CN115420838A - 一种氰化物衍生化检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种氰化物衍生化检测方法，其包括如下步骤：准备对照品溶液和供试品溶液；将衍生试剂与含有设定含量的氰化物溶液混合，在室温、缓冲盐条件下进行反应，得到对照品溶液；将衍生试剂与供试品溶液混合，在室温、缓冲盐条件下进行反应，得到供试品溶液；所述衍生试剂为将4‑甲醛吡啶溶于有机溶剂中得到；采用液相色谱‑质谱联用仪，对对照品溶液、供试品溶液分别进行分析，记录色谱图，结合对照品溶液中的氰化物含量，根据峰面积外标法计算2‑羟基‑(吡啶‑4‑基)乙腈的含量，从而得到供试品中氰化物的含量。采用本发明的技术方案，反应简单、快速，且衍生产物在LC‑MS中具有很强的响应，能够避免干扰，灵敏度高。

Description

一种氰化物衍生化检测方法
技术领域
本发明属于氰化物检测技术领域，尤其涉及一种氰化物衍生化检测方法。
背景技术
氰化物是含有氰基的一类化合物总称，属于剧毒物，根据氰基结合的化学键和性质的不同，可分为无机氰化物和有机氰化物，一般将无机氰化物称为氰化物(cyanides)，而有机氰化物称为腈(nitriles)。氰化物作为剧毒物质，能够通过结合细胞色素氧化酶的Fe(III)来抑制细胞呼吸，非常少量就可抑制金属酶和非金属酶，引起血管、胃肠道、视觉、内分泌、中枢神经和新陈代谢系统的疾病。氰化物广泛用于工业，一些国家已制定法规以确保最低质量标准。而某些药物合成工艺亦会使用氰化物作为原料进行反应，因此，必须严格控制此类药物中氰化物的含量。随着法规的健全，国家药监部门对毒性杂质的监管要求越来越高。近年来，由于杂质控制不合规而导致药监部门对企业要求补充技术资料的越来越多，因此开发专属性强、灵敏度高的氰化物检测方法对药品质量控制非常关键，对药物申报成功与否也至关重要。
常用的氰化物检测方法有很多，但是各有优缺点，具体分析如下：
(1)衍生化分光光度法：主要用于水中氰化物检测，灵敏度、专属性均较差，无法达到药物中检测限度要求。
(2)离子色谱法：检测灵敏度低，受样品基质中共存离子的干扰和仪器设备的限制较大。
(3)顶空气相色谱质谱联用法：需将氰根离子转化为氢氰酸，氢氰酸挥发性强、分子量小，其质谱特征性差，且有一定的毒害性。
发明内容
针对以上技术问题，本发明公开了一种氰化物衍生化检测方法，方法简单，检测快速，灵敏度高。
对此，本发明采用的技术方案为：
一种氰化物衍生化检测方法，其包括如下步骤：
步骤S1，准备对照品溶液和供试品溶液；
所述对照品溶液采用如下步骤配制得到：将衍生试剂与含有设定含量的氰化物溶液混合，在室温、缓冲盐条件下进行反应；
所述供试品溶液采用如下步骤配制得到：将衍生试剂与供试品溶液混合，在室温、缓冲盐条件下进行反应；
其中，所述衍生试剂为将4-甲醛吡啶溶于有机溶剂中得到；
步骤S2，采用液相色谱-质谱联用仪(HPLC/MS)，对对照品溶液、供试品溶液分别进行分析，记录色谱图，结合对照品溶液中的氰化物含量，根据峰面积外标法计算2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈的含量，从而得到供试品中氰化物的含量。
采用此技术方案，衍生试剂采用4-甲醛吡啶，利用的衍生反应如下：
Figure BDA0003815443390000021
该衍生反应简单、快速，且得到的衍生产物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈在HPLC/MS中具有很强的响应，简化了氰化物的测试方法，提高了检测氰化物的灵敏度。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中，所述衍生试剂中，所述4-甲醛吡啶的浓度为0.5-20mg/ml。优选地，所述衍生试剂中，所述4-甲醛吡啶的浓度为5-10mg/ml。更优选地，所述衍生试剂中，所述4-甲醛吡啶的浓度为10mg/ml。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中，所述缓冲盐条件为1-50mM的乙腈-磷酸盐缓冲溶液。优选地，所述磷酸盐缓冲溶液浓度为10-20mM。更优选地，所述磷酸盐缓冲溶液浓度为20mM。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.0。优选地，所述磷酸盐缓冲溶液溶液的pH值为6.5、7.0或8.0。
作为本发明的进一步改进，所述有机溶剂包括二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、乙腈中的至少一种。
作为本发明的进一步改进，步骤S1中，所述对照品溶液采用平行配制至少2份；步骤S2中，将平行配制的至少2份对照品溶液分别通过液相色谱-质谱联用仪并记录色谱图，供试品中氰化物含量采用如下公式计算得到：
