稻抗病基因LBRW1，所述水稻抗病性基因的编码区序列如SEQID NO：1所示。

可选地，所述水稻抗病基因LBRW1编码的氨基酸序列如SEQ ID NO： 2所示。

本发明提出一种含有上述水稻抗病基因LBRW1的重组载体。

可选地，载体为pCambia1301-35SN。

本发明提出一种含有上述水稻抗病基因LBRW1的重组工程菌。

本发明提出上述水稻抗病基因LBRW1在提高水稻稻瘟病抗性中的应用。

可选地，如上所述的应用，包括以下步骤：

S1、将所述水稻抗病基因LBRW1克隆到pCambia1301-35SN载体中，得到表达载体；

S2、将所述表达载体转化至农杆菌后，用转化后的所述农杆菌对水稻进行侵染转化，得到转基因植株。

可选地，所述水稻的品种为C105TTP-4L-23。

本发明实施例的水稻抗病基因LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用的有益效果是：

本发明所提供的水稻抗病基因LBRW1是首次从水稻中克隆得到的。其 CDS序列长3612bp，编码1203氨基酸的蛋白。用CDD在线程序分析预测发现该蛋白包括NB-ARC和RX-CC结构域。本发明通过比较稻瘟菌侵染下超表达转基因植株和野生型日本晴的稻瘟病发病情况，发现LBRW1基因能够提高水稻抗稻瘟病能力，将其应用于基因工程领域具有重要的经济价值和应用前景，从而可为水稻广谱抗稻瘟病新品种的选育提供理论基础。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例1的水稻抗病基因LBRW1编码的蛋白的保守结构域预测图；

图2为本发明实施例3的野生型日本晴水稻、转基因日本晴水稻和 CO39水稻接种稻瘟菌7天后叶片的对比图；

图3为本发明实施例3的野生型日本晴水稻、转基因日本晴水稻和 CO39水稻接种稻瘟菌7天后叶片病斑面积的对比图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的水稻抗病基因LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用进行具体说明。

本发明提供一种水稻抗病基因LBRW1，所述水稻抗病性基因LBRW1 的编码区序列如SEQ ID NO：1所示。通过测序可知，LBRW1基因的CDS 长3612bp，其可编码1203氨基酸的蛋白。发明人通过研究发现，该基因能够提高水稻抗稻瘟菌引起的稻瘟病的能力。

进一步地，在本发明较佳实施例中，所述水稻抗病基因LBRW1编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。经蛋白保守结构域预测发现，该蛋白中包含NB-ARC结构域和RX-CC保守结构域。

本发明提出一种含有上述水稻抗病基因的重组载体。

进一步地，在本发明较佳实施例中，载体为pCambia1301-35SN。

本发明提出一种含有上述水稻抗病基因LBRW1的重组工程菌。

本发明还提出上述水稻抗病基因LBRW1在提高水稻稻瘟病抗性中的应用。

进一步地，在本发明较佳实施例中，如上所述的应用，包括以下步骤：

S1、将所述水稻抗病基因LBRW1克隆到pCambia1301-35SN载体中，得到表达载体；

S2、将所述表达载体转化至农杆菌后，用转化后的所述农杆菌对水稻进行侵染转化，得到转基因植株。

进一步地，在本发明较佳实施例中，所述水稻的品种为C105TTP-4L-23。当然，需要说明的是，本发明的LBRW1基因还可用于转化其他品种的水稻以得到具有稻瘟病抗性的转基因植株，本发明不做具体限定。

本发明采用农杆菌转化法转化日本睛以得到转基因植株。通过研究转基因植株与野生型日本晴的抗病情况可知，LBRW1基因可以提高水稻的抗病能力，尤其是抗稻瘟病的抗病能力，将其应用于基因工程领域有着巨大的经济价值和应用前景。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

在下述各实施例中，将水稻抗病基因LBRW1简称为LBRW1。

实施例1

本实施例提供水稻抗病基因LBRW1的克隆方法，包括以下步骤：

(1)根据LBRW1的注释信息(GenBank:BK005062.1)设计一对特异性引物LBRW1-F(CGGTGGCGGCCGCTCTAGAGCCACCATGGAGGGC TCCATGTTCAACC)和LBRW1-R(GGGATCCACTAGTTCTAGCTACGATT TGGGGGCCCAGTTTG)。

(2)提取水稻C105TTP-4L-23(由福建农林大学作物遗传育种与综合利用省部共建教育部重点实验室提供)叶片的总RNA，反转录成cDNA，作为PCR反应模板，以上述引物进行PCR扩增，并对PCR产物进行克隆测序，具体包括以下步骤：

