CN115427060A - 环孢菌素类似物用于治疗纤维化的用途 - Google Patents

Abstract

本文公开的内容包括适合用于预防、治疗或逆转纤维化的方法、组合物和试剂盒。所述方法包括向有相应需要的受试者施用包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物。所述组合物和试剂盒包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。

Description

环孢菌素类似物用于治疗纤维化的用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年2月19日提交的美国临时专利申请第62/978,526号以及于2020年2月25日提交的美国临时专利申请第62/981,383号的优先权的权益。这些相关申请中的每一个的内容通过引用以其整体并入本文。

背景

领域

本公开内容总体上涉及分子生物学领域和医学领域。一个方面涉及用亲环蛋白抑制剂预防、治疗和逆转纤维化。

相关技术的描述

纤维化是一种以纤维结缔组织蛋白质的不受控制的沉积和减少的清除为特征的病理状况，并且最终导致致命的终末期器官瘢痕形成。组织纤维化可以发生在所有器官中。纤维化紊乱的临床治疗仍然非常具有挑战性，例如，对于特发性肺纤维化(IPF)和硬皮病的治疗选择是极其有限的。

对发现抗纤维化剂(antifibrotic agent)存在需求，所述抗纤维化剂在预防、治疗和逆转影响多种器官的纤维化(包括非肝纤维化)中是有效的。

概述

本文公开的内容包括用于治疗非肝纤维化的方法。该方法可以例如包括向有相应需要的受试者施用包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，该芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

有相应需要的受试者可以是患有非肝纤维化的受试者。该方法可以包括减少受试者的非肝纤维化的量。在一些实施方案中，受试者的非肝纤维化的量减少了5％、10％、20％或更多。该方法可以包括减少受试者的非肝纤维化的形成。在一些实施方案中，受试者的非肝纤维化的形成减少了5％、10％、20％或更多。

非肝纤维化的非限制性实例包括肺、肾脏、心脏、皮肤、眼睛、胃肠道、腹膜、骨髓、肌肉、血管、脉管系统或其任何组合中的纤维化。在一些实施方案中，有相应需要的受试者是患有纤维化紊乱的受试者，该纤维化紊乱选自由以下组成的组：特发性肺纤维化(IPF)、心脏纤维化、真皮纤维化、肾纤维化或其组合。

本文还包括用于预防或延迟纤维化的发作的方法。该方法可以例如包括向有相应需要的受试者施用包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，该芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

有相应需要的受试者可以是例如处于发展纤维化的风险的受试者。在一些实施方案中，与未经治疗的受试者相比，受试者的发展纤维化的风险被降低了至少5％、10％、20％或更多。在一些实施方案中，纤维化的发作在受试者中被延迟至少一个月、一年或更长时间。

在一些实施方案中，该方法包括减少纤维化形成，其中与未经治疗的受试者相比，纤维化形成在受试者中被减少至少一个月、一年或更长时间。

本文还包括用于减少纤维化或逆转纤维化的方法。该方法可以例如包括向有相应需要的受试者施用包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，该芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，有相应需要的受试者是患有纤维化的受试者。在一些实施方案中，该方法包括抑制受试者的纤维化形成。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。在一些实施方案中，非肝纤维化包括肺、肾脏、心脏、皮肤、眼睛、胃肠道、腹膜、骨髓、肌肉、血管、脉管系统或其任何组合的纤维化。在一些实施方案中，有相应需要的受试者是患有纤维化紊乱的受试者，所述纤维化紊乱选自由以下组成的组：肺纤维化、心脏纤维化、真皮纤维化、肾纤维化、肝纤维化或其组合。

在一些实施方案中，有相应需要的受试者是患有特发性肺纤维化(IPF)的受试者。在一些实施方案中，纤维化是肝纤维化，例如肝硬化。在一些实施方案中，肝硬化与病毒性肝炎、血吸虫病和慢性酒精中毒相关。

在一些实施方案中，式L的环孢菌素类似物是CRV431：

在一些实施方案中，组合物包含治疗或预防有效量的式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。

在一些实施方案中，非肝纤维化或纤维化由治疗剂、损伤或其组合诱导。在一些实施方案中，非肝纤维化或纤维化与在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增殖、瘤形成、其组合之后发生的细胞外基质成分的积聚相关。在一些实施方案中，非肝纤维化或纤维化与主要器官疾病、纤维增生性紊乱、与创伤相关的瘢痕形成或其组合相关。在一些实施方案中，纤维化与间质性肺病、肝硬化、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、肾脏疾病、心脏或血管疾病、眼疾病、全身和局部硬皮病、瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、动脉粥样硬化、再狭窄、掌腱膜挛缩、手术并发症、化疗药物诱导的纤维化、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤、腹膜后纤维化、腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成或其组合相关。在一些实施方案中，与间质性肺病相关的纤维化是结节病、矽肺、药物反应、感染、胶原血管疾病、类风湿性关节炎、系统性硬化症、硬皮病、肺纤维化、特发性肺纤维化、普通型间质性肺炎、间质性肺病、隐源性纤维化肺泡炎、闭塞性细支气管炎、支气管扩张或其组合。

与未经治疗的受试者相比，该方法可以例如将受试者中的纤维化形成减少至少5％、10％、20％、50％、70％、90％或更多。

在一些实施方案中，该方法包括与未经治疗的受试者相比，延迟受试者的纤维化形成。受试者可以是例如哺乳动物(例如，人类)。在一些实施方案中，组合物包含一种或更多种药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，组合物包含一种或更多种另外的治疗剂。

在一些实施方案中，该方法还包括向有相应需要的受试者施用一种或更多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂包括另外的抗纤维化剂。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂包括II型干扰素受体激动剂、吡非尼酮和吡非尼酮类似物、尼达尼布(nintedanib)和尼达尼布类似物、抗血管生成剂、抗炎剂、IL-1拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素受体阻断剂和醛固酮拮抗剂、丝裂霉素C(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、腺苷酸环化酶活化剂、β-肾上腺素受体激动剂、类黄酮、肥大细胞稳定剂、磷酸二酯酶抑制剂、原花青素(procyanidin)或其组合。

在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂中的至少一种与组合物被共同施用至受试者。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂中的至少一种在施用组合物之前、在施用组合物之后或两者被施用至受试者。组合物可以通过例如静脉内施用、口服施用、肠胃外施用被施用至受试者。组合物可以例如呈粉末、丸剂、片剂、微片剂、小丸(pellet)、微丸(micropellet)、胶囊、含有微片剂的胶囊、液体、气溶胶或纳米颗粒的形式。在一些实施方案中，组合物以从10mg至250mg的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的有效日剂量被施用至受试者。

本文还提供的内容包括一种药物组合物，该药物组合物包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，用于预防或治疗纤维化，或用于预防或减少纤维化形成，或用于逆转纤维化，或用于减少纤维化的量，或用于延迟纤维化的发作，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，该芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是CRV431：

在一些实施方案中，药物组合物用于静脉内施用、口服施用或肠胃外施用。在一些实施方案中，药物组合物呈粉末、丸剂、片剂、微片剂、小丸、微丸、胶囊、含有微片剂的胶囊、液体、气溶胶或纳米颗粒的形式。

本文公开的内容包括一种试剂盒，该试剂盒包含

本文公开的药物组合物；以及

标签，其中该标签指示以下中的一种或更多种：

(a)试剂盒用于预防或治疗纤维化，

(b)试剂盒用于减少或抑制纤维化形成，

(c)试剂盒用于逆转纤维化，

(d)试剂盒用于减少纤维化的量，以及

(e)试剂盒用于延迟纤维化的发作。

在一些实施方案中，试剂盒还包含用于识别处于发展纤维化的风险的受试者的使用说明、用于识别患有纤维化的受试者的使用说明或两者。

附图简述

图1A-图1B是示出了在人类LX-2肝星状细胞培养中由CRV431治疗引起的前胶原和纤连蛋白的丰度的剂量依赖性降低的直方图。

图2A-图2B是示出了在人类IPF肺成纤维细胞培养中由CRV431治疗引起的前胶原和纤连蛋白的丰度的剂量依赖性降低的直方图。

图3A-图3B是示出了在人类心脏成纤维细胞培养中由CRV431治疗引起的前胶原和纤连蛋白的丰度的剂量依赖性降低的直方图。

图4A-图4B是示出了在人类肾系膜细胞培养中由CRV431治疗引起的前胶原和纤连蛋白的丰度的剂量依赖性降低的直方图。

图5A-图5B是示出了在人类真皮成纤维细胞培养中由CRV431治疗引起的前胶原和纤连蛋白的丰度的剂量依赖性降低的直方图。

图6A是示出了在培养中的人类精确切割的IPF肺切片中分泌的标志物的％每日平均变化的图。图6B是示出了在培养中的同一人类精确切割的IPF肺切片中的基因表达的图。

图7A-图7B是示出了CRV431在肾脏纤维化的小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型中的抗纤维化活性的图。

图8A-图8C是示出了CRV431在人类精确切割的肝切片(PCLS)中的抗纤维化活性的图。

图9A-图9B是示出了样品和供体的分布的PCA图，针对TGFb/PDGF+CRV431相对于TGFb/PDGF+媒介物的按组比较。

图9C是MA图，以及图10A-图10B是生成的热图，针对TGFb/PDGF+CRV431相对于TGFb/PDGF+媒介物的按组比较。

图11是示出了在按组比较TGFb/PDGF+CRV431相对于TGFb/PDGF+媒介物中识别的表达显著不同的基因的火山图。

图12A-图12B是示出了所有三个供体之间的明显的基因重叠的维恩图。

图13A-图13B是示出了样品和供体的分布的PCA图，针对未经刺激的+CRV431相对于未经刺激的+媒介物的按组比较。

图13C是MA图，以及图14A-图14B是生成的热图，针对未经刺激的+CRV431相对于未经刺激的+媒介物的按组比较。

图15是示出了在按组比较未经刺激的+CRV431相对于未经刺激的+媒介物中识别的表达显著不同的基因的火山图。

图16A-图16B是示出了所有三个供体之间的明显的基因重叠的维恩图，针对未经刺激的+CRV431相对于未经刺激的+媒介物的按组比较。

详细描述

在以下详细描述中，参考了构成其一部分的附图。在附图中，相似的符号通常识别相似的组分，除非上下文另外规定。详细描述、附图和权利要求中描述的说明性实施方案不意味着是限制性的。可以利用其他实施方案，并且可以做出其他改变，而不偏离本文呈现的主题的精神或范围。将容易地理解的是，如本文一般描述的和附图中图示的，本公开内容的方面可以以多种不同的配置被布置、替代、组合、分离和设计，其全部在本文中被明确地考虑并且构成本文的公开内容的一部分。

关于相关技术，所有专利、公布的专利申请、其他出版物以及来自GenBank和本文提及的其他数据库的序列通过引用以其整体并入。

定义

除非另外定义，否则本文使用的技术术语和科学术语具有与由本公开内容所属的领域的普通技术人员通常理解的相同含义。参见，例如Singleton等人,Dictionary ofMicrobiology and Molecular Biology第2版,J.Wiley&Sons(New York,NY 1994)；Sambrook等人,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press(Cold Spring Harbor,NY 1989)。为了本公开内容的目的，在下文定义了以下术语。

如本文使用的，“受试者”指的是作为治疗、观察或实验的对象的动物。“动物”包括冷血和温血的脊椎动物和无脊椎动物，诸如鱼类、贝类、爬行动物以及特别是哺乳动物。“哺乳动物”包括但不限于小鼠；大鼠；兔子；豚鼠；犬；猫；绵羊；山羊；奶牛；马；灵长类动物，诸如猴、黑猩猩和猿以及特别是人类。

如本文使用的，“患者”指的是正在由医学专业人员诸如医生(即，对抗疗法医生或骨科医学医生)或兽医医生治疗以尝试治愈特定疾病或紊乱、或者至少缓解特定疾病或紊乱的影响或者防止疾病或紊乱首先发生的受试者。

如本文使用的，“施用(administration)”或“施用(administering)”指的是向脊椎动物给予一定剂量的药学活性成分的方法。

如本文使用的，“剂量”指的是活性成分(例如，环孢菌素类似物，包括CRV431)的组合的量。

如本文使用的，“单位剂量”指的是以单剂量施用至患者的治疗剂的量。

如本文使用的,“日剂量”指的是在一天内施用至患者的治疗剂的总量。

如本文使用的，“治疗有效量”或“药学有效量”意指具有治疗效果的治疗剂的量。当单独施用或与一种或更多种另外的治疗剂组合施用时在治疗中有用的药学活性成分的剂量是治疗有效量。因此，如本文使用的，治疗有效量意指如通过临床试验结果和/或模型动物研究判断产生期望的治疗效果的治疗剂的量。

如本文使用的，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”指的是为了预防目的和/或治疗目的向受试者施用治疗剂或药物组合物。术语“预防性治疗”指的是治疗尚未表现出疾病或状况的症状，但易患特定疾病或状况或以其他方式处于特定疾病或状况的风险的受试者，由此该治疗降低了患者将发展疾病或状况的可能性。术语“治疗性治疗”指的是向已经患有疾病或状况的受试者施用治疗。如本文使用的，“治疗效果”在一定程度上缓解疾病或紊乱的症状中的一种或更多种。例如，可以通过由受试者传达的主观不适的减少(例如，在自填患者问卷中注意到的减少的不适)来观察治疗效果。

如本文使用的，术语“预防(prophylaxis)”或“预防(prevention)”指的是对受试者例如哺乳动物(包括人类)的亚临床疾病状态的预防性治疗，以用于降低临床疾病状态的发生的概率。基于已知与一般人群相比增加患临床疾病状态的风险的因素，选择受试者进行预防性疗法。“预防”疗法可以被分为(a)一级预防和(b)二级预防。一级预防被定义为对尚未呈现出临床疾病状态的受试者的治疗，而二级预防被定义为防止相同或相似的临床疾病状态的第二次发生。

纤维化

纤维化是其中发生纤维结缔组织的过度积聚的病理状况。在一些情况下，纤维化被认为是对组织或器官的急性或慢性应激的结果，其特征是细胞外基质沉积、血管/小管/导管/气道通畅性的降低和功能受损，最终导致器官衰竭。器官或组织中过度纤维结缔组织的形成可以发生在反应性过程或修复性过程中。反应性纤维化是在没有功能性细胞坏死(即，受影响的细胞仍然存活)的情况下出现的可逆过程，而修复性纤维化伴随着细胞死亡之后的瘢痕形成。纤维化可以影响所有组织和器官系统，包括但不限于心脏、肝、肺、骨骼肌、肾脏、眼睛、血管、皮肤、脑、骨髓、胃肠道、腹膜和脉管系统。纤维化代表许多慢性组织疾病的终末期，占全世界所有死亡人数的近一半：骨骼肌组织(例如，营养不良性肌肉疾病)、心脏和血管组织(例如，心肌梗死)、肝组织(例如，非酒精性脂肪肝病/肝硬化)、肺组织(例如，特发性肺纤维化)和肾脏组织(例如，慢性肾脏疾病/肾纤维化)。纤维化和纤维化紊乱可以与主要器官相关，所述主要器官包括但不限于肺、肝、肾脏、心脏、皮肤、眼睛、胃肠道、腹膜、骨髓或其组合。如本文描述的，纤维化可以是非肝纤维化，其是存在于非肝组织和除肝以外的器官中和/或影响非肝组织和除肝以外的器官的纤维化。非肝纤维化的非限制性实例包括影响心脏、肺、骨骼肌、肾脏、眼睛、血管、皮肤、脑、骨髓、胃肠道、腹膜和脉管系统的纤维化。非肝纤维化紊乱的实例包括但不限于与肺、肾脏、心脏、皮肤、眼睛、胃肠道、腹膜、骨髓、肌肉(例如，骨骼肌)、血管、脉管系统或其任何组合相关的纤维化状况。

