CN115385984A - 一种拟肽类衍生物、制备方法和应用 - Google Patents

一种拟肽类衍生物、制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种拟肽类衍生物或其盐，所述化合物的化学结构式如式(I)所示，所述衍生物为所述化合物的互变异构体、立体异构体、溶剂化物、溶剂化物的盐、代谢产物、代谢前体或前药、药学上可接受的盐或它们的混合物。本发明的拟肽类衍生物或其盐可有效抑制3C样半胱氨酸蛋白酶，可制备为治疗和/或预防H1N1、SARS‑CoV、MERS‑CoV或SARS‑CoV‑2病毒感染疾病的药物。

Description

一种拟肽类衍生物、制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种拟肽类衍生物或其盐、制备方法、药物组合物和应用，尤其涉及一种能抑制3C样半胱氨酸蛋白酶的拟肽类衍生物或其盐、制备方法和应用。
背景技术
SARS-CoV-2是一种高致病性、大规模流行的人畜共患病毒，其感染症状从无症状疾病到中度和重度肺炎，以及危及生命的并发症，包括低氧性呼吸衰竭、急性呼吸窘迫综合征、多系统器官衰竭，并最终出现死亡。伴随着感染人数的增加和疫情的持续，SARS-CoV-2病毒逐渐产生了变异，其中一些变异株的传播能力和致病性明显提高，还有一些毒株出现抗原逃逸现象，这些变异株引起了公共卫生部门和民众的关注。尽管应对普通型的SARS-CoV-2病毒的疫苗已经在各个国家相应地展开接种，但变种毒株因其更具传染性、致重症率，并可能会降低因感染或疫苗所产生的抗体效力，使得全球掀起新的一轮“疫情风暴”。尽管多年来科研工作者们一直致力于抗冠状病毒药物的研究与开发，但是令人遗憾的是目前尚无有效的针对性治疗药。值得注意的是，瑞德西韦被FDA正式批准上市，但是它的临床疗效不显著，对重症患者无效，使得其适用范围受限。2020年11月9日，美国FDA批准了礼来的单抗bamlanivimab的紧急使用授权（EUA），用于治疗成人和儿童中轻至中度COVID-19患者，代表着人们对治疗住院新冠患者方面前进了一小步。 2021年12月22日，美国FDA批准新型COVID-19口服抗病毒候选药物Paxlovid的紧急授权申请（EUA），用于治疗非住院、具有发展成重症疾病高风险的轻中度、12岁及以上儿童和成人COVID-19感染患者。Paxlovid是3CLpro（3C样半胱氨酸蛋白酶，Mpro）抑制剂Nirmatrelvir （PF-07321332）与低剂量利托那韦（Ritonavir）的复方制剂。利托那韦有助于减缓Nirmatrelvir的代谢或分解，使其在体内有效浓度维持较长时间，持久对抗病毒。
和其他冠状病毒一样，SARS-Cov-2进入宿主细胞后会被分解释放出核衣壳和病毒基因组。宿主细胞核糖体将病毒基因组的开放阅读框架（ORF）1a和ORF1b分别翻译成多聚蛋白（polyproteins，PP）pp1a和pp1b，用于编码16个非结构蛋白（nsps），而其余的ORF编码结构蛋白和附属蛋白。3C样半胱氨酸蛋白酶（3CLpro，nsp5，EC 3.4.22.69) 和木瓜样半胱氨酸蛋白酶（PLpro，nsp3，EC3.4.22.46）高度协调，催化PP裂解生成nsp2-16，进而形成复制-转录复合体（RTC）；3CLpro酶活性缺失会导致病毒生命周期停止，因而3CLpro对于病毒的复制和生存至关重要。另外，研究表明3CLpro还可以裂解宿主免疫相关蛋白，比如人先天性免疫分子STING。3CLpro不仅是维持病毒本身复制所必需的，还可以破坏宿主细胞的免疫系统、抑制抗感染免疫应答，造成免疫逃逸。抑制3CLpro不仅可以有效杀死冠状病毒还可以减少感染的宿主细胞内免疫失衡。鉴于3CLpro在冠状病毒的基因复制过程中的重要地位，发展3CLpro抑制剂对冠状病毒会产生强效的抑制或杀伤效果，这使得3CLpro成为抗病毒化学治疗的令人关注的目标。
已报道的3CLpro抑制剂包括肽类抑制剂（参见Kim等（2012）Bioorg. Med. Chem.Lett. 22: 6952-6956; Thibaut等（2012）Biochem. Pharmacol. 83: 185-192; Van 等（2014）Antiviral Res.103:17-24;国际专利申请公布号WO 2005/113580; WO 2006/061714; WO 2017/114509; Zhang等（2020）Science 368：409-412；Dai等（2020）Science368：1331-1335；Qiao等（2021）Science 371：1374-1378；Jacobs等（2012）J. Med. Chem.56：534-546；AkaJi等（2011）J. Med. Chem. 54:7962-7973；Zhang等（2020）J. Med. Chem.63：4562-4578；Hoffman等（2020）J. Med. Chem. 63:12725-12747）和非肽类抑制剂，如杂环酯类（参见Lu等（2006）J. Med. Chem. 49:5154-5161）、吡唑类（参见RamaJayam等（2010）Bioorg. Med. Chem. 18: 7849-7854）、靛红衍生物类（参见Chen等（2005）Bioorg. Med.Chem. Lett.15: 3058-3062; Zhou等（2006）J. Med. Chem.49:3440-3443）以及其他类（参见CN111233649B、CN111920821A、CN11154442A）。
