CN115427553A - 用于调节免疫细胞中精氨酸水平的方法和组合物 - Google Patents

用于调节免疫细胞中精氨酸水平的方法和组合物 Download PDF

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Abstract

本文提供了经遗传修饰的T细胞和CAR‑T细胞，其例如通过过表达氨基酸转运体(特别是精氨酸转运体)而具有提高的处理必需氨基酸精氨酸的能力。该经遗传修饰的T细胞和CAR‑T细胞因其具有提高的处理精氨酸的能力而能够更好地存活于通常不利的肿瘤微环境中。本文还提供了提高可用于T细胞的精氨酸的量的方法和组合物，因此提供了可通过在该肿瘤微环境中存活而有效治疗实体瘤的CAR‑T细胞。

Description

用于调节免疫细胞中精氨酸水平的方法和组合物
相关申请的交叉引用
本申请要求于2020年2月21日提交的美国临时专利申请第62/979,805号的优先权和权益，其通过引用整体并入本文中。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已以ASCII格式电子提交，并通过引用整体并入本文中。所述ASCII副本创建于2021年2月18日，名为SKP-001WO_SL.txt，大小为312,657字节。
技术领域
本发明针对用于调节免疫细胞中精氨酸水平的组合物和方法，以例如延长肿瘤微环境中的细胞存活。
背景技术
嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法已成为癌症治疗方面的重大突破。在CAR-T疗法中，收获患者的T细胞并对其进行遗传工程改造以产生结合预先选择的特异性抗原(例如癌细胞上的跨膜受体)的CAR。将CAR-T细胞再引入患者身体中，从而允许其攻击预先确定的靶标，例如癌细胞。在CAR受体与其靶抗原结合之后，CAR-T细胞变得活化并针对呈现靶抗原的细胞发起免疫应答。CAR-T细胞疗法已成功诱导患者响应，且在一些情况下，使先前未能对标准治疗作出响应的患者得以缓解。举例而言，已证实在一些形式的白血病中，CAR-T疗法的缓解率高达94％。
现有CAR-T细胞疗法当前仅批准用于血液癌症。目前市面上存在两种FDA批准的CAR-T细胞疗法，Kymriah(tisagenlecleucel)和Yescarta(axicabtagene ciloleucel)，其在若干专门研究医院中用于治疗血液恶性病。这些治疗已在若干对象中引起完全且持久的缓解，包括那些先前对标准治疗方案具有抗性的患癌对象。
先前的CAR开发聚焦于靶向B淋巴细胞抗原CD19，一种将细胞质信号转导蛋白募集至膜并降低B细胞受体信号转导通路的阈值的跨膜蛋白。由于这些必要功能，CD19在所有B细胞上普遍存在并用作由B细胞引起的恶性病，尤其是B细胞淋巴瘤、急性淋巴母细胞白血病以及慢性淋巴细胞白血病的生物标志物。CAR-T疗法已靶向的其他结构域为CD22(在成熟B细胞表面上发现的糖结合跨膜蛋白)，CD123(在急性髓系白血病亚型中表达的白介素3传递素)，以及B细胞成熟抗原(肿瘤坏死因子受体超家族的细胞表面受体，其识别与多种白血病、淋巴瘤以及多发性骨髓瘤相关的B细胞活化因子)。
实体瘤的肿瘤微环境(tumor microenvironment，TME)对所有效应T细胞(包括经工程改造的CAR-T细胞)不利。TME内的免疫抑制信号和必需营养素的短缺导致T细胞耗竭(exhaustion)。因此，CAR-T细胞穿透TME并在其中发挥作用的能力仍受到限制。
因此，需要抵抗TME困境并能够在TME内发挥癌细胞破坏作用的CAR-T细胞和包含CAR-T细胞的药物组合物。还需要用CAR-T细胞和包含CAR-T细胞的药物组合物有效治疗癌症的方法，所述CAR-T细胞在患者难以用其他形式的癌症治疗或其他CAR-T细胞治疗方法治疗的情况下有效诱导患者响应和缓解。此外，需要通过施用有效在TME内破坏癌细胞而不经历耗竭的优异的CAR-T细胞来治疗癌症的方法。
发明内容
本公开至少部分地涉及表达氨基酸转运蛋白(例如精氨酸转运蛋白)以及特异性结合靶细胞上的细胞表面抗原的CAR的T细胞。此类CAR-T细胞可用于治疗恶性病，诸如癌症。与例如未经遗传修饰的T细胞群体相比，本文所述的经遗传修饰的T细胞和表达载体在肿瘤微环境和资源耗竭(resource-depleted)(例如精氨酸耗竭)的微环境中可具有增强的稳健性和/或存活。所述经遗传修饰的T细胞和表达载体可用于治疗癌症和需要将T细胞靶向至特定细胞群体的其他疾病。
在另一方面中，本公开涉及表达氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞。氨基酸转运体可为重组氨基酸转运体核苷酸序列的产物。与例如未经遗传修饰以表达或过表达氨基酸转运体的T细胞群体相比，本文所述的经遗传修饰以表达或过表达氨基酸转运体的T细胞在肿瘤微环境和资源耗竭(例如精氨酸耗竭)微环境中可具有增强的稳健性和/或存活。所述经遗传修饰的T细胞和表达载体可用于治疗癌症和需要将T细胞靶向至特定细胞群体或需要增强的T细胞稳健性以便在一种或多种氨基酸(例如精氨酸)耗竭的生物环境中存活的其他疾病。
在一个方面中，本文公开一种经遗传修饰的T细胞，其经遗传修饰以表达精氨酸转运体和嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，CAR具有至少一个特异性结合在靶细胞群体上呈递的细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域及胞内信号转导结构域。在一些实施方案中，CAR具有至少一个特异性结合在靶细胞群体上呈递的细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域、至少一个共刺激结构域及胞内信号转导结构域。
本文还描述了表达载体，其包括编码CAR和/或氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所述的表达载体的转录使得产生编码CAR和/或氨基酸转运体(例如精氨酸转运体核苷酸序列)的核糖核酸(RNA)，例如信使RNA(mRNA)序列。在一些实施方案中，本文所述的表达载体能够表达CAR和/或氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码抗原特异性靶向区、跨膜结构域、任选地至少一个共刺激结构域、胞内信号转导结构域及精氨酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码抗原特异性靶向区、跨膜结构域、任选地至少一个共刺激结构域及胞内信号转导结构域的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码精氨酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码抗原特异性靶向区、跨膜结构域、任选地至少一个共刺激结构域、胞内信号转导结构域及氨基酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码氨基酸转运体的分离的核酸序列。
本文还描述了表达载体，其包括编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所述的表达载体的转录使得产生编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体核苷酸序列)的核糖核酸(RNA)，例如信使RNA(mRNA)序列。在一些实施方案中，本文所述的表达载体能够表达氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码精氨酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码精氨酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码氨基酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文描述一种表达载体，其包含编码氨基酸转运体的分离的核酸序列。在本文所述的实施方案中，核酸序列可例如为核糖核酸(RNA)序列、脱氧核糖核酸(DNA)序列或混合式DNA和RNA序列。
在一些实施方案中，本文所述的表达载体包含编码CAR和氨基酸转运体的核苷酸序列，其中所述CAR和氨基酸转运体核苷酸序列转录成独立mRNA转录物。在一些实施方案中，本文所述的表达载体包含编码CAR和氨基酸转运体的核苷酸序列，其中所述CAR和氨基酸转运体核苷酸序列一起转录成单一mRNA转录物。在CAR和氨基酸转运体核苷酸序列一起转录成单一mRNA转录物的实施方案中，编码CAR和氨基酸转运体mRNA转录物的表达载体核苷酸序列可包括内部核糖体入口序列(IRES)。在一些实施方案中，IRES设置于编码CAR的核苷酸序列部分与编码氨基酸转运体的核苷酸序列部分之间。因此，在实施方案中，CAR核苷酸序列和氨基酸转运体核苷酸序列由IRES序列隔开。在CAR和氨基酸转运体核苷酸序列一起转录成单一mRNA转录物的实施方案中，编码CAR和氨基酸转运体mRNA转录物的表达载体核苷酸序列可包括设置于编码CAR的核苷酸序列部分与编码氨基酸转运体的核苷酸序列部分之间的2A自切割(self-cleavage)序列。因此，在一些实施方案中，CAR核苷酸序列和氨基酸转运体核苷酸序列由2A自切割序列隔开。在一些实施方案中，使由包括CAR核苷酸序列、2A自切割序列和氨基酸转运体核苷酸序列的mRNA翻译的肽在翻译之后，在2A自切割位点处裂解。
本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由表达载体编码的CAR。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由表达载体编码的CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由表达载体编码的氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由第一表达载体编码的CAR，及由第二表达载体编码的氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。在本文所述的实施方案中，由表达载体编码的CAR可包括抗原特异性靶向区、跨膜结构域、任选地至少一个共刺激结构域及胞内信号转导结构域。经修饰以表达由表达载体编码的氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞可包括经修饰以表达重组氨基酸转运体，例如重组精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞。
本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由病毒衍生的转基因编码的CAR。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由病毒衍生的转基因编码的CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由病毒衍生的转基因编码的氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由第一病毒衍生的转基因编码的CAR，及由第二病毒衍生的转基因编码的氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)。在本文所述的实施方案中，由病毒衍生的转基因编码的CAR可包括抗原特异性靶向区、跨膜结构域、任选地至少一个共刺激结构域及胞内信号转导结构域。经修饰以表达由病毒衍生的转基因编码的氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞可包括经修饰以表达重组氨基酸转运体，例如重组精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞。
本文所述的经遗传修饰的T细胞可表达特异性精氨酸转运体。在一些实施方案中，精氨酸转运体包含单一精氨酸转运蛋白。在一些实施方案中，精氨酸转运体包含两种精氨酸转运蛋白。举例而言，本文所述的经遗传修饰的T细胞可表达选自由以下组成的组的精氨酸转运体：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。
在一些实施方案中，本文所述的表达载体包含编码精氨酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文所述的表达载体包含两种或更多种编码共同包含精氨酸转运体的蛋白质的分离的核酸序列。在一些实施方案中，精氨酸转运体核酸序列选自由以下的核酸序列组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。
在一些实施方案中，本文所述的病毒衍生的转基因包含编码精氨酸转运体的分离的核酸序列。在一些实施方案中，本文所述的病毒衍生的转基因包含两种或更多种编码共同包含精氨酸转运体的蛋白质的分离的核酸序列。在一些实施方案中，精氨酸转运体核酸序列选自由选自由以下组成的组的核酸序列组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0 ,+，或其组合。
本文还描述表达载体，其包括编码氨基酸转运体序列的核酸序列和包含编码氨基酸转运体的重组核酸序列的经遗传修饰的T细胞。举例而言，本文描述一种表达载体，其包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。本文还描述一种表达载体，其包含SEQID NO:220-222中任一者的核苷酸序列和SEQ ID NO:227-230中任一者的核苷酸序列。本文还描述一种表达载体，其包含SEQ ID NO:214和215中任一者的核苷酸序列以及SEQ ID NO:227-230中任一者的核苷酸序列。本文还描述一种表达载体，其包含SEQ ID NO:234-236中任一者的核苷酸序列和SEQ ID NO:242的核苷酸序列。
本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其包含重组核酸序列，该重组核酸序列包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其包含重组核酸，该重组核酸包含SEQ ID NO:220-222中任一者的核苷酸序列和SEQ ID NO:227-230中任一者的核苷酸序列。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其包含重组核酸，该重组核酸包含SEQ ID NO:214和215中任一者的核苷酸序列及SEQ ID NO:227-230中任一者的核苷酸序列。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其包含重组核酸，该重组核酸包含SEQID NO:234-236中任一者的核苷酸序列和SEQ ID NO:242的核苷酸序列。
在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰的T细胞经遗传修饰以包含重组核酸序列，该重组核酸序列包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。举例而言，在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰的T细胞经修饰以包含一个或多个额外拷贝的选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。本文还描述一种经遗传修饰的T细胞，其包含表达载体，该表达载体包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。在一些实施方案中，表达载体、经遗传修饰的T细胞或包含本文所述的表达载体的经遗传修饰的T细胞包含选自由以下组成的组的核酸序列的组合：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。在本文所述的一些实施方案中，表达载体、包含重组核酸序列的经遗传修饰的T细胞、经遗传修饰以包含重组核酸序列的经遗传修饰的T细胞、经修饰以包含核酸序列的一个或多个额外拷贝的经遗传修饰的T细胞或包含表达载体的经遗传修饰的T细胞(该表达载体包含核酸序列)包含至少两个选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，表达载体、包含重组核酸序列的经遗传修饰的T细胞、经遗传修饰以包含重组核酸序列的经遗传修饰的T细胞、经修饰以包含核酸序列的一个或多个额外拷贝的经遗传修饰的T细胞或包含含有核酸序列的表达载体的经遗传修饰的T细胞包含以下核苷酸序列对中的一者：SEQ ID NO:220-222中任一者的核苷酸序列和SEQ ID NO:227-230中任一者的核苷酸序列；SEQ ID NO:214和215中任一者的核苷酸序列及SEQ ID NO:227-230中任一者的核苷酸序列；或SEQ ID NO:234-236中任一者的核苷酸序列和SEQ ID NO:242的核苷酸序列。
本文所述的经遗传修饰的T细胞可包括与以下中的一者的核酸序列具有相似性的重组核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246。举例而言，在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰的T细胞包含与以下中的一者具有约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、约90％至约95％、约95％至约99％或约90％至约99％百分比同一性的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246。在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰的T细胞包含与以下中的一者具有约90％、95％或99％百分比同一性的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246。在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰的T细胞包含表达载体，该表达载体包含与以下中的一者具有约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、约90％至约95％、约95％至约99％或约90％至约99％百分比同一性的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246。在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰的T细胞包含表达载体，该表达载体包含与以下中的一者具有约90％、95％或99％百分比同一性的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246。
在另一方面中，本文描述一种药学上可接受的组合物，其包含本文所述的经遗传修饰的T细胞和药学上可接受的赋形剂。
本文还描述一种包含L-精氨酸的促发(priming)培养基，其用于促发经遗传修饰的T细胞，例如本文所述的经遗传修饰的T细胞。本文所述的促发培养基可提高经遗传修饰的T细胞(例如表达精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞)中的胞内精氨酸浓度。本文所述的促发培养基可促发经遗传修饰的T细胞用于治疗。举例而言，本文所述的促发培养基在向有需要的患者，例如需要治疗癌症的患者施用经遗传修饰的T细胞之前可增加经遗传修饰的T细胞中的胞内精氨酸浓度。在一些实施方案中，本文描述一种促发培养基，其包含本文所述的经遗传修饰的T细胞和L-精氨酸。
本文还描述包含CAR-T细胞的药物组合物。举例而言，本文描述一种药物组合物，其包含表达重组精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞。在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含CAR-T细胞，其中CAR-T细胞包含一种或多种表达载体，其包含编码精氨酸转运体和/或嵌合抗原受体蛋白的核酸序列。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含表达精氨酸转运体的CAR-T细胞。在一些实施方案中，本发明的药物组合物包含CAR-T细胞，其中CAR-T细胞包含一种或多种编码精氨酸转运体和/或嵌合抗原受体蛋白的重组核酸序列。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含表达精氨酸转运体，例如重组蛋白质精氨酸转运体的CAR-T细胞。在多个实施方案中，精氨酸转运体选自由以下组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。在一些实施方案中，一种或多种编码精氨酸转运体的核酸序列包含一种或多种重组精氨酸转运体核酸序列，例如重组CAT-1核酸序列、重组CAT-2核酸序列、重组CAT-3核酸序列、重组CAT-4核酸序列、重组y+LAT1核酸序列、重组4F2hc核酸序列、重组y+LAT2核酸序列、重组y+LAT1核酸序列和重组4F2hc核酸序列、重组y+LAT2核酸序列和重组4F2hc核酸序列、重组b0,+AT核酸序列、重组rBAT核酸序列、重组b0,+AT核酸序列和重组rBAT核酸序列或重组ATB0,+核酸序列。在一些实施方案中，精氨酸转运体为重组精氨酸转运蛋白，例如重组CAT-1、重组CAT-2、重组CAT-3、重组CAT-4、重组y+LAT1、重组4F2hc、重组y+LAT2、重组y+LAT1和重组4F2hc、重组y+LAT2和重组4F2hc、重组b0,+AT、重组rBAT、重组b0,+AT和重组rBAT、或重组ATB0,+。
在另一方面中，本文所述的药物组合物被包装为试剂盒。举例而言，在一些实施方案中，包含表达精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞(例如表达精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的经遗传修饰的CAR-T细胞)的药物组合物被包装为试剂盒。在一些实施方案中，包含表达精氨酸转运体的T细胞(例如表达精氨酸转运体，例如重组精氨酸转运蛋白的经遗传修饰的T细胞)的药物组合物被包装为试剂盒。本文所述的试剂盒可包含向需要治疗的患者施用CAR-T细胞的说明。本文所述的试剂盒可包含用于促发CAR-T细胞以向需要治疗的患者施用的说明。在一些实施方案中，试剂盒可包含缓冲液(例如包含足以促发T细胞的水平的L-精氨酸的缓冲液)、试剂及用于产生、施用和/或促发CAR-T细胞的详细说明中的至少一者。在一些实施方案中，本文所述的试剂盒可包含用于产生包括表达载体、病毒构建体、细胞、转染试剂及培养基的CAR-T细胞的药剂、用于细胞选择(例如抗体)的药剂和/或生长培养基。
本文还描述使用本文所述的药物组合物治疗癌症的方法。举例而言，本文描述一种治疗有需要的患者的实体瘤癌症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的本文所述的药物组合物。举例而言，本文描述一种治疗有需要的患者的实体瘤癌症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的药物组合物，其包含本文所述的经遗传修饰的T细胞(例如经遗传修饰以表达氨基酸转运体的CAR-T细胞或T细胞)和药学上可接受的赋形剂。
本文还描述使用本文所述的药物组合物治疗血液癌症的方法。举例而言，本文描述一种治疗有需要的患者的血液癌症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的本文所述的药物组合物。举例而言，本文描述一种治疗有需要的患者的血液癌症的方法，该方法包括向该患者施用有效量的药物组合物，其包含本文所述的经遗传修饰的T细胞(例如经遗传修饰以表达氨基酸转运体的CAR-T细胞或T细胞)和药学上可接受的赋形剂。
本文还描述一种调节有治疗需要的患者的胞内精氨酸水平(例如胞内T细胞精氨酸水平)以影响T细胞介导的免疫应答的方法。举例而言，本文描述一种调节有需要的患者的胞内精氨酸水平以影响T细胞介导的免疫应答的方法，该方法包括调节经遗传修饰的T细胞的胞内精氨酸水平。在一些实施方案中，调节有需要的患者的胞内精氨酸水平以影响T细胞介导的免疫应答的方法进一步包括向该患者施用有效量的本文所述的药物组合物(例如包含本文所述的经遗传修饰的T细胞和药学上可接受的赋形剂的药物组合物，其中该经遗传修饰的T细胞已经受可有效提高胞内精氨酸水平的条件)。在一些实施方案中，调节有需要的患者的胞内精氨酸水平以影响T细胞介导的免疫应答的方法包括调节经遗传修饰的T细胞的胞内精氨酸水平并向该患者施用有效量的包含经遗传修饰的T细胞和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在又一方面中，本文描述一种用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，该方法包括：向该人类患者施用治疗有效量的包含表达精氨酸转运体(例如重组精氨酸转运体)和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞(例如经遗传修饰的CAR-T细胞)的组合物。在一些实施方案中，用于治疗有需要的人类患者的病症的方法包括向该人类患者施用治疗有效量的包含本文所述的CAR-T细胞，例如本文所述的经遗传修饰的CAR-T细胞的组合物。举例而言，在一些实施方案中，用于治疗有需要的人类患者的病症的方法包括向该人类患者施用治疗有效量的包含CAR-T细胞的组合物，其中该CAR-T细胞包含编码精氨酸转运体和/或嵌合抗原受体蛋白的一种或多种重组核酸序列。在本文所述的一些实施方案中，用于治疗有需要的人类患者的病症的方法包括向该人类患者施用治疗有效量的包含经遗传修饰以表达或过表达氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞的组合物。
本文还描述一种调节有需要的患者的T细胞介导的免疫应答的方法，该免疫应答针对表达细胞表面抗原的靶细胞群体，该方法包括向该患者施用治疗有效量的经遗传修饰的T细胞。在一些实施方案中，所述T细胞：a)经遗传修饰以表达嵌合抗原受体，其中该嵌合抗原受体包含：至少一个特异性结合呈递在靶细胞群体上的细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域、胞内信号转导结构域；及b)经遗传修饰以表达精氨酸转运体(例如重组精氨酸转运体)。在一些实施方案中，T细胞经遗传修饰以表达精氨酸转运体(例如重组精氨酸转运体)。举例而言，在一些实施方案中，用于施用的T细胞包含一种或多种编码嵌合抗原受体和精氨酸转运体的重组核酸序列，其中该嵌合抗原受体包含：至少一个特异性结合在靶细胞群体上呈递的细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域、胞内信号转导结构域。在一些实施方案中，用于施用的T细胞包含重组嵌合抗原受体蛋白和重组精氨酸转运蛋白，其中重组嵌合抗原受体蛋白包含：至少一个特异性结合在靶细胞群体上呈递的细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域、胞内信号转导结构域。在一些实施方案中，用于施用的T细胞包含一种或多种编码精氨酸转运体的重组核酸序列。在一些实施方案中，用于施用的T细胞包含重组精氨酸转运蛋白。
在另一方面中，本公开涉及一种在低精氨酸环境中提高T细胞存活的方法，该方法包括：向低精氨酸环境施用包含重组精氨酸转运体的T细胞。在某些实施方案中，在该施用步骤之前，该方法包括用包含编码重组精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体转染T细胞。在某些实施方案中，该T细胞包含嵌合抗原受体和/或包含含有编码嵌合抗原受体的核苷酸序列的DNA构建体。在某些实施方案中，T细胞为CAR-T细胞。在某些实施方案中，在施用步骤之前，该方法包括在包含精氨酸的培养基中培养T细胞或CAR-T细胞，例如直至该T细胞或CAR-T细胞的胞内精氨酸水平累积至一定水平。在某些实施方案中，该低精氨酸环境为细胞培养基。在某些实施方案中，该低精氨酸环境为肿瘤微环境。
在本文所述的实施方案中，所公开的方法可包括在施用(例如向需要治疗的患者施用)之前，在包含精氨酸的培养基中培养T细胞的步骤。举例而言，本文描述一种用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，该方法包括：在向该人类患者施用治疗有效量的包含T细胞的组合物之前，在包含精氨酸的培养基中培养T细胞。本文还描述一种调节有需要的患者中T细胞介导的免疫应答的方法，该免疫应答针对表达细胞表面抗原的靶细胞群体，该方法包括：在向患者施用治疗有效量的T细胞之前，在包含精氨酸的培养基中培养经遗传修饰的T细胞。
在本文所述的方法中，精氨酸转运体选自由以下组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。举例而言，本文描述一种用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，该方法包括：向该人类患者施用治疗有效量的包含CAR-T细胞的组合物，该CAR-T细胞表达选自由以下组成的组的嵌合抗原受体蛋白和精氨酸转运体(例如重组精氨酸转运体)：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。本文还描述一种调节有需要的患者中T细胞介导的免疫应答的方法，该免疫应答针对表达细胞表面抗原的靶细胞群体，该方法包括向患者施用治疗有效量的T细胞，该T细胞经遗传修饰以表达选自由以下组成的组的嵌合抗原受体和精氨酸转运体(例如重组精氨酸转运体)：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。在一些实施方案中，精氨酸转运体为重组精氨酸转运蛋白，例如重组CAT-1、重组CAT-2、重组CAT-3、重组CAT-4、重组y+LAT1、重组4F2hc、重组y+LAT2、重组y+LAT1和重组4F2hc、重组y+LAT2和重组4F2hc、重组b0,+AT、重组rBAT、重组b0,+AT和重组rBAT、或重组ATB0,+。在某些实施方案中，精氨酸转运体包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246，或其片段或变体。在某些实施方案中，该精氨酸转运体包含表达与以下中的一者具有约90％、95％或99％百分比同一性的序列的核酸：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242及246。
在一些实施方案中，该方法进一步包括向人类患者施用第二治疗剂。举例而言，本文描述了用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，所述方法包括向该人类患者施用治疗有效量的包含CAR-T细胞的组合物并向该人类患者施用第二治疗剂。在一些实施方案中，本文所述的方法包括在施用包含CAR-T细胞的组合物之前、期间或之后施用第二治疗剂。本文还描述一种调节有需要的患者中T细胞介导的免疫应答的方法，所述免疫应答针对表达细胞表面抗原的靶细胞群体，所述方法包括向该患者施用治疗有效量的经遗传修饰的T细胞并向该人类患者施用第二治疗剂。在一些实施方案中，本文所述的方法包括在施用治疗有效量的T细胞之前、期间或之后施用第二治疗剂。
在一些实施方案中，第二治疗剂为检查点蛋白抑制剂，例如抑制检查点蛋白活性或检查点蛋白信号转导的检查点蛋白抑制剂，例如抑制检查点蛋白或检查点蛋白信号转导的抗体。举例而言，在一些实施方案中，第二治疗剂为抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体。在一些实施方案中，第二治疗剂为DNA损伤和修复抑制剂。举例而言，在一些实施方案中，DNA损伤和修复抑制剂为ATM/ATR抑制剂、PARP抑制剂、WEE1抑制剂、Chk1抑制剂、Chk2抑制剂或DNA依赖型蛋白激酶(DNA-PK)抑制剂。
在本文所述的实施方案中，每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次向人类患者施用包含CAR-T细胞的组合物。举例而言，本文描述一种用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，该方法包括每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次向该人类患者施用治疗有效量的包含CAR-T细胞的组合物。本文还描述一种调节有需要的患者中T细胞介导之免疫应答的方法，该免疫应答针对表达细胞表面抗原的靶细胞群体，该方法包括每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次向该患者施用治疗有效量的经遗传修饰的T细胞。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括施用以患者的重量计指定数目的CAR-T细胞或施用以患者的重量计指定范围的CAR-T细胞。在一些实施方案中，本文所述的方法包括施用每千克患者约102、约103、约104、约105、约106、约107、约108、约109、约1010、约1011、约1012、约1013、约1014、约1015、约1016、约1017、约1018、约1019、约1020、约1025、约1030、约1035、约1040、约1045或约1050个CAR-T细胞。在一些实施方案中，本文所述的方法包括施用每千克患者约102至107、约102至1010、约103至1010、约104至1010、约105至1010、约106至1010、约107至1010、约108至1011、约109至1012、约1010至1013、约107至1015、约105至1015、约1010至1020、约1010至1025、约1010至1030、约107至1020、约107至1025、约1010至1050或约107至1050个CAR-T细胞。举例而言，在一些实施方案中，本文所述的方法包括施用每千克患者约107至1010个CAR-T细胞。
本文所述的实施方案包括一种制备表达精氨酸转运体的经遗传修饰的CAR-T细胞的方法，该方法包括：用包含特异性嵌合抗原受体和精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体转染T细胞，由此产生表达该嵌合抗原受体和该精氨酸转运体两者的经遗传修饰的CAR-T细胞；及在包含精氨酸的培养基中培养该经遗传修饰的CAR-T细胞。本文所述的实施方案还包括一种制备表达精氨酸转运体的经遗传修饰的CAR-T细胞的方法，该方法包括：用包含含有特异性嵌合抗原受体核苷酸序列和精氨酸转运体核苷酸序列的核苷酸构建体的病毒转导T细胞，由此产生表达该嵌合抗原受体和该精氨酸转运体两者的经遗传修饰的CAR-T细胞；及在包含精氨酸的培养基中培养该经遗传修饰的CAR-T细胞。在一些实施方案中，经遗传修饰的CAR-T细胞表达重组精氨酸转运体核苷酸序列。在一些实施方案中，经遗传修饰的CAR-T细胞表达重组精氨酸转运蛋白。在一些实施方案中，培养包括在培养基中培养该经遗传修饰的CAR-T细胞，直至该CAR-T细胞的胞内精氨酸水平累积至一定水平。在一些实施方案中，CAR-T细胞的胞内精氨酸水平为允许CAR-T细胞在肿瘤微环境中存活的胞内精氨酸水平。举例而言，在一些实施方案中，培养包括在培养基中培养该经遗传修饰的CAR-T细胞，直至CAR-T细胞的胞内精氨酸水平为约500μM、约600μM、约700μM、约800μM、约900μM、约1,000μM、约1,100μM、约1,200μM、约1,300μM、约1,400μM、约1,500μM、约1,600μM、约1,700μM、约1,800μM、约1,900μM、约2,000μM、约2,500μM、约3,000μM、约3,500μM或约4,000μM。在一些实施方案中，培养包括在培养基中培养该经遗传修饰的CAR-T细胞，直至CAR-T细胞的胞内精氨酸水平为约500μM至约1,000μM、约800μM至约1,200μM、约1,000μM至约1,500μM、约1,000μM至约2,000μM、约1,500μM至约2,000μM、约700μM至约900μM、约900μM至约1,100μM、约900μM至约1,200μM或约1,300μM至约1,500μM。
本文所述的实施方案还包括一种制备表达精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞的方法，该方法包括：用包含精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体转染T细胞，由此产生表达该精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞；及在包含精氨酸的培养基中培养该经遗传修饰的T细胞。本文所述的实施方案还包括一种制备表达精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞的方法，该方法包括：用包含含有精氨酸转运体的核苷酸序列的核苷酸构建体的病毒转导T细胞，由此产生表达该精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞；及在包含精氨酸的培养基中培养该经遗传修饰的T细胞。在一些实施方案中，培养包括在培养基中培养该经遗传修饰的T细胞，直至该T细胞的胞内精氨酸水平累积至一定水平。在一些实施方案中，T细胞的胞内精氨酸水平为使得T细胞能够在肿瘤微环境或精氨酸耗竭环境中存活的胞内精氨酸水平。举例而言，在一些实施方案中，培养包括在该培养基中培养该经遗传修饰的T细胞，直至该T细胞的该胞内精氨酸水平为约500μM、约600μM、约700μM、约800μM、约900μM、约1,000μM、约1,100μM、约1,200μM、约1,300μM、约1,400μM、约1,500μM、约1,600μM、约1,700μM、约1,800μM、约1,900μM、约2,000μM、约2,500μM、约3,000μM、约3,500μM或约4,000μM。在一些实施方案中，培养包括在培养基中培养经遗传修饰的T细胞，直至该T细胞的胞内精氨酸水平为约500μM至约1,000μM、约800μM至约1,200μM、约1,000μM至约1,500μM、约1,000μM至约2,000μM、约1,500μM至约2,000μM、约700μM至约900μM、约900μM至约1,100μM、约900μM至约1,200μM、或约1,300μM至约1,500μM。
附图说明
图1为pBCTex01G表达载体的图。图1公开了如SEQ ID NO:30的“(G4S)3”。
图2为pBCTex02mini表达载体的图。
图3A为示出了实施例1所述的实验的转染和精氨酸耗竭步骤的示意图。
图3B为示出了实施例1所述的实验的细胞过滤和计数步骤的示意图。
图3C为示出了在富含精氨酸(左)或精氨酸耗竭(右)环境中72小时之后经表达构建体(对照、CAT或ASS)转染的细胞的估计变化百分比的一组图。各数据点代表一个经分离孔的经独立转染细胞的细胞数目的估计变化百分比。
图4为示出了在对照(顶部)或精氨酸耗竭(底部)培养基中经对照(mNeonGreen)或CAT(精氨酸转运体)mRNA转染的原代人T细胞的估计变化百分比的一组图。在富含精氨酸培养基中24小时之后，在经GFP对照(约100％)和CAT(约200％)转染的细胞中观察到细胞百分比增加。相比之下，在精氨酸耗竭培养基中，观察到GFP对照细胞净减少，而观察到经CATmRNA转染的细胞增加约15％。
具体实施方式
定义
如本文所用，术语“嵌合抗原受体”(CAR)一般是指经设计以结合至特异性抗原，例如在癌细胞表面上呈递的抗原的经遗传改造的受体。CAR可引入免疫细胞以帮助其识别和杀伤表达特异性抗原的癌细胞。
如本文所用，术语“T淋巴细胞”或“T细胞”一般是指与其他淋巴细胞的区别在于细胞表面上存在T细胞受体的一类免疫细胞。分化T细胞在以下方面起到许多重要作用：通过若干免疫相关功能(诸如免疫介导的细胞死亡)控制和形成免疫应答、在通过细胞因子建立免疫应答时募集细胞、确定免疫系统的其他部分对感知到的特定威胁是否作出应答及如何应答、影响调节性B细胞、以及在其他功能中将外来细胞与自身区分开。
如本文所用，术语“共刺激信号转导区”是指CAR中包含共刺激分子的胞内结构域的部分。共刺激分子为淋巴细胞对抗原进行高效应答所需的除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。共刺激信号转导分子的实例包括CD28、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、OX40(CD134)、CD27、CD40、CD40L、TLR(例如TLR2)、DAP10、IL-2RB、IL-2RA及MYD88。
如本文所用，术语“CAR-T细胞疗法”一般是指其中受体蛋白已经通过遗传改造方式并入至现有淋巴细胞中的遗传改造的T细胞(CAR-T细胞)。这样的受体蛋白可向经改造的CAR-T细胞赋予靶向特异性蛋白质的能力。“CAR-T细胞疗法”还可指包括施用CAR-T细胞或CAR-T细胞药物组合物的治疗方法。
如本文所用，术语“宿主细胞”意指生物体的任何细胞，该细胞经选择、修饰、转化、生长、使用或操纵以通过细胞产生物质，例如通过细胞表达基因、DNA或RNA序列、蛋白质或酶。本发明的宿主细胞包括含有编码嵌合受体的DNA或RNA序列且在细胞表面上表达嵌合受体的T细胞和NK细胞。宿主细胞可用于增强癌症治疗中的T淋巴细胞活性。
如本文所用，术语“表达”意指允许或引起基因或DNA序列中的信息表现出来，例如通过活化与对应基因或DNA序列的转录和翻译有关的细胞功能来产生蛋白质，诸如CAR或氨基酸转运体。如本文所用，术语“过表达”通常是指通过经工程改造的异常表达来增强蛋白质表达，其导致基因的人工诱导或增强以及目标模态的高于正常水平的后续蛋白质表达。DNA序列在细胞中表达或由细胞表达以形成“表达产物”，诸如蛋白质。表达产物本身(例如所得的蛋白质)还可称为由细胞“表达”。表达产物可表征为在胞内、胞外或跨膜的。术语“胞内”意指某物位于细胞内部。术语“胞外”意指某物位于细胞外部。术语跨膜意指某物具有位于细胞外部的胞外结构域、嵌入细胞膜中的部分及位于细胞内部的胞内结构域。
如本文所用，术语“表达构建体编码”或“表达载体工程改造”是指经设计用于细胞中的基因表达的质粒。此载体用于将一个或多个特异性基因引入靶细胞中且可命令该细胞的蛋白质合成机制以产生由该基因编码的蛋白质。载体通常经工程改造以含有调控序列，所述调控序列充当增强子和启动子区并引起携带于表达载体上的一个或多个基因的高效转录。表达载体可通过产生可被翻译成一个或多个蛋白质的诸如信使RNA的模态而有效产生目的蛋白。
如本文所用，术语“氨基酸”一般是指含有至少一个氨基-NH2(其可以其电离形式-NH3 +存在)以及一个羧基-COOH(其可以其电离形式-COO-存在，即羧酸在中性pH值下去质子化)的具有NH2CHRCOOH的基本式的有机化合物。氨基酸和由此的肽具有N(氨基)端残基区和C(羧基)端残基区。氨基酸类型包括至少20种被认为是“天然的”氨基酸，因为其构成哺乳动物中的大部分生物蛋白，包括诸如赖氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、苏氨酸等氨基酸。氨基酸还可基于其侧链分组，诸如具有羧酸基团(在中性pH值下)的氨基酸，包括天冬氨酸或天冬氨酸盐(Asp；D)和谷氨酸或谷氨酸盐(Glu；E)；以及碱性氨基酸(在中性pH值下)，包括赖氨酸(Lys；L)、精氨酸(Arg；N)和组氨酸(His；H)。
如本文所用，术语“氨基酸转运体”(AAT)是指可转运氨基酸(例如精氨酸)的膜转运蛋白。更特别地，其为介导氨基酸转移进入细胞或细胞器和从细胞或细胞器转移出来的膜转运蛋白。如本文所用，术语“精氨酸转运体”是指能够跨细胞膜转运精氨酸的膜转运蛋白。“精氨酸转运体”可转运精氨酸和其他氨基酸。精氨酸转运体的非限制性实例展示于表1中。它们在各种生物系统中起到多种不同的功能作用，其可调节代谢重编程、酸碱平衡以及合成代谢和分解代谢反应等。
如本文所用，术语“肿瘤微环境”(TME)一般是指实体瘤内和周围的环境，包括血管、免疫细胞、成纤维细胞、信号转导分子和胞外基质。肿瘤进展主要受癌细胞与该微环境的相互作用影响并可确定转移、生长和疾病进展。TME可通过物理方式或化学方式抑制治疗因素或导致转移来影响治疗响应和抗性。
如本文所用，术语“T细胞的代谢重编程”是指其在活化期间的代谢重编程，这与其获取不同分化型态(profile)有关。在遇到抗原和活化期间，T细胞具有增加的生物能和合成代谢需求，以支持其快速复制和产生可溶性因子。为满足这些需求，T细胞通过多种过程(包括但不限于糖酵解、谷氨酰胺分解、支链氨基酸的分解代谢、脂肪酸的吸收、脂质合成和脂肪酸氧化)增加其对葡萄糖和氨基酸的摄取以便于其利用。氨基酸作为T细胞分化和功能命运的关键代谢调节因子的作用得到充分记载。氨基酸既能够充当其代谢需求期间的燃料来源，又能用作合成蛋白质和核酸的前体。
如本文所用，术语“骨髓来源的抑制性细胞”用于指来自骨髓谱系的非均质免疫细胞群。由于改变的血细胞生成，这些细胞在病理性情况下强烈扩增。这些细胞具有较强的免疫抑制活性并与其他免疫细胞类型(诸如T细胞、树突状细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞)相互作用以调控其功能。这些细胞与这样的癌症特别相关：其中这些细胞的存在和上调与不良的患者预后和治疗抗性相关。
如本申请的说明书和权利要求所用的，术语“施用”包括可有效地引起嵌合抗原受体和一种或多种精氨酸转运体在对象个体的T淋巴细胞中表达的任何方法。一种用于施用嵌合抗原受体的方法因此是通过用根据本发明的核酸构建体活体外转染或转导外周血T细胞或造血祖细胞(其最终为同种异体的)，并将经转染或经转导的细胞(优选在扩增之后)返回至对象个体。在本文所述的实施方案中，施用药剂(例如施用CAR-T细胞或CAR表达载体)可包括接触含有细胞的患者体液。举例而言，施用药剂可包括使含有癌细胞(例如肿瘤细胞)的患者体液与药剂活体外接触。在本文所述的实施方案中，“施用”药剂(例如施用CAR-T细胞或CAR表达载体)可包括使含有细胞，例如癌细胞(例如肿瘤细胞)的患者体液与药剂活体内接触。
如本文所用，术语“与……组合施用”、“组合施用”或“共施用”意指同时或在一定时间间隔内向对象施用两种或更多种药剂，使得当两者作为同一治疗方案的一部分给出时，各药剂对患者可存在累加或改进的治疗效果。组合施用的两种或更多种药剂可同时或几乎同时施用。组合施用的两种或更多种药剂不必一起施用。在一些实施方案中，药剂彼此在90天内(例如在80、70、60、50、40、30、20、10、5、4、3、2或1天内)、28天(例如14、7、6、5、4、3、2或1天)内、24小时(例如12、6、5、4、3、2或1小时)内或在约60、30、15、10、5或1分钟内施用。在一些实施方案中，药剂的施用相互间隔得足够近，以便实现组合作用。
术语“癌症”是指任何由恶性赘生性细胞增殖引起的疾病，诸如肿瘤、赘生物、上皮癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。“实体瘤癌症”为包含异常组织块(例如肉瘤、上皮癌和淋巴瘤)的癌症。如在本文中可互换使用的，“血液癌症”或“液体癌症”为存在于体液中的癌症，例如淋巴瘤和白血病。
术语“难治性癌症”是指对用当前使用的抗癌剂或当前抗癌方案的治疗无响应或可能无响应的癌症形式。难治性癌症可能最初对抗癌剂治疗展现出响应性而后变得对治疗无响应。举例而言，难治性癌症可包括以下形式的癌症：其中癌细胞未能响应于治疗而停止增殖，或其其最初响应于治疗而停止增殖，但在进一步用抗癌剂治疗后又开始增殖。具有高复发频率的明显消退也视为难治性的。难治性癌症可能对用一线、二线或甚至三线当前治疗的特异性抗癌治疗无响应。罹患难治性癌症的患者在本文中可称为“难治性癌症患者”。本文所述的本发明的方法可用于治疗、预防或改善难治性癌症或治疗罹患难治性癌症的患者。
如本文所用，术语药剂(例如经遗传修饰的T细胞)的“有效量”为足以影响有益或期望结果(诸如临床结果)的量，且因此“有效量”视其应用情景而定。
如本文所用，术语“药物组合物”表示含有与药学上可接受的赋形剂一起配制的本文所述化合物的组合物。在一些实施方案中，药物组合物在政府监管机构的批准下作为用于治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分而被制造或销售。药物组合物可配制为例如经肠胃外、经口、经肺、气管内、鼻内、经皮或十二指肠内施用。在多个实施方案中，本文所述的药物组合物可通过一种或数种途径施用，包括经肠胃外，例如通过皮下或静脉内注射施用。如本文所用，术语经肠胃外包括皮下注射、胰脏内施用及静脉内、肌内、腹膜内及胸骨内注射或输注技术。在本文所述的实施方案中，可向需要治疗癌症的患者静脉内施用药物组合物。
如本文所用的，“药学上可接受的赋形剂”是指具有在患者中无毒性且非炎性的特性的任何成分(例如能够使活性化合物悬浮或溶解的载剂)。赋形剂可包括例如：抗黏剂、抗氧化剂、黏合剂、包衣、压制助剂、崩解剂、染料(颜料)、润滑剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、芳香剂、助滑剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷油墨、放射性保护剂、吸附剂、悬浮或分散剂、甜味剂或水合的水。示例性赋形剂包括但不限于：抗坏血酸、组氨酸、磷酸盐缓冲剂、丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸钙(二元)、硬脂酸钙、交联羧甲纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、预胶凝化淀粉、对羟基苯甲酸丙酯、棕榈酸视黄酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羟基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E、维生素C及木糖醇。
如本文所用，术语“多肽”是指一串通过肽键彼此附接的至少两个氨基酸。在一些实施方案中，多肽可包括至少3-5个氨基酸，其中每一个均藉助于至少一个肽键附接至其他氨基酸。本领域普通技术人员应了解多肽可包括一个或多个能够整合至多肽链中的“非天然”氨基酸或其他实体。在一些实施方案中，多肽可为糖基化的，例如多肽可含有一个或多个共价连接的糖部分。在一些实施方案中，单一“多肽”(例如抗体多肽)可包含两个或更多个单独的多肽链，其可在一些情况下例如通过一个或多个二硫键或其他方式彼此间连接。
“患者”或“对象”意指人或非人动物(例如哺乳动物)。在本文所述的一些实施方案中，患者需要治疗癌症。此类患者还可称为“癌症患者”。
“基本上一致”或“实质上一致”意指分别与参考序列具有相同的多肽或核苷酸序列的多肽或核苷酸序列，或当最佳比对两个序列时，分别具有指定百分比的氨基酸残基或核苷酸在参考序列内的对应位置处相同的多肽或核苷酸序列。举例而言，与参考序列“实质上一致”的氨基酸序列与参考氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。对于多肽，比较序列的长度一般应为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、75、90、100、150、200、250、300或350个连续氨基酸(例如全长序列)。类似地，与参考序列“实质上一致”的核苷酸序列与参考核苷酸序列具有至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。对于核苷酸，比较序列的长度一般将为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、75、90、100、150、200、250、300、350、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、10000或超过10,000个连续核苷酸(例如全长序列)。序列同一性可使用序列分析软件，根据默认设定(例如GeneticsComputer Group的序列分析软件包,University of Wisconsin Biotechnology Center,1710University Avenue,Madison,WI 53705)来量测。此类软件可通过对各种取代、缺失及其他修饰指定同源性程度来匹配相似序列。
如本文所用及如在本领域中较好地理解的，“治疗”病症(例如本文所述的病症，诸如癌症)或对病症的“治疗”为用于获得有益或期望结果(诸如临床结果)的方法。有益或期望结果可包括但不限于缓解或改善一种或多种症状或病症；减轻疾病、紊乱或病症的程度；使疾病、紊乱或病症的状态稳定(即，不恶化)；预防疾病、紊乱或病症的传播；延迟或减缓疾病、紊乱或病症的进展；改善或缓和疾病、紊乱或病症；以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测到还是或不可检测到。“缓和”疾病、紊乱或病症意指相比于不存在治疗下的程度或时程而言疾病、紊乱或病症的程度和/或不合期望的临床表现减轻和/或进展的时程减缓或拉长。
如本文所用，术语“降低”、“增加”、“提高”或“减少”(例如，提及治疗结果或效果时)具有相对于参考水平的含义。在一些实施方案中，参考水平为如在实验动物模型或临床试验中通过使用该方法采用对照确定的水平。在一些实施方案中，参考水平为在治疗开始之前或开始时同一对象的水平。在一些实施方案中，参考水平为未通过该治疗方法治疗的群体的平均水平。
术语“DNA损伤和修复抑制剂(DDRi)”是指避免修复由内源性或外源性染色体损害引起的细胞DNA损伤且通过抑制正常发生的DNA修复机制和维持细胞活力所需的相关过程来起作用的药剂。
术语“检查点抑制剂”(也称为“免疫检查点抑制剂”或“ICI”)是指阻断免疫检查点蛋白的作用，例如阻断此类免疫检查点蛋白与其伴侣蛋白结合的药剂。已知癌细胞表达免疫检查点蛋白，使得T细胞无法将此类癌细胞识别为破坏靶标。一般而言，检查点抑制剂通过阻断T细胞上的特异性免疫检查点蛋白和靶细胞之间的相互作用而促进T细胞对癌细胞的破坏，其中此类相互作用否则将作为信号来抑制T细胞破坏靶细胞。检查点抑制剂包括阻断PD-1与PD-L1相互作用或阻断CTLA-4与B7-1/B7-2相互作用的药剂。特异性的检查点抑制剂的实例包括以下抗体类药物：伊匹单抗(ipilimumab)、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)及测米匹单抗(cemiplimab)。
如本文所用，术语“肿瘤相关抗原”意指以比正常细胞显著更大的量在肿瘤细胞上呈递的抗原。
如本文所用，术语“肿瘤特异性抗原”是指仅在肿瘤细胞上内源性地呈递的抗原。
如本文所用，术语“癌细胞抗原”意指在形成癌症(例如恶性赘生性细胞，诸如肿瘤、赘生物、上皮癌、肉瘤、白血病及淋巴瘤)的一部分的细胞上呈递的抗原。单独的癌细胞可表达一种或多种癌细胞抗原。用于靶向的优选癌细胞抗原是相对于对象中的健康细胞在癌细胞上具有显著差异表达的抗原。
如本文所用，对例如抗体、其抗原结合片段或CAR的抗原特异性结合结构域的术语“结合”意指与靶抗原的至少暂时相互作用或缔合。举例而言，“结合”可指CAR的抗原结合部分与表达癌细胞抗原的癌细胞暂时或持续接触的过程。在本文所述的一些实施方案中，CAR能够结合癌细胞抗原。在此类实施方案中，结合经由癌细胞抗原与CAR的抗原特异性结合区之间的相互作用发生。
如本文所用，“原发肿瘤”是指在原发部位处的原始肿瘤生长，其不为转移的产物。
如本文所用，“继发性肿瘤”是指通常通过转移过程自原发部位扩散至继发性解剖部位的肿瘤生长。
“实体瘤”为异常组织块，例如肉瘤、上皮癌及淋巴瘤。如本文所用，“液体肿瘤”为存在于体液中的癌症，例如淋巴瘤和白血病。
如本文所用，“冷肿瘤”是指特征在于缺乏T细胞浸润的肿瘤。冷肿瘤的特征还在于在用作单一疗法时，检查点抑制剂在治疗效力方面无效。冷肿瘤的实例包括但不限于胶质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌及乳腺癌肿瘤，其特征在于缺乏T细胞浸润。
详细描述
嵌合抗原受体
嵌合抗原受体(CAR)为经遗传工程改造的细胞表面受体蛋白，其经设计以结合特异性抗原，例如在癌细胞表面上呈递的抗原。CAR可在免疫细胞，例如T淋巴细胞(T细胞)中表达，以将T细胞引导至表达CAR结合抗原的靶细胞并靶向抗原表达性细胞进行破坏。本文所述的CAR可结合至例如蛋白质、碳水化合物或糖脂抗原。举例而言，本文所述的CAR可结合至以下抗原中的任一者：α-叶酸受体、CAIX、CD19、CD20、CD22、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44v7/8、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、EGFRvIII、EGP-2、EGP-40、EphA2、EphA3、Erb-B2、Erb-B 2,3,4、FBP、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HER2、HMW-MAA、IL-11Rα、IL-13Rα2、KDR、κ轻链、刘易斯Y、L1-细胞黏附分子、黑素瘤相关抗原(MAGE)、间皮素、鼠CMV感染细胞、MUC1、MUC16、NKG2D、NY-ESO-1/LAGE-1、癌胚抗原(Oncofetal antigen)、PSCA、PSMA、ROR1、mAb IgE、TAG-72、VEGF-R2、胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)、肿瘤内皮细胞标志物1(TEM-1)、α-胎蛋白(AFP)、癌症抗原125(CA125)、癌症抗原15-3(CA15-3)、碳水化合物抗原19-9(CA19-9)、人绒膜促性腺激素(hCG或β-hCG)、前列腺特异性抗原(PSA)、上皮肿瘤抗原(ETA)、不成熟层黏连蛋白受体、HPV E6、HPV E7、BING-4、钙激活的氯离子通道2、细胞周期调节蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、端粒酶、间皮素、SAP-1、存活素、livin、BAGE家族蛋白、CAGE家族蛋白、GAGE家族蛋白、MAGE家族蛋白、SAGE家族蛋白、XAGE家族蛋白、PRAME、SSX-2、Melan-A/MART-1、MART-2、Gp100/pmel17、酪氨酸酶、TRP-1/-2、P.多肽、MC1R、β-连环蛋白、β-连环蛋白-m、β-肌动蛋白/4/m、肌球蛋白/m、HSP70-2/m、GM2、sTn、globo-H、HLA-A2-R17OJ、BRCA1/2、CDK4、CML66、纤连蛋白、p53、Ras、TGF-βRII或乳腺珠蛋白-A。本文所述的CAR可结合至癌细胞抗原，包括肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原。
本文所述的CAR至少包括以下组分：抗原结合片段、跨膜结构域组分及细胞质活化结构域。CAR还可包括一个或多个细胞质共刺激结构域。示例性CAR描述于例如Feins等人(2018)“An introduction to chimeric antigen receptor(CAR)T-cell immunotherapyfor human cancer”Am.J.Hematol.94:S3-9；Stoiber等人(2019)“Limitations in theDesign of Chimeric Antigen Receptors for Cancer Therapy”Cells,8(472):1-26；及Sadelain等人(2013)“The Basic Principles of Chimeric Antigen Receptor Design”Cancer Discovery,3(4):388-98中。
在本文所述的实施方案中，CAR可包括铰链区或间隔区。CAR抗原结合片段一般经由铰链区或间隔区连接至CAR跨膜结构域。铰链区可为免疫球蛋白G(IgG)或CD8α或CD28胞外结构域的氨基酸序列或由其衍生而来。示例性铰链结构域描述于例如Stoiber等人(2019)“Limitations in the Design of Chimeric Antigen Receptors for CancerTherapy”Cells,8(472):1-26中。
CAR抗原结合片段或结构域
CAR抗原结合片段可为单链可变片段(scFv)、抗原结合片段(Fab)、F(ab')2片段或配体，例如天然的、人工或经工程改造的配体。scFv为由免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)的可变区构成且通过肽接头结合在一起的融合蛋白。scFv的接头的长度可例如为10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个残基，例如长度为10至20、15至20、15至25或10至25个残基。scFv可在哺乳动物或细菌细胞中表达为单链肽。还可以与接头区域串联的方式克隆scFv，以产生二价和三价scFv。另外，可表达两个或更多个VH和VL对，其中各VH和VL对通过短接头连接且各VH与另一相连VH和VL对的VL二聚化以形成双特异抗体(即，通过VH/VL二聚化形成的两个scFv)或三特异抗体(即，通过VH/VL二聚化形成的三个scFv)。双特异抗体和三特异抗体可包括长度较短(例如约5个氨基酸)的接头。scFv接头可包括甘氨酸和丝氨酸重复序列，例如五肽(Gly4Ser)(SEQ ID NO:275)、(Gly4Ser)2(SEQ ID NO:276)、(Gly4Ser)3(SEQ ID NO:30)或(Gly4Ser)4(SEQ ID NO:277)。scFv氨基酸序列可为鼠抗体序列、人抗体序列或人源化抗体序列。在一些实施方案中，CAR可包括两个或三个抗原特异性靶向区域，例如结合至不同细胞表面抗原的两个或三个scFv、Fab、F(ab')2或配体(例如突变蛋白)。
Fab由重链和轻链抗体链中的每一者的恒定结构域和可变结构域构成。可通过使用酶(诸如番木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或IdeS)直接裂解抗体制备Fab。
可在CAR中包含的天然配体的实例包括但不限于CD8、CD4、CD25及CD16。
CAR包括识别且结合至特异性细胞表面抗原的抗原结合片段或抗原结合结构域。示例性CD33抗原识别结构域核苷酸序列包括以下：
Figure BDA0003874665800000251
Figure BDA0003874665800000252
和
Figure BDA0003874665800000261
示例性CD33抗原结合片段氨基酸序列包括以下：
抗CD33重链可变结构域：
Figure BDA0003874665800000262
Figure BDA0003874665800000263
和
抗CD33轻链可变结构域：
Figure BDA0003874665800000264
CAR铰链区或间隔区
示例性CD8α衍生的铰链区核苷酸序列包括：
Figure BDA0003874665800000265
Figure BDA0003874665800000266
和
Figure BDA0003874665800000267
示例性CD8α衍生的铰链区氨基酸序列包括：
Figure BDA0003874665800000268
和
Figure BDA0003874665800000269
示例性CD28衍生的铰链区核苷酸序列为序列SEQ ID NO:9：
Figure BDA00038746658000002610
示例性CD28衍生的铰链区氨基酸序列为序列SEQ ID NO:10：
Figure BDA0003874665800000271
示例性IgG1衍生的铰链区核苷酸序列为序列SEQ ID NO:11：
Figure BDA0003874665800000272
示例性IgG1衍生的铰链区氨基酸序列为序列SEQ ID NO:12：
Figure BDA0003874665800000273
示例性IgG2衍生的铰链区核苷酸序列为序列SEQ ID NO:13：
Figure BDA0003874665800000274
示例性IgG2衍生的铰链区氨基酸序列为序列SEQ ID NO:14：
Figure BDA0003874665800000275
示例性IgG3衍生的铰链区核苷酸序列为序列SEQ ID NO:15：
Figure BDA0003874665800000276
示例性IgG3衍生的铰链区氨基酸序列为序列SEQ ID NO:16：
Figure BDA0003874665800000277
示例性IgG4衍生的铰链区核苷酸序列包括：
Figure BDA0003874665800000278
Figure BDA0003874665800000281
Figure BDA0003874665800000282
和
Figure BDA0003874665800000283
示例性IgG4衍生的铰链区氨基酸序列包括：
Figure BDA0003874665800000291
Figure BDA0003874665800000292
和
Figure BDA0003874665800000293
在本文所述的实施方案中，CAR可包括间隔区。示例性间隔区核苷酸序列为：GGCGGCGGAGGATCTGGGGGAGGTGGAAGCGGAGGCGGTGGAAGC(SEQ ID NO：29)。
示例性间隔区氨基酸序列为：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：30)。
CAR跨膜结构域
本文所述的CAR的跨膜结构域连接抗原结合结构域和胞内信号转导结构域。CAR跨膜结构域可为例如来自或衍生自CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或诱导性T细胞共刺激因子(ICOS)的氨基酸序列。跨膜结构域可导致CAR与T细胞受体(TCR)复合物的二聚化以及CAR的表面表达。示例性CAR跨膜结构域描述于例如Stoiber等人(2019)“Limitations in the Designof Chimeric Antigen Receptors for Cancer Therapy”，Cells，8(472)：1-26。
如本文所用，“CD4”(也称为T细胞表面糖蛋白CD4和CD4mut)是指由Entrez基因ID第920号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_000616.5、NM_001195014.3、NM_001195015.3、NM_001195016.3及NM_001195017.3的核苷酸序列。CD4蛋白质产物包括由CD4编码的蛋白质，例如包含以下的NCBI参考序列的氨基酸序列的蛋白质：NP_000607.1、NP_001181943.1、NP_001181944.1、NP_001181945.1或NP_001181946.1。CD4的跨膜区包括例如由以下核苷酸序列编码的NCBI参考序列NP_000607.1的氨基酸序列的氨基酸397-418：
Figure BDA0003874665800000301
如本文所用，“CD8α”(也称为CD8a分子、T细胞表面糖蛋白CD8、p32、Leu2及CD8a)是指由Entrez基因ID第925号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001145873.1、NM_001768.6及NM_171827.3的核苷酸序列。CD8蛋白质产物包括由CD8编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_001139345.1、NP_001759.3或NP_741969.1的氨基酸序列的蛋白质。CD8α的跨膜区包括例如NCBI参考序列NP_001139345.1的氨基酸序列的氨基酸183-203、183-205或183-206，其分别为：
Figure BDA0003874665800000302
Figure BDA0003874665800000303
及
Figure BDA0003874665800000304
CD8α的跨膜区由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000305
Figure BDA0003874665800000306
及
Figure BDA0003874665800000307
如本文所用，“CD28”(也称为T细胞特异性表面糖蛋白CD28、CD28分子、Tp44)是指由Entrez基因ID第940号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001243077.2、NM_001243078.1及NM_006139.4的核苷酸序列。CD28蛋白质产物包括由CD28编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_001230006.1、NP_001230007.1或NP_006130.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_006130.1的氨基酸序列的氨基酸19-220的成熟CD28蛋白。CD28的跨膜区包括例如NCBI参考序列NP_006130.1的氨基酸序列的氨基酸153-179：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(SEQ ID NO:62)。
CD28的跨膜区由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000311
如本文所用，“CD3ζ”(也称为CD247、CD247分子、T细胞表面糖蛋白CD3ζ链、T3Z、CD3H、CD3Q、CD3Z、TCRZ、IMD25及CD3ζ)是指由Entrez基因ID第919号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_000734.4及NM_198053.2的核苷酸序列。CD3ζ蛋白质产物包括由CD3ζ编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_000725.1或NP_932170.1的氨基酸序列的蛋白质。CD3ζ的跨膜区包括例如NCBI参考序列NP_000725.1的氨基酸序列的氨基酸31-51：
Figure BDA0003874665800000312
CD3ζ的跨膜区由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000313
如本文所用，“ICOS”(也称为诱导性T细胞共刺激因子、诱导性T细胞共刺激因子前体、AILIM、CD278及CVID1)是指由Entrez基因ID第29851号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_012092.4的核苷酸序列。ICOS蛋白质产物包括由ICOS编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_036224.1(SEQ ID NO:71)的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_036224.1(SEQID NO:72)的氨基酸序列的氨基酸21-199的成熟ICOS蛋白质。ICOS的跨膜区包括NCBI参考序列NP_036224.1的氨基酸序列的氨基酸141-161：
Figure BDA0003874665800000314
在本文所述的一些实施方案中，CAR可包括本文所述的跨膜结构域(例如本文所述的CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或ICOS跨膜结构域)的全部或一部分。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，CAR包含约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24或约25个氨基酸，或约15至约20、约15至约25、约15至约22、约18至约20、约18至约22或约18至约25个氨基酸的跨膜结构域。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，CAR包含本文所述的CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或ICOS跨膜结构域的约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24或约25个氨基酸，或约15至约20、约15至约25、约15至约22、约18至约20、约18至约22或约18至约25个氨基酸的跨膜结构域。
在本文所述的一些实施方案中，CAR包括具有与本文所述的CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或ICOS跨膜结构域约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约90％至约95％、约95％至约100％或约90％至约100％一致的氨基酸序列的跨膜结构域。
CAR胞内信号转导和共刺激结构域
本文所述的CAR的胞内部分可包括胞内信号转导结构域及任选地一个或多个共刺激结构域。示例性胞内信号转导结构域包括例如Fc受体γ链亚单位(FcRγ)或CD3ζ信号转导结构域的氨基酸序列或由其衍生氨基酸序列。示例性共刺激结构域包括例如来自以下或衍生自以下的氨基酸序列：4-1BB(C137；TNFRS9)、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40(CD134)、IL-2RB、IL-2RA、MYD88或ICOS(CD278)胞内结构域。举例而言，本文所述的CAR可包括但不限于以下信号转导结构域与共刺激结构域的组合：4-1BB/CD3ζ，CD27/CD3ζ，CD28/CD3ζ，DAP10/CD3ζ，0X40/CD3ζ，ICOS/CD3ζ，4-1BB/FcRγ，CD27/FcRγ，CD28/FcRγ,DAP10/FcRγ,OX40/FcRγ,ICOS/FcRγ,4-1BB/CD28/CD3ζ,4-1BB/CD28/FcRγ,OX40/CD28/CD3ζ,OX40/CD28/FcRγ，ICOS/4-1BB/CD3ζ,及ICOS/4-1BB/FcRγ。
本文所述的CD3ζ信号转导结构域可包括例如包含NCBI参考序列NP_000725.1的氨基酸序列的氨基酸52-163的蛋白质：
Figure BDA0003874665800000321
编码CD3ζ信号转导结构域的核苷酸序列为：
Figure BDA0003874665800000331
FcRγ蛋白的实例为由Entrez基因ID第2207号标识的IgE受体Ig的Fc片段(也称为FCER1G、FCRG及高亲和力免疫球蛋白ε受体亚单位γ)。本文所述的FcRγ核苷酸序列可包括例如由Entrez基因ID第2207号编码的等位基因变体、直系同源物及mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_004106.2的核苷酸序列。FcRγ蛋白质产物包括由NCBI参考序列NM_004106.2的核苷酸序列编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_004097.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_004097.1的氨基酸序列的氨基酸19-86的成熟FcRγ蛋白。FcRγ的信号转导结构域包括例如NCBI参考序列NP_001552.2的氨基酸序列的氨基酸45-86：
Figure BDA0003874665800000332
FcRγ亚单位和CD3ζ含有多个YXXL免疫受体酪氨酸类活化基序(“ITAM”)序列。不受理论束缚，据信，例如在CAR的抗原结合部分结合细胞表面抗原后，ITAM的酪氨酸磷酸化促进T细胞活化。包括ITAM序列的CD3ζ氨基酸序列的实例为SEQ ID NO:74。包括编码ITAM序列的CD3ζ核苷酸序列的实例为SEQ ID NO:75。
包括ITAM序列的CD3ζ氨基酸序列的实例为：
Figure BDA0003874665800000333
在本文所述的一些实施方案中，CAR可包括本文所述的信号转导结构域(例如本文所述的CD3ζ或FcRγ信号转导结构域)的全部或一部分。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，CAR包含约20、约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90、约100、约110、约120或约130个氨基酸，或约20至约40、约30至约50、约40至约50、约40至约60、约100至约120、约110至约120或约110至约130个氨基酸的信号转导结构域。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，CAR包含含有本文所述的CD3ζ或FcRγ信号转导结构域或其一部分的约20、约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90、约100、约110、约120或约130个氨基酸，或约20至约40、约30至约50、约40至约50、约40至约60、约100至约120、约110至约120或约110至约130个氨基酸。
在本文所述的一些实施方案中，CAR包括具有与本文所述的CD3ζ或FcRγ信号转导结构域约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约90％至约95％、约95％至约100％或约90％至约100％一致的氨基酸序列的跨膜结构域。
如本文所用，“4-1BB”(也称为TNFRSF9，TNF受体超家族成员9、CD137、ILA、CDw137、肿瘤坏死因子受体超家族成员9及TNFRS9)是指由Entrez基因ID第3604号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_001561.6的核苷酸序列。4-1BB蛋白质产物包括由4-1BB编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_001552.2的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_001552.2的氨基酸序列的氨基酸24-255的成熟4-1BB蛋白。
4-1BB的跨膜区包括例如以下氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000341
4-1BB的跨膜区由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000342
4-1BB的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_001552.2的氨基酸序列的氨基酸214-255：
Figure BDA0003874665800000343
4-1BB的共刺激结构域由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000344
如本文所用，“CD27”(也称为CD27分子、T14、S152、Tp55、TNFRSF7、S152、LPFS2及CD27抗原)是指由Entrez基因ID第939号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_001242.4的核苷酸序列。CD27蛋白质产物包括由CD27编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_001233.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_001233.1的氨基酸序列的氨基酸21-260的成熟CD27蛋白。CD27的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_001233.1的氨基酸序列的氨基酸213-260：
Figure BDA0003874665800000351
CD28的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_006130.1的氨基酸序列的氨基酸180-220：
Figure BDA0003874665800000352
本文所述的CD28共刺激结构域还包括：
Figure BDA0003874665800000353
编码CD28共刺激结构域的核苷酸序列包括：
Figure BDA0003874665800000354
如本文所用，“CD40”(也称为CD40分子、p50、Bp50、CDW40、TNFRSF5及肿瘤坏死因子受体超家族成员5)是指由Entrez基因ID第958号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001250.6、NM_001302753.2、NM_001322421.2、NM_001322422.2、NM_001362758.2或NM_152854.4的核苷酸序列。CD40蛋白质产物包括由CD40编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_001241.1、NP_001289682.1、NP_001309350.1、NP_001309351.1、NP_001349687.1、NP_690593.1的氨基酸序列的蛋白质，或例如包含NCBI参考序列NP_001241.1的氨基酸序列的氨基酸21-277的成熟CD40蛋白质。CD40的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_001241.1的氨基酸序列的氨基酸216-277：
Figure BDA0003874665800000361