按照RNA提取试剂盒(Takara 9767)的操作流程提取2周龄水稻 C105TTP-4L-23叶片的总RNA，之后以逆转录试剂盒(Takara AT311)将 RNA逆转录为cDNA。以LBRW1-F和LBRW1-R为引物，cDNA为模板按照表1体系进行PCR，反应程序为：98℃预变性2min→(98℃变性10s→60℃退火15s→72℃延伸4min)扩增30个循环→72℃10min→4℃保存。最后将PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。

表1扩增LBRW1基因的PCR反应体系

测序结果显示，水稻LBRW1基因的CDS长3612bp，编码1203氨基酸的蛋白。用NCBI的CDD工具分析LBRW1蛋白的结构发现该蛋白包含 NB-ARC结构域和RX-CC保守结构域(图1所示)。

实施例2

本实施例中提供了一种抗稻瘟病水稻的构建，其中，日本晴由福建农林大学作物遗传育种与综合利用省部共建教育部重点实验室提供，农杆菌 EHA105可购于上海唯地生物技术有限公司，包括以下步骤：

(1)将实施例1得到的LBRW1基因连接到pCambia1301-35SN载体上，具体包括以下步骤：

将经LBRW1-F和LBRW1-R引物克隆后的序列通过Takara的infusion 试剂盒与经XbaⅠ酶切后的pCambia1301-35SN载体骨架相连接，通过卡那霉素平板的筛选后，进行菌落PCR鉴定并送阳性克隆测序，该部分委托生工生物工程(上海)股份有限公司完成，正确后提取质粒转化农杆菌 EHA105。

(2)利用农杆菌介导法使阳性载体pCambia1301-35SN-LBRW1转化日本睛，得到稳定表达的转基因植株LBRW1-OE，具体步骤如下：

取成熟的水稻种子，用2.5％次氯酸钠浸泡消毒30min，无菌水清洗5 次，接着将消毒后的种子接种于愈伤组织诱导培养基，28℃光照下培养7d。

将水稻愈伤组织浸入鉴定正确的农杆菌菌液10min，然后用无菌滤纸吸干表面菌液，接种于共培养培养基；将侵染后的愈伤组织浸入500mg/L 的羧苄青霉素溶液中浸泡15min，重复两次，用滤纸吸干愈伤组织表面水分，接种于筛选培养基。

将新长出的抗性愈伤组织块继代于芽诱导培养基，30℃光照培养至不定芽长出；然后将不定芽继代于生根培养基，30℃光照培养至幼苗长出大部分不定根；最后取出生根的幼苗，洗净培养基，将幼苗根部浸入无菌水炼苗3-7d后，移栽于大田或温室，得到转基因日本晴。

实施例3

本实施例提供野生型日本晴、转基因日本晴和CO39水稻的稻瘟病抗性鉴定，包括以下步骤：

分别取转基因(3个系)日本晴种子、野生型日本晴种子以及对照CO39 水稻种子(由福建农林大学作物遗传育种与综合利用省部共建教育部重点实验室提供)，浸入水中催芽2～3d，随后播种于小花盆中，将水稻幼苗培养于光照强度10000Lx、光周期为14h光照/10h黑暗、28℃的温室内，直至水稻长到三叶一心或四叶一心。其中，转基因日本晴水稻分别为OE-1、 OE-2和OE-3。然后将浓度为1.0×10⁵～2.0×10⁵个/mL稻瘟菌(GUY11) 孢子悬液用高压雾化器均匀的喷至水稻叶片上。接种后的幼苗置于湿度高于90％、26℃的接种室暗培养24h，之后改变光周期为12h光照/12h黑暗，继续培养7d。

如图2所示为野生型日本晴、转基因日本晴和CO39水稻接种稻瘟菌7 天后叶片的对比图。从图2可以看出，接种稻瘟菌7d后，发现超表达转基因(LBRW1-OE)水稻叶片病斑明显少于野生型日本晴。同时，用ImageJ 软件分析病斑面积发现，野生型日本晴的病斑面积高于超表达转基因水稻 (如图3所示)，说明LBRW1基因能够增强水稻稻瘟病的抗性。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 莆田学院