如本文使用的，纤维化疾病或状况是以过度纤维结缔组织的形成为特征的任何疾病或状况。这些疾病的共同特征是纤维化细胞的过度增殖，并且组织纤维化或器官纤维化通常包括肺纤维化、肝纤维化、慢性胰腺炎、硬皮病、肾小球纤维化以及由放射化学疗法和组织移植引起的多器官纤维化。过度纤维结缔组织的形成可能是对修复性过程或反应性过程的响应。纤维化包括但不限于肺纤维化、肝纤维化、骨髓纤维化、皮肤纤维化(例如，肾源性系统性纤维化和瘢痕疙瘩纤维化)、纵隔纤维化、心脏纤维化、肾脏纤维化、间质纤维化、硬膜外纤维化、上皮纤维化、特发性纤维化、肝硬化及其任何组合。

在一些实施方案中，纤维化是在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增殖和瘤形成之后发生的具有细胞外基质成分的积聚的纤维化状况。纤维化和纤维化紊乱的非限制性实例包括但不限于囊性纤维化；与主要器官疾病相关的纤维化和纤维化紊乱，所述主要器官疾病包括但不限于间质性肺病(ILD)、肝硬化、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)(肝纤维化)、肾脏疾病(肾纤维化)、心脏或血管疾病(心脏纤维化)和眼疾病；纤维增生性紊乱，包括但不限于全身和局部硬皮病、瘢痕疙瘩和增生性瘢痕、动脉粥样硬化、再狭窄和掌腱膜挛缩；与创伤相关的瘢痕形成，包括但不限于手术并发症、化疗药物诱导的纤维化(例如博来霉素诱导的纤维化)、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤)；腹膜后纤维化(奥蒙德氏病(Ormond's disease))；以及通常在肾移植之后，接受腹膜透析的患者的腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成。

纤维化可以是眼纤维化，其包括但不限于由眼疾病或眼紊乱诸如糖尿病性视网膜病变、细菌感染、病毒感染、真菌感染、阿米巴感染(amoeba infection)、眼创伤、化学性角膜烧伤、热性角膜烧伤(thermal corneal burn)、翼状胬肉、青光眼、手术创伤、富克斯内皮角膜营养不良(Fuch's Endothelial Corneal Dystrophy)(FECD)、增生性玻璃体视网膜病变(PVR，例如前部增生性玻璃体视网膜病变(前部PVR))或其组合造成的眼纤维化。眼纤维化可以是例如视网膜纤维化、角膜纤维化、结膜纤维化、小梁网的纤维化或其组合。眼纤维化可以包括例如角膜混浊、角膜瘢痕形成、小梁泡或其组合。眼纤维化可以由例如角膜烧伤、翼状胬肉、FECD、青光眼或其组合造成。在一些实施方案中，眼纤维化包括与抗VEGF治疗相关的视网膜纤维化。

肾纤维化是其中纤维化发生在由于肾脏组织中的炎症而积聚的瘢痕中的纤维化状况，其中肾脏的一部分硬化并且失去其功能。肾脏的硬化可以导致慢性肾衰竭，其可以伴随着贫血、凝血障碍、高血压、多种并发症以及心肺器官和胃肠道的感染。如果肾脏功能下降至例如低于正常水平的15％，则肾脏产生较少的促红细胞生成素，导致红细胞的产生减少。此外，由不活跃的尿液分泌引起的尿毒症减少了红细胞寿命并且引起强烈贫血。此外，尿毒症的发作增加了全身感染的可能性，这是脓毒症发展的主要因素。在一些情况下，肾脏疾病(可能与糖尿病相关)可以损害肾脏并使肾脏结疤，导致功能的逐渐损失并且还导致高血压疾病。肾脏纤维化可以发生在肾脏疾病的任何阶段，从慢性肾脏疾病(CKD)到终末期肾病(ESRD)。肾脏纤维化可以由于心血管疾病诸如高血压或糖尿病而发展，高血压和糖尿病两者都对促进纤维化响应的肾脏功能造成巨大压力。在一些情况下，肾脏纤维化也可以是特发性的(没有已知的原因)，并且某些遗传线粒体疾病也呈现肾脏纤维化的表现和相关症状。

肺的纤维化紊乱包括例如肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、普通型间质性肺炎(UIP)、间质性肺病(ILD)、隐源性纤维化肺泡炎(CFA)、闭塞性细支气管炎和支气管扩张。间质性肺病(ILD)包括其中肺部炎症和纤维化为最终共同的病理途径的紊乱，例如结节病、矽肺、药物反应、感染和胶原血管疾病诸如类风湿性关节炎和系统性硬化症(硬皮病)。IPF是ILD的最常见类型。已知IPF通过由持续刺激上皮细胞或杯状细胞引起的受损区域的愈合过程中的异常引起，但其刺激因子尚未知晓。肺的炎症可能不直接引起肺纤维化，但已知的是，肺纤维化由于在肺的炎症之后向正常组织愈合的过程中患有特发性肺纤维化的患者和正常人之间的差异而发生。纤维化的另一种机制是通过经由T辅助2型细胞因子来活化和增殖成纤维细胞而使细胞外基质沉积和纤维化。

肝的纤维化(肝纤维化)可以被定义为由于肝的慢性炎症而导致的细胞外基质的过度沉积。如果慢性肝病由于这样的细胞外基质的过度沉积而持续存在，则它最终由于肝的内部结构的扭曲和肝细胞数量的减少而进展为肝硬化。参与肝纤维化的代表性细胞包括肝星状细胞、枯否细胞(Kupffer cell)和内皮细胞。活化的肝星状细胞是细胞外基质产生的主要来源，并且肝星状细胞参与增加包括胶原的多种细胞外基质的产生。枯否细胞位于肝中的窦状隙中，并且由活化的枯否细胞产生的物质影响周围的肝细胞、内皮细胞和肝星状细胞，从而促进肝纤维化。内皮细胞不仅在肝中的血流的调节中起必要的作用，而且还参与生长因子和参与由炎症或肝纤维化引起的肝星状细胞的增殖的细胞外基质的产生。影响肝纤维化的细胞因子包括转化生长因子β(TGF-β)和血小板衍生生长因子(PDGF)。TGF-β是促进肝星状细胞的纤维化的最有效的细胞因子，并且肝星状细胞本身是TGF-β的主要来源。PDGF是促进肝星状细胞的分裂和增殖的最有效的细胞因子。在过去，肝纤维化过程已经被认为是不可逆的现象，但最近，已经报告肝纤维化过程被可逆地改变。因此，它可以是动态过程。因此，准确地测量这样的变化在临床上变得重要。在一些实施方案中，肝纤维化是肝硬化，包括例如与病毒性肝炎、血吸虫病和慢性酒精中毒相关的肝硬化。

在一些实施方案中，纤维化与心脏疾病、眼疾病或其组合相关。已知的是，心脏疾病可以导致瘢痕组织，其损害心脏泵血的能力。心脏纤维化状况的非限制性实例包括心房纤维化、心内膜心肌纤维化及其任何组合。眼疾病包括但不限于黄斑变性以及视网膜和玻璃体视网膜病变，其可以损害视力。纤维化可以是肌肉纤维化，例如反应性肌肉纤维化。肌肉纤维化可以是心脏纤维化，其包括但不限于间质性心脏纤维化、血管周围性心脏纤维化、骨骼肌纤维化及其组合。

心脏纤维化可以通过多种不同的机制在患者的心脏疾病的发病机制中起重要作用。纤维化心肌重塑可以损害心室舒张功能，促成具有保留的射血分数的心力衰竭的发展。心房纤维化的发展可以使受试者易患房性快速性心律失常。此外，心室心肌层中的胶原沉积可以促成在代谢异常的个体中观察到的室性心律失常和猝死的增加的发生率。此外，在一些患者中，右心室中的纤维化变化的发展可以扰乱右心室功能。另外，梗死后修复性纤维化响应的代谢异常相关的调节可以使这些受试者易发展梗死后心力衰竭。在具有改变的代谢的受试者中减轻纤维化以用于降低心脏发病率和死亡率可以是有利的。

如本文描述的，纤维化紊乱可以是例如纤维化血管疾病、囊性纤维化、肺纤维化、特发性肺纤维化、肌肉骨骼纤维化、肾纤维化疾病、与HIV相关的淋巴结纤维化、炎性肺纤维化、胰腺纤维化、肝纤维化、心肌纤维化或其组合。

纤维化可以是年龄诱导的(例如，由于组织损伤或心血管疾病)、损伤诱导的或应激诱导的。年龄诱导的纤维化可以是心脏(heart)(心脏(cardiac))、肾脏(肾)、血管(bloodvessel)(血管(vascular))、肝(liver)(肝(hepatic))、脑、肠、皮肤(真皮)、胰腺和肺(lung)(肺(pulmonary))或其任何组合的年龄诱导的纤维化。纤维化可以是例如心脏纤维化、肝纤维化、脑纤维化、肾脏纤维化、血管纤维化、肺纤维化、真皮纤维化或其任何组合。真皮纤维化紊乱的非限制性实例包括异常的伤口愈合、皱纹(wrinkle)、皮下脂肪团和真皮赘生性纤维化、血管病变、血管炎、过度烧伤伤口愈合、糖尿病足综合征、关节纤维化、佩罗尼氏病(Peyronie's disease)及其任何组合。脑纤维化状况的非限制性实例包括胶质瘢痕。在一些实施方案中，纤维化状况是动脉硬化、关节纤维化、克罗恩氏病、掌腱膜挛缩、瘢痕疙瘩、纵隔纤维化、骨髓纤维化、佩罗尼氏病(PD)、肾源性系统性纤维化、进行性大块纤维化、腹膜后纤维化、烧伤瘢痕、任何器官的术后纤维化、尿道纤维化、糖尿病性肾病变、硬皮病/系统性硬化症或其任何组合。纤维化状况可以涉及胃肠系统的器官，例如肝、小肠、大肠或胰腺；呼吸系统的器官，例如肺；心血管系统的器官，例如心脏或血管；皮肤；神经系统的器官，例如脑；泌尿系统的器官，例如肾脏；和/或肌肉骨骼系统的器官，例如肌肉组织。在一些实施方案中，纤维化或纤维化状况具有已知的原因和/或诱因，例如皮肤烧伤、术后纤维化或其组合。在一些实施方案中，纤维化或纤维化状况不具有已知的原因和/或诱因。

预防和治疗的方法

本文公开的内容包括用于治疗纤维化(例如，一种或更多种纤维化疾病/紊乱)的方法、组合物和试剂盒。方法、组合物和试剂盒可以例如减轻或缓解有相应需要的受试者的纤维化的一种或更多种症状。本文还公开了用于预防(包括一级预防和二级预防)纤维化(例如，一种或更多种纤维化疾病/紊乱)的方法、组合物和试剂盒。此外，提供了用于预防或延迟纤维化的发作的方法、组合物和试剂盒。在一些实施方案中，本文公开的方法、组合物和试剂盒可以逆转纤维化，减少或抑制纤维化形成，和/或减少受试者的纤维化的量(amount)。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。

在一些实施方案中，该方法包括识别患有纤维化的受试者。在一些实施方案中，该方法包括识别处于发展纤维化的风险的受试者。该试剂盒可以包含用于识别患有纤维化的受试者的使用说明、用于识别处于发展纤维化的风险的受试者的使用说明或两者。

该方法可以例如包括：向有相应需要的受试者施用包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物。在一些实施方案中，有相应需要的受试者是处于发展纤维化的风险的受试者。在一些实施方案中，受试者尚未发展纤维化。例如，受试者是在没有预防措施(例如，用本文公开的预防纤维化的方法或预防纤维化的组合物治疗)的情况下可能发展或将发展纤维化的个体。在一些实施方案中，有相应需要的受试者是患有纤维化的受试者。在一些实施方案中，有相应需要的受试者是具有纤维化的一种或更多种症状的受试者。在一些实施方案中，有相应需要的受试者是最近已经患有纤维化的受试者。

例如，本文公开的方法、组合物和试剂盒可以用于预防处于发展纤维化的风险的受试者(例如，没有发展纤维化但在没有纤维化预防治疗的情况下可能发展或将发展纤维化的受试者)的纤维化的发作。此外，本文公开的方法、组合物和试剂盒可以用于延迟处于发展纤维化的风险的受试者(例如，在没有纤维化预防治疗的情况下在较早的时间将发展纤维化的受试者)的纤维化的发作。如本文描述的，处于发展纤维化的风险的受试者是尚未患有纤维化的受试者，并且因此在受试者中没有纤维化进展。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟。延迟可以是例如一秒或更多秒、一分钟或更多分钟、一小时或更多小时、一天或更多天、一周或更多周、一个月或更多个月或一年或更多年。在一些实施方案中，经治疗的受试者中的延迟是相对于他/她没有接受治疗的同一受试者。在一些实施方案中，经治疗的受试者中的延迟是相对于未经治疗的受试者。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟以下时间或约以下时间：5天、10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、50天、75天、100天、150天、200天、250天、300天、350天，或这些值中的任何值之间的范围。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟以下时间或约以下时间：一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月或一年、两年、三年、四年、五年、六年、七年、八年、九年、十年、十一年、十二年，或这些值中的任何值之间的范围。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟至少以下时间或至少约以下时间：一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月或一年、两年、三年、四年、五年、六年、七年、八年、九年、十年。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟至少以下时间或至少约以下时间：一小时、两小时、三小时、四小时、五小时、六小时、七小时、八小时、九小时、十小时或更长时间。

在一些实施方案中，纤维化(例如，组织纤维化)在受试者中被逆转。逆转可以是受试者现有的纤维化的1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或这些值中的任两个之间的范围，或者可以是受试者现有的纤维化的约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，逆转可以是受试者现有的纤维化的至少1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多，或者可以是受试者现有的纤维化的至少约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。

在一些实施方案中，纤维化(例如，组织纤维化)的量在受试者中被减少。在受试者中，纤维化的量的减少可以是1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或这些值中的任两个之间的范围，或者可以是约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，在受试者中，纤维化的量的减少可以是至少1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多，或者可以是至少约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。