如本文所用，“CD40L”(也称为CD40配体、CD40LG、IGM、IMD3、TRAP、gp39、CD154、HIGM1、T-BAM、TNFSF5及hCD40L)是指由Entrez基因ID第959号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_000074.3的核苷酸序列。CD40L蛋白质产物包括由CD40L编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_000065.1的氨基酸序列的蛋白质。CD40L的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_000065.1的氨基酸序列的氨基酸1-22：
Figure BDA0003874665800000362
如本文所用，“TLR2”(也称为tol1样受体2、TIL4及CD282)是指由Entrez基因ID第7097号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001318787.2，NM_001318789.2，NM_001318790.2，NM_001318791.2，NM_001318793.2，NM_001318795.2，NM_001318796.2，及NM_003264.5的核苷酸序列。TLR2蛋白质产物包括由TLR2编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_001305716.1，NP_001305718.1，NP_001305719.1，NP_001305720.1，NP_001305722.1，NP_001305724.1，NP_001305725.1，NP_003255.2的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_001305716.1的氨基酸序列的氨基酸21-784的成熟TLR2蛋白质。TLR2的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_001305716.1的氨基酸610-784：
Figure BDA0003874665800000363
Figure BDA0003874665800000364
或
NCBI参考序列NP_001305716.1的氨基酸序列的氨基酸640-784：
Figure BDA0003874665800000365
如本文所用，“DAP10”(也称为HCST、造血细胞信号转导物、KAP10及PIK3AP)是指由Entrez基因ID第10870号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001007469.2或NM_014266.4的核苷酸序列。DAP10蛋白质产物包括由DAP10编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_001007470.1或NP_055081.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_001007470.1的氨基酸序列的氨基酸20-92的成熟DAP10蛋白。DAP10的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_001007470.1的氨基酸序列的氨基酸70-92：CARPRRSSPAQDGKVYTNMPGRG(SEQ ID NO:137)。
如本文所用，“OX40”(也称为TNFRSF4、TNF受体超家族成员4、CD134、ACT35、IMD16、肿瘤坏死因子受体超家族成员4及TXGP1L)是指由Entrez基因ID第7293号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_003327.4的核苷酸序列。OX40蛋白质产物包括由OX40编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列NP_003318.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_003318.1的氨基酸序列的氨基酸29-277的成熟OX40蛋白质。OX40的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_003318.1的氨基酸序列的氨基酸236-277：ALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI(SEQ ID NO:141)。
OX40的共刺激结构域由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000371
ICOS的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_036224.1的氨基酸序列的氨基酸162-199或165-199，例如：
Figure BDA0003874665800000372
ICOS的共刺激结构域由以下核苷酸序列编码：
Figure BDA0003874665800000373
如本文所用，“IL-2Rβ”(也称为IL2RB、白介素2受体亚单位β、CD122、IMD63、IL15RB及P70-75)是指由Entrez基因ID第3560号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_000878.5、NM_001346222.1或NM_001346223.2的核苷酸序列。IL-2Rβ蛋白质产物包括由IL-2Rβ编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_000869.1、NP_001333151.1或NP_001333152.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_000869.1的氨基酸序列的氨基酸27-551的成熟IL-2Rβ蛋白质。IL-2Rβ的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_000869.1的氨基酸序列的氨基酸266-551：
Figure BDA0003874665800000381
如本文所用，“IL2RA”(也称为IL2RA、白介素2受体亚单位α、p55、CD25、IL2R、IMD41、TCGFR及IDDM10)是指由Entrez基因ID第3559号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_000417.3、NM_001308242.2或NM_001308243.2的核苷酸序列。IL2RA蛋白质产物包括由IL2RA编码的蛋白质，例如包含NCBI参考序列：NP_000408.1、NP_001295171.1或NP_001295172.1的氨基酸序列的蛋白质，或包含NCBI参考序列NP_000408.1的氨基酸序列的氨基酸22-272的成熟IL2RA蛋白质。IL2RA的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_000408.1的氨基酸序列的氨基酸260-272。
如本文所用，“MYD88”(也称为MYD88固有免疫信号转导衔接子、骨髓分化初级反应蛋白MyD88及MYD88D)是指由Entrez基因ID第4615号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物、其蛋白质产物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001172566.2，NM_001172567.2，NM_001172568.2，NM_001172569.3，NM_001365876.1，NM_001365877.1，NM_001374787.1，NM_001374788.1，或NM_002468.5的核苷酸序列。MYD88蛋白质产物包括由MYD88编码的蛋白质，例如包含以下NCBI参考序列的氨基酸序列的蛋白质：NP_001166037.2，NP_001166038.2，NP_001166039.2，NP_001166040.2，NP_001352805.1，NP_001352806.1，NP_0013617161，NP_001361717.1及NP_002459.3。MYD88的共刺激结构域包括例如NCBI参考序列NP_001166038.2的氨基酸序列的氨基酸160-304：
Figure BDA0003874665800000391
在本文所述的一些实施方案中，CAR可包括本文所述的共刺激结构域的全部或一部分，例如本文所述的4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88或ICOS共刺激结构域。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，CAR包含长度为约10、约12、约15、约20、约22、约25、约30、约35、约37、约40、约41、约45、约47、约50、约60、约61、约70、约80、约90、约100、约110、约120、约130、约134、约140、约144、约150、约160、约170、约174、约180、约190、约200、约225、约250、约275、约285、约290或约300个氨基酸的共刺激结构域。举例而言，在本文所述的一些实施方案中，CAR包含含有本文所述的4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88或ICOS共刺激结构域，或其一部分的长度为约10、约12、约15、约20、约22、约25、约30、约35、约37、约40、约41、约45、约47、约50、约60、约61、约70、约80、约90、约100、约110、约120、约130、约134、约140、约144、约150、约160、约170、约174、约180、约190、约200、约225、约250、约275、约285、约290或约300个氨基酸的共刺激结构域。
在本文所述的一些实施方案中，CAR包括具有与本文所述的4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88或ICOS共刺激结构域约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约90％至约95％、约95％至约100％或约90％至约100％一致的氨基酸序列的共刺激结构域。
本文所述的基因、核苷酸序列(例如mRNA序列)及蛋白质的直系同源物包括例如哺乳动物直系同源物，包括但不限于小鼠(即，Mus musculus)直系同源物。
CAR-T细胞
表达CAR的T细胞(CAR-T细胞)为经分离且经遗传工程改造以表达一个/种或多个/种CAR的T淋巴细胞(T细胞)。CAR-T细胞可为自患者(例如需要治疗癌症的患者)中分离的T细胞，其经遗传工程改造以表达一个/种或多个/种CAR。可使用任何适合的方法(例如白细胞去除术或血球分离术)自患者中收集细胞，接着通过溶离(elutriation)移除骨髓及其他污染细胞并富集T细胞。在分离后，可通过任何适合的方式扩增和遗传工程改造T细胞，例如通过病毒转导(例如慢病毒或γ-逆转录病毒转导)，或用适合的表达载体转染或电穿孔。随后，可在向患者施用之前在活体外(ex vivo)培养中扩增经遗传修饰的T细胞。
在不受理论束缚的情况下，据信CAR的表达允许CAR-T细胞靶向靶细胞群体，例如表达特异性细胞表面抗原的癌细胞，其中CAR的抗原特异性靶向区(例如，scFv、Fab片段、F(ab')2片段或配体)与该特异性细胞表面抗原特异性结合。据信，CAR同与主要组织相容性复合物分子复合的该特异性细胞表面抗原的结合将通过CAR的胞内信号转导结构域(例如，FcRγ或CD3ζ信号转导结构域)及(若存在)一个或多个共刺激结构域(例如，4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88和/或ICOS共刺激结构域)而引起信号转导级联活化。因此，据信，将CAR引入至T细胞中将允许T细胞通过与野生型T细胞所用相同的效应子功能(例如，FcRγ、CD3ζ或共刺激蛋白信号转导)来靶向并杀伤表达被CAR识别的细胞表面抗原的靶细胞群体，以消除受感染或经转化的细胞。举例而言，将本文所述的CAR引入至T细胞中可有效允许T细胞通过FcRγ、CD3ζ和/或共刺激蛋白信号转导来靶向并杀伤表达被CAR识别的细胞表面抗原(例如癌细胞抗原、肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原)的靶癌细胞群体。
在本文所述的一些实施方案中，可通过将一种或多种病毒载体引入至分离的T细胞或分离的T细胞群体来产生本发明的CAR-T细胞。在一些实施方案中，病毒载体将编码CAR核苷酸序列的转基因递送至T细胞。在一些实施方案中，CAR核苷酸序列包括编码抗原特异性靶向区、跨膜结构域及胞内信号转导结构域的核苷酸序列。在一些实施方案中，CAR核苷酸序列还包括编码一个或多个共刺激结构域、铰链结构域、间隔结构域和/或氨基酸转运体结构域(例如精氨酸转运体结构域)的核苷酸序列。
本文提供了表达精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞(在本文中也称为“精氨酸+CAR-T细胞(arg+CAR-T细胞)”)，其可用于治疗实体瘤癌症和血液癌症。
除CAR的表达之外，CAR-T细胞还可经遗传修饰以共表达可增强CAR功能和持久性的一种或多种单独的共刺激蛋白，包括细胞因子。举例而言，CAR-T细胞可经编程以共表达CD28、CD80、4-1BB、4-1BBL、CD86、OX40L、IL-12、IL-15、IL-18和/或CD70蛋白。另外，在一些实施方案中，CAR-T细胞可经遗传修饰以表达靶向不同细胞表面抗原的2种或更多种CAR。在一些实施方案中，CAR-T细胞可经遗传修饰以表达靶向单一细胞表面抗原的单一CAR。
本发明的CAR-T细胞包括第一代、第二代、第三代、第四代及第五代CAR。CAR-T技术描述于例如Petersen and Krenciute,(2019)，“用于高级别胶质瘤的免疫疗法的下一代CAR T细胞(Next Generation CAR T Cells for the Immunotherapy of High-GradeGlioma)”，Frontiers in Oncology,9:1-9。
第一代CAR包括抗原结合蛋白结构域(例如，CD8、CD4、CD25、CD16或抗体衍生的scFv)、铰链/间隔结构域、跨膜结构域及信号转导结构域(诸如CD3ζ或FcRγ胞内信号转导结构域)的融合物。
第二代CAR包括抗原结合蛋白结构域、铰链/间隔结构域、跨膜结构域及CD3ζ或FcRγ信号转导结构域，并进一步包括胞内共刺激结构域(例如，4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88或ICOS胞内共刺激结构域)。
第三代CAR包括在第二代CAR中可见的所有组分，但包括多个共刺激结构域(例如4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88和/或ICOS胞内共刺激结构域中的不止一种)。
第四代及第五代CAR(也称为装甲CAR或TRUCK)经进一步遗传工程改造以表达CAR且表达编码一种或多种信号转导蛋白(例如细胞因子或细胞因子受体蛋白)的转基因。举例而言，在一些实施方案中，CAR-T细胞经遗传工程改造以过表达IL-12、IL-15、IL-18、IL-7R、CD28、CD80、4-1BB、4-1BBL、CD86、OX40L或CD70。在一些实施方案中，信号转导蛋白(诸如细胞因子或细胞因子受体蛋白)的过表达可有效地提供具有增强的持久性、增殖或抗肿瘤活性的CAR-T。
另外，CAR-T细胞可使用例如CRISPR/Cas9基因编辑工具而经遗传工程改造以缺失抑制细胞固有检查点的基因，例如PD-1或CTLA4。因此，在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞经遗传工程改造以缺失或降低PD-1或CTLA4基因表达。CAR-T细胞亦可经遗传工程改造以缺失二酰基甘油激酶(DGK)。因此，在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞经遗传工程改造以缺失或降低DGK基因表达，例如DGKα和/或DGKζ同种型表达。
在一些实施方案中，CAR-T细胞可使用例如CRISPR/Cas9基因编辑工具而经遗传工程改造，以允许将CAR转基因靶向插入至T细胞的基因组中。在一些实施方案中，CAR转基因的插入由编码CAR核苷酸序列的腺相关病毒(AAV)载体(例如AAV6载体)介导。举例而言，在一些实施方案中，CAR-T细胞经遗传工程改造以将CAR转基因插入至内源TCR基因序列中，例如TCRα链基因座中。在一些实施方案中，CAR-T细胞可使用例如CRISPR/Cas9基因编辑工具而经遗传工程改造以用突变基因序列置换初始T细胞基因序列。举例而言，在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞经遗传工程改造以分别用突变PD-1或CXCR4基因序列置换PD-1或CXCR4基因序列。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码CAR的附加体。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码CAR的整合的转基因。
本文还描述经遗传工程改造以表达氨基酸转运蛋白(例如精氨酸转运蛋白)的CAR-T细胞。在本文所述的一些实施方案中，CAR-T细胞经遗传工程改造以表达选自由以下组成的组的精氨酸转运蛋白：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1、4F2hc、y+LAT2、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT、rBAT、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+，或其组合。举例而言，在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞经遗传工程改造以包括编码氨基酸转运体的核苷酸序列，例如编码精氨酸转运体的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的附加体。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的转基因。
本文还描述经遗传工程改造以表达CAR和氨基酸转运蛋白(例如精氨酸转运蛋白)的CAR-T细胞。举例而言，在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞经遗传工程改造以包括编码CAR和氨基酸转运体的核苷酸序列，例如编码精氨酸转运体的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的附加体。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的转基因。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码CAR的附加体和编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的附加体。在一些实施方案中，本文所述的CAR-T细胞包含编码CAR的转基因和编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的转基因。
氨基酸转运蛋白
本文描述了经遗传修饰以表达一种或多种氨基酸转运蛋白(AAT)的CAR-T细胞。氨基酸转运体为膜转运蛋白，其通过氨基酸转运来调节能量代谢、蛋白质合成、基因表达、氧化还原平衡信号转导通路以及在细胞层面和整个生物体层面上的生长而起重要作用。氨基酸不易跨脂质膜扩散，因此需要跨膜转运蛋白来将氨基酸移入、移出细胞并在膜结合胞内隔室间移动。氨基酸转运可与包括Na+、H+、K+和/或Cl-的离子的移动以及其他氨基酸的反向移动偶联。AAT的失调引起代谢重编程，这将改变胞内氨基酸的含量，从而导致发病。AAT的失调涉及多种病理性病症，诸如但不限于自体吞噬和由代谢重编程导致的肿瘤细胞增殖，以及遗传性人类代谢紊乱，诸如胱氨酸尿症。归因于此类代谢能力，AAT可在抗癌药物方面提供潜在靶标。
氨基酸转运蛋白由属于多个家族的基因编码，所述家族包括：溶质载体(SLC)蛋白；氨基酸-多胺-有机阳离子(APC)超家族；氨基酸/生长素通透酶(AAAP)家族；二羧酸酯/氨基酸:阳离子(Na+或H+)同向转运体(DAACS)家族；支链氨基酸:阳离子同向转运体(LIVCS)家族；羟基/芳族氨基酸通透酶(HAAAP)家族；支链氨基酸输出子(LIV-E)家族；6TMS中性氨基酸转运体(NAAT)家族；碱性氨基酸反向转运体(ArcD)家族；及推定的氨基酸通透酶(PAAP)家族。SLC蛋白包含最大的氨基酸转运蛋白群，且包括分布于65个家族间的超过400种蛋白质。
氨基酸转运蛋白可分类为：钠依赖性中性氨基酸转运体、非钠依赖性中性氨基酸转运体、钠依赖性阴离子氨基酸转运体-系统X- AG、非钠依赖性阴离子氨基酸转运体系统xC -、钠依赖性阳离子氨基酸转运体及非钠依赖性阳离子氨基酸转运体。氨基酸转运蛋白控制氨基酸跨细胞膜的转运，包括精氨酸、谷氨酰胺及亮氨酸以及信号转导化合物(诸如γ-氨基丁酸(GABA))的转运。氨基酸转运蛋白的实例描述于例如Ren等人,(2017)“Amino-acidtransporters in T-cell activation and differentiation”，Cell Death andDisease,8,e2655中。
精氨酸转运蛋白
本文还描述了经遗传修饰以表达一种或多种精氨酸转运蛋白的CAR-T细胞。精氨酸转运蛋白由属于溶质载体基因(SLC)家族的基因编码。大多数SLC编码定位于细胞膜的蛋白质，不过一些成员定位于线粒体或其他胞内细胞器。SLC家族蛋白质产物可跨细胞膜转运例如带电有机分子、不带电有机分子、无机离子和/或氨。特异性编码能够跨细胞膜转运精氨酸之转运蛋白的SLC家族包括SLC3、SLC6及SLC7家族。
在哺乳动物中，尽管在溶质载体基因超家族中存在6个主要的AAT家族，然而细胞精氨酸的可用性很大程度上由SLC7家族的成员调控。这些转运体基因的蛋白质产物的特征为具有围绕中心孔区组织的多个跨膜结构域。其在质膜中的效率和能力显著决定了细胞中精氨酸的可用性。
SLC7家族分成两个亚组：阳离子氨基酸转运体(CAT)和L型氨基酸转运体(LAT)。CAT以单体形式在质膜中发挥功能，而LAT则为与单跨膜糖蛋白(SLC3)形成二硫键连接之二聚体的专性异二聚体，该单跨膜糖蛋白将转运体运输至质膜并且有助于蛋白质稳定性。在与SLC3家族的相互作用、底物特异性和转运机制方面，CAT和LAT家族展现出诸多差异。CAT对包括精氨酸在内的阳离子氨基酸具有特异性。CAT最初表示为系统y+，其以较高亲和力介导阳离子氨基酸的非Na+依赖性摄取。在哺乳动物中，CAT充当交换剂或促进剂。通过阳离子氨基酸转运体的这些y+系统的表达可显著调节精氨酸代谢。
精氨酸转运蛋白包括：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT2、4F2hc、y+LAT1、b0,+AT、rBAT及ATB0,+。在本文所述的一些实施方案中，精氨酸转运体由单一的SLC家族蛋白构成，例如：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4或ATB0,+。在一些实施方案中，精氨酸转运体由SLC家族蛋白之组合构成，例如：y+LAT2和4F2hc、y+LAT1和4F2hc、或b0,+AT和rBAT。
精氨酸转运蛋白可为钠依赖性及氯依赖性或非钠依赖性氨基酸转运蛋白。非钠依赖性氨基酸转运蛋白的实例包括以下成员：y+(例如，CAT-1、CAT-2、CAT-3)、y+L(例如，4F2hc与y+LAT1或y+LAT2的组合)及b0,+转运系统。钠依赖性氨基酸转运蛋白的实例包括B0,+转运系统的成员。由单一蛋白质构成的精氨酸转运体系统包括y+及B0,+转运体系统的成员。相比之下，y+L和b0,+精氨酸转运体系统包含糖蛋白(例如，4F2hc)和蛋白质。
如本文所用，“SLC7A1”(也称为溶质载体家族7成员1、ERR、ATRC1、CAT-1、HCAT1及REC1L)是指由Entrez基因ID第6541号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_003045.5的核苷酸序列(SEQ ID NO:180)。
本文所述的阳离子氨基酸转运体1(CAT-1)蛋白包括由SLC7A1编码的蛋白质序列、NCBI参考序列NP_003036.1的氨基酸序列及NCBI共同编码序列(CCDS)ID第CCDS9333.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000451
示例性CAT-1核苷酸序列为NCBI CCDS ID第CCDS9333.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000452
Figure BDA0003874665800000461
如本文所用，“SLC7A2”(也称为溶质载体家族7成员2、CAT2、ATRC2及HCAT2)是指由Entrez基因ID第6542号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001008539.4(SEQ ID NO:184)、NM_001164771.2(SEQID NO:185)、NM_001370337.1(SEQ ID NO:186)、NM_001370338.1(SEQ ID NO:187)或NM_003046.6(SEQ ID NO:188)的核苷酸序列。
本文所述的阳离子氨基酸转运体2(CAT-2)蛋白包括由SLC7A2编码的蛋白质序列及NCBI参考序列：NP_001008539.3、NP_001158243.1、NP_001357266.1、NP_001357267.1或NP_003037.4的氨基酸序列。CAT-2可表达为多种同种型，包括CAT-2A(标识为NCBI CCDS ID第CCDS6002.2号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000471
Figure BDA0003874665800000472
及
CAT-2B(标识为NCBI CCDS ID第CCDS34852.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000473
CAT-2A核苷酸序列为CCDS ID第CCDS6002.2号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000481
CAT-2B核苷酸序列为CCDS ID第CCDS34852.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000491
本文还描述CAT-2A蛋白，其包括一个或多个天然的或经工程改造的氨基酸突变。举例而言，本文描述包括取代和/或插入突变的CAT-2A蛋白。CAT-2A氨基酸序列可包括例如氨基酸突变R369E、N381i或R369E及N381i。包括R369E、N381i及R369E/N381i突变的CAT-2A氨基酸序列包括以下：
Figure BDA0003874665800000501
编码R369E、N381i及R369E/N381i突变的核酸序列包括以下：
Figure BDA0003874665800000511
Figure BDA0003874665800000521
Figure BDA0003874665800000522
及
Figure BDA0003874665800000531
如本文所用，“SLC7A3”(也称为溶质载体家族7成员3、CAT3、ATRC3及CAT-3)是指由Entrez基因ID第84889号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001048164.3(SEQ ID NO:204)或NM_032803.6(SEQ IDNO:205)的核苷酸序列。
本文所述的阳离子氨基酸转运体3(CAT-3)蛋白包括由SLC7A3编码的蛋白质序列、NCBI参考序列NP_001041629.1及NP_116192.4的氨基酸序列及NCBI CCDS ID第CCDS14404.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000541
CAT-3核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS14404.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000551
如本文所用，“SLC7A4”(也称为溶质载体家族7成员4、VH、CAT4、CAT-4及HCAT3)是指由Entrez基因ID第6545号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_004173.3(SEQ ID NO:210)的核苷酸序列。
本文所述的阳离子氨基酸转运体4(CAT-4)蛋白包括由SLC7A4编码的蛋白质序列、NCBI参考序列NP_004164.2的氨基酸序列及NCBI CCDS ID第CCDS33608.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000561
CAT-4核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS33608.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000571
如本文所用，“SLC7A6”(也称为溶质载体家族7成员6、LAT3、LAT-2及y+LAT-2)是指由Entrez基因ID第9057号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001076785.3(SEQ ID NO:214)或NM_003983.6(SEQ IDNO:215)的核苷酸序列。
y+L氨基酸转运体2(y+LAT2)蛋白包括由SLC7A6编码的蛋白质序列、NCBI参考序列NP_001070253.1及NP_003974.3的氨基酸序列及NCBI CCDS ID第CCDS32470.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000581
y+LAT2核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS32470.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000582
Figure BDA0003874665800000591
如本文所用，“SLC7A7”(也称为溶质载体家族7成员7、LPI、LAT3、MOP-2、Y+LAT1及y+LAT-1)是指由Entrez基因ID第9056号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001126105.3(SEQ ID NO:220)、NM_003982.4(SEQ ID NO:221)及NM_001126106.4(SEQ ID NO:222)的核苷酸序列。
本文所述的y+L氨基酸转运体1(y+LAT1)蛋白质包括由SLC7A7编码的蛋白质、NCBI参考序列NP_001119578.1及NP_003973.3的氨基酸序列及NCBI CCDS ID第CCDS9574.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000592
y+LAT1核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS9574.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000601
如本文所用，“SLC3A2”(也称为溶质载体家族3成员2、4F2、CD98、MDU1、4F2HC、4T2HC、NACAE及CD98HC)是指由Entrez基因ID第6520号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：NM_001012662.3(SEQ ID NO:227)、NM_001012664.3(SEQ ID NO:228)、NM_001013251.3(SEQ ID NO:229)或NM_002394.6(SEQ ID NO:230)的核苷酸序列。
本文所述的4F2细胞表面抗原重链(4F2hc)蛋白质包括由SLC3A2编码的蛋白质及NCBI参考序列NP_002385.3及NCBI CCDS ID第CCDS8039.2号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000611
4F2hc核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS8039.2号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000612
Figure BDA0003874665800000621
如本文所用，“SLC7A9”(也称为溶质载体家族7成员9、BAT1及CSNU3)是指由Entrez基因ID第11136号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列：
Figure BDA0003874665800000622
Figure BDA0003874665800000623
的核苷酸序列。
本文所述的钠依赖性中性氨基酸转运体BAT1(b0,+AT)蛋白质包括由SLC7A9编码的蛋白质及NCBI参考序列NP_001119807.1、NP_001229965.1、NP_055085.1及NCBI CCDS ID第CCDS12425.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000624
b0,+AT核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS 12425.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000631
如本文所用，“SLC3A1”(也称为溶质载体家族3成员1、D2H、ATR1、NBAT、RBAT及CSNU1)是指由Entrez基因ID第6519号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_000341.4(SEQ ID NO:242)的核苷酸序列。
本文所述的中性和碱性氨基酸转运蛋白rBAT(rBAT)蛋白包括由SLC3A1编码的蛋白质及NCBI参考序列NP_000332.2及NCBI CCDS ID第CCDS1819.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000641
rBAT核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS1819.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000642
Figure BDA0003874665800000651
如本文所用，“SLC6A14”(也称为溶质载体家族6成员14和BMIQ11)是指由Entrez基因ID第11254号标识的基因、其等位基因变体、其直系同源物及由该基因编码的mRNA转录物，包括NCBI参考序列NM_007231.5(SEQ ID NO:246)的核苷酸序列。
本文所述的钠依赖性和氯依赖性中性和碱性氨基酸转运体B0,+(ATB0,+)蛋白质包括由SLC6A14编码的蛋白质及NCBI参考序列NP_009162.1及NCBI CCDS ID第CCDS14570.1号的氨基酸序列：
Figure BDA0003874665800000661
ATB0,+核苷酸序列包括NCBI CCDS ID第CCDS 14570.1号的核苷酸序列：
Figure BDA0003874665800000662
Figure BDA0003874665800000671
经活化的T细胞通过上调阳离子氨基酸转运体来显著增加精氨酸输入。CAT的上调有助于T细胞增殖。精氨酸缺乏在炎症和癌症相关免疫抑制中十分重要，其导致T细胞功能严重受损。响应于精氨酸缺乏，T细胞诱导自体吞噬以增加精氨酸向胞内的进入。这种细胞保护机制保持了T细胞活力但无法维持细胞增殖。
骨髓来源的抑制性细胞可通过剥夺T细胞的基本代谢物(诸如精氨酸)或干扰T细胞活力、迁移或活化而直接促进免疫功能失调。MDSC还可通过诱导其他免疫调节细胞(诸如T调节细胞和肿瘤相关巨噬细胞)来间接抑制T细胞，增大对资源的竞争力。精氨酸可用性调节了许多此等活性。多形核MDSC(负载肿瘤的宿主中精氨酸酶1的主要来源)通过分泌精氨酸酶1并通过阳离子氨基酸转运体增强精氨酸摄取来降低胞外精氨酸。在精氨酸介导的肿瘤免疫逃避的情况下重构适应性免疫功能为用以增强免疫抗肿瘤应答的潜在治疗策略。
本文描述了在精氨酸可用性受限的环境中(其在骨髓细胞和癌细胞在对精氨酸的竞争中胜过T细胞时(例如在TME中)发生)拯救T细胞增殖和活性的方法。在一些实施方案中，本文描述了过表达特异性氨基酸转运体或氨基酸转运体的组合的CAR-T细胞。在一些实施方案中，本文描述了过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞。在一些实施方案中，本文描述了表达或过表达可将精氨酸自CAR-T细胞的胞外空间转运至胞质溶胶中的氨基酸转运体的CAR-T细胞。在一些实施方案中，氨基酸转运体为人氨基酸转运体以降低免疫原性，但可由其他物种修饰而来。举例而言，在一些实施方案中，氨基酸转运体为人源化氨基酸转运体。表1描述了能够双向转运诸如精氨酸的阳离子氨基酸的人氨基酸转运体。
表1
Figure BDA0003874665800000691
CAT家族成员通过用胞内底物的差异性反式刺激促进扩散来转运必要的阳离子氨基酸。在一些细胞中，其可通过控制作为一氧化氮合酶的底物的L-精氨酸的摄取来调节NO合成速率。在正常生理浓度下，主要由阳离子氨基酸转运体类型1(CAT-1)表示的生物化学系统y+载体为穿过质膜的主要细胞转运体系统。CAT-1由SLC7A1基因编码且广泛分布于多种系统中且对多种细胞功能至关重要。CAT-1为非Na+依赖性转运体且对精氨酸具有最高的亲和力(最低的KM)，即使当精氨酸浓度较低时，其还允许有效转运。CAT-1的较强反式刺激指示其在交换模式下比在单向转运模式下效果更好。
本公开还涵盖CAT-2A同种型的人工变体，诸如CAT-2AR369E、CAT-2AN381i和CAT-2AR369E/N381i。尽管阳离子氨基酸的表观KM值及对CAT-1、CAT-2B和CAT-3的反式刺激的敏感性为系统y+的特征，CAT-2A展现出的低10倍的底物亲和力且在膜的反侧处很大程度上与底物无关。此变体是通过将来自CAT-1的胞内结构域的两个氨基酸移植至CAT-2A中的同源结构域而人工产生的。具体而言，369位置处的Arg残基置换为Glu残基(R369E)，而Asn残基插入位置381中。所得变体具有与CAT-1相当的KM，而不负载反式刺激。
CAR-T细胞呈现出与单克隆抗体相当的靶标特异性且呈现出细胞毒T细胞的效应子功能，使CAR-T治疗对于多种疾病都具有吸引力。此等特征允许抗原识别与主要组织相容性复合物无关且可被设计为特异性地靶向抗原的保守和必需表位。
实体瘤中的TME为不利环境，其中大量的免疫抑制信号和必需营养素的短缺导致T细胞耗竭。特别地，精氨酸被活性癌细胞迅速消耗并被自浸润的骨髓来源的抑制性细胞分泌的各种精氨酸酶降解。此外，T细胞不能自其他氨基酸再生精氨酸且依赖于外源性精氨酸供应。本发明人已发现，使用一种或多种精氨酸转运体增强CAR-T细胞可使得这些细胞在该不利微环境中更好地竞争精氨酸。
也可利用精氨酸转运体的过表达，从而例如在再输注至患者中之前促发经增强的CAR-T细胞。表达精氨酸转运体的CAR-T细胞可在富含精氨酸条件下活体外培养，直至其获取到足够多的精氨酸以在TME内维持表达和后续抗肿瘤活性。经由T细胞的活体外促发实现的胞内精氨酸富集可促进CAR-T细胞的存活、生存期、活性和治疗效力。
示例性精氨酸转运体包括CAT-1、CAT-2、CAT-3及ATB0,+，其可能不需要任何亚单位。还涵盖精氨酸转运体y+LAT1+4F2hc、y+LAT2+4F2hc或b0,+AT+rBAT。举例而言，CAT-1、CAT-2及CAT-3不共转运Na+或Cl-，且可在过表达时对膜电位具有极小影响。CAT-1对精氨酸具有较高亲和力(即，最低Km)，即使当精氨酸浓度较低时其也可允许有效转运。CAT-2的活性可不受反式刺激影响。
精氨酸+CAR-T细胞可表达包含一个或多个突变的精氨酸转运体。用于改进精氨酸转运体的表达的适合的氨基酸修饰可为保守或非保守突变。可进行突变以使得经编码的转运体被修饰成极性、非极性、碱性或酸性氨基酸转运体。经工程改造的CAR-T细胞可自对象的全血产生，其中将T细胞与全血产物分离并在实验室中通过经由载体将基因插入至细胞中以在其表面上产生特异性靶向目的抗原的嵌合抗原受体而再次进行工程改造。这些经修饰的T细胞被扩增并放回对象的血流中，在血流中T细胞继续扩增。在不受理论束缚的情况下，据信一旦施用于对象，CAR-T细胞便被吸引至癌细胞表面上的靶标上。在不受理论束缚的情况下，据信CAR-T细胞鉴别表达靶抗原的细胞且杀死它们。CAR-T细胞可在急性攻击之后留在体内并防止靶细胞恢复。
产生CAR-T细胞的方法
本文所述的CAR-T细胞可由自对象(例如需要治疗的患者)收获的免疫细胞(例如CD4+和CD8+T细胞)产生。可使用血球分离术/白细胞去除术与细胞分离方法(例如逆流离心淘析法)的组合而自全血收获并分离适当T细胞群体。分离T细胞群体的方法为本领域已知的且可使用适合的设备进行，例如Haemonetics细胞回收器(Haemonetics,Boston,MA)和/或CliniMACS Prodigy(Miltenyi Biotec，Germany)。分离的T细胞可使用本领域已知的方法扩增并刺激，包括例如与饲养细胞一起和/或在生物反应器中并在例如抗CD3抗体、抗CD28抗体、磁珠缀合的抗CD3抗体、磁珠缀合的抗CD28抗体、生长因子(例如IL-2)及人工抗原呈递细胞的存在下进行培养。适合的生物反应器系统包括CliniMACS Prodigy(MiltenyiBiotec,Germany)、WAVE生物反应器(GE Healthcare Life Sciences,Pittsburgh,PA)及G-Rex(Wilson Wolf Manufacturing,Saint Paul,MN)。举例而言，分离的T细胞可在37℃下在5％CO2下在补充有200IU/mL IL-2及TransAct珠(Miltenyi Biotec,Germany)的TexMACS培养基(Miltenyi Biotec,Germany)中扩增。分离和扩增T细胞群体的方法描述于例如Levine等人,(2017)“Global Manufacturing of CAR T Cell Therapy”Mol Ther Methods ClinDev.4:92-101。
本文所述的产生CAR-T细胞的方法还可包括用编码CAR、氨基酸转运体或CAR和氨基酸转运体的一种或多种表达载体转染经扩增T细胞群体的步骤。适合的转染方法为本领域已知的并且包括例如磷酸钙转染、脂质体转染、聚合物转染、Fugene产物类转染(PromegaCorporation,Madison,WI)及电穿孔，例如使用CliniMACS电穿孔器(Miltenyi Biotec,Germany)的电穿孔。在本文所述的一些实施方案中，产生CAR-T细胞的方法可包括用一种或多种含转座子的质粒，例如编码睡美人转座子(Sleeping Beauty transposon)及CAR、氨基酸转运体或CAR和氨基酸转运体的质粒转染经扩增T细胞群体的步骤。
在本文所述的一些实施方案中，产生CAR-T细胞的方法可包括使用病毒(例如慢病毒、逆转录病毒、腺病毒或腺相关病毒)来用一种或多种编码CAR、氨基酸转运体或CAR和氨基酸转运体的表达载体转导经扩增T细胞群体的步骤。
经适当核苷酸构建体转染或转导的T细胞可在适合的培养基(例如补充有1mM L-精氨酸(Sigma-Aldrich，USA)的TexMACS培养基(Miltenyi Biotec,Germany))中进一步滋养并测定其活力。
可使用利用适合的抗体(例如，抗CD19、CD14、CD45、CD3、CD4及CD8抗体)的流式细胞术和荧光辅助细胞分选(FACS)方法确定T细胞纯度及辅助T细胞与杀伤T细胞的比率。可使用对CAR的抗原识别结构域具有特异性或对精氨酸转运体具有特异性的定制抗体来确定CAR和精氨酸转运蛋白的表达。
可使用L-精氨酸ELISA试剂盒(ALPCO，USA)来确定CAR-T胞内精氨酸含量。
本文所述的方法可包括基于所得细胞的数目收获用于下游应用的CAR-T细胞的步骤。举例而言，在一些实施方案中，用于收获的CAR-T细胞的量包括等效于以下的量：约1×103、约1×104、约1×105、约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约2×1010、约3×1010、约4×1010、约5×1010、约6×1010、约7×1010、约8×1010、约9×1010、约1×1011、约1×1012、约1×1013、约1×1014、约1×1015、约1×103至约3×1010、约1×105至约3×1010、约1×103至约1×105、约1×105至约1×1015、约1×105至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×105至约1×107、约1×1010至约9×1010或约1×109至约1×1011个细胞每千克对象体重。在一些实施方案中，用于收获的CAR-T细胞的量包括约1×105、约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约1×1011、约1×1012、约1×105至约1×1012、约1×105至约1×1010、约1×105至约1×107、约1×107至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×109至约1×1010、约1×106至约1×108、约1×107至约1×109或约1×109至约1×1011个细胞。
本文所述的方法可包括基于所得细胞的精氨酸含量收获用于下游应用的CAR-T细胞的步骤。举例而言，在一些实施方案中，用于收获的CAR-T细胞包括具有以下胞内精氨酸含量的细胞：约10μM、约20μM、约30μM、约40μM、约50μM、约60μM、约70μM、约80μM、约90μM、约100μM、约200μM、约300μM、约400μM、约500μM、约600μM、约700μM、约800μM、约900μM、约1000μM、约1500μM、约2000μM、约2500μM、约3000μM、约3500μM、约4000μM、约100μM至约4000μM、约100μM至约1000μM、约100μM至约2000μM、约1000μM至约2000μM、约1000μM至约3000μM、约1000μM至约4000μM、约500μM至约1000μM、约3000μM至约4000μM、约2000μM至约4000μM或约500μM至约2000μM精氨酸/细胞。
本文所述的CAR-T细胞可经遗传修饰以表达特异性CAR和/或氨基酸转运蛋白，例如精氨酸转运蛋白。在一些实施方案中，在编码CAR的表达盒之前、之后或同时将编码精氨酸转运体的表达盒(例如通过遗传工程改造)引入T细胞中。编码氨基酸转运体的核苷酸序列可与编码CAR的核苷酸序列并排置于同一载体上(例如CAR和转运体两者用一个载体)。这同时将CAR与转运体两者引入相同细胞中，使得每个所得精氨酸+CAR-T细胞均通过转运体而得到增强。在一些实施方案中，编码氨基酸转运体的核苷酸构建体置于与编码CAR的核苷酸构建体不同的载体上(例如CAR和转运体两者用分别的载体)。
本文所述的CAR-T细胞可通过用一种或多种编码CAR和/或氨基酸转运蛋白(例如精氨酸转运蛋白)的核酸序列的特定表达载体转染、电穿孔或转化T细胞而产生。本文所述的CAR-T细胞还可通过用一种或多种携带编码CAR和/或氨基酸转运蛋白(例如精氨酸转运蛋白)的核酸序列的特定表达载体的病毒转导T细胞而产生。分离的T细胞可用一种或多种逆转录病毒载体，例如用整合性γ-逆转录病毒载体或慢病毒载体进行转导。将γ-逆转录病毒载体或慢病毒载体随机整合至T细胞基因组中。还可用一个或多个整合性人工转座子转化分离的T细胞或用非整合性RNA分子对其进行转染。在一些实施方案中，分离的T细胞可用CRISPR/Cas-9表达构建体进行电穿孔并用一种或多种编码特异性CAR和/或氨基酸转运蛋白(例如精氨酸转运蛋白)的腺病毒或AAV载体进行转染。
举例而言，本文描述一种产生经遗传修饰的T细胞(例如CAR-T细胞)的方法，其包括用包含编码CAR的核酸序列和编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核酸序列的表达载体转染T细胞。本文还描述一种产生经遗传修饰的T细胞(例如CAR-T细胞)的方法，其包括用包含编码CAR的核酸序列的第一表达载体和包含编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核酸序列的第二表达载体转染T细胞。在一些实施方案中，转染可通过化学转染方法(例如，磷酸钙转染、脂质体转染、聚合物转染(例如，DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺(PEI)转染)或由Fugene研发的转染试剂(Promega Corporation,Madison,WI；例如，FuGENE HD或FuGENE6转染试剂))、非化学转染方法(例如电穿孔、细胞挤压(cell squeezing)、超音穿孔(sonoporation)、光学转染、原生质体融合、刺穿转染(impalefection)或流体动力递送(hydrodynamic delivery))、粒子类转染(基因枪转染、磁辅助转染)、核转染或热休克转染进行。在一些实施方案中，该方法包括同时或依次用第一表达载体和第二表达载体转染T细胞。
本文还描述一种产生经遗传修饰的T细胞(例如CAR-T细胞)的方法，其包括用携带编码CAR的核酸序列和编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核酸序列的病毒(例如腺病毒、AAV、慢病毒或逆转录病毒)转导T细胞。本文还描述一种产生经遗传修饰的T细胞(例如CAR-T细胞)的方法，其包括用携带编码CAR的核酸序列的第一病毒(例如腺病毒、腺相关病毒、慢病毒或逆转录病毒)转导T细胞并用携带编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核酸序列的第二病毒(例如腺病毒、腺相关病毒、慢病毒或逆转录病毒)转导T细胞。在一些实施方案中，该方法包括同时或依次用第一病毒和第二病毒转导T细胞。
在一些实施方案中，在产生经遗传修饰的T细胞的方法包括用表达载体转染T细胞或用病毒转导该细胞的情况下，该方法还可包括例如通过抗生素抗性选择转染子的步骤。
在一些实施方案中，在产生经遗传修饰的T细胞的方法包括依次用第一表达载体和第二表达载体转染T细胞的情况下，该方法还可包括例如通过抗生素抗性或适用于FACS的选择标志物(诸如荧光蛋白)的表达选择转染子的步骤。举例而言，此类方法可包括选择第一表达载体的转染子的步骤。此类方法可进一步包括选择第二表达载体的转染子的步骤。此类方法可进一步包括选择第一和第二表达载体的转染子的步骤。在一些实施方案中，在用第二表达载体进行转染之前选择第一表达载体的转染子。
在一些实施方案中，在产生经遗传修饰的T细胞的方法包括依次用第一病毒和第二病毒转导T细胞的情况下，该方法还可包括例如通过抗生素抗性或通过FACS选择经转导细胞的步骤。举例而言，此类方法可包括选择转导有第一病毒的细胞的步骤。此类方法可进一步包括选择转导有第二病毒的细胞的步骤。此类方法可进一步包括选择转导有第一和第二病毒的细胞的步骤。在一些实施方案中，在用第二病毒进行转导之前选择转导有第一病毒的细胞。
在一些实施方案中，一种产生经遗传修饰的T细胞的方法包括用病毒转导T细胞并用表达载体转染T细胞，其中转导和转染可以任一顺序进行(例如，先转导再转染，或先转染再转导)。举例而言，在一些实施方案中，一种产生经遗传修饰的T细胞的方法包括用携带编码CAR的核酸序列的病毒转导T细胞并用包含编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核酸序列的表达载体转染T细胞。在一些实施方案中，一种产生经遗传修饰的T细胞的方法包括用携带编码氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的核酸序列的病毒转导T细胞并用包含编码CAR的核酸序列的表达载体转染T细胞。
CAR和氨基酸转运体表达载体和转基因
本文所述的CAR-T核苷酸构建体(例如核苷酸表达载体和病毒核苷酸构建体)可包括标准组分，诸如但不限于启动子、Kozak序列、基因表达盒、自切割位点、选择标志物(例如，荧光蛋白表达盒或抗生素抗性盒)、反向串联重复序列及转录终止及polyA信号序列。
示例性启动子序列包括以下：
Figure BDA0003874665800000761
Figure BDA0003874665800000771
Figure BDA0003874665800000772
及
Figure BDA0003874665800000773
示例性转录终止和polyA信号序列包括以下：
Figure BDA0003874665800000774
Figure BDA0003874665800000781
Figure BDA0003874665800000782
及
Figure BDA0003874665800000783
示例性反向串联重复(TIR)序列包括以下pT4左侧反向重复(LIR)序列和右侧反向重复(RIR)序列：
Figure BDA0003874665800000784
Figure BDA0003874665800000785
及
Figure BDA0003874665800000786
示例性自切割位点核苷酸序列包括以下：
Figure BDA0003874665800000791
Figure BDA0003874665800000792
及
Figure BDA0003874665800000793
示例性选择标志物核苷酸序列包括以下荧光蛋白和抗生素抗性蛋白编码序列：
mEGFP(荧光蛋白编码序列)：
Figure BDA0003874665800000794
mEmerald(荧光蛋白编码序列)：
Figure BDA0003874665800000801
mCherry2(荧光蛋白编码序列)：
Figure BDA0003874665800000802
mScarlet-i(荧光蛋白编码序列)：
Figure BDA0003874665800000811
嘌呤霉素N-乙酰基转移酶(嘌呤霉素抗性编码序列)：
Figure BDA0003874665800000812
氨基糖苷3'-磷酸转移酶II(G418抗性编码序列)：
Figure BDA0003874665800000821
Figure BDA0003874665800000822
及
潮霉素B磷酸转移酶(潮霉素抗性编码序列)：
Figure BDA0003874665800000823
举例而言，本文所述的CAR-T表达载体可包括以下核苷酸组分：启动子序列(例如，EF1α、cumate、CAG、CMV、UbC或PGK启动子序列)、抗原特异性靶向序列、跨膜结构域序列(例如，CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或ICOS核苷酸序列)、跨膜结构域序列(例如，CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或ICOS跨膜结构域核苷酸序列)及胞内信号转导结构域序列(例如，FcRγ或CD3ζ胞内信号转导结构域序列)。本文所述的CAR-T表达载体可进一步包括以下一种或多种组分：一个或多个共刺激结构域序列(例如，4-1BB、CD27、CD28、CD40、CD40L、TLR2、DAP10、OX40、IL-2RB、IL-2RA、MYD88或ICOS共刺激结构域序列)、精氨酸转运体序列(例如，SLC7A1、SLC7A2、SLC7A3、SLC7A4、SLC7A6、SLC7A7、SLC3A2、SLC3A1、SLC7A9或SLC6A14核苷酸序列)及铰链或间隔结构域序列。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T表达载体包括启动子序列(例如，EF1α、cumate、CMV、CAG、UbC或PGK启动子序列)及精氨酸转运体序列(例如，SLC7A1、SLC7A2、SLC7A3、SLC7A4、SLC7A6、SLC7A7、SLC3A2、SLC3A1、SLC7A9或SLC6A14核苷酸序列)。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T表达载体还可包括以下中的一者或多者：抗生素选择盒(例如，氨苄青霉素、遗传霉素、博莱霉素、潮霉素、杀稻瘟菌素、嘌呤霉素或卡那霉素抗性盒)及复制起始序列(例如，pUC、pMB1、pBR322、ColE1、R6K、p15A、pSC101、pMSCV或F1序列)。本文所述的慢病毒及γ-逆转录病毒载体可包括以下中的一者或多者：5'长末端重复(LTR)序列(包括U3、R及U5序列中的一者或多者)、3'LTR序列(包括U3、R及U5序列中的一者或多者)、psi(Ψ)序列、反式激活应答(trans-activating response，TAR)元件序列、中央多聚嘌呤区(central polypurine tract，cPPT)序列、土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element，WPRE)序列及Rev应答元件(Rev response element，RRE)序列。本文所述的腺病毒及AAV载体还可包括反向末端重复(ITR)序列。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T表达载体可包括以下顺序的组分：启动子序列、Kozak序列、起始密码子、一个或多个编码目的蛋白的核苷酸序列(例如，CAR核苷酸序列和/或氨基酸转运体核苷酸序列(例如精氨酸转运体核苷酸序列))、2A自切割位点、一个或多个选择标志物核苷酸序列(例如抗生素抗性核苷酸序列和/或荧光蛋白核苷酸序列)、终止密码子及终止和poly A信号核苷酸序列。示例性CAR-T表达载体为pBCTex01G，其展示于图1中。pBCTex01G的核苷酸序列如下：
Figure BDA0003874665800000841
Figure BDA0003874665800000851
Figure BDA0003874665800000861
Figure BDA0003874665800000871
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T表达载体可包括以下顺序的组分：启动子序列、Kozak序列、起始密码子、一个或多个编码目的蛋白的核苷酸序列(例如，CAR核苷酸序列和/或氨基酸转运体核苷酸序列(例如精氨酸转运体核苷酸序列))、终止密码子及终止和polyA信号核苷酸序列。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T表达载体可包括以下顺序的组分：左侧反向重复序列、启动子序列(例如，EF-1α启动子序列)、Kozak序列、起始密码子、一个或多个编码目的蛋白的核苷酸序列(例如，CAR核苷酸序列和/或氨基酸转运体核苷酸序列(例如精氨酸转运体核苷酸序列))、终止密码子、终止和polyA信号核苷酸序列(例如bGH polyA信号序列)及右侧反向末端重复序列。示例性CAR-T表达载体为pBCTex02mini，其展示于图2中。pBCTex02mini的核苷酸序列如下：
Figure BDA0003874665800000881
Figure BDA0003874665800000891
Figure BDA0003874665800000901
本文所述的CAR-T整合性慢病毒衍生的转基因可包括以下核苷酸组分：5′长末端重复(LTR)序列(包括U3、R和U5序列中的一者或多者)、启动子序列(例如，EF1α、cumate、CAG、CMV、UbC或PGK启动子序列)、抗原特异性靶向序列、跨膜结构域序列(例如，CD4、CD8α、CD28、CD3ζ或ICOS跨膜结构域核苷酸序列)、胞内信号转导结构域序列(例如，FcRγ或CD3ζ胞内信号转导结构域序列)及3′LTR序列(包括U3、R及U5序列中的一者或多者)。本文所述的CAR-T整合性转基因可进一步包括以下一种或多种组分：psi(Ψ)序列、RRE序列、一个或多个共刺激结构域序列(例如，4-1BB，CD27，CD28，CD40，CD40L，TLR2，DAP10，OX40，IL-2RB，IL-2RA、MYD88或ICOS共刺激结构域序列)、精氨酸转运体序列(例如，SLC7A1，SLC7A2，SLC7A3，SLC7A4，SLC7A6，SLC7A7，SLC3A2，SLC3A1，SLC7A9或SLC6A14核苷酸序列)或铰链结构域序列或间隔结构域序列。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T整合性转基因包括以下核苷酸组分：5′长末端重复(LTR)序列(包括U3、R及U5序列中的一者或多者)、启动子序列(例如，EF1α、cumate、CMV、CAG、UbC或PGK启动子序列)、精氨酸转运体序列(例如，SLC7A1、SLC7A2，SLC7A3，SLC7A4，SLC7A6，SLC7A7，SLC3A2，SLC3A1，SLC7A9，或SLC6A14核苷酸序列)及3′LTR序列(包括U3、R及U5序列中的一者或多者)。本文所述的CAR-T整合性转基因可进一步包括psi(Ψ)序列和RRE序列中的一者或多者。
在一些实施方案中，本文所述的表达盒可包括在T细胞中起作用的真核启动子(例如，EF-1α、PGK、CAG或CMV启动子)、具有或不具有在先的Kozak序列的氨基酸转运体的编码序列及真核转录终止子和polyA信号(例如，SV40、hGH、bGH、rbHBB及rbGlob)。表达盒可嵌入于转座子(例如，睡美人、piggyBac、Tol2)中，使得能够在不使用慢病毒或逆转录病毒的情况下进行基因组整合。
还可在本文所述的表达载体中包含抗生素抗性基因(例如，嘌呤霉素N-乙酰基转移酶)、蛋白质标签(例如，6xHis(SEQ ID NO:278)、FLAG)和/或报道子(诸如但不限于荧光蛋白)，其与氨基酸转运体串联(例如，呈融合蛋白形式)或作为单独实体(例如通过IRES或2A裂解序列与氨基酸转运体编码序列分开)以促进下游选择。
在一些实施方案中，本文所述的氨基酸转运体表达载体可具有以下顺序的组分：IR/DR(SB)-PEF1α::Kozak-转运体-P2A-PAC-(G4S)3-mEGFP-BGHpolyA-DR/IR(SB)(“(G4S)3，如SEQ ID NO:30所公开)。
肿瘤微环境
癌细胞产生一种部分地通过自其环境消耗必需营养素而允许肿瘤生长和增殖的肿瘤微环境(TME)。TME的代谢状态通过癌细胞的代谢活性调节，该代谢活性改变微环境中诸如葡萄糖、脂质及氨基酸等营养素的可用性。例如，TME的特征在于低水平的氨基酸精氨酸。精氨酸耗竭部分地由肿瘤细胞自TME中摄取精氨酸造成。精氨酸耗竭还通过活化肿瘤细胞、局部巨噬细胞、粒细胞及骨髓来源的抑制性细胞中的精氨酸酶及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)来介导。
值得注意的是，天然的T细胞不能合成精氨酸。因此，T细胞依赖于外源性精氨酸的可持续供应。然而，T细胞的活化、存活及持久性受到TME中相对较低的精氨酸水平的制约。特别地，TME条件(包括较低的精氨酸水平)减弱了T细胞受体信号转导、糖酵解代谢、氨基酸吸收及代谢，导致肿瘤特异性T效应细胞的抗肿瘤效应子功能减弱。此外，相对于氨基酸摄取而言主要依赖于脂肪酸氧化的Treg细胞可在TME条件下存活并对肿瘤特异性T效应细胞发挥免疫抑制作用。因此，TME的条件抑制了T效应细胞分化并促进免疫抑制。当前可用的CAR-T细胞易受同样的TME逆境影响，因为其初始T细胞对应物导致CAR-T治疗实体瘤的效力较差。本发明提供了相较于本领域已知的CAR-T细胞，能够与癌细胞及MDSC竞争精氨酸并增加其在实体瘤中的存活、持久性及抗肿瘤活性的CAR-T细胞。
特别地，本发明提供具有增强的将氨基酸(尤其是精氨酸)自胞外空间转运至胞质溶胶中的能力的CAR-T细胞。举例而言，本文所述的CAR-T细胞经遗传工程改造以表达能够将氨基酸(例如精氨酸)转运至CAR-T细胞中的氨基酸转运体。本文所述的经遗传工程改造以表达氨基酸转运体的CAR-T细胞的特征在于其与未经遗传工程改造以表达氨基酸转运体的T细胞和CAR-T细胞相比具有更高的T细胞活化、持久性、增殖和/或抗肿瘤效力。另外，本文所述的经遗传工程改造以表达氨基酸转运体的CAR-T细胞的特征在于其与未经遗传工程改造以表达氨基酸转运体的T细胞和CAR-T细胞相比在TME中具有更高的存活率和持久性。
CAR-T细胞的促发
在一个方面中，本发明包括一种调节CAR-T细胞(例如，本文所述的CAR-T细胞)中的胞内精氨酸水平以影响有需要的患者的T细胞介导的免疫应答的方法。举例而言，在一些实施方案中，本发明包括将表达精氨酸转运体和CAR的CAR-T细胞暴露于包含精氨酸的培养基，其中将CAR-T细胞暴露于该培养基有效增加了CAR-T细胞的胞内精氨酸浓度。将表达精氨酸转运体和CAR的CAR-T细胞暴露于包含精氨酸的培养基中(例如在富含精氨酸的培养基中活体外培养此类CAR-T细胞)可导致相较于未暴露于该培养基的CAR-T细胞而言提高的CAR-T胞内精氨酸浓度。此类胞内富含精氨酸的CAR-T细胞可与癌细胞和MDSC竞争胞外精氨酸，例如在TME的胞外空间中的胞外精氨酸。因此，在一些实施方案中，本发明包括将表达精氨酸转运体和CAR的CAR-T细胞暴露于包含精氨酸的培养基，其中将CAR-T细胞暴露于培养基有效增加CAR-T存活、生存期及功能活性。举例而言，在一些实施方案中，将CAR-T细胞暴露于培养基有效增加CAR-T抗肿瘤活性(例如，将CAR-T细胞暴露于培养基有效增加实体瘤的TME中的CAR-T抗肿瘤活性)。因此，本文还描述了施用胞内富含精氨酸的CAR-T细胞的方法，其中该方法有效治疗血液恶性病以及实体瘤。
在一些实施方案中，可有效增加CAR-T细胞的胞内精氨酸浓度的培养基含有生理水平的L-精氨酸，包括但不限于0.2g/L或100μmol/L，或超生理水平的L-精氨酸，诸如但不限于100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L、600μmol/L、700μmol/L、800μmol/L、900μmol/L、1000μmol/L或大于1000μmol/L。培养基可为具有或不具有补充物的RPMI-1640。培养基可补充有血清和/或营养物，诸如但不限于胎牛血清、人AB血清或人血小板裂解物。经工程改造的T细胞可在富含L-精氨酸的培养基中培养和促发，直至胞内精氨酸累积至足够水平，诸如但不限于20μmol、30μmol、40μmol、50μmol、60μmol、70μmol、80μmol、90μmol、100μmol、200μmol、2000μmol或大于2000μmol。在一些实施方案中，CAR-T细胞可在富含L-精氨酸的培养基中培养和促发，直至胞内精氨酸累积至约10μM、约20μM、约30μM、约40μM、约50μM、约60μM、约70μM、约80μM、约90μM、约100μM、约200μM、约300μM、约400μM、约500μM、约600μM、约700μM、约800μM、约900μM、约1000μM、约1500μM、约2000μM、约2500μM、约3000μM、约3500μM、约4000μM、约100μM至约4000μM、约100μM至约1000μM、约100μM至约2000μM、约1000μM至约2000μM、约1000μM至约3000μM、约1000μM至约4000μM、约500μM至约1000μM、约3000μM至约4000μM、约2000μM至约4000μM或约500μM至约2000μM精氨酸/细胞。
试剂盒/药盒(kit)
本文还描述包括本文所述的药物组合物的试剂盒。举例而言，在一些实施方案中，包含表达精氨酸转运体和CAR的CAR-T细胞的药物组合物被包装为试剂盒。本文所述的试剂盒可包含向需要治疗的患者施用CAR-T细胞的说明。本文所述的试剂盒可包含用于促发CAR-T细胞以向需要治疗的患者施用的说明。本文所述的试剂盒可包含用于产生表达精氨酸转运体和CAR的CAR-T细胞的说明。在一些实施方案中，试剂盒可包含缓冲液(例如包含足以促发T细胞的水平的L-精氨酸的缓冲液)、试剂及用于产生、扩增、施用和/或促发CAR-T细胞的详细说明中的至少一者。
本文所述的用于产生CAR-T细胞的试剂盒可包含编码CAR的表达载体、编码精氨酸转运体的表达载体、编码CAR和精氨酸转运体的表达载体和/或编码转座酶的表达载体，以稳定整合CAR和/或精氨酸转运体。试剂盒可包含能够表达CAR和精氨酸转运体的多顺反子表达载体。
本文所述的用于产生CAR-T细胞的试剂盒可包含用于产生包括编码CAR、精氨酸转运体或CAR和精氨酸转运体的核苷酸构建体的病毒的试剂，包括培养基、细胞、转染试剂、缓冲液及核苷酸构建体。试剂盒可包含能够表达CAR和精氨酸转运体的多顺反子表达载体。
本文所述的试剂盒可包含用于测定CAR-T细胞中的CAR和/或精氨酸转运蛋白的表达的试剂。举例而言，本文所述的试剂盒可包含对精氨酸转运体具有特异性的抗体(例如多克隆抗体)。本文所述的试剂盒可包含对CAR的抗原识别结构域具有特异性的抗体(例如多克隆抗体)。
治疗癌症的方法
本公开的方法包括治疗、预防、遏制、逆转或改善疾病的方法。在本文所述的方法的一些实施方案中，疾病为癌症。在一些实施方案中，通过施用治疗有效剂量的本文所述的CAR-T细胞(例如，本文所述的精氨酸+CAR-T细胞)来达成治疗、预防、遏制、逆转或改善的方法。举例而言，本文描述一种治疗有需要的患者的实体瘤癌症的方法，其包括向患者施用有效量的本文所述的CAR-T细胞或包含本文所述的CAR-T细胞的药物组合物。本文还描述一种治疗有需要的患者的血液癌症的方法，其包括向患者施用有效量的本文所述的CAR-T细胞或包含本文所述的CAR-T细胞的药物组合物。本文还描述一种用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，其包括：向人类患者施用治疗有效量的包含表达精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞的组合物，或包含表达精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞的药物组合物。
免疫系统中的多个/种细胞的活性可通过精氨酸调节，例如巨噬细胞、B细胞、T细胞、自然杀伤细胞、中性粒细胞及树突状细胞。对胞内精氨酸的调节可影响T细胞介导的免疫应答。因此，本文描述一种调节有需要的患者的胞内精氨酸水平以影响T细胞介导的免疫应答的方法，其包括向患者施用有效量的本文所述的CAR-T细胞或包含本文所述的CAR-T细胞的药物组合物。
本文描述了用于治疗、预防、遏制、逆转或改善有需要的对象或患者的疾病的方法。在本文所述的实施方案中，患者和对象可为人、非人灵长类动物(诸如黑猩猩及其他猿和猴物种)；农畜，诸如牛、马、绵羊、山羊、猪；家畜，诸如兔、狗及猫；实验室动物，包括啮齿动物，诸如大鼠、小鼠及豚鼠，等等。对象或患者可为任何年龄。对象和患者可为例如老年人、成年人、青少年、青春期前青少年、儿童、幼儿或婴儿。
可用过表达精氨酸转运体的经工程改造的CAR-T细胞(包括过表达表1的精氨酸转运体的经工程改造的CAR-T细胞)治疗的疾病或病症的实例包括血液恶性病、实体瘤恶性病、转移性癌症、良性肿瘤、冷肿瘤、原发性肿瘤及继发性肿瘤。
在一些实施方案中，本文公开了一种用本文所述的经工程改造的CAR-T细胞(例如过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞，包括过表达表1的精氨酸转运体的经工程改造的CAR-T细胞)治疗癌症的方法。本文所述的治疗癌症的方法包括治疗例如以下中的任一者的方法：急性淋巴母细胞白血病、急性髓系白血病、肾上腺皮质癌、AIDS相关癌症、AIDS相关淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、神经母细胞瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑肿瘤，诸如小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚叶肿瘤(supratentorial primitive neuroectodermal tumors)、视觉通路及下丘脑神经胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)、原发灶不明癌(carcinoma of unknown primary origin)、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤、宫颈癌、儿童癌症、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、慢性骨髓增生病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、促结缔组织增生小型圆形细胞肿瘤、子宫内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、生殖细胞肿瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠类癌瘤、胃肠基质肿瘤、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、心脏癌症、肝细胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma)、下咽癌、眼内黑素瘤、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)、肾癌、喉癌、唇及口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌，诸如非小细胞肺癌及小细胞肺癌、淋巴瘤、白血病、巨球蛋白血症、骨的恶性纤维组织细胞瘤/骨肉瘤、髓母细胞瘤、黑素瘤、间皮瘤、原发不明鳞状细胞癌的颈部转移(metastatic squamous neck cancer with occult primary)、口腔癌、多发性内分泌瘤综合征、骨髓增生异常综合征、髓系白血病、鼻腔及鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/骨的恶性纤维组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖细胞肿瘤、胰腺癌、胰腺癌胰岛细胞、鼻旁窦及鼻腔癌、副甲状腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体星形细胞瘤、松果体胚细胞瘤(pinealgerminoma)、垂体腺瘤、胸膜肺母细胞瘤、浆细胞瘤形成、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌、肾盂及输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、皮肤癌梅克尔细胞(skin carcinoma merkel cell)、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、咽喉癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲状腺癌、(妊娠)滋养细胞肿瘤、原发位置未明癌症(cancer of unknown primary site)、尿道癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(
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macroglobulinemia)及威尔姆斯肿瘤(Wilms tumor)。
在一些实施方案中，在包括施用CAR-T细胞的步骤的用于治疗癌症的方法中，CAR的抗原特异性靶标区域可识别并结合细胞表面抗原。在一些实施方案中，CAR可用于治疗存在特异性单克隆抗体或能够产生特异性单克隆抗体的癌症的方法中。特别地，诸如神经母细胞瘤、小细胞肺癌、黑素瘤、卵巢癌、肾细胞癌、结肠癌、霍奇金淋巴瘤及儿童急性淋巴母细胞白血病等癌症具有被本文所述的CAR所识别的抗原。
本文所述的治疗方法可包括用过表达氨基酸转运体的经遗传工程改造的CAR-T细胞(包括过表达精氨酸转运体的经工程改造的CAR-T细胞)治疗对象(例如患有疾病的患者和/或患有病症的实验室动物)。该疾病可为血液恶性病。该疾病可为实体瘤恶性病。对象可为人类。可在疾病临床发作之前向对象提供治疗。可在疾病临床发作之后向对象提供治疗。
可在疾病的临床发作之后约1天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年或更久向对象提供治疗。可在疾病的临床发作之后约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、15小时、18小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年或更久向对象提供治疗。可在疾病的临床发作之后大于1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、15小时、18小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年或更久向对象提供治疗。可在疾病的临床发作之后小于1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、15小时、18小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年、5年或更久向对象提供治疗。治疗还可包括在临床试验中治疗人类。治疗可包括向对象施用药物组合物，诸如本公开通篇所述的药物组合物中的一者或多者。治疗可包括活体内调节内源性精氨酸的水平。
细胞组分的再引入方法为本领域已知的并且包括诸如美国专利第4,844,893及4,690,915号中所例示的程序。所用的经活化T细胞的量可根据活体外与活体内使用而变化，以及根据靶细胞的量及类型而变化。施用的量还将视患者的病症而变化并且应由从业者考虑所有恰当因素之后确定。
免疫检查点疗法与经工程改造的CAR-T细胞的组合
本文还公开了组合疗法及其使用方法，其包括施用与第二治疗剂组合的经工程改造的CAR-T细胞(或其药物组合物)，例如本文所公开的过表达氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的CAR-T细胞。举例而言，本文描述了一种治疗癌症的方法，其包括施用：经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞；及靶向免疫检查点(例如免疫检查点抑制剂)的免疫疗法。举例而言，本文描述了一种治疗癌症的方法，其包括施用：经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞；及阻断PD-1与PD-L1相互作用或阻断CTLA-4与B7-1/B7-2相互作用的药剂。举例而言，本文描述一种治疗癌症的方法，其包括施用：经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞；及抗PD-1、抗PD-L1或抗CTLA-4抗体。本文还描述一种治疗癌症的方法，其包括施用：经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞；及选自由以下组成的组的化合物：伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗及测米匹单抗。可向对象共同施用本公开的组合疗法以改善癌症治疗的结果。在一些实施方案中，同时或依次向需要治疗的患者施用本文所述的CAR-T细胞和免疫检查点抑制剂。
大部分免疫检查点分子为免疫球蛋白超家族的成员，且通常为防止不受控制的免疫应答的抑制性受体。适应性免疫应答受到此类检查点分子控制，所述检查点分子对于维持自身耐受且最小化免疫应答期间可能发生的附带组织损伤而言很重要。在一些实施方案中，靶向免疫检查点并促进CAR-T细胞的氨基酸摄取，尤其是精氨酸摄取的组合疗法可对罹患实体恶性病及血液恶性病的对象产生较佳结果。
免疫检查点为免疫系统固有的共刺激及抑制性成分。免疫检查点帮助维持自身耐受并调节生理免疫应答的持续时间及幅度，以在免疫系统对病原性感染作出应答时避免对组织造成损伤。当T细胞识别到肿瘤细胞所特有的抗原时，也可开始免疫应答。可通过免疫检查点蛋白来调节用于控制T细胞免疫应答的共刺激信号与抑制信号之间的平衡。在T细胞在胸腺中成熟及活化之后，T细胞可行进至炎症和损伤部位以执行修复功能。T细胞发挥功能可经由直接作用或通过募集免疫系统所涉及的细胞因子和膜配体而实现。T细胞成熟、活化、增殖及发挥功能所涉及的步骤可通过共刺激信号和抑制信号调节，即，通过免疫检查点蛋白调节。肿瘤可使充当免疫抗性机制的检查点蛋白功能失调。因此，检查点蛋白的调节剂的开发可具有治疗价值。免疫检查点分子的非限制性实例包括CTLA4和PD-1。这些检查点分子可在通路中的IL-2上游操作。检查点抑制剂包括阻断PD-1与PD-L1相互作用或阻断CTLA-4与B7-1/B7-2相互作用的药剂。特异性检查点抑制剂的实例包括以下抗体类药物：伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗及测米匹单抗。