<120> 一种水稻抗病基因LBRW1、重组载体、重组工程菌及应用

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3612

<212> DNA

<213> 水稻C105TTP-4L-23

<400> 1

atggagggct ccatgttcaa cctcccagga aggctcgacc ggctcctgtg tcgtcatggc 60

agcatgctgc ccaagggggc agaggaggag atacctctca tcaagcaaga tctcgaggaa 120

ataatctccg tcctccatgg tcactgtagc gagccaaagc tggaggacca tgccatggtg 180

gtcaggtgct ggatgaagga ggtacgtgag ctctcttatg acatcgagga ttgcatcgac 240

cagtatgagc atgccgccac tgccacccgg tcacatactg gacctaatat ttgtcgccgt 300

aagttcaatc agcggcatgg aaagatgatc ccttgggttc cctggaaact taagcagcgg 360

ttgtggatgg ccaacaagat cagagaattc agcctgcgca cccaggaggc gcttcaacgc 420

cacaccatgt acaacaacct tggtggcatc accattgctt caactactgg aggagatgta 480

tgctctgcaa caccttggca tcccacgcag ttcagagagc acaccgacaa cgtctgttct 540

gtcagtatag acgccgatgg tatggaagct gccctgaatg acctgaacaa gctcaaaaac 600

ttgctcgcta gtatcccgac tgcttctctc gtgcagttca gggagcacgc caataaagtg 660

cgtcatatcc accccgatat ggaagccatc ctgaagaagc tcaaaaacat acccactggt 720

atcaccacta cttctactac cactagaggt gatgtatctt ctacctcatc taggcaaccc 780

acgcggttca tggagtccgt gggtcttgtt ggcatcgacg ccgcggtgaa caagcttgaa 840

aacttgctcg atgtgtgtgg agaggagaag ctcaaggtgg tgtccatcgt gggagttgga 900

ggagttggca agactacgct cgccaacaag ctgtactgca agcttcagcg gcagttcgag 960

tgccgggcat ttgtgcagac atctcagaag actgatatga ggaggcttct catcaatatc 1020

ctctcacagg ttcagccgca ccagtcacct gacaattgga aggtgcatag cctaatttcc 1080

agtatcagga cacatctgca agataagagg tacttgatca taattgatgg tttatgggct 1140

acatccacat gggatgttat taagtgcgct ttgccggatg gtaatagttc cagcagaata 1200

ctaaccacaa cagaaattga ggatctagct ttgcaatctt gtagttatga cttgaaattt 1260

attttcaaga tgaaaccttt tggtgagggt gactcaagaa aactattttt cagtatagtc 1320

tttggctctc attctaagtg tcctccagaa gtcagtgaaa cattatatga tattgtaagg 1380

aaatgtggtg gtttgccgct agctattgtc actgttgcta gtattttagc aagccagctt 1440

gagaaacaag aacaatggga ttatataaac aaatccttag gttacggttt gatggcaaat 1500

cctactttgg aagggatgaa acaactactg aacatttgtt acaacaatct tcctcagcat 1560

ttgaaggtat gcatgttgta tcttagtatg tatcaagaag atcacataat ttggaaagat 1620

gatttagtga gtcaatggat agctgaaggt tttatctgtg caactgaagg gcatgacaag 1680

gaagaaattt caagggccta ttttgatgag cttgtgggca gaaaaatcat ccagcctgta 1740

catatcgatg acagtggtga ggttttgtcc tgtgtagttc accatatggt actcaatttc 1800

gttacataca agtcaataga agaaaatttt attattgcaa tagaccattc acaggcaact 1860

ataagatttg ctgacaaggt tcgacgatta tctatccact ttagtaacgt agaagatgca 1920

actccgccta ccagtatgag attgtcccaa gttcggacag ttgccttctt cggggtcttg 1980

aagtatatgc ctttcgttat ggagtttcga cttattaaag ttctagttct acatattttg 2040

ggtgatgagg atagcatagg catttttgat ctcactaaaa tttcagaact tgttcgactg 2100

agatatttga aggtcacctc taatgtcacc gtaaaactgc caacccagat gcaaggtcta 2160

ccatatttgg agacactgaa aatagatggg acaataagtg aagttccaac agacatttat 2220