在一些实施方案中，纤维化(例如，组织纤维化)的形成在受试者中被减少。在受试者中，纤维化形成的减少可以是1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或这些值中的任两个之间的范围，或者可以是约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，在受试者中，纤维化形成的减少可以是至少1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多，或者可以是至少约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。经治疗的受试者的纤维化形成的减少可以是相对于他/她没有接受治疗的同一受试者。在一些实施方案中，经治疗的受试者的纤维化形成的减少是相对于未经治疗的受试者。

本文公开的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体中的一种或更多种的治疗有效性可以使用已知用于测量受试者的纤维化(例如，受影响的器官、组织或区域的纤维化)的量的方法来确定。受试者可以是例如患有纤维化的患者或最近患有纤维化的患者。受试者的纤维化的量可以通过本领域技术人员已知的用于确定纤维化的量的方法来确定。例如，但不限于，纤维化的量可以通过以下来确定：对受试者进行肌肉活检，将肌肉切片到载玻片上，并且评估如由本领域已知的染色技术(例如，苏木精和伊红(H&E)染色和/或Masson三色染色)所揭示的纤维化的量。作为另一个实例，纤维化的量可以在体内通过使用磁共振成像(MRI)来确定。

可以通过本文公开的组合物、方法或试剂盒实现的示例性治疗终点可以是用本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体以及任选的一种或更多种另外的治疗剂(例如，抗纤维化剂)施用的受试者的纤维化的量的减少。受试者的纤维化的相对量可以例如通过组织活检和随后的组织学来定量，包括但不限于，通过将伊文思蓝染料摄取作为肌纤维或细胞损伤的量度进行定量(例如在Heydemann等人,Neuromuscular Disorders 15(9-10):601-9(2005)中描述的)、如在Swaggart等人,Physiol Genomics 43:24-31(2011)中描述的羟脯氨酸含量的定量或两者。在一些实施方案中，与未经如此治疗的患者相比，用本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体以及任选的一种或更多种另外的治疗剂(例如，抗纤维化剂)施用的受试者的纤维化的量减少了以下值或减少了约以下值：1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、100％，或1％至100％内的任何值，或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，与未经如此治疗的患者相比，用本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体以及任选的一种或更多种另外的治疗剂(例如，抗纤维化剂)施用的受试者的纤维化的量减少了至少以下值或减少了至少约以下值：1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。

功能测定可以用于确定本文公开的化合物在例如治疗纤维化、预防纤维化、逆转纤维化、减少纤维化的量、延迟纤维化的发作、减少或抑制纤维化形成或其任何组合的有效性。例如，化合物可以在抑制胶原凝胶收缩方面进行测试，胶原凝胶收缩作为肌成纤维细胞收缩性的量度，肌成纤维细胞收缩性是肌成纤维细胞的特征功能，其将肌成纤维细胞与成纤维细胞分开。将胶原凝胶负载有成纤维细胞，并且在用TGF-β1刺激之后测量收缩。预期有效的化合物抑制TGF-β1诱导的胶原收缩。化合物的效力还可以在抑制ECM蛋白产生方面进行测试，ECM蛋白产生是肌成纤维细胞的重要特征功能之一。

本文公开的方法可以适用于治疗具有例如器官功能障碍、瘢痕形成、正常细胞外基质平衡的改变、胶原沉积的增加、增加的胶原体积分数、成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化、基质金属蛋白酶的水平的降低和基质金属蛋白酶的组织抑制剂的水平的增加、I型前胶原的N末端前肽或C末端前肽(PINP或PICP)的增加的水平、I型胶原的C末端端肽(CTP或CITP)的降低的水平、通过多种非侵入性成像技术测量的增加的胶原沉积和受损的心脏功能，以及如通过增加的蛋白脲和白蛋白脲、降低的肾小球滤过率或肌酐水平的加倍测量的受损的肾功能。

治疗剂

如本文使用的，术语“抗纤维化剂”指的是在哺乳动物中具有抗纤维化活性(例如，预防、减少或逆转纤维化)的剂(例如，化学化合物或生物制品(biologic))。抗纤维化剂可以具有不同的作用机制，例如，一些抗纤维化剂减少胶原或另一种蛋白质的形成，并且一些抗纤维化剂增强胶原在身体的受影响的区域中的分解代谢或去除。具有减少纤维化组织的存在的活性的抗纤维化剂被包括在本文中，而不考虑每种这样的剂起作用的特定作用机制。抗纤维化剂的一些非限制性实例在美国专利第5,720,950号中描述，该美国专利通过引用并入本文。另外的抗纤维化剂包括但不限于II型干扰素受体激动剂(例如，干扰素-γ)；吡非尼酮和吡非尼酮类似物；抗血管生成剂，诸如VEGF拮抗剂、VEGF受体拮抗剂、bFGF拮抗剂、bFGF受体拮抗剂、TGF-β拮抗剂、TGF-β受体拮抗剂；抗炎剂；IL-1拮抗剂，诸如IL-1Ra；血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂；血管紧张素受体阻断剂和醛固酮拮抗剂。

抗纤维化剂，包括本文公开的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，可以用于治疗受试者的纤维化(例如，纤维化紊乱)，或者用于纤维化(例如，纤维化紊乱)的一级预防或二级预防。环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以例如延迟受试者(例如，处于发展纤维化的风险的受试者)的纤维化的发作。环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以例如逆转受试者的纤维化。环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以用于减少或抑制受试者的纤维化形成。环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以用于减少受试者的纤维化的量。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。

本文公开的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以防止纤维化(例如，组织纤维化)的发生。例如，这些抗纤维化剂可以禁止受试者的纤维化形成、延迟受试者的纤维化的发作或两者。延迟可以是例如一秒或更多秒、一分钟或更多分钟、一小时或更多小时、一天或更多天、一周或更多周、一个月或更多个月或一年或更多年。经治疗的受试者中的延迟可以是相对于他/她没有接受治疗的同一受试者，或者相对于未经治疗的受试者。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟以下时间或约以下时间：5天、10天、15天、20天、25天、30天、35天、40天、50天、75天、100天、150天、200天、250天、300天、350天，或这些值中的任何值之间的范围。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟以下时间或约以下时间：一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月、十一个月、十二个月或一年、两年、三年、四年、五年、六年、七年、八年、九年、十年、十一年、十二年，或这些值中的任何值之间的范围。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟至少以下时间或至少约以下时间：一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、十个月或一年、两年、三年、四年、五年、六年、七年、八年、九年、十年。在一些实施方案中，纤维化的发作被延迟至少以下时间或至少约以下时间：一小时、两小时、三小时、四小时、五小时、六小时、七小时、八小时、九小时、十小时或更长时间。

本文公开的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以逆转受试者的纤维化(例如，组织纤维化)。逆转可以是受试者现有的纤维化的1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或这些值中的任两个之间的范围，或者可以是受试者现有的纤维化的约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，逆转可以是受试者现有的纤维化的至少1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多，或者可以是受试者现有的纤维化的至少约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。

本文公开的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以减少受试者的纤维化(例如，组织纤维化)的量。在受试者中，纤维化的量的减少可以是1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或这些值中的任两个之间的范围，或者可以是约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，在受试者中，纤维化的量的减少可以是至少1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多，或者可以是至少约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。

本文公开的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体可以减少受试者的纤维化(例如，组织纤维化)的形成。在受试者中，纤维化形成的减少可以是1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或这些值中的任两个之间的范围，或者可以是约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或这些值中的任两个之间的范围。在一些实施方案中，在受试者中，纤维化形成的减少可以是至少1％、2％、5％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多，或者可以是至少约1％、约2％、约5％、约8％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。经治疗的受试者中的纤维化形成的减少可以是相对于他/她没有接受治疗的同一受试者，或者相对于未经治疗的受试者。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是式L的化合物：

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，该芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R1-R2选自由以下组成的组：

在一些实施方案中，R1-R2包含2个和5个之间的碳的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，其任选地被选自由以下组成的组的取代基取代：氢、酮、羟基、腈、卤素、氧代、羧酸、酯和1,3-二氧戊环。

在一些实施方案中，R2选自由以下组成的组：

R5是长度为1个和10个之间的碳的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；并且R6是长度为1个和10个之间的碳的单羟基化、二羟基化、三羟基化或多羟基化的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R23选自由以下组成的组：-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CHCH₂、-CH₂CH₂CH₂I、-(CH₂)₃CH₂I、-(CH₂)₃N⁺(CH₃)₃、-CH₂CCH、-CH₂CO₂(t-Bu)、-CH₂Ph、-CH₂OH、-CH(OH)CH₃、-CH(OH)(t-Bu)、-CH(OH)Ph、-COOH、-SCH₃和-S(p-Tol)。在一些实施方案中，R23包括任选地被取代的烷基，包括任选地被取代的C1-C3烷基。所述烷基可以被氨基取代并且可以包括C1-C3-Ala，其中化合物包括氨基酸3的D-差向异构体，该氨基酸3是R23被附接至的氨基酸。在一些实施方案中，R23可以是MeAla。在一些实施方案中，R23是长度为1个至6个、1个至5个、1个至4个、1个至3个或2个碳的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，式L中的

选自由以下组成的组：

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是式L的化合物：

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

ii.羧酸；

iii.腈；

iv.酯；

v.酮；

vi.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；

vii.被取代的或未被取代的芳基；

viii.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链被选自由以下组成的组的取代基取代：酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环和氧代；

ix.芳香族基团，该芳香族基团被选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、酯和硝基；和

x.viii)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链和ix)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是未被取代的C₁-C₃烷基。

在一些实施方案中，R’是H。

在一些实施方案中，R1是长度为从5个至8个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R2选自由以下组成的组：

R5是长度为1个和10个之间的碳的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；并且R6是长度为1个和10个之间的碳的单羟基化、二羟基化、三羟基化或多羟基化的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R1-R2选自由以下组成的组：

在一些实施方案中，R1-R2被选自由以下组成的组的取代基取代：酮、羟基、腈、氧代、羧酸、酯和1,3-二氧戊环。在一些实施方案中，R1-R2的长度为至少6个碳原子。

在一些实施方案中，式L中的

选自由以下组成的组：

以及

在一些实施方案中，R23选自由以下组成的组：-CH₃和-CH₂CH₃。在一些实施方案中，R23是甲基。在一些实施方案中，化合物包括氨基酸3的D-差向异构体，该氨基酸3是R23被附接至的氨基酸。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是选自由以下组成的组的化合物：

其中：

R是

R’是H或乙酰基；和

异构体是氨基酸3的异构体形式，该氨基酸3是R23被附接至的氨基酸。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是式L的化合物：

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

ii.羧酸；

iii.腈；

iv.酯；

v.酮；

vi.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；

vii.被取代的或未被取代的芳基；

viii.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链，该饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链被选自由以下组成的组的取代基取代：酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环和氧代；

ix.芳香族基团，该芳香族基团被选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、酯和硝基；和

x.(viii)的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链和(ix)的芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链，

其中R1-R2的长度为至少6个碳原子。

在一些实施方案中，R’是H。

在一些实施方案中，R1是长度为从5个至8个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R1-R2选自由以下组成的组：

在一些实施方案中，R1-R2被选自由以下组成的组的取代基取代：酮、羟基、腈、氧代、羧酸、酯和1，3-二氧戊环。

在一些实施方案中，R23选自由以下组成的组：-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CHCH₂、-CH₂CH₂CH₂I、-(CH₂)₃CH₂I、-(CH₂)₃N⁺(CH₃)₃、-CH₂CCH、-CH₂CO₂(t-Bu)、-CH₂Ph、-CH₂OH、-CH(OH)CH₃、-CH(OH)(t-Bu)、-CH(OH)Ph、-COOH、-SCH₃和-S(p-Tol)。在一些实施方案中，R23包括任选地被取代的C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R23被氨基取代。在一些实施方案中，R23是C₁-C₃烷基，并且化合物包括氨基酸3的D-差向异构体，该氨基酸3是R23被附接至的氨基酸。在一些实施方案中，R23是甲基。在一些实施方案中，R23是长度为1个至6个碳的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，式L中的

选自由以下组成的组：

在一些实施方案中，R1-R2是

R23是甲基，并且化合物是氨基酸3的D-差向异构体，该氨基酸3是R23被附接至的氨基酸。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是式L的化合物：

其中：

R’是H或乙酰基；

R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

R2是N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；以及

R23是甲基或乙基。

在一些实施方案中，R’是H。

在一些实施方案中，R1是长度为从5个至8个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R2是

其中R5是长度为1和10个之间的碳的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R1-R2选自由以下组成的组：

在一些实施方案中，R23是甲基。

在一些实施方案中，式L中的

是

在一些实施方案中，R’、R1-R2和R23以及所述化合物的异构体选自以下：

其中异构体是氨基酸3的异构体形式，该氨基酸3是R23被附接至的氨基酸。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是式L的化合物：

其中：

R’是H或乙酰基；

R1-R2选自由以下组成的组：

以及

R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R’是H。

在一些实施方案中，R1-R2是

在一些实施方案中，式L中的

是

在一些实施方案中，R23选自由以下组成的组：-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CHCH₂、-CH₂CH₂CH₂I、-(CH₂)₃CH₂I、-(CH₂)₃N⁺(CH₃)₃、-CH₂CCH、-CH₂CO₂(t-Bu)、-CH₂Ph、-CH₂OH、-CH(OH)CH₃、-CH(OH)(t-Bu)、-CH(OH)Ph、-COOH、-SCH₃和-S(p-Tol)。在一些实施方案中，R23是-CH₃或-CH₂CH₃。在一些实施方案中，R23是-CH₃。在一些实施方案中，R23(a)包括任选地被取代的C1-C3烷基；(b)被氨基取代；(c)是C1-C3-Ala，并且所述化合物包括D-差向异构体；(d)是MeAla；和/或(e)是长度为1个至6个、1个至5个、1个至4个、1个至3个或2个碳的直链或支链的脂肪族碳链。

在一些实施方案中，R’、R1-R2和R23以及所述化合物的异构体选自以下：

在一些实施方案中，环孢菌素类似物是小分子亲环蛋白抑制剂CRV431(下文示出)，其是环孢菌素A(CsA)的衍生物，一种由11个氨基酸组成的中性环肽，其中氨基酸1和氨基酸3已经被化学修饰。

CRV431是一种正在临床开发的、用于治疗包括肝纤维化和肝细胞癌的肝病的小分子亲环蛋白抑制剂。在临床前研究中，CRV431在许多体内模型中示出针对包括乙型肝炎、丙型肝炎和HIV的多种病毒的抗病毒活性以及肝中的抗纤维化活性。在非酒精性脂肪性肝炎(“NASH”)的实验模型中，CRV431可以减少由NASH和肝细胞癌肿瘤负担引起的肝纤维化。

如本文公开的，包括体外研究公开的，CRV431可以减少从来源于多种不同器官的成纤维细胞中产生的细胞外基质(ECM)分子、胶原和纤连蛋白。从这些类型的细胞中过度产生胶原和纤连蛋白引起受损伤的器官的纤维化瘢痕形成，并且CRV431可以减少从多种细胞类型中产生胶原和纤连蛋白。这些结果证明CsA的衍生物诸如CRV431可以在一系列疾病和一系列细胞、组织和器官中发挥抗纤维化活性。