在一些情形下，本公开提供一种用于治疗人类对象的病症的方法，其包括：(a)向该人类对象施用治疗有效量的包含异常表达一种或多种精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白的CAR-T细胞的组合物；和(b)向该人类对象施用第二治疗剂，其中该第二治疗剂为抗PD-1、抗PD-L1或抗CTLA-4抗体。第二治疗剂的施用可以在施用包含CAR-T细胞组合物的组合物之前、期间或之后进行。
PD1为属于CD28/CTLA-4家族并在经活化T细胞、B细胞、单核细胞、DC及自然杀伤(NK)细胞的表面上表达的抑制性受体。与CTLA-4相反，PD-1的主要作用为在对感染作出炎性反应时限制周边组织中T细胞的活性并限制自体免疫。慢性抗原暴露可导致持续高水平的PD-1表达，其可诱导抗原特异性T细胞的耗竭或无反应(anergy)状态，该状态可通过PD-1阻断而至少部分地逆转。在一些实施方案中，向罹患病症的对象共施用本公开的经工程改造的CAR-T细胞和抗PD-1或抗PD-L1抗体。
CTLA-4(细胞毒T淋巴细胞抗原4)也称为CD152(分化簇152)。CTLA-4与共刺激分子CD28共享序列同源性及配体(CD80/B7-1及CD86/B7-2)，但不同之处在于将抑制信号递送至表达CTLA-4的T细胞作为受体。CTLA-4对两种配体均具有高得多的总体亲和力并且当配体密度受到限制时在竞争结合时可能胜过CD28。CTLA-4表达于CD8+效应T细胞的表面上，并在未致敏(naive)T细胞及记忆T细胞两者的最初活化阶段发挥功能性作用。CTLA-4在T细胞活化的早期阶段期间经由对CD80和CD86的增加的亲和力来抵消CD28的活性。CTLA-4的主要功能包括下调辅助T细胞和增强调节性T细胞免疫抑制活性。
CTLA-4还可经由抑制IL-2产生和IL-2受体表达来下调免疫系统功能。CTLA-4可抑制IL-2的CD28依赖性上调，而抑制IL-2产生可引起细胞周期停滞。IL-2的降低及后续的细胞周期停滞可解释在CTLA-4存在下观测到的T细胞增殖减少。
其他组合疗法
如上文所指出的，本文还公开了组合疗法及其使用方法，其包括与第二治疗剂组合施用经工程改造的CAR-T细胞，例如本文所公开的过表达氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的CAR-T细胞，或其药物组合物。在一些实施方案中，同时或依次向需要治疗的患者施用本文所述的CAR-T细胞或其药物组合物，以及第二治疗剂。在一些实施方案中，该方法包括在施用治疗有效量的T细胞或包含治疗有效量的CAR-T细胞的组合物之前、期间或之后施用第二治疗剂。
举例而言，本文描述一种治疗癌症的方法，其包括施用：经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞；或其药物组合物，及DNA损伤反应抑制剂(DDRi)。在一些实施方案中，DDRi选自由以下组成的组：ATM抑制剂、PARP抑制剂、ATR抑制剂、WEE1抑制剂、Chk1抑制剂、Chk2抑制剂及DNA蛋白激酶抑制剂。在一些实施方案中，DDRi为选自由以下组成的组的PARP抑制剂：尼拉帕尼(niraparib)、奥拉帕尼(olaparib)、帕米帕里(pamiparib)、芦卡帕尼(rucaparib)(樟脑磺酸盐)、拉唑帕尼(talazoparib)、维利帕尼(veliparib)及其类似物。在一些实施方案中，DDRi为ATM/ATR抑制剂。在一些实施方案中，ATM/ATR抑制剂选自由以下组成的组：AZ20、AZD0156、AZD1390、AZD6738、BAY-1895344、EPT-46464、M3541、M4344、M6620(先前称为VE-922或VX-970)、NU6027、VE-821及其类似物。在一些实施方案中，PARPi为阿达替布、AZD2811或其类似物。在一些实施方案中，DDRi为WEE1抑制剂、Chk1抑制剂或Chk2抑制剂。在一些实施方案中，DDRi为选自由以下组成的组的DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)抑制剂：AZD7648、KU-0060648、NU7026、NU7441(KU-57788)、PI-103、PIK-75HCI、PP121、SF2523及其类似物。
在一些实施方案中，该方法包括施用经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞或其药物组合物；以及放射疗法、化学疗法、免疫疗法、激素疗法、血管生成抑制剂、干细胞移植疗法、骨髓移植疗法或靶向疗法。
放射疗法的实例包括外部束放射疗法、内部束放射疗法、近距离放射疗法及全身放射疗法。
化疗药剂的实例包括烷基化剂(例如六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、洛莫司汀(lomustine)、氮芥、美法仑、奥沙利铂、替莫唑胺、噻替派及曲贝替定)、亚硝基脲(nitrosureas)(例如卡莫司汀、洛莫司汀及链脲菌素)、抗代谢物(例如，阿扎胞苷、5-氟尿嘧啶(5-fu)、6-巯基嘌呤(6-mp)、卡培他滨(希罗达)、克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷(ara-c)、地西他滨、氟尿苷、氟达拉宾、吉西他滨(健择(gemzar))、羟基脲、甲胺喋呤、奈拉滨、培美曲塞(力比泰(alimta))、喷司他丁、普拉曲沙、硫鸟嘌呤及三氟胸苷/地匹福林(trifluridien/tipiracil))、蒽环霉素(例如，道诺霉素、小红莓(阿德力霉素)、小红莓脂质体、表柔比星、埃达霉素及伐柔比星)、非蒽环霉素抗肿瘤抗生素(例如博莱霉素、放线菌素、丝裂霉素-c及米托蒽醌)、拓朴异构酶抑制剂(例如，伊立替康、伊立替康脂质体、拓朴替康依托泊苷(vp-16)、米托蒽醌、替尼泊甙)、有丝分裂抑制剂，诸如紫杉烷及长春花生物碱(例如卡巴利他索(capazitaxel)、多西他赛、白蛋白结合-紫杉醇、紫杉醇、长春花生物碱，包括：长春碱、长春新碱、长春新碱脂质体、长春瑞宾)、皮质类固醇(例如普赖松、甲普赖松及地塞米松)、全反式视黄酸、三氧化二砷、天冬酰胺酶、艾日布尔、羟基脲、伊沙匹隆、米托坦、奥马他辛、聚乙二醇-天冬酰胺酶(pegasparaginase)、丙卡巴肼、罗米地辛及伏立诺他。
免疫治疗药剂的实例包括免疫检查点抑制剂、癌症治疗疫苗(例如人类乳头状瘤病毒疫苗、乙肝疫苗、西普亮塞-T(Sipuleucel-T)(Provenge)及塔里穆尼拉赫帕雷普韦克(Talimogene laherparepvec)(T-VEC))、单克隆抗体(例如阿仑单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)、伊匹单抗、奥伐木单抗(ofatumumab)、帕尼单抗、派姆单抗、兰尼单抗(ranibizumab)、利妥昔单抗及曲妥珠单抗)及免疫系统调节剂(例如白介素(例如IL-2、IL-7、IL-21及IL-12)、细胞因子(例如干扰素(IFN-α、IFN-β及IFN-γ)及G-CSF)、趋化因子(例如CCL3、CCL26及CXCL7)、免疫调节酰亚胺药物(例如沙利度胺及其类似物(来那度胺、泊利度胺(pomalidomide)及阿普司特(apremilast)))、咪喹莫特、卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin，BCG)、磷酸胞嘧啶-鸟嘌呤、寡脱氧核苷酸及葡聚糖)
激素疗法的实例包括阿比特龙
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阿那曲唑
Figure BDA0003874665800001012
依西美坦
Figure BDA0003874665800001013
氟维司群
Figure BDA0003874665800001014
来曲唑
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亮丙立德(
Figure BDA0003874665800001016
Lupron
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)、托瑞米芬
Figure BDA0003874665800001018
氟甲睾酮
Figure BDA0003874665800001019
乙酸甲地孕酮
Figure BDA00038746658000010110
比卡鲁胺
Figure BDA00038746658000010111
尼鲁米特
Figure BDA00038746658000010112
氟他米特
Figure BDA00038746658000010113
戈舍瑞林
Figure BDA00038746658000010114
地加瑞克
Figure BDA00038746658000010115
及它莫西芬
Figure BDA00038746658000010116
血管生成抑制剂的实例包括：阿西替尼
Figure BDA00038746658000010117
贝伐单抗
Figure BDA00038746658000010118
卡博替尼
Figure BDA00038746658000010119
依维莫司
Figure BDA00038746658000010120
来那度胺
Figure BDA0003874665800001021
甲磺酸乐伐替尼
Figure BDA0003874665800001022
帕唑帕尼
Figure BDA0003874665800001023
雷莫芦单抗
Figure BDA0003874665800001024
瑞戈非尼
Figure BDA0003874665800001025
索拉非尼
Figure BDA0003874665800001026
舒尼替尼
Figure BDA0003874665800001027
沙利度胺(Synovir、
Figure BDA0003874665800001028
)、凡德他尼
Figure BDA0003874665800001029
及Ziv-阿柏西普
Figure BDA00038746658000010210
靶向疗法的实例包括：EGFR抑制剂(例如，西妥昔单抗
Figure BDA00038746658000010211
及帕尼单抗
Figure BDA00038746658000010212
)、HER2抑制剂(例如，曲妥珠单抗
Figure BDA00038746658000010213
帕妥珠单抗
Figure BDA00038746658000010214
及曲妥珠单抗-美坦新偶联物
Figure BDA00038746658000010215
)、激酶抑制剂(例如，阿西替尼
Figure BDA00038746658000010216
伯舒替尼
Figure BDA00038746658000010217
卡博替尼
Figure BDA00038746658000010218
克卓替尼
Figure BDA00038746658000010219
达拉非尼
Figure BDA00038746658000010220
达沙替尼
Figure BDA00038746658000010221
埃罗替尼
Figure BDA00038746658000010222
依鲁替尼
Figure BDA00038746658000010223
加以域
Figure BDA00038746658000010224
拉帕替尼
Figure BDA00038746658000010225
尼罗替尼
Figure BDA00038746658000010226
帕唑帕尼
Figure BDA00038746658000010227
普纳替尼
Figure BDA00038746658000010228
瑞戈非尼
Figure BDA00038746658000010229
索拉非尼
Figure BDA00038746658000010230
舒尼替尼
Figure BDA00038746658000010231
曲美替尼
Figure BDA00038746658000010232
凡德他尼
Figure BDA00038746658000010233
及维罗非尼
Figure BDA00038746658000010234
)、mTOR抑制剂(例如，西罗莫司
Figure BDA00038746658000010235
依维莫司
Figure BDA00038746658000010236
及坦罗莫司
Figure BDA00038746658000010237
)、hedgehod通路抑制剂(例如，维莫德吉
Figure BDA00038746658000010238
)、免疫系统靶向抑制剂(例如，阿仑单抗
Figure BDA00038746658000010239
贝伦妥单抗维多汀
Figure BDA00038746658000010240
伊匹单抗
Figure BDA00038746658000010241
替伊莫单抗
Figure BDA00038746658000010242
阿托珠单抗(GazyvaTM)、奥伐木单抗
Figure BDA00038746658000010243
及利妥昔单抗
Figure BDA00038746658000010244
)、VEGF受体抑制剂(例如，贝伐单抗
Figure BDA00038746658000010245
及ziv-阿柏西普
Figure BDA00038746658000010246
)、雌激素靶向抑制剂(例如，阿那曲唑
Figure BDA00038746658000010247
依西美坦(阿诺新)、氟维司群
Figure BDA00038746658000010248
来曲唑
Figure BDA00038746658000010249
雷诺昔酚
Figure BDA00038746658000010250
它莫西芬柠檬酸盐及托瑞米芬柠檬酸盐
Figure BDA00038746658000010251
)、雄激素靶向抑制剂(例如，乙酸阿比特龙
Figure BDA00038746658000010252
比卡鲁胺
Figure BDA00038746658000010253
恩杂鲁胺
Figure BDA00038746658000010254
氟他米特及尼鲁米特
Figure BDA00038746658000010255
)、蛋白酶体靶向抑制剂(例如，硼替佐米
Figure BDA00038746658000010256
及卡非佐米(KyprolisTM))、组蛋白脱乙酰酶靶向抑制剂(例如，罗米地辛
Figure BDA00038746658000010257
及伏立诺他
Figure BDA00038746658000010258
)、叶酸靶向抑制剂(例如，普拉曲沙
Figure BDA00038746658000010259
)及视黄酸受体靶向抑制剂(例如，异维甲酸、维甲酸、阿曲汀(acitretin)
Figure BDA00038746658000010260
及贝瑟罗汀
Figure BDA00038746658000010261
)。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括施用经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞或其药物组合物；并对患者进行手术。在一些实施方案中，该方法包括施用经修饰以表达CAR和氨基酸转运体(例如精氨酸转运体)的经遗传修饰的T细胞或其药物组合物，其中该施用是向已经历抗癌手术、将经历抗癌手术或为抗癌手术的候选者的患者的施用。抗癌手术包括例如冷冻手术、激光手术、高热、光动力疗法、开放手术、微创手术。
药物组合物
本发明的药物组合物可为本文所述的任何过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞与其他化学组分(诸如载剂、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的组合。药物组合物有助于向生物体施用本文所述的经工程改造的CAR-T细胞。药物组合物可以治疗有效量作为药物组合物通过多种形式和途径施用，包括例如静脉内、皮下、肌内、经直肠、气雾剂、经肠胃外、经眼、经肺、经皮、经阴道、经眼、经鼻及局部施用。药物组合物可以局部或全身方式施用，例如经由将CAR-T细胞直接输注至器官中施用。
在一些实施方案中，本文所述的CAR-T药物组合物经静脉内施用，例如通过静脉内滴注施用。在一些实施方案中，经约20至约30分钟的过程施用一定剂量的CAR-T药物组合物。在一些实施方案中，经约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约35分钟、约40分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约10至约20分钟、约10至约30分钟、约10至约60分钟、约30至约60分钟、约40至约60分钟、约20至约30分钟、约20至约40分钟、约1小时至约2小时、约1小时至约3小时、约1小时至约4小时、约1小时至约5小时、约1小时至约6小时、约2小时至约3小时、约2小时至约4小时或约3小时至约6小时的过程施用一定剂量的CAR-T药物组合物。
在一些实施方案中，每天向对象施用一定剂量的CAR-T药物组合物持续1、2、3、4、5、6或7天。在一些实施方案中，每周向对象施用一定剂量的CAR-T药物组合物持续1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月、约1至约2周、约1至约3周、约2至约3周、约1至约4周、约2至约4周、约3至约4周、约1至约12周、约4至约12周、约6至约12周、约8至约12周、约10至约12周、约6至约24周、约8至约24周、约10至约24周、约12至约24周、约6至约18周、约8至约18周、约10至约18周、约12至约18周、约14至约18周或约16至约18周。在一些实施方案中，每2周向对象施用一定剂量的CAR-T药物组合物持续4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月、约1至约2周、约4至约12周、约6至约12周、约8至约12周、约10至约12周、约6至约24周、约8至约24周、约10至约24周、约12至约24周、约6至约18周、约8至约18周、约10至约18周、约12至约18周、约14至约18周或约16至约18周。
在实践本文所提供的治疗方法或用途时，向患有影响免疫系统的病症的对象施用呈药物组合物形式的治疗有效量的本文所述的过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞。在一些实施方案中，对象为哺乳动物，诸如人。治疗有效量可视疾病严重度、对象的年龄及相对健康状况、所用化合物的效力及其他因素而变化很大。
本文所述的药物组合物可包括活的遗传工程改造细胞，例如过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞。本文所述的CAR-T药物组合物可以离散剂量向对象施用。举例而言，本文所述的CAR-T细胞药物组合物可以以下的剂量施用：104至1011个细胞/千克对象体重、105至1011个细胞/千克体重、106至1011个细胞/千克体重、107至1011个细胞/千克体重、108至1011个细胞/千克体重、109至1011个细胞/千克体重、1010至1011个细胞/千克体重、104至1010个细胞/千克体重、105至1010个细胞/千克体重、106至1010个细胞/千克体重、107至1010个细胞/千克体重、108至1010个细胞/千克体重、109至1010个细胞/千克体重、104至109个细胞/千克体重、105至109个细胞/千克体重、106至109个细胞/千克体重、107至109个细胞/千克体重、108至109个细胞/千克体重、104至108个细胞/千克体重、105至108个细胞/千克体重、106至108个细胞/千克体重、107至108个细胞/千克体重、104至107个细胞/千克体重、105至107个细胞/千克体重、106至107个细胞/千克体重、104至106个细胞/千克体重、105至106个细胞/千克体重或104至105个细胞/千克体重。
在一些实施方案中，CAR-T细胞药物组合物的剂量包括约1×103、约1×104、约1×105、约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约2×1010、约3×1010、约4×1010、约5×1010、约6×1010、约7×1010、约8×1010、约9×1010、约1×1011、约1×1012、约1×1013、约1×1014、约1×1015、约1×103至约3×1010、约1×105至约3×1010、约1×103至约1×105、约1×105至约1×1015、约1×105至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×105至约1×107、约1×1010至约9x1010或约1×109至约1×1011个细胞/千克对象体重。
在一些实施方案中，CAR-T细胞药物组合物的剂量包括约1×105、约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约1×1011、约1×1012、约1×1013、约1×1014、约1×1015、约1×105至约1×1012、约1×105至约1×1010、约1×105至约1×107、约1×107至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×109至约1×1010、约1×106至约1×108、约1×107至约1×109、约1×105至约1×1014、约1×1010至约1×1015或约1×109至约1×1011个细胞。
在一些实施方案中，向患者施用增加剂量的CAR-T细胞药物组合物。举例而言，在一些实施方案中，治疗方法包括施用初始剂量的包括指定数目个细胞/千克对象体重的CAR-T药物组合物，和施用后续剂量的包括更多个CAR-T细胞/千克对象体重的CAR-T药物组合物(相比于初始剂量)。举例而言，在一些实施方案中，治疗方法包括施用初始剂量的包括约1×105个细胞/千克对象体重的CAR-T药物组合物，和施用一个或多个后续剂量的包括以下的CAR-T药物组合物：约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约2×1010、约3×1010、约4×1010、约5×1010、约6×1010、约7×1010、约8×1010、约9×1010、约1×1011、约1×1012、约1×1013、约1×1014、约1×1015、约1×106至约3×1010、约1×106至约3×1010、约1×106至约1×107、约1×106至约1×1015、约1×106至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×106至约1×108、约1×1010至约9×1010或约1×109至约1×1011个细胞/千克对象体重。
在一些实施方案中，CAR-T细胞药物组合物的初始剂量包括约1×103、约1×104、约1×105、约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约2×1010、约3×1010、约4×1010、约5×1010、约6×1010、约7×1010、约8×1010、约9×1010、约1×1011、约1×1012、约1×1013、约1×1014、约1×1015、约1×103至约3×1010、约1×105至约3×1010、约1×103至约1×105、约1×105至约1×1015、约1×105至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×105至约1×107、约1×1010至约9×1010或约1×109至约1×1011个细胞/千克对象体重。
在一些实施方案中，CAR-T细胞药物组合物的后续剂量包括约1×103、约1×104、约1×105、约1×106、约1×107、约1×108、约1×109、约1×1010、约2×1010、约3×1010、约4×1010、约5×1010、约6×1010、约7×1010、约8×1010、约9×1010、约1×1011、约1×1012、约1×1013、约1×1014、约1×1015、约1×103至约3×1010、约1×105至约3×1010、约1×103至约1×105、约1×105至约1×1015、约1×105至约1×1010、约1×107至约1×1012、约1×105至约1×107、约1×1010至约9×1010或约1×109至约1×1011个细胞/千克对象体重。
包含本文所述的CAR-T细胞的药物组合物还可以此等剂量施用多次。细胞可通过使用免疫疗法中通常已知的输注技术施用(参见例如，Rosenberg等人,New Eng.J.ofMed.319:1676,1988)。药学上可接受的赋形剂的非限制性实例可见于例如以下各者中：Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第十九版(Easton,Pa.:MackPublishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.及Lachman,L.编,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；及PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems,第七版(Lippincott Williams&Wilkins1999)，其各自以全文引用的方式并入本文中。
施用方法
可施用本文所述的含有过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞或过表达精氨酸转运体的功能性片段的CAR-T细胞的药物组合物以用于预防性和/或治疗性治疗。在治疗性应用中，可将组合物以足以治愈或至少部分地遏制疾病或病症的症状，或治愈、愈合、改善或减轻该病症的量施用于已患有该疾病或病症的对象。还可施用过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞，以减轻发生、感染该病症或使该病症恶化的可能性。对此用途有效的量可根据疾病或病症的严重程度及病程、先前治疗、对象的健康状态、体重及对药物的反应，以及治疗医师的诊断而变化。
本文所述的过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞可在疾病或病症出现之前、期间或之后施用，且施用含有过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞的组合物的时序可变化。举例而言，过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞可用作预防剂，并可连续向具有患上病症或疾病的倾向的对象施用，以便减小该疾病或病症出现的可能性。过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞可在症状发作期间或症状发作后尽快地施用于对象。可在症状发作后即刻、在症状发作的最初3小时内、在症状发作的最初6小时内、在症状发作的最初24小时内、在症状发作的48小时内或在自症状发作的任何时间段内开始施用过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞。初始施用可经由任何实际途径，诸如通过本文所述的任何途径使用本文所述的任何配制物。可在检测到或所怀疑的免疫疾病或病症发作之后在可行的情况下尽快施用过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞，并持续治疗免疫疾病所需的时长，诸如约24小时至约48小时、约48小时至约1周、约1周至约2周、约2周至约1个月、约1个月至约3个月。在一些实施方案中，可施用过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞持续至少24小时、至少48小时、至少72小时、至少96小时、至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月、至少12个月、至少1年、至少2年、至少3年、至少4年或至少5年。各对象的治疗时长可不同。
本文所述的CAR-T细胞的重组核苷酸序列的参考核苷酸序列的同源性可表示为序列同源性百分比。在一些实施方案中，参考序列的同源性为重组序列的约60％碱基至约100％碱基。在一些实施方案中，参考序列的同源性为重组序列的约60％碱基至约70％碱基、约60％碱基至约80％碱基、约60％碱基至约90％碱基、约60％碱基至约100％碱基、约70％碱基至约80％碱基、约70％碱基至约90％碱基、约70％碱基至约100％碱基、约80％碱基至约90％碱基、约80％碱基至约100％碱基或约90％碱基至约100％碱基。在一些实施方案中，参考序列的同源性为重组序列的约60％碱基、约70％碱基、约80％碱基、约90％碱基或约100％碱基。在一些实施方案中，序列的同源性为重组序列的至少约60％碱基、约70％碱基、约80％碱基或约90％碱基。在一些实施方案中，参考序列的同源性为重组序列的至多约70％碱基、约80％碱基、约90％碱基或约100％碱基。
实施例
通过以下实施例进一步说明本公开。提供实施例仅用于说明的目的而不欲视为以任何方式限制本公开的范围或内容。
实施例1.精氨酸转运体和精氨酸合成蛋白表达对T细胞存活的影响
在低环境精氨酸条件下分析T细胞存活，以评估外源性精氨酸转运蛋白和精氨酸合成蛋白的作用。使用脂质体(Lipofectamine)LTX(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)转染Jurkat E6-1细胞(一种自急性T细胞白血病患者的外周血分离出的人T淋巴细胞细胞株)。通过将阳离子氨基酸转运体2(CAT-2，缩写为“CAT”)和精氨基琥珀酸合成酶1(ASS-1，缩写为“ASS”)的编码序列克隆至紧接在P2A自切割序列和荧光蛋白之前且与自切割序列和荧光蛋白同框的pBCTex01G荧光表达载体中来产生表达构建体。用未经修饰的pBCTex01G(“对照”)或编码CAT或ASS的表达构建体转染细胞。所用的CAT-2核苷酸序列包括编码R369E取代突变和N381i插入突变的突变，且对应于SEQ ID NO:203。所用的ASS-1核苷酸序列如下：
Figure BDA0003874665800001081
Figure BDA0003874665800001091
在37℃和5％CO2下，在含有2mM L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺(Transgen Biotech，中国)、10％过滤的非热灭活胎牛血清(TransSerum EQ胎牛血清；Transgen Biotech，中国)、100U/mL青霉素及100μg/mL链霉素(Thermo Fisher Scientific，USA)的RPMI-1640培养基中培养Jurkat克隆E6-1细胞(ATCC,USA)。在达到约80％汇合之后，以2×105个细胞/毫升的密度将细胞重悬于新鲜的完全培养基中。将细胞接种至24孔培养平板中(500μL/孔，1×105个细胞/孔)。
用每个构建体(对照、CAT或ASS)转染4个细胞孔。使用1μL PLUS试剂将5μg各纯化质粒稀释于1mL OptiMEM还原的血清培养基(Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA)中。在室温下培育混合物15分钟，其后添加2.75μL LTX试剂以起始复合物形成。在室温下持续25分钟复合物形成。向各孔中添加100μL载体-脂质体复合物。在添加转染复合物之后，使平板摇晃2分钟。随后将细胞在37℃下在5％CO2下培育24小时。使用台盼蓝染色(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)计量细胞的活力(>90％)并通过在显微镜(Zeiss AxioObserver,Germany)下分析荧光蛋白表达来量测细胞的转染效率。
Jurkat E6-1细胞的转染效率为7％至14％(平均转染效率为10％)。在转染之后，在37℃下在5％CO2下使细胞在补充有或未补充400ng/mL BCT-100的相同培养基中培养72小时，以实现培养基中的精氨酸耗竭(图3A)。对各样品中存活的经转染细胞的总数目进行计数。使用Countess II FL(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)，采用默认设门参数对各孔进行细胞计数，仅对显示出荧光的细胞进行计数(图3B)。
计算经对照、CAT或ASS构建体转染的细胞在富含精氨酸和精氨酸耗竭培养基中培养72小时之后的细胞数目的百分比变化(图3C)。细胞数目的百分比变化计算为在培养72小时之后的经转染细胞数目减去初始经转染细胞数目，除以初始经转染细胞数目，全部再乘以100(100×((72小时之后的经转染细胞数目-经转染细胞数目)/(经转染细胞数目)))。由初始活细胞数目乘以估计的转染效率来估计初始经转染细胞数目(初始活细胞数目*转染效率)。图3C的各数据点代表经独立转染细胞的一个单独孔的细胞数目的估计变化百分比。用对照、CAT或ASS构建体转染细胞皆使得细胞数目在富含精氨酸培养基中72小时之后增加(图3C，左侧)。相比之下，用对照构建体转染细胞使得细胞数目在精氨酸耗竭培养基中72小时之后整体降低，但用CAT或ASS表达构建体转染细胞均使得细胞数目在精氨酸耗竭培养基中72小时之后整体增加(图3C，右侧)。
这些结果显示，促进细胞精氨酸摄取或胞内精氨酸合成的蛋白质的表达均增加了在低胞外精氨酸浓度条件下的T细胞的存活和增殖。
实施例2.精氨酸转运体对原代人T细胞存活的影响
在低环境精氨酸条件下分析原代人T细胞的存活，以便评定外源性精氨酸转运蛋白的作用。自StemExpress(California,USA)获取冷冻的原代人CD4+T细胞，解冻并以1×106个细胞/mL重悬于补充有GlutaMAX和HEPES(Thermo Fisher Scientific)的RPMI-1640中。在37℃下在5％CO2下用25μL/mL ImmunoCult人CD3/CD28 T细胞活化剂(STEMCELLTechnologies,Canada)及10ng/mL rIL-2(Solarbio,China)刺激细胞3天。收获经活化T细胞，以1×107个细胞/mL的密度重悬于Opti-MEM I还原血清培养基(Thermo FisherScientific)中。将一百微升细胞悬液转移至Fisherbrand Electroporation CuvettesPlus(Fisher Scientific,Pennsylvania,USA)并在ECM 830方波电穿孔系统(BTX,USA)中用编码作为对照的mNeonGreen(SEQ ID NO:274)或编码CAT(SEQ ID NO:203)的活体外转录mRNA对其进行电穿孔。所用的mNeonGreen核苷酸序列如下：
Figure BDA0003874665800001111
将经电穿孔的细胞转移至含有补充有GlutaMAX、HEPES及rIL-2的900μL RPMI-1640的6孔板的一个孔并培养过夜。使用台盼蓝染色(Thermo Fisher Scientific)计量细胞的活力(50-60％)并通过在显微镜(Zeiss Axio Observer)下分析荧光蛋白表达来量测细胞的转染效率。转染效率大于80％。将五百微升培养物等分至相邻空孔，并补充400ng/mlBCT-100，以实现精氨酸耗竭。将板在37℃下在5％CO2下培养过夜。再次如上所述确定细胞活力。
计算经对照或CAT mRNA转染的细胞在富含精氨酸和精氨酸耗竭培养基中培养24小时之后的细胞数目的百分比变化(图4)。细胞数目的百分比变化计算为在培养24小时之后的细胞数目减去初始细胞数目，除以初始细胞数目，全部再乘以100。
用对照或CAT mRNA转染原代人T细胞皆使得细胞数目在富含精氨酸培养基中24小时之后增加(图4，上图)。相比的下之，用GFP对照mRNA转染细胞使得细胞数目在精氨酸耗竭培养基中24小时之后净减少，但用CAT mRNA转染细胞使得细胞数目在精氨酸耗竭培养基中24小时之后整体增加(图4，下图)。
这些结果显示，促进细胞精氨酸摄取的精氨酸转运蛋白的表达增加了在低胞外精氨酸浓度条件下原代人T细胞的存活和增殖。
实施例3.产生CAR-T细胞
此实施例涵盖产生本文所述的CAR-T细胞的方法。
使用具有管组TS520和CD4/CD8微珠的CliniMACS Prodigy(Miltenyi Biotec,Germany)自全血分离出CD4+和CD8+T细胞。在37℃下在5％CO2下将约1×108个分离的细胞在补充有200IU/mL IL-2及TransAct beads(Miltenyi Biotec,Germany)的70mL TexMACS培养基中培养以扩增3天。
使用CliniMACS电穿孔器(Miltenyi Biotec,Germany)用编码CAR、精氨酸转运体或CAR和精氨酸转运体的表达载体转染经扩增细胞。经扩增细胞还可经编码CAR的第一表达载体和编码精氨酸转运体的第二表达载体共转染。一经转染，在补充有1mM L-精氨酸(Sigma-Aldrich,USA)的TexMACS培养基(Miltenyi Biotec,Germany)中培养细胞。使用存活/死亡细胞双重染色试剂盒(Sigma-Aldrich,USA)对细胞每日取样，以计量细胞数目和活力。每日添加新鲜培养基以维持2×105至1×106个细胞/毫升的细胞密度。每隔一天置换一半培养基。
使用BD FACSAria III流式细胞仪及经标记抗CD19、CD14、CD45、CD3、CD4及CD8抗体(BD Biosciences,USA)确定T细胞纯度及辅助T细胞与杀伤T细胞的比率。使用分别对CAR的抗原识别结构域和精氨酸转运体具有特异性的定制抗体(GenScript,USA)来确定CAR和精氨酸转运蛋白表达。
通过收集约1×105个CAR-T细胞的等分试样确定胞内精氨酸水平。沉淀细胞并在10mL PBS中洗涤两次，随后于100μL RIPA缓冲液中裂解。使用L-精氨酸ELISA试剂盒(ALPCO,USA)确定细胞裂解物的精氨酸水平。相对于裂解的细胞数目对总精氨酸水平进行归一化。
一旦获得约1×105至约3×1010个细胞/千克对象体重的细胞，就收获细胞用于下游应用，其中细胞具有约100μM至约4000μM/细胞的胞内精氨酸水平。
实施例4.过表达精氨酸转运体的CAR-T细胞的活体外滋养及促发
此实施例涵盖一种用于促发表达精氨酸转运蛋白的经遗传修饰的CAR-T细胞的治疗的方法。
在含有或补充有L-精氨酸的培养基中培养经遗传修饰以表达精氨酸转运体和CAR的CAR-T细胞。此培养基含有0.2g/L至1000μmol/L的L-精氨酸。将经工程改造的T细胞在L-精氨酸培养基中培养，直至胞内精氨酸水平在100μmol与4000μmol之间。
除非另外规定，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。
在通篇说明书中，在组合物和试剂盒被描述为具有、包括或包含特定组分的情况下，或在过程和方法被描述为具有、包括或包含特定步骤的情况下，另外预期存在基本上由所列组分组成或由所列组分组成的本发明的组合物和试剂盒，且存在基本上由所列过程步骤组成或由所列过程步骤组成的根据本发明的过程和方法。
在其中称一种要素或组分包含于所列要素或组分的列表中和/或选自所列要素或组分的列表的申请中，应理解，该要素或组分可为所列要素或组分中的任一者，或者该要素或组分可选自由所列要素或组分中的两者或更多者组成的组。
此外，应理解，本文所描述的组合物或方法中的要素和/或特征可以各种方式组合而不背离本发明的精神及范围，无论在本文中为明确或隐含的。举例而言，除非上下文另外理解，否则当提及特定化合物时，该化合物可用于本发明组合物的多种实施方案和/或本发明的方法中。换言之，在本申请内，实施方案已以使得申请能够得到简明书写及绘制的方式描述和描绘，但希望且应了解，可在不脱离本教导和本发明的情况下以各种方式组合或分离实施方案。举例而言，应了解，本文中所描述和描绘的所有特征可适用于本文中所描述和描绘的本发明的所有方面。
除非上下文不适当，否则本公开中所用的无数量词修饰的名词是指一个/种或多于一个/种(即，至少一个)所述名词。举例而言，“要素”意指一个/种或多于一个/种要素。
除非另外指示，否则本公开中使用的术语“和/或”意指“和”或“或”任一者。
应理解，除非自上下文和用途另有理解，否则表述“……中的至少一者”包括该表述所针对的列举对象中的单独的每一者以及列举对象中的两者或更多者的各种组合。除非自上下文另有理解，否则表述“和/或”结合三个或更多个列举对象时应理解为具有相同含义。
除非另外特别说明或自上下文另有理解，否则术语“包括/包含(include/includes/including)”、“具有(have/has/having)”、“含有(contain/contains/containing)”的使用包括其语法等效物，通常应理解为开放式及非限制性的，例如不排除其他未列举的元素或步骤。
在数值之前使用术语“约”时，除非另外特别说明，否则本公开还包括该特定数值本身。
除非另有说明或自上下文另有理解，否则若将例如聚合物的分子量提供为绝对值，则该分子量应理解为平均分子量。
应理解步骤顺序或用于执行某些行动的顺序并不重要，只要本发明保持可操作即可。此外，可同时进行两个或超过两个步骤或动作。
在本说明书中的各种位置，取代基以群组或范围方式公开。特别地，意图本说明书包括所述群组和范围的成员中的各个及每一个独立的组合。举例而言，0至40范围内的整数特别地意图单独地公开0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39及40，1至20范围内的整数特别地意图单独地公开1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19及20。
除非主张，否则本文中任何及所有实例或示例性语言(例如“诸如”或“包括/包含”)的使用仅意图更好地说明本发明而不对本发明的范围造成限制。说明书中的语言不应理解为表示任何未主张的要素为实施本发明必不可少的。
一般而言，除非另有规定，否则指定百分比的组合物以重量计。此外，若变量未附定义，则以该变量的先前定义为准。
以引用方式并入
本文提及的所有科学文章、出版物及专利文献均以全文引用的方式并入本文中用于所有目的，如同各单独出版物或专利特别地且个别地以引用的方式并入一般。在存在冲突的情况下，以本申请(包括本文中的任何定义)为准。
等同
尽管已论述本发明的具体实施方案，但以上说明书为说明性的而非限制性的。本领域技术人员在审阅本说明书时将显而易知本发明的许多变化形式。本发明的完整范围应参照权利要求及其等同物的完整范围以及说明书及其变化形式来确定。
除非另外指示，否则本说明书和权利要求中所用的表示成分数量、反应条件等的所有数字应理解为在所有情况下皆经术语“约”修饰。因此，除非相反指示，否则本说明书及所附权利要求中所阐述的数值参数为近似值，其可根据本发明设法获得的期望特性而变化。
Figure BDA0003874665800001161
Figure BDA0003874665800001171
Figure BDA0003874665800001181
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Figure BDA0003874665800001291
Figure BDA0003874665800001301
Figure BDA0003874665800001311
Figure BDA0003874665800001321
Figure BDA0003874665800001331
Figure BDA0003874665800001341
Figure BDA0003874665800001351
Figure BDA0003874665800001361
Figure BDA0003874665800001371
Figure BDA0003874665800001381
Figure BDA0003874665800001391
Figure BDA0003874665800001401
Figure BDA0003874665800001411
Figure BDA0003874665800001421
Figure BDA0003874665800001431
Figure BDA0003874665800001441
Figure BDA0003874665800001451
序列表
<110> 天丽国际有限公司
<120> 用于调节免疫细胞中精氨酸水平的方法和组合物
<130> SKP-001WO
<140>
<141>
<150> 62/979,805
<151> 2020-02-21
<160> 278
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 348
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD33抗原识别结构域
<400> 1
gaagtgcagc tggtgcagag cggagcagaa gtgaagaagc ccggaagcag cgtgaaggtg 60
tcttgcaagg ccagcggcta caccatcacc gacagcaaca tccattgggt ccggcaggct 120
ccaggacagt ctctggagtg gatcggctac atctacccct acaacggcgg caccgactac 180
aaccagaagt tcaagaaccg ggccaccctg accgtggata accccaccaa caccgcctac 240
atggagctga gcagcctgag aagcgaggac accgccttct actattgcgt gaacggcaac 300
ccttggctgg cctattgggg acagggaaca ctggtgaccg tgtcctct 348
<210> 2
<211> 342
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD33抗原识别结构域
<400> 2
gacatccagc tgacccagtc tcctagcacc ctgagcgcta gcgtgggaga tagagtgacc 60
atcacttgca gagccagcga gagcctggac aactacggca tccggttcct gacttggttc 120
cagcagaaac ccggcaaggc ccctaaactg ctgatgtacg ccgcctctaa ccagggaagc 180
ggagtgccta gcagattcag cggcagcgga agcggaaccg agttcaccct gaccatcagc 240
tctctgcagc cagacgactt cgccacctac tactgccagc agaccaagga ggtgccttgg 300
agcttcggcc agggaaccaa ggtggaagtg aagcggacag tg 342
<210> 3
<211> 116
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: 抗CD33重链可变结构域序列
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Ser
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Asn Gly Asn Pro Trp Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 114
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: 抗CD33轻链可变结构域序列
<400> 4
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Leu Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Arg Phe Leu Thr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Met Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Lys
85 90 95
Glu Val Pro Trp Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys Arg
100 105 110
Thr Val
<210> 5
<211> 135
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD8α衍生的铰链区序列
<400> 5
accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60
tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120
gacttcgcct gtgat 135
<210> 6
<211> 144
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD8α衍生的铰链区序列
<400> 6
gcgaagccca ccacgacgcc agcgccgcga ccaccaacac cggcgcccac catcgcgtcg 60
cagcccctgt ccctgcgccc agaggcgtgc cggccagcgg cggggggcgc agtgcacacg 120
agggggctgg acttcgcctg tgat 144
<210> 7
<211> 45
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD8α衍生的铰链区序列
<400> 7
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 8
<211> 48
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD8α衍生的铰链区序列
<400> 8
Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
1 5 10 15
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
20 25 30
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 9
<211> 117
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD28衍生的铰链区序列
<400> 9
attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc 60
catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagccc 117
<210> 10
<211> 39
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD28衍生的铰链区序列
<400> 10
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
35
<210> 11
<211> 45
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG1衍生的铰链区序列
<400> 11
gagcccaaga gctgcgacaa gacccacacc tgccccccct gcccc 45
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG1衍生的铰链区序列
<400> 12
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 13
<211> 117
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG2衍生的铰链区序列
<400> 13
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catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagccc 117
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG2衍生的铰链区序列
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Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 15
<211> 186
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG3衍生的铰链区序列
<400> 15
gagctcaaaa ccccacttgg tgacacaact cacacatgcc cacggtgccc agagcccaaa 60
tcttgtgaca cacctccccc gtgcccacgg tgcccagagc ccaaatcttg tgacacacct 120
cccccatgcc cacggtgccc agagcccaaa tcttgtgaca cacctccccc gtgcccaagg 180
tgccca 186
<210> 16
<211> 62
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG3衍生的铰链区序列
<400> 16
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
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Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
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<211> 36
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 17
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<210> 18
<211> 39
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 18
gagtccaaat atggtccccc atgcccatca tgcccagca 39
<210> 19
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 19
gggcagcccc gagagccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccaggagga gatgaccaag 60
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 120
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 180
gacggctcct tcttcctcta cagcaggctc accgtggaca agagcaggtg gcaggagggg 240
aatgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac acagaagagc 300
ctctccctgt ctctgggtaa a 321
<210> 20
<211> 387
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 20
gagagcaagt acggcccccc ctgccccccc tgccccggcg gcggcagcag cggcggcggc 60
agcggcggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccccagcca ggaggagatg 120
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gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 240
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc agactgaccg tggacaagag cagatggcag 300
gagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 360
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<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 21
gagagcaagt acggcccccc ctgccccagc tgccccgccc ccgagttcga gggcggcccc 60
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 120
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccag gaggaccccg aggtgcagtt caactggtac 180
gtggacggcg tggaggtgca ccaggccaag accaagccca gagaggagca gttcaacagc 240
acctacagag tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 300
tacaagtgca aggtgagcaa caagggcctg cccagcagca tcgagaagac catcagcaag 360
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccccagcca ggaggagatg 420
accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 480
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 540
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc agactgaccg tggacaagag cagatggcag 600
gagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 660
aagagcctga gcctgagcct gggcaag 687
<210> 22
<211> 687
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 22
gagagcaagt acggcccccc ctgccccccc tgccccgccc ccgagttcga gggcggcccc 60
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagcag aacccccgag 120
gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccag gaggaccccg aggtgcagtt caactggtac 180
gtggacggcg tggaggtgca ccaggccaag accaagccca gagaggagca gttcaacagc 240
acctacagag tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 300
tacaagtgca aggtgagcaa caagggcctg cccagcagca tcgagaagac catcagcaag 360
gccaagggcc agcccagaga gccccaggtg tacaccctgc cccccagcca ggaggagatg 420
accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 480
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 540
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc agactgaccg tggacaagag cagatggcag 600
gagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 660
aagagcctga gcctgagcct gggcaag 687
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 23
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 24
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 25
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
100 105
<210> 26
<211> 129
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 26
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
20 25 30
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
35 40 45
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
50 55 60
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
65 70 75 80
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
85 90 95
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
100 105 110
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
115 120 125
Lys
<210> 27
<211> 229
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 27
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Gln Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 28
<211> 229
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: IgG4衍生的铰链区序列
<400> 28
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Gln Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 29
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的寡核苷酸
<400> 29
ggcggcggag gatctggcgg aggtggaagc ggaggcggtg gaagc 45
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的肽
<400> 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 31
<400> 31
000
<210> 32
<400> 32
000
<210> 33
<400> 33
000
<210> 34
<400> 34
000
<210> 35
<400> 35
000
<210> 36
<400> 36
000
<210> 37
<400> 37
000
<210> 38
<400> 38
000
<210> 39
<400> 39
000
<210> 40
<400> 40
000
<210> 41
<400> 41
000
<210> 42
<211> 66
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
atggccctga ttgtgctggg gggcgtcgcc ggcctcctgc ttttcattgg gctaggcatc 60
ttcttc 66
<210> 43
<400> 43
000
<210> 44
<400> 44
000
<210> 45
<400> 45
000
<210> 46
<400> 46
000
<210> 47
<400> 47
000
<210> 48
<400> 48
000
<210> 49
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人
<400> 49
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr
20
<210> 50
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人
<400> 50
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
20
<210> 51
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人
<400> 51
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 52
<211> 63
<212> DNA
<213> 智人
<400> 52
atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60
acc 63
<210> 53
<211> 69
<212> DNA
<213> 智人
<400> 53
atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60
accctttac 69
<210> 54
<211> 72
<212> DNA
<213> 智人
<400> 54
atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60
accctttact gc 72
<210> 55
<400> 55
000
<210> 56
<400> 56
000
<210> 57
<400> 57
000
<210> 58
<400> 58
000
<210> 59
<400> 59
000
<210> 60
<400> 60
000
<210> 61
<400> 61
000
<210> 62
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人
<400> 62
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 63
<211> 81
<212> DNA
<213> 智人
<400> 63
ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg 60
gcctttatta ttttctgggt g 81
<210> 64
<400> 64
000
<210> 65
<400> 65
000
<210> 66
<400> 66
000
<210> 67
<400> 67
000
<210> 68
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人
<400> 68
Leu Cys Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu
1 5 10 15
Thr Ala Leu Phe Leu
20
<210> 69
<211> 63
<212> DNA
<213> 智人
<400> 69
ctctgctacc tgctggatgg aatcctcttc atctatggtg tcattctcac tgccttgttc 60
ctg 63
<210> 70
<400> 70
000
<210> 71
<211> 199
<212> PRT
<213> 智人
<400> 71
Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu Phe Cys Leu Arg Ile Lys
1 5 10 15
Val Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile
20 25 30
Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val
35 40 45
Gln Gln Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp
50 55 60
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu
65 70 75 80
Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95
Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser
100 105 110
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu
115 120 125
His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro
130 135 140
Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu
145 150 155 160
Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro
165 170 175
Asn Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser
180 185 190
Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu
195
<210> 72
<211> 179
<212> PRT
<213> 智人
<400> 72
Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile Phe His Asn Gly
1 5 10 15
Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val Gln Gln Phe Lys
20 25 30
Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp Leu Thr Lys Thr
35 40 45
Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu Lys Phe Cys His
50 55 60
Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu Tyr Asn Leu Asp
65 70 75 80
His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser Ile Phe Asp Pro
85 90 95
Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu His Ile Tyr Glu
100 105 110
Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro Ile Gly Cys Ala
115 120 125
Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu Ile Cys Trp Leu
130 135 140
Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr
145 150 155 160
Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg Leu Thr Asp
165 170 175
Val Thr Leu
<210> 73
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人
<400> 73
Phe Trp Leu Pro Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu
1 5 10 15
Gly Cys Ile Leu Ile
20
<210> 74
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人
<400> 74
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 75
<211> 336
<212> DNA
<213> 智人
<400> 75
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336
<210> 76
<400> 76
000
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<400> 78
000
<210> 79
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<400> 79
Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg
1 5 10 15
Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys
20 25 30
Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys
35 40
<210> 80
<211> 112
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD3ζ序列
<400> 80
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 81
<400> 81
000
<210> 82
<400> 82
000
<210> 83
<400> 83
000
<210> 84
<211> 27
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: 4-1BB跨膜区序列
<400> 84
Ile Ile Ser Phe Phe Leu Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu
1 5 10 15
Leu Phe Phe Leu Thr Leu Arg Phe Ser Val Val
20 25
<210> 85
<211> 81
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: 4-1BB跨膜区序列
<400> 85
atcatctcct tctttcttgc gctgacgtcg actgcgttgc tcttcctgct gttcttcctc 60
acgctccgtt tctctgttgt t 81
<210> 86
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<400> 86
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 87
<211> 126
<212> DNA
<213> 智人
<400> 87
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 88
<400> 88
000
<210> 89
<400> 89
000
<210> 90
<400> 90
000
<210> 91
<211> 48
<212> PRT
<213> 智人
<400> 91
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15
Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45
<210> 92
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人
<400> 92
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 93
<211> 41
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD28共刺激结构域
<400> 93
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 94
<211> 123
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD28共刺激结构域
<400> 94
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 95
<211> 123
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CD28共刺激结构域
<400> 95
aggagtaaga ggagcagggg cggccacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 96
<400> 96
000
<210> 97
<400> 97
000
<210> 98
<400> 98
000
<210> 99
<400> 99
000
<210> 100
<400> 100
000
<210> 101
<400> 101
000
<210> 102
<400> 102
000
<210> 103
<400> 103
000
<210> 104
<400> 104
000
<210> 105
<400> 105
000
<210> 106
<400> 106
000
<210> 107
<400> 107
000
<210> 108
<400> 108
000
<210> 109
<211> 62
<212> PRT
<213> 智人
<400> 109
Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn Lys Ala Pro His Pro Lys Gln
1 5 10 15
Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr
20 25 30
Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln
35 40 45
Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser Val Gln Glu Arg Gln
50 55 60
<210> 110
<400> 110
000
<210> 111
<400> 111
000
<210> 112
<211> 22
<212> PRT
<213> 智人
<400> 112
Met Ile Glu Thr Tyr Asn Gln Thr Ser Pro Arg Ser Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Leu Pro Ile Ser Met Lys
20
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<400> 113
000
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<400> 114
000
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<400> 115
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<400> 116
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<400> 117
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<400> 118
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<400> 119
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<400> 120
000
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<400> 121
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<400> 122
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<400> 124
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<400> 126
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<400> 128