ttgccaggtt tgctgcatct tactcttcct gctaagacaa acctgcccag tggaattgtc 2280

cacatgacat cgcttcgtac aattggatat tttgatctca gctgtaactc agcggagaat 2340

ctatggagcc ttggtgagct gagcaatctc cgggatttgc agctcaccta ttctgaaata 2400

cattctgaca atctgaagga taatatgaaa tatcttggat ccattctggg gaaactccgt 2460

aatctcacat ctataacttt atcgcctcct ggctcttcct gtccagatac tctacatatt 2520

gacagggata caaagacgag gatcaatgtt gatggctgga gcagtgtgtc ctctccacca 2580

gcccttcttc agaggtttga gttgttacca tgtgtttgca tcttttctaa cctcccaaat 2640

tggattgggc agcttggaaa cctctgcatt ttgaagattg ggataaggga agtaacaagt 2700

aatagtattg atgttctagg agtattaccg aaactcactg ttttgtcact ttatgtccac 2760

acaaagcctg cagaaaggat tgtctttgac aatgcagggt tctcaatcct caaatacttc 2820

gagtttatat gcagtgtagc atggatgaaa tttgagatgg gtgcaatgcc tagtctaagg 2880

aagctcaagc taggttttga tgtccataga gcagatcagc atgatattat tcctgttggc 2940

atcgaacatc tgtctggact tgaagagatc tctgcaaaaa ttagggtcgc ctatactgct 3000

catgatcatt gtagaagatt tgcagagtca gctttgacta acgcctttat gatgcatcca 3060

ggacgtccta gcgtcaacat acggtgtgtg gattggacct ttcatgataa ggataatgac 3120

tgtgtgggga cacgagagga agaatgtagg actccaatga aacaggagca ttttgtgaaa 3180

gaagacttaa gtgagaaatc tgcagttcta caaaacgagc acgacgaaga agcacataaa 3240

tttgttgaca gaagatatta ttccatcatg gacgcggcag agatccgcag gtgtccgtgg 3300

agcatcaacg aggagcagga gcagccggtg ttgatctacg acgccagaac caagatttcc 3360

cagtcgttgt ccatgcacgg cgaattctgg gcggccgtcc aacggctcac cggcccagct 3420

gccacgccgg ccaagaccaa gaggcacctc cacctgacga cctcgcctga gctggaggac 3480

ggcttcttgc cggtacgtag tctcgtcttc ccgtccgctc cggatccacg gtgcaacatg 3540

aagaagaaga tgacgagggc cggccctgga gggggtcgag cagtgtggtc gaactgggcc 3600

cccaaatcgt ag 3612

<210> 2

<211> 1203

<212> PRT

<213> 水稻C105TTP-4L-23

<400> 2

Met Glu Gly Ser Met Phe Asn Leu Pro Gly Arg Leu Asp Arg Leu Leu

1 5 10 15

Cys Arg His Gly Ser Met Leu Pro Lys Gly Ala Glu Glu Glu Ile Pro

20 25 30

Leu Ile Lys Gln Asp Leu Glu Glu Ile Ile Ser Val Leu His Gly His

35 40 45

Cys Ser Glu Pro Lys Leu Glu Asp His Ala Met Val Val Arg Cys Trp

50 55 60

Met Lys Glu Val Arg Glu Leu Ser Tyr Asp Ile Glu Asp Cys Ile Asp

65 70 75 80

Gln Tyr Glu His Ala Ala Thr Ala Thr Arg Ser His Thr Gly Pro Asn

85 90 95

Ile Cys Arg Arg Lys Phe Asn Gln Arg His Gly Lys Met Ile Pro Trp

100 105 110

Val Pro Trp Lys Leu Lys Gln Arg Leu Trp Met Ala Asn Lys Ile Arg

115 120 125

Glu Phe Ser Leu Arg Thr Gln Glu Ala Leu Gln Arg His Thr Met Tyr

130 135 140

Asn Asn Leu Gly Gly Ile Thr Ile Ala Ser Thr Thr Gly Gly Asp Val

145 150 155 160

Cys Ser Ala Thr Pro Trp His Pro Thr Gln Phe Arg Glu His Thr Asp

165 170 175

Asn Val Cys Ser Val Ser Ile Asp Ala Asp Gly Met Glu Ala Ala Leu

180 185 190

Asn Asp Leu Asn Lys Leu Lys Asn Leu Leu Ala Ser Ile Pro Thr Ala