Figure BDA0003815443390000031
其中，Ai为供试品溶液中测得待测物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈的峰面积；
AS为至少2份对照品溶液中测得的待测物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈峰面积的平均值；
WT为供试品液体的称样质量；
WS为配制对照品溶液所称取的氰化物溶液中氰化物的质量；
DT为供试品溶液的稀释倍数；
DS为对照品溶液的稀释倍数。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱填料类型为C18柱、C8柱、氰基柱、氨基柱、苯基柱或五氟苯基柱。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱长度为100mm、150mm或250mm。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱粒径为2.7μm、3μm、3.5μm或5μm。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱内径为2.1mm、3.0mm或4.6mm。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱包括但不限于ACE Excel 3C18-PFP(100×3.0mm，3μm)、ACE Excel 3C18-PFP(100×4.6mm，3μm)、ACEExcel 3C18-PFP(150×4.6mm，3μm)、ACE Excel 3C18(100×4.6mm，3μm)、Xbridge BEH C18(100×4.6mm，2.5μm)、EclipsePlusC18(100×4.6mm，3.5μm)。
作为本发明的进一步改进，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱为ACE Excel3C18-PFP(100×3.0mm，3μm)、ACE Excel 3 C18-PFP(100×4.6mm，3μm)或ACE Excel3C18-PFP(150×4.6mm，3μm)色谱柱。
作为本发明的进一步改进，步骤S2中，HPLC-MS法中采用HPLC液相色谱仪，检测器为单重四极杆质谱仪或三重四级杆质谱仪，采用反相分配色谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，质谱定量离子为135.1。
作为本发明的进一步改进，所述的HPLC-MS仪器为Agilent 1260/6130B，包括在线真空脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、单重四极杆检测器。
作为本发明的进一步改进，步骤S2中，液相色谱-质谱的条件为：以0.1％甲酸(含10mM甲酸铵水溶液)-乙腈为流动相，柱温20～35℃，流速0.2ml/min～0.6ml/min，进样量为1μL～5μL，质谱定量离子为135.1。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
采用本发明的技术方案，利用在磷酸盐缓冲溶液存在的条件下，衍生试剂4-甲醛吡啶与氰化物生成产物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈，通过对2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈进行测定，从而检测氰化物，该反应简单、快速，且衍生产物在LC-MS中具有很强的响应，能够避免药物或其中间体本身带来的基质干扰，检测限约7.5ng/ml，简化了氰化物的测试方法，并提高了检测氰化物的灵敏度和专属性。
附图说明
图1是本发明实施例的线性验证实验的线性回归方程图。
具体实施方式
下面对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明。
一种氰化物衍生化检测方法，具体包括如下内容：
仪器：液相色谱-质谱联用仪，十万分之一分析天平；
试剂：乙腈(ACN)，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，二甲亚砜(HPLC)，4-甲醛吡啶(99％)；
对照品：水中氰(50μg/ml)，结构式：
Figure BDA0003815443390000041
衍生剂：4-甲醛吡啶，结构式：
Figure BDA0003815443390000042
衍生反应：
Figure BDA0003815443390000043
1、溶液配制
衍生试剂：精密称定100mg 4-甲醛吡啶，至10ml容量瓶中，用二甲亚砜(DMSO)溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