综上所述，本领域迫切需要更加安全、有效、便捷的抗病毒药物。新型抗冠状病毒药物不仅是国际病毒研究的热点，也是我国传染病防治的重要工具。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗冠状病毒的拟肽类衍生物或其盐。
本发明的另一目的是提供一种拟肽类衍生物或其盐制备方法。
本发明的另一目的是提供一种拟肽类化合物或/和衍生物的药物组合物。
本发明的另一目的是提供一种拟肽类衍生物或其盐、药物组合物在制备RNA病毒的3C样半胱氨酸蛋白酶抑制剂中的应用。
本发明的拟肽类衍生物或其盐，所述化合物的化学结构式如式(I)所示，所述衍生物为所述化合物的互变异构体、立体异构体、溶剂化物、溶剂化物的盐、代谢产物、代谢前体或前药、药学上可接受的盐或它们的混合物：
Figure 249181DEST_PATH_IMAGE001
式I中：
A为
Figure 179090DEST_PATH_IMAGE002
，
R1选自C1-6烷基或氘代C1-6烷基。
进一步地，所述的如式I所示化合物为以下任一化合物：
Figure 77776DEST_PATH_IMAGE003
上述的拟肽类衍生物或其盐的制备方法，所述制备方法为：
原料S1与硼氢化钠溶于甲醇中，还原得到化合物S2；化合物S2在四氢呋喃溶液中与苯甲醛反应得到化合物S3；化合物S3与苯基氯化硒、双（三甲基硅烷基）氨基钾反应，得到硒醚中间体S4；化合物S4用过氧化氢氧化，通过Grieco消除得到化合物S5；化合物S5与2,2-二氯丙烷或2,2-二氯氘代丙烷在锌粉、溴化锌、溴化钴和配体的存在下成环得到化合物S6；化合物S6通过氢化铝锂还原得到化合物S7；化合物S7脱去苄基，再用二叔丁基二碳酸酯保护得到化合物S8；将化合物S8的羟基氧化为羧酸得到化合物S9；化合物S9在甲醇溶液中与氯化亚砜反应得到关键中间体S10；化合物S10与N-Boc-L-叔亮氨酸溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲和N,N-二异丙基乙胺条件下缩合得到化合物S11；化合物通过氢氧化锂水溶液水解，再酸化得到化合物S12；化合物S12在盐酸甲醇溶液中脱除保护基得到S13；化合物S13与三氟乙酸乙酯、N,N-二异丙基乙胺在甲醇溶液中反应得到化合物S14；
原料S15与氯甲酸甲酯、溴乙酸乙酯和氨甲醇溶液反应得到化合物S16；化合物S16在碱性条件下关环得到化合物S17；酸性条件下，脱去保护基得到化合物S18；化合物S18与氨甲醇溶液反应得到化合物S19；化合物S19与化合物S14、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲、N,N-二异丙基乙胺在N,N-二甲基甲酰胺中反应，得到化合物S20；化合物S20经伯吉斯试剂脱水得到目标产物(I)。
Figure 896565DEST_PATH_IMAGE004
Figure 906110DEST_PATH_IMAGE005
Figure 877477DEST_PATH_IMAGE006
Figure 291272DEST_PATH_IMAGE007
包含上述拟肽类化合物和/或衍生物以及药学上可接受的载体的药物组合物。
在所述的药物组合物中，拟肽类化合物和/或衍生物的用量可为治疗有效量。
上述拟肽类衍生物或其盐、上述的药物组合物在制备RNA病毒的3C样半胱氨酸蛋白酶抑制剂中的应用。
上述拟肽类衍生物或其盐、上述的药物组合物在制备药物或疫苗佐剂中的应用，所述的药物为用于治疗病毒感染的药物；所述的疫苗佐剂为用于治疗病毒感染的疫苗佐剂；所述病毒感染为H1N1、SARS-CoV、MERS-CoV或SARS-CoV-2中的一种或多种。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
（1）该类小分子及其衍生物对RNA病毒的3C样半胱氨酸蛋白酶具有高效的抑制活性；
（2）该类拟肽类衍生物或其盐和药物组合物应用广泛，可制备为治疗/预防H1N1、SARS-CoV、MERS-CoV或SARS-CoV-2病毒感染疾病的药物，IC50值最优可达到纳摩尔浓度级别；
（3）化合物制备方法易操作，反应底物适用性广。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1：合成化合物1
(1R, 2S, 5S)-N-((S)-1-氰基-2-(2,4-二氧咪唑烷-1-基)乙基)-3-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰氨基)丁酰基)-6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酰胺(1)
Figure 223456DEST_PATH_IMAGE008
Figure 895746DEST_PATH_IMAGE009
Figure 862565DEST_PATH_IMAGE010
步骤一：合成化合物S2