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<400> 129
000
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 130
His Arg Phe His Gly Leu Trp Tyr Met Lys Met Met Trp Ala Trp Leu
1 5 10 15
Gln Ala Lys Arg Lys Pro Arg Lys Ala Pro Ser Arg Asn Ile Cys Tyr
20 25 30
Asp Ala Phe Val Ser Tyr Ser Glu Arg Asp Ala Tyr Trp Val Glu Asn
35 40 45
Leu Met Val Gln Glu Leu Glu Asn Phe Asn Pro Pro Phe Lys Leu Cys
50 55 60
Leu His Lys Arg Asp Phe Ile Pro Gly Lys Trp Ile Ile Asp Asn Ile
65 70 75 80
Ile Asp Ser Ile Glu Lys Ser His Lys Thr Val Phe Val Leu Ser Glu
85 90 95
Asn Phe Val Lys Glu Trp Cys Lys Tyr Glu Leu Asp Phe Ser His Phe
100 105 110
Arg Leu Phe Asp Glu Asn Asn Asp Ala Ala Ile Leu Ile Leu Leu Glu
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Lys Ala Ile Pro Gln Arg Phe Cys Lys Leu Arg Lys
130 135 140
Ile Met Asn Thr Lys Thr Tyr Leu Glu Trp Pro Met Asp Glu Ala Gln
145 150 155 160
Arg Glu Gly Phe Trp Val Asn Leu Arg Ala Ala Ile Lys Ser
165 170
<210> 131
<211> 145
<212> PRT
<213> 智人
<400> 131
Cys Tyr Asp Ala Phe Val Ser Tyr Ser Glu Arg Asp Ala Tyr Trp Val
1 5 10 15
Glu Asn Leu Met Val Gln Glu Leu Glu Asn Phe Asn Pro Pro Phe Lys
20 25 30
Leu Cys Leu His Lys Arg Asp Phe Ile Pro Gly Lys Trp Ile Ile Asp
35 40 45
Asn Ile Ile Asp Ser Ile Glu Lys Ser His Lys Thr Val Phe Val Leu
50 55 60
Ser Glu Asn Phe Val Lys Ser Glu Trp Cys Lys Tyr Glu Leu Asp Phe
65 70 75 80
Ser His Phe Arg Leu Phe Asp Glu Asn Asn Asp Ala Ala Ile Leu Ile
85 90 95
Leu Leu Glu Pro Ile Glu Lys Lys Ala Ile Pro Gln Arg Phe Cys Lys
100 105 110
Leu Arg Lys Ile Met Asn Thr Lys Thr Tyr Leu Glu Trp Pro Met Asp
115 120 125
Glu Ala Gln Arg Glu Gly Phe Trp Val Asn Leu Arg Ala Ala Ile Lys
130 135 140
Ser
145
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<400> 132
000
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<400> 133
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<400> 136
000
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 137
Cys Ala Arg Pro Arg Arg Ser Pro Ala Gln Asp Gly Lys Val Tyr Ile
1 5 10 15
Asn Met Pro Gly Arg Gly
20
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<400> 138
000
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<400> 139
000
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<400> 140
000
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<211> 42
<212> PRT
<213> 智人
<400> 141
Ala Leu Tyr Leu Leu Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His
1 5 10 15
Lys Pro Pro Gly Gly Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln
20 25 30
Ala Asp Ala His Ser Thr Leu Ala Lys Ile
35 40
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 142
gccctgtacc tgctccggag ggaccagagg ctgccccccg atgcccacaa gccccctggg 60
ggaggcagtt tccggacccc catccaagag gagcaggccg acgcccactc caccctggcc 120
aagatc 126
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 143
Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Tyr His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr
1 5 10 15
Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg Leu Thr Asp
20 25 30
Val Thr Leu
35
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 144
acaaaaaaga agtattcatc cagtgtgcac gaccctaacg gtgaatacat gttcatgaga 60
gcagtgaaca cagccaaaaa atctagactc acagatgtga cccta 105
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<400> 145
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 152
Asn Cys Arg Asn Thr Gly Pro Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn
1 5 10 15
Thr Pro Asp Pro Ser Lys Phe Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly
20 25 30
Gly Asp Val Gln Lys Trp Leu Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe
35 40 45
Ser Pro Gly Gly Leu Ala Pro Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu
50 55 60
Arg Asp Lys Val Thr Gln Leu Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu
65 70 75 80
Pro Ala Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn
85 90 95
Gln Gly Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala
100 105 110
Cys Gln Val Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp
115 120 125
Glu Gly Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln
130 135 140
Pro Leu Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp
145 150 155 160
Asp Leu Leu Leu Phe Ser Pro Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro
165 170 175
Ser Thr Ala Pro Gly Gly Ser Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro
180 185 190
Ser Leu Gln Glu Arg Val Pro Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly
195 200 205
Pro Pro Thr Pro Gly Val Pro Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro
210 215 220
Glu Leu Val Leu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro
225 230 235 240
Arg Glu Gly Val Ser Phe Pro Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu
245 250 255
Phe Arg Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu
260 265 270
Ser Leu Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val
275 280 285
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<213> 智人
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Arg Phe Asp Ala Phe Ile Cys Tyr Cys Pro Ser Asp Ile Gln Phe Val
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Gln Glu Met Ile Arg Gln Leu Glu Gln Thr Asn Tyr Arg Leu Lys Leu
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Cys Val Ser Asp Arg Asp Val Leu Pro Gly Thr Cys Val Trp Ser Ile
35 40 45
Ala Ser Glu Leu Ile Glu Lys Arg Leu Ala Arg Arg Pro Arg Gly Gly
50 55 60
Cys Arg Arg Met Val Val Val Val Ser Asp Asp Tyr Leu Gln Ser Lys
65 70 75 80
Glu Cys Asp Phe Gln Thr Lys Phe Ala Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala
85 90 95
His Gln Lys Arg Leu Ile Pro Ile Lys Tyr Lys Ala Met Lys Lys Glu
100 105 110
Phe Pro Ser Ile Leu Arg Phe Ile Thr Val Cys Asp Tyr Thr Asn Pro
115 120 125
Cys Thr Lys Ser Trp Phe Trp Thr Arg Leu Ala Lys Ala Leu Ser Leu
130 135 140
Pro
145
<210> 180
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<212> DNA
<213> 智人
<400> 180
gcactgctga tgaaacctgg cgccggaacc cgccagccct cggcgcccat tcagtccgcg 60
caggcaggtg tgagcagcgg gtcaactacc tggcaggcgc gcacgcggcc gcgggctccc 120
gctaaccgca gcctccactc ctctccccgc gcgccgcgcc cccgccccgc cccgccccgc 180
ccggtctcgc cggccgagcg tccgttggtc cttgagcgcg tccgacagtc tgtctgttcg 240
cgatcctgcc ggagccccgc cgccgccggc ttggattctg aaaccttcct tgtatccctc 300
ctgagacatc tttgctgcaa gatcgaggct gtcctctggt gagaaggtgg tgaggcttcc 360
cgtcatattc cagctctgaa cagcaacatg gggtgcaaag tcctgctcaa cattgggcag 420
cagatgctgc ggcggaaggt ggtggactgt agccgggagg agacgcggct gtctcgctgc 480
ctgaacactt ttgatctggt ggccctcggg gtgggcagca cactgggtgc tggtgtctac 540
gtcctggctg gagctgtggc ccgtgagaat gcaggccctg ccattgtcat ctccttcctg 600
atcgctgcgc tggcctcagt gctggctggc ctgtgctatg gcgagtttgg tgctcgggtc 660
cccaagacgg gctcagctta cctctacagc tatgtcaccg ttggagagct ctgggccttc 720
atcaccggct ggaacttaat cctctcctac atcatcggta cttcaagcgt agcgagggcc 780
tggagcgcca ccttcgacga gctgataggc agacccatcg gggagttctc acggacacac 840
atgactctga acgcccccgg cgtgctggct gaaaaccccg acatattcgc agtgatcata 900
attctcatct tgacaggact tttaactctt ggtgtgaaag agtcggccat ggtcaacaaa 960
atattcactt gtattaacgt cctggtcctg ggcttcataa tggtgtcagg atttgtgaaa 1020
ggatcggtta aaaactggca gctcacggag gaggattttg ggaacacatc aggccgtctc 1080
tgtttgaaca atgacacaaa agaagggaag cccggtgttg gtggattcat gcccttcggg 1140
ttctctggtg tcctgtcggg ggcagcgact tgcttctatg ccttcgtggg ctttgactgc 1200
atcgccacca caggtgaaga ggtgaagaac ccacagaagg ccatccccgt ggggatcgtg 1260
gcgtccctct tgatctgctt catcgcctac tttggggtgt cggctgccct cacgctcatg 1320
atgccctact tctgcctgga caataacagc cccctgcccg acgcctttaa gcacgtgggc 1380
tgggaaggtg ccaagtacgc agtggccgtg ggctccctct gcgctctttc cgccagtctt 1440
ctaggttcca tgtttcccat gcctcgggtt atctatgcca tggctgagga tggactgcta 1500
tttaaattct tagccaacgt caatgatagg accaaaacac caataatcgc cacattagcc 1560
tcgggtgccg ttgctgctgt gatggccttc ctctttgacc tgaaggactt ggtggacctc 1620
atgtccattg gcactctcct ggcttactcg ttggtggctg cctgtgtgtt ggtcttacgg 1680
taccagccag agcagcctaa cctggtatac cagatggcca gtacttccga cgagttagat 1740
ccagcagacc aaaatgaatt ggcaagcacc aatgattccc agctgggctt tttaccagag 1800
gcagagatgt tctctttgaa aaccatactc tcacccaaaa acatggagcc ttccaaaatc 1860
tctgggctaa ttgtgaacat ttcaaccagc ctcatagctg ttctcatcat caccttctgc 1920
attgtgaccg tgcttggaag ggaggctctc accaaagggg cgctgtgggc agtctttctg 1980
ctcgcagggt ctgccctcct ctgtgccgtg gtcacgggcg tcatctggag gcagcccgag 2040
agcaagacca agctctcatt taaggttccc ttcctgccag tgctccccat cctgagcatc 2100
ttcgtgaacg tctatctcat gatgcagctg gaccagggca cctgggtccg gtttgctgtg 2160
tggatgctga taggcttcat catctacttt ggctatggcc tgtggcacag cgaggaggcg 2220
tccctggatg ccgaccaagc aaggactcct gacggcaact tggaccagtg caagtgacgc 2280
acagccccgc cccccggagg tggcagcagc cccgagggac gcccccagag gaccgggagg 2340
caccccaccc tccccaccag tgcaacagaa accacctgcg tccacaccct cactgcagcc 2400
aaaggtgcaa ttacttgacc tgcagcccca gcccaccctc ggctctgcag ccggttctcc 2460
gggccctggt cacctccaga cagctgcctg gccggggcca ctaggctgcg gctggccact 2520
gtgtctcctc acttctctga acaaagcagt tcctccccta ccagctcagc cccgagctgc 2580
cgcagcctca ggcagaacgg aggtcacctt ctctccttat cttgggaacc aggccttcct 2640
cccggggact gttctgggat tgaaattgtg catactccaa actttcgcag ccatcttccc 2700
gctcagcccc agacacccag caatcaagcc agatgagtac cacaaaacag tgtgtcccca 2760
gcagctcccc accccagagc caaatgacag tagtgcactt aaaaaggaaa atcaggcctg 2820
ttgtccttct ccggttgcat tcagatgggt cattagggcc ggaccctgcc tgccccttgg 2880
cttctcaggg ctttgctctg acaccatgac agctgcccgg ggctgagggc agctggctcc 2940
actcaaatga ggaagaaggg atcactccca ttagggcctg ctttgcttat gcatgtgtgt 3000
gcacatgcat gtaaaccagg gaccttcagc tcacggcctc caggcctggg ccagttcttg 3060
ctgctcctgc cgtctccccc gactggctgt gtcctgagta actggaacat gagacagtat 3120
ctgcaggact ggccccatgg tggccgagtc agaagtctgt ttcctgtgag tcgccaccgt 3180
tcactcagtc ttgccctccc atgctttgga gccagtctgg tggctcctgt aaggttctca 3240
aggctggtgg cagctcagtc tggggtcagg acatgtcggg gtcatgcgtt tctggccctg 3300
acataagctg tctggcctct ctgtgacatg atgaaattga aatcaatcca cagtccatga 3360
aattgtgaca ctccaccaga ttaagttagg gcataacatt aacttggaaa tggccatgtc 3420
atcacccctg cggctgtcct atagctgaga tgcgtgggtc gcaggggagg tgatttctag 3480
gcatattgct gtcccttttg tgtatctgtc atccggatgc ttcggacccc acgcctctgc 3540
aagtgggaga gacccgagca tcctccccac ccccatagct ccagtgcacg ccacccccgt 3600
cttgcctggg tcggggcctg cggccagcac catttcacac acactccttg tagatgggag 3660
ccagaggaaa cctgaacgtg ggtggagcgt tccactgagt ctacttcagg agacagaagg 3720
cccatgctga tgggggagga ggagggatgt gggcattttg gacaccaggg gaaatggaaa 3780
tgctgctttc aaaacttagt ttcctttcca tttcttccta gtctggcctt tgacacaaat 3840
ctggtagaaa gaagcctgat aaattgaggg cacttgtacc ctccctgtgc ccccagaagg 3900
ttcttggaga gaagtgcaag aatttgtgaa cacggcggtg gagggcgggt ggatggccat 3960
gggctgagcc tccgtatcag gcctgctcac cttgctggga gctttattct gatctcattt 4020
tgaatgttcc agagggagca tcataagagc ccagagctcc gatttccaaa gagtgatatt 4080
gacatttatg gagattggtg ttgtaacata ttttgataaa tactaactta ttttgttggg 4140
gttttggttg tctcttgtct taggacctgg tagttatttg cttgattttt ttttccgtta 4200
ttttctacat aggcaaagag aattcgaggg atagacagtc tccaagaaaa gtgaagtggt 4260
gggagagaat tgcttttttc ttttttttct tttctctagt ttttctttct ggctgagatt 4320
tccgtgcaag acagcaccca atagactatt tagagttgac atttgacatt ttaatgggcg 4380
ccatggctca ttttgtagat tgagaaggtg cgtctcccct gctccaagtc tcatcatgac 4440
agcgtgctga cagctgggag tctgtggcct tcctcacgca gaggccttaa agctggacac 4500
agaagcacgc ctaggctggg cagggatggg acccatgccc cctccttaga ggacgggctt 4560
cctggttagg aaaggacacg tgggggtgcc ttgcataata gttcactggt caccgtgctt 4620
ttatgagtag tgtttttgtg cacttgccag gggttttctc tctgtgtgag aggggagtga 4680
tttaagcaat ggtgtctgga gtaagcctta caattttaat agactttttc ttatcatatc 4740
cctcatttct ttccctgaaa taaaaataca cacaagcaaa aaaaaaatga tagtttcaca 4800
tctcttagtt cccttgccca aacaagaata ttcttagttc cactggccag gattttccta 4860
catagtcaga acttacacat tactagaggc acacccacca aggagtattg tgtctacttt 4920
tatctgtgca ccagccacaa atacccacat tggaaagacc catttgtgat gggtaaacat 4980
cccttcctgt ctcccacaac ccctgtgact gccctgcatg tgttcatgac ctccgaaggc 5040
ccaaattcat gaagcagcaa acccagcaga tctccacccc cctgcctcag gacctctgct 5100
gaagaggggg atgaagtggg tctccaggga ggcagtgggg gccttgttgg cagctggctc 5160
gggagccggc ttacaggagg gcagctctgc agttgggagg ggcaccgtcc ggaggagacc 5220
aggcctctac acacccccca ctctacttat catccctgct cacacaccct tgtccaaggc 5280
tttatgcatc ggatttattt ttccaaatca agaggacagt gatagatgca ttttccccag 5340
gctgtctcag aaaggtcgct aaatgtatac tgttgtcaga attgctgaga tctcccccca 5400
cttttggttt ttgcagcagt aaaaactctt tccactgtga cttattttct ctctcaggca 5460
gccagccacc tggtcccttg tgctgactct agcacagtgg ccaggatcca atacgagtcc 5520
aggggtgacc gcaggatggt gggggcagcg ggcttctcca cctaccccag ccaccaaggc 5580
cctgacgcac tgcctcctgc accttcagca catccctgtg cacagctgga agggtgcatg 5640
gcccgctcac ctttgttcag atgggtggaa acgctgatga taccagctcc tccctgccgt 5700
gcccctgcca cggagcaggc attgtgaact ggctggtgtt tgcagtccca cgtggcatgg 5760
cctccagccc aacccacagt ggagactgga gacagggcaa tgagtctggt ggggggcacg 5820
tggacatgcc ccataggggc cccacccaga cttaacaggc aaggtcctgg gcattgcgcg 5880
acgcaggact caatgctaaa gcaagcctgc ctggctctgt gccagggccc ctcttctgat 5940
tcacacatcc catttttaca cagacccttc cttcttaata aaggctgaca gttctgttgg 6000
cagccaagaa cccacaccat gaagacaggg agtgaggggc ctttgtgccc aactccagca 6060
cagctgcgtt ctggggtgtg tgagaggcat gttcgtgtct gtgcgctggt ggtctcgtga 6120
gacagttccg aggacgggga aattgcaggg tggtgggggc gtgaggctta tatgtggaac 6180
tgatgcagag ttcgcctgca gacggatctg gatatacact atgtataatt gttacgtgta 6240
atttaaaata tatctgtttg ccatcgtcat gagaagatta tatgtaaggc tctgaaggga 6300
gagggagatg tacattctgc caggctcctg gggaccttat ccgagtcatg aaattgatta 6360
ctgttgatcc agtggtgcaa gaagctacac tccatgtgtc atcacgctta tgactcctaa 6420
tgtattttta aggcaaaaaa tgtcagccga ctccatcttc acccctcgat tcctcgagtc 6480
cagcctttct gtgccagtgc ttcactgagc cacaacgctc tcgccatcgg gacccggctg 6540
ggcctggagt ctcggggcac agttgccatg gagccctcct gggtcattct acaaatgtgc 6600
tgagtgccag ctgaaaaccc cacaggagat ggagtacctt ggccaagctt aaagagaaga 6660
ttttctcagg gtatttatta gtgtgtccag cagggtcagg aagcaggatg gaaagatgca 6720
ctcagactgt taatttatta acaaggcaaa tgattttgtg tttcttgatg acagactatt 6780
aagtttggga cttattttcc catttgagaa gttataatat atatttaaga tgataagttt 6840
cctgcttaag ttgtgccttt cagcttcaat gagtttaagg agcactaagg gtaatgatac 6900
caatgagggt tggtttatta tcaaacctga atagctgtgg tttctccagt aaatattttc 6960
ttctactgaa catggagcca ttattaagag ttgtgtgttt tttattatgt acatttgtat 7020
atttttttgc ttgtttgatg ttctattttt ctaatagttt tcttttagtt tcttaaagtt 7080
gtgatactag atttagattc tgatgctaac tgcaaatcag gttggtctct gctgggtctc 7140
tcctgctttt attttacttt aaggacaagt gtagttgtcg tccaccacct ttcaaaaaat 7200
gtgaaactgc cctgcctccc ctttttgctg acaacactgt gtacattgac cacttcctac 7260
catactttat gttgtaaaat caaactcttt tgtggtacat tatctcatgc ttctgcaaat 7320
tcgaataaat tctatggctt cca 7343
<210> 181
<400> 181
000
<210> 182
<211> 629
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-1序列
<400> 182
Met Gly Cys Lys Val Leu Leu Asn Ile Gly Gln Gln Met Leu Arg Arg
1 5 10 15
Lys Val Val Asp Cys Ser Arg Glu Glu Thr Arg Leu Ser Arg Cys Leu
20 25 30
Asn Thr Phe Asp Leu Val Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu Gly Ala
35 40 45
Gly Val Tyr Val Leu Ala Gly Ala Val Ala Arg Glu Asn Ala Gly Pro
50 55 60
Ala Ile Val Ile Ser Phe Leu Ile Ala Ala Leu Ala Ser Val Leu Ala
65 70 75 80
Gly Leu Cys Tyr Gly Glu Phe Gly Ala Arg Val Pro Lys Thr Gly Ser
85 90 95
Ala Tyr Leu Tyr Ser Tyr Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala Phe Ile
100 105 110
Thr Gly Trp Asn Leu Ile Leu Ser Tyr Ile Ile Gly Thr Ser Ser Val
115 120 125
Ala Arg Ala Trp Ser Ala Thr Phe Asp Glu Leu Ile Gly Arg Pro Ile
130 135 140
Gly Glu Phe Ser Arg Thr His Met Thr Leu Asn Ala Pro Gly Val Leu
145 150 155 160
Ala Glu Asn Pro Asp Ile Phe Ala Val Ile Ile Ile Leu Ile Leu Thr
165 170 175
Gly Leu Leu Thr Leu Gly Val Lys Glu Ser Ala Met Val Asn Lys Ile
180 185 190
Phe Thr Cys Ile Asn Val Leu Val Leu Gly Phe Ile Met Val Ser Gly
195 200 205
Phe Val Lys Gly Ser Val Lys Asn Trp Gln Leu Thr Glu Glu Asp Phe
210 215 220
Gly Asn Thr Ser Gly Arg Leu Cys Leu Asn Asn Asp Thr Lys Glu Gly
225 230 235 240
Lys Pro Gly Val Gly Gly Phe Met Pro Phe Gly Phe Ser Gly Val Leu
245 250 255
Ser Gly Ala Ala Thr Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp Cys Ile
260 265 270
Ala Thr Thr Gly Glu Glu Val Lys Asn Pro Gln Lys Ala Ile Pro Val
275 280 285
Gly Ile Val Ala Ser Leu Leu Ile Cys Phe Ile Ala Tyr Phe Gly Val
290 295 300
Ser Ala Ala Leu Thr Leu Met Met Pro Tyr Phe Cys Leu Asp Asn Asn
305 310 315 320
Ser Pro Leu Pro Asp Ala Phe Lys His Val Gly Trp Glu Gly Ala Lys
325 330 335
Tyr Ala Val Ala Val Gly Ser Leu Cys Ala Leu Ser Ala Ser Leu Leu
340 345 350
Gly Ser Met Phe Pro Met Pro Arg Val Ile Tyr Ala Met Ala Glu Asp
355 360 365
Gly Leu Leu Phe Lys Phe Leu Ala Asn Val Asn Asp Arg Thr Lys Thr
370 375 380
Pro Ile Ile Ala Thr Leu Ala Ser Gly Ala Val Ala Ala Val Met Ala
385 390 395 400
Phe Leu Phe Asp Leu Lys Asp Leu Val Asp Leu Met Ser Ile Gly Thr
405 410 415
Leu Leu Ala Tyr Ser Leu Val Ala Ala Cys Val Leu Val Leu Arg Tyr
420 425 430
Gln Pro Glu Gln Pro Asn Leu Val Tyr Gln Met Ala Ser Thr Ser Asp
435 440 445
Glu Leu Asp Pro Ala Asp Gln Asn Glu Leu Ala Ser Thr Asn Asp Ser
450 455 460
Gln Leu Gly Phe Leu Pro Glu Ala Glu Met Phe Ser Leu Lys Thr Ile
465 470 475 480
Leu Ser Pro Lys Asn Met Glu Pro Ser Lys Ile Ser Gly Leu Ile Val
485 490 495
Asn Ile Ser Thr Ser Leu Ile Ala Val Leu Ile Ile Thr Phe Cys Ile
500 505 510
Val Thr Val Leu Gly Arg Glu Ala Leu Thr Lys Gly Ala Leu Trp Ala
515 520 525
Val Phe Leu Leu Ala Gly Ser Ala Leu Leu Cys Ala Val Val Thr Gly
530 535 540
Val Ile Trp Arg Gln Pro Glu Ser Lys Thr Lys Leu Ser Phe Lys Val
545 550 555 560
Pro Phe Leu Pro Val Leu Pro Ile Leu Ser Ile Phe Val Asn Val Tyr
565 570 575
Leu Met Met Gln Leu Asp Gln Gly Thr Trp Val Arg Phe Ala Val Trp
580 585 590
Met Leu Ile Gly Phe Ile Ile Tyr Phe Gly Tyr Gly Leu Trp His Ser
595 600 605
Glu Glu Ala Ser Leu Asp Ala Asp Gln Ala Arg Thr Pro Asp Gly Asn
610 615 620
Leu Asp Gln Cys Lys
625
<210> 183
<211> 1890
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-1序列
<400> 183
atggggtgca aagtcctgct caacattggg cagcagatgc tgcggcggaa ggtggtggac 60
tgtagccggg aggagacgcg gctgtctcgc tgcctgaaca cttttgatct ggtggccctc 120
ggggtgggca gcacactggg tgctggtgtc tacgtcctgg ctggagctgt ggcccgtgag 180
aatgcaggcc ctgccattgt catctccttc ctgatcgctg cgctggcctc agtgctggct 240
ggcctgtgct atggcgagtt tggtgctcgg gtccccaaga cgggctcagc ttacctctac 300
agctatgtca ccgttggaga gctctgggcc ttcatcaccg gctggaactt aatcctctcc 360
tacatcatcg gtacttcaag cgtagcgagg gcctggagcg ccaccttcga cgagctgata 420
ggcagaccca tcggggagtt ctcacggaca cacatgactc tgaacgcccc cggcgtgctg 480
gctgaaaacc ccgacatatt cgcagtgatc ataattctca tcttgacagg acttttaact 540
cttggtgtga aagagtcggc catggtcaac aaaatattca cttgtattaa cgtcctggtc 600
ctgggcttca taatggtgtc aggatttgtg aaaggatcgg ttaaaaactg gcagctcacg 660
gaggaggatt ttgggaacac atcaggccgt ctctgtttga acaatgacac aaaagaaggg 720
aagcccggtg ttggtggatt catgcccttc gggttctctg gtgtcctgtc gggggcagcg 780
acttgcttct atgccttcgt gggctttgac tgcatcgcca ccacaggtga agaggtgaag 840
aacccacaga aggccatccc cgtggggatc gtggcgtccc tcttgatctg cttcatcgcc 900
tactttgggg tgtcggctgc cctcacgctc atgatgccct acttctgcct ggacaataac 960
agccccctgc ccgacgcctt taagcacgtg ggctgggaag gtgccaagta cgcagtggcc 1020
gtgggctccc tctgcgctct ttccgccagt cttctaggtt ccatgtttcc catgcctcgg 1080
gttatctatg ccatggctga ggatggactg ctatttaaat tcttagccaa cgtcaatgat 1140
aggaccaaaa caccaataat cgccacatta gcctcgggtg ccgttgctgc tgtgatggcc 1200
ttcctctttg acctgaagga cttggtggac ctcatgtcca ttggcactct cctggcttac 1260
tcgttggtgg ctgcctgtgt gttggtctta cggtaccagc cagagcagcc taacctggta 1320
taccagatgg ccagtacttc cgacgagtta gatccagcag accaaaatga attggcaagc 1380
accaatgatt cccagctggg ctttttacca gaggcagaga tgttctcttt gaaaaccata 1440
ctctcaccca aaaacatgga gccttccaaa atctctgggc taattgtgaa catttcaacc 1500
agcctcatag ctgttctcat catcaccttc tgcattgtga ccgtgcttgg aagggaggct 1560
ctcaccaaag gggcgctgtg ggcagtcttt ctgctcgcag ggtctgccct cctctgtgcc 1620
gtggtcacgg gcgtcatctg gaggcagccc gagagcaaga ccaagctctc atttaaggtt 1680
cccttcctgc cagtgctccc catcctgagc atcttcgtga acgtctatct catgatgcag 1740
ctggaccagg gcacctgggt ccggtttgct gtgtggatgc tgataggctt catcatctac 1800
tttggctatg gcctgtggca cagcgaggag gcgtccctgg atgccgacca agcaaggact 1860
cctgacggca acttggacca gtgcaagtga 1890
<210> 184
<211> 7569
<212> DNA
<213> 智人
<400> 184
ctccttctgc agcgcggccg gcgggcgctc ctcttcgcgg gaccagcgag gcggcggccg 60
ctgctccagc gtcccccagc cgcgggcccc cgacgcgctg cagccggcag cccaccgccg 120
ccttcttggc gcgaccccaa cccagcccca gtcgccttcg tcagacgtca gaatgattcc 180
ttgcagagcc gcgctgacct ttgcccgatg tctgatccgg agaaaaatcg tgaccctgga 240
cagtctagaa gacaccaaat tatgccgctg cttatccacc atggacctca ttgccctggg 300
cgttggaagc acccttgggg ccggggttta tgtcctcgct ggggaggtgg ccaaggcaga 360
ctcgggcccc agcatcgtgg tgtccttcct cattgctgcc ctggcttcag tgatggctgg 420
cctctgctat gccgaatttg gggcccgtgt tcccaagacg gggtctgcat atttgtacac 480
ctacgtgact gtcggagagc tgtgggcctt catcactggc tggaatctca ttttatcgta 540
tgtgataggt acatcaagtg ttgcaagagc ctggagtggc acctttgatg aacttcttag 600
caaacagatt ggtcagtttt tgaggacata cttcagaatg aattacactg gtcttgcaga 660
atatcccgat ttttttgctg tgtgccttat attacttcta gcaggtcttt tgtcttttgg 720
agtaaaagag tctgcttggg tgaataaagt cttcacagct gttaatattc tcgtccttct 780
gtttgtgatg gttgctgggt ttgtgaaagg aaatgtggca aactggaaga ttagtgaaga 840
gtttctcaaa aatatatcag caagtgccag agagccacct tctgaaaacg gaacaagtat 900
ctatggggct ggtggcttta tgccttatgg ctttacggga acgttggctg gtgctgcaac 960
ttgcttttat gcctttgtgg gatttgactg cattgcaaca actggtgaag aagttcggaa 1020
tccccagaaa gctattccca ttggaattgt gacgtctttg cttgtttgct ttatggccta 1080
ttttggggtc tctgcagctt taacacttat gatgccgtac tacctcctcg atgaaaaaag 1140
cccccttcct gtagcgtttg aatatgtggg atggggtcct gccaaatatg tcgtcgcagc 1200
tggttctctc tgcgccttgt caacaagtct tcttggatcc attttcccaa tgcctcgtgt 1260
aatctatgct atggcggagg atgggttgct tttcaaatgt ctagctcaaa tcaattccaa 1320
aacgaagaca ccaataattg ctactttatc atcgggtgca gtggcagctt tgatggcctt 1380
tctgtttgac ctgaaggcgc ttgtggacat gatgtccatt ggcacactca tggcctactc 1440
tctggtggca gcctgtgttc tcatcctcag gtaccagcct ggcttatctt acgaccagcc 1500
caaatgttct cctgagaaag atggtctggg atcgtctccc agggtaacct cgaagagtga 1560
gtcccaggtc accatgctgc agagacaggg cttcagcatg cggaccctct tctgcccctc 1620
ccttctgcca acacagcagt cagcttctct cgtgagcttt ctggtaggat tcctagcttt 1680
cctcgtgttg ggcctgagtg tcttgaccac ttacggagtt catgccatca ccaggctgga 1740
ggcctggagc ctcgctctcc tcgcgctgtt tcttgttctc ttcgttgcca tcgttctcac 1800
catctggagg cagccccaga atcagcaaaa agtagccttc atggttccat tcttaccatt 1860
tttgccagcg ttcagcatct tggtgaacat ttacttgatg gtccagttaa gtgcagacac 1920
ttgggtcaga ttcagcattt ggatggcaat tggcttcctg atttactttt cttatggcat 1980
tagacacagc ctggagggtc atctgagaga tgaaaacaat gaagaagatg cttatccaga 2040
caacgttcat gcagcagcag aagaaaaatc tgccattcaa gcaaatgacc atcacccaag 2100
aaatctcagt tcacctttca tattccatga aaagacaagt gaattctaac acttgcagga 2160
gcagagctgg tcatcgtctt agcatacata tcctacactg agtaaaccgt aacgggatgt 2220
catcagcatg ctgggttgtc atgggtttgc tgcatacata gttcacccta atttatactt 2280
actcatctgg acagcatctc ctcagatggt gaattatgtg cacggggaaa cctcctgagt 2340
ggaagtttca ttcatcagtg atgaatagcc cccaaacagt gggagtgtgt atgtatgtgt 2400
gtatgtatgt atctatgtat atgcttggga acatgagtgt tacaagttag ctggtgtttt 2460
actattattg tgttacattt ttccagtgtc gtcattaatc ggtggcatat actgcacata 2520
ctgaaataga gggaaatcac tgaatgtaaa gaggtttcat ctatgccccc tgcagttggg 2580
gaaatactag tagctttacc ttgtttgact tcattaatgt cagtttaggg gatgccaaaa 2640
atgcagttac tcatcatggt gtctgtcact ggttaggggt aagatgaggg gataaggaaa 2700
gagacttttc aataagttgt gaatgccaac agtgggttta atgcaaattt tttttcctgt 2760
gaggtatgac agtttgctca aacttcagcc aacaggggtg tctgcttctg ctgcactaca 2820
caggccagga gtggcattcc atgccactag ttggcatcct tttgaacttt tgtctccttt 2880
gcaaacagtg gtcctaaaat acgaggtctt cacttgctgt gaatgacgta tccccagtca 2940
gggacttaag agaggcactg tgatatactt gggacccttt aaattaaaaa gtgaagatag 3000
tcaccagggc cagaaagctc atggagtggc cgtaatgaga atatgtttga agatcaaaga 3060
gttagaccaa tgcttgaata agtagacccc aagcatcctt ttctaaaaag tgacttaaaa 3120
taagccaaca gactctccca gaccacacaa ctagtggaat gattcctcct ttttccatta 3180
cttacttaat cacagtttag tttttttctt aacctcgtca ggcccagagt tcacttcttt 3240
gtttctctgt ttcttttgtc ttgtcttaga gatgaggggg ctacagcagc atcatgcaaa 3300
gagggaaaga tgaagggata gaagaagaga aaatccccct gttctgatag gaacggcctg 3360
ttccattgtt aaatggcaaa tggcccaatt taagggcttt ggatctaatt tgcctctgat 3420
gtttcctttg gaaacattta ggaatatttt tctcccccta ccccataaat tgtgtagcac 3480
tttttattcc atttgctttc aaatgactac actaagccta ataatacaag ctccagtgtt 3540
atacaataac ccatcagtga ttggggaatc aaacattttg gtttaaaaaa catgattatt 3600
taaaactgga aactaaaaag aatcaaattg aattaaagct atataaacac agttaaccct 3660
tgtaaatgag taaacaaatt tttacatgta agattctcta attgtcatat tttacttttt 3720
aggattccct aatagtggac tgtttatttg cagtgtattt gcttctcatg aactatttct 3780
cgtacaaatc attaaatagt tcattggatg aggctgggtg acatttccca ggacagcatg 3840
gtgaacatta ccaggcatgc tagctggccc gtgtaatccc aagacaagga aaacattcgt 3900
tttcctcatg ggtcttccaa gaaatgagct attttattga tgccattaaa aagcaagttg 3960
cgatggtttt gtatagccag gagtttattg tgattaaaca tcaaagaaac aggtagaaag 4020
cctgggtttc tggctgctag cgttatagca tccatgacac agaactcatt acggacattc 4080
cacaacttcc agggtgcaca tggtaaaatc tgaagcccag aattttctct caagctgcgt 4140
ggtttactgg agagaaggag ttggataagc acaggctcgg gtattttggt agggactgta 4200
ggcatgctca taaatccttg ctgttgtcac agtacgctga aaacccgttt gattctatac 4260
ccaatcaaga atagaccctt cacacaggaa atgtgaacaa ttgttatata tgaacactca 4320
aatcttttac tgtaacgaaa ccaagaaact tgtttagaat gtgataggca gctaaaactg 4380
ttatgcccac tgtgctcaat ttgaagcaga atttagtgaa aaattatttt tccacattga 4440
aacactttgc agacacaaat atctatgaaa agatgctttg tcagccactg tgcctttttt 4500
tctgtgaaga ctcaacggat gtgtgtgttt gtatgtttgt taacagttac atatgtttgt 4560
atgagtgtat atatatatct gtgtgtgtgt atctctaacg tcagtgtata agtaagttgg 4620
gtttatggtg ggctttgact atgtcattag gtgggtacaa aacccaactg atgtggagaa 4680
aaattgatgt ttgatgttga tagatatgct tatacctaat ttttagtttt taaactattt 4740
taaaatatac tatgatttta tatgtatatt tcctatagac tctttaagac gtatttataa 4800
tgtttctaat atgaaatcac taaactctag tacattatag caggtgcttt gtaatctgga 4860
atggagaaga ggtaggggca tttggggatt cctgtttact tgctgctgcc acaccttttc 4920
cgactgatct gtcctggtag gtgtttatta gcaaaagtca gtatcaccag ctctttggca 4980
cctttctgtt tctgcttgtg aattcataat gttttcaact aaattttttt tttctttctc 5040
agaattacct aaatgttttg tagagttttg actagtaatc aatcaaaatt atataaagtc 5100
ttctccagta attaagaaat acatatgcaa attcttttgt gattgagtaa aagcagctta 5160
aattactttt cttttctaca ttaagaaata tattctcaac attttcagtg agaatttctt 5220
gtaatggcac ctcaaatttt atactcttaa aaaaaaacaa taatttgtga attaccacca 5280
aaaggcaatg gcagtcctac atttaagaat agagctatgc aaactctgtt aaaaactatg 5340
aggaaaactt atattagaac ttttgatata tactaaaata ctgattatct taatcacatt 5400
ttccccagag ataaacattg agagaacgaa agccaaagtg tcatttaaga gagatatata 5460
tgaaaaagta acattaatat atagaacttt accatcacca gccgtagttg atagaaaata 5520
ttagtttcag aattaccctc ctttaaaaaa taagagacta tttgttttct tttaatttct 5580
atgaataaaa gaaattttta aaaactttaa aattttaaat attagtcaaa atacttttta 5640
agtcctgagt gcttacaggt agttgttaaa aaaattttaa ggccaggcat ggtggctcgc 5700
tcacacctat aatcctagga tcttgggagg tcgaggcaag ctgatcgctt gagcccagga 5760
gtttaagacc ggcctgagta gcatagcaag accctgtctc tacaaaaaaa acaaaaatta 5820
gctgggcatg gtggcatgca catgtagtca gagctactgg gggtgctgag gtgggaggat 5880
cgcttgagcc caggagagtg aggctgcagt gagctgagat tacgccactg cactctagcc 5940
tgggcaacgg tgagaccctg cctcaaaaaa aataaaaata aaaataaaac actttaatta 6000
gaatctattt ttacctattt tctaaattta tttaaatgct tagcaggaag cataaggaaa 6060
agccatcggc ctccaatacc catgatgaca gagggagcac ttgagccttg ccttccctcc 6120
tcttaaatca gggtgtgttc cgagattaca gaacatcaca ccttggcgtg atgaaatcat 6180
gccaagattc tgactctccc tttccggtga tactgctcat gatttctcct aatacgcttc 6240
aagcaactgt taccacaaaa aatacagttt ccgcagggct ttaaaggatt gagtttagca 6300
tgtatatcat gcgttattaa agttcacgtg attcatgtga aattaactgt cctttttgct 6360
agtgccaaaa cagtgccttc tctgcacact ttacttgttt ataaagttct cccacatgtc 6420
cttaaatatc aagggggaaa gtatggatat tcgcgtagca ataatgccag caaaggtcat 6480
tttcattttt tagtcatata gatatgaaaa taagttcata tagatatgaa attgcttgac 6540
tttattgttt tggggagatt ttttttcctt acatgattat attaaacact ttaaaatagc 6600
cttccggttt ctggattttg agaagcctga tctgttattg ttgtggttgt tggtgtttgt 6660
aatattcatt attgtttgta tatacacggt ttagtcttac tgatttcaaa tgcattttgt 6720
tattgctcaa cccaactggt aacactgttt gctgggagca ttatacttaa ctttgattca 6780
ccatggttga tgccactgcc atgatcgctg ggtcttaaag agctttccct agccactgac 6840
agccccgtgg agatcataat cagggcccca ggctggttcc aggatcaggc agcctataga 6900
gtgtgagcat ctatgtgtag ctacccttgt tgggtgggct cttagactga tggggtagga 6960
tatgaagtga aagacttcaa atgcaagtaa ggtagtttgg gctccttaat tccaaacatc 7020
ccatgagtat atcaagatga ataaggacca agggacctct gtgactcata gaagggctgg 7080
ctgaatcctg aagtagcata gtgggacctg gtctacaatt tatgcacatg cactgacagc 7140
cttgctgtgc cacgtgtctc accaagaccc agttgggaaa gagcgtcata ttgccaacag 7200
gttgggtttc tctggcctac acctgattaa tgggcccttt atctttggtg tcccctagga 7260
gtgtccagtt gttttattgc tgtattttgt tattgcagta cttaataaaa attgttgata 7320
gggcccaaaa ccctacagaa attctatgtc tgtaaaaacc aacaaaggca ttggacttgt 7380
gtgaatgtac agggtttttt tagtagtaat tttaaattta aatgttttaa gtgatcatca 7440
gtgttccttt ttacttataa agttggattc ttttttagaa tttgtaataa ataaaaactg 7500
ctgctttacc actgtaaaat atgctttctg atgtggtgta tttttaaaat aaattttaat 7560
atgtaataa 7569
<210> 185
<211> 7565
<212> DNA
<213> 智人
<400> 185
tcccaaaaca gaaagagcag atgtctcacc acgaaactag caactggaat gaagatagaa 60
acaagtggtt ataactcaga caaactaatt tgtcgagggt ttattggaac acctgcccca 120
ccggtttgcg acagcaagtt tctcctgtcg ccttcgtcag acgtcagaat gattccttgc 180
agagccgcgc tgacctttgc ccgatgtctg atccggagaa aaatcgtgac cctggacagt 240
ctagaagaca ccaaattatg ccgctgctta tccaccatgg acctcattgc cctgggcgtt 300
ggaagcaccc ttggggccgg ggtttatgtc ctcgctgggg aggtggccaa ggcagactcg 360
ggccccagca tcgtggtgtc cttcctcatt gctgccctgg cttcagtgat ggctggcctc 420
tgctatgccg aatttggggc ccgtgttccc aagacggggt ctgcatattt gtacacctac 480
gtgactgtcg gagagctgtg ggccttcatc actggctgga atctcatttt atcgtatgtg 540
ataggtacat caagtgttgc aagagcctgg agtggcacct ttgatgaact tcttagcaaa 600
cagattggtc agtttttgag gacatacttc agaatgaatt acactggtct tgcagaatat 660
cccgattttt ttgctgtgtg ccttatatta cttctagcag gtcttttgtc ttttggagta 720
aaagagtctg cttgggtgaa taaagtcttc acagctgtta atattctcgt ccttctgttt 780
gtgatggttg ctgggtttgt gaaaggaaat gtggcaaact ggaagattag tgaagagttt 840
ctcaaaaata tatcagcaag tgccagagag ccaccttctg aaaacggaac aagtatctat 900
ggggctggtg gctttatgcc ttatggcttt acgggaacgt tggctggtgc tgcaacttgc 960
ttttatgcct ttgtgggatt tgactgcatt gcaacaactg gtgaagaagt tcggaatccc 1020
cagaaagcta ttcccattgg aattgtgacg tctttgcttg tttgctttat ggcctatttt 1080
ggggtctctg cagctttaac acttatgatg ccgtactacc tcctcgatga aaaaagcccc 1140
cttcctgtag cgtttgaata tgtgggatgg ggtcctgcca aatatgtcgt cgcagctggt 1200
tctctctgcg ccttgtcaac aagtcttctt ggatccattt tcccaatgcc tcgtgtaatc 1260
tatgctatgg cggaggatgg gttgcttttc aaatgtctag ctcaaatcaa ttccaaaacg 1320
aagacaccaa taattgctac tttatcatcg ggtgcagtgg cagctttgat ggcctttctg 1380
tttgacctga aggcgcttgt ggacatgatg tccattggca cactcatggc ctactctctg 1440
gtggcagcct gtgttctcat cctcaggtac cagcctggct tatcttacga ccagcccaaa 1500
tgttctcctg agaaagatgg tctgggatcg tctcccaggg taacctcgaa gagtgagtcc 1560
caggtcacca tgctgcagag acagggcttc agcatgcgga ccctcttctg cccctccctt 1620
ctgccaacac agcagtcagc ttctctcgtg agctttctgg taggattcct agctttcctc 1680
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<210> 193
<400> 193
000
<210> 194
<211> 697
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-2A序列
<400> 194
Met Lys Ile Glu Thr Ser Gly Tyr Asn Ser Asp Lys Leu Ile Cys Arg
1 5 10 15
Gly Phe Ile Gly Thr Pro Ala Pro Pro Val Cys Asp Ser Lys Phe Leu
20 25 30
Leu Ser Pro Ser Ser Asp Val Arg Met Ile Pro Cys Arg Ala Ala Leu
35 40 45
Thr Phe Ala Arg Cys Leu Ile Arg Arg Lys Ile Val Thr Leu Asp Ser
50 55 60
Leu Glu Asp Thr Lys Leu Cys Arg Cys Leu Ser Thr Met Asp Leu Ile
65 70 75 80
Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu Gly Ala Gly Val Tyr Val Leu Ala
85 90 95
Gly Glu Val Ala Lys Ala Asp Ser Gly Pro Ser Ile Val Val Ser Phe
100 105 110
Leu Ile Ala Ala Leu Ala Ser Val Met Ala Gly Leu Cys Tyr Ala Glu
115 120 125
Phe Gly Ala Arg Val Pro Lys Thr Gly Ser Ala Tyr Leu Tyr Thr Tyr
130 135 140
Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala Phe Ile Thr Gly Trp Asn Leu Ile
145 150 155 160
Leu Ser Tyr Val Ile Gly Thr Ser Ser Val Ala Arg Ala Trp Ser Gly
165 170 175
Thr Phe Asp Glu Leu Leu Ser Lys Gln Ile Gly Gln Phe Leu Arg Thr
180 185 190
Tyr Phe Arg Met Asn Tyr Thr Gly Leu Ala Glu Tyr Pro Asp Phe Phe
195 200 205
Ala Val Cys Leu Ile Leu Leu Leu Ala Gly Leu Leu Ser Phe Gly Val
210 215 220
Lys Glu Ser Ala Trp Val Asn Lys Val Phe Thr Ala Val Asn Ile Leu
225 230 235 240
Val Leu Leu Phe Val Met Val Ala Gly Phe Val Lys Gly Asn Val Ala
245 250 255
Asn Trp Lys Ile Ser Glu Glu Phe Leu Lys Asn Ile Ser Ala Ser Ala
260 265 270
Arg Glu Pro Pro Ser Glu Asn Gly Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Gly Gly
275 280 285
Phe Met Pro Tyr Gly Phe Thr Gly Thr Leu Ala Gly Ala Ala Thr Cys
290 295 300
Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp Cys Ile Ala Thr Thr Gly Glu Glu
305 310 315 320
Val Arg Asn Pro Gln Lys Ala Ile Pro Ile Gly Ile Val Thr Ser Leu
325 330 335
Leu Val Cys Phe Met Ala Tyr Phe Gly Val Ser Ala Ala Leu Thr Leu
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Met Met Pro Tyr Tyr Leu Leu Asp Glu Lys Ser Pro Leu Pro Val Ala
355 360 365
Phe Glu Tyr Val Gly Trp Gly Pro Ala Lys Tyr Val Val Ala Ala Gly
370 375 380
Ser Leu Cys Ala Leu Ser Thr Ser Leu Leu Gly Ser Met Phe Pro Leu
385 390 395 400
Pro Arg Ile Leu Phe Ala Met Ala Arg Asp Gly Leu Leu Phe Arg Phe
405 410 415
Leu Ala Arg Val Ser Lys Arg Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr Leu Thr
420 425 430
Ala Gly Val Ile Ser Ala Leu Met Ala Phe Leu Phe Asp Leu Lys Ala
435 440 445
Leu Val Asp Met Met Ser Ile Gly Thr Leu Met Ala Tyr Ser Leu Val
450 455 460
Ala Ala Cys Val Leu Ile Leu Arg Tyr Gln Pro Gly Leu Ser Tyr Asp
465 470 475 480
Gln Pro Lys Cys Ser Pro Glu Lys Asp Gly Leu Gly Ser Ser Pro Arg
485 490 495
Val Thr Ser Lys Ser Glu Ser Gln Val Thr Met Leu Gln Arg Gln Gly
500 505 510
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Ser Ala Ser Leu Val Ser Phe Leu Val Gly Phe Leu Ala Phe Leu Val
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565 570 575
Val Ala Ile Val Leu Thr Ile Trp Arg Gln Pro Gln Asn Gln Gln Lys
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Val Ala Phe Met Val Pro Phe Leu Pro Phe Leu Pro Ala Phe Ser Ile
595 600 605
Leu Val Asn Ile Tyr Leu Met Val Gln Leu Ser Ala Asp Thr Trp Val
610 615 620
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625 630 635 640
Gly Ile Arg His Ser Leu Glu Gly His Leu Arg Asp Glu Asn Asn Glu
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660 665 670
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675 680 685
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690 695
<210> 195
<211> 658
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-2B序列
<400> 195
Met Ile Pro Cys Arg Ala Ala Leu Thr Phe Ala Arg Cys Leu Ile Arg
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Arg Lys Ile Val Thr Leu Asp Ser Leu Glu Asp Thr Lys Leu Cys Arg
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Cys Leu Ser Thr Met Asp Leu Ile Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu
35 40 45
Gly Ala Gly Val Tyr Val Leu Ala Gly Glu Val Ala Lys Ala Asp Ser
50 55 60
Gly Pro Ser Ile Val Val Ser Phe Leu Ile Ala Ala Leu Ala Ser Val
65 70 75 80
Met Ala Gly Leu Cys Tyr Ala Glu Phe Gly Ala Arg Val Pro Lys Thr
85 90 95
Gly Ser Ala Tyr Leu Tyr Thr Tyr Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala
100 105 110
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Gly Phe Val Lys Gly Asn Val Ala Asn Trp Lys Ile Ser Glu Glu Phe
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Leu Lys Asn Ile Ser Ala Ser Ala Arg Glu Pro Pro Ser Glu Asn Gly
225 230 235 240
Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Gly Gly Phe Met Pro Tyr Gly Phe Thr Gly
245 250 255
Thr Leu Ala Gly Ala Ala Thr Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp
260 265 270
Cys Ile Ala Thr Thr Gly Glu Glu Val Arg Asn Pro Gln Lys Ala Ile
275 280 285
Pro Ile Gly Ile Val Thr Ser Leu Leu Val Cys Phe Met Ala Tyr Phe
290 295 300
Gly Val Ser Ala Ala Leu Thr Leu Met Met Pro Tyr Tyr Leu Leu Asp
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Glu Lys Ser Pro Leu Pro Val Ala Phe Glu Tyr Val Gly Trp Gly Pro
325 330 335
Ala Lys Tyr Val Val Ala Ala Gly Ser Leu Cys Ala Leu Ser Thr Ser
340 345 350
Leu Leu Gly Ser Ile Phe Pro Met Pro Arg Val Ile Tyr Ala Met Ala
355 360 365
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370 375 380