空白溶液：20mM的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)。
空白衍生溶液：取2.0ml空白溶液，再加入2.0ml衍生试剂至5ml EP管中，摇匀后室温放置30min后即得。
氰化物储备液：移取1.0ml水中氰(50μg/ml)至10ml容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀即得。
对照品储备液：移取1.0ml氰化物储备液1至25ml容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀即得。
对照品溶液：取2.0ml对照品储备液，再加入2.0ml衍生试剂至5ml EP管中，摇匀后室温放置30min后即得。
供试品溶液：取供试品约200mg，精密称定，至5ml EP管中，再加入2.0ml衍生试剂，再加入2.0ml空白溶液，摇匀后室温放置30min即得。
2、方法参数，如下表：
Figure BDA0003815443390000051
下面通过具体的实施例进行说明。
实施例1
枸橼酸托法替尼中氰化物残留方法验证。
1、仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：十万分之一分析天平，液相-质谱联用(Agilent 1260A-6130B)；
溶剂：磷酸二氢钠(AR)，磷酸氢二钠(AR)，乙腈(HPLC)，二甲亚砜(HPLC)，4-甲醛吡啶(99％)；
对照品：水中氰(50μg/ml)；
供试品：枸橼酸托法替尼。
2、溶液配制
衍生试剂：取4-甲醛吡啶约100mg，精密称定，至10ml容量瓶中，用二甲亚砜(DMSO)溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
空白溶液：20mM的磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0)；
空白衍生溶液：取2.0ml空白溶液，再加入2.0ml衍生试剂至5ml EP管中，摇匀后室温放置30min后即得；
氰化物储备液：移取1.0ml水中氰(50μg/ml)至10ml容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀即得；
对照品储备液：移取1.0ml氰化物储备液1至25ml容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀即得；
对照品溶液：取2.0ml对照品储备液，再加入2.0ml衍生试剂至5ml EP管中，摇匀后室温放置30min后即得；
供试品溶液：取供试品约200mg，精密称定，至5ml EP管中，再加入2.0ml衍生试剂，再加入2.0ml空白溶液，摇匀后室温放置30min即得。
3、系统适用性实验
(1)溶液配制：
空白溶液：配制方法同上，配制1份；
对照品溶液：配制方法同上，配制1份；
(2)操作
待系统平衡后，取空白溶液进样1针，对照品溶液6份各进样1针，记录色谱图。报告对照品溶液连续进样6针的待测物的峰面积、峰面积均值及其RSD值。
(3)结果，如表1所示。
表1 系统适用性结果
Figure BDA0003815443390000071
结论：对照品溶液连续进样6针2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈峰面积的RSD为2.87％，符合要求。系统适用性符合检测要求。
4、专属性实验
(1)溶液配制：
空白溶液：配制方法同上，配制1份；
对照品溶液：配制方法同上，配制1份；
供试品溶液：配制方法同上，配制1份；
对照品储备液：配制方法同上，配制1份；
供试品加标溶液：取供试品约200mg，精密称定，至5ml EP管中，加入2.0ml衍生试剂，再加入2.0ml对照品储备液，摇匀后室温放置30min即得。
(2)操作
在系统适用性合格的前提下，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，每份各进1针，记录色谱图。报告空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中待测杂质的保留时间、峰面积及与邻近峰的分离度。
(3)结果，如表2所示。
表2 专属性结果
Figure BDA0003815443390000072
结论：
1)空白溶液对对照品溶液和供试品溶液中各待测杂质无干扰；
2)对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中各待测杂质峰无邻近峰(即满足≥1.5)；
3)供试品溶液或供试品加标溶液中各待测杂质峰保留时间与对照品溶液一致；