称取化合物S1（5.0 g，35.0 mmol）溶于甲醇（50 mL）中，冰水浴下分批加入硼氢化钠（1.6 g，42.0 mmol），室温搅拌6 h。反应完毕后，滴加饱和氯化铵溶液（10 mL）淬灭，减压除去溶剂，用二氯甲烷（50 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得白色固体S2（3.3 g，85%），产物可直接用于下一步。1H NMR (400 MHz, Methanol-d 4)δ 3.75 (dq, J = 7.8, 5.1 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 11.2, 4.4 Hz, 1H), 3.47 (dd,J = 11.3, 5.6 Hz, 1H), 2.42-2.26 (m, 2H), 2.26-2.15 (m, 1H), 1.93-1.83 (m,1H)。
步骤二：合成化合物S3
称取化合物S2（3.3 g，28.7 mmol）溶于四氢呋喃（50 mL）中，冰水浴下缓慢滴加苯甲醛（2.9 mL，28.7 mmol），室温反应4 h。反应完毕后，滴加饱和氯化铵溶液（50 mL），减压除去溶剂，用乙酸乙酯（50 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析纯化（PE：EA = 6:1）得无色液体S3（5.3 g，91%）。1H NMR (300 MHz,Chloroform-d) δ 7.48-7.41 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 3H), 6.33 (s, 1H), 4.28-4.19(m, 1H), 4.19-4.09 (m, 1H), 3.49 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 2.82 (ddd, J = 17.3,10.1, 9.1 Hz, 1H), 2.56 (ddd, J = 17.3, 10.0, 3.8 Hz, 1H), 2.38 (dddd, J =13.7, 10.2, 7.5, 3.8 Hz, 1H), 1.95 (dtd, J = 13.2, 9.5, 5.3 Hz, 1H)。
步骤三：合成化合物S4
称取化合物S3（5.0 g，24.6 mmol）溶于四氢呋喃（100 mL）中，在-78℃下，氩气氛围中缓慢滴加双（三甲基硅烷基）氨基钾的四氢呋喃溶液（29.5 mL，29.5 mmol），维持-78℃搅拌1 h，升温至-15℃，缓慢滴加苯基氯化硒（5.7 g，29.5 mmol）的四氢呋喃（50 mL）溶液，升温至0℃反应3 h。反应完毕后，滴加饱和氯化铵溶液（30 mL）淬灭，减压除去溶剂，用乙酸乙酯（50 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析（PE：EA = 5:1）得黄色液体S4（6.7 g，76%）。异构体1：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ7.71-7.65 (m, 2H), 7.46-7.42 (m, 2H), 7.37-7.30 (m, 6H), 6.26 (s, 1H), 4.36(t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.15-4.09 (m, 1H), 4.03 (tt, J = 7.8, 5.8 Hz, 1H), 3.08(t, J = 8.1 Hz, 1H), 2.82 (ddd, J = 13.9, 9.5, 7.4 Hz, 1H), 2.04-1.98 (m,1H).异构体2：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.67 (dq, J = 8.0, 1.6 Hz, 2H),7.38-7.32 (m, 4H), 7.30-7.27 (m, 2H), 7.23-7.18 (m, 2H), 6.29 (s, 1H), 4.13(dd, J = 8.2, 6.3 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 7.0, 4.6 Hz, 1H), 3.64 (dq, J = 8.0,6.6 Hz, 1H), 3.43 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 2.56-2.49 (m, 2H)。
步骤四：合成化合物S5
称取化合物S4（6.6 g，18.4 mmol）溶于乙酸乙酯（50 mL）中，冰水浴下滴加30%过氧化氢（9 mL），反应30 min后，分离有机相，用水（50 mL×2），饱和食盐水（50 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析（PE：EA = 3:1）得白色固体S5（3.1 g，85%）。1H NMR (300MHz, Chloroform-d) δ 7.61-7.50 (m, 2H), 7.40 (qd, J = 7.6, 6.6, 3.6 Hz, 3H),7.29 (dd, J = 5.8, 2.0 Hz, 1H), 6.29-6.09 (m, 2H), 4.64 (ddt, J = 8.6, 6.8,1.8 Hz, 1H), 4.36-4.23 (m, 1H), 3.44 (t, J = 8.4 Hz, 1H)。