195 200 205

Ser Leu Val Gln Phe Arg Glu His Ala Asn Lys Val Arg His Ile His

210 215 220

Pro Asp Met Glu Ala Ile Leu Lys Lys Leu Lys Asn Ile Pro Thr Gly

225 230 235 240

Ile Thr Thr Thr Ser Thr Thr Thr Arg Gly Asp Val Ser Ser Thr Ser

245 250 255

Ser Arg Gln Pro Thr Arg Phe Met Glu Ser Val Gly Leu Val Gly Ile

260 265 270

Asp Ala Ala Val Asn Lys Leu Glu Asn Leu Leu Asp Val Cys Gly Glu

275 280 285

Glu Lys Leu Lys Val Val Ser Ile Val Gly Val Gly Gly Val Gly Lys

290 295 300

Thr Thr Leu Ala Asn Lys Leu Tyr Cys Lys Leu Gln Arg Gln Phe Glu

305 310 315 320

Cys Arg Ala Phe Val Gln Thr Ser Gln Lys Thr Asp Met Arg Arg Leu

325 330 335

Leu Ile Asn Ile Leu Ser Gln Val Gln Pro His Gln Ser Pro Asp Asn

340 345 350

Trp Lys Val His Ser Leu Ile Ser Ser Ile Arg Thr His Leu Gln Asp

355 360 365

Lys Arg Tyr Leu Ile Ile Ile Asp Gly Leu Trp Ala Thr Ser Thr Trp

370 375 380

Asp Val Ile Lys Cys Ala Leu Pro Asp Gly Asn Ser Ser Ser Arg Ile

385 390 395 400

Leu Thr Thr Thr Glu Ile Glu Asp Leu Ala Leu Gln Ser Cys Ser Tyr

405 410 415

Asp Leu Lys Phe Ile Phe Lys Met Lys Pro Phe Gly Glu Gly Asp Ser

420 425 430

Arg Lys Leu Phe Phe Ser Ile Val Phe Gly Ser His Ser Lys Cys Pro

435 440 445

Pro Glu Val Ser Glu Thr Leu Tyr Asp Ile Val Arg Lys Cys Gly Gly

450 455 460

Leu Pro Leu Ala Ile Val Thr Val Ala Ser Ile Leu Ala Ser Gln Leu

465 470 475 480

Glu Lys Gln Glu Gln Trp Asp Tyr Ile Asn Lys Ser Leu Gly Tyr Gly

485 490 495

Leu Met Ala Asn Pro Thr Leu Glu Gly Met Lys Gln Leu Leu Asn Ile

500 505 510

Cys Tyr Asn Asn Leu Pro Gln His Leu Lys Val Cys Met Leu Tyr Leu

515 520 525

Ser Met Tyr Gln Glu Asp His Ile Ile Trp Lys Asp Asp Leu Val Ser

530 535 540

Gln Trp Ile Ala Glu Gly Phe Ile Cys Ala Thr Glu Gly His Asp Lys

545 550 555 560

Glu Glu Ile Ser Arg Ala Tyr Phe Asp Glu Leu Val Gly Arg Lys Ile

565 570 575

Ile Gln Pro Val His Ile Asp Asp Ser Gly Glu Val Leu Ser Cys Val

580 585 590

Val His His Met Val Leu Asn Phe Val Thr Tyr Lys Ser Ile Glu Glu

595 600 605

Asn Phe Ile Ile Ala Ile Asp His Ser Gln Ala Thr Ile Arg Phe Ala

610 615 620

Asp Lys Val Arg Arg Leu Ser Ile His Phe Ser Asn Val Glu Asp Ala

625 630 635 640

Thr Pro Pro Thr Ser Met Arg Leu Ser Gln Val Arg Thr Val Ala Phe

645 650 655

Phe Gly Val Leu Lys Tyr Met Pro Phe Val Met Glu Phe Arg Leu Ile

660 665 670

Lys Val Leu Val Leu His Ile Leu Gly Asp Glu Asp Ser Ile Gly Ile

675 680 685

Phe Asp Leu Thr Lys Ile Ser Glu Leu Val Arg Leu Arg Tyr Leu Lys

690 695 700

Val Thr Ser Asn Val Thr Val Lys Leu Pro Thr Gln Met Gln Gly Leu

705 710 715 720

Pro Tyr Leu Glu Thr Leu Lys Ile Asp Gly Thr Ile Ser Glu Val Pro

725 730 735

Thr Asp Ile Tyr Leu Pro Gly Leu Leu His Leu Thr Leu Pro Ala Lys

740 745 750

Thr Asn Leu Pro Ser Gly Ile Val His Met Thr Ser Leu Arg Thr Ile