4)与供试品溶液相比，供试品加标溶液中各待测杂质的峰面积有增加，方法专属性良好。
5、分析重复性实验
(1)溶液配制：
分析重复性溶液：配制方法同实施例专属性中的供试品加标溶液，平行配制6份；
(2)操作
根据测定方法，取6份分析重复性溶液，各进样1针，根据系统适用性中对照品溶液峰面积的平均值计算6份分析重复性溶液中待测物的含量。报告待测物峰面积、含量单值、Mean±SD、RSD值及95％置信区间。
(3)结果
表3 分析重复性结果
Figure BDA0003815443390000081
可接受标准：
6份分析重复性溶液中待测物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈含量的RSD≤10.0％。
结论：
6份分析重复性溶液中，2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈含量的RSD值为4.31％(≤10.0％)，符合要求。
6、检测限实验
(1)溶液配制：
空白溶液：配制方法同上，配制1份；
检测限储备液：移取1.0mL对照品储备液至20ml容量瓶中，加入空白溶液稀释至刻度，摇匀即得。
检测限溶液：分别移取2.0ml衍生试剂和2.0ml检测限储备液，置于5ml EP管中，室温反应30min后即得。
(2)操作
在系统适用性合格的前提下，取空白溶液进样1针，检测限溶液3份各进1针，记录色谱图。报告检测限溶液待测杂质的峰面积、信噪比(S/N)；计算待测杂质检测限浓度及该浓度相当于供试品溶液浓度的百分比。
(3)结果如表4所示。
表4 检测限结果
Figure BDA0003815443390000091
结论：
检测限溶液连续进样3次2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈峰信噪比最小值为3.2(≥3)；2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈的检测限浓度水平为0.1ppm。
7、定量限实验
(1)溶液配制：
空白溶液：配制方法同上，配制1份；
定量限储备液：移取1.5mL对照品储备液至10ml容量瓶中，加入空白溶液稀释至刻度，摇匀即得。
定量限溶液：分别移取2.0ml衍生试剂和2.0ml定量限储备液，置于5ml EP管中，室温反应30min后即得。
(2)操作
在系统适用性合格的前提下，取空白溶液进样1针，定量限溶液3份各进1针，记录色谱图。报告定量限溶液待测杂质的峰面积、信噪比(S/N)；计算待测杂质定量限浓度及该浓度相当于供试品溶液浓度的百分比。
(3)结果，如表5所示。
表5 定量限结果
Figure BDA0003815443390000101
可接受标准：
1)限溶液连续进样3次待测物信噪比≥10；
2)限溶液连续进样3次待测物峰峰面积的RSD值≤15.0％；
结论：
1)限溶液连续进样3次2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈信噪比最小值为12.3(≥10)，符合要求；
2)溶液连续进样3次2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈峰面积的RSD值为1.60％(≤15.0％)，符合要求；方法定量限满足检测要求。
3)羟基-(吡啶-4-基)乙腈的定量限浓度水平为0.015μg/ml(0.3ppm)。
8、线性及范围实验
(1)溶液配制：
空白溶液、氰化物储备液、对照品储备液，对照品溶液：配制方法同前。
各浓度线性溶液：取2.0ml衍生试剂置于5ml EP管中，平行配制5份；按下表分别移取2.0ml不同浓度水平的线性溶液于上述5ml EP管中，室温反应30min，每个浓度配制1份，具体参考表6。
表6 线性溶液配制
浓度水平 LOQ％ 50％ 80％ 100％ 150％
氰化物储备液(mL) N/A 0.5 0.8 1 1.5
对照品储备液(mL) 1.5 N/A N/A N/A N/A
容量瓶(mL) 10 25 25 25 25
(2)操作
待系统适用性合格后，取空白溶液进样1针，取各浓度水平下线性溶液，依次从低浓度到高浓度，每个浓度进样2次，记录色谱图。以各待测物峰面积平均值对其浓度作一元线性回归，分别报告待测物的线性方程、线性相关系数r、残差平方和、Y轴截距、Y轴截距占100％浓度比值的绝对值、Y轴截距的95％置信区间，并绘出线性图谱。
(3)结果，如表7所示。
表7 线性结果
Figure BDA0003815443390000111
通过上述结果，可以得到图1的线性分析图，其中相关系数r为0.9980，y轴截距1069.2052(0.09％，占100％浓度水平)，得到线性回归方程为y＝356361.5053x+1069.2052。
可接受标准：
1)待测物的线性相关系数r≥0.990；
2)待测物的Y轴截距的绝对值与各自100％限度浓度对应的峰面积比值≤10.0％。