例如，如本文描述的，CRV431可以减少从来源于五种细胞类型的成纤维细胞中产生细胞外基质(ECM)分子、胶原和纤连蛋白，所述五种细胞类型包括来自患有特发性肺纤维化(“IPF”)的患者的肺成纤维细胞、心脏成纤维细胞、真皮(皮肤)成纤维细胞、肾系膜细胞和LX2肝星状细胞系。已知的是，IPF是一种迫切需要新的治疗的侵袭性纤维化疾病。如本文描述的，CRV431剂量依赖性地以相似的幅度降低来自所有细胞类型的前胶原和纤连蛋白的分泌，如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量的。无论细胞是否用促纤维化剂转化生长因子-β(TGFβ)刺激，抑制程度是相似的，这与对ECM合成的直接影响一致。在临床相关浓度，CRV431剂量依赖性地降低ECM产生多达55％，而不引起细胞生存力的任何降低。如本文公开的，CRV431可以用于通过抑制亲环蛋白B来减少ECM产生，并且与该观察结果一致，用小干扰RNA(siRNA)下调亲环蛋白B类似地减少前胶原和纤连蛋白的分泌。

纤维化瘢痕形成是许多疾病的主要病理特征和器官功能障碍的驱动因素，所述疾病包括肝硬化、IPF、慢性肾脏疾病和若干种心脏状况。然而，存在极少的减弱瘢痕形成的可用治疗。大多数治疗试图通过靶向成纤维细胞的刺激来减少纤维化，但这些信号传导事件可能因患者、纤维化疾病的类型或疾病阶段而变化。在不局限于任何特定理论的情况下，有利的是使用CRV431用于治疗纤维化疾病(在肝中以及在除肝以外的器官中)，因为在一些实施方案中，CRV431的作用与刺激信号的类型无关。

在一些实施方案中，该方法可以包括向有相应需要的受试者施用一种或更多种另外的治疗剂。例如，组合物可以包含一种或更多种另外的抗纤维化剂。抗纤维化剂的非限制性实例包括II型干扰素受体激动剂(例如，干扰素-γ)；吡非尼酮和吡非尼酮类似物；尼达尼布和尼达尼布类似物；抗血管生成剂，诸如VEGF拮抗剂、VEGF受体拮抗剂、bFGF拮抗剂、bFGF受体拮抗剂、TGF-β拮抗剂、TGF-β受体拮抗剂；抗炎剂；IL-1拮抗剂，诸如IL-1Ra；血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂；血管紧张素受体阻断剂和醛固酮拮抗剂；丝裂霉素C(MMC)；5-氟尿嘧啶(5-FU)；腺苷酸环化酶活化剂；β-肾上腺素受体激动剂；类黄酮；肥大细胞稳定剂；磷酸二酯酶抑制剂和原花青素；及其任何组合。

在一些实施方案中，另外的治疗剂(例如，另外的抗纤维化剂)与包含本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物被共同施用至受试者。在一些实施方案中，另外的治疗剂在施用包含本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物之前，和/或在施用包含本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物之后被施用至受试者。

试剂盒、组合物及施用方法

在一些实施方案中提供的内容包括试剂盒，该试剂盒包含：环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，以及指示试剂盒的使用的标签。在一些实施方案中，标签指示试剂盒用于预防受试者的纤维化，例如纤维化紊乱。在一些实施方案中，标签指示试剂盒用于治疗受试者的纤维化，例如纤维化紊乱。在一些实施方案中，标签指示试剂盒用于减少受试者的纤维化的量。在一些实施方案中，标签指示试剂盒用于延迟受试者的纤维化的发作。在一些实施方案中，标签指示试剂盒用于减少或抑制受试者的纤维化形成。在一些实施方案中，标签指示试剂盒用于逆转受试者的纤维化。

在一些实施方案中，本文还提供了组合物，该组合物包含：本文公开的一种或更多种环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，用于预防纤维化(例如，纤维化紊乱)、治疗纤维化(例如，纤维化紊乱)、减少纤维化的量、延迟纤维化的发作、减少或抑制纤维化形成、逆转纤维化或其任何组合。

纤维化可以是影响心脏、肝、肺、骨骼肌、肾脏、眼睛、血管、皮肤、脑、骨髓、胃肠道、腹膜、脉管系统或其任何组合的纤维化。在一些实施方案中，纤维化是非肝纤维化。纤维化紊乱可以是本文公开的任何纤维化紊乱，包括但不限于视网膜纤维化、角膜纤维化、结膜纤维化、小梁网的纤维化、肾纤维化、肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、普通型间质性肺炎(UIP)、间质性肺病(ILD)、隐源性纤维化肺泡炎(CFA)、闭塞性细支气管炎、支气管扩张、肝硬化、肝纤维化、纤维化血管疾病、囊性纤维化、肺纤维化、特发性肺纤维化、肌肉骨骼纤维化、肾纤维化疾病、与HIV相关的淋巴结纤维化、炎性肺纤维化、胰腺纤维化、心脏纤维化、血管纤维化、心肌纤维化或其组合。

在一些实施方案中，组合物是稳定的自微乳化药物递送系统(“SMEDDS”)制剂，其包含环孢菌素A的衍生物或类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。组合物可以例如使得能够实现环孢菌素A的衍生物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的良好溶解度，并且使得能够实现人类中显著的血液暴露。在一些实施方案中，组合物还包含聚氧乙烯蓖麻油(polyoxyl castor oil)(也被称为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯(macrogolglycerol hydroxystearate)和PEG-40氢化蓖麻油诸如

RH40和

RH40)。在一些实施方案中，组合物包含乙醇。在一些实施方案中，组合物包含二乙二醇单乙醚(也被称为2-(2-乙氧基乙氧基)乙醇，诸如

)。在一些实施方案中，组合物包含丙二醇(PG)。在一些实施方案中，组合物包含单亚油酸甘油酯，诸如

CC。在一些实施方案中，组合物包含维生素E。包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐的多种药物组合物/药物递送系统(例如，SMEDDS制剂)已经在作为WO 2020/112562公布的PCT专利申请中描述，该PCT专利申请的内容通过引用以其整体并入本文。

在一些实施方案中，该系统包含以1/1/5/5/2.4/4或1/1.5/2.5/5/2.4/5的重量比率的维生素E、

CC、丙二醇、

乙醇和

RH40。该系统可以例如包含以从约10mg/mL至约90mg/mL，包括10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、这些值中的任两个之间的范围或在10mg/mL至90mg/mL内的任何值的浓度的环孢菌素类似物(例如，CRV431)。在一些实施方案中，该系统包含以约90mg/mL的浓度的环孢菌素类似物(例如，CRV431)。在一些实施方案中，该系统包含以70mg/mL或约70mg/mL的浓度的环孢菌素类似物(例如，CRV431)。

组合物可以是例如包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体以及一种或更多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，组合物通过静脉内施用、鼻施用、肺施用、口服施用或肠胃外施用被施用至受试者。在一些实施方案中，组合物呈粉末、丸剂、片剂、微片剂、小丸、微丸、胶囊、含有微片剂的胶囊、液体、气溶胶、悬浮液或纳米颗粒的形式。在一些实施方案中，组合物每天一次、每天两次或每天三次被施用至受试者。在一些实施方案中，组合物在紧急情况下(例如，在正在进行的手术中)被施用至受试者一次或两次。在一些实施方案中，组合物在至少一天、至少两天、至少三天、至少一周或更长时间的进程中被施用至受试者。在一些实施方案中，组合物以从10mg至250mg的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的有效日剂量被施用至受试者。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)的治疗有效量和施用频率以及使用环孢菌素类似物(例如，CRV431)的治疗长度可以取决于多种因素，包括增生性疾病诸如癌症的性质和严重程度，环孢菌素类似物(例如，CRV431)的效力，施用模式，受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食以及受试者对治疗的响应，并且可以由治疗医师确定。在一些实施方案中，用于治疗或预防增生性疾病诸如癌症或者用于减少或抑制如本文描述的增生性疾病的一种或更多种症状的环孢菌素类似物(例如，CRV431)的治疗有效量为约0.1mg-200mg、0.1mg-150mg、0.1mg-100mg、0.1mg-50mg、0.1mg-30mg、0.5mg-20mg、0.5mg-10mg或1mg-10mg(例如，每天或每剂)，或者在治疗医师认为合适的情况下，其可以以单剂量或以分开的剂量施用。在一些实施方案中，用于治疗或预防增生性疾病诸如癌症或者用于减少或抑制如本文描述的增生性疾病的一种或更多种症状的环孢菌素类似物(例如，CRV431)的治疗有效剂量(例如，每天或每剂)为约0.1mg-1mg(例如，约0.1mg、0.5mg或1mg)、约1mg-5mg(例如，约1mg、2mg、3mg、4mg或5mg)、约5mg-10mg(例如，约5mg、6mg、7mg、8mg、9mg或10mg)、约10mg-20mg(例如，约10mg、15mg或20mg)、约20mg-30mg(例如，约20mg、25mg或30mg)、约30mg-40mg(例如，约30mg、35mg或40mg)、约40mg-50mg(例如，约40mg、45mg或50mg)、约50mg-100mg(例如，约50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或100mg)、约100mg-150mg(例如，约100mg、125mg或150mg)或约150mg-200mg(例如，约150mg、175mg或200mg)。在一些实施方案中，治疗有效剂量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)每天一次或更多次(例如，两次、三次或更多次)、或每两天或每三天一次、或每周一次、每周两次或每周三次被施用，或在治疗医师认为合适的情况下被施用。在一些实施方案中，组合物包含治疗或预防有效量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)也可以以不规则的方式给药。例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以在30分钟、一小时、两小时或更长时间的时间段内以不规则的方式被施用一次、两次或三次。此外，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以按比例(根据需要)服用。例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以被施用1次、2次、3次、4次、5次或更多次，无论是以规则的方式还是不规则的方式，直到增生性疾病/状况(例如，癌症)改善。在实现从增生性疾病/状况(例如，癌症)中缓解后，环孢菌素类似物(例如，CRV431)的给药可以任选地被停止。如果疾病紊乱/状况复发，则可以恢复环孢菌素类似物(例如，CRV431)的施用，无论是以规则的方式还是不规则的方式。环孢菌素类似物(例如，CRV431)的适当的剂量、给药频率以及使用环孢菌素类似物(例如，CRV431)的治疗长度可以由治疗医师确定。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)也可以预防性地用于治疗或预防增生性疾病诸如癌症，或者预防或减少增生性疾病的一种或更多种症状(例如，纤维化)，或者减少或抑制增生性疾病的一种或更多种症状(例如，纤维化)的发作。环孢菌素类似物(例如，CRV431)的预防有效量可以是本文描述的环孢菌素类似物(例如，CRV431)的任何治疗有效量。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以经由任何合适的途径施用。环孢菌素类似物(例如，CRV431)的潜在施用途径包括但不限于口服的、肠胃外的(包括肌内的、皮下的、皮内的、血管内的、静脉内的、动脉内的、髓内的和鞘内的)、腔内的、腹膜内的和局部的(包括真皮的/表皮的、透皮的、粘膜的、经粘膜的、鼻内的[例如，通过鼻喷雾剂或鼻滴剂]、眼内的[例如，通过滴眼剂]、肺部的[例如，通过口服吸入或鼻吸入]、含服的、舌下的、直肠的和阴道的)。在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)被口服地施用(例如，作为胶囊或片剂，任选地具有肠溶包衣)。在其他实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)被肠胃外地(例如，静脉内地、皮下地或皮内地)施用。在另外的实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)被局部地(例如，真皮地、表皮地、透皮地、粘膜地、经粘膜地、含服地或舌下地)施用。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)在没有食物的情况下被施用。在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)在餐前或在餐后至少约1小时或2小时被施用。在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)在晚餐后至少约2小时被施用。环孢菌素类似物(例如，CRV431)也可以大体上与食物同时服用(例如，在餐前或在餐后约0.5小时、1小时或2小时内服用，或者与餐一起服用)。

在其中期望环孢菌素类似物(例如，CRV431)的治疗水平更快速建立的一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)按给药时间表施用，其中负载剂量被施用，随后是(i)一个或更多个另外的负载剂量以及然后一个或更多个治疗有效维持剂量，或(ii)一个或更多个治疗有效维持剂量，而没有另外的负载剂量，如治疗医师认为合适的。药物的负载剂量通常比随后的维持剂量大(例如，是随后的维持剂量的约1.5倍、2倍、3倍、4倍或5倍大)，并且被设计成更快速地建立药物的治疗水平。一个或更多个治疗有效维持剂量可以是本文描述的任何治疗有效剂量。在一些实施方案中，负载剂量是维持剂量的约三倍大。在一些实施方案中，负载剂量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)被施用，随后是在适当的时间之后(例如，在约12小时或24小时之后)施用维持剂量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)，并且此后持续治疗持续时间—例如，负载剂量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)在第1天被施用并且维持剂量在第2天被施用，并且此后持续治疗持续时间。在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)在第1天以约1.5mg、3mg、15mg或30mg(例如，3×约0.5mg、3×1mg、3×5mg或3×10mg)的负载剂量被口服地(例如，作为片剂)施用，随后每天一次口服地(例如，作为片剂)施用约0.5mg、1mg、5mg或10mg的维持剂量，任选地在就寝时间施用，持续至少约2周、1个月(4周)、6周、2个月、10周、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、1.5年、2年、3年或更长时间(例如，至少约6周、2个月、3个月或6个月)。在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)在第1天以约15mg(例如，3×约5mg)的负载剂量被口服地(例如，作为片剂)施用，随后每天一次口服地(例如，作为片剂)施用约5mg的维持剂量，任选地在就寝时间施用，持续至少约2周、1个月、6周、2个月、3个月、6个月、1年、1.5年、2年、3年或更长时间(例如，至少约6周、2个月、3个月或6个月)。

在一些实施方案中，第一负载剂量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)在第1天被施用，第二负载剂量在第2天被施用并且维持剂量在第3天被施用，并且此后持续治疗持续时间。在一些实施方案中，第一负载剂量是维持剂量的约三倍大，并且第二负载剂量是维持剂量的约两倍大。

如本文公开的，治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))可以被配制用于以药物组合物施用，所述药物组合物包含生理学上可接受的表面活性剂、载体、稀释剂、赋形剂、平滑剂(smoothing agent)、悬浮剂、成膜物质、包衣助剂或其组合。在一些实施方案中，治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))被配制用于与药学上可接受的载体或稀释剂一起施用。治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))可以按照制药领域中常规的标准药学上可接受的载体和/或赋形剂被配制为药物。制剂的确切性质将取决于若干种因素，包括期望的施用途径。在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)被配制用于口服施用、静脉内施用、胃内施用、血管内施用或腹膜内施用。可以使用标准的药物配制技术，诸如在通过引用以其整体并入本文的Remington's The Science and Practice ofPharmacy,第21版,Lippincott Williams&Wilkins(2005)中公开的技术。