755 760 765

Gly Tyr Phe Asp Leu Ser Cys Asn Ser Ala Glu Asn Leu Trp Ser Leu

770 775 780

Gly Glu Leu Ser Asn Leu Arg Asp Leu Gln Leu Thr Tyr Ser Glu Ile

785 790 795 800

His Ser Asp Asn Leu Lys Asp Asn Met Lys Tyr Leu Gly Ser Ile Leu

805 810 815

Gly Lys Leu Arg Asn Leu Thr Ser Ile Thr Leu Ser Pro Pro Gly Ser

820 825 830

Ser Cys Pro Asp Thr Leu His Ile Asp Arg Asp Thr Lys Thr Arg Ile

835 840 845

Asn Val Asp Gly Trp Ser Ser Val Ser Ser Pro Pro Ala Leu Leu Gln

850 855 860

Arg Phe Glu Leu Leu Pro Cys Val Cys Ile Phe Ser Asn Leu Pro Asn

865 870 875 880

Trp Ile Gly Gln Leu Gly Asn Leu Cys Ile Leu Lys Ile Gly Ile Arg

885 890 895

Glu Val Thr Ser Asn Ser Ile Asp Val Leu Gly Val Leu Pro Lys Leu

900 905 910

Thr Val Leu Ser Leu Tyr Val His Thr Lys Pro Ala Glu Arg Ile Val

915 920 925

Phe Asp Asn Ala Gly Phe Ser Ile Leu Lys Tyr Phe Glu Phe Ile Cys

930 935 940

Ser Val Ala Trp Met Lys Phe Glu Met Gly Ala Met Pro Ser Leu Arg

945 950 955 960

Lys Leu Lys Leu Gly Phe Asp Val His Arg Ala Asp Gln His Asp Ile

965 970 975

Ile Pro Val Gly Ile Glu His Leu Ser Gly Leu Glu Glu Ile Ser Ala

980 985 990

Lys Ile Arg Val Ala Tyr Thr Ala His Asp His Cys Arg Arg Phe Ala

995 1000 1005

Glu Ser Ala Leu Thr Asn Ala Phe Met Met His Pro Gly Arg Pro

1010 1015 1020

Ser Val Asn Ile Arg Cys Val Asp Trp Thr Phe His Asp Lys Asp

1025 1030 1035

Asn Asp Cys Val Gly Thr Arg Glu Glu Glu Cys Arg Thr Pro Met

1040 1045 1050

Lys Gln Glu His Phe Val Lys Glu Asp Leu Ser Glu Lys Ser Ala

1055 1060 1065

Val Leu Gln Asn Glu His Asp Glu Glu Ala His Lys Phe Val Asp

1070 1075 1080

Arg Arg Tyr Tyr Ser Ile Met Asp Ala Ala Glu Ile Arg Arg Cys

1085 1090 1095

Pro Trp Ser Ile Asn Glu Glu Gln Glu Gln Pro Val Leu Ile Tyr

1100 1105 1110

Asp Ala Arg Thr Lys Ile Ser Gln Ser Leu Ser Met His Gly Glu

1115 1120 1125

Phe Trp Ala Ala Val Gln Arg Leu Thr Gly Pro Ala Ala Thr Pro

1130 1135 1140

Ala Lys Thr Lys Arg His Leu His Leu Thr Thr Ser Pro Glu Leu

1145 1150 1155

Glu Asp Gly Phe Leu Pro Val Arg Ser Leu Val Phe Pro Ser Ala

1160 1165 1170

Pro Asp Pro Arg Cys Asn Met Lys Lys Lys Met Thr Arg Ala Gly

1175 1180 1185

Pro Gly Gly Gly Arg Ala Val Trp Ser Asn Trp Ala Pro Lys Ser

1190 1195 1200

Claims (8)

1.一种水稻抗病基因LBRW1，其特征在于，所述水稻抗病性基因LBRW1的编码区序列如SEQ ID NO：1所示。

2.如权利要求1所述的水稻抗病基因，其特征在于，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.含有如权利要求1所述的水稻抗病基因LBRW1的重组载体。

4.如权利要求3所述的重组载体，其特征在于，载体为pCambia1301-35SN。

5.含有如权利要求1所述的水稻抗病基因LBRW1的重组工程菌。

6.一种如权利要求1所述的水稻抗病基因LBRW1在提高水稻稻瘟病抗性中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将所述水稻抗病基因LBRW1克隆到pCambia1301-35SN载体中，得到表达载体；

S2、将所述表达载体转化至农杆菌后，用转化后的所述农杆菌对水稻进行侵染转化，得到转基因植株。

8.根据权利要求6或7任意一项所述的应用，其特征在于，所述水稻的品种为C105TTP-4L-23。

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