结论：
1)羟基-(吡啶-4-基)乙腈线性相关系数r为0.9980(≥0.990)，符合要求；
2)羟基-(吡啶-4-基)乙腈的Y轴截距的绝对值与100％限度浓度对应的峰面积比值为0.09％(≤10.0％)，符合要求。
总体来说，本方法2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈在LOQ至限度浓度的150％内线性良好。
9、准确度实验
(1)溶液配制：
空白溶液、氰化物储备液、对照品储备液：配制方法同前，各配制1份；
供试品溶液：配制方法同前，配制2份；
准确度溶液：取供试品约200mg，精密称定，至5ml EP管中，加入2.0ml下表中的溶液，再各加入2.0ml衍生试剂，摇匀后室温放置30min，每个浓度配制3份，具体详见表8。
表8 准确度溶液配制
LOQ加标溶液 100％加标溶液 150％加标溶液
氰化物储备液1(mL) N/A 1 1.5
对照品储备液(ml) 1.5 N/A N/A
容量瓶(mL) 10 25 25
(2)操作
待系统适用性合格后，取空白溶液进样1针，取2份供试品溶液各进1针，各浓度水平下准确度溶液分别3份各进样1针，记录色谱图。计算并报告9份样品的各个待测物回收率单值，平均回收率(n＝9)的95％置信区间。
按照以下公式分别计算加标前和加标后供试品溶液中各待测物含量、回收率：
Figure BDA0003815443390000121
理论量＝CS×V
Figure BDA0003815443390000122
Figure BDA0003815443390000123
式中：CS为供试品加标溶液中加入的待测物储备液的浓度，mg/mL；
V为各供试品加标溶液中加入的待测物储备液的体积，mL；
CS+T为各供试品加标溶液中测得的待测物残留量，ppm；
Ci为供试品溶液中测得的待测物残留量，ppm；
Figure BDA0003815443390000124
为供试品溶液中测得的待测物残留量的平均值，ppm；
Ai为供试品溶液中待测物峰面积；
AS为6针对照溶液中待测物平均峰面积；
AS+T为各供试品加标溶液中待测物的峰面积；
WT为供试品溶液中供试品的称样量，mg；
WS为对照溶液中待测物的称样量，mg；
WS+T为各供试品加标溶液中供试品的称样量，mg；
DT为供试品溶液的稀释倍数；
DS为对照溶液的稀释倍数；
DS+T为各供试品加标溶液中供试品的稀释倍数。
(3)结果，如表9所示。
表9 准确度结果
Figure BDA0003815443390000131
可接受标准：各浓度下，待测物回收率单值在70.0％～130.0％；
结论：在限度浓度的LOQ，100％，150％下，2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈回收率单值范围为83.6％～114.6％(在70.0％～130.0％之间)符合要求；方法准确度良好。
实施例2
恩他卡朋中间体中氰化物残留含量测定。
1、仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：液相色谱-质谱联用仪，十万分之一分析天平；
试剂：N,N-二甲基甲酰胺(DMF，HPLC)，磷酸二氢钠，氢氧化钠，4-甲醛吡啶(AR)；
对照品：水中氰(50μg/ml)；
供试品：恩他卡朋中间体。
2、溶液配制
衍生试剂：取4-甲醛吡啶约100mg，精密称定，至10ml容量瓶中，用DMF溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
pH 6.5磷酸盐缓冲溶液：10mM的磷酸二氢钠溶液中加入适量10mM氢氧化钠溶液调节pH至6.5；
空白溶液：2.0ml pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液加2.0ml衍生试剂；
氰化物储备液：移取1ml水中氰(50μg/ml)至10ml容量瓶中，用pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀即得；
对照品储备液：移取1.0ml氰化物储备液至25ml容量瓶中，用pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀即得；
对照品溶液：取2.0ml对照品储备液，再加入2.0ml衍生试剂至5ml EP管中，室温放置30min后即得；
供试品溶液：取供试品约100mg，精密称定，至5ml EP管中，加入2.0ml pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液，再加入2.0ml衍生试剂，摇匀后室温放置30min。
3、操作
待系统平衡后，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，空白溶液进1针，对照溶液进3针，供试品溶液进2针，记录色谱图。