Lys Thr Pro Ile Ile Ala Thr Leu Ser Ser Gly Ala Val Ala Ala Leu
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Met Ala Phe Leu Phe Asp Leu Lys Ala Leu Val Asp Met Met Ser Ile
405 410 415
Gly Thr Leu Met Ala Tyr Ser Leu Val Ala Ala Cys Val Leu Ile Leu
420 425 430
Arg Tyr Gln Pro Gly Leu Ser Tyr Asp Gln Pro Lys Cys Ser Pro Glu
435 440 445
Lys Asp Gly Leu Gly Ser Ser Pro Arg Val Thr Ser Lys Ser Glu Ser
450 455 460
Gln Val Thr Met Leu Gln Arg Gln Gly Phe Ser Met Arg Thr Leu Phe
465 470 475 480
Cys Pro Ser Leu Leu Pro Thr Gln Gln Ser Ala Ser Leu Val Ser Phe
485 490 495
Leu Val Gly Phe Leu Ala Phe Leu Val Leu Gly Leu Ser Val Leu Thr
500 505 510
Thr Tyr Gly Val His Ala Ile Thr Arg Leu Glu Ala Trp Ser Leu Ala
515 520 525
Leu Leu Ala Leu Phe Leu Val Leu Phe Val Ala Ile Val Leu Thr Ile
530 535 540
Trp Arg Gln Pro Gln Asn Gln Gln Lys Val Ala Phe Met Val Pro Phe
545 550 555 560
Leu Pro Phe Leu Pro Ala Phe Ser Ile Leu Val Asn Ile Tyr Leu Met
565 570 575
Val Gln Leu Ser Ala Asp Thr Trp Val Arg Phe Ser Ile Trp Met Ala
580 585 590
Ile Gly Phe Leu Ile Tyr Phe Ser Tyr Gly Ile Arg His Ser Leu Glu
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Val His Ala Ala Ala Glu Glu Lys Ser Ala Ile Gln Ala Asn Asp His
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His Pro Arg Asn Leu Ser Ser Pro Phe Ile Phe His Glu Lys Thr Ser
645 650 655
Glu Phe
<210> 196
<211> 2094
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-2A序列
<400> 196
atgaagatag aaacaagtgg ttataactca gacaaactaa tttgtcgagg gtttattgga 60
acacctgccc caccggtttg cgacagcaag tttctcctgt cgccttcgtc agacgtcaga 120
atgattcctt gcagagccgc gctgaccttt gcccgatgtc tgatccggag aaaaatcgtg 180
accctggaca gtctagaaga caccaaatta tgccgctgct tatccaccat ggacctcatt 240
gccctgggcg ttggaagcac ccttggggcc ggggtttatg tcctcgctgg ggaggtggcc 300
aaggcagact cgggccccag catcgtggtg tccttcctca ttgctgccct ggcttcagtg 360
atggctggcc tctgctatgc cgaatttggg gcccgtgttc ccaagacggg gtctgcatat 420
ttgtacacct acgtgactgt cggagagctg tgggccttca tcactggctg gaatctcatt 480
ttatcgtatg tgataggtac atcaagtgtt gcaagagcct ggagtggcac ctttgatgaa 540
cttcttagca aacagattgg tcagtttttg aggacatact tcagaatgaa ttacactggt 600
cttgcagaat atcccgattt ttttgctgtg tgccttatat tacttctagc aggtcttttg 660
tcttttggag taaaagagtc tgcttgggtg aataaagtct tcacagctgt taatattctc 720
gtccttctgt ttgtgatggt tgctgggttt gtgaaaggaa atgtggcaaa ctggaagatt 780
agtgaagagt ttctcaaaaa tatatcagca agtgccagag agccaccttc tgaaaacgga 840
acaagtatct atggggctgg tggctttatg ccttatggct ttacgggaac gttggctggt 900
gctgcaactt gcttttatgc ctttgtggga tttgactgca ttgcaacaac tggtgaagaa 960
gttcggaatc cccagaaagc tattcccatt ggaattgtga cgtctttgct tgtttgcttt 1020
atggcctatt ttggggtctc tgcagcttta acacttatga tgccgtacta cctcctcgat 1080
gaaaaaagcc cccttcctgt agcgtttgaa tatgtgggat ggggtcctgc caaatatgtc 1140
gtcgcagctg gttctctctg cgccttgtca acaagtcttc tgggctctat gtttccttta 1200
ccccgaattc tgtttgccat ggcccgggat ggcttactgt ttagatttct tgccagagtg 1260
agtaagaggc agtcaccagt tgctgccacg ttgactgcag gggtcatttc tgctttgatg 1320
gcctttctgt ttgacctgaa ggcgcttgtg gacatgatgt ccattggcac actcatggcc 1380
tactctctgg tggcagcctg tgttctcatc ctcaggtacc agcctggctt atcttacgac 1440
cagcccaaat gttctcctga gaaagatggt ctgggatcgt ctcccagggt aacctcgaag 1500
agtgagtccc aggtcaccat gctgcagaga cagggcttca gcatgcggac cctcttctgc 1560
ccctcccttc tgccaacaca gcagtcagct tctctcgtga gctttctggt aggattccta 1620
gctttcctcg tgttgggcct gagtgtcttg accacttacg gagttcatgc catcaccagg 1680
ctggaggcct ggagcctcgc tctcctcgcg ctgtttcttg ttctcttcgt tgccatcgtt 1740
ctcaccatct ggaggcagcc ccagaatcag caaaaagtag ccttcatggt tccattctta 1800
ccatttttgc cagcgttcag catcttggtg aacatttact tgatggtcca gttaagtgca 1860
gacacttggg tcagattcag catttggatg gcaattggct tcctgattta cttttcttat 1920
ggcattagac acagcctgga gggtcatctg agagatgaaa acaatgaaga agatgcttat 1980
ccagacaacg ttcatgcagc agcagaagaa aaatctgcca ttcaagcaaa tgaccatcac 2040
ccaagaaatc tcagttcacc tttcatattc catgaaaaga caagtgaatt ctaa 2094
<210> 197
<211> 1977
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-2B序列
<400> 197
atgattcctt gcagagccgc gctgaccttt gcccgatgtc tgatccggag aaaaatcgtg 60
accctggaca gtctagaaga caccaaatta tgccgctgct tatccaccat ggacctcatt 120
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aaggcagact cgggccccag catcgtggtg tccttcctca ttgctgccct ggcttcagtg 240
atggctggcc tctgctatgc cgaatttggg gcccgtgttc ccaagacggg gtctgcatat 300
ttgtacacct acgtgactgt cggagagctg tgggccttca tcactggctg gaatctcatt 360
ttatcgtatg tgataggtac atcaagtgtt gcaagagcct ggagtggcac ctttgatgaa 420
cttcttagca aacagattgg tcagtttttg aggacatact tcagaatgaa ttacactggt 480
cttgcagaat atcccgattt ttttgctgtg tgccttatat tacttctagc aggtcttttg 540
tcttttggag taaaagagtc tgcttgggtg aataaagtct tcacagctgt taatattctc 600
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acaagtatct atggggctgg tggctttatg ccttatggct ttacgggaac gttggctggt 780
gctgcaactt gcttttatgc ctttgtggga tttgactgca ttgcaacaac tggtgaagaa 840
gttcggaatc cccagaaagc tattcccatt ggaattgtga cgtctttgct tgtttgcttt 900
atggcctatt ttggggtctc tgcagcttta acacttatga tgccgtacta cctcctcgat 960
gaaaaaagcc cccttcctgt agcgtttgaa tatgtgggat ggggtcctgc caaatatgtc 1020
gtcgcagctg gttctctctg cgccttgtca acaagtcttc ttggatccat tttcccaatg 1080
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gaccagccca aatgttctcc tgagaaagat ggtctgggat cgtctcccag ggtaacctcg 1380
aagagtgagt cccaggtcac catgctgcag agacagggct tcagcatgcg gaccctcttc 1440
tgcccctccc ttctgccaac acagcagtca gcttctctcg tgagctttct ggtaggattc 1500
ctagctttcc tcgtgttggg cctgagtgtc ttgaccactt acggagttca tgccatcacc 1560
aggctggagg cctggagcct cgctctcctc gcgctgtttc ttgttctctt cgttgccatc 1620
gttctcacca tctggaggca gccccagaat cagcaaaaag tagccttcat ggttccattc 1680
ttaccatttt tgccagcgtt cagcatcttg gtgaacattt acttgatggt ccagttaagt 1740
gcagacactt gggtcagatt cagcatttgg atggcaattg gcttcctgat ttacttttct 1800
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cacccaagaa atctcagttc acctttcata ttccatgaaa agacaagtga attctaa 1977
<210> 198
<211> 657
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多肽
<400> 198
Met Ile Pro Cys Arg Ala Ala Leu Thr Phe Ala Arg Cys Leu Ile Arg
1 5 10 15
Arg Lys Ile Val Thr Leu Asp Ser Leu Glu Asp Thr Lys Leu Cys Arg
20 25 30
Cys Leu Ser Thr Met Asp Leu Ile Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu
35 40 45
Gly Ala Gly Val Tyr Val Leu Ala Gly Glu Val Ala Lys Ala Asp Ser
50 55 60
Gly Pro Ser Ile Val Val Ser Phe Leu Ile Ala Ala Leu Ala Ser Val
65 70 75 80
Met Ala Gly Leu Cys Tyr Ala Glu Phe Gly Ala Arg Val Pro Lys Thr
85 90 95
Gly Ser Ala Tyr Leu Tyr Thr Tyr Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala
100 105 110
Phe Ile Thr Gly Trp Asn Leu Ile Leu Ser Tyr Val Ile Gly Thr Ser
115 120 125
Ser Val Ala Arg Ala Trp Ser Gly Thr Phe Asp Glu Leu Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Ile Gly Gln Phe Leu Arg Thr Tyr Phe Arg Met Asn Tyr Thr Gly
145 150 155 160
Leu Ala Glu Tyr Pro Asp Phe Phe Ala Val Cys Leu Ile Leu Leu Leu
165 170 175
Ala Gly Leu Leu Ser Phe Gly Val Lys Glu Ser Ala Trp Val Asn Lys
180 185 190
Val Phe Thr Ala Val Asn Ile Leu Val Leu Leu Phe Val Met Val Ala
195 200 205
Gly Phe Val Lys Gly Asn Val Ala Asn Trp Lys Ile Ser Glu Glu Phe
210 215 220
Leu Lys Asn Ile Ser Ala Ser Ala Arg Glu Pro Pro Ser Glu Asn Gly
225 230 235 240
Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Gly Gly Phe Met Pro Tyr Gly Phe Thr Gly
245 250 255
Thr Leu Ala Gly Ala Ala Thr Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp
260 265 270
Cys Ile Ala Thr Thr Gly Glu Glu Val Arg Asn Pro Gln Lys Ala Ile
275 280 285
Pro Ile Gly Ile Val Thr Ser Leu Leu Val Cys Phe Met Ala Tyr Phe
290 295 300
Gly Val Ser Ala Ala Leu Thr Leu Met Met Pro Tyr Tyr Leu Leu Asp
305 310 315 320
Glu Lys Ser Pro Leu Pro Val Ala Phe Glu Tyr Val Gly Trp Gly Pro
325 330 335
Ala Lys Tyr Val Val Ala Ala Gly Ser Leu Cys Ala Leu Ser Thr Ser
340 345 350
Leu Leu Gly Ser Met Phe Pro Leu Pro Arg Ile Leu Phe Ala Met Ala
355 360 365
Glu Asp Gly Leu Leu Phe Arg Phe Leu Ala Arg Val Ser Lys Arg Gln
370 375 380
Ser Pro Val Ala Ala Thr Leu Thr Ala Gly Val Ile Ser Ala Leu Met
385 390 395 400
Ala Phe Leu Phe Asp Leu Lys Ala Leu Val Asp Met Met Ser Ile Gly
405 410 415
Thr Leu Met Ala Tyr Ser Leu Val Ala Ala Cys Val Leu Ile Leu Arg
420 425 430
Tyr Gln Pro Gly Leu Ser Tyr Asp Gln Pro Lys Cys Ser Pro Glu Lys
435 440 445
Asp Gly Leu Gly Ser Ser Pro Arg Val Thr Ser Lys Ser Glu Ser Gln
450 455 460
Val Thr Met Leu Gln Arg Gln Gly Phe Ser Met Arg Thr Leu Phe Cys
465 470 475 480
Pro Ser Leu Leu Pro Thr Gln Gln Ser Ala Ser Leu Val Ser Phe Leu
485 490 495
Val Gly Phe Leu Ala Phe Leu Val Leu Gly Leu Ser Val Leu Thr Thr
500 505 510
Tyr Gly Val His Ala Ile Thr Arg Leu Glu Ala Trp Ser Leu Ala Leu
515 520 525
Leu Ala Leu Phe Leu Val Leu Phe Val Ala Ile Val Leu Thr Ile Trp
530 535 540
Arg Gln Pro Gln Asn Gln Gln Lys Val Ala Phe Met Val Pro Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Leu Pro Ala Phe Ser Ile Leu Val Asn Ile Tyr Leu Met Val
565 570 575
Gln Leu Ser Ala Asp Thr Trp Val Arg Phe Ser Ile Trp Met Ala Ile
580 585 590
Gly Phe Leu Ile Tyr Phe Ser Tyr Gly Ile Arg His Ser Leu Glu Gly
595 600 605
His Leu Arg Asp Glu Asn Asn Glu Glu Asp Ala Tyr Pro Asp Asn Val
610 615 620
His Ala Ala Ala Glu Glu Lys Ser Ala Ile Gln Ala Asn Asp His His
625 630 635 640
Pro Arg Asn Leu Ser Ser Pro Phe Ile Phe His Glu Lys Thr Ser Glu
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Phe
<210> 199
<211> 658
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多肽
<400> 199
Met Ile Pro Cys Arg Ala Ala Leu Thr Phe Ala Arg Cys Leu Ile Arg
1 5 10 15
Arg Lys Ile Val Thr Leu Asp Ser Leu Glu Asp Thr Lys Leu Cys Arg
20 25 30
Cys Leu Ser Thr Met Asp Leu Ile Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu
35 40 45
Gly Ala Gly Val Tyr Val Leu Ala Gly Glu Val Ala Lys Ala Asp Ser
50 55 60
Gly Pro Ser Ile Val Val Ser Phe Leu Ile Ala Ala Leu Ala Ser Val
65 70 75 80
Met Ala Gly Leu Cys Tyr Ala Glu Phe Gly Ala Arg Val Pro Lys Thr
85 90 95
Gly Ser Ala Tyr Leu Tyr Thr Tyr Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala
100 105 110
Phe Ile Thr Gly Trp Asn Leu Ile Leu Ser Tyr Val Ile Gly Thr Ser
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Leu Ala Glu Tyr Pro Asp Phe Phe Ala Val Cys Leu Ile Leu Leu Leu
165 170 175
Ala Gly Leu Leu Ser Phe Gly Val Lys Glu Ser Ala Trp Val Asn Lys
180 185 190
Val Phe Thr Ala Val Asn Ile Leu Val Leu Leu Phe Val Met Val Ala
195 200 205
Gly Phe Val Lys Gly Asn Val Ala Asn Trp Lys Ile Ser Glu Glu Phe
210 215 220
Leu Lys Asn Ile Ser Ala Ser Ala Arg Glu Pro Pro Ser Glu Asn Gly
225 230 235 240
Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Gly Gly Phe Met Pro Tyr Gly Phe Thr Gly
245 250 255
Thr Leu Ala Gly Ala Ala Thr Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp
260 265 270
Cys Ile Ala Thr Thr Gly Glu Glu Val Arg Asn Pro Gln Lys Ala Ile
275 280 285
Pro Ile Gly Ile Val Thr Ser Leu Leu Val Cys Phe Met Ala Tyr Phe
290 295 300
Gly Val Ser Ala Ala Leu Thr Leu Met Met Pro Tyr Tyr Leu Leu Asp
305 310 315 320
Glu Lys Ser Pro Leu Pro Val Ala Phe Glu Tyr Val Gly Trp Gly Pro
325 330 335
Ala Lys Tyr Val Val Ala Ala Gly Ser Leu Cys Ala Leu Ser Thr Ser
340 345 350
Leu Leu Gly Ser Met Phe Pro Leu Pro Arg Ile Leu Phe Ala Met Ala
355 360 365
Arg Asp Gly Leu Leu Phe Arg Phe Leu Ala Arg Val Asn Ser Lys Arg
370 375 380
Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr Leu Thr Ala Gly Val Ile Ser Ala Leu
385 390 395 400
Met Ala Phe Leu Phe Asp Leu Lys Ala Leu Val Asp Met Met Ser Ile
405 410 415
Gly Thr Leu Met Ala Tyr Ser Leu Val Ala Ala Cys Val Leu Ile Leu
420 425 430
Arg Tyr Gln Pro Gly Leu Ser Tyr Asp Gln Pro Lys Cys Ser Pro Glu
435 440 445
Lys Asp Gly Leu Gly Ser Ser Pro Arg Val Thr Ser Lys Ser Glu Ser
450 455 460
Gln Val Thr Met Leu Gln Arg Gln Gly Phe Ser Met Arg Thr Leu Phe
465 470 475 480
Cys Pro Ser Leu Leu Pro Thr Gln Gln Ser Ala Ser Leu Val Ser Phe
485 490 495
Leu Val Gly Phe Leu Ala Phe Leu Val Leu Gly Leu Ser Val Leu Thr
500 505 510
Thr Tyr Gly Val His Ala Ile Thr Arg Leu Glu Ala Trp Ser Leu Ala
515 520 525
Leu Leu Ala Leu Phe Leu Val Leu Phe Val Ala Ile Val Leu Thr Ile
530 535 540
Trp Arg Gln Pro Gln Asn Gln Gln Lys Val Ala Phe Met Val Pro Phe
545 550 555 560
Leu Pro Phe Leu Pro Ala Phe Ser Ile Leu Val Asn Ile Tyr Leu Met
565 570 575
Val Gln Leu Ser Ala Asp Thr Trp Val Arg Phe Ser Ile Trp Met Ala
580 585 590
Ile Gly Phe Leu Ile Tyr Phe Ser Tyr Gly Ile Arg His Ser Leu Glu
595 600 605
Gly His Leu Arg Asp Glu Asn Asn Glu Glu Asp Ala Tyr Pro Asp Asn
610 615 620
Val His Ala Ala Ala Glu Glu Lys Ser Ala Ile Gln Ala Asn Asp His
625 630 635 640
His Pro Arg Asn Leu Ser Ser Pro Phe Ile Phe His Glu Lys Thr Ser
645 650 655
Glu Phe
<210> 200
<211> 658
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多肽
<400> 200
Met Ile Pro Cys Arg Ala Ala Leu Thr Phe Ala Arg Cys Leu Ile Arg
1 5 10 15
Arg Lys Ile Val Thr Leu Asp Ser Leu Glu Asp Thr Lys Leu Cys Arg
20 25 30
Cys Leu Ser Thr Met Asp Leu Ile Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu
35 40 45
Gly Ala Gly Val Tyr Val Leu Ala Gly Glu Val Ala Lys Ala Asp Ser
50 55 60
Gly Pro Ser Ile Val Val Ser Phe Leu Ile Ala Ala Leu Ala Ser Val
65 70 75 80
Met Ala Gly Leu Cys Tyr Ala Glu Phe Gly Ala Arg Val Pro Lys Thr
85 90 95
Gly Ser Ala Tyr Leu Tyr Thr Tyr Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala
100 105 110
Phe Ile Thr Gly Trp Asn Leu Ile Leu Ser Tyr Val Ile Gly Thr Ser
115 120 125
Ser Val Ala Arg Ala Trp Ser Gly Thr Phe Asp Glu Leu Leu Ser Lys
130 135 140
Gln Ile Gly Gln Phe Leu Arg Thr Tyr Phe Arg Met Asn Tyr Thr Gly
145 150 155 160
Leu Ala Glu Tyr Pro Asp Phe Phe Ala Val Cys Leu Ile Leu Leu Leu
165 170 175
Ala Gly Leu Leu Ser Phe Gly Val Lys Glu Ser Ala Trp Val Asn Lys
180 185 190
Val Phe Thr Ala Val Asn Ile Leu Val Leu Leu Phe Val Met Val Ala
195 200 205
Gly Phe Val Lys Gly Asn Val Ala Asn Trp Lys Ile Ser Glu Glu Phe
210 215 220
Leu Lys Asn Ile Ser Ala Ser Ala Arg Glu Pro Pro Ser Glu Asn Gly
225 230 235 240
Thr Ser Ile Tyr Gly Ala Gly Gly Phe Met Pro Tyr Gly Phe Thr Gly
245 250 255
Thr Leu Ala Gly Ala Ala Thr Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp
260 265 270
Cys Ile Ala Thr Thr Gly Glu Glu Val Arg Asn Pro Gln Lys Ala Ile
275 280 285
Pro Ile Gly Ile Val Thr Ser Leu Leu Val Cys Phe Met Ala Tyr Phe
290 295 300
Gly Val Ser Ala Ala Leu Thr Leu Met Met Pro Tyr Tyr Leu Leu Asp
305 310 315 320
Glu Lys Ser Pro Leu Pro Val Ala Phe Glu Tyr Val Gly Trp Gly Pro
325 330 335
Ala Lys Tyr Val Val Ala Ala Gly Ser Leu Cys Ala Leu Ser Thr Ser
340 345 350
Leu Leu Gly Ser Met Phe Pro Leu Pro Arg Ile Leu Phe Ala Met Ala
355 360 365
Glu Asp Gly Leu Leu Phe Arg Phe Leu Ala Arg Val Asn Ser Lys Arg
370 375 380
Gln Ser Pro Val Ala Ala Thr Leu Thr Ala Gly Val Ile Ser Ala Leu
385 390 395 400
Met Ala Phe Leu Phe Asp Leu Lys Ala Leu Val Asp Met Met Ser Ile
405 410 415
Gly Thr Leu Met Ala Tyr Ser Leu Val Ala Ala Cys Val Leu Ile Leu
420 425 430
Arg Tyr Gln Pro Gly Leu Ser Tyr Asp Gln Pro Lys Cys Ser Pro Glu
435 440 445
Lys Asp Gly Leu Gly Ser Ser Pro Arg Val Thr Ser Lys Ser Glu Ser
450 455 460
Gln Val Thr Met Leu Gln Arg Gln Gly Phe Ser Met Arg Thr Leu Phe
465 470 475 480
Cys Pro Ser Leu Leu Pro Thr Gln Gln Ser Ala Ser Leu Val Ser Phe
485 490 495
Leu Val Gly Phe Leu Ala Phe Leu Val Leu Gly Leu Ser Val Leu Thr
500 505 510
Thr Tyr Gly Val His Ala Ile Thr Arg Leu Glu Ala Trp Ser Leu Ala
515 520 525
Leu Leu Ala Leu Phe Leu Val Leu Phe Val Ala Ile Val Leu Thr Ile
530 535 540
Trp Arg Gln Pro Gln Asn Gln Gln Lys Val Ala Phe Met Val Pro Phe
545 550 555 560
Leu Pro Phe Leu Pro Ala Phe Ser Ile Leu Val Asn Ile Tyr Leu Met
565 570 575
Val Gln Leu Ser Ala Asp Thr Trp Val Arg Phe Ser Ile Trp Met Ala
580 585 590
Ile Gly Phe Leu Ile Tyr Phe Ser Tyr Gly Ile Arg His Ser Leu Glu
595 600 605
Gly His Leu Arg Asp Glu Asn Asn Glu Glu Asp Ala Tyr Pro Asp Asn
610 615 620
Val His Ala Ala Ala Glu Glu Lys Ser Ala Ile Gln Ala Asn Asp His
625 630 635 640
His Pro Arg Asn Leu Ser Ser Pro Phe Ile Phe His Glu Lys Thr Ser
645 650 655
Glu Phe
<210> 201
<211> 1971
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 201
atgattccct gcagagccgc tctgaccttc gccagatgcc tgatcagacg gaagatcgtg 60
accctggaca gcctggaaga taccaagctg tgccggtgcc tgagcaccat ggatctgatt 120
gccctcggcg tgggctctac acttggagct ggtgtttatg tgctggctgg cgaggtggcc 180
aaggccgatt ctggaccttc tatcgtggtg tccttcctga tcgccgctct ggcctctgtt 240
atggccggac tgtgttacgc cgagttcgga gccagagtgc ctaagacagg cagcgcctac 300
ctgtacacct acgtgacagt gggagagctg tgggccttta tcaccggctg gaacctgatc 360
ctgagctacg tgatcggcac ctcctctgtg gctagagctt ggagcggcac ctttgacgag 420
ctgctgtcta agcagatcgg ccagttcctg cggacctact tccggatgaa ttacaccggc 480
ctggccgagt atcccgactt cttcgccgtg tgtctgatcc tgctgcttgc cggactgctg 540
agcttcggcg tgaaagagtc tgcctgggtc aacaaggtgt tcaccgccgt gaatatcctg 600
gtgctgctgt tcgtgatggt ggccggcttc gtgaagggca acgtggccaa ttggaagatc 660
agcgaagagt tcctgaagaa catcagcgcc agcgccagag agcctccttc tgaaaacggc 720
accagcatct atggcgcagg cggctttatg ccctacggct ttactggaac actggcaggc 780
gccgctacct gcttctatgc cttcgtgggc ttcgactgta tcgccaccac tggggaagaa 840
gtgcggaacc ctcagaaggc tatccccatc ggcatcgtga caagcctgct cgtgtgcttc 900
atggcctact tcggagtgtc cgccgcactg accctgatga tgccttacta cctgctggac 960
gagaagtccc ctctgcctgt ggcctttgag tatgttggct ggggccctgc caaatacgtg 1020
gtggctgctg gatctctgtg cgccctgtct acatctctgc tgggcagcat gttccctctg 1080
ccaagaatcc tgttcgccat ggccgaggat ggcctgctgt tcagattcct ggccagagtg 1140
agcaagcggc agtctcctgt ggccgctaca cttacagctg gcgtgatctc tgccctgatg 1200
gctttcctgt tcgacctgaa ggccctggtg gacatgatga gcatcggcac actgatggcc 1260
tacagcctgg tggcagcctg cgtgctgatt ctgagatacc agccaggcct gtcctacgac 1320
cagcctaagt gttcccctga gaaggacggc ctgggcagct ctcctagagt gacaagcaag 1380
agcgagagcc aagtgaccat gctgcagaga cagggcttca gcatgcggac cctgttctgc 1440
ccttctctgc tgcctacaca gcagtctgct agcctggtgt ctttcctcgt gggatttctg 1500
gcctttctgg tgctgggcct gagcgtgctg acaacatatg gggtgcacgc catcaccaga 1560
ctggaagctt ggagtctggc tctgctggcc ctgttcctgg ttctgtttgt ggccatcgtg 1620
ctgaccattt ggcggcagcc ccagaaccag cagaaagtgg ctttcatggt gccctttctg 1680
cctttcctgc cagccttcag catcctggtc aacatctacc tgatggtgca gctgagcgcc 1740
gacacctggg tccgattttc catctggatg gctatcggct tcctcatcta cttcagctac 1800
ggcatccggc actccctgga aggccatctg agagatgaga acaacgaaga ggacgcttac 1860
cccgacaacg tgcacgccgc tgccgaagag aaatctgcca tccaggccaa cgaccaccat 1920
ccaagaaacc tgagcagccc cttcatcttc cacgagaaaa ccagcgagtt t 1971
<210> 202
<211> 1974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 202
atgattccct gcagagccgc tctgaccttc gccagatgcc tgatcagacg gaagatcgtg 60
accctggaca gcctggaaga taccaagctg tgccggtgcc tgagcaccat ggatctgatt 120
gccctcggcg tgggctctac acttggagct ggtgtttatg tgctggctgg cgaggtggcc 180
aaggccgatt ctggaccttc tatcgtggtg tccttcctga tcgccgctct ggcctctgtt 240
atggccggac tgtgttacgc cgagttcgga gccagagtgc ctaagacagg cagcgcctac 300
ctgtacacct acgtgacagt gggagagctg tgggccttta tcaccggctg gaacctgatc 360
ctgagctacg tgatcggcac ctcctctgtg gctagagctt ggagcggcac ctttgacgag 420
ctgctgtcta agcagatcgg ccagttcctg cggacctact tccggatgaa ttacaccggc 480
ctggccgagt atcccgactt cttcgccgtg tgtctgatcc tgctgcttgc cggactgctg 540
agcttcggcg tgaaagagtc tgcctgggtc aacaaggtgt tcaccgccgt gaatatcctg 600
gtgctgctgt tcgtgatggt ggccggcttc gtgaagggca acgtggccaa ttggaagatc 660
agcgaagagt tcctgaagaa catcagcgcc agcgccagag agcctccttc tgaaaacggc 720
accagcatct atggcgcagg cggctttatg ccctacggct ttactggaac actggcaggc 780
gccgctacct gcttctatgc cttcgtgggc ttcgactgta tcgccaccac tggggaagaa 840
gtgcggaacc ctcagaaggc tatccccatc ggcatcgtga caagcctgct cgtgtgcttc 900
atggcctact tcggagtgtc cgccgcactg accctgatga tgccttacta cctgctggac 960
gagaagtccc ctctgcctgt ggcctttgag tatgttggct ggggccctgc caaatacgtg 1020
gtggctgctg gatctctgtg cgccctgtct acatctctgc tgggcagcat gttccctctg 1080
ccaagaatcc tgttcgccat ggcccgggat ggcctgctgt tcagattcct ggccagagtg 1140
aacagcaagc ggcagtctcc tgtggccgct acacttacag ctggcgtgat ctctgccctg 1200
atggctttcc tgttcgacct gaaggccctg gtggacatga tgagcatcgg cacactgatg 1260
gcctacagcc tggtggcagc ctgcgtgctg attctgagat accagccagg cctgtcctac 1320
gaccagccta agtgttcccc tgagaaggac ggcctgggca gctctcctag agtgacaagc 1380
aagagcgaga gccaagtgac catgctgcag agacagggct tcagcatgcg gaccctgttc 1440
tgcccttctc tgctgcctac acagcagtct gctagcctgg tgtctttcct cgtgggattt 1500
ctggcctttc tggtgctggg cctgagcgtg ctgacaacat atggggtgca cgccatcacc 1560
agactggaag cttggagtct ggctctgctg gccctgttcc tggttctgtt tgtggccatc 1620
gtgctgacca tttggcggca gccccagaac cagcagaaag tggctttcat ggtgcccttt 1680
ctgcctttcc tgccagcctt cagcatcctg gtcaacatct acctgatggt gcagctgagc 1740
gccgacacct gggtccgatt ttccatctgg atggctatcg gcttcctcat ctacttcagc 1800
tacggcatcc ggcactccct ggaaggccat ctgagagatg agaacaacga agaggacgct 1860
taccccgaca acgtgcacgc cgctgccgaa gagaaatctg ccatccaggc caacgaccac 1920
catccaagaa acctgagcag ccccttcatc ttccacgaga aaaccagcga gttt 1974
<210> 203
<211> 1974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 203
atgattccct gcagagccgc tctgaccttc gccagatgcc tgatcagacg gaagatcgtg 60
accctggaca gcctggaaga taccaagctg tgccggtgcc tgagcaccat ggatctgatt 120
gccctcggcg tgggctctac acttggagct ggtgtttatg tgctggctgg cgaggtggcc 180
aaggccgatt ctggaccttc tatcgtggtg tccttcctga tcgccgctct ggcctctgtt 240
atggccggac tgtgttacgc cgagttcgga gccagagtgc ctaagacagg cagcgcctac 300
ctgtacacct acgtgacagt gggagagctg tgggccttta tcaccggctg gaacctgatc 360
ctgagctacg tgatcggcac ctcctctgtg gctagagctt ggagcggcac ctttgacgag 420
ctgctgtcta agcagatcgg ccagttcctg cggacctact tccggatgaa ttacaccggc 480
ctggccgagt atcccgactt cttcgccgtg tgtctgatcc tgctgcttgc cggactgctg 540
agcttcggcg tgaaagagtc tgcctgggtc aacaaggtgt tcaccgccgt gaatatcctg 600
gtgctgctgt tcgtgatggt ggccggcttc gtgaagggca acgtggccaa ttggaagatc 660
agcgaagagt tcctgaagaa catcagcgcc agcgccagag agcctccttc tgaaaacggc 720
accagcatct atggcgcagg cggctttatg ccctacggct ttactggaac actggcaggc 780
gccgctacct gcttctatgc cttcgtgggc ttcgactgta tcgccaccac tggggaagaa 840
gtgcggaacc ctcagaaggc tatccccatc ggcatcgtga caagcctgct cgtgtgcttc 900
atggcctact tcggagtgtc cgccgcactg accctgatga tgccttacta cctgctggac 960
gagaagtccc ctctgcctgt ggcctttgag tatgttggct ggggccctgc caaatacgtg 1020
gtggctgctg gatctctgtg cgccctgtct acatctctgc tgggcagcat gttccctctg 1080
ccaagaatcc tgttcgccat ggccgaggat ggcctgctgt tcagattcct ggccagagtg 1140
aacagcaagc ggcagtctcc tgtggccgct acacttacag ctggcgtgat ctctgccctg 1200
atggctttcc tgttcgacct gaaggccctg gtggacatga tgagcatcgg cacactgatg 1260
gcctacagcc tggtggcagc ctgcgtgctg attctgagat accagccagg cctgtcctac 1320
gaccagccta agtgttcccc tgagaaggac ggcctgggca gctctcctag agtgacaagc 1380
aagagcgaga gccaagtgac catgctgcag agacagggct tcagcatgcg gaccctgttc 1440
tgcccttctc tgctgcctac acagcagtct gctagcctgg tgtctttcct cgtgggattt 1500
ctggcctttc tggtgctggg cctgagcgtg ctgacaacat atggggtgca cgccatcacc 1560
agactggaag cttggagtct ggctctgctg gccctgttcc tggttctgtt tgtggccatc 1620
gtgctgacca tttggcggca gccccagaac cagcagaaag tggctttcat ggtgcccttt 1680
ctgcctttcc tgccagcctt cagcatcctg gtcaacatct acctgatggt gcagctgagc 1740
gccgacacct gggtccgatt ttccatctgg atggctatcg gcttcctcat ctacttcagc 1800
tacggcatcc ggcactccct ggaaggccat ctgagagatg agaacaacga agaggacgct 1860
taccccgaca acgtgcacgc cgctgccgaa gagaaatctg ccatccaggc caacgaccac 1920
catccaagaa acctgagcag ccccttcatc ttccacgaga aaaccagcga gttt 1974
<210> 204
<211> 2215
<212> DNA
<213> 智人
<400> 204
aagccgcagc tttgaagcct gagcggccga actcggcagc tccaacccaa ctcggcttaa 60
ctccgcctca ccgagcccag tccaagactc tgtgctccct aggtttgcaa cagctctctg 120
gatgccgtgg caagcatttc gcagatttgg tcaaaagctg gtacgcagac gtacactgga 180
gtcaggcatg gctgagactc gccttgccag atgcctaagc accctggatt tagtggccct 240
gggtgtgggc agcacattgg gtgcaggcgt gtatgtccta gctggcgagg tggccaaaga 300
taaagcaggg ccatccattg tgatctgctt tttggtggct gccctgtctt ctgtgttggc 360
tgggctgtgc tatgcggagt ttggtgcccg ggttccccgt tctggttcgg catatctcta 420
cagctatgtc actgtgggtg aactctgggc cttcaccact ggctggaacc tcatcctctc 480
ctatgtcatt ggtacagcca gtgtggcccg ggcctggagc tctgcttttg acaacctgat 540
tgggaaccac atctctaaga ctctgcaggg gtccattgca ctgcacgtgc cccatgtcct 600
tgcagaatat ccagatttct ttgctttggg cctcgtgttg ctgctcactg gattgttggc 660
tctcggggct agtgagtcgg ccctggttac caaagtgttc acaggcgtga accttttggt 720
tcttgggttc gtcatgatct ctggcttcgt taagggggac gtgcacaact ggaagctcac 780
agaagaggac tacgaattgg ccatggctga actcaatgac acctatagct tgggtcctct 840
gggctctgga ggatttgtgc ctttcggctt cgagggaatt ctccgtggag cagcgacctg 900
tttctatgca tttgttggtt tcgactgtat tgctaccact ggagaagaag cccagaatcc 960
ccagcgttcc atcccgatgg gcattgtgat ctcactgtct gtctgctttt tggcgtattt 1020
tgctgtctct tctgcactca ccctgatgat gccttactac cagcttcagc ctgagagccc 1080
tttgcctgag gcatttctct acattggatg ggctcctgcc cgctatgttg tggctgttgg 1140
ctccctctgt gctctttcta ccagcctcct gggctccatg ttccccatgc ctcgggtgat 1200
ctacgcgatg gcagaggatg gcctcctgtt ccgtgtactt gctcggatcc acaccggcac 1260
acgcacccca atcatagcca ccgtggtctc tggcattatt gcagcattca tggcattcct 1320
cttcaaactc actgatcttg tggacctcat gtcaattggg accctgcttg cttactccct 1380
ggtgtcgatt tgtgttctca tcctcaggta tcaacctgat caggagacaa agactgggga 1440
agaagtggag ttgcaggagg aggcaataac tactgaatca gagaagttga ccctatgggg 1500
actatttttc ccactcaact ccatccccac tccactctct ggccaaattg tctatgtttg 1560
ttcctcattg cttgctgtcc tgctgactgc tctttgcctg gtgctggccc agtggtcagt 1620
tccattgctt tctggagacc tgctgtggac tgcagtggtt gtgctgctcc tgctgctcat 1680
tattgggatc attgtggtca tctggagaca gccacagagt tccactcccc ttcactttaa 1740
ggtgcctgct ttgcctctcc tcccactaat gagcatcttt gtgaatattt accttatgat 1800
gcagatgaca gctggtacct gggcccgatt tggggtctgg atgctgattg gctttgctat 1860
ctacttcggc tatgggatcc agcacagcct ggaagagatt aagagtaacc aaccctcacg 1920
caagtctaga gccaaaactg tagaccttga tcccggcact ctctatgtcc actcagtttg 1980
acatcgtcac acctaaatgc tgtctggtcc cctgcacaat aatggagagt actcctgacc 2040
ccagtgacag ctagccctcc cctgtgatgg tggtggtgga tactaataca gttctgtacg 2100
atgtgaagga tgtgtctttg ctatttcttg tctattttaa cccgtctgct tctaaatgat 2160
gtctagctgc ttaccaactt taaaaaatga tattaaaaga aagtagaaaa ataaa 2215
<210> 205
<211> 2239
<212> DNA
<213> 智人
<400> 205
aagccgcagc tttgaagcct gagcggccga actcggcagc tccaacccaa ctcggcttaa 60
ctccgcctca ccgagcccag tccaagactc tgtgctccct aggtttgcaa cagctctctg 120
atcatcttct tcaattcctg ctaggatgcc gtggcaagca tttcgcagat ttggtcaaaa 180
gctggtacgc agacgtacac tggagtcagg catggctgag actcgccttg ccagatgcct 240
aagcaccctg gatttagtgg ccctgggtgt gggcagcaca ttgggtgcag gcgtgtatgt 300
cctagctggc gaggtggcca aagataaagc agggccatcc attgtgatct gctttttggt 360
ggctgccctg tcttctgtgt tggctgggct gtgctatgcg gagtttggtg cccgggttcc 420
ccgttctggt tcggcatatc tctacagcta tgtcactgtg ggtgaactct gggccttcac 480
cactggctgg aacctcatcc tctcctatgt cattggtaca gccagtgtgg cccgggcctg 540
gagctctgct tttgacaacc tgattgggaa ccacatctct aagactctgc aggggtccat 600
tgcactgcac gtgccccatg tccttgcaga atatccagat ttctttgctt tgggcctcgt 660
gttgctgctc actggattgt tggctctcgg ggctagtgag tcggccctgg ttaccaaagt 720
gttcacaggc gtgaaccttt tggttcttgg gttcgtcatg atctctggct tcgttaaggg 780
ggacgtgcac aactggaagc tcacagaaga ggactacgaa ttggccatgg ctgaactcaa 840
tgacacctat agcttgggtc ctctgggctc tggaggattt gtgcctttcg gcttcgaggg 900
aattctccgt ggagcagcga cctgtttcta tgcatttgtt ggtttcgact gtattgctac 960
cactggagaa gaagcccaga atccccagcg ttccatcccg atgggcattg tgatctcact 1020
gtctgtctgc tttttggcgt attttgctgt ctcttctgca ctcaccctga tgatgcctta 1080
ctaccagctt cagcctgaga gccctttgcc tgaggcattt ctctacattg gatgggctcc 1140
tgcccgctat gttgtggctg ttggctccct ctgtgctctt tctaccagcc tcctgggctc 1200
catgttcccc atgcctcggg tgatctacgc gatggcagag gatggcctcc tgttccgtgt 1260
acttgctcgg atccacaccg gcacacgcac cccaatcata gccaccgtgg tctctggcat 1320
tattgcagca ttcatggcat tcctcttcaa actcactgat cttgtggacc tcatgtcaat 1380
tgggaccctg cttgcttact ccctggtgtc gatttgtgtt ctcatcctca ggtatcaacc 1440
tgatcaggag acaaagactg gggaagaagt ggagttgcag gaggaggcaa taactactga 1500
atcagagaag ttgaccctat ggggactatt tttcccactc aactccatcc ccactccact 1560
ctctggccaa attgtctatg tttgttcctc attgcttgct gtcctgctga ctgctctttg 1620
cctggtgctg gcccagtggt cagttccatt gctttctgga gacctgctgt ggactgcagt 1680
ggttgtgctg ctcctgctgc tcattattgg gatcattgtg gtcatctgga gacagccaca 1740
gagttccact ccccttcact ttaaggtgcc tgctttgcct ctcctcccac taatgagcat 1800
ctttgtgaat atttacctta tgatgcagat gacagctggt acctgggccc gatttggggt 1860
ctggatgctg attggctttg ctatctactt cggctatggg atccagcaca gcctggaaga 1920
gattaagagt aaccaaccct cacgcaagtc tagagccaaa actgtagacc ttgatcccgg 1980
cactctctat gtccactcag tttgacatcg tcacacctaa atgctgtctg gtcccctgca 2040
caataatgga gagtactcct gaccccagtg acagctagcc ctcccctgtg atggtggtgg 2100
tggatactaa tacagttctg tacgatgtga aggatgtgtc tttgctattt cttgtctatt 2160
ttaacccgtc tgcttctaaa tgatgtctag ctgcttacca actttaaaaa atgatattaa 2220
aagaaagtag aaaaataaa 2239
<210> 206
<400> 206
000
<210> 207
<400> 207
000
<210> 208
<211> 619
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-3序列
<400> 208
Met Pro Trp Gln Ala Phe Arg Arg Phe Gly Gln Lys Leu Val Arg Arg
1 5 10 15
Arg Thr Leu Glu Ser Gly Met Ala Glu Thr Arg Leu Ala Arg Cys Leu
20 25 30
Ser Thr Leu Asp Leu Val Ala Leu Gly Val Gly Ser Thr Leu Gly Ala
35 40 45
Gly Val Tyr Val Leu Ala Gly Glu Val Ala Lys Asp Lys Ala Gly Pro
50 55 60
Ser Ile Val Ile Cys Phe Leu Val Ala Ala Leu Ser Ser Val Leu Ala
65 70 75 80
Gly Leu Cys Tyr Ala Glu Phe Gly Ala Arg Val Pro Arg Ser Gly Ser
85 90 95
Ala Tyr Leu Tyr Ser Tyr Val Thr Val Gly Glu Leu Trp Ala Phe Thr
100 105 110
Thr Gly Trp Asn Leu Ile Leu Ser Tyr Val Ile Gly Thr Ala Ser Val
115 120 125
Ala Arg Ala Trp Ser Ser Ala Phe Asp Asn Leu Ile Gly Asn His Ile
130 135 140
Ser Lys Thr Leu Gln Gly Ser Ile Ala Leu His Val Pro His Val Leu
145 150 155 160
Ala Glu Tyr Pro Asp Phe Phe Ala Leu Gly Leu Val Leu Leu Leu Thr
165 170 175
Gly Leu Leu Ala Leu Gly Ala Ser Glu Ser Ala Leu Val Thr Lys Val
180 185 190
Phe Thr Gly Val Asn Leu Leu Val Leu Gly Phe Val Met Ile Ser Gly
195 200 205
Phe Val Lys Gly Asp Val His Asn Trp Lys Leu Thr Glu Glu Asp Tyr
210 215 220
Glu Leu Ala Met Ala Glu Leu Asn Asp Thr Tyr Ser Leu Gly Pro Leu
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Phe Val Pro Phe Gly Phe Glu Gly Ile Leu Arg Gly
245 250 255
Ala Ala Thr Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp Cys Ile Ala Thr
260 265 270
Thr Gly Glu Glu Ala Gln Asn Pro Gln Arg Ser Ile Pro Met Gly Ile
275 280 285
Val Ile Ser Leu Ser Val Cys Phe Leu Ala Tyr Phe Ala Val Ser Ser
290 295 300
Ala Leu Thr Leu Met Met Pro Tyr Tyr Gln Leu Gln Pro Glu Ser Pro
305 310 315 320
Leu Pro Glu Ala Phe Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Pro Ala Arg Tyr Val
325 330 335
Val Ala Val Gly Ser Leu Cys Ala Leu Ser Thr Ser Leu Leu Gly Ser
340 345 350
Met Phe Pro Met Pro Arg Val Ile Tyr Ala Met Ala Glu Asp Gly Leu
355 360 365
Leu Phe Arg Val Leu Ala Arg Ile His Thr Gly Thr Arg Thr Pro Ile
370 375 380
Ile Ala Thr Val Val Ser Gly Ile Ile Ala Ala Phe Met Ala Phe Leu
385 390 395 400
Phe Lys Leu Thr Asp Leu Val Asp Leu Met Ser Ile Gly Thr Leu Leu
405 410 415
Ala Tyr Ser Leu Val Ser Ile Cys Val Leu Ile Leu Arg Tyr Gln Pro
420 425 430
Asp Gln Glu Thr Lys Thr Gly Glu Glu Val Glu Leu Gln Glu Glu Ala
435 440 445
Ile Thr Thr Glu Ser Glu Lys Leu Thr Leu Trp Gly Leu Phe Phe Pro
450 455 460
Leu Asn Ser Ile Pro Thr Pro Leu Ser Gly Gln Ile Val Tyr Val Cys
465 470 475 480
Ser Ser Leu Leu Ala Val Leu Leu Thr Ala Leu Cys Leu Val Leu Ala
485 490 495
Gln Trp Ser Val Pro Leu Leu Ser Gly Asp Leu Leu Trp Thr Ala Val
500 505 510
Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Ile Ile Gly Ile Ile Val Val Ile Trp
515 520 525
Arg Gln Pro Gln Ser Ser Thr Pro Leu His Phe Lys Val Pro Ala Leu
530 535 540
Pro Leu Leu Pro Leu Met Ser Ile Phe Val Asn Ile Tyr Leu Met Met
545 550 555 560
Gln Met Thr Ala Gly Thr Trp Ala Arg Phe Gly Val Trp Met Leu Ile
565 570 575
Gly Phe Ala Ile Tyr Phe Gly Tyr Gly Ile Gln His Ser Leu Glu Glu
580 585 590
Ile Lys Ser Asn Gln Pro Ser Arg Lys Ser Arg Ala Lys Thr Val Asp
595 600 605
Leu Asp Pro Gly Thr Leu Tyr Val His Ser Val
610 615
<210> 209
<211> 1860
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-3序列
<400> 209
atgccgtggc aagcatttcg cagatttggt caaaagctgg tacgcagacg tacactggag 60
tcaggcatgg ctgagactcg ccttgccaga tgcctaagca ccctggattt agtggccctg 120
ggtgtgggca gcacattggg tgcaggcgtg tatgtcctag ctggcgaggt ggccaaagat 180
aaagcagggc catccattgt gatctgcttt ttggtggctg ccctgtcttc tgtgttggct 240
gggctgtgct atgcggagtt tggtgcccgg gttccccgtt ctggttcggc atatctctac 300
agctatgtca ctgtgggtga actctgggcc ttcaccactg gctggaacct catcctctcc 360
tatgtcattg gtacagccag tgtggcccgg gcctggagct ctgcttttga caacctgatt 420
gggaaccaca tctctaagac tctgcagggg tccattgcac tgcacgtgcc ccatgtcctt 480
gcagaatatc cagatttctt tgctttgggc ctcgtgttgc tgctcactgg attgttggct 540
ctcggggcta gtgagtcggc cctggttacc aaagtgttca caggcgtgaa ccttttggtt 600
cttgggttcg tcatgatctc tggcttcgtt aagggggacg tgcacaactg gaagctcaca 660
gaagaggact acgaattggc catggctgaa ctcaatgaca cctatagctt gggtcctctg 720
ggctctggag gatttgtgcc tttcggcttc gagggaattc tccgtggagc agcgacctgt 780
ttctatgcat ttgttggttt cgactgtatt gctaccactg gagaagaagc ccagaatccc 840
cagcgttcca tcccgatggg cattgtgatc tcactgtctg tctgcttttt ggcgtatttt 900
gctgtctctt ctgcactcac cctgatgatg ccttactacc agcttcagcc tgagagccct 960
ttgcctgagg catttctcta cattggatgg gctcctgccc gctatgttgt ggctgttggc 1020
tccctctgtg ctctttctac cagcctcctg ggctccatgt tccccatgcc tcgggtgatc 1080
tacgcgatgg cagaggatgg cctcctgttc cgtgtacttg ctcggatcca caccggcaca 1140
cgcaccccaa tcatagccac cgtggtctct ggcattattg cagcattcat ggcattcctc 1200
ttcaaactca ctgatcttgt ggacctcatg tcaattggga ccctgcttgc ttactccctg 1260
gtgtcgattt gtgttctcat cctcaggtat caacctgatc aggagacaaa gactggggaa 1320
gaagtggagt tgcaggagga ggcaataact actgaatcag agaagttgac cctatgggga 1380
ctatttttcc cactcaactc catccccact ccactctctg gccaaattgt ctatgtttgt 1440
tcctcattgc ttgctgtcct gctgactgct ctttgcctgg tgctggccca gtggtcagtt 1500
ccattgcttt ctggagacct gctgtggact gcagtggttg tgctgctcct gctgctcatt 1560
attgggatca ttgtggtcat ctggagacag ccacagagtt ccactcccct tcactttaag 1620
gtgcctgctt tgcctctcct cccactaatg agcatctttg tgaatattta ccttatgatg 1680
cagatgacag ctggtacctg ggcccgattt ggggtctgga tgctgattgg ctttgctatc 1740
tacttcggct atgggatcca gcacagcctg gaagagatta agagtaacca accctcacgc 1800
aagtctagag ccaaaactgt agaccttgat cccggcactc tctatgtcca ctcagtttga 1860
<210> 210
<211> 2316
<212> DNA
<213> 智人
<400> 210
agagcggagg cagcggctgc ggcagcagca ggttccagta gctggctcgg tgctcttctc 60
ggccacctgc catggcccgg gggctgccca ccattgctag cctggcacgc ttatgccaga 120
agctgaaccg cctgaagccg ctggaggact ccaccatgga gacgtcactg cggcgctgcc 180
tgtccacgct ggacctgact cttctgggcg tgggtggcat ggtgggctcg ggtctctacg 240
tgctcacagg tgccgtggcc aaggaggtgg ctggccctgc tgtgctcttg tccttcggtg 300
tggccgctgt ggcctccctg ctggcagccc tatgctatgc agaatttggg gcacgtgtgc 360
cacgcacggg ctctgcctac ctgttcacct acgtatccat gggcgagctg tgggccttcc 420
tcatcggctg gaatgttctc ctcgaataca tcatcggtgg cgccgccgtg gcccgtgcct 480
ggagtggcta cctggactct atgttcagcc acagcatccg caacttcact gagacccacg 540
tgggttcttg gcaggtgccc ctcctgggcc actacccgga cttcctggct gctggcatca 600
tcctcctggc ctctgccttt gtctcctgtg gagcccgcgt gtcctcctgg ctcaatcaca 660
ccttctcggc catcagcctg cttgtcattc tcttcattgt catcctgggc ttcatcctgg 720
cccagcctca caactggagc gctgacgaag gcggctttgc acccttcggc ttctccggcg 780
tcatggccgg cactgcctcc tgcttctatg ctttcgtggg cttcgacgtc attgccgcct 840
ccagtgagga ggcccagaac ccacggcggt ctgtgcctct ggccatcgcc atctcgcttg 900
ccattgcagc tggtgcctac atccttgtct ccaccgtgct aaccctcatg gtgccctggc 960
acagcctgga ccccgactca gcgcttgcag atgccttcta ccagcggggc tacaggtggg 1020
ctggcttcat cgtggcagct ggctccatct gcgccatgaa caccgtcctg ctcagcctcc 1080
tcttctccct gccacgcatt gtctatgcca tggccgccga tgggctcttc ttccaggtgt 1140
ttgcccatgt gcacccccgg acacaggtgc ctgtggcggg caccctggcg ttcgggctcc 1200
tcacggcctt cctggcactg ctgctggacc tggagtcgct ggttcagttc ctgtcccttg 1260
gcacactcct ggcctacaca ttcgtggcca ccagtatcat tgtgctgcgc ttccagaagt 1320
cttccccgcc cagctcccca ggcccagcca gccctggccc cctgaccaag cagcagagct 1380
ccttctcaga ccacctacag ctggtgggca ctgtacacgc ctccgtccct gagccagggg 1440
agctgaagcc agccctgagg ccctacctgg gcttcttgga tgggtacagc cctggagcag 1500
tggtgacttg ggcgcttggc gttatgttgg cctcagccat caccataggc tgcgtgcttg 1560
tctttgggaa ctcgaccctg cacctcccac actggggtta catcctgctg ctcctgctca 1620
ccagtgtcat gtttctgctc agcctccttg tcctgggggc tcaccagcaa cagtatcggg 1680
aagacttatt tcagatcccc atggttcccc tgattccagc cctgagcatc gtcctcaaca 1740
tctgcctcat gctgaaactt agctatctga cctgggtgcg cttctccatc tggctgctga 1800
tgggacttgc agtgtatttc ggctatggca tccggcatag caaggagaac cagcgggagc 1860
tgccagggct gaactccaca cactacgtgg tattccccag gggcagcctg gaggagacag 1920
tgcaggctat gcagcccccc agccaggcac cagcacagga ccctggccat atggagtagc 1980
tgatcagccc acacttgccc cgccctccca cacctgcttg ggaggccaga gaggccagac 2040
aagccgagag ccccttctgt tgtgggcagc ctgggtttgc aggcctgcac aggctgggga 2100