术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。用于药学活性物质的这样的介质和剂的使用是本领域熟知的。除非任何常规的介质或剂与活性成分不相容，否则考虑其在治疗组合物中的使用。此外，可以包括诸如本领域中常用的多种佐剂。对在药物组合物中包含多种组分的考虑例如在Gilman等人(编著)(1990)；Goodman and Gilman's:ThePharmacological Basis of Therapeutics,第8版,Pergamon Press中描述，其通过引用以其整体并入本文。

可以用作药学上可接受的载体或其组分的物质的一些实例是糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石粉；固体润滑剂，诸如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，诸如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油(theobroma oil)；多元醇，诸如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，诸如TWEEN；润湿剂，诸如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；制片剂(tableting agent)、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；以及磷酸盐缓冲剂溶液。

与主题治疗剂结合使用的药学上可接受的载体的选择基本上由组合物被施用的方式决定。

本文描述的组合物优选地以单位剂型提供。如本文使用的，“单位剂型”是包含一定量的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))的组合物，其根据良好的医学实践，适合于以单剂量施用至动物，优选地哺乳动物受试者。然而，单一剂型或单位剂型的制备并不意味着该剂型每天一次或每个疗程一次被施用。这样的剂型被考虑每天一次、两次、三次或更多次被施用，并且可以在一段时间内(例如，从约30分钟至约2小时-6小时)以输注施用，或以连续输注施用，并且可以在疗程期间被给予多于一次，尽管不特别排除单次施用。技术人员将认识到，制剂并不特定地考虑整个疗程，并且这样的决定留给治疗领域的技术人员而不是制剂领域的技术人员。

如上文描述的有用的组合物可以呈用于多种施用途径，例如用于口服的、鼻的、直肠的、局部的(包括透皮的)、眼部的、脑内的、颅内的、鞘内的、动脉内的、静脉内的、肌内的或其他肠胃外施用途径的多种合适形式中的任一种。技术人员将理解，口服组合物和鼻组合物包括通过吸入施用并使用可用的方法制备的组合物。取决于期望的特定施用途径，可以使用本领域中熟知的多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括例如固体或液体填充剂、稀释剂、水溶物、表面活性剂和包封物质。可以包括任选的药学活性材料，其大体上不干扰治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))的抑制活性。与治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))结合使用的载体的量足以为每单位剂量的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))提供切实可行的量的施用材料。用于制备可用于本文描述的方法的剂型的技术和组合物在全部通过引用并入本文的以下参考文献中描述：ModernPharmaceutics,第4版,第9章和第10章(Banker&Rhodes编著,2002)；Lieberman等人,Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets(1989)；以及Ansel,Introduction toPharmaceutical Dosage Forms第8版(2004)。

可以使用多种口服剂型，包括诸如片剂、胶囊和颗粒剂的固体形式。片剂可以是压缩的、片剂研磨剂、肠溶包衣的、糖包衣的、膜包衣的或多重压缩的，包含合适的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂(flow-inducing agent)和熔化剂(melting agent)。液体口服剂型包括水溶液、乳液、悬浮液、由非泡腾颗粒剂重构的溶液和/或悬浮液以及由泡腾颗粒剂重构的泡腾制品，包含合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、熔化剂、着色剂和调味剂。

适合于制备用于经口施用的单位剂型的药学上可接受的载体是本领域熟知的。片剂通常包含作为惰性稀释剂的常规药学上相容的佐剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、甘露糖醇、乳糖和纤维素；粘合剂，诸如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂，诸如淀粉、海藻酸和交联羧甲基纤维素；润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。助流剂诸如二氧化硅可以用于改善粉末混合物的流动特性。着色剂诸如FD&C染料可以被添加用于外观。甜味剂和调味剂诸如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果香料是用于咀嚼片的有用佐剂。胶囊通常包含一种或更多种上文公开的固体稀释剂。载体组分的选择取决于次要考虑如味道、成本和储存稳定性，该次要考虑不是关键的，并且可以由本领域技术人员容易地进行。

经口组合物还包括液体溶液、乳液、悬浮液及类似物。适合于制备这样的组合物的药学上可接受的载体是本领域熟知的。糖浆、酏剂、乳液和悬浮液的载体的典型组分包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨糖醇和水。对于悬浮液，典型的悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、黄蓍胶和海藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨醇酯80；并且典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。经口液体组合物还可以包含一种或更多种组分诸如上文公开的甜味剂、调味剂和着色剂。

可用于实现主题治疗剂的全身递送的其他组合物包括舌下剂型、含服剂型和鼻剂型。这样的组合物通常包含以下中的一种或更多种：可溶性填充剂物质诸如蔗糖、山梨糖醇和甘露糖醇；以及粘合剂诸如阿拉伯树胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。还可以包括上文公开的助流剂、润滑剂、甜味剂、着色剂、抗氧化剂和调味剂。

对于局部使用，采用包含本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))的乳膏、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。局部制剂通常可以包含药物载体、助溶剂、乳化剂、渗透增强剂、防腐剂体系和润肤剂。

对于静脉内施用，本文描述的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))和组合物可以溶解或分散在药学上可接受的稀释剂诸如盐水或右旋糖溶液中。可以包括合适的赋形剂以达到期望的pH，包括但不限于NaOH、碳酸钠、乙酸钠、HC1和柠檬酸。在多种实施方案中，最终组合物的pH在从2至8，或优选地从4至7的范围内。抗氧化剂赋形剂可以包括亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、甲醛钠、次硫酸盐、硫脲和EDTA。在最终静脉内组合物中存在的合适的赋形剂的其他非限制性实例可以包括磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸、酒石酸、明胶和碳水化合物诸如右旋糖、甘露糖醇和右旋糖酐。另外的可接受的赋形剂在Powell等人,Compendiumof Excipients for Parenteral Formulations,PDA J Pharm Sci and Tech 1998,52238-31 1以及Nema等人,Excipients and Their Role in Approved InjectableProducts:Current Usage and Future Directions,PDA J Pharm Sci and Tech 2011,65287-332中描述，这两篇文献通过引用以其整体并入本文。还可以包括抗微生物剂以实现抑细菌溶液或抑真菌溶液，包括但不限于硝酸苯汞、硫柳汞、苄索氯铵、苯扎氯铵、苯酚、甲酚和氯丁醇。

用于静脉内施用的组合物可以以一种或更多种固体的形式提供给护理人员，所述固体在施用之前不久用合适的稀释剂诸如无菌水、盐水或在水中的右旋糖重构。在其他实施方案中，组合物以准备进行肠胃外地施用的溶液提供。在还其他实施方案中，组合物以溶液提供，该溶液在施用之前被进一步稀释。在包括施用本文描述的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))和另一种剂的组合的实施方案中，该组合可以作为混合物提供给护理人员，或者护理人员可以在施用之前混合这两种剂，或者这两种剂可以被分开地施用。

在非人类动物研究中，潜在产品的应用以较高的剂量水平开始，随着剂量的减少，直到不再实现期望的效果或不良副作用消失。取决于期望的效果和治疗适应症，剂量范围可能很广。通常，剂量可以在约0.1mg/kg体重和4000mg/kg体重之间，优选地在约80mg/kg体重和1600mg/kg体重之间。可选择地，如本领域技术人员所理解的，剂量可以基于患者的表面积并根据患者的表面积计算。

取决于待被治疗的状况的严重程度和反应性，给药也可以是缓慢释放组合物的单次施用，其中疗程持续从数天至数周或直到治愈被实现或疾病状态的减轻被实现。当然，待被施用的组合物的量将取决于许多因素，包括所治疗的受试者、痛苦的严重程度、施用的方式、处方医师的判断。本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))或治疗剂的组合可以以每天从0.1mg/kg患者体重至4000mg/kg患者体重的剂量口服地或经由注射施用。对于成人的剂量范围通常是从1g/天至100g/天。以离散单位提供的片剂或其他呈递形式可以方便地包含一定量的本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))或治疗剂的组合，其在这样的剂量或作为多个这样的剂量是有效的，例如包含1g至60g(例如，从约5g至20g、从约10g至50g、从约20g至40g或从约25g至35g)的单位。施用至患者的治疗剂的精确量将由巡诊医师(attendant physician)负责。然而，采用的剂量将取决于许多因素，包括患者的年龄和性别、被治疗的确切紊乱以及其严重程度。另外，施用途径可能取决于状况及其严重程度而变化。治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))的典型剂量可以是每kg体重从0.02g至1.25g，例如每kg体重从0.1g至0.5g，这取决于这样的参数。在一些实施方案中，治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))的剂量可以是从1g至100g，例如从10g至80g、从15g至60g、从20g至40g或从25g至35g。医师将能够确定治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))针对任何特定受试者的所需剂量。

本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))或治疗剂的组合的药物组合物的确切的制剂、施用途径和剂量可以由个体医师考虑患者的状况来选择。通常，施用至患者的组合物的剂量范围可以是从约0.1mg/kg患者体重至约4000mg/kg患者体重。根据患者的需要，剂量可以是在一天或更多天的进程中给予的单个剂量或两个或更多个剂量的系列。在其中已经针对至少一些状况确定治疗剂的人体剂量的情况下，本公开内容将使用那些相同的剂量，或者确定的人体剂量的在约0.1％和约5000％之间、更优选地在约25％和约1000％之间的剂量。在没有确定人体剂量的情况下，正如新发现的药物化合物的情况，可以从ED₅₀值或ID₅₀值或者从体外或体内研究得出的其他适当值(如通过在动物中的毒性研究和效力研究所证实的)推断出合适的人体剂量。

应当注意的是，主治医师将知道如何以及何时由于毒性或器官功能障碍而终止、中断或调节施用。相反地，如果临床响应不充分(排除毒性)，主治医师也将知道将治疗调节至较高水平。在管理关注的紊乱时所施用的剂量的大小将随着待被治疗的状况的严重程度和施用途径而变化。状况的严重程度可以例如部分地通过标准的预后评价方法来评价。此外，剂量和可能的给药频率也将根据个体患者的年龄、体重和响应而变化。与上文讨论的程序相当的程序可以用于兽医学。

尽管确切的剂量将基于不同的药物来确定，但是在大多数情况下，可以进行关于剂量的一些一般化。在施用药学上可接受的盐的情况下，剂量可以作为游离碱计算。在一些实施方案中，组合物每天1次至4次被施用。可选择地，本文公开的组合物可以通过连续静脉内输注施用，例如，以每天多达100g的每种活性成分的剂量施用。如本领域技术人员将理解的，在某些情况下，可能有必要以超过或甚至远远超过上文陈述的优选的剂量范围的量施用本文公开的组合物，以便有效且积极地治疗特别有侵袭性的疾病或感染。在一些实施方案中，本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))或治疗剂的组合将被施用持续连续治疗的时间段，例如持续一周或更长时间，或持续数月或数年。

在一些实施方案中，本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))或治疗剂的组合的给药方案被施用持续一段时间，该时间段可以是例如从至少约1周到至少约4周、从至少约4周到至少约8周、从至少约4周到至少约12周、从至少约4周到至少约16周或更长时间。本文公开的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))或治疗剂的组合的给药方案可以每天三次、每天两次、每天、每隔一天、每周三次、每隔一周、每月三次、每月一次、大体上连续地或连续地被施用。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以单独施用或以组合物(例如，药物组合物)的形式施用。在一些实施方案中，药物组合物包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、笼形包合物、多晶型物、前药或代谢物，以及一种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂。组合物可以任选地包含如本文描述的一种或更多种另外的治疗剂。药物组合物包含治疗有效量的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))以及一种或更多种药学上可接受的载体或赋形剂，并且被配制用于施用至受试者以用于治疗用途。出于药物组合物的含量的目的，术语“治疗剂”、“活性成分”、“活性剂”和“药物”涵盖前药。

药物组合物包含呈大体上纯的形式的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))。在一些实施方案中，治疗剂的纯度是至少约95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，治疗剂的纯度是至少约98％或99％。此外，药物组合物大体上不含污染物或杂质。在一些实施方案中，药物组合物中除了残余溶剂以外的污染物或杂质的水平相对于预期的活性成分和非活性成分的组合重量不大于约5％、4％、3％、2％或1％。在一些实施方案中，药物组合物中除了残余溶剂以外的污染物或杂质的水平相对于预期的活性成分和非活性成分的组合重量不大于约2％或1％。药物组合物通常根据当前的优良生产规范(GMP)制备，如通过例如联邦食品、药物和化妆品法案§501(a)(2)(B)和国际协调协合会Q7指南所推荐或要求的。

药学上可接受的载体和赋形剂包括药学上可接受的材料、媒介物和物质。赋形剂的非限制性实例包括液体和固体填充剂、稀释剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、增溶剂、表面活性剂、分散剂、崩解剂、乳化剂、润湿剂、悬浮剂、增稠剂、溶剂、等渗剂、缓冲剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、抗氧化剂、抗微生物剂、抗细菌剂、抗真菌剂、吸收延迟剂、甜味剂、调味剂、着色剂、佐剂、包封材料和包衣材料。这样的赋形剂在药物制剂中的用途是本领域已知的。例如，常规的媒介物和载体包括但不限于油(例如，植物油，诸如芝麻油)、含水溶剂(例如，盐水、磷酸盐缓冲盐水[PBS]和等渗溶液[例如，林格氏溶液])以及溶剂(例如，二甲基亚砜[DMSO]和醇[例如，乙醇、甘油和丙二醇])。除非任何常规的载体或赋形剂与活性成分不相容，否则本公开内容涵盖常规的载体和赋形剂在包含治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))的制剂中的用途。参见，例如，Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第21版,Lippincott Williams&Wilkins(Philadelphia,Pennsylvania[2005])；Handbook of Pharmaceutical Excipients,第5版,Rowe等人编著,The PharmaceuticalPress and the American Pharmaceutical Association(2005)；Handbook ofPharmaceutical Additives,第3版,Ash and Ash编著,Gower Publishing Co.(2007)；以及Pharmaceutical Preformulation and Formulation,Gibson编著,CRC Press(BocaRaton,Florida,2004)。

适当的制剂可以取决于多种因素，诸如选择的施用模式。包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)的药物组合物的潜在施用模式包括但不限于口服的、肠胃外的(包括肌内的、皮下的、皮内的、血管内的、静脉内的、动脉内的、腹膜内的、髓内的、鞘内的和局部的)、腔内的和局部的(包括真皮的/表皮的、透皮的、粘膜的、经粘膜的、鼻内的[例如，通过鼻喷雾剂或滴鼻剂]、肺部的[例如，通过口服吸入或鼻吸入]、含服的、舌下的、直肠的[例如，通过栓剂]和阴道的[例如，通过栓剂])。

作为实例，适合于口服施用的环孢菌素类似物(例如，CRV431)的制剂可以作为例如快速推注剂(bolus)；片剂、胶囊、丸剂、扁囊剂或锭剂；作为粉末或颗粒剂；作为半固体、舐剂(electuary)、糊剂或凝胶；作为在含水液体或/和非含水液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳液或油包水液体乳液呈现。