含量计算公式：
Figure BDA0003815443390000141
式中：Ai为供试品溶液中测得待测物的峰面积；
AS为对照品溶液中测得待测物峰面积的平均值；
WT为供试品溶液的称样量，mg；
WS为配制对照品溶液所称取待测物的质量，mg；
DT为供试品溶液的稀释倍数；
DS为对照品溶液的稀释倍数。
4、检测结果
表10 氰化物含量检测结果
Figure BDA0003815443390000151
5、结论
恩他卡朋中间体中氰化物未检出(限度为4ppm，检测限为0.1ppm)。
实施例3
瑞德西韦中氰化物残留含量测定。
1、仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：液相色谱-质谱联用仪，十万分之一分析天平；
试剂：二甲亚砜(HPLC)，磷酸二氢钠，氢氧化钠，4-甲醛吡啶(99％)；
对照品：水中氰(50μg/ml)。
供试品：瑞德西韦。
2、溶液配制
衍生试剂：取4-甲醛吡啶约100mg，精密称定，至10ml容量瓶中，用DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
pH 8.0磷酸盐缓冲溶液：10mM的磷酸二氢钠溶液中加入适量10mM氢氧化钠溶液调节pH至8.0；
空白溶液：1.0ml pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液加1.0ml衍生试剂；
氰化物储备液：移取1.0ml水中氰(50μg/ml)至10ml容量瓶中，用pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀即得；
对照品储备液：移取1.0ml氰化物储备液至25ml容量瓶中，用pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度，摇匀即得；
对照品溶液：取1.0ml对照品储备液，再加入1.0ml衍生试剂至5ml EP管中，室温放置40min后即得；
供试品溶液：取供试品约200mg，精密称定，至5ml EP管中，加入1.0ml pH 8.0的磷酸盐缓冲溶液，再加入1.0ml衍生试剂，摇匀后室温放置40min。
3、操作
待系统平衡后，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，空白溶液进1针，对照品溶液进3针，供试品溶液进2针，记录色谱图，根据峰面积归一化法计算含量。
4、检测结果
表11 氰化物含量检测结果
Figure BDA0003815443390000161
5、结论
瑞德西韦样品中氰化物的结果均小于LOD(限度为1ppm，检测限为0.2ppm)。
通过上述实施例的实验结果可见，采用本发明技术方案的方法进行氰化物检测，反应简单、快速，操作简单，且检测氰化物的灵敏度高。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种氰化物衍生化检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：
步骤S1，准备对照品溶液和供试品溶液；
所述对照品溶液采用如下步骤配制得到：将衍生试剂与含有设定含量的氰化物溶液混合，在室温、缓冲盐条件下进行反应；
所述供试品溶液采用如下步骤配制得到：将衍生试剂与供试品溶液混合，在室温、缓冲盐条件下进行反应；
其中，所述衍生试剂为将4-甲醛吡啶溶于有机溶剂中得到；
步骤S2，采用液相色谱-质谱联用仪，对对照品溶液、供试品溶液分别进行分析，记录色谱图，结合对照品溶液中的氰化物含量，根据峰面积外标法计算2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈的含量，从而得到供试品中氰化物的含量。
2.根据权利要求1所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S1中，所述衍生试剂中，所述4-甲醛吡啶的浓度为0.5-20mg/ml。
3.根据权利要求2所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：所述4-甲醛吡啶的浓度为10mg/ml。
4.根据权利要求2所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S1中，所述缓冲盐条件为1-50mM的乙腈-磷酸盐缓冲溶液。
5.根据权利要求4所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S1中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.0。