gtcctcagga ccttaggacc ttcatccagg ggctgggctt cgggtcttca ggagtgggcc 2160
ttggctggtg ctggtgccat ggactctgcc cagagccttc ttgtttatga tcagctccag 2220
ctacctgggc agttgtggtg gggtggatgg gaaggcccac agcccaaggg atccataata 2280
ataattgctt ggccagccat gtggcctgct ggcgta 2316
<210> 211
<400> 211
000
<210> 212
<211> 635
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-4序列
<400> 212
Met Ala Arg Gly Leu Pro Thr Ile Ala Ser Leu Ala Arg Leu Cys Gln
1 5 10 15
Lys Leu Asn Arg Leu Lys Pro Leu Glu Asp Ser Thr Met Glu Thr Ser
20 25 30
Leu Arg Arg Cys Leu Ser Thr Leu Asp Leu Thr Leu Leu Gly Val Gly
35 40 45
Gly Met Val Gly Ser Gly Leu Tyr Val Leu Thr Gly Ala Val Ala Lys
50 55 60
Glu Val Ala Gly Pro Ala Val Leu Leu Ser Phe Gly Val Ala Ala Val
65 70 75 80
Ala Ser Leu Leu Ala Ala Leu Cys Tyr Ala Glu Phe Gly Ala Arg Val
85 90 95
Pro Arg Thr Gly Ser Ala Tyr Leu Phe Thr Tyr Val Ser Met Gly Glu
100 105 110
Leu Trp Ala Phe Leu Ile Gly Trp Asn Val Leu Leu Glu Tyr Ile Ile
115 120 125
Gly Gly Ala Ala Val Ala Arg Ala Trp Ser Gly Tyr Leu Asp Ser Met
130 135 140
Phe Ser His Ser Ile Arg Asn Phe Thr Glu Thr His Val Gly Ser Trp
145 150 155 160
Gln Val Pro Leu Leu Gly His Tyr Pro Asp Phe Leu Ala Ala Gly Ile
165 170 175
Ile Leu Leu Ala Ser Ala Phe Val Ser Cys Gly Ala Arg Val Ser Ser
180 185 190
Trp Leu Asn His Thr Phe Ser Ala Ile Ser Leu Leu Val Ile Leu Phe
195 200 205
Ile Val Ile Leu Gly Phe Ile Leu Ala Gln Pro His Asn Trp Ser Ala
210 215 220
Asp Glu Gly Gly Phe Ala Pro Phe Gly Phe Ser Gly Val Met Ala Gly
225 230 235 240
Thr Ala Ser Cys Phe Tyr Ala Phe Val Gly Phe Asp Val Ile Ala Ala
245 250 255
Ser Ser Glu Glu Ala Gln Asn Pro Arg Arg Ser Val Pro Leu Ala Ile
260 265 270
Ala Ile Ser Leu Ala Ile Ala Ala Gly Ala Tyr Ile Leu Val Ser Thr
275 280 285
Val Leu Thr Leu Met Val Pro Trp His Ser Leu Asp Pro Asp Ser Ala
290 295 300
Leu Ala Asp Ala Phe Tyr Gln Arg Gly Tyr Arg Trp Ala Gly Phe Ile
305 310 315 320
Val Ala Ala Gly Ser Ile Cys Ala Met Asn Thr Val Leu Leu Ser Leu
325 330 335
Leu Phe Ser Leu Pro Arg Ile Val Tyr Ala Met Ala Ala Asp Gly Leu
340 345 350
Phe Phe Gln Val Phe Ala His Val His Pro Arg Thr Gln Val Pro Val
355 360 365
Ala Gly Thr Leu Ala Phe Gly Leu Leu Thr Ala Phe Leu Ala Leu Leu
370 375 380
Leu Asp Leu Glu Ser Leu Val Gln Phe Leu Ser Leu Gly Thr Leu Leu
385 390 395 400
Ala Tyr Thr Phe Val Ala Thr Ser Ile Ile Val Leu Arg Phe Gln Lys
405 410 415
Ser Ser Pro Pro Ser Ser Pro Gly Pro Ala Ser Pro Gly Pro Leu Thr
420 425 430
Lys Gln Gln Ser Ser Phe Ser Asp His Leu Gln Leu Val Gly Thr Val
435 440 445
His Ala Ser Val Pro Glu Pro Gly Glu Leu Lys Pro Ala Leu Arg Pro
450 455 460
Tyr Leu Gly Phe Leu Asp Gly Tyr Ser Pro Gly Ala Val Val Thr Trp
465 470 475 480
Ala Leu Gly Val Met Leu Ala Ser Ala Ile Thr Ile Gly Cys Val Leu
485 490 495
Val Phe Gly Asn Ser Thr Leu His Leu Pro His Trp Gly Tyr Ile Leu
500 505 510
Leu Leu Leu Leu Thr Ser Val Met Phe Leu Leu Ser Leu Leu Val Leu
515 520 525
Gly Ala His Gln Gln Gln Tyr Arg Glu Asp Leu Phe Gln Ile Pro Met
530 535 540
Val Pro Leu Ile Pro Ala Leu Ser Ile Val Leu Asn Ile Cys Leu Met
545 550 555 560
Leu Lys Leu Ser Tyr Leu Thr Trp Val Arg Phe Ser Ile Trp Leu Leu
565 570 575
Met Gly Leu Ala Val Tyr Phe Gly Tyr Gly Ile Arg His Ser Lys Glu
580 585 590
Asn Gln Arg Glu Leu Pro Gly Leu Asn Ser Thr His Tyr Val Val Phe
595 600 605
Pro Arg Gly Ser Leu Glu Glu Thr Val Gln Ala Met Gln Pro Pro Ser
610 615 620
Gln Ala Pro Ala Gln Asp Pro Gly His Met Glu
625 630 635
<210> 213
<211> 1908
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAT-4序列
<400> 213
atggcccggg ggctgcccac cattgctagc ctggcacgct tatgccagaa gctgaaccgc 60
ctgaagccgc tggaggactc caccatggag acgtcactgc ggcgctgcct gtccacgctg 120
gacctgactc ttctgggcgt gggtggcatg gtgggctcgg gtctctacgt gctcacaggt 180
gccgtggcca aggaggtggc tggccctgct gtgctcttgt ccttcggtgt ggccgctgtg 240
gcctccctgc tggcagccct atgctatgca gaatttgggg cacgtgtgcc acgcacgggc 300
tctgcctacc tgttcaccta cgtatccatg ggcgagctgt gggccttcct catcggctgg 360
aatgttctcc tcgaatacat catcggtggc gccgccgtgg cccgtgcctg gagtggctac 420
ctggactcta tgttcagcca cagcatccgc aacttcactg agacccacgt gggttcttgg 480
caggtgcccc tcctgggcca ctacccggac ttcctggctg ctggcatcat cctcctggcc 540
tctgcctttg tctcctgtgg agcccgcgtg tcctcctggc tcaatcacac cttctcggcc 600
atcagcctgc ttgtcattct cttcattgtc atcctgggct tcatcctggc ccagcctcac 660
aactggagcg ctgacgaagg cggctttgca cccttcggct tctccggcgt catggccggc 720
actgcctcct gcttctatgc tttcgtgggc ttcgacgtca ttgccgcctc cagtgaggag 780
gcccagaacc cacggcggtc tgtgcctctg gccatcgcca tctcgcttgc cattgcagct 840
ggtgcctaca tccttgtctc caccgtgcta accctcatgg tgccctggca cagcctggac 900
cccgactcag cgcttgcaga tgccttctac cagcggggct acaggtgggc tggcttcatc 960
gtggcagctg gctccatctg cgccatgaac accgtcctgc tcagcctcct cttctccctg 1020
ccacgcattg tctatgccat ggccgccgat gggctcttct tccaggtgtt tgcccatgtg 1080
cacccccgga cacaggtgcc tgtggcgggc accctggcgt tcgggctcct cacggccttc 1140
ctggcactgc tgctggacct ggagtcgctg gttcagttcc tgtcccttgg cacactcctg 1200
gcctacacat tcgtggccac cagtatcatt gtgctgcgct tccagaagtc ttccccgccc 1260
agctccccag gcccagccag ccctggcccc ctgaccaagc agcagagctc cttctcagac 1320
cacctacagc tggtgggcac tgtacacgcc tccgtccctg agccagggga gctgaagcca 1380
gccctgaggc cctacctggg cttcttggat gggtacagcc ctggagcagt ggtgacttgg 1440
gcgcttggcg ttatgttggc ctcagccatc accataggct gcgtgcttgt ctttgggaac 1500
tcgaccctgc acctcccaca ctggggttac atcctgctgc tcctgctcac cagtgtcatg 1560
tttctgctca gcctccttgt cctgggggct caccagcaac agtatcggga agacttattt 1620
cagatcccca tggttcccct gattccagcc ctgagcatcg tcctcaacat ctgcctcatg 1680
ctgaaactta gctatctgac ctgggtgcgc ttctccatct ggctgctgat gggacttgca 1740
gtgtatttcg gctatggcat ccggcatagc aaggagaacc agcgggagct gccagggctg 1800
aactccacac actacgtggt attccccagg ggcagcctgg aggagacagt gcaggctatg 1860
cagcccccca gccaggcacc agcacaggac cctggccata tggagtag 1908
<210> 214
<211> 6342
<212> DNA
<213> 智人
<400> 214
gcggcggcgg cggcgcgacc gagcatcctg gcggcgccgg gccactggga gagtttatgt 60
ggccgaggca gacaagtgga attaggcctt gctgcagggg acttcatttc cttctcagta 120
ctggacccat ttatgaggag gtggcttatg aaagtgtgat gttcgcgtat ttcttgacag 180
gcagtggcgt gatcttggct cactgcaacc tccgactccc tggttcaagc gattctcctg 240
cctcagcctc ctgagtgggg attacaggcc acagcaaaca caggtgtgca ggaaccgttt 300
gtcatggaag ccagggagcc tgggaggccc acacccacct accatcttgt ccctaacacc 360
agccagtccc aggtggaaga agatgtcagc tcgccacctc aaaggtcctc cgaaactatg 420
cagctgaaga aggagatctc cctgctgaat ggggtcagcc tggtggtggg caacatgatc 480
ggctcaggga tctttgtctc acccaagggt gtgctggtac acactgcctc ctatgggatg 540
tcactgattg tgtgggccat tggtgggctc ttctctgttg tgggtgccct ttgttatgca 600
gagctgggga ccaccatcac caagtcggga gccagctacg cttatattct agaggccttt 660
gggggcttca ttgccttcat ccgcctgtgg gtctcactgc tagttgttga gcccaccggt 720
caggccatca tcgccatcac ctttgccaac tacatcatcc agccgtcctt ccccagctgt 780
gatcccccat acctggcctg ccgtctcctg gctgctgctt gcatatgtct gctgacattt 840
gtgaactgtg cctatgtcaa gtggggcaca cgtgtgcagg acacgttcac ttacgccaag 900
gtcgtagcgc tcattgccat cattgtcatg ggccttgtta aactgtgcca gggacactct 960
gagcactttc aggacgcctt tgagggttcc tcctgggaca tgggaaacct ctctcttgcc 1020
ctctactctg ccctcttctc ttactcaggt tgggacaccc ttaattttgt aacagaagaa 1080
atcaaaaacc cagaaagaaa tttgcccttg gccattggga tttctatgcc aattgtgacg 1140
ctcatctaca tcctgaccaa tgtggcctat tacacagtgc tgaacatttc agatgtcctt 1200
agcagtgatg ctgtggctgt gacatttgct gaccagacgt ttggcatgtt cagctggacc 1260
atccccattg ctgttgccct gtcctgcttt gggggcctca atgcatccat ctttgcttca 1320
tcaaggttgt tcttcgtggg ctcccgggag ggccacctac cggaccttct gtccatgatc 1380
cacattgagc gttttacacc tatccctgct ttactgttca attgcaccat ggcactcatc 1440
tacctcatcg tggaggatgt tttccagctt atcaactact tcagcttcag ctactggttc 1500
ttcgtgggcc tgtctgttgt tggacagctc tacctccgct ggaaggagcc caagcggccc 1560
cggcctctca agctgagcgt gtttttcccc atcgtgttct gcatatgctc cgtgtttctg 1620
gtgatagtgc ccctcttcac tgacaccatt aattccctca ttggcatcgg gattgccctt 1680
tctggagtcc ctttctactt catgggtgtt tacctgccag agtcccggag gccattgttt 1740
attcggaatg tcctggctgc tatcaccaga ggcacccagc agctttgctt ttgtgtcctg 1800
actgagcttg atgtagccga agaaaaaaag gatgagagga aaactgacta gaggtcagag 1860
gtggctttct gaggcctgga aggcaggcca accagcaaaa tcctgataac aagactctgt 1920
gggcccaact ctcctgaatt aaaggagcct tttgacccaa tcatatagtg gggctcaggg 1980
ccagtgctca ctcttattgg taagctatag gagactcagg atctgggcca acctcaaggt 2040
gggggcttca gagggtgggg ggaagattgg ggaacggggg gaatggtcat ttagttttac 2100
tcctgatagg tagatgcagc tcttacagat atttacttgg taaagtgcag tggggaagag 2160
ggaatgctag gttgataggg ctggtggctt ctgaatttgg tatttgaact aggagtccct 2220
atagaggggc tgctttatgg gaagtttttc tctgaccagg tacaacacct gactttaaag 2280
gcctgaaatg ctaccatttc ttcctctggc tcaaaattct tccctgggga gagagttata 2340
ttcccttatt tattgatatt tagtccagaa caccagttct aacgaagcat gcgtgtctct 2400
tcatctacag gatgcaatag gctgattgta tttaaaaatc aaagtaccca aaactgagtc 2460
cctttgggct cagaaatgtc tgtggtattg ggtcagactc tgaccacagg ttttatgctg 2520
tttagcacaa tttctattga gtcttacctg caacaatgaa ccttaaagat ttttttactc 2580
acgtacctgt tacactttag catacagata gatcatagat cacgttacaa gcacttggct 2640
caggtccagc aaggacagat gaacaaattc ctgagtcaga agtctgttaa tattgctgtt 2700
ttgaaggaca atcctttatt ttacttgaga ccttacatct ttgttctagc tgacagtaaa 2760
tctctgggtt tctgttacga actctaagag ggctgaaact tctgatattc aggtggatca 2820
cctgaattct ctcagctgtc aatggcttgg agaacatctc atgggcccaa gtcatcaaat 2880
aacctgttcc tctctgtaag ggcagtgtga gggactgctg tgcagaccca agcaatccca 2940
acctggtgct aggtcatttc acttttctga aaacctcaca tcaggctgca tcctcttctg 3000
tccctggcac caggctttgt ttacacttgg agccaccttg gtgtgggtca ccgggacagt 3060
gtactcctct cctgccagcc tccccttccc cgaggtgtgg tggctgcagt ctcaggaaga 3120
gcttggtact tgtggggact tctgttttct ccctgtggag atcagtgaag actgggagga 3180
aagctgcttc aacctgagtc cggctcttca gcaggctgca caagtggaag caactaattc 3240
tggtgctcag gctgggctct ccacccaagt taggcctgct ctggcctaat ggatcttact 3300
gtatgagcag gacggctgca ttggattgta caactgtttt gtgatgcccc cagacactgt 3360
catcctgggc cgagaagaac ctgctagctt gacatacccc atgggcttat ccttaggttt 3420
tggaattggt caacagtgag gcagtctccc ttcctgacca ttcttctcca cccagtcaca 3480
gataagggaa taaccttggc catatatttg ctcaataaag attgaaggaa gcatggtcat 3540
agttgccctg ggttcagagc ataatgcata tgtgaagcat ggggtgacat tcctactgtc 3600
atgggtttgg gatttgtaac ggcaaattcc tgcccgacga cagggtgtct tatgcaaagg 3660
ctgacttgcc tgaacgctaa gaacatgact tctgtctgag ctaagctggc acccatccca 3720
gggctcctct ggagctaatc ctttaagcaa aatgtgcttg ccttttaaag atccctgacc 3780
ccagctttag ctttctccac cagataacca gctaatccca ggaatttgct gccccccacc 3840
agtggcttct agggaaagca aggacctcac atgccaggtg ccctagtact tgcttagtga 3900
gccatgtcat cctcctttca tttttggatg gtgacagcat ttttcccctc tgtgctggat 3960
acagacttct cccaggatcc tctctttggg agcgaagcca gaggatccct acagcactca 4020
agcttcatgg tggaattaat ttctgccagc tctttgttgt ctgtctcctt aaatcctttt 4080
cctggtgtgc ttattatccc ttttgcagtg agtacagttt attaagttgt cagcccttta 4140
atattgggga aacttaatga gtataaatag cagggagcac attgtaacag cacagtgttt 4200
tgtttttttc acccggttgc tgtatgagaa tggctttcaa tcctttgttt ctatgcctac 4260
agacagaaag caagatgtct aatattagac atacaagttg ctgcctgtta taacggtgaa 4320
ttataccttt gtgcatgcct aggatgtttg ttgttttaat tagctgcaat atatacggcc 4380
tgtgtacaca gaatttaatc acttcggcag gttgaacaac tccatgtaga taagagcaag 4440
tgtaggcaaa ggtttagaaa atggacataa agtcaaagaa tgatggcagg taggatgaag 4500
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catcactgca gatagttcta ctggacaatg ttacgctaga ataaacacca aggcagtcag 4860
ttaaggcagc tatggtttgg aaaggcatac ggacagagtc tgcttagaag agatacaagt 4920
tgttaataaa attgatcctg ttgatagtag tttgtttttg tggtgggtgc tgtgaagagt 4980
aaacattact cagtggaaag ctaagttcag aaggtacttt gtttttcctc ccttgcctta 5040
agtccttggt atttataatc aatgctgaac cttctatttc actaccgctc cctgttttag 5100
atattcagat ttaaaaggtt ttcaaagaat tactttcttc catgttcaaa gctagatttt 5160
actaaacaca tgtatcacat tcatatatat tgtttcttgg ccccactgcc aaaggaagtc 5220
agtcagtaat ttcacaaccg ttatcagagt ttggaagcag aaatagctgt taactaaaat 5280
ctcccactgc tcagactact ttctgcccta atggccatta ctatccagtc tgtattgcta 5340
caagggaccc actggtaccc cttttagatt ctatcaaaag gaacagggtt ttcctagagg 5400
caggcagcct ggtggtatgg cacagcagaa gcttactgct aatgaaatgg gaacctcccc 5460
ctcccttgtg gtttcagcac agaacctgaa tgccaggaaa aattcctggg ccaagaagct 5520
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tttgattgag gcaaaggggt cctactgtaa gtggaaaaga ctcactcccc taacataagt 5640
tttcactgtg gtgggatggt gccgcccgat atgcttgata tgcttttcct tccacatgtt 5700
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gggcatgtgg cagaacctca tggacatcac aagaccatca gtctgaatcc aggtcgtggg 5820
ggctgtcata gccgaactcc ttctgcacat ccagagggta cttgctccac atccgctgtc 5880
tgctgctgcc tctttcctcc tcactcaggc tgttgtagtc agcagagcct agaatgacat 5940
cccgggagtg gattctaaat gtgattttcc taggctactg caggagcccc ttctcttctc 6000
agaaaggtct gtttttgttc ccgattgtaa tgcaaaatcc ttgctcaata aataaaaaag 6060
aatatagaat tctttttttt ttaaagaagg aatcactttc ctatcatcta aaccaagttc 6120
cttcacactg gagtattttg tcacttctcc cctccgtgga gtattttgtc acttctcccc 6180
tccgtatagg attttttgtt gttgtaagag ttgtagtcat attgtaaata tttttgtacc 6240
tttctccttt taacgtgtta ttgacaaacc tccccaaaag aatatgcaat tgtttgattc 6300
atttctctgt tatcagacac caataaattc tttttgttgg gc 6342
<210> 215
<211> 6255
<212> DNA
<213> 智人
<400> 215
gcggcggcgg cggcgcgacc gagcatcctg gcggcgccgg gccactggga gagtttatgt 60
ggccgaggca gacaagtgga attaggcctt gctgcagggg acttcatttc cttctcagta 120
ctggacccat ttatgaggag gtggcttatg aaagtgtgat gttcgcgtat ttcttgacag 180
gccacagcaa acacaggtgt gcaggaaccg tttgtcatgg aagccaggga gcctgggagg 240
cccacaccca cctaccatct tgtccctaac accagccagt cccaggtgga agaagatgtc 300
agctcgccac ctcaaaggtc ctccgaaact atgcagctga agaaggagat ctccctgctg 360
aatggggtca gcctggtggt gggcaacatg atcggctcag ggatctttgt ctcacccaag 420
ggtgtgctgg tacacactgc ctcctatggg atgtcactga ttgtgtgggc cattggtggg 480
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ggagccagct acgcttatat tctagaggcc tttgggggct tcattgcctt catccgcctg 600
tgggtctcac tgctagttgt tgagcccacc ggtcaggcca tcatcgccat cacctttgcc 660
aactacatca tccagccgtc cttccccagc tgtgatcccc catacctggc ctgccgtctc 720
ctggctgctg cttgcatatg tctgctgaca tttgtgaact gtgcctatgt caagtggggc 780
acacgtgtgc aggacacgtt cacttacgcc aaggtcgtag cgctcattgc catcattgtc 840
atgggccttg ttaaactgtg ccagggacac tctgagcact ttcaggacgc ctttgagggt 900
tcctcctggg acatgggaaa cctctctctt gccctctact ctgccctctt ctcttactca 960
ggttgggaca cccttaattt tgtaacagaa gaaatcaaaa acccagaaag aaatttgccc 1020
ttggccattg ggatttctat gccaattgtg acgctcatct acatcctgac caatgtggcc 1080
tattacacag tgctgaacat ttcagatgtc cttagcagtg atgctgtggc tgtgacattt 1140
gctgaccaga cgtttggcat gttcagctgg accatcccca ttgctgttgc cctgtcctgc 1200
tttgggggcc tcaatgcatc catctttgct tcatcaaggt tgttcttcgt gggctcccgg 1260
gagggccacc taccggacct tctgtccatg atccacattg agcgttttac acctatccct 1320
gctttactgt tcaattgcac catggcactc atctacctca tcgtggagga tgttttccag 1380
cttatcaact acttcagctt cagctactgg ttcttcgtgg gcctgtctgt tgttggacag 1440
ctctacctcc gctggaagga gcccaagcgg ccccggcctc tcaagctgag cgtgtttttc 1500
cccatcgtgt tctgcatatg ctccgtgttt ctggtgatag tgcccctctt cactgacacc 1560
attaattccc tcattggcat cgggattgcc ctttctggag tccctttcta cttcatgggt 1620
gtttacctgc cagagtcccg gaggccattg tttattcgga atgtcctggc tgctatcacc 1680
agaggcaccc agcagctttg cttttgtgtc ctgactgagc ttgatgtagc cgaagaaaaa 1740
aaggatgaga ggaaaactga ctagaggtca gaggtggctt tctgaggcct ggaaggcagg 1800
ccaaccagca aaatcctgat aacaagactc tgtgggccca actctcctga attaaaggag 1860
ccttttgacc caatcatata gtggggctca gggccagtgc tcactcttat tggtaagcta 1920
taggagactc aggatctggg ccaacctcaa ggtgggggct tcagagggtg gggggaagat 1980
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gatatttact tggtaaagtg cagtggggaa gagggaatgc taggttgata gggctggtgg 2100
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ctgcaacaat gaaccttaaa gattttttta ctcacgtacc tgttacactt tagcatacag 2520
atagatcata gatcacgtta caagcacttg gctcaggtcc agcaaggaca gatgaacaaa 2580
ttcctgagtc agaagtctgt taatattgct gttttgaagg acaatccttt attttacttg 2640
agaccttaca tctttgttct agctgacagt aaatctctgg gtttctgtta cgaactctaa 2700
gagggctgaa acttctgata ttcaggtgga tcacctgaat tctctcagct gtcaatggct 2760
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gggagcgaag ccagaggatc cctacagcac tcaagcttca tggtggaatt aatttctgcc 3960
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ggcggcaaga aggtacctcc ctgtgtaact caccttcccc catgacagtg agtaagagac 4500
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tggtgtccgc tgcaacagct actagccacg tgtagctaat tacattaaaa tgaaataaaa 4620
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tacggacaga gtctgcttag aagagataca agttgttaat aaaattgatc ctgttgatag 4860
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000
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<400> 217
000
<210> 218
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<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: y+LAT2序列
<400> 218
Met Glu Ala Arg Glu Pro Gly Arg Pro Thr Pro Thr Tyr His Leu Val
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Pro Asn Thr Ser Gln Ser Gln Val Glu Glu Asp Val Ser Ser Pro Pro
20 25 30
Gln Arg Ser Ser Glu Thr Met Gln Leu Lys Lys Glu Ile Ser Leu Leu
35 40 45
Asn Gly Val Ser Leu Val Val Gly Asn Met Ile Gly Ser Gly Ile Phe
50 55 60
Val Ser Pro Lys Gly Val Leu Val His Thr Ala Ser Tyr Gly Met Ser
65 70 75 80
Leu Ile Val Trp Ala Ile Gly Gly Leu Phe Ser Val Val Gly Ala Leu
85 90 95
Cys Tyr Ala Glu Leu Gly Thr Thr Ile Thr Lys Ser Gly Ala Ser Tyr
100 105 110
Ala Tyr Ile Leu Glu Ala Phe Gly Gly Phe Ile Ala Phe Ile Arg Leu
115 120 125
Trp Val Ser Leu Leu Val Val Glu Pro Thr Gly Gln Ala Ile Ile Ala
130 135 140
Ile Thr Phe Ala Asn Tyr Ile Ile Gln Pro Ser Phe Pro Ser Cys Asp
145 150 155 160
Pro Pro Tyr Leu Ala Cys Arg Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ile Cys Leu
165 170 175
Leu Thr Phe Val Asn Cys Ala Tyr Val Lys Trp Gly Thr Arg Val Gln
180 185 190
Asp Thr Phe Thr Tyr Ala Lys Val Val Ala Leu Ile Ala Ile Ile Val
195 200 205
Met Gly Leu Val Lys Leu Cys Gln Gly His Ser Glu His Phe Gln Asp
210 215 220
Ala Phe Glu Gly Ser Ser Trp Asp Met Gly Asn Leu Ser Leu Ala Leu
225 230 235 240
Tyr Ser Ala Leu Phe Ser Tyr Ser Gly Trp Asp Thr Leu Asn Phe Val
245 250 255
Thr Glu Glu Ile Lys Asn Pro Glu Arg Asn Leu Pro Leu Ala Ile Gly
260 265 270
Ile Ser Met Pro Ile Val Thr Leu Ile Tyr Ile Leu Thr Asn Val Ala
275 280 285
Tyr Tyr Thr Val Leu Asn Ile Ser Asp Val Leu Ser Ser Asp Ala Val
290 295 300
Ala Val Thr Phe Ala Asp Gln Thr Phe Gly Met Phe Ser Trp Thr Ile
305 310 315 320
Pro Ile Ala Val Ala Leu Ser Cys Phe Gly Gly Leu Asn Ala Ser Ile
325 330 335
Phe Ala Ser Ser Arg Leu Phe Phe Val Gly Ser Arg Glu Gly His Leu
340 345 350
Pro Asp Leu Leu Ser Met Ile His Ile Glu Arg Phe Thr Pro Ile Pro
355 360 365
Ala Leu Leu Phe Asn Cys Thr Met Ala Leu Ile Tyr Leu Ile Val Glu
370 375 380
Asp Val Phe Gln Leu Ile Asn Tyr Phe Ser Phe Ser Tyr Trp Phe Phe
385 390 395 400
Val Gly Leu Ser Val Val Gly Gln Leu Tyr Leu Arg Trp Lys Glu Pro
405 410 415
Lys Arg Pro Arg Pro Leu Lys Leu Ser Val Phe Phe Pro Ile Val Phe
420 425 430
Cys Ile Cys Ser Val Phe Leu Val Ile Val Pro Leu Phe Thr Asp Thr
435 440 445
Ile Asn Ser Leu Ile Gly Ile Gly Ile Ala Leu Ser Gly Val Pro Phe
450 455 460
Tyr Phe Met Gly Val Tyr Leu Pro Glu Ser Arg Arg Pro Leu Phe Ile
465 470 475 480
Arg Asn Val Leu Ala Ala Ile Thr Arg Gly Thr Gln Gln Leu Cys Phe
485 490 495
Cys Val Leu Thr Glu Leu Asp Val Ala Glu Glu Lys Lys Asp Glu Arg
500 505 510
Lys Thr Asp
515
<210> 219
<211> 1548
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: y+LAT2序列
<400> 219
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<210> 220
<211> 2139
<212> DNA
<213> 智人
<400> 220
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agcaggtgaa gctgaagaag gagatctcac tgcttaacgg cgtgtgcctg attgtgggga 360
acatgatcgg ctcgggcatc tttgtttccc ccaagggtgt gctcatatac agtgcctcct 420
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ttgccctctc aggcctgccc ttttacttcc tcatcatcag agtgccagaa cataagcgac 1620
cgctttacct ccgaaggatc gtggggtctg ccacaaggta cctccaggtc ctgtgtatgt 1680
cagttgctgc agaaatggat ttggaagatg gaggagagat gcccaagcaa cgggatccca 1740
aatctaacta aacaccatct ggaatcctga tgtggaaagc aggggtttct ggtctactgg 1800
ctagagctaa ggaagttgaa aaggaaagct cacttctttg gaggcacctg tccagaagcc 1860
tggcctaggc agcttcaacc tttgaactta ctttttgaaa tgaaaagtaa tttatttgtt 1920
ttgctacata ctgttccaga cttttaaagg ggacaatgaa ggtgactgtg gggaggagca 1980
tgtcaggttt gggcttggtt gttttagaag cacctgggtg tgcctaccta ctcctctttt 2040
cttttaaaag ggcccacaat gctccaattt cctgtctcct ttagagagac atgaaactat 2100
cacaggtgct ggatgacaat aaaagtttat gttcctaaa 2139
<210> 221
<211> 2082
<212> DNA
<213> 智人
<400> 221
cccttttact gctggctggg aaggaggagc atcagaccac agatcctgga aggcacttct 60
ctccctgact gctgctcaca ctgccgtgag aacctgctta tatccaggac caaggaggca 120
atgccaggaa gctggtgaag ggtttcctct cctccaccat ggttgacagc actgagtatg 180
aagtggcctc ccagcctgag gtggaaacct cccctttggg tgatggggcc agcccagggc 240
cggagcaggt gaagctgaag aaggagatct cactgcttaa cggcgtgtgc ctgattgtgg 300
ggaacatgat cggctcgggc atctttgttt cccccaaggg tgtgctcata tacagtgcct 360
cctttggtct ctctctggtc atctgggctg tcgggggcct cttctccgtc tttggggccc 420
tttgttatgc ggaactgggc accaccatta agaaatctgg ggccagctat gcctatatcc 480
tggaggcctt tggaggattc cttgctttca tcagactctg gacctccctg ctcatcattg 540
agcccaccag ccaggccatc attgccatca cctttgccaa ctacatggta cagcctctct 600
tcccgagctg cttcgcccct tatgctgcca gccgcctgct ggctgctgcc tgcatttgtc 660
tcttaacctt cattaactgt gcctatgtca aatggggaac cctggtacaa gatattttca 720
cctatgctaa agtattggca ctgatcgcgg tcatcgttgc aggcattgtt agacttggcc 780
agggagcctc tactcatttt gagaattcct ttgagggttc atcatttgca gtgggtgaca 840
ttgccctggc actgtactca gctctgttct cctactcagg ctgggacacc ctcaactatg 900
tcactgaaga gatcaagaat cctgagagga acctgcccct ctccattggc atctccatgc 960
ccattgtcac catcatctat atcttgacca atgtggccta ttatactgtg ctagacatga 1020
gagacatctt ggccagtgat gctgttgctg tgacttttgc agatcagata tttggaatat 1080
ttaactggat aattccactg tcagttgcat tatcctgttt tggtggcctc aatgcctcca 1140
ttgtggctgc ttctaggctt ttctttgtgg gctcaagaga aggccatctc cctgatgcca 1200
tctgcatgat ccatgttgag cggttcacac cagtgccttc tctgctcttc aatggtatca 1260
tggcattgat ctacttgtgc gtggaagaca tcttccagct cattaactac tacagcttca 1320
gctactggtt ctttgtgggg ctttctattg tgggtcagct ttatctgcgc tggaaggagc 1380
ctgatcgacc tcgtcccctc aagctcagcg ttttcttccc gattgtcttc tgcctctgca 1440
ccatcttcct ggtggctgtt ccactttaca gtgatactat caactccctc atcggcattg 1500
ccattgccct ctcaggcctg cccttttact tcctcatcat cagagtgcca gaacataagc 1560
gaccgcttta cctccgaagg atcgtggggt ctgccacaag gtacctccag gtcctgtgta 1620
tgtcagttgc tgcagaaatg gatttggaag atggaggaga gatgcccaag caacgggatc 1680
ccaaatctaa ctaaacacca tctggaatcc tgatgtggaa agcaggggtt tctggtctac 1740
tggctagagc taaggaagtt gaaaaggaaa gctcacttct ttggaggcac ctgtccagaa 1800
gcctggccta ggcagcttca acctttgaac ttactttttg aaatgaaaag taatttattt 1860
gttttgctac atactgttcc agacttttaa aggggacaat gaaggtgact gtggggagga 1920
gcatgtcagg tttgggcttg gttgttttag aagcacctgg gtgtgcctac ctactcctct 1980
tttcttttaa aagggcccac aatgctccaa tttcctgtct cctttagaga gacatgaaac 2040
tatcacaggt gctggatgac aataaaagtt tatgttccta aa 2082
<210> 222
<211> 2252
<212> DNA
<213> 智人
<400> 222
agtccccgtt accctctgct ttttctgctc ctcagagtca acagctgttg cagcatgagc 60
gatacgcttg gttctcctaa ctagcacctt cccctctccc ctgactcagc tggtagcccc 120
tcctccccgc acctgcccaa aggtcactgg acaggcattt gtctggcctt cccttttact 180
gctggctggg aaggaggagc atcagaccac agatcctgga aggcacttct ctccctgact 240
gctgctcaca ctgccgtgag aacctgctta tatccaggac caaggaggca atgccaggaa 300
gctggtgaag ggtttcctct cctccaccat ggttgacagc actgagtatg aagtggcctc 360
ccagcctgag gtggaaacct cccctttggg tgatggggcc agcccagggc cggagcaggt 420
gaagctgaag aaggagatct cactgcttaa cggcgtgtgc ctgattgtgg ggaacatgat 480
cggctcgggc atctttgttt cccccaaggg tgtgctcata tacagtgcct cctttggtct 540
ctctctggtc atctgggctg tcgggggcct cttctccgtc tttggggccc tttgttatgc 600
ggaactgggc accaccatta agaaatctgg ggccagctat gcctatatcc tggaggcctt 660
tggaggattc cttgctttca tcagactctg gacctccctg ctcatcattg agcccaccag 720
ccaggccatc attgccatca cctttgccaa ctacatggta cagcctctct tcccgagctg 780
cttcgcccct tatgctgcca gccgcctgct ggctgctgcc tgcatttgtc tcttaacctt 840
cattaactgt gcctatgtca aatggggaac cctggtacaa gatattttca cctatgctaa 900
agtattggca ctgatcgcgg tcatcgttgc aggcattgtt agacttggcc agggagcctc 960
tactcatttt gagaattcct ttgagggttc atcatttgca gtgggtgaca ttgccctggc 1020
actgtactca gctctgttct cctactcagg ctgggacacc ctcaactatg tcactgaaga 1080
gatcaagaat cctgagagga acctgcccct ctccattggc atctccatgc ccattgtcac 1140
catcatctat atcttgacca atgtggccta ttatactgtg ctagacatga gagacatctt 1200
ggccagtgat gctgttgctg tgacttttgc agatcagata tttggaatat ttaactggat 1260
aattccactg tcagttgcat tatcctgttt tggtggcctc aatgcctcca ttgtggctgc 1320
ttctaggctt ttctttgtgg gctcaagaga aggccatctc cctgatgcca tctgcatgat 1380
ccatgttgag cggttcacac cagtgccttc tctgctcttc aatggtatca tggcattgat 1440
ctacttgtgc gtggaagaca tcttccagct cattaactac tacagcttca gctactggtt 1500
ctttgtgggg ctttctattg tgggtcagct ttatctgcgc tggaaggagc ctgatcgacc 1560
tcgtcccctc aagctcagcg ttttcttccc gattgtcttc tgcctctgca ccatcttcct 1620
ggtggctgtt ccactttaca gtgatactat caactccctc atcggcattg ccattgccct 1680
ctcaggcctg cccttttact tcctcatcat cagagtgcca gaacataagc gaccgcttta 1740
cctccgaagg atcgtggggt ctgccacaag gtacctccag gtcctgtgta tgtcagttgc 1800
tgcagaaatg gatttggaag atggaggaga gatgcccaag caacgggatc ccaaatctaa 1860
ctaaacacca tctggaatcc tgatgtggaa agcaggggtt tctggtctac tggctagagc 1920
taaggaagtt gaaaaggaaa gctcacttct ttggaggcac ctgtccagaa gcctggccta 1980
ggcagcttca acctttgaac ttactttttg aaatgaaaag taatttattt gttttgctac 2040
atactgttcc agacttttaa aggggacaat gaaggtgact gtggggagga gcatgtcagg 2100
tttgggcttg gttgttttag aagcacctgg gtgtgcctac ctactcctct tttcttttaa 2160
aagggcccac aatgctccaa tttcctgtct cctttagaga gacatgaaac tatcacaggt 2220
gctggatgac aataaaagtt tatgttccta aa 2252
<210> 223
<400> 223
000
<210> 224
<400> 224
000
<210> 225
<211> 511
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: y+LAT1序列
<400> 225
Met Val Asp Ser Thr Glu Tyr Glu Val Ala Ser Gln Pro Glu Val Glu
1 5 10 15
Thr Ser Pro Leu Gly Asp Gly Ala Ser Pro Gly Pro Glu Gln Val Lys
20 25 30
Leu Lys Lys Glu Ile Ser Leu Leu Asn Gly Val Cys Leu Ile Val Gly
35 40 45
Asn Met Ile Gly Ser Gly Ile Phe Val Ser Pro Lys Gly Val Leu Ile
50 55 60
Tyr Ser Ala Ser Phe Gly Leu Ser Leu Val Ile Trp Ala Val Gly Gly
65 70 75 80
Leu Phe Ser Val Phe Gly Ala Leu Cys Tyr Ala Glu Leu Gly Thr Thr
85 90 95
Ile Lys Lys Ser Gly Ala Ser Tyr Ala Tyr Ile Leu Glu Ala Phe Gly
100 105 110
Gly Phe Leu Ala Phe Ile Arg Leu Trp Thr Ser Leu Leu Ile Ile Glu
115 120 125
Pro Thr Ser Gln Ala Ile Ile Ala Ile Thr Phe Ala Asn Tyr Met Val
130 135 140
Gln Pro Leu Phe Pro Ser Cys Phe Ala Pro Tyr Ala Ala Ser Arg Leu
145 150 155 160
Leu Ala Ala Ala Cys Ile Cys Leu Leu Thr Phe Ile Asn Cys Ala Tyr
165 170 175
Val Lys Trp Gly Thr Leu Val Gln Asp Ile Phe Thr Tyr Ala Lys Val
180 185 190
Leu Ala Leu Ile Ala Val Ile Val Ala Gly Ile Val Arg Leu Gly Gln
195 200 205
Gly Ala Ser Thr His Phe Glu Asn Ser Phe Glu Gly Ser Ser Phe Ala
210 215 220
Val Gly Asp Ile Ala Leu Ala Leu Tyr Ser Ala Leu Phe Ser Tyr Ser
225 230 235 240
Gly Trp Asp Thr Leu Asn Tyr Val Thr Glu Glu Ile Lys Asn Pro Glu
245 250 255
Arg Asn Leu Pro Leu Ser Ile Gly Ile Ser Met Pro Ile Val Thr Ile
260 265 270
Ile Tyr Ile Leu Thr Asn Val Ala Tyr Tyr Thr Val Leu Asp Met Arg
275 280 285
Asp Ile Leu Ala Ser Asp Ala Val Ala Val Thr Phe Ala Asp Gln Ile
290 295 300
Phe Gly Ile Phe Asn Trp Ile Ile Pro Leu Ser Val Ala Leu Ser Cys
305 310 315 320
Phe Gly Gly Leu Asn Ala Ser Ile Val Ala Ala Ser Arg Leu Phe Phe
325 330 335
Val Gly Ser Arg Glu Gly His Leu Pro Asp Ala Ile Cys Met Ile His
340 345 350
Val Glu Arg Phe Thr Pro Val Pro Ser Leu Leu Phe Asn Gly Ile Met
355 360 365
Ala Leu Ile Tyr Leu Cys Val Glu Asp Ile Phe Gln Leu Ile Asn Tyr
370 375 380
Tyr Ser Phe Ser Tyr Trp Phe Phe Val Gly Leu Ser Ile Val Gly Gln
385 390 395 400
Leu Tyr Leu Arg Trp Lys Glu Pro Asp Arg Pro Arg Pro Leu Lys Leu
405 410 415
Ser Val Phe Phe Pro Ile Val Phe Cys Leu Cys Thr Ile Phe Leu Val
420 425 430
Ala Val Pro Leu Tyr Ser Asp Thr Ile Asn Ser Leu Ile Gly Ile Ala
435 440 445
Ile Ala Leu Ser Gly Leu Pro Phe Tyr Phe Leu Ile Ile Arg Val Pro
450 455 460
Glu His Lys Arg Pro Leu Tyr Leu Arg Arg Ile Val Gly Ser Ala Thr
465 470 475 480
Arg Tyr Leu Gln Val Leu Cys Met Ser Val Ala Ala Glu Met Asp Leu
485 490 495
Glu Asp Gly Gly Glu Met Pro Lys Gln Arg Asp Pro Lys Ser Asn
500 505 510
<210> 226
<211> 1536
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: y+LAT1序列
<400> 226
atggttgaca gcactgagta tgaagtggcc tcccagcctg aggtggaaac ctcccctttg 60
ggtgatgggg ccagcccagg gccggagcag gtgaagctga agaaggagat ctcactgctt 120
aacggcgtgt gcctgattgt ggggaacatg atcggctcgg gcatctttgt ttcccccaag 180
ggtgtgctca tatacagtgc ctcctttggt ctctctctgg tcatctgggc tgtcgggggc 240
ctcttctccg tctttggggc cctttgttat gcggaactgg gcaccaccat taagaaatct 300
ggggccagct atgcctatat cctggaggcc tttggaggat tccttgcttt catcagactc 360
tggacctccc tgctcatcat tgagcccacc agccaggcca tcattgccat cacctttgcc 420
aactacatgg tacagcctct cttcccgagc tgcttcgccc cttatgctgc cagccgcctg 480
ctggctgctg cctgcatttg tctcttaacc ttcattaact gtgcctatgt caaatgggga 540
accctggtac aagatatttt cacctatgct aaagtattgg cactgatcgc ggtcatcgtt 600
gcaggcattg ttagacttgg ccagggagcc tctactcatt ttgagaattc ctttgagggt 660
tcatcatttg cagtgggtga cattgccctg gcactgtact cagctctgtt ctcctactca 720
ggctgggaca ccctcaacta tgtcactgaa gagatcaaga atcctgagag gaacctgccc 780
ctctccattg gcatctccat gcccattgtc accatcatct atatcttgac caatgtggcc 840
tattatactg tgctagacat gagagacatc ttggccagtg atgctgttgc tgtgactttt 900
gcagatcaga tatttggaat atttaactgg ataattccac tgtcagttgc attatcctgt 960
tttggtggcc tcaatgcctc cattgtggct gcttctaggc ttttctttgt gggctcaaga 1020
gaaggccatc tccctgatgc catctgcatg atccatgttg agcggttcac accagtgcct 1080
tctctgctct tcaatggtat catggcattg atctacttgt gcgtggaaga catcttccag 1140
ctcattaact actacagctt cagctactgg ttctttgtgg ggctttctat tgtgggtcag 1200
ctttatctgc gctggaagga gcctgatcga cctcgtcccc tcaagctcag cgttttcttc 1260
ccgattgtct tctgcctctg caccatcttc ctggtggctg ttccacttta cagtgatact 1320
atcaactccc tcatcggcat tgccattgcc ctctcaggcc tgccctttta cttcctcatc 1380
atcagagtgc cagaacataa gcgaccgctt tacctccgaa ggatcgtggg gtctgccaca 1440
aggtacctcc aggtcctgtg tatgtcagtt gctgcagaaa tggatttgga agatggagga 1500
gagatgccca agcaacggga tcccaaatct aactaa 1536
<210> 227
<211> 2224
<212> DNA
<213> 智人
<400> 227
gcattgcggc ttggttttct cacccagtgc atgtggcagg agcggtgaga tcactgcctc 60
acggcgatcc tggactgacg gtcacgactg cctaccctct aaccctgttc tgagctgccc 120
cttgcccaca caccccaaac ctgtgtgcag gatccgcctc catggagcta cagcctcctg 180
aagcctcgat cgccgtcgtg tcgattccgc gccagttgcc tggctcacat tcggaggctg 240
gtgtccaggg tctcagcgcg ggggacgact cagagacggg gtctgactgt gttacccagg 300
ctggtcttca actcttggcc tcaagtgatc ctcctgcctt agcttccaag aatgctgagg 360
ttacagtaga aacggggttt caccatgtta gccaggctga tattgaattc ctgacctcaa 420
ttgatccgac tgcctcggcc tccggaagtg ctgggattac aggcaccatg agccaggaca 480
ccgaggtgga tatgaaggag gtggagctga atgagttaga gcccgagaag cagccgatga 540
acgcggcgtc tggggcggcc atgtccctgg cgggagccga gaagaatggt ctggtgaaga 600
tcaaggtggc ggaagacgag gcggaggcgg cagccgcggc taagttcacg ggcctgtcca 660
aggaggagct gctgaaggtg gcaggcagcc ccggctgggt acgcacccgc tgggcactgc 720
tgctgctctt ctggctcggc tggctcggca tgcttgctgg tgccgtggtc ataatcgtgc 780
gagcgccgcg ttgtcgcgag ctaccggcgc agaagtggtg gcacacgggc gccctctacc 840
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ggcgtctcga ttacctgagc tctctgaagg tgaagggcct tgtgctgggt ccaattcaca 960
agaaccagaa ggatgatgtc gctcagactg acttgctgca gatcgacccc aattttggct 1020
ccaaggaaga ttttgacagt ctcttgcaat cggctaaaaa aaagagcatc cgtgtcattc 1080
tggaccttac tcccaactac cggggtgaga actcgtggtt ctccactcag gttgacactg 1140
tggccaccaa ggtgaaggat gctctggagt tttggctgca agctggcgtg gatgggttcc 1200
aggttcggga catagagaat ctgaaggatg catcctcatt cttggctgag tggcaaaata 1260
tcaccaaggg cttcagtgaa gacaggctct tgattgcggg gactaactcc tccgaccttc 1320
agcagatcct gagcctactc gaatccaaca aagacttgct gttgactagc tcatacctgt 1380
ctgattctgg ttctactggg gagcatacaa aatccctagt cacacagtat ttgaatgcca 1440
ctggcaatcg ctggtgcagc tggagtttgt ctcaggcaag gctcctgact tccttcttgc 1500
cggctcaact tctccgactc taccagctga tgctcttcac cctgccaggg acccctgttt 1560
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tgagtgacca gcggagtaag gagcgctccc tactgcatgg ggacttccac gcgttctccg 1800
ctgggcctgg actcttctcc tatatccgcc actgggacca gaatgagcgt tttctggtag 1860
tgcttaactt tggggatgtg ggcctctcgg ctggactgca ggcctccgac ctgcctgcca 1920
gcgccagcct gccagccaag gctgacctcc tgctcagcac ccagccaggc cgtgaggagg 1980
gctcccctct tgagctggaa cgcctgaaac tggagcctca cgaagggctg ctgctccgct 2040
tcccctacgc ggcctgactt cagcctgaca tggacccact acccttctcc tttccttccc 2100
aggccctttg gcttctgatt tttctctttt ttaaaaacaa acaaacaaac tgttgcagat 2160
tatgagtgaa cccccaaata gggtgttttc tgccttcaaa taaaagtcac ccctgcatgg 2220
tgaa 2224
<210> 228
<211> 2035
<212> DNA
<213> 智人
<400> 228
gcattgcggc ttggttttct cacccagtgc atgtggcagg agcggtgaga tcactgcctc 60
acggcgatcc tggactgacg gtcacgactg cctaccctct aaccctgttc tgagctgccc 120
cttgcccaca caccccaaac ctgtgtgcag gatccgcctc catggagcta cagcctcctg 180
aagcctcgat cgccgtcgtg tcgattccgc gccagttgcc tggctcacat tcggaggctg 240
gtgtccaggg tctcagcgcg ggggacgact caggcaccat gagccaggac accgaggtgg 300
atatgaagga ggtggagctg aatgagttag agcccgagaa gcagccgatg aacgcggcgt 360
ctggggcggc catgtccctg gcgggagccg agaagaatgg tctggtgaag atcaaggtgg 420
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tgctgaaggt ggcaggcagc cccggctggg tacgcacccg ctgggcactg ctgctgctct 540
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accttcaggc cttccagggc cacggcgcgg gcaacctggc gggtctgaag gggcgtctcg 720
attacctgag ctctctgaag gtgaagggcc ttgtgctggg tccaattcac aagaaccaga 780
aggatgatgt cgctcagact gacttgctgc agatcgaccc caattttggc tccaaggaag 840
attttgacag tctcttgcaa tcggctaaaa aaaagagcat ccgtgtcatt ctggacctta 900
ctcccaacta ccggggtgag aactcgtggt tctccactca ggttgacact gtggccacca 960
aggtgaagga tgctctggag ttttggctgc aagctggcgt ggatgggttc caggttcggg 1020
acatagagaa tctgaaggat gcatcctcat tcttggctga gtggcaaaat atcaccaagg 1080
gcttcagtga agacaggctc ttgattgcgg ggactaactc ctccgacctt cagcagatcc 1140
tgagcctact cgaatccaac aaagacttgc tgttgactag ctcatacctg tctgattctg 1200
gttctactgg ggagcataca aaatccctag tcacacagta tttgaatgcc actggcaatc 1260
gctggtgcag ctggagtttg tctcaggcaa ggctcctgac ttccttcttg ccggctcaac 1320
ttctccgact ctaccagctg atgctcttca ccctgccagg gacccctgtt ttcagctacg 1380
gggatgagat tggcctggat gcagctgccc ttcctggaca gcctatggag gctccagtca 1440
tgctgtggga tgagtccagc ttccctgaca tcccaggggc tgtaagtgcc aacatgactg 1500
tgaagggcca gagtgaagac cctggctccc tcctttcctt gttccggcgg ctgagtgacc 1560
agcggagtaa ggagcgctcc ctactgcatg gggacttcca cgcgttctcc gctgggcctg 1620
gactcttctc ctatatccgc cactgggacc agaatgagcg ttttctggta gtgcttaact 1680
ttggggatgt gggcctctcg gctggactgc aggcctccga cctgcctgcc agcgccagcc 1740
tgccagccaa ggctgacctc ctgctcagca cccagccagg ccgtgaggag ggctcccctc 1800
ttgagctgga acgcctgaaa ctggagcctc acgaagggct gctgctccgc ttcccctacg 1860
cggcctgact tcagcctgac atggacccac tacccttctc ctttccttcc caggcccttt 1920
ggcttctgat ttttctcttt tttaaaaaca aacaaacaaa ctgttgcaga ttatgagtga 1980
acccccaaat agggtgtttt ctgccttcaa ataaaagtca cccctgcatg gtgaa 2035
<210> 229
<211> 1885
<212> DNA
<213> 智人
<400> 229
agatgcagta gccgaaactg cgcggaggca cagaggccgg ggagagcgtt ctgggtccga 60
gggtccaggt aggggttgag ccaccatctg accgcaagct gcgtcgtgtc gccggttctg 120
caggcaccat gagccaggac accgaggtgg atatgaagga ggtggagctg aatgagttag 180
agcccgagaa gcagccgatg aacgcggcgt ctggggcggc catgtccctg gcgggagccg 240
agaagaatgg tctggtgaag atcaaggtgg cggaagacga ggcggaggcg gcagccgcgg 300
ctaagttcac gggcctgtcc aaggaggagc tgctgaaggt ggcaggcagc cccggctggg 360
tacgcacccg ctgggcactg ctgctgctct tctggctcgg ctggctcggc atgcttgctg 420
gtgccgtggt cataatcgtg cgagcgccgc gttgtcgcga gctaccggcg cagaagtggt 480
ggcacacggg cgccctctac cgcatcggcg accttcaggc cttccagggc cacggcgcgg 540
gcaacctggc gggtctgaag gggcgtctcg attacctgag ctctctgaag gtgaagggcc 600
ttgtgctggg tccaattcac aagaaccaga aggatgatgt cgctcagact gacttgctgc 660
agatcgaccc caattttggc tccaaggaag attttgacag tctcttgcaa tcggctaaaa 720
aaaagagcat ccgtgtcatt ctggacctta ctcccaacta ccggggtgag aactcgtggt 780
tctccactca ggttgacact gtggccacca aggtgaagga tgctctggag ttttggctgc 840
aagctggcgt ggatgggttc caggttcggg acatagagaa tctgaaggat gcatcctcat 900
tcttggctga gtggcaaaat atcaccaagg gcttcagtga agacaggctc ttgattgcgg 960
ggactaactc ctccgacctt cagcagatcc tgagcctact cgaatccaac aaagacttgc 1020
tgttgactag ctcatacctg tctgattctg gttctactgg ggagcataca aaatccctag 1080
tcacacagta tttgaatgcc actggcaatc gctggtgcag ctggagtttg tctcaggcaa 1140
ggctcctgac ttccttcttg ccggctcaac ttctccgact ctaccagctg atgctcttca 1200
ccctgccagg gacccctgtt ttcagctacg gggatgagat tggcctggat gcagctgccc 1260
ttcctggaca gcctatggag gctccagtca tgctgtggga tgagtccagc ttccctgaca 1320