片剂可以包含与例如填充剂或惰性稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙、乳糖、甘露糖醇或微晶纤维素)、粘合剂(例如，淀粉、明胶、阿拉伯树胶、海藻酸或其盐或微晶纤维素)、润滑剂(例如，硬脂酸、硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)和崩解剂(例如，交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠或胶体二氧化硅)以及任选的表面活性剂(例如，月桂基硫酸钠)混合的环孢菌素类似物(例如，CRV431)。片剂可以是无包衣的，或者可以用例如保护活性成分免受胃的酸性环境影响的肠溶包衣，或用延迟活性成分在胃肠道中的崩解和吸收并由此在较长的时间段内提供持续的作用的材料来包衣。在一些实施方案中，片剂包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)、甘露糖醇、微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠和月桂基硫酸钠以及任选的乳糖一水合物，并且片剂任选地被膜包衣(例如，用

)。

推入配合式胶囊(Push-fit capsule)或两件式硬明胶胶囊可以包含与例如填充剂或惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙、高岭土或乳糖)、粘合剂(例如，淀粉)、助流剂或润滑剂(例如，滑石粉或硬脂酸镁)和崩解剂(例如，交联聚维酮)以及任选的稳定剂或/和防腐剂混合的环孢菌素类似物(例如，CRV431)。对于软胶囊或单件式明胶胶囊，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以溶解或悬浮在合适的液体(例如，液体聚乙二醇或油介质，诸如脂肪油、花生油、橄榄油或液体石蜡)中，并且液体填充的胶囊可以包含一种或更多种其他液体赋形剂或/和半固体赋形剂，诸如稳定剂或/和两亲性剂(例如，甘油、丙二醇或山梨糖醇的脂肪酸酯)。

用于口服施用的组合物也可以被配制为在含水液体或/和非含水液体中的溶液或悬浮液，或者被配制为水包油液体乳液或油包水液体乳液。环孢菌素类似物(例如，CRV431)的可分散的粉末或颗粒剂可以与含水液体、有机溶剂或/和油以及任何合适的赋形剂(例如，分散剂、润湿剂、悬浮剂、乳化剂或/和防腐剂的任何组合)的任何合适的组合混合，以形成溶液、悬浮液或乳液。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)也可以被配制用于通过注射或输注的肠胃外施用，以规避胃肠吸收和首过代谢。代表性的肠胃外途径是静脉内的。

静脉内施用的另外的优点包括将治疗剂直接施用到体循环中以实现快速的全身效果，以及如果需要，连续地或/和以大体积施用剂的能力。用于注射或输注的制剂可以呈例如在油性媒介物或含水媒介物中的溶液、悬浮液或乳液的形式，并且可以包含赋形剂，诸如悬浮剂、分散剂或/和稳定剂。例如，含水或非含水(例如，油性)无菌注射溶液可以包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)连同赋形剂诸如抗氧化剂、缓冲剂、抑细菌剂以及致使制剂与受试者的血液等渗的溶质。含水或非含水无菌悬浮液可以包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)连同赋形剂诸如悬浮剂和增稠剂以及任选的稳定剂和增加环孢菌素类似物(例如，CRV431)的溶解度的剂，以允许制备更浓的溶液或悬浮液。作为另一个实例，用于注射或输注(例如，皮下地或静脉内地)的无菌水溶液可以包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)、NaCl、缓冲剂(例如，柠檬酸钠)、防腐剂(例如，间甲酚)以及任选的碱(例如，NaOH)或/和酸(例如，HCl)以调节pH。

对于局部施用，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以被配制为例如含服或舌下片剂或丸剂。含服或舌下片剂或丸剂可以避免首过代谢和规避胃肠吸收。含服或舌下片剂或丸剂可以被设计以提供环孢菌素类似物(例如，CRV431)的更快释放，以用于将其更快速摄取到体循环中。除了治疗有效量的环孢菌素类似物(例如，CRV431)之外，含服或舌下片剂或丸剂可以包含合适的赋形剂，包括但不限于填充剂和稀释剂(例如，甘露糖醇和山梨糖醇)、粘合剂(例如，碳酸钠)、润湿剂(例如，碳酸钠)、崩解剂(例如，交联聚维酮和交联羧甲基纤维素钠)、润滑剂(例如，二氧化硅[包括胶体二氧化硅]和硬脂基富马酸钠)、稳定剂(例如，碳酸氢钠)、调味剂(例如，绿薄荷香料(spearmint flavor))、甜味剂(例如，三氯蔗糖)和着色剂(例如，黄色氧化铁)的任何组合。

对于局部施用，环孢菌素类似物(例如，CRV431)也可以被配制用于鼻内施用。鼻粘膜提供大的表面积、多孔的内皮、血管丰富的上皮下层和高吸收率，并且因此允许高生物利用度。此外，鼻内施用避免了首过代谢，并且可以将相当大浓度的环孢菌素类似物(例如，CRV431)引入到中枢神经系统，允许环孢菌素类似物(例如，CRV431)经由在延髓中的咳嗽中枢中的孤束核(其中迷走神经传入神经终止)阻断中枢咳嗽反射。鼻内溶液或悬浮液制剂可以包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)连同赋形剂诸如溶解度增强剂(例如，丙二醇)、保湿剂(例如，甘露糖醇或山梨糖醇)、缓冲剂和水以及任选的防腐剂(例如，苯扎氯铵)、粘膜粘附剂(mucoadhesive agent)(例如，羟乙基纤维素)或/和渗透增强剂。在一些实施方案中，鼻喷雾制剂包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、右旋糖和水以及任选的酸(例如，HC1)以调节pH。鼻内溶液或悬浮液制剂可以通过任何合适的手段被施用至鼻腔，所述手段包括但不限于滴管、移液管或使用例如计量雾化喷雾泵的喷雾。另外的局部施用模式是肺部的，包括通过口服吸入和鼻吸入。

在一些实施方案中，环孢菌素类似物(例如，CRV431)由持续释放组合物递送。如本文使用的，术语“持续释放组合物”涵盖持续释放的、延长释放的、延时释放的、缓慢释放的和控制释放的组合物、系统和装置。持续释放组合物的使用可以具有益处，诸如在一段时间内递送至靶位点的药物或其活性代谢物的量的改善的概况，包括在延长的时间段内递送治疗有效量的药物或其活性代谢物。在一些实施方案中，持续释放组合物在至少约1天、2天、3天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月或更长时间的时间段内递送环孢菌素类似物(例如，CRV431)。在一些实施方案中，持续释放组合物是药物包封系统，诸如纳米颗粒、微粒或由例如可生物降解的聚合物或/和水凝胶制成的胶囊。在一些实施方案中，持续释放组合物包含水凝胶。水凝胶可以包含的聚合物的非限制性实例包括聚乙烯醇、丙烯酸酯聚合物(例如，聚丙烯酸钠)和具有相对大量的亲水性基团(例如，羟基基团或/和羧酸酯基团)的其他均聚物和共聚物。在一些实施方案中，持续释放药物包封系统包含膜封闭的储器，其中储器包含药物，并且膜对药物是可渗透的。这样的药物递送系统可以呈例如透皮贴剂的形式。

在一些实施方案中，持续释放组合物是口服剂型，诸如片剂或胶囊。例如，药物可以被嵌入不溶性多孔基质中，使得溶解药物必须在药物可以通过胃肠道吸收之前使其离开基质。可选择地，药物可以被嵌入基质中，该基质溶胀以形成凝胶，由此药物离开。持续释放也可以通过单层或多层渗透控制释放口服递送系统(OROS)的方式来实现。OROS是一种具有半渗透外部膜和在其中的一个或更多个小的激光钻孔的片剂。随着片剂通过身体，水经由渗透通过半渗透膜被吸收，并且所得到的渗透压将药物通过片剂中的孔推出并进入胃肠道，在胃肠道中，药物可以被吸收。

持续释放组合物可以被配制为聚合物纳米颗粒或微粒，其中聚合物颗粒可以例如通过吸入或注射或从植入物递送。在一些实施方案中，聚合物植入物或聚合物纳米颗粒或微粒包含可生物降解的聚合物。在一些实施方案中，可生物降解的聚合物包含乳酸或/和乙醇酸[例如，基于L-乳酸的共聚物，诸如聚(L-丙交酯-共-乙交酯)或聚(L-乳酸-共-D,L-2-羟基辛酸)]。例如，包含聚乳酸或/和聚乙醇酸的可生物降解的聚合物微球可以用作持续释放肺部药物递送系统。聚合物植入物或聚合物纳米颗粒或微粒的可生物降解的聚合物可以被选择为使得聚合物在预期治疗期结束的时间附近大体上完全降解，并且使得聚合物降解的副产物如聚合物是生物相容的。

对于环孢菌素类似物(例如，CRV431)的延迟释放或持续释放，组合物也可以被配制为可以被植入或注射(例如，肌内地或皮下地)到受试者中的储库。储库制剂可以被设计以在较长的时间段内，例如在至少约1周、2周、3周、1个月、6周、2个月、3个月或更长时间的时间段内递送环孢菌素类似物(例如，CRV431)。例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以与聚合物材料(例如，聚乙二醇(PEG)、聚乳酸(PLA)或聚乙醇酸(PGA)或其共聚物(例如，PLGA))、疏水性材料(例如，作为油中的乳液)或/和离子交换树脂一起配制，或者作为微溶性衍生物(例如，微溶性盐)配制。作为说明性实例，环孢菌素类似物(例如，CRV431)可以被并入或嵌入包含PLGA的持续释放微粒中，并且作为每月储库配制。

环孢菌素类似物(例如，CRV431)也可以被包含或分散在基质材料中。基质材料可以包含聚合物(例如，乙烯-乙酸乙烯酯)，并且通过控制化合物从例如储器中的溶解或/和扩散来控制化合物的释放，并且可以增强化合物在被包含在储器中时的稳定性。这样的释放系统可以被设计为持续释放系统，可以被配置为例如透皮贴剂或经粘膜贴剂，并且可以包含可以加速化合物的释放的赋形剂，诸如有助于将化合物排出储器的水可溶胀的材料(例如，水凝胶)。

释放系统当需要血浆水平的时间变化时可以提供时间调制的释放概况(例如，脉冲式释放)，或者当需要恒定的血浆水平时可以提供更连续或一致的释放概况。脉冲式释放可以从单独的储器中或从多于一个储器中实现。例如，在每个储器提供单个脉冲的情况下，多个脉冲(“脉冲式”释放)通过在时间上错开来自多个储器中的每一个的单个脉冲释放来实现。

此外，包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)的药物组合物可以被配制为例如脂质体、胶束(例如，包含可生物降解的天然聚合物或/和合成聚合物诸如乳糖体(lactosome)的胶束)、微球、微粒或纳米颗粒，无论是否设计用于持续释放。

药物组合物可以以本领域已知的任何合适的方式制造，例如借助于常规的混合、溶解、悬浮、制粒、糖衣丸制造(dragee-making)、磨细(levigating)、乳化、包封、包埋或压缩工艺制造。

药物组合物可以以作为单一剂量的单位剂型呈现，其中所有活性成分和非活性成分在合适的系统中组合，并且组分不需要被混合以形成待被施用的组合物。单位剂型可以包含有效剂量的或有效剂量的适当分数的治疗剂(例如，环孢菌素类似物(例如，CRV431))。单位剂型的代表性实例包括用于口服施用的片剂、胶囊或丸剂，以及用于口服吸入或鼻吸入的小瓶或安瓿中的粉末。

本文公开的药物组合物可以作为试剂盒呈现，其中活性成分、赋形剂和载体(例如，溶剂)被提供在两个或更多个单独的容器(例如，安瓿、小瓶、管、瓶子或注射器)中，并且需要被组合以形成待被施用的组合物。试剂盒可以包含用于储存、制备和施用组合物(例如，待被静脉内地注射的溶液)的使用说明。

试剂盒可以包含呈单位剂型的所有活性成分和非活性成分或者在两个或更多个单独的容器中的活性成分和非活性成分，并且可以包含用于使用药物组合物的使用说明。在一些实施方案中，试剂盒包含环孢菌素类似物(例如，CRV431)或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、笼形包合物、多晶型物、前药或代谢物，以及用于施用化合物的使用说明。

实施例

上文讨论的实施方案的一些方面在以下实施例中被更详细地公开，这些实施例不以任何方式意图限制本公开内容的范围。

实施例1

确定CRV431在来自多个不同器官的成纤维细胞中的抗纤维化活性

在本实施例中，使用五种不同类型的成纤维细胞，包括(1)来自患有特发性肺纤维化(“IPF”)的患者的肺成纤维细胞、(2)心脏成纤维细胞、(3)真皮(皮肤)成纤维细胞、(4)肾系膜细胞和(5)LX2肝星状细胞系，以确定CRV431在减少ECM分子、胶原和纤连蛋白的产生方面的能力。

如该实施例中示出的，如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量的，CRV431剂量依赖性地以相似的幅度降低前胶原和纤连蛋白从所有五种类型的成纤维细胞的分泌。无论细胞是否用促纤维化剂转化生长因子-β(TGFβ)刺激，抑制程度是相似的，这与对ECM合成的直接影响一致。此外，在临床相关浓度，CRV431剂量依赖性地降低ECM产生多达55％，而不引起细胞生存力的任何降低。如本文公开的，CRV431可以用于通过抑制亲环蛋白B来减少ECM产生，并且与该假说一致，用小干扰RNA(siRNA)下调亲环蛋白B类似地减少前胶原和纤连蛋白的分泌。

人类LX-2肝星状细胞(Millipore-Sigma,目录号#SCC064)在96孔板中培养。在一式三份的孔中应用处理(每孔应用100μl处理)24小时。细胞在处理开始时接近汇合。在处理结束时的细胞生存力分析示出，CRV431处理均未影响细胞生存力。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)(来自Abcam的前胶原ELISA抗体对(ab216064)和纤连蛋白ELISA抗体对(ab222262))来测定在处理结束时收集的用过的培养基中的前胶原和纤连蛋白。在未应用于细胞的培养基中未检测到前胶原和纤连蛋白。培养基中的前胶原和纤连蛋白水平通过来自3个重复孔(空心圆圈(open circle))的平均值±SD(条)来表示。如图1A和图1B中示出的，CRV431在不存在或存在0.1ng/ml TGFβ的情况下均剂量依赖性地降低培养基中前胶原和纤连蛋白的丰度。

来自患有特发性肺纤维化(IPF)的患者的人类肺成纤维细胞(Lonza Bioscience,目录号#CC-7231)在96孔板中培养。在一式三份的孔中应用处理(每孔应用100μl处理)6天。细胞在处理开始时接近汇合。在处理结束时的细胞生存力分析示出，CRV431处理均未影响细胞生存力。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)(来自Abcam的前胶原ELISA抗体对(ab216064)和纤连蛋白ELISA抗体对(ab222262))来测定在处理结束时收集的用过的培养基中的前胶原和纤连蛋白。在未应用于细胞的培养基中未检测到前胶原和纤连蛋白。培养基中的前胶原和纤连蛋白水平通过来自3个重复孔(空心圆圈)的平均值±SD(条)来表示。如图2A和图2B中示出的，CRV431在不存在或存在0.4ng/ml TGFβ的情况下均剂量依赖性地降低培养基中前胶原和纤连蛋白的丰度。