步骤五：合成化合物S6
称取溴化钴（490 mg，2.2 mmol）、2,6-二[1-(2-叔丁基苯基亚氨基)乙基]吡啶（951 mg，2.2 mmol）于双口瓶中，氩气置换三次，加入四氢呋喃（30 mL）溶解，室温搅拌过夜。再加入锌粉（2.3 g，35.8 mmol）、溴化锌（3.7 g，16.4 mmol），搅拌15 min后，加入化合物S5（3.0 g，14.9 mmol）的四氢呋喃（20 mL）溶液、2,2-二氯丙烷（3.1 mL，29.8 mmol），室温搅拌过夜。反应完毕后，用硅藻土过滤，滤液加入饱和氯化铵（10 mL）和乙酸乙酯（30mL），用乙酸乙酯（30 mL×3）萃取，饱和碳酸钠溶液（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得淡黄色液体（2.3 g，64%）。1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 7.54-7.48 (m, 2H),7.37-7.30 (m, 1H), 7.30-7.24 (m, 2H), 6.26 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 3.78 (d, J =1.0 Hz, 2H), 3.42 (dq, J = 5.8, 0.9 Hz, 1H), 1.54 (s, 1H), 1.32 (t, J = 6.0Hz, 1H), 1.08 (d, J = 14.8 Hz, 6H)。
步骤六：合成化合物S7
称取化合物S6（2.3 g，9.5 mmol）溶于四氢呋喃（50 mL）中，加入氢化铝锂（718mg，18.9 mmol），回流反应4 h。冷却至0℃，缓慢滴加饱和氯化铵溶液（10 mL）淬灭，用乙酸乙酯（40 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得淡黄色液体（1.9 g，88%）。1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 7.33-7.22 (m, 5H), 3.74-3.68 (m,2H), 3.59 (dd, J = 5.6, 2.7 Hz, 2H), 3.02-2.95 (m, 2H), 2.64 (dd, J = 12.4,3.8 Hz, 1H), 1.33 (ddd, J = 4.9, 3.8, 2.0 Hz, 1H), 1.25 (dd, J = 6.4, 4.9 Hz,1H), 1.06 (s, 3H), 1.02 (s, 3H)。
步骤七：合成化合物S8
称取化合物S7（1.9 g，8.2 mmol）溶于甲醇（30 mL）中，加入钯碳（200 mg），氢气置换三次，室温反应6 h后，用硅藻土过滤，减压除去溶剂，将浓缩液用四氢呋喃（20 mL）溶解，加入3N 氢氧化钠水溶液（4 mL），再缓慢滴加二碳酸二叔丁酯（2.1 mL，9.0 mmol），室温反应过夜。反应完毕后，加入乙酸乙酯（20 mL）稀释，分离有机相，用饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析（PE：EA = 1:1）得无色液体S8（1.5 g，77%）。1H NMR(300 MHz, Chloroform-d) δ 3.93 (dt, J = 6.4, 3.1 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 6.0,5.1 Hz, 1H), 3.72-3.64 (m, 1H), 3.62 (dd, J = 12.4, 2.1 Hz, 1H), 3.42 (dd, J= 12.5, 4.0 Hz, 1H), 1.49 (ddd, J = 4.9, 4.0, 2.2 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.33(dd, J = 6.6, 4.9 Hz, 1H), 1.07 (s, 3H), 1.03 (s, 3H)。
步骤八：合成化合物S9
将化合物S8（1.5 g，6.2 mmol）溶于丙酮（100 mL）中，-5℃下缓慢滴加琼斯试剂（27 mL，1.8 M），反应30 min后，加入异丙醇（7 mL）淬灭，用水（100 mL）和乙酸乙酯（100mL）稀释，乙酸乙酯（100 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析（EA）得白色固体S9（1.4 g，86%）。1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 4.51(d, J = 7.5 Hz, 1H), 3.68 (dd, J = 12.5, 2.2 Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 12.4, 4.1Hz, 1H), 1.45 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.15 (ddd, J = 5.5, 4.1,2.2 Hz, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.05 (s, 3H)。