tcccaggggc tgtaagtgcc aacatgactg tgaagggcca gagtgaagac cctggctccc 1380
tcctttcctt gttccggcgg ctgagtgacc agcggagtaa ggagcgctcc ctactgcatg 1440
gggacttcca cgcgttctcc gctgggcctg gactcttctc ctatatccgc cactgggacc 1500
agaatgagcg ttttctggta gtgcttaact ttggggatgt gggcctctcg gctggactgc 1560
aggcctccga cctgcctgcc agcgccagcc tgccagccaa ggctgacctc ctgctcagca 1620
cccagccagg ccgtgaggag ggctcccctc ttgagctgga acgcctgaaa ctggagcctc 1680
acgaagggct gctgctccgc ttcccctacg cggcctgact tcagcctgac atggacccac 1740
tacccttctc ctttccttcc caggcccttt ggcttctgat ttttctcttt tttaaaaaca 1800
aacaaacaaa ctgttgcaga ttatgagtga acccccaaat agggtgtttt ctgccttcaa 1860
ataaaagtca cccctgcatg gtgaa 1885
<210> 230
<211> 2221
<212> DNA
<213> 智人
<400> 230
gcattgcggc ttggttttct cacccagtgc atgtggcagg agcggtgaga tcactgcctc 60
acggcgatcc tggactgacg gtcacgactg cctaccctct aaccctgttc tgagctgccc 120
cttgcccaca caccccaaac ctgtgtgcag gatccgcctc catggagcta cagcctcctg 180
aagcctcgat cgccgtcgtg tcgattccgc gccagttgcc tggctcacat tcggaggctg 240
gtgtccaggg tctcagcgcg ggggacgact cagagttggg gtctcactgt gttgcccaga 300
ctggtctcga actcttggcc tcaggtgatc ctcttccctc agcttcccag aatgccgaga 360
tgatagagac ggggtctgac tgtgttaccc aggctggtct tcaactcttg gcctcaagtg 420
atcctcctgc cttagcttcc aagaatgctg aggttacagg caccatgagc caggacaccg 480
aggtggatat gaaggaggtg gagctgaatg agttagagcc cgagaagcag ccgatgaacg 540
cggcgtctgg ggcggccatg tccctggcgg gagccgagaa gaatggtctg gtgaagatca 600
aggtggcgga agacgaggcg gaggcggcag ccgcggctaa gttcacgggc ctgtccaagg 660
aggagctgct gaaggtggca ggcagccccg gctgggtacg cacccgctgg gcactgctgc 720
tgctcttctg gctcggctgg ctcggcatgc ttgctggtgc cgtggtcata atcgtgcgag 780
cgccgcgttg tcgcgagcta ccggcgcaga agtggtggca cacgggcgcc ctctaccgca 840
tcggcgacct tcaggccttc cagggccacg gcgcgggcaa cctggcgggt ctgaaggggc 900
gtctcgatta cctgagctct ctgaaggtga agggccttgt gctgggtcca attcacaaga 960
accagaagga tgatgtcgct cagactgact tgctgcagat cgaccccaat tttggctcca 1020
aggaagattt tgacagtctc ttgcaatcgg ctaaaaaaaa gagcatccgt gtcattctgg 1080
accttactcc caactaccgg ggtgagaact cgtggttctc cactcaggtt gacactgtgg 1140
ccaccaaggt gaaggatgct ctggagtttt ggctgcaagc tggcgtggat gggttccagg 1200
ttcgggacat agagaatctg aaggatgcat cctcattctt ggctgagtgg caaaatatca 1260
ccaagggctt cagtgaagac aggctcttga ttgcggggac taactcctcc gaccttcagc 1320
agatcctgag cctactcgaa tccaacaaag acttgctgtt gactagctca tacctgtctg 1380
attctggttc tactggggag catacaaaat ccctagtcac acagtatttg aatgccactg 1440
gcaatcgctg gtgcagctgg agtttgtctc aggcaaggct cctgacttcc ttcttgccgg 1500
ctcaacttct ccgactctac cagctgatgc tcttcaccct gccagggacc cctgttttca 1560
gctacgggga tgagattggc ctggatgcag ctgcccttcc tggacagcct atggaggctc 1620
cagtcatgct gtgggatgag tccagcttcc ctgacatccc aggggctgta agtgccaaca 1680
tgactgtgaa gggccagagt gaagaccctg gctccctcct ttccttgttc cggcggctga 1740
gtgaccagcg gagtaaggag cgctccctac tgcatgggga cttccacgcg ttctccgctg 1800
ggcctggact cttctcctat atccgccact gggaccagaa tgagcgtttt ctggtagtgc 1860
ttaactttgg ggatgtgggc ctctcggctg gactgcaggc ctccgacctg cctgccagcg 1920
ccagcctgcc agccaaggct gacctcctgc tcagcaccca gccaggccgt gaggagggct 1980
cccctcttga gctggaacgc ctgaaactgg agcctcacga agggctgctg ctccgcttcc 2040
cctacgcggc ctgacttcag cctgacatgg acccactacc cttctccttt ccttcccagg 2100
ccctttggct tctgattttt ctctttttta aaaacaaaca aacaaactgt tgcagattat 2160
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a 2221
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<400> 231
000
<210> 232
<211> 630
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: 4F2hc序列
<400> 232
Met Glu Leu Gln Pro Pro Glu Ala Ser Ile Ala Val Val Ser Ile Pro
1 5 10 15
Arg Gln Leu Pro Gly Ser His Ser Glu Ala Gly Val Gln Gly Leu Ser
20 25 30
Ala Gly Asp Asp Ser Glu Leu Gly Ser His Cys Val Ala Gln Thr Gly
35 40 45
Leu Glu Leu Leu Ala Ser Gly Asp Pro Leu Pro Ser Ala Ser Gln Asn
50 55 60
Ala Glu Met Ile Glu Thr Gly Ser Asp Cys Val Thr Gln Ala Gly Leu
65 70 75 80
Gln Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Ala Leu Ala Ser Lys Asn Ala
85 90 95
Glu Val Thr Gly Thr Met Ser Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Glu
100 105 110
Val Glu Leu Asn Glu Leu Glu Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala
115 120 125
Ser Gly Ala Ala Met Ser Leu Ala Gly Ala Glu Lys Asn Gly Leu Val
130 135 140
Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp Glu Ala Glu Ala Ala Ala Ala Ala Lys
145 150 155 160
Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser Pro
165 170 175
Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu Gly
180 185 190
Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala Pro
195 200 205
Arg Cys Arg Glu Leu Pro Ala Gln Lys Trp Trp His Thr Gly Ala Leu
210 215 220
Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln Ala Phe Gln Gly His Gly Ala Gly Asn
225 230 235 240
Leu Ala Gly Leu Lys Gly Arg Leu Asp Tyr Leu Ser Ser Leu Lys Val
245 250 255
Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Asp Val
260 265 270
Ala Gln Thr Asp Leu Leu Gln Ile Asp Pro Asn Phe Gly Ser Lys Glu
275 280 285
Asp Phe Asp Ser Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile Arg Val
290 295 300
Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Arg Gly Glu Asn Ser Trp Phe Ser
305 310 315 320
Thr Gln Val Asp Thr Val Ala Thr Lys Val Lys Asp Ala Leu Glu Phe
325 330 335
Trp Leu Gln Ala Gly Val Asp Gly Phe Gln Val Arg Asp Ile Glu Asn
340 345 350
Leu Lys Asp Ala Ser Ser Phe Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile Thr Lys
355 360 365
Gly Phe Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala Gly Thr Asn Ser Ser Asp
370 375 380
Leu Gln Gln Ile Leu Ser Leu Leu Glu Ser Asn Lys Asp Leu Leu Leu
385 390 395 400
Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asp Ser Gly Ser Thr Gly Glu His Thr Lys
405 410 415
Ser Leu Val Thr Gln Tyr Leu Asn Ala Thr Gly Asn Arg Trp Cys Ser
420 425 430
Trp Ser Leu Ser Gln Ala Arg Leu Leu Thr Ser Phe Leu Pro Ala Gln
435 440 445
Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Met Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro
450 455 460
Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Ile Gly Leu Asp Ala Ala Ala Leu Pro
465 470 475 480
Gly Gln Pro Met Glu Ala Pro Val Met Leu Trp Asp Glu Ser Ser Phe
485 490 495
Pro Asp Ile Pro Gly Ala Val Ser Ala Asn Met Thr Val Lys Gly Gln
500 505 510
Ser Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Ser Leu Phe Arg Arg Leu Ser Asp
515 520 525
Gln Arg Ser Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly Asp Phe His Ala Phe
530 535 540
Ser Ala Gly Pro Gly Leu Phe Ser Tyr Ile Arg His Trp Asp Gln Asn
545 550 555 560
Glu Arg Phe Leu Val Val Leu Asn Phe Gly Asp Val Gly Leu Ser Ala
565 570 575
Gly Leu Gln Ala Ser Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Leu Pro Ala Lys
580 585 590
Ala Asp Leu Leu Leu Ser Thr Gln Pro Gly Arg Glu Glu Gly Ser Pro
595 600 605
Leu Glu Leu Glu Arg Leu Lys Leu Glu Pro His Glu Gly Leu Leu Leu
610 615 620
Arg Phe Pro Tyr Ala Ala
625 630
<210> 233
<211> 1893
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: 4F2hc序列
<400> 233
atggagctac agcctcctga agcctcgatc gccgtcgtgt cgattccgcg ccagttgcct 60
ggctcacatt cggaggctgg tgtccagggt ctcagcgcgg gggacgactc agagttgggg 120
tctcactgtg ttgcccagac tggtctcgaa ctcttggcct caggtgatcc tcttccctca 180
gcttcccaga atgccgagat gatagagacg gggtctgact gtgttaccca ggctggtctt 240
caactcttgg cctcaagtga tcctcctgcc ttagcttcca agaatgctga ggttacaggc 300
accatgagcc aggacaccga ggtggatatg aaggaggtgg agctgaatga gttagagccc 360
gagaagcagc cgatgaacgc ggcgtctggg gcggccatgt ccctggcggg agccgagaag 420
aatggtctgg tgaagatcaa ggtggcggaa gacgaggcgg aggcggcagc cgcggctaag 480
ttcacgggcc tgtccaagga ggagctgctg aaggtggcag gcagccccgg ctgggtacgc 540
acccgctggg cactgctgct gctcttctgg ctcggctggc tcggcatgct tgctggtgcc 600
gtggtcataa tcgtgcgagc gccgcgttgt cgcgagctac cggcgcagaa gtggtggcac 660
acgggcgccc tctaccgcat cggcgacctt caggccttcc agggccacgg cgcgggcaac 720
ctggcgggtc tgaaggggcg tctcgattac ctgagctctc tgaaggtgaa gggccttgtg 780
ctgggtccaa ttcacaagaa ccagaaggat gatgtcgctc agactgactt gctgcagatc 840
gaccccaatt ttggctccaa ggaagatttt gacagtctct tgcaatcggc taaaaaaaag 900
agcatccgtg tcattctgga ccttactccc aactaccggg gtgagaactc gtggttctcc 960
actcaggttg acactgtggc caccaaggtg aaggatgctc tggagttttg gctgcaagct 1020
ggcgtggatg ggttccaggt tcgggacata gagaatctga aggatgcatc ctcattcttg 1080
gctgagtggc aaaatatcac caagggcttc agtgaagaca ggctcttgat tgcggggact 1140
aactcctccg accttcagca gatcctgagc ctactcgaat ccaacaaaga cttgctgttg 1200
actagctcat acctgtctga ttctggttct actggggagc atacaaaatc cctagtcaca 1260
cagtatttga atgccactgg caatcgctgg tgcagctgga gtttgtctca ggcaaggctc 1320
ctgacttcct tcttgccggc tcaacttctc cgactctacc agctgatgct cttcaccctg 1380
ccagggaccc ctgttttcag ctacggggat gagattggcc tggatgcagc tgcccttcct 1440
ggacagccta tggaggctcc agtcatgctg tgggatgagt ccagcttccc tgacatccca 1500
ggggctgtaa gtgccaacat gactgtgaag ggccagagtg aagaccctgg ctccctcctt 1560
tccttgttcc ggcggctgag tgaccagcgg agtaaggagc gctccctact gcatggggac 1620
ttccacgcgt tctccgctgg gcctggactc ttctcctata tccgccactg ggaccagaat 1680
gagcgttttc tggtagtgct taactttggg gatgtgggcc tctcggctgg actgcaggcc 1740
tccgacctgc ctgccagcgc cagcctgcca gccaaggctg acctcctgct cagcacccag 1800
ccaggccgtg aggagggctc ccctcttgag ctggaacgcc tgaaactgga gcctcacgaa 1860
gggctgctgc tccgcttccc ctacgcggcc tga 1893
<210> 234
<211> 1680
<212> DNA
<213> 智人
<400> 234
gccatttcta gggttggacc gtgcaggcac gggcggtcag ctgggccgca gctcctccgg 60
ctctgcaggg tcacggagga agtctcctgg aaccagcagg aggaaacatg ggggatactg 120
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gtctccaaaa ggagctgggc ctcatcagtg gcatctccat catcgtgggc accatcattg 240
gctctgggat cttcgtttcc cccaagtctg tgctcagcaa cacggaagct gtggggccct 300
gcctcatcat atgggcggct tgcggggtcc tcgcgacgct gggtgccctg tgctttgcgg 360
agcttggcac aatgatcacc aagtcagggg gagagtatcc ctacctgatg gaggcctacg 420
ggcccatccc cgcctacctc ttctcctggg ccagcctgat cgtcattaag cccacgtcct 480
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agcctcctca aatcgttgtg aaatgcctgg ccgccgccgc catcttgttc atctcgacag 600
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tggtgatcgt ggccatcatc atcatcagcg ggctggtgct cctggcccaa ggaaacacaa 720
agaattttga taattctttc gagggcgccc agctgtctgt gggagccatc agcctggcgt 780
tttacaatgg actctgggcc tatgatggat ggaatcaact caattacatc acagaagaac 840
ttagaaaccc ttacagaaac ctgcctttgg ccattatcat cgggatcccc ctggtgacgg 900
cgtgctacat cctcatgaac gtgtcctact tcaccgtgat gactgccacc gaactcctgc 960
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gcgtcaggcg cctcactcca gcccccgcca tcatctttta tggtatcata gcaacgattt 1200
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tctcaaagcc gattaccatg caccttcaga tgctaatgga agtggtccca ccggaggaag 1560
accctgagta acaagctccg tctcttgtag ccaagtcagc tgaatttatt ttcttaagca 1620
atatttgtgg ttatttcttc ctttttttct tacgaataaa atatactcag atgtttaaaa 1680
<210> 235
<211> 1775
<212> DNA
<213> 智人
<400> 235
gccatttcta gggttggacc gtgcaggcac gggcggtcag ctgggccgca gctcctccgg 60
ctctgcaggg tcacggagga aggtaagtaa gccagctccc ctagtccagg ccgagcttgc 120
acttgcgtct tgtctgctgc tgctgaacca agatttagct gtgcgccctc cttgcagtct 180
cctggaacca gcaggaggaa acatggggga tactggcctg agaaagcgga gagaggatga 240
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cagtggcatc tccatcatcg tgggcaccat cattggctct gggatcttcg tttcccccaa 360
gtctgtgctc agcaacacgg aagctgtggg gccctgcctc atcatatggg cggcttgcgg 420
ggtcctcgcg acgctgggtg ccctgtgctt tgcggagctt ggcacaatga tcaccaagtc 480
agggggagag tatccctacc tgatggaggc ctacgggccc atccccgcct acctcttctc 540
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cgagtatgtg tgtgcgccct tctatgtggg ctgcaagcct cctcaaatcg ttgtgaaatg 660
cctggccgcc gccgccatct tgttcatctc gacagtgaac tcactgagcg tgcggctggg 720
aagctacgtc cagaacatct tcaccgcggc caagctggtg atcgtggcca tcatcatcat 780
cagcgggctg gtgctcctgg cccaaggaaa cacaaagaat tttgataatt ctttcgaggg 840
cgcccagctg tctgtgggag ccatcagcct ggcgttttac aatggactct gggcctatga 900
tggatggaat caactcaatt acatcacaga agaacttaga aacccttaca gaaacctgcc 960
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ggagggtcac atgctcaaag tgctttctta catcagcgtc aggcgcctca ctccagcccc 1260
cgccatcatc ttttatggta tcatagcaac gatttatatc atccctggtg acataaactc 1320
gttagtcaat tatttcagct ttgccgcatg gctgttttat ggcctgacga ttctaggact 1380
catcgtgatg agatttacaa ggaaagagct ggaaaggcct atcaaggtgc ccgtagtcat 1440
tcccgtcttg atgacactca tctctgtgtt tttggttctg gctccaatca tcagcaagcc 1500
cacctgggag tacctctact gtgtgctgtt tatattaagc ggccttttat tttacttcct 1560
gtttgtccac tacaagtttg gatgggctca gaaaatctca aagccgatta ccatgcacct 1620
tcagatgcta atggaagtgg tcccaccgga ggaagaccct gagtaacaag ctccgtctct 1680
tgtagccaag tcagctgaat ttattttctt aagcaatatt tgtggttatt tcttcctttt 1740
tttcttacga ataaaatata ctcagatgtt taaaa 1775
<210> 236
<211> 1766
<212> DNA
<213> 智人
<400> 236
gccatttcta gggttggacc gtgcaggcac gggcggtcag ctgggccgca gctcctccgg 60
ctctgcaggg tcacggagga agccagctcc cctagtccag gccgagcttg cacttgcgtc 120
ttgtctgctg ctgctgaacc aagatttagc tgtgcgccct ccttgcagtc tcctggaacc 180
agcaggagga aacatggggg atactggcct gagaaagcgg agagaggatg agaagtcgat 240
ccagagccaa gagcctaaga ccaccagtct ccaaaaggag ctgggcctca tcagtggcat 300
ctccatcatc gtgggcacca tcattggctc tgggatcttc gtttccccca agtctgtgct 360
cagcaacacg gaagctgtgg ggccctgcct catcatatgg gcggcttgcg gggtcctcgc 420
gacgctgggt gccctgtgct ttgcggagct tggcacaatg atcaccaagt cagggggaga 480
gtatccctac ctgatggagg cctacgggcc catccccgcc tacctcttct cctgggccag 540
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tcaactcaat tacatcacag aagaacttag aaacccttac agaaacctgc ctttggccat 960
tatcatcggg atccccctgg tgacggcgtg ctacatcctc atgaacgtgt cctacttcac 1020
cgtgatgact gccaccgaac tcctgcagtc ccaggcggtg gctgtgacat ttggtgaccg 1080
tgttctctat cctgcttctt ggatcgttcc actttttgtg gcattttcaa ccatcggtgc 1140
tgctaacggg acctgcttca cagcgggcag actcatttac gtggcgggcc gggagggtca 1200
catgctcaaa gtgctttctt acatcagcgt caggcgcctc actccagccc ccgccatcat 1260
cttttatggt atcatagcaa cgatttatat catccctggt gacataaact cgttagtcaa 1320
ttatttcagc tttgccgcat ggctgtttta tggcctgacg attctaggac tcatcgtgat 1380
gagatttaca aggaaagagc tggaaaggcc tatcaaggtg cccgtagtca ttcccgtctt 1440
gatgacactc atctctgtgt ttttggttct ggctccaatc atcagcaagc ccacctggga 1500
gtacctctac tgtgtgctgt ttatattaag cggcctttta ttttacttcc tgtttgtcca 1560
ctacaagttt ggatgggctc agaaaatctc aaagccgatt accatgcacc ttcagatgct 1620
aatggaagtg gtcccaccgg aggaagaccc tgagtaacaa gctccgtctc ttgtagccaa 1680
gtcagctgaa tttattttct taagcaatat ttgtggttat ttcttccttt ttttcttacg 1740
aataaaatat actcagatgt ttaaaa 1766
<210> 237
<400> 237
000
<210> 238
<400> 238
000
<210> 239
<400> 239
000
<210> 240
<211> 487
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: b0,+AT序列
<400> 240
Met Gly Asp Thr Gly Leu Arg Lys Arg Arg Glu Asp Glu Lys Ser Ile
1 5 10 15
Gln Ser Gln Glu Pro Lys Thr Thr Ser Leu Gln Lys Glu Leu Gly Leu
20 25 30
Ile Ser Gly Ile Ser Ile Ile Val Gly Thr Ile Ile Gly Ser Gly Ile
35 40 45
Phe Val Ser Pro Lys Ser Val Leu Ser Asn Thr Glu Ala Val Gly Pro
50 55 60
Cys Leu Ile Ile Trp Ala Ala Cys Gly Val Leu Ala Thr Leu Gly Ala
65 70 75 80
Leu Cys Phe Ala Glu Leu Gly Thr Met Ile Thr Lys Ser Gly Gly Glu
85 90 95
Tyr Pro Tyr Leu Met Glu Ala Tyr Gly Pro Ile Pro Ala Tyr Leu Phe
100 105 110
Ser Trp Ala Ser Leu Ile Val Ile Lys Pro Thr Ser Phe Ala Ile Ile
115 120 125
Cys Leu Ser Phe Ser Glu Tyr Val Cys Ala Pro Phe Tyr Val Gly Cys
130 135 140
Lys Pro Pro Gln Ile Val Val Lys Cys Leu Ala Ala Ala Ala Ile Leu
145 150 155 160
Phe Ile Ser Thr Val Asn Ser Leu Ser Val Arg Leu Gly Ser Tyr Val
165 170 175
Gln Asn Ile Phe Thr Ala Ala Lys Leu Val Ile Val Ala Ile Ile Ile
180 185 190
Ile Ser Gly Leu Val Leu Leu Ala Gln Gly Asn Thr Lys Asn Phe Asp
195 200 205
Asn Ser Phe Glu Gly Ala Gln Leu Ser Val Gly Ala Ile Ser Leu Ala
210 215 220
Phe Tyr Asn Gly Leu Trp Ala Tyr Asp Gly Trp Asn Gln Leu Asn Tyr
225 230 235 240
Ile Thr Glu Glu Leu Arg Asn Pro Tyr Arg Asn Leu Pro Leu Ala Ile
245 250 255
Ile Ile Gly Ile Pro Leu Val Thr Ala Cys Tyr Ile Leu Met Asn Val
260 265 270
Ser Tyr Phe Thr Val Met Thr Ala Thr Glu Leu Leu Gln Ser Gln Ala
275 280 285
Val Ala Val Thr Phe Gly Asp Arg Val Leu Tyr Pro Ala Ser Trp Ile
290 295 300
Val Pro Leu Phe Val Ala Phe Ser Thr Ile Gly Ala Ala Asn Gly Thr
305 310 315 320
Cys Phe Thr Ala Gly Arg Leu Ile Tyr Val Ala Gly Arg Glu Gly His
325 330 335
Met Leu Lys Val Leu Ser Tyr Ile Ser Val Arg Arg Leu Thr Pro Ala
340 345 350
Pro Ala Ile Ile Phe Tyr Gly Ile Ile Ala Thr Ile Tyr Ile Ile Pro
355 360 365
Gly Asp Ile Asn Ser Leu Val Asn Tyr Phe Ser Phe Ala Ala Trp Leu
370 375 380
Phe Tyr Gly Leu Thr Ile Leu Gly Leu Ile Val Met Arg Phe Thr Arg
385 390 395 400
Lys Glu Leu Glu Arg Pro Ile Lys Val Pro Val Val Ile Pro Val Leu
405 410 415
Met Thr Leu Ile Ser Val Phe Leu Val Leu Ala Pro Ile Ile Ser Lys
420 425 430
Pro Thr Trp Glu Tyr Leu Tyr Cys Val Leu Phe Ile Leu Ser Gly Leu
435 440 445
Leu Phe Tyr Phe Leu Phe Val His Tyr Lys Phe Gly Trp Ala Gln Lys
450 455 460
Ile Ser Lys Pro Ile Thr Met His Leu Gln Met Leu Met Glu Val Val
465 470 475 480
Pro Pro Glu Glu Asp Pro Glu
485
<210> 241
<211> 1464
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: b0,+AT序列
<400> 241
atgggggata ctggcctgag aaagcggaga gaggatgaga agtcgatcca gagccaagag 60
cctaagacca ccagtctcca aaaggagctg ggcctcatca gtggcatctc catcatcgtg 120
ggcaccatca ttggctctgg gatcttcgtt tcccccaagt ctgtgctcag caacacggaa 180
gctgtggggc cctgcctcat catatgggcg gcttgcgggg tcctcgcgac gctgggtgcc 240
ctgtgctttg cggagcttgg cacaatgatc accaagtcag ggggagagta tccctacctg 300
atggaggcct acgggcccat ccccgcctac ctcttctcct gggccagcct gatcgtcatt 360
aagcccacgt ccttcgccat catctgcctc agcttctccg agtatgtgtg tgcgcccttc 420
tatgtgggct gcaagcctcc tcaaatcgtt gtgaaatgcc tggccgccgc cgccatcttg 480
ttcatctcga cagtgaactc actgagcgtg cggctgggaa gctacgtcca gaacatcttc 540
accgcggcca agctggtgat cgtggccatc atcatcatca gcgggctggt gctcctggcc 600
caaggaaaca caaagaattt tgataattct ttcgagggcg cccagctgtc tgtgggagcc 660
atcagcctgg cgttttacaa tggactctgg gcctatgatg gatggaatca actcaattac 720
atcacagaag aacttagaaa cccttacaga aacctgcctt tggccattat catcgggatc 780
cccctggtga cggcgtgcta catcctcatg aacgtgtcct acttcaccgt gatgactgcc 840
accgaactcc tgcagtccca ggcggtggct gtgacatttg gtgaccgtgt tctctatcct 900
gcttcttgga tcgttccact ttttgtggca ttttcaacca tcggtgctgc taacgggacc 960
tgcttcacag cgggcagact catttacgtg gcgggccggg agggtcacat gctcaaagtg 1020
ctttcttaca tcagcgtcag gcgcctcact ccagcccccg ccatcatctt ttatggtatc 1080
atagcaacga tttatatcat ccctggtgac ataaactcgt tagtcaatta tttcagcttt 1140
gccgcatggc tgttttatgg cctgacgatt ctaggactca tcgtgatgag atttacaagg 1200
aaagagctgg aaaggcctat caaggtgccc gtagtcattc ccgtcttgat gacactcatc 1260
tctgtgtttt tggttctggc tccaatcatc agcaagccca cctgggagta cctctactgt 1320
gtgctgttta tattaagcgg ccttttattt tacttcctgt ttgtccacta caagtttgga 1380
tgggctcaga aaatctcaaa gccgattacc atgcaccttc agatgctaat ggaagtggtc 1440
ccaccggagg aagaccctga gtaa 1464
<210> 242
<211> 2969
<212> DNA
<213> 智人
<400> 242
actcttccac ctcccttact gcaggaaggc actccgaaga cataagtcgg tgagacatgg 60
ctgaagataa aagcaagaga gactccatcg agatgagtat gaagggatgc cagacaaaca 120
acgggtttgt ccataatgaa gacattctgg agcagacccc ggatccagga agctcaacag 180
acaacctgaa gcacagcacc aggggcatcc ttggctccca ggagcccgac ttcaagggcg 240
tccagcccta tgcggggatg cccaaggagg tgctgttcca gttctctggc caggcccgct 300
accgcatacc tcgggagatc ctcttctggc tcacagtggc ttctgtgctg gtgctcatcg 360
cggccaccat agccatcatt gccctctctc caaagtgcct agactggtgg caggaggggc 420
ccatgtacca gatctaccca aggtctttca aggacagtaa caaggatggg aacggagatc 480
tgaaaggtat tcaagataaa ctggactaca tcacagcttt aaatataaaa actgtttgga 540
ttacttcatt ttataaatcg tcccttaaag atttcagata tggtgttgaa gatttccggg 600
aagttgatcc catttttgga acgatggaag attttgagaa tctggttgca gccatacatg 660
ataaaggttt aaaattaatc atcgatttca taccaaacca cacgagtgat aaacatattt 720
ggtttcaatt gagtcggaca cggacaggaa aatatactga ttattatatc tggcatgact 780
gtacccatga aaatggcaaa accattccac ccaacaactg gttaagtgtg tatggaaact 840
ccagttggca ctttgacgaa gtgcgaaacc aatgttattt tcatcagttt atgaaagagc 900
aacctgattt aaatttccgc aatcctgatg ttcaagaaga aataaaagaa attttacggt 960
tctggctcac aaagggtgtt gatggtttta gtttggatgc tgttaaattc ctcctagaag 1020
caaagcacct gagagatgag atccaagtaa ataagaccca aatcccggac acggtcacac 1080
aatactcgga gctgtaccat gacttcacca ccacgcaggt gggaatgcac gacattgtcc 1140
gcagcttccg gcagaccatg gaccaataca gcacggagcc cggcagatac aggttcatgg 1200
ggactgaagc ctatgcagag agtattgaca ggaccgtgat gtactatgga ttgccattta 1260
tccaagaagc tgattttccc ttcaacaatt acctcagcat gctagacact gtttctggga 1320
acagcgtgta tgaggttatc acatcctgga tggaaaacat gccagaagga aaatggccta 1380
actggatgat tggtggacca gacagttcac ggctgacttc gcgtttgggg aatcagtatg 1440
tcaacgtgat gaacatgctt cttttcacac tccctggaac tcctataact tactatggag 1500
aagaaattgg aatgggaaat attgtagccg caaatctcaa tgaaagctat gatattaata 1560
cccttcgctc aaagtcacca atgcagtggg acaatagttc aaatgctggt ttttctgaag 1620
ctagtaacac ctggttacct accaattcag attaccacac tgtgaatgtt gatgtccaaa 1680
agactcagcc cagatcggct ttgaagttat atcaagattt aagtctactt catgccaatg 1740
agctactcct caacaggggc tggttttgcc atttgaggaa tgacagccac tatgttgtgt 1800
acacaagaga gctggatggc atcgacagaa tctttatcgt ggttctgaat tttggagaat 1860
caacactgtt aaatctacat aatatgattt cgggccttcc cgctaaaatg agaataaggt 1920
taagtaccaa ttctgccgac aaaggcagta aagttgatac aagtggcatt tttctggaca 1980
agggagaggg actcatcttt gaacacaaca cgaagaatct ccttcatcgc caaacagctt 2040
tcagagatag atgctttgtt tccaatcgag catgctattc cagtgtactg aacatactgt 2100
atacctcgtg ttaggcacct ttatgaagag atgaagacac tggcatttca gtgggattgt 2160
aagcatttgt aatagcttca tgtacagcat gctgcttggt gaacaatcat taattcttcg 2220
atatttctgt agcttgaatg taactgcttt aagaaaggtt ctcaaatgtt ttgaaaaaaa 2280
taaaatgttt aaaagtaaat tatggcttat aggagcttat aactttattc agatagcatc 2340
aatcagggat gaccagaaca cattaggacc ccagattatt caaaaacttt aacgaatttt 2400
aaggggaaga attttatctt ttcccttaaa atgcagtcat agaaattaga ggatgactca 2460
ctgccacagt gtctaaaagc atttgctagc aaagaggcag gacactaatt tgtaaactgc 2520
tcaactgttc tgactggaag ggaggcctgg agctctgcta tcaccaatcc ttcccttccc 2580
tctactccac atccttctaa ggagcatgat ttgaaaatta ctttcctagg ttaatgggca 2640
tgtgcatcaa tggagagaat agtataagca agtgagatgt agactaagca aaatttagat 2700
ggagaagcac attttaaaaa attaataact taaaagtctc aagttattaa tttttttttt 2760
gctaactcaa ttggaagtaa gactatgaaa tatttcagtg tgtttccaat tcccagttga 2820
atgcagtgtt tcagaatttc aggtatttct taagatcctc gaaaacactg gtgctgtcaa 2880
gtccaagttc ctcgtacagg aatttaattt gggctgtaat ctaaaagaaa cacattaaaa 2940
aaattaaata gaaggccttt gtagtaaaa 2969
<210> 243
<400> 243
000
<210> 244
<211> 685
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: rBAT序列
<400> 244
Met Ala Glu Asp Lys Ser Lys Arg Asp Ser Ile Glu Met Ser Met Lys
1 5 10 15
Gly Cys Gln Thr Asn Asn Gly Phe Val His Asn Glu Asp Ile Leu Glu
20 25 30
Gln Thr Pro Asp Pro Gly Ser Ser Thr Asp Asn Leu Lys His Ser Thr
35 40 45
Arg Gly Ile Leu Gly Ser Gln Glu Pro Asp Phe Lys Gly Val Gln Pro
50 55 60
Tyr Ala Gly Met Pro Lys Glu Val Leu Phe Gln Phe Ser Gly Gln Ala
65 70 75 80
Arg Tyr Arg Ile Pro Arg Glu Ile Leu Phe Trp Leu Thr Val Ala Ser
85 90 95
Val Leu Val Leu Ile Ala Ala Thr Ile Ala Ile Ile Ala Leu Ser Pro
100 105 110
Lys Cys Leu Asp Trp Trp Gln Glu Gly Pro Met Tyr Gln Ile Tyr Pro
115 120 125
Arg Ser Phe Lys Asp Ser Asn Lys Asp Gly Asn Gly Asp Leu Lys Gly
130 135 140
Ile Gln Asp Lys Leu Asp Tyr Ile Thr Ala Leu Asn Ile Lys Thr Val
145 150 155 160
Trp Ile Thr Ser Phe Tyr Lys Ser Ser Leu Lys Asp Phe Arg Tyr Gly
165 170 175
Val Glu Asp Phe Arg Glu Val Asp Pro Ile Phe Gly Thr Met Glu Asp
180 185 190
Phe Glu Asn Leu Val Ala Ala Ile His Asp Lys Gly Leu Lys Leu Ile
195 200 205
Ile Asp Phe Ile Pro Asn His Thr Ser Asp Lys His Ile Trp Phe Gln
210 215 220
Leu Ser Arg Thr Arg Thr Gly Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Ile Trp His
225 230 235 240
Asp Cys Thr His Glu Asn Gly Lys Thr Ile Pro Pro Asn Asn Trp Leu
245 250 255
Ser Val Tyr Gly Asn Ser Ser Trp His Phe Asp Glu Val Arg Asn Gln
260 265 270
Cys Tyr Phe His Gln Phe Met Lys Glu Gln Pro Asp Leu Asn Phe Arg
275 280 285
Asn Pro Asp Val Gln Glu Glu Ile Lys Glu Ile Leu Arg Phe Trp Leu
290 295 300
Thr Lys Gly Val Asp Gly Phe Ser Leu Asp Ala Val Lys Phe Leu Leu
305 310 315 320
Glu Ala Lys His Leu Arg Asp Glu Ile Gln Val Asn Lys Thr Gln Ile
325 330 335
Pro Asp Thr Val Thr Gln Tyr Ser Glu Leu Tyr His Asp Phe Thr Thr
340 345 350
Thr Gln Val Gly Met His Asp Ile Val Arg Ser Phe Arg Gln Thr Met
355 360 365
Asp Gln Tyr Ser Thr Glu Pro Gly Arg Tyr Arg Phe Met Gly Thr Glu
370 375 380
Ala Tyr Ala Glu Ser Ile Asp Arg Thr Val Met Tyr Tyr Gly Leu Pro
385 390 395 400
Phe Ile Gln Glu Ala Asp Phe Pro Phe Asn Asn Tyr Leu Ser Met Leu
405 410 415
Asp Thr Val Ser Gly Asn Ser Val Tyr Glu Val Ile Thr Ser Trp Met
420 425 430
Glu Asn Met Pro Glu Gly Lys Trp Pro Asn Trp Met Ile Gly Gly Pro
435 440 445
Asp Ser Ser Arg Leu Thr Ser Arg Leu Gly Asn Gln Tyr Val Asn Val
450 455 460
Met Asn Met Leu Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Ile Thr Tyr Tyr
465 470 475 480
Gly Glu Glu Ile Gly Met Gly Asn Ile Val Ala Ala Asn Leu Asn Glu
485 490 495
Ser Tyr Asp Ile Asn Thr Leu Arg Ser Lys Ser Pro Met Gln Trp Asp
500 505 510
Asn Ser Ser Asn Ala Gly Phe Ser Glu Ala Ser Asn Thr Trp Leu Pro
515 520 525
Thr Asn Ser Asp Tyr His Thr Val Asn Val Asp Val Gln Lys Thr Gln
530 535 540
Pro Arg Ser Ala Leu Lys Leu Tyr Gln Asp Leu Ser Leu Leu His Ala
545 550 555 560
Asn Glu Leu Leu Leu Asn Arg Gly Trp Phe Cys His Leu Arg Asn Asp
565 570 575
Ser His Tyr Val Val Tyr Thr Arg Glu Leu Asp Gly Ile Asp Arg Ile
580 585 590
Phe Ile Val Val Leu Asn Phe Gly Glu Ser Thr Leu Leu Asn Leu His
595 600 605
Asn Met Ile Ser Gly Leu Pro Ala Lys Met Arg Ile Arg Leu Ser Thr
610 615 620
Asn Ser Ala Asp Lys Gly Ser Lys Val Asp Thr Ser Gly Ile Phe Leu
625 630 635 640
Asp Lys Gly Glu Gly Leu Ile Phe Glu His Asn Thr Lys Asn Leu Leu
645 650 655
His Arg Gln Thr Ala Phe Arg Asp Arg Cys Phe Val Ser Asn Arg Ala
660 665 670
Cys Tyr Ser Ser Val Leu Asn Ile Leu Tyr Thr Ser Cys
675 680 685
<210> 245
<211> 2058
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: rBAT序列
<400> 245
atggctgaag ataaaagcaa gagagactcc atcgagatga gtatgaaggg atgccagaca 60
aacaacgggt ttgtccataa tgaagacatt ctggagcaga ccccggatcc aggaagctca 120
acagacaacc tgaagcacag caccaggggc atccttggct cccaggagcc cgacttcaag 180
ggcgtccagc cctatgcggg gatgcccaag gaggtgctgt tccagttctc tggccaggcc 240
cgctaccgca tacctcggga gatcctcttc tggctcacag tggcttctgt gctggtgctc 300
atcgcggcca ccatagccat cattgccctc tctccaaagt gcctagactg gtggcaggag 360
gggcccatgt accagatcta cccaaggtct ttcaaggaca gtaacaagga tgggaacgga 420
gatctgaaag gtattcaaga taaactggac tacatcacag ctttaaatat aaaaactgtt 480
tggattactt cattttataa atcgtccctt aaagatttca gatatggtgt tgaagatttc 540
cgggaagttg atcccatttt tggaacgatg gaagattttg agaatctggt tgcagccata 600
catgataaag gtttaaaatt aatcatcgat ttcataccaa accacacgag tgataaacat 660
atttggtttc aattgagtcg gacacggaca ggaaaatata ctgattatta tatctggcat 720
gactgtaccc atgaaaatgg caaaaccatt ccacccaaca actggttaag tgtgtatgga 780
aactccagtt ggcactttga cgaagtgcga aaccaatgtt attttcatca gtttatgaaa 840
gagcaacctg atttaaattt ccgcaatcct gatgttcaag aagaaataaa agaaatttta 900
cggttctggc tcacaaaggg tgttgatggt tttagtttgg atgctgttaa attcctccta 960
gaagcaaagc acctgagaga tgagatccaa gtaaataaga cccaaatccc ggacacggtc 1020
acacaatact cggagctgta ccatgacttc accaccacgc aggtgggaat gcacgacatt 1080
gtccgcagct tccggcagac catggaccaa tacagcacgg agcccggcag atacaggttc 1140
atggggactg aagcctatgc agagagtatt gacaggaccg tgatgtacta tggattgcca 1200
tttatccaag aagctgattt tcccttcaac aattacctca gcatgctaga cactgtttct 1260
gggaacagcg tgtatgaggt tatcacatcc tggatggaaa acatgccaga aggaaaatgg 1320
cctaactgga tgattggtgg accagacagt tcacggctga cttcgcgttt ggggaatcag 1380
tatgtcaacg tgatgaacat gcttcttttc acactccctg gaactcctat aacttactat 1440
ggagaagaaa ttggaatggg aaatattgta gccgcaaatc tcaatgaaag ctatgatatt 1500
aatacccttc gctcaaagtc accaatgcag tgggacaata gttcaaatgc tggtttttct 1560
gaagctagta acacctggtt acctaccaat tcagattacc acactgtgaa tgttgatgtc 1620
caaaagactc agcccagatc ggctttgaag ttatatcaag atttaagtct acttcatgcc 1680
aatgagctac tcctcaacag gggctggttt tgccatttga ggaatgacag ccactatgtt 1740
gtgtacacaa gagagctgga tggcatcgac agaatcttta tcgtggttct gaattttgga 1800
gaatcaacac tgttaaatct acataatatg atttcgggcc ttcccgctaa aatgagaata 1860
aggttaagta ccaattctgc cgacaaaggc agtaaagttg atacaagtgg catttttctg 1920
gacaagggag agggactcat ctttgaacac aacacgaaga atctccttca tcgccaaaca 1980
gctttcagag atagatgctt tgtttccaat cgagcatgct attccagtgt actgaacata 2040
ctgtatacct cgtgttag 2058
<210> 246
<211> 4536
<212> DNA
<213> 智人
<400> 246
ggctcactct ggcaggtagg aacaggggag agtgcacctg ctaccagtca agctcagcca 60
gactgcaaga ggaggcgagg cggagccagc cgagggagtg aaccatggac aagttgaaat 120
gcccgagttt cttcaagtgc agggagaagg agaaagtgtc ggcttcatca gagaatttcc 180
atgttggtga aaatgatgag aatcaggacc gtggtaactg gtccaaaaaa tcggattatc 240
ttctatctat gattggatac gcagtgggat taggaaatgt gtggagattt ccatatctga 300
cctacagcaa tggtggaggc gccttcttga taccttatgc aattatgtta gcattggctg 360
gtttaccttt gttctttctg gagtgttcac tgggacaatt tgctagctta ggtccagttt 420
cagtttggag gattcttcca ttgtttcaag gtgtgggaat tacaatggtc ctgatctcca 480
tttttgtgac aatctattac aatgtcataa ttgcctatag tctttactac atgtttgctt 540
cttttcaaag tgaactacca tggaaaaatt gttcttcgtg gtcagataaa aactgtagca 600
gatcaccaat agtaactcac tgtaatgtga gtacagtgaa taaaggaata caagagatca 660
tccaaatgaa taaaagctgg gtagacatca acaattttac ctgcatcaac ggcagtgaaa 720
tttatcagcc agggcagctt cccagtgaac aatattggaa taaagtggcg ctccaacggt 780
caagtggaat gaatgagact ggagtaattg tttggtattt agcactttgt cttcttctgg 840
cttggctcat agttggagca gcactattta aaggaatcaa atcgtctggc aaggtggtat 900
attttacagc tcttttcccc tatgtggtcc tactcatcct gttagtacga ggtgcaactc 960
tggagggtgc ttcaaaaggc atttcatact atattggagc ccagtcaaat tttacaaaac 1020
ttaaggaagc tgaggtatgg aaagatgctg ccactcagat attttactcc ctttcagtgg 1080
cttggggtgg cttagttgct ctatcatctt acaataagtt caaaaacaac tgcttctctg 1140
atgccattgt ggtttgtttg acaaactgtc tcactagcgt gtttgctgga tttgctattt 1200
tttctatatt gggacacatg gcccatatat ctggaaagga agtttctcaa gttgtaaaat 1260
caggttttga tttggcattc attgcctatc cagaggctct agcccaactc ccaggtggtc 1320
cattttggtc catattattt tttttcatgc ttttaacttt gggtctcgat tctcagtttg 1380
cttcgattga aacgatcaca acaacaattc aagatttatt tcccaaagtg atgaagaaaa 1440
tgagggttcc cataactttg ggctgctgct tggttttgtt tctccttggt ctcgtctgtg 1500
tgactcaggc tggaatttac tgggttcatc tgattgacca cttctgtgct ggatggggca 1560
ttttaattgc agctatactg gagctagttg gaatcatctg gatttatgga gggaacagat 1620
tcattgagga tacagaaatg atgattggag caaagaggtg gatattctgg ctatggtgga 1680
gagcttgctg gtttgtaatt acgcctatcc ttttgattgc aatatttatc tggtcattgg 1740
tgcaatttca tagacctaat tatggcgcaa ttccataccc tgactgggga gttgctttag 1800
gctggtgtat gattgttttc tgcattattt ggattccaat tatggctatc ataaaaataa 1860
ttcaggctaa aggaaacatc tttcaacgcc ttataagttg ctgcagacca gcttctaact 1920
ggggtccata cctggaacaa catcgtgggg aaagatataa agacatggta gatcctaaaa 1980
aagaggctga ccatgaaata cctactgtta gtggcagcag aaaaccggaa tgagatctca 2040
ttgaaaaaaa tatatgattg tataatgtga ttttttttag aataggggga accttattta 2100
tttgtgtgtt aactgaatag gaaaatgtac atactatgtt catgatagtg tgattttttt 2160
cacatttaag caggaatgca atataaaaat gtgaatctct taattctcag ccatgtgctt 2220
attatatttc tttttagatt gtctatctgt ataacacaca cacacacacc taagagtctc 2280
tatttcacaa ttatattttt gtaaatagta tatgcatttt taatacattg gaggctttat 2340
tttgaactaa tttcttagag aatagttata ttttctatta cacaagttta aaaatattat 2400
taacttgtat tttcttaata tacaatctat cttttccaca aatatgagtg ggaaataaat 2460
cagcacattt gaaagaaagt gttaaaactg aaggcctcac ttaattagaa acgtgataaa 2520
tatatggaca aatggactat acatactata agaggactgt agtttaatac tttttaccca 2580
aatatgttta aaaacttcgt gcatttgtta cagctcatgt tttctatatg aacttagtca 2640
ttaatgttct ttataaaaag tgaaataaga tggaaaaata aggatcctac agccagtaag 2700
tgataaatct agaaaattga gttttgagta cctcttttcc catatacaat cttccttcct 2760
taggtaattt ggaagaaaac tatgacccat ttaatttcta ttgtgtttca caaaattaag 2820
tgttgttcat tatactctct gaaatatagg tttaatttca aatagaatat ggacttaaat 2880
gttaatgaga aaatggcttt aatcaattct agcattttat tactgtaata cagggctgat 2940
agagtgattt tgtcttatat gagtaagtta ctacttacag gtgataactt gcatactatt 3000
ggaagataaa cttgtcaaac ttgtcaagaa tgagaaaagc caaattagaa aatcctatgt 3060
cctagtttcc ttaccaagga taattaaata tatcactaag agctttatat attgattata 3120
tattgttgac aactggttta agcatcatag cctatgatga taaacactgc ctatatatgt 3180
aaatagcttt tcatcaattc ttaaatttct taacctaggc ttcagggagc atatgaaacc 3240
aaaattatat ggaacatttt ctgtgtgtac atgtacatgc atttttctag ggagagagtc 3300
cgtaggttta tcagaatatc aaggaaaact gtgacccaaa gaagtttaag aatcacatac 3360
actgctgctg gctttttgtg cttggcaaat gagtgacaat agaagaaata atttttctta 3420
cacattttaa aacgttttct cttccttgtg attgaagatg aaaggagtaa gaaattaagg 3480
catttgttta atttatactg gtaacttatt taggggggag gggacatgaa ggtaggtaaa 3540
taggtaggcc tctaattgaa ccacctctct aagttatgta cgtatatata agctgaaatt 3600
gtgtttgaca ttctgagggt tttctttttc tttttccttt tttttttttt tggtgggggg 3660
ctgggggtca gagtcttgtt ctgttgcccg ggctggagtg cagtggcatg atctcagctc 3720
actgcaacct ctgccttctg gattcaagtg attctcctgc ctcagcctct tgagtagctg 3780
ggactacagg tgcccgccac cacaccagct aatttttgta tttttagtag aggcgaagtt 3840
tccccatgtt ggccaggctg gtcttgaact cccgacctca agtgatctgt ctacctcggc 3900
ctcctaaagt gctgagatta caggtgtgag ccaccgtgcc cggcccattc taagggtttt 3960
ctttgaagac aggtcaaatg ctgttagtaa gtttcaggag attgttaatt cctcagttat 4020
accagatttt ataaaatatt tgagaataga tggctaacaa gaggttagaa atacttttcc 4080
ttaattttaa tccacagtat gttacatgca ttctaccact acattttggt gctatttaag 4140
gtgtgcaatt ttctataggt gacttttgca attcagggaa gatttgggca tattaaatga 4200
aagaatatct aattggggga ggtgtgaagg gaaagaaatt cttttcaaaa gctgaccaca 4260
aagagtagtt aaaagttttt gtcactatct tcacaagtgt gtaaagcaca gatttcaaca 4320
gagtgcttgg catattgtag ggtgctcaat ggtggttttt attattatta ctcagattcc 4380
acagtggcaa gaaacatcat tctacataat ggaaaacatt tacatcaaat cccacttact 4440
ttaatgcgaa cttggagata atttatggta ttgtattgta aaccattaat gaaaactttt 4500
tcacagttga gtgaaattaa aatcactata tctcaa 4536
<210> 247
<400> 247
000
<210> 248
<211> 642
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: ATB0,+序列
<400> 248
Met Asp Lys Leu Lys Cys Pro Ser Phe Phe Lys Cys Arg Glu Lys Glu
1 5 10 15
Lys Val Ser Ala Ser Ser Glu Asn Phe His Val Gly Glu Asn Asp Glu
20 25 30
Asn Gln Asp Arg Gly Asn Trp Ser Lys Lys Ser Asp Tyr Leu Leu Ser
35 40 45
Met Ile Gly Tyr Ala Val Gly Leu Gly Asn Val Trp Arg Phe Pro Tyr
50 55 60
Leu Thr Tyr Ser Asn Gly Gly Gly Ala Phe Leu Ile Pro Tyr Ala Ile
65 70 75 80
Met Leu Ala Leu Ala Gly Leu Pro Leu Phe Phe Leu Glu Cys Ser Leu
85 90 95
Gly Gln Phe Ala Ser Leu Gly Pro Val Ser Val Trp Arg Ile Leu Pro
100 105 110
Leu Phe Gln Gly Val Gly Ile Thr Met Val Leu Ile Ser Ile Phe Val
115 120 125
Thr Ile Tyr Tyr Asn Val Ile Ile Ala Tyr Ser Leu Tyr Tyr Met Phe
130 135 140
Ala Ser Phe Gln Ser Glu Leu Pro Trp Lys Asn Cys Ser Ser Trp Ser
145 150 155 160
Asp Lys Asn Cys Ser Arg Ser Pro Ile Val Thr His Cys Asn Val Ser
165 170 175
Thr Val Asn Lys Gly Ile Gln Glu Ile Ile Gln Met Asn Lys Ser Trp
180 185 190
Val Asp Ile Asn Asn Phe Thr Cys Ile Asn Gly Ser Glu Ile Tyr Gln
195 200 205
Pro Gly Gln Leu Pro Ser Glu Gln Tyr Trp Asn Lys Val Ala Leu Gln
210 215 220
Arg Ser Ser Gly Met Asn Glu Thr Gly Val Ile Val Trp Tyr Leu Ala
225 230 235 240
Leu Cys Leu Leu Leu Ala Trp Leu Ile Val Gly Ala Ala Leu Phe Lys
245 250 255
Gly Ile Lys Ser Ser Gly Lys Val Val Tyr Phe Thr Ala Leu Phe Pro
260 265 270
Tyr Val Val Leu Leu Ile Leu Leu Val Arg Gly Ala Thr Leu Glu Gly
275 280 285
Ala Ser Lys Gly Ile Ser Tyr Tyr Ile Gly Ala Gln Ser Asn Phe Thr
290 295 300
Lys Leu Lys Glu Ala Glu Val Trp Lys Asp Ala Ala Thr Gln Ile Phe
305 310 315 320
Tyr Ser Leu Ser Val Ala Trp Gly Gly Leu Val Ala Leu Ser Ser Tyr
325 330 335
Asn Lys Phe Lys Asn Asn Cys Phe Ser Asp Ala Ile Val Val Cys Leu
340 345 350
Thr Asn Cys Leu Thr Ser Val Phe Ala Gly Phe Ala Ile Phe Ser Ile
355 360 365
Leu Gly His Met Ala His Ile Ser Gly Lys Glu Val Ser Gln Val Val
370 375 380
Lys Ser Gly Phe Asp Leu Ala Phe Ile Ala Tyr Pro Glu Ala Leu Ala
385 390 395 400
Gln Leu Pro Gly Gly Pro Phe Trp Ser Ile Leu Phe Phe Phe Met Leu
405 410 415
Leu Thr Leu Gly Leu Asp Ser Gln Phe Ala Ser Ile Glu Thr Ile Thr
420 425 430
Thr Thr Ile Gln Asp Leu Phe Pro Lys Val Met Lys Lys Met Arg Val
435 440 445
Pro Ile Thr Leu Gly Cys Cys Leu Val Leu Phe Leu Leu Gly Leu Val
450 455 460
Cys Val Thr Gln Ala Gly Ile Tyr Trp Val His Leu Ile Asp His Phe
465 470 475 480
Cys Ala Gly Trp Gly Ile Leu Ile Ala Ala Ile Leu Glu Leu Val Gly
485 490 495
Ile Ile Trp Ile Tyr Gly Gly Asn Arg Phe Ile Glu Asp Thr Glu Met
500 505 510
Met Ile Gly Ala Lys Arg Trp Ile Phe Trp Leu Trp Trp Arg Ala Cys
515 520 525
Trp Phe Val Ile Thr Pro Ile Leu Leu Ile Ala Ile Phe Ile Trp Ser
530 535 540
Leu Val Gln Phe His Arg Pro Asn Tyr Gly Ala Ile Pro Tyr Pro Asp
545 550 555 560
Trp Gly Val Ala Leu Gly Trp Cys Met Ile Val Phe Cys Ile Ile Trp