人类心脏成纤维细胞(Lonza Bioscience,目录号#CC-2903)在96孔板中培养。在一式三份的孔中应用处理(每孔应用100μl处理)6天。细胞在处理开始时接近汇合。在处理结束时的细胞生存力分析示出，CRV431处理均未影响细胞生存力。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)(来自Abcam的前胶原ELISA抗体对(ab216064)和纤连蛋白ELISA抗体对(ab222262))来测定在处理结束时收集的用过的培养基中的前胶原和纤连蛋白。在未应用于细胞的培养基中未检测到前胶原和纤连蛋白。培养基中的前胶原和纤连蛋白水平通过来自3个重复孔(空心圆圈)的平均值±SD(条)来表示。如图3A和图3B中示出的，CRV431在不存在或存在0.4ng/ml TGFβ的情况下均剂量依赖性地降低培养基中前胶原和纤连蛋白的丰度。

人类肾系膜细胞(ScienCell,目录号#4200(SC))在96孔板中培养。在一式三份的孔中应用处理(每孔应用100μl处理)2天，然后再应用另外的2天。细胞在处理开始时接近汇合。在处理4天结束时的细胞生存力分析示出，CRV431处理均未影响细胞生存力。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)(来自Abcam的前胶原ELISA抗体对(ab216064)和纤连蛋白ELISA抗体对(ab222262))来测定从处理的第2-4天收集的用过的培养基中的前胶原和纤连蛋白。在未应用于细胞的培养基中未检测到前胶原和纤连蛋白。培养基中的前胶原和纤连蛋白水平通过来自3个重复孔(空心圆圈)的平均值±SD(条)来表示。如图4A和图4B中示出的，CRV431在不存在或存在0.4ng/ml TGFβ的情况下均剂量依赖性地降低培养基中前胶原和纤连蛋白的丰度。

人类成人真皮成纤维细胞(Lonza Bioscience,目录号#CC-2511)在96孔板中培养。在一式三份的孔中应用处理(每孔应用100μl处理)1天，然后再应用另外的一天。细胞在处理开始时接近汇合。在处理4天结束时的细胞生存力分析示出，CRV431处理均未影响细胞生存力。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)(来自Abcam的前胶原ELISA抗体对(ab216064)和纤连蛋白ELISA抗体对(ab222262))来测定从处理的第1-2天收集的用过的培养基中的前胶原和纤连蛋白。在未应用于细胞的培养基中未检测到前胶原和纤连蛋白。培养基中的前胶原和纤连蛋白水平通过来自3个重复孔(空心圆圈)的平均值±SD(条)来表示。如图5A和图5B中示出的，CRV431在不存在或存在10ng/ml表皮生长因子(EGF)或0.4ng/ml TGFβ的情况下均剂量依赖性地降低培养基中前胶原和纤连蛋白的丰度。

实施例2

使用CRV431处理培养中的人类精确切割的IPF肺切片

该实施例描述了用精确切割的肺切片进行的研究。将来自得自患有经活检证实的特发性肺纤维化(IPF)的患者的移植的肺组织的精确切割的切片培养6天。在培养的第2天应用处理，每种处理6个重复切片，并且在培养的第3天、第4天和第5天每天更换。

为了生成图6A中示出的分泌的标志物的结果(％每日平均变化)，在第3天、第4天、第5天和第6天收集用过的培基养(24小时间隔)，以通过ELISA测量六种炎症和纤维化标志物的分泌：单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、金属蛋白酶-1的组织抑制剂(TIMP1)、透明质酸和胶原1α1。来自每种药物处理的6个重复切片的平均分泌水平被表示为处理的每一天相对于DMSO媒介物处理的百分比变化，并且然后计算来自4个每日处理间隔的平均百分比变化。

为了生成图6B中示出的基因表达的结果，在药物或媒介物处理4天之后在培养的第6天从每种处理的6个合并的肺切片中分离RNA，并且通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评价6种炎症和纤维化标志物：MCP-1、IL-6、TGFβ、TIMP1、胶原1α1和α-平滑肌肌动蛋白(αSMA)。β肌动蛋白被用作参考基因，以计算每个靶基因RNA的相对水平。以5μM浓度应用的CRV431与Alk5i(TGFβ受体激酶的抑制剂)、吡非尼酮(用于IPF的经批准的治疗)和尼达尼布(用于IPF的经批准的治疗)相似地减少了所有标志物的平均每日分泌和基因表达。

实施例3

使用CRV431处理小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型中的肾脏纤维化

该实施例描述了在小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)肾脏纤维化模型中进行的研究。在该研究中使用了七周龄的雌性C57BL/6小鼠(每组n＝8只小鼠)。假手术组小鼠不接受UUO。其余的小鼠经历左侧输尿管的完全手术结扎。从手术当天开始，通过每日口饲施用50mg/kg/天的媒介物和CRV431，持续13天。在第14天处死小鼠，并且对左肾进行组织学处理并且用天狼星红对纤维化胶原进行染色。在来自每个肾脏的5个切片中以形态计量学测量每个组织切片用天狼星红染色的百分比。结果在图7A(在单个组织切片中示出天狼星红)和图7B(在单个小鼠中示出天狼星红(每只小鼠5个组织切片))中示出。单因素ANOVA与Tukey的多重比较证明，当数据以每个切片和每只动物两者呈现时，CRV431处理在天狼星红染色方面产生了统计学上显著的降低。

实施例4

CRV431在人类精确切割的肝切片(PCLS)中的抗纤维化活性

该实施例描述了用人类PCLS进行的研究，以确定CRV431的抗纤维化活性，其中观察到来自所有5个人类供体的PCLS具有一些预先存在的纤维化，所述预先存在的纤维化通过TGFβ+PDGF-BB刺激增加至按分数面积计7％-11％。CRV431在预防TGFβ+PDGF-BB诱导的组织纤维化方面是五种NASH药物候选中最有效的。在不存在外源性TGFβ+PDGF-BB的情况下，大多数CRV431处理的切片在培养6天之后也示出比媒介物处理的切片更少的纤维化。减少的组织纤维化伴随着胶原1α1、纤连蛋白、透明质酸、IL-6和MCP-1的减少的分泌，以及胶原1α1、αSMA、TIMP1、IL-6和MCP-1的RNA水平的降低，如通过qRT-PCR所展示的。RNA-Seq分析类似地示出，CRV431减少了许多纤维化相关基因(包括多于10种胶原基因)的表达、胶原羟化酶和氧化酶、ACTA2、VEGF和TIMP。基因表达在供体之间有相当大的变化，使得在所有供体中，少于200个基因的表达被CRV431普遍改变。许多这些泛供体转录变化与文献中关于基因所描述的抗NASH活性、抗纤维化活性和抗致癌活性一致。在不存在TGFβ+PDGF-BB的情况下受到CRV431普遍影响的显著基因是ESM1(RNA的2.2倍减少；-2.2)、NCOA3(-2.7)、IFI44L(-4.8)、mIR-194-2(-7.9)和DKK1(RNA的3.8倍增加；+3.8)。在存在外源性TGFβ+PDGF-BB的情况下，受到CRV431普遍影响的显著基因是LOXL2(-1.9)、UBD/FAT10(-2.0)、ESM1(-2.6)、STRA6(-3.1)、RCCD1(-3.6)和DUOX2(-4.5)。不受任何特定理论的束缚，据信本文描述的结果指示CRV431能够预防纤维化形成和逆转纤维化。

PCLS获自5名经历肝癌切除术的人类供体。取决于实验方案，重复切片从切除的健康边缘收集并且培养4天或6天。在非刺激方案中，将切片培养6天，并且在整个时间段内用DMSO媒介物或5μM CRV431处理。在刺激方案中，将切片静置1天，并且然后施用细胞因子TGFβ和PDGF-BB持续3天，以刺激炎症和纤维化。DMSO媒介物、CRV431(1μM和5μM)、Alk5i(10μM)、奥贝胆酸(obeticholic acid)(5μM)、elafibranor(5μM)、resmetirom(5μM)和Aramchol(5μM)在用TGFβ+PDGF-BB同时进行的刺激方案中作为药物处理被单独地施用。每天更换培养基处理。

对PCLS进行四种类型的评价：(a)炎症和纤维化生物标志物向培养基中的分泌，(b)天狼星红的组织学染色和定量作为组织纤维化的量度，(c)通过RT-PCR的炎症和纤维化生物标志物的基因表达，以及(d)完整转录组的RNA测序(RNA-Seq)。四种类型的评价中的每一种在下文中描述：

(a)生物标志物分泌。对于每种处理，每天从一式两份的切片中收集用过的培养基。使用ELISA来定量单核细胞趋化蛋白(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、金属蛋白酶-1的组织抑制剂(TIMP1)、透明质酸、纤连蛋白和胶原1α1的分泌。对于每个供体，每个处理组的生物标志物分泌的平均水平被表示为相对于DMSO媒介物的百分比变化、所有供体平均的百分比以及最后从所有评价的天数计算的平均每日百分比变化。结果在图8A中示出(分泌的标志物-％每日平均变化)。

(b)天狼星红组织学染色。在实验结束时对PCLS进行组织学处理，并且用天狼星红染色以展示组织纤维化。在组织学切片中将天狼星红以形态计量学定量为来自每种处理的10个切片中具有天狼星红染色的百分比面积。在非刺激方案中，天狼星红染色的量相对于媒介物组表示。在刺激方案中，天狼星红染色的量相对于未经刺激的PCLS(0％)和TGFβ+PDGF-BB-刺激的+媒介物PCLS(100％)表示。结果在图8B中示出(组织纤维化的天狼星红染色)。

(c)通过RT-PCR的基因表达。在实验结束时，每种处理从一式两份的肝切片中分离RNA，并且通过RT-PCR评价5种炎症和纤维化标志物：MCP-1、IL-6、TIMP1、αSMA和胶原1α1。β肌动蛋白被用作参考基因，以计算每个靶基因RNA的相对水平。以5μM浓度应用的CRV431与Alk5i(TGFβ受体激酶的抑制剂)、吡非尼酮(用于IPF的经批准的治疗)和尼达尼布(用于IPF的经批准的治疗)相似地减少了所有标志物的平均每日分泌和基因表达。结果在图8C中示出(通过RT-PCR的基因表达)。

(d)通过RNA-Seq的基因表达。对来自得自非刺激方案和刺激方案两者的3个供体的媒介物处理组和5μM CRV431处理组进行完整转录组的RNA测序(每样品3000万次读取)。通过生物信息学软件程序分析数据以识别在媒介物处理和CRV431处理之间差异表达的基因。

为了对(d)进行的评价，研究了对应于3个不同的供体载玻片、经历了4种不同的处理的12个样品。在该分析中进行的比较是：(1)TGFb/PDGF+CRV相对于TGFb/PDGF+媒介物(V)，以及(2)未经刺激的+CRV相对于未经刺激的+媒介物。表1示出了样品ID和对应的处理。

表1.用于评价(d)的样品

样品ID	处理
		CVR_2.1_3	TGFb/PDGF+V
CVR_2.1_9	TGFb/PDGF+CRV
		CVR_2.1_19	对照+V
CVR_2.1_21	对照+CRV
		CVR_2.2_3	TGFb/PDGF+V
CVR_2.2_9	TGFb/PDGF+CRV
		CVR_2.2_19	对照+V
CVR_2.2_21	对照+CRV
		CVR_2.4_3	TGFb/PDGF+V
CVR_2.4_9	TGFb/PDGF+CRV
		CVR_2.4_19	对照+V
CVR_2.4_21	对照+CRV

对所有样品进行质量控制检查。对于序列中的几乎所有碱基，所有样品具有多于3000万次读取和平均质量评分>35。重复水平是预期的，因为它是RNA测序，并且相同RNA的不同拷贝被预期存在于样品中。所有样品具有良好的读取量和质量，因此所有样品通过QC检查并且被包含在分析中。

按组比较TGFb/PDGF+CRV431相对于TGFb/PDGF+媒介物。生成主成分分析(PCA)图来分析样品的分布(图9A)，其示出了供体的强烈影响，因为它们基于供体聚集在一起；然而，在处理之间也存在差异，因为它们在PCA图中分开，如图9B中示出的。

在图9C的MA图中，将平均计数对对数倍数变化作图。以红色示出在比较TGFb/PDGF+CRV和TGFb/PDGF+媒介物中表达不同的显著基因(p-调整<0.05)。

对于比较TGFb/PDGF+CRV和TGFb/PDGF+媒介物(p-调整<0.05，对数倍数变化>0.5)，还生成了热图以绘制表达显著不同的基因。按组分组的样品的热图在图10A中示出，以观察组内存在的不同表达模式(蓝色＝媒介物；红色＝CRV)。相同的显著基因也被绘制到另一个热图(图10B)中，但现在将样品按供体分组绘制以便观察供体之间的差异(蓝色＝媒介物；红色＝CRV)。

此外，显著命中被绘制在火山图(图11)中，其中显著基因以红色绘制并且用其对应的符号ID标记。下调和上调是相对于CRV处理。

在比较TGFb/PDGF+CRV和TGFb/PDGF+媒介物(p-调整>0.05，对数倍数变化>0.5)中识别的显著不同地表达的基因在表2中示出。倍数变化是相对于处理(CRV)。

表2.在比较TGFb/PDGF+CRV和TGFb/PDGF+媒介物中识别的显著不同地表达的基因

如PCA分析中示出的，存在供体的强烈影响。因此，对每个供体单独地进行分析。按供体对TGFb/PDGF+CRV341相对于TGFb/PDGF+媒介物进行计数比较。首先，选择具有计数数目的差异(TGFb/PDGF+媒介物-TGFb/PDGF+CRV)<-300的基因。因此，媒介物组比CRV处理少至少300个拷贝。换句话说，处理比媒介物多至少300个拷贝。在对每个供体单独地进行该选择之后，绘制了维恩图，示出了所有三个供体之间的重叠。如图12A中示出的，117个基因在经CRV处理的样品中比在媒介物中多至少300个拷贝。

然后，选择具有计数数目的差异(TGFb/PDGF+媒介物-TGFb/PDGF+CRV)>300的基因，因此，选择与经CRV处理相比在媒介物样品中多至少300个拷贝的那些基因。因此，与媒介物相比，它们在CRV处理中少至少300个拷贝。在对每个供体单独地进行选择之后，绘制了维恩图，示出了所有三个供体之间的重叠。如图12B中示出的，279个基因在经CRV处理中比在媒介物中少至少300个拷贝。

然后按组比较未经刺激的+CRV431相对于未经刺激的+媒介物。生成主成分分析(PCA)图来分析样品的分布(图13A)。如所预期的，观察到供体的强烈影响，因为它们基于供体而不是基于处理聚集在一起。但是处理之间存在差异，因为它们在PCA图中分开(图13B)。