6.根据权利要求4所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：所述有机溶剂包括二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、乙腈中的至少一种。
7.根据权利要求1～6任意一项所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S1中，所述对照品溶液采用平行配制至少2份；步骤S2中，将平行配制的至少2份对照品溶液分别通过液相色谱-质谱联用仪并记录色谱图，供试品中氰化物含量采用如下公式计算得到：
Figure FDA0003815443380000021
其中，Ai为供试品溶液中测得待测物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈的峰面积；
AS为至少2份对照品溶液中测得的待测物2-羟基-(吡啶-4-基)乙腈峰面积的平均值；
WT为供试品液体的称样质量；
WS为配制对照品溶液所称取的氰化物溶液中氰化物的质量；
DT为供试品溶液的稀释倍数；
DS为对照品溶液的稀释倍数。
8.根据权利要求1～6任意一项所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S2中，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料。
9.根据权利要求8所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S2中，所述液相色谱-质谱联用仪中的色谱柱为ACE Excel 3C18-PFP色谱柱。
10.根据权利要求9所述的氰化物衍生化检测方法，其特征在于：步骤S2中，液相色谱-质谱的条件为：以0.1wt.％甲酸-乙腈为流动相，柱温20～35℃，流速0.2ml/min～0.6ml/min，进样量为1μL～5μL，质谱定量离子为135.1；其中0.1wt.％甲酸为含10mM的甲酸铵水溶液。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117074578A (zh) * 2023-10-16 2023-11-17 瀚盟测试科技（天津）有限公司 一种2-（甲氨基）-乙醇的lc-ms/ms定量检测方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63295548A (ja) * 1987-05-27 1988-12-01 Wako Pure Chem Ind Ltd 新規なピレン誘導体及びこれをラベル化剤として用いる高速液体クロマトグラフィ−
CN106770729A (zh) * 2016-11-30 2017-05-31 江南大学 一种检测游离态及结合态微量氰化物的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63295548A (ja) * 1987-05-27 1988-12-01 Wako Pure Chem Ind Ltd 新規なピレン誘導体及びこれをラベル化剤として用いる高速液体クロマトグラフィ−
CN106770729A (zh) * 2016-11-30 2017-05-31 江南大学 一种检测游离态及结合态微量氰化物的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SAMIK NANDAET AL.: "A new (R)-hydroxynitrile lyase from Prunus mume: asymmetric synthesis of cyanohydrins", TETRAHEDRON, vol. 61, pages 10908 - 10916 *
何维为等: "柱前衍生-高效液相色谱法测定酒中的氰化物", 食品与药品, vol. 23, no. 2, pages 128 - 132 *
刘津;冯启国;张杨;赵毅民;: "4-甲基烟腈衍生物的合成研究", 解放军药学学报, vol. 27, no. 04, pages 283 - 285 *
周锡瑞: "O-苯甲酰吡啶甲醛肟衍生物的合成及其季铵化反应", 高等学校化学学报, vol. 5, no. 05, pages 683 - 685 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117074578A (zh) * 2023-10-16 2023-11-17 瀚盟测试科技（天津）有限公司 一种2-（甲氨基）-乙醇的lc-ms/ms定量检测方法
CN117074578B (zh) * 2023-10-16 2024-02-09 瀚盟测试科技（天津）有限公司 一种2-（甲氨基）-乙醇的lc-ms/ms定量检测方法

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