565 570 575
Ile Pro Ile Met Ala Ile Ile Lys Ile Ile Gln Ala Lys Gly Asn Ile
580 585 590
Phe Gln Arg Leu Ile Ser Cys Cys Arg Pro Ala Ser Asn Trp Gly Pro
595 600 605
Tyr Leu Glu Gln His Arg Gly Glu Arg Tyr Lys Asp Met Val Asp Pro
610 615 620
Lys Lys Glu Ala Asp His Glu Ile Pro Thr Val Ser Gly Ser Arg Lys
625 630 635 640
Pro Glu
<210> 249
<211> 1929
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: ATB0,+序列
<400> 249
atggacaagt tgaaatgccc gagtttcttc aagtgcaggg agaaggagaa agtgtcggct 60
tcatcagaga atttccatgt tggtgaaaat gatgagaatc aggaccgtgg taactggtcc 120
aaaaaatcgg attatcttct atctatgatt ggatacgcag tgggattagg aaatgtgtgg 180
agatttccat atctgaccta cagcaatggt ggaggcgcct tcttgatacc ttatgcaatt 240
atgttagcat tggctggttt acctttgttc tttctggagt gttcactggg acaatttgct 300
agcttaggtc cagtttcagt ttggaggatt cttccattgt ttcaaggtgt gggaattaca 360
atggtcctga tctccatttt tgtgacaatc tattacaatg tcataattgc ctatagtctt 420
tactacatgt ttgcttcttt tcaaagtgaa ctaccatgga aaaattgttc ttcgtggtca 480
gataaaaact gtagcagatc accaatagta actcactgta atgtgagtac agtgaataaa 540
ggaatacaag agatcatcca aatgaataaa agctgggtag acatcaacaa ttttacctgc 600
atcaacggca gtgaaattta tcagccaggg cagcttccca gtgaacaata ttggaataaa 660
gtggcgctcc aacggtcaag tggaatgaat gagactggag taattgtttg gtatttagca 720
ctttgtcttc ttctggcttg gctcatagtt ggagcagcac tatttaaagg aatcaaatcg 780
tctggcaagg tggtatattt tacagctctt ttcccctatg tggtcctact catcctgtta 840
gtacgaggtg caactctgga gggtgcttca aaaggcattt catactatat tggagcccag 900
tcaaatttta caaaacttaa ggaagctgag gtatggaaag atgctgccac tcagatattt 960
tactcccttt cagtggcttg gggtggctta gttgctctat catcttacaa taagttcaaa 1020
aacaactgct tctctgatgc cattgtggtt tgtttgacaa actgtctcac tagcgtgttt 1080
gctggatttg ctattttttc tatattggga cacatggccc atatatctgg aaaggaagtt 1140
tctcaagttg taaaatcagg ttttgatttg gcattcattg cctatccaga ggctctagcc 1200
caactcccag gtggtccatt ttggtccata ttattttttt tcatgctttt aactttgggt 1260
ctcgattctc agtttgcttc gattgaaacg atcacaacaa caattcaaga tttatttccc 1320
aaagtgatga agaaaatgag ggttcccata actttgggct gctgcttggt tttgtttctc 1380
cttggtctcg tctgtgtgac tcaggctgga atttactggg ttcatctgat tgaccacttc 1440
tgtgctggat ggggcatttt aattgcagct atactggagc tagttggaat catctggatt 1500
tatggaggga acagattcat tgaggataca gaaatgatga ttggagcaaa gaggtggata 1560
ttctggctat ggtggagagc ttgctggttt gtaattacgc ctatcctttt gattgcaata 1620
tttatctggt cattggtgca atttcataga cctaattatg gcgcaattcc ataccctgac 1680
tggggagttg ctttaggctg gtgtatgatt gttttctgca ttatttggat tccaattatg 1740
gctatcataa aaataattca ggctaaagga aacatctttc aacgccttat aagttgctgc 1800
agaccagctt ctaactgggg tccatacctg gaacaacatc gtggggaaag atataaagac 1860
atggtagatc ctaaaaaaga ggctgaccat gaaataccta ctgttagtgg cagcagaaaa 1920
ccggaatga 1929
<210> 250
<211> 1179
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: EF1α启动子序列
<400> 250
ggctccggtg cccgtcagtg ggcagagcgc acatcgccca cagtccccga gaagttgggg 60
ggaggggtcg gcaattgaac cggtgcctag agaaggtggc gcggggtaaa ctgggaaagt 120
gatgtcgtgt actggctccg cctttttccc gagggtgggg gagaaccgta tataagtgca 180
gtagtcgccg tgaacgttct ttttcgcaac gggtttgccg ccagaacaca ggtaagtgcc 240
gtgtgtggtt cccgcgggcc tggcctcttt acgggttatg gcccttgcgt gccttgaatt 300
acttccacct ggctgcagta cgtgattctt gatcccgagc ttcgggttgg aagtgggtgg 360
gagagttcga ggccttgcgc ttaaggagcc ccttcgcctc gtgcttgagt tgaggcctgg 420
cctgggcgct ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc ttcgcgcctg tctcgctgct 480
ttcgataagt ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg ctgcgacgct ttttttctgg 540
caagatagtc ttgtaaatgc gggccaagat ctgcacactg gtatttcggt ttttggggcc 600
gcgggcggcg acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt cggcgaggcg gggcctgcga 660
gcgcggccac cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg gccggcctgc tctggtgcct 720
ggcctcgcgc cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa ggctggcccg gtcggcacca 780
gttgcgtgag cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctg cagggagctc aaaatggagg 840
acgcggcgct cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac aaaggaaaag ggcctttccg 900
tcctcagccg tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg cgccgtccag gcacctcgat 960
tagttctcga gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg gggaggggtt ttatgcgatg 1020
gagtttcccc acactgagtg ggtggagact gaagttaggc cagcttggca cttgatgtaa 1080
ttctccttgg aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt tcattctcaa gcctcagaca 1140
gtggttcaaa gtttttttct tccatttcag gtgtcgtga 1179
<210> 251
<211> 500
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: PGK启动子序列
<400> 251
gggtagggga ggcgcttttc ccaaggcagt ctggagcatg cgctttagca gccccgctgg 60
gcacttggcg ctacacaagt ggcctctggc ctcgcacaca ttccacatcc accggtaggc 120
gccaaccggc tccgttcttt ggtggcccct tcgcgccacc ttctactcct cccctagtca 180
ggaagttccc ccccgccccg cagctcgcgt cgtgcaggac gtgacaaatg gaagtagcac 240
gtctcactag tctcgtgcag atggacagca ccgctgagca atggaagcgg gtaggccttt 300
ggggcagcgg ccaatagcag ctttgctcct tcgctttctg ggctcagagg ctgggaaggg 360
gtgggtccgg gggcgggctc aggggcgggc tcaggggcgg ggcgggcgcc cgaaggtcct 420
ccggaggccc ggcattctgc acgcttcaaa agcgcacgtc tgccgcgctg ttctcctctt 480
cctcatctcc gggcctttcg 500
<210> 252
<211> 508
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CMV启动子序列
<400> 252
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120
atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180
aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240
catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 300
catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 360
atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 420
ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 480
acggtgggag gtctatataa gcagagct 508
<210> 253
<211> 584
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: CAG启动子序列
<400> 253
gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat 60
tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc 120
aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc 180
caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt 240
acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta 300
ccatggtcga ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac 360
ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg 420
ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga 480
gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc 540
ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcg 584
<210> 254
<211> 225
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: bGH pA转录终止和polyA信号序列
<400> 254
ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 60
tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 120
tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 180
gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatgg 225
<210> 255
<211> 49
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: rbHBB pA转录终止和polyA信号序列
<400> 255
aataaaagat ctttattttc attagatctg tgtgttggtt ttttgtgtg 49
<210> 256
<211> 238
<212> DNA
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述: SV40 pA转录终止和polyA信号序列
<400> 256
ctagagctcg ctgatcagcc tcgactgtgc cttctagttg ccagccatct gttgtttgcc 60
cctcccccgt gccttccttg accctggaag gtgccactcc cactgtcctt tcctaataaa 120
atgaggaaat tgcatcgcat tgtctgagta ggtgtcattc tattctgggg ggtggggtgg 180
ggcaggacag caagggggag gattgggaag acaatagcag gcatgctggg gatatgca 238
<210> 257
<211> 481
<212> DNA
<213> 智人
<400> 257
gacgggtggc atccctgtga cccctcccca gtgcctctcc tggccctgga agttgccact 60
ccagtgccca ccagccttgt cctaataaaa ttaagttgca tcattttgtc tgactaggtg 120
tccttctata atattatggg gtggaggggg gtggtatgga gcaaggggca agttgggaag 180
acaacctgta gggcctgcgg ggtctattgg gaaccaagct ggagtgcagt ggcacaatct 240
tggctcactg caatctccgc ctcctgggtt caagcgattc tcctgcctca gcctcccgag 300
ttgttgggat tccaggcatg catgaccagg ctcagctaat ttttgttttt ttggtagaga 360
cggggtttca ccatattggc caggctggtc tccaactcct aatctcaggt gatctaccca 420
ccttggcctc ccaaattgct gggattacag gcgtgaacca ctgctccctt ccctgtcctt 480
t 481
<210> 258
<211> 244
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 258
tacagttgaa gtcggaagtt tacatacact taagttggag tcattaaaac tcgtttttca 60
actactccac aaatttcttg ttaacaaaca atagttttgg caagtcagtt aggacatcta 120
ctttgtgcat gacacaagtc atttttccaa caattgttta cagacagatt atttcactta 180
taattcactg tatcacaatt ccagtgggtc agaagtgtac atacacgcgc ttgactgtgc 240
cttt 244
<210> 259
<211> 266
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 259
ttaaacaatt taaaggcaat gctaccaaat actaagcgcg tgtatgtaca cttctgaccc 60
actgggaatg tgatgaaaga aataaaagct gaaatgaatc attctctcta ctattattct 120
gatatttcac attcttaaaa taaagtggtg atcctaactg accttaagac agggaatctt 180
tactcggatt aaatgtcagg aattgtgaaa aagtgagttt aaatgtattt ggctaaggtg 240
tatgtaaact tccgacttca actgta 266
<210> 260
<211> 57
<212> DNA
<213> 捷申病毒(Teschovirus) A
<400> 260
gccaccaatt tcagcctgct gaaacaggct ggcgacgtgg aagagaaccc tggacct 57
<210> 261
<211> 63
<212> DNA
<213> 明脉扁刺蛾(Thosea asigna)病毒
<400> 261
ggcagcggcg agggcagagg cagcctgctg acctgcggcg acgtggagga gaaccccggc 60
ccc 63
<210> 262
<211> 60
<212> DNA
<213> 马甲型鼻炎(Equine rhinitis A)病毒
<400> 262
ggcagcggcc agtgcaccaa ctacgccctg ctgaagctgg ccggcgacgt ggagagcaac 60
<210> 263
<211> 75
<212> DNA
<213> 口蹄疫病(Foot-and-mouth disease)病毒
<400> 263
ggcagcggcg tgaagcagac cctgaacttc gacctgctga agctggccgg cgacgtggag 60
agcaaccccg gcccc 75
<210> 264
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 264
gtgtccaagg gcgaagaact gtttaccggc gtggtgccca tcctggtgga actggatggg 60
gatgtgaacg gccacaagtt cagcgttagc ggagaaggcg aaggcgacgc cacatacgga 120
aagctgacac tgaagttcat ctgcaccacc ggcaagctgc ctgtgccatg gccaacactg 180
gtcaccacac tgacatacgg cgtgcagtgc ttcagcagat accccgacca tatgaagcag 240
catgacttct tcaagagcgc catgcctgag ggctacgtgc aagagcggac catcttcttt 300
aaggacgacg gcaactacaa gaccagggcc gaagtgaagt tcgagggcga caccctcgtg 360
aaccggatcg agctgaaggg catcgacttc aaagaggacg gcaacatcct gggccacaag 420
ctcgagtaca actacaacag ccacaacgtg tacatcatgg ccgacaagca gaaaaacggc 480
atcaaagtga acttcaagat ccggcacaac atcgaggacg gctcagtgca gctggccgac 540
cactatcagc agaacacacc catcggagat ggccccgttc tgctgcccga taaccactac 600
ctgagcacac agagcaagct gagcaaggac cccaacgaga agcgggacca catggtcctg 660
ctggaatttg tgacagccgc cggaatcacc ctcggcatgg acgagcttta caaa 714
<210> 265
<211> 714
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 265
gtgagcaagg gcgaggagct gttcaccggc gtggtgccca tcctggtgga gctggacggc 60
gacgtgaacg gccacaagtt cagcgtgagc ggcgagggcg agggcgacgc cacctacggc 120
aagctgaccc tgaagttcat ctgcaccacc ggcaagctgc ccgtgccctg gcccaccctg 180
gtgaccaccc tgacctacgg cgtgcagtgc ttcgccagat accccgacca catgaagcag 240
cacgacttct tcaagagcgc catgcccgag ggctacgtgc aggagagaac catcttcttc 300
aaggacgacg gcaactacaa gaccagagcc gaggtgaagt tcgagggcga caccctggtg 360
aacagaatcg agctgaaggg catcgacttc aaggaggacg gcaacatcct gggccacaag 420
ctggagtaca actacaacag ccacaaggtg tacatcaccg ccgacaagca gaagaacggc 480
atcaaggtga acttcaagac cagacacaac atcgaggacg gcagcgtgca gctggccgac 540
cactaccagc agaacacccc catcggcgac ggccccgtgc tgctgcccga caaccactac 600
ctgagcaccc agagcaagct gagcaaggac cccaacgaga agagagacca catggtgctg 660
ctggagttcg tgaccgccgc cggcatcacc ctgggcatgg acgagctgta caag 714
<210> 266
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 266
gtgtctaagg gcgaagagga caacatggcc atcatcaaag aattcatgcg gttcaaggtg 60
cacatggaag gcagcgtgaa cggccacgag ttcgagattg aaggcgaagg cgagggcaga 120
ccttacgagg gaacacagac cgccaagctg aaagtcacca aaggcggccc tctgcctttt 180
gcctgggaca ttctgagccc tcagtttatg tacggctcca aggcctacgt gaagcacccc 240
gccgatattc ccgactatct gaagctgagc ttccccgagg gcttcaactg ggagcgcgtg 300
atgaatttcg aggacggcgg cgtggtcacc gtgactcaag atagctctct gcaggacggc 360
gagttcatct acaaagtgaa gctgcggggc acaaacttcc ccagcgacgg acctgtgatg 420
cagtgcagaa caatgggctg ggaagccagc accgagagaa tgtacccaga agatggcgcc 480
ctgaagggcg agattaagca gcggctgaaa ctcaaggatg gcggccacta cgacgccgaa 540
gtgaaaacca cctacaaggc caagaaaccc gtgcagctgc ctggcgccta caacgtggac 600
atcaagctgg atatcctgag ccacaatgag gactacacca tcgtcgagca gtacgagaga 660
gccgagggga gacattctac cggcggaatg gacgagctgt acaaa 705
<210> 267
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 267
gtgtctaagg gcgaagccgt gatcaaagaa ttcatgcggt tcaaggtgca catggaaggc 60
agcatgaacg gccacgagtt cgagatcgaa ggcgaaggcg agggcagacc ttatgaggga 120
acacagaccg ccaagctgaa agtgaccaaa ggcggccctc tgcctttcag ctgggacatt 180
ctgagccctc agtttatgta cggcagccgg gccttcatca agcaccctgc cgatattccc 240
gactactaca agcagagctt ccccgagggc ttcaagtggg agagagtgat gaacttcgag 300
gacggcggag ccgtgaccgt gacacaggat acaagcctgg aagatggcac cctgatctac 360
aaagtgaagc tgcggggcac caactttcca cctgatggcc ccgtgatgca gaaaaagacc 420
atgggctggg aagccagcac cgagagactg tatcctgagg atggcgtgct gaagggcgac 480
atcaagatgg ccctgagact gaaggatggc ggcagatacc tggccgactt caagaccacc 540
tacaaggcca agaaacccgt gcagatgcct ggcgcctaca acgtggacag aaagctggac 600
atcaccagcc acaacgagga ctacaccgtg gtggaacagt acgagcggag cgaaggcaga 660
cactctacag gcggaatgga cgagctgtac aaa 693
<210> 268
<211> 594
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 268
acagagtaca aacctacagt gcgcctggcc accagggacg atgttcctag agccgtcaga 60
actctggccg ctgccttcgc cgattatcca gccacaagac acaccgtgga tcccgacaga 120
cacatcgaga gagtgaccga gctgcaagag ctgtttctga ccagagtcgg cctggacatc 180
ggcaaagtgt gggttgcaga tgatggcgcc gctgtggctg tgtggacaac acctgaatct 240
gtggaagccg gcgcagtgtt tgccgagatc ggacctagaa tggccgagct gagcggatct 300
agactggctg ctcaacagca gatggaaggc ctgctggctc cccacagacc aaaagagcct 360
gcttggtttc tggccaccgt gggcgttagc cctgaccacc aaggcaaagg actgggatct 420
gctgtggtgc tgcctggcgt tgaagccgct gaaagagctg gcgttccagc cttcctggaa 480
acaagcgccc ctcggaacct gcctttctac gagagactgg gctttaccgt gaccgccgat 540
gtggaagtgc cagagggacc aagaacctgg tgcatgacca gaaagcctgg cgcc 594
<210> 269
<211> 789
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 269
attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc 60
tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg 120
caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcag 180
gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc 240
gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat 300
ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg 360
cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc 420
gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag 480
catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgcgcat gcccgacggc 540
gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc 600
cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata 660
gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc 720
gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac 780
gagttcttc 789
<210> 270
<211> 1014
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 270
cctgaactca ccgcgacgtc tgtcgagaag tttctgatcg aaaagttcga cagcgtctcc 60
gacctgatgc agctctcgga gggcgaagaa tctcgtgctt tcagcttcga tgtaggaggg 120
cgtggatatg tcctgcgggt aaatagctgc gccgatggtt tctacaaaga tcgttatgtt 180
tatcggcact ttgcatcggc cgcgctcccg attccggaag tgcttgacat tggggaattc 240
agcgagagcc tgacctattg catctcccgc cgtgcacagg gtgtcacgtt gcaagacctg 300
cctgaaaccg aactgcccgc tgttctgcag ccggtcgcgg aggccatgga tgcgatcgct 360
gcggccgatc ttagccagac gagcgggttc ggcccattcg gaccgcaagg aatcggtcaa 420
tacactacat ggcgtgattt catatgcgcg attgctgatc cccatgtgta tcactggcaa 480
actgtgatgg acgacaccgt cagtgcgtcc gtcgcgcagg ctctcgatga gctgatgctt 540
tgggccgagg actgccccga agtccggcac ctcgtgcacg cggatttcgg ctccaacaat 600
gtcctgacgg acaatggccg cataacagcg gtcattgact ggagcgaggc gatgttcggg 660
gattcccaat acgaggtcgc caacatcttc ttctggaggc cgtggttggc ttgtatggag 720
cagcagacgc gctacttcga gcggaggcat ccggagcttg caggatcgcc gcggctccgg 780
gcgtatatgc tccgcattgg tcttgaccaa ctctatcaga gcttggttga cggcaatttc 840
gatgatgcag cttgggcgca gggtcgatgc gacgcaatcg tccgatccgg agccgggact 900
gtcgggcgta cacaaatcgc ccgcagaagc gcggccgtct ggaccgatgg ctgtgtagaa 960
gtactcgccg atagtggaaa ccgacgcccc agcactcgtc cgagggcaaa ggaa 1014
<210> 271
<211> 5448
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 271
gccacctgac gtctaagaaa ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat 60
cacgaggccc tttcgttgta aaacgacggc cagtcgaacc acgcaatgcg tctcgatccg 120
cagtgtcttg cgtctcttac agttgaagtc ggaagtttac atacacttaa gttggagtca 180
ttaaaactcg tttttcaact actccacaaa tttcttgtta acaaacaata gttttggcaa 240
gtcagttagg acatctactt tgtgcatgac acaagtcatt tttccaacaa ttgtttacag 300
acagattatt tcacttataa ttcactgtat cacaattcca gtgggtcaga agtgtacata 360
cacgcgcttg actgtgcctt tgctcttcaa tgggagggct ccggtgcccg tcagtgggca 420
gagcgcacat cgcccacagt ccccgagaag ttggggggag gggtcggcaa ttgaaccggt 480
gcctagagaa ggtggcgcgg ggtaaactgg gaaagtgatg tcgtgtactg gctccgcctt 540
tttcccgagg gtgggggaga accgtatata agtgcagtag tcgccgtgaa cgttcttttt 600
cgcaacgggt ttgccgccag aacacaggta agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc 660
ctctttacgg gttatggccc ttgcgtgcct tgaattactt ccacctggct gcagtacgtg 720
attcttgatc ccgagcttcg ggttggaagt gggtgggaga gttcgaggcc ttgcgcttaa 780
ggagcccctt cgcctcgtgc ttgagttgag gcctggcctg ggcgctgggg ccgccgcgtg 840
cgaatctggt ggcaccttcg cgcctgtctc gctgctttcg ataagtctct agccatttaa 900
aatttttgat gacctgctgc gacgcttttt ttctggcaag atagtcttgt aaatgcgggc 960
caagatctgc acactggtat ttcggttttt ggggccgcgg gcggcgacgg ggcccgtgcg 1020
tcccagcgca catgttcggc gaggcggggc ctgcgagcgc ggccaccgag aatcggacgg 1080
gggtagtctc aagctggccg gcctgctctg gtgcctggcc tcgcgccgcc gtgtatcgcc 1140
ccgccctggg cggcaaggct ggcccggtcg gcaccagttg cgtgagcgga aagatggccg 1200
cttcccggcc ctgctgcagg gagctcaaaa tggaggacgc ggcgctcggg agagcgggcg 1260
ggtgagtcac ccacacaaag gaaaagggcc tttccgtcct cagccgtcgc ttcatgtgac 1320
tccacggagt accgggcgcc gtccaggcac ctcgattagt tctcgagctt ttggagtacg 1380
tcgtctttag gttgggggga ggggttttat gcgatggagt ttccccacac tgagtgggtg 1440
gagactgaag ttaggccagc ttggcacttg atgtaattct ccttggaatt tgcccttttt 1500
gagtttggat cttggttcat tctcaagcct cagacagtgg ttcaaagttt ttttcttcca 1560
tttcaggtgt cgtgatactg ccgccaccat gggctccggc gccaccaact ttagcctgct 1620
gaaacaggca ggcgacgtgg aagagaaccc tggacctgtg tccaagggcg aagaactgtt 1680
taccggcgtg gtgcccatcc tggtggaact ggatggggat gtgaacggcc acaagttcag 1740
cgttagcgga gaaggcgaag gcgacgccac atacggaaag ctgacactga agttcatctg 1800
caccaccggc aagctgcctg tgccatggcc aacactggtc accacactga catacggcgt 1860
gcagtgcttc agcagatacc ccgaccatat gaagcagcat gacttcttca agagcgccat 1920
gcctgagggc tacgtgcaag agcggaccat cttctttaag gacgacggca actacaagac 1980
cagggccgaa gtgaagttcg agggcgacac cctcgtgaac cggatcgagc tgaagggcat 2040
cgacttcaaa gaggacggca acatcctggg ccacaagctc gagtacaact acaacagcca 2100
caacgtgtac atcatggccg acaagcagaa aaacggcatc aaagtgaact tcaagatccg 2160
gcacaacatc gaggacggct cagtgcagct ggccgaccac tatcagcaga acacacccat 2220
cggagatggc cccgttctgc tgcccgataa ccactacctg agcacacaga gcaagctgag 2280
caaggacccc aacgagaagc gggaccacat ggtcctgctg gaatttgtga cagccgccgg 2340
aatcaccctc ggcatggacg agctttacaa aggcggcgga ggatctggcg gaggtggaag 2400
cggaggcggt ggaagcacag agtacaaacc tacagtgcgc ctggccacca gggacgatgt 2460
tcctagagcc gtcagaactc tggccgctgc cttcgccgat tatccagcca caagacacac 2520
cgtggatccc gacagacaca tcgagagagt gaccgagctg caagagctgt ttctgaccag 2580
agtcggcctg gacatcggca aagtgtgggt tgcagatgat ggcgccgctg tggctgtgtg 2640
gacaacacct gaatctgtgg aagccggcgc agtgtttgcc gagatcggac ctagaatggc 2700
cgagctgagc ggatctagac tggctgctca acagcagatg gaaggcctgc tggctcccca 2760
cagaccaaaa gagcctgctt ggtttctggc caccgtgggc gttagccctg accaccaagg 2820
caaaggactg ggatctgctg tggtgctgcc tggcgttgaa gccgctgaaa gagctggcgt 2880
tccagccttc ctggaaacaa gcgcccctcg gaacctgcct ttctacgaga gactgggctt 2940
taccgtgacc gccgatgtgg aagtgccaga gggaccaaga acctggtgca tgaccagaaa 3000
gcctggcgcc tgagcttctg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc 3060
cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga 3120
aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga 3180
cagcaagggg gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat 3240
ggcgctgcat gaagagctta aacaatttaa aggcaatgct accaaatact aagcgcgtgt 3300
atgtacactt ctgacccact gggaatgtga tgaaagaaat aaaagctgaa atgaatcatt 3360
ctctctacta ttattctgat atttcacatt cttaaaataa agtggtgatc ctaactgacc 3420
ttaagacagg gaatctttac tcggattaaa tgtcaggaat tgtgaaaaag tgagtttaaa 3480
tgtatttggc taaggtgtat gtaaacttcc gacttcaact gtaagagacg gagtcactgc 3540
caaccgagac ggtcatagct gtttcctgtg tgccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg 3600
ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttacc 3660
cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag 3720
gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca 3780
tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca 3840
ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg 3900
atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag 3960
gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt 4020
tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca 4080
cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg 4140
cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa ggacagtatt 4200
tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc 4260
cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg 4320
cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg 4380
gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta 4440
gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg 4500
gtctgacagt tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg 4560
attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag 4620
gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc 4680
aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg 4740
agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc agacttgttc 4800
aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat 4860
tcgtgattgc gcctgagcga gtcgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac 4920
aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac ggccagcgca tcaacaatat tttcacctga 4980
atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgctg tggtgagtaa 5040
ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt 5100
cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg 5160
tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga 5220
ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt 5280
taatcgcggc ctagagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcatactct tcctttttca 5340
atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat 5400
ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagt 5448
<210> 272
<211> 3802
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 272
ccaatgatta cagttgaagt cggaagttta catacactta agttggagtc attaaaactc 60
gtttttcaac tactccacaa atttcttgtt aacaaacaat agttttggca agtcagttag 120
gacatctact ttgtgcatga cacaagtcat ttttccaaca attgtttaca gacagattat 180
ttcacttata attcactgta tcacaattcc agtgggtcag aagtgtacat acacgcgctt 240
gactgtgcct ttgctcttca atgggagggc tccggtgccc gtcagtgggc agagcgcaca 300
tcgcccacag tccccgagaa gttgggggga ggggtcggca attgaaccgg tgcctagaga 360
aggtggcgcg gggtaaactg ggaaagtgat gtcgtgtact ggctccgcct ttttcccgag 420
ggtgggggag aaccgtatat aagtgcagta gtcgccgtga acgttctttt tcgcaacggg 480
tttgccgcca gaacacaggt aagtgccgtg tgtggttccc gcgggcctgg cctctttacg 540
ggttatggcc cttgcgtgcc ttgaattact tccacctggc tgcagtacgt gattcttgat 600
cccgagcttc gggttggaag tgggtgggag agttcgaggc cttgcgctta aggagcccct 660
tcgcctcgtg cttgagttga ggcctggcct gggcgctggg gccgccgcgt gcgaatctgg 720
tggcaccttc gcgcctgtct cgctgctttc gataagtctc tagccattta aaatttttga 780
tgacctgctg cgacgctttt tttctggcaa gatagtcttg taaatgcggg ccaagatctg 840
cacactggta tttcggtttt tggggccgcg ggcggcgacg gggcccgtgc gtcccagcgc 900
acatgttcgg cgaggcgggg cctgcgagcg cggccaccga gaatcggacg ggggtagtct 960
caagctggcc ggcctgctct ggtgcctggc ctcgcgccgc cgtgtatcgc cccgccctgg 1020
gcggcaaggc tggcccggtc ggcaccagtt gcgtgagcgg aaagatggcc gcttcccggc 1080
cctgctgcag ggagctcaaa atggaggacg cggcgctcgg gagagcgggc gggtgagtca 1140
cccacacaaa ggaaaagggc ctttccgtcc tcagccgtcg cttcatgtga ctccacggag 1200
taccgggcgc cgtccaggca cctcgattag ttctcgagct tttggagtac gtcgtcttta 1260
ggttgggggg aggggtttta tgcgatggag tttccccaca ctgagtgggt ggagactgaa 1320
gttaggccag cttggcactt gatgtaattc tccttggaat ttgccctttt tgagtttgga 1380
tcttggttca ttctcaagcc tcagacagtg gttcaaagtt tttttcttcc atttcaggtg 1440
tcgtgatact gccgccacca tgtaagcttc tgtgccttct agttgccagc catctgttgt 1500
ttgcccctcc cccgtgcctt ccttgaccct ggaaggtgcc actcccactg tcctttccta 1560
ataaaatgag gaaattgcat cgcattgtct gagtaggtgt cattctattc tggggggtgg 1620
ggtggggcag gacagcaagg gggaggattg ggaagacaat agcaggcatg ctggggatgc 1680
ggtgggctct atggcgctgc atgaagagct taaacaattt aaaggcaatg ctaccaaata 1740
ctaagcgcgt gtatgtacac ttctgaccca ctgggaatgt gatgaaagaa ataaaagctg 1800
aaatgaatca ttctctctac tattattctg atatttcaca ttcttaaaat aaagtggtga 1860
tcctaactga ccttaagaca gggaatcttt actcggatta aatgtcagga attgtgaaaa 1920
agtgagttta aatgtatttg gctaaggtgt atgtaaactt ccgacttcaa ctgtaatcgg 1980
aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct 2040
ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca 2100
gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct 2160
cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc 2220
gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt 2280
tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc 2340
cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc 2400
cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg 2460
gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc 2520
agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag 2580
cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga 2640
tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat 2700
tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag 2760
ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat 2820
cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc 2880
cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat 2940
accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag 3000
ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg 3060
ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc 3120
tacaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca 3180
acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg 3240
tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc 3300
actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta 3360
ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc 3420
aatacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg 3480
ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc 3540
cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc 3600
aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat 3660
actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag 3720
cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc 3780
ccgaaaagtg ccacctgacg tc 3802
<210> 273
<211> 1236
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 273
atgagcagca agggatctgt ggtgctggcc tactctggcg gcctggatac ctcttgtatc 60
ctcgtgtggc tgaaagaaca gggctacgac gtgatcgcct acctggccaa catcggccag 120
aaagaggact tcgaggaagc ccggaagaag gccctgaagc tgggagccaa gaaggtgttc 180
atcgaggacg tgtcccgcga gttcgtggaa gagtttatct ggcccgccat ccagtctagc 240
gccctgtacg aggatagata cctgctgggc accagcctgg ccagaccttg tatcgccaga 300
aagcaggtcg agatcgccca gagagaaggc gccaaatacg tgtcccatgg cgccacaggc 360
aagggcaacg atcaagttcg cttcgagctg agctgctact ctctggcccc tcagatcaaa 420
gtgatcgccc cttggagaat gcccgagttc tacaacagat tcaagggccg caacgacctg 480
atggaatacg ccaagcagca cggcatcccc attccagtga cacccaagaa tccttggagc 540
atggacgaga acctgatgca catcagctac gaggccggca tcctggaaaa ccctaagaat 600
caggcccctc ctggcctgta caccaagaca caggatccag ccaaggctcc caacacaccc 660
gacattctgg aaatcgagtt caagaaaggc gtgcccgtga aagtgaccaa cgtgaaggat 720
ggcaccacac accagacaag cctggaactg ttcatgtacc tgaacgaggt ggccggcaag 780
cacggcgtgg gaagaatcga catcgtggaa aatcggttca tcggcatgaa gtcccggggc 840
atctatgaga caccagccgg caccattctg tatcacgccc acctggacat tgaggccttc 900
accatggacc gggaagtgcg gaagatcaag caaggcctgg gcctgaagtt tgccgaactg 960
gtgtataccg gcttctggca ctctcctgag tgcgagtttg tgcggcactg cattgccaag 1020
agccaagagc gcgtggaagg caaggtgcag gtttccgtgc tgaaaggcca ggtgtacatt 1080
ctgggcagag agagccctct gagcctgtat aacgaggaac tcgtgtccat gaacgtgcag 1140
ggcgattacg agcctaccga tgccaccggc ttcatcaaca tcaacagcct gagactgaaa 1200
gagtaccacc gcctgcagtc caaagtgacc gccaaa 1236
<210> 274
<211> 708
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的多核苷酸
<400> 274
atggtgtcca agggtgaaga ggacaacatg gcttccttgc ctgccaccca tgaactccat 60
atcttcgggt ctattaacgg agtcgacttt gatatggtgg ggcagggtac gggcaaccct 120
aacgacggct acgaagagct gaacctgaag tccactaagg gcgacctcca gttttctcct 180
tggattctgg tgccacacat cggttatggt tttcatcagt accttccata cccggacggc 240
atgtccccgt tccaggcggc tatggtcgac ggatctggct accaggtgca ccgcactatg 300
cagtttgaag acggcgcatc tctgaccgtg aactaccgtt acacttatga gggctcccat 360
atcaagggtg aggcgcaagt caagggcacc ggtttcccgg cggatggacc agtgatgacc 420
aacagtctta ccgcagccga ctggtgtcgc agcaaaaaga catatcccaa cgacaagacc 480
attatcagca cctttaaatg gtcttacacg accgggaacg gtaaacgcta taggagcaca 540
gcccgcacta cctatacctt tgcaaaacct atggccgcga actatctgaa aaaccagccg 600
atgtacgtct tccggaagac cgagctgaag cacagtaaga cagagctgaa cttcaaagag 660
tggcaaaaag cttttacgga cgtgatgggc atggatgaat tgtacaag 708
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的肽
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1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的肽
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser
20
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成的6xHis标签
<400> 278
His His His His His His
1 5

Claims (87)

1.一种经遗传修饰的T细胞，其经遗传修饰以表达：
a)重组精氨酸转运体，和
b)嵌合抗原受体，其具有至少一个特异性结合呈递在靶细胞群体上的细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域以及胞内信号转导结构域。
2.一种表达载体，其包含编码以下的分离的核酸：a)抗原特异性靶向区、b)跨膜结构域、c)任选地至少一个共刺激结构域、d)胞内信号转导结构域以及e)精氨酸转运体。
3.一种经遗传修饰的T细胞，其经修饰以表达由根据权利要求2所述的表达载体编码的嵌合抗原受体。
4.根据权利要求1或3所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述精氨酸转运体选自由以下组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+。
5.根据权利要求1、3或4中任一项所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述经遗传修饰的T细胞包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242和246，或其片段或变体。
6.根据权利要求1、3或4所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述经遗传修饰的T细胞包含这样的核酸，所述核酸表达与以下中的一者具有约90％、95％或99％百分比同一性的序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242和246。
7.一种药学上可接受的组合物，其包含根据权利要求1或3至6中任一项所述的经遗传修饰的T细胞和药学上可接受的赋形剂。
8.一种促发培养基，其包含根据权利要求1或3至6中任一项所述的经遗传修饰的T细胞和L-精氨酸。
9.一种药物组合物，其包含嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)，所述CAR-T细胞表达重组精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-1。
11.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-2。
12.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-3。
13.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-4。
14.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为y+LAT1和4F2hc。
15.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为y+LAT2和4F2hc。
16.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为b0,+AT和rBAT。
17.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为ATB0,+。
18.根据权利要求9所述的药物组合物，其中所述药物组合物被包装为试剂盒。
19.一种治疗有需要的患者的实体瘤癌症的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据权利要求7或9所述的药物组合物。
20.一种治疗有需要的患者的血液癌症的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据权利要求7或9所述的药物组合物。
21.一种调节有需要的患者的胞内精氨酸水平以影响T细胞介导的免疫应答的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据权利要求7或9所述的药物组合物。
22.一种治疗有需要的人类患者的病症的方法，其包括：向所述人类患者施用治疗有效量的包含嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)的组合物，所述CAR-T细胞表达重组精氨酸转运体和嵌合抗原受体蛋白。
23.一种调节有需要的患者中T细胞介导的免疫应答的方法，所述免疫应答针对表达细胞表面抗原的靶细胞群，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的T细胞，所述T细胞：a)经遗传修饰以表达嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含：至少一个特异性结合呈递在所述靶细胞群上的所述细胞表面抗原的抗原特异性靶向区、跨膜结构域、胞内信号转导结构域，和b)经遗传修饰以表达重组精氨酸转运体。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述T细胞在施用之前被培养在包含精氨酸的培养基中。
25.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-1。
26.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-2。
27.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-3。
28.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-4。
29.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为y+LAT1和4F2hc。
30.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为y+LAT2和4F2hc。
31.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为b0,+AT和rBAT。
32.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体为ATB0,+。
33.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其包括施用根据权利要求1和3至6中任一项所述的T细胞。
34.根据权利要求22至32中任一项所述的方法，其进一步包括向所述人类患者施用第二治疗剂。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述第二治疗剂为抗PD-1、抗PD-L1或抗CTLA-4抗体。
36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述第二治疗剂的施用在施用包含所述CAR-T细胞的所述组合物之前、期间或之后进行。
37.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述第二治疗剂的施用在施用所述治疗有效量的T细胞之前、期间或之后进行。
38.根据权利要求22至37中任一项所述的方法，其中每周一次、每2周一次、每3周一次或每4周一次向所述人类患者施用包含所述CAR-T细胞的所述组合物。
39.根据权利要求22至37中任一项所述的方法，其包括施用每千克所述患者107至1010个CAR-T细胞。
40.一种制备表达重组精氨酸转运体的经遗传修饰的CAR-T细胞的方法，其包括：
用DNA构建体转染T细胞，所述DNA构建体包含特异性嵌合抗原受体和精氨酸转运体的核苷酸序列，由此产生表达所述嵌合抗原受体与所述精氨酸转运体两者的经遗传修饰的CAR-T细胞；和
在包含精氨酸的培养基中培养所述经遗传修饰的CAR-T细胞。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述培养包括在所述培养基中培养所述经遗传修饰的CAR-T细胞，直至所述CAR-T细胞的胞内精氨酸水平累积至一定水平。
42.一种经遗传修饰的T细胞，其经遗传修饰以表达重组精氨酸转运体。
43.根据权利要求42所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述精氨酸转运体选自由以下组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+。
44.根据权利要求42或43所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述经遗传修饰的T细胞包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242和246，或其片段或变体。
45.根据权利要求42或43所述的经遗传修饰的T细胞，其中所述经遗传修饰的T细胞包含这样的核酸，所述核酸表达与以下中的一者具有约90％、95％或99％百分比同一性的序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242和246。
46.一种药学上可接受的组合物，其包含根据权利要求42至45中任一项所述的经遗传修饰的T细胞，和药学上可接受的赋形剂。
47.一种促发培养基，其包含根据权利要求42至45中任一项所述的经遗传修饰的T细胞和L-精氨酸。
48.一种药物组合物，其包含表达重组精氨酸转运蛋白的T细胞。
49.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-1。
50.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-2。
51.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-3。
52.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为CAT-4。
53.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为y+LAT1和4F2hc。
54.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为y+LAT2和4F2hc。
55.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为b0,+AT和rBAT。
56.根据权利要求48的药物组合物，其中所述精氨酸转运体为ATB0,+。
57.根据权利要求48的药物组合物，其中所述药物组合物被包装为试剂盒。
58.一种治疗有需要的患者的实体瘤癌症的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据权利要求46或48所述的药物组合物。
59.一种治疗有需要的患者的血液癌症的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据权利要求46或48所述的药物组合物。
60.一种调节有需要的患者的胞内精氨酸水平以影响T细胞介导的免疫应答的方法，其包括向所述患者施用有效量的根据权利要求46或48所述的药物组合物。
61.一种用于治疗有需要的人类患者的病症的方法，其包括：向所述人类患者施用治疗有效量的包含表达重组精氨酸转运体的T细胞的组合物。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述T细胞在施用之前被培养在包含精氨酸的培养基中。
63.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-1。
64.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-2。
65.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-3。
66.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为CAT-4。
67.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为y+LAT1和4F2hc。
68.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为y+LAT2和4F2hc。
69.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为b0,+AT和rBAT。
70.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述精氨酸转运体为ATB0,+。
71.根据权利要求61或62所述的方法，其包括施用根据权利要求42至45中任一项所述的T细胞。
72.根据权利要求58至71中任一项所述的方法，其进一步包括向所述人类患者施用第二治疗剂。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述第二治疗剂为抗PD-1、抗PD-L1或抗CTLA-4抗体。
74.根据权利要求72或73所述的方法，其中所述第二治疗剂的施用在施用包含所述T细胞的所述组合物之前、期间或之后进行。
75.根据权利要求72或73所述的方法，其中所述第二治疗剂的施用在施用所述治疗有效量的T细胞之前、期间或之后进行。
76.一种制备表达重组精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞的方法，其包括：
用包含精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体转染T细胞，由此产生表达所述精氨酸转运体的经遗传修饰的T细胞；和
在包含精氨酸的培养基中培养所述经遗传修饰的T细胞。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述培养包括在所述培养基中培养所述经遗传修饰的T细胞，直至所述T细胞的胞内精氨酸水平累积至一定水平。
78.一种在低精氨酸环境中提高T细胞存活的方法，所述方法包括：向低精氨酸环境施用包含重组精氨酸转运体的T细胞。
79.根据权利要求78所述的方法，其中在所述施用步骤之前，所述方法包括用包含编码所述重组精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体转染所述T细胞。
80.根据权利要求78或权利要求79所述的方法，其中所述T细胞包含嵌合抗原受体和/或包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列的DNA构建体。
81.根据权利要求78至80中任一项所述的方法，其中在所述施用步骤之前，所述方法包括在包含精氨酸的培养基中培养所述T细胞。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述培养包括在所述培养基中培养所述T细胞，直至所述T细胞的胞内精氨酸水平累积至一定水平。
83.根据权利要求78至82中任一项所述的方法，其中所述精氨酸转运体选自由以下组成的组：CAT-1、CAT-2、CAT-3、CAT-4、y+LAT1和4F2hc、y+LAT2和4F2hc、b0,+AT和rBAT、以及ATB0,+。
84.根据权利要求78至82中任一项所述的方法，其中所述包含编码所述重组精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242和246，或其片段或变体。
85.根据权利要求78至82中任一项所述的方法，其中所述包含编码所述重组精氨酸转运体的核苷酸序列的DNA构建体包含这样的核酸，所述核酸表达与以下中的一者具有约90％、95％或99％百分比同一性的序列：SEQ ID NO:180、184-188、204、205、210、214、215、220-222、227-230、234-236、242和246。
86.根据权利要求78至85中任一项所述的方法，其中所述低精氨酸环境为细胞培养基。
87.根据权利要求78至85中任一项所述的方法，其中所述低精氨酸环境为肿瘤微环境。
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