对于图13C中示出的MA图，平均计数对对数倍数变化作图。以红色示出在比较未经刺激的+CRV和未经刺激的+媒介物中表达不同的显著基因(p-调整<0.05)。

对于比较未经刺激的+CRV和未经刺激的+媒介物(p-调整<0.05，对数倍数变化>0.5)，通过绘制表达显著不同的基因来生成热图。首先，示出了按组分组的样品的热图(图14A)，以便观察组内存在的不同表达模式(蓝色＝媒介物；红色＝CRV)。然后，相同的显著基因被绘制到热图(图14B)中，但现在将样品按供体分组绘制以便观察供体之间的差异(蓝色＝媒介物；红色＝CRV)。

显著命中被绘制在火山图(图15)中。显著基因以红色绘制并且用其对应的符号ID标记。下调基因和上调基因是相对于CRV处理。

在比较未经刺激的+CRV和未经刺激的+媒介物(p-调整>0.05，对数倍数变化>0.5)中识别的显著不同地表达的基因在表3中提供。所示出的倍数变化是相对于CRV处理。

表3.在比较未经刺激的+CRV和未经刺激的+媒介物中识别的显著不同地表达的基因

然后按供体比较未经刺激的+CRV431相对于未经刺激的+媒介物。如PCA中示出的，存在供体的强烈影响。因此，与先前的比较一样重复分析。首先，选择具有计数数目的差异(未经刺激的+媒介物-未经刺激的+CRV)<-300的基因，因此媒介物组比CRV处理少至少300个拷贝。换句话说，在CRV处理中比在媒介物中多至少300个拷贝。在对每个供体单独地进行该选择之后，绘制了维恩图，示出了所有三个供体之间的重叠。如图16A中示出的，210个基因在CRV处理中比在媒介物中多至少300个拷贝。然后，选择具有计数数目的差异(未经刺激的+媒介物-未经刺激的+CRV)>300的基因，因此，选择与经CRV处理相比在媒介物样品中多至少300个拷贝的那些基因。因此，与媒介物相比在经处理的组中少至少300个拷贝。在对每个供体单独地进行选择之后，绘制了维恩图，示出了所有三个供体之间的重叠。如图16B中示出的，255个基因在经CRV处理中比在媒介物中少至少300个拷贝。

在先前描述的实施方案中的至少一些中，在一种实施方案中使用的一个或更多个要素可以可互换地在另一种实施方案中使用，除非这样的替换在技术上是不可行的。本领域技术人员将理解，可以对上文描述的方法和结构进行多种其他省略、添加和修改，而不脱离所要求保护的主题的范围。所有这样的修改和改变意图落在如由所附权利要求定义的主题的范围内。

关于本文的大体上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可以根据上下文和/或应用适当地将复数翻译为单数和/或将单数翻译为复数。多种单数/复数排列可以为了清楚而在本文中明确地阐述。如本说明书和所附权利要求中使用的，除非上下文另外清楚地指出，否则单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包括复数指示物。除非另外陈述，否则在本文中对“或”的任何提及意图涵盖“和/或”。

本领域技术人员将理解，一般地，本文使用的术语，且尤其是在所附权利要求(例如，所附权利要求的主体)中使用的术语通常意指“开放式的”术语(例如，术语“包括(including)”应被解释为“包括但不限于”，术语“具有”应被解释为“至少具有”，术语“包括(includes)”应被解释为“包括但不限于”等)。本领域技术人员还将理解，如果意图是特定数目的引入的权利要求叙述，则这样的意图将在权利要求中明确地叙述，并且在不存在这样的叙述的情况下，这样的意图不存在。例如，作为对理解的帮助，以下所附权利要求可以包含引导性短语“至少一个”和“一个或更多个”的使用，以引入权利要求叙述。然而，这样的短语的使用不应被解释为意味着权利要求叙述通过不定冠词“一(a)”或“一(an)”的引入将含有这样引入的权利要求叙述的任何特定的权利要求限制为含有仅仅一个这样的叙述的实施方案，即使当同一个权利要求包括引导性短语“一个或更多个”或“至少一个”和诸如“一(a)”或“一(an)”的不定冠词(例如，“一(a)”和/或“一(an)”应被解释为意指“至少一个”或“一个或更多个”)时；这也适用于用于引入权利要求叙述的定冠词的使用。此外，即使引入的权利要求叙述的具体数目被明确地叙述，本领域技术人员将认识到，这样的叙述应被解释为意指至少所叙述的数目(例如，“两个叙述”的没有其他修饰语的纯叙述，意指至少两个叙述，或者是指两个或更多个叙述)。此外，在使用与“A、B和C等中的至少一个”相似的惯例的那些情况下，一般地，这样的结构在意义上意图是本领域技术人员在惯例中所理解的意思(例如，“具有A、B和C中的至少一个的系统”将包括但不限于只具有A、只具有B、只具有C、具有A和B一起、A和C一起、B和C一起、和/或A、B和C一起等的系统)。在使用与“A、B或C等中的至少一个”相似的惯例的那些情况下，一般地，这样的结构在意义上意图是本领域技术人员在惯例中所理解的意思(例如，“具有A、B或C中的至少一个的系统”将包括但不限于只具有A、只具有B、只具有C、具有A和B一起、A和C一起、B和C一起、和/或A、B和C一起等的系统)。本领域技术人员还将理解，实际上表示两个或更多个可选择的术语的任何转折性词语和/或短语，无论是在说明书、权利要求还是附图中，都应被理解为考虑了包括一个术语、术语中的任一个、或两个术语的可能性。

此外，当本公开内容的特征或方面根据马库什组来描述时，本领域技术人员将认识到，本公开内容从而还根据马库什组的任何单独的成员或成员的子组来描述。

如将被本领域技术人员所理解的，出于任何和所有的目的，诸如在提供书面描述的方面，本文公开的所有范围还涵盖任何和所有可能的子范围和其子范围的组合。任何所列出的范围可以容易地被认识为充分地描述且能够使相同的范围被分解成至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性实例，本文讨论的每个范围可以容易地被分解成下三分之一、中间的三分之一和上三分之一等。如还将被本领域技术人员所理解的，所有措辞诸如“多达(up to)”、“至少”、“大于”、“小于”及类似措辞包括所列举的数值并且指的是如上文讨论的随后可以被分解成子范围的范围。最后，如将被本领域技术人员所理解的，范围包括每个单独的成员。因此，例如，具有1个-3个项的组指的是具有1个、2个或3个项的组。类似地，具有1个-5个项的组指的是具有1个、2个、3个、4个或5个项的组等等。

虽然多个方面和实施方案已经在本文中公开，但是其他的方面和实施方案对于本领域技术人员来说将是明显的。本文公开的多个方面和实施方案是为了说明的目的并且不意图是限制性的，其中真正的范围和精神通过所附权利要求指示。

Claims (51)

1.一种用于治疗非肝纤维化的方法，包括向有相应需要的受试者施用包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，所述芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的所述芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是患有非肝纤维化的受试者。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，包括减少所述受试者的非肝纤维化的量。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述受试者的非肝纤维化的所述量减少了5％、10％、20％或更多。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，包括减少所述受试者的非肝纤维化的形成。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述受试者的非肝纤维化的所述形成减少了5％、10％、20％或更多。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述非肝纤维化包括肺、肾脏、心脏、皮肤、眼睛、胃肠道、腹膜、骨髓、肌肉、血管、脉管系统或其任何组合的纤维化。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是患有纤维化紊乱的受试者，所述纤维化紊乱选自由以下组成的组：特发性肺纤维化(IPF)、心脏纤维化、真皮纤维化、肾纤维化或其组合。

9.一种用于预防或延迟纤维化的发作的方法，包括向有相应需要的受试者施用包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，所述芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的所述芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是处于发展纤维化的风险的受试者。

11.根据权利要求9-10中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是没有纤维化进展的受试者。

12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，与未经治疗的受试者相比，所述受试者的所述发展纤维化的风险被降低了至少5％、10％、20％或更多。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的方法，所述纤维化的发作在所述受试者中被延迟至少一个月、一年或更长时间。

14.根据权利要求9-13中任一项所述的方法，包括减少纤维化形成，其中与未经治疗的受试者相比，所述纤维化形成在所述受试者中被减少至少一个月、一年或更长时间。

15.一种用于减少纤维化或逆转纤维化的方法，包括向有相应需要的受试者施用包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的组合物，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，所述芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的所述芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是患有纤维化的受试者。

17.根据权利要求9-16中任一项所述的方法，包括抑制所述受试者的纤维化形成。

18.根据权利要求9-17中任一项所述的方法，其中所述纤维化是非肝纤维化。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述非肝纤维化包括肺、肾脏、心脏、皮肤、眼睛、胃肠道、腹膜、骨髓、肌肉、血管、脉管系统或其任何组合的纤维化。

20.根据权利要求9-17中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是患有纤维化紊乱的受试者，所述纤维化紊乱选自由以下组成的组：肺纤维化、心脏纤维化、真皮纤维化、肾纤维化、肝纤维化或其组合。

21.根据权利要求9-17中任一项所述的方法，其中所述有相应需要的受试者是患有特发性肺纤维化(IPF)的受试者。

22.根据权利要求9-17中任一项所述的方法，其中所述纤维化是肝纤维化。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述肝纤维化是肝硬化。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述肝硬化与病毒性肝炎、血吸虫病和慢性酒精中毒相关。

25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述式L的环孢菌素类似物是CRV431：

26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述组合物包含治疗或预防有效量的式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。

27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述非肝纤维化或纤维化由治疗剂、损伤或其组合诱导。

28.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述非肝纤维化或纤维化与在创伤、炎症、组织修复、免疫反应、细胞增殖、瘤形成、其组合之后发生的细胞外基质成分的积聚相关。

29.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述非肝纤维化或纤维化与主要器官疾病、纤维增生性紊乱、与创伤相关的瘢痕形成或其组合相关。

30.根据权利要求9-26中任一项所述的方法，其中所述纤维化与间质性肺病、肝硬化、非酒精性脂肪肝病、非酒精性脂肪性肝炎、肾脏疾病、心脏或血管疾病、眼疾病、全身和局部硬皮病、瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、动脉粥样硬化、再狭窄、掌腱膜挛缩、手术并发症、化疗药物诱导的纤维化、辐射诱导的纤维化、意外损伤和烧伤、腹膜后纤维化、腹膜纤维化/腹膜瘢痕形成或其组合相关。

31.根据权利要求30所述的方法，其中与间质性肺病相关的所述纤维化是结节病、矽肺、药物反应、感染、胶原血管疾病、类风湿性关节炎、系统性硬化症、硬皮病、肺纤维化、特发性肺纤维化、普通型间质性肺炎、间质性肺病、隐源性纤维化肺泡炎、闭塞性细支气管炎、支气管扩张或其组合。

32.根据权利要求9-31中任一项所述的方法，包括与未经治疗的受试者相比，将所述受试者的纤维化形成减少至少5％、10％、20％、50％、70％、90％或更多。

33.根据权利要求9-31中任一项所述的方法，包括与未经治疗的受试者相比，延迟所述受试者的纤维化形成。

34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物。

35.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。

36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所述组合物包含一种或更多种药学上可接受的赋形剂。

37.根据权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述组合物包含一种或更多种另外的治疗剂。

38.根据权利要求1-36中任一项所述的方法，还包括向所述有相应需要的受试者施用一种或更多种另外的治疗剂。

39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述一种或更多种另外的治疗剂包括另外的抗纤维化剂。

40.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述一种或更多种另外的治疗剂包括II型干扰素受体激动剂、吡非尼酮和吡非尼酮类似物、尼达尼布和尼达尼布类似物、抗血管生成剂、抗炎剂、IL-1拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、血管紧张素受体阻断剂和醛固酮拮抗剂、丝裂霉素C(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、腺苷酸环化酶活化剂、β-肾上腺素受体激动剂、类黄酮、肥大细胞稳定剂、磷酸二酯酶抑制剂、原花青素或其组合。

41.根据权利要求37-40中任一项所述的方法，其中所述一种或更多种另外的治疗剂中的至少一种与所述组合物被共同施用至所述受试者。

42.根据权利要求37-40中任一项所述的方法，其中所述一种或更多种另外的治疗剂中的至少一种在施用所述组合物之前、在施用所述组合物之后或两者被施用至所述受试者。

43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中所述组合物通过静脉内施用、口服施用、肠胃外施用被施用至所述受试者。

44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述组合物呈粉末、丸剂、片剂、微片剂、小丸、微丸、胶囊、含有微片剂的胶囊、液体、气溶胶或纳米颗粒的形式。

45.根据权利要求1-44中任一项所述的方法，其中所述组合物以从10mg至250mg的所述环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的有效日剂量被施用至所述受试者。

46.一种药物组合物，包含式L的环孢菌素类似物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，用于在预防或治疗纤维化中使用，或用于在预防或减少纤维化形成中使用，或用于在逆转纤维化中使用，或用于减少纤维化的量，或用于延迟纤维化的发作，

其中：

a.R’是H或乙酰基；

b.R1是长度为从2个至15个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族碳链；

c.R2选自由以下组成的组：

i.H；

ii.未被取代的、N-取代的或N,N-二取代的酰胺；

iii.N-取代的或未被取代的酰基保护的胺；

iv.N-取代的或未被取代的胺；

v.羧酸；

vi.腈；

vii.酯；

viii.酮；

ix.羟基烷基、二羟基烷基、三羟基烷基或多羟基烷基；和

x.被取代的或未被取代的芳基；

xi.饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链，所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链任选地包含选自由以下组成的组的取代基：氢、酮、羟基、腈、羧酸、酯、1,3-二氧戊环、卤素和氧代；

xii.芳香族基团，所述芳香族基团包含选自由以下组成的组的取代基：卤素、酯和硝基；和

xiii.(xi)的所述饱和或不饱和的直链或支链的脂肪族链和(xii)的所述芳香族基团的组合；以及

d.R23是饱和或不饱和的直链或支链的任选地被取代的脂肪族碳链。

47.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述环孢菌素类似物是CRV431：

48.根据权利要求46所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于静脉内施用、口服施用或肠胃外施用。

49.根据权利要求46-48中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物呈粉末、丸剂、片剂、微片剂、小丸、微丸、胶囊、含有微片剂的胶囊、液体、气溶胶或纳米颗粒的形式。

50.一种试剂盒，包含：

根据权利要求46-49中任一项所述的药物组合物；以及

标签，其中所述标签指示以下中的一种或更多种：

(a)所述试剂盒用于预防或治疗纤维化，

(b)所述试剂盒用于减少或抑制纤维化形成，

(c)所述试剂盒用于逆转纤维化，

(d)所述试剂盒用于减少纤维化的量，以及

(e)所述试剂盒用于延迟纤维化的发作。

51.根据权利要求50所述的试剂盒，还包含用于识别处于发展纤维化的风险的受试者的使用说明、用于识别患有纤维化的受试者的使用说明或两者。

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