步骤九：合成化合物S10
将化合物S9（1.4 g，5.5 mmol）溶于甲醇（20 mL）中，冰水浴下滴加氯化亚砜（0.6mL，8.3 mmol），回流反应3 h。减压除去溶剂，冰水浴下加入乙醚（30 mL），过滤得白色固体S10（1.1 g，96%）。1H NMR (400 MHz, Deuterium Oxide) δ 4.31 (d, J = 2.0 Hz, 1H),3.85 (s, 3H), 3.73 (dd, J = 12.6, 6.3 Hz, 1H), 3.27 (dd, J = 12.6, 2.0 Hz,1H), 1.99 (dd, J = 7.9, 2.0 Hz, 1H), 1.83 (ddd, J = 8.1, 6.3, 2.0 Hz, 1H),1.06 (d, J = 4.8 Hz, 6H)。
步骤十：合成化合物S11
称取化合物S10（2 g，10 mmol），N-Boc-L-叔亮氨酸（2.3g，10 mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（20 mL）中，0℃下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲（3.7 g，12 mmol）和N,N-二异丙基乙胺（3.3 mL，30 mmol），维持0℃反应3 h。加入饱和氯化铵溶液（20 mL）淬灭，用乙酸乙酯（30 mL×3）萃取，饱和食盐水（30 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制砂，柱层析纯化（PE：EA=10:1）得到白色泡沫状固体化合物S11（2.8 g，75%）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.11 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.46 (s,1H), 4.20 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.99 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.86 (ddd, J =10.2, 3.4, 1.5 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.44 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 1.40 (d, J =9.0 Hz, 10H), 1.02 (d, J = 5.9 Hz, 12H), 0.89 (s, 3H)。
步骤十一：合成化合物S12
将化合物S11（2.8 g，7.3 mmol）溶于四氢呋喃（50 mL）中，0℃下缓慢滴加2M 氢氧化钠溶液（36 mL，73 mmol），室温反应2 h后，加入乙酸乙酯（20 mL），待分层后取水相，加入2M 盐酸溶液（20 mL）调节pH至酸性，过滤，用水（20 mL）洗涤得白色固体化合物5（2.2 g，82%）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 5.22 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.47 (s,1H), 4.23 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.83 (dd, J =10.4, 5.4 Hz, 1H), 1.67 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 1.49 (dd, J = 7.6, 5.3 Hz, 1H),1.39 (s, 9H), 1.05 (s, 3H), 1.00 (s, 9H), 0.90 (s, 3H)。
步骤十二：合成化合物S13
称取化合物S12（2.2 g，6.0 mmol）溶于二氧六环（20 mL）溶液中，0℃下缓慢滴入氯化氢的二氧六环（15 mL，60 mmol）溶液，室温搅拌6 h。停止反应，减压除去溶剂，得白色固体S13（1.7 g，98%），直接用于下步反应。1H NMR (400 MHz, Deuterium Oxide) δ 4.40(d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.63-3.57 (m, 2H), 3.26 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 2.80 (t, J= 7.4 Hz, 1H), 2.66 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 1.53 (dddd, J = 5.5, 3.8, 3.1, 1.6Hz, 1H), 1.47-1.40 (m, 1H), 1.07 (t, J = 1.5 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 1.6 Hz,3H), 1.01 (s, 9H)。
步骤十三：合成化合物S14
称取化合物S13（1.7 g，5.6 mmol）溶于二氯甲烷（20 mL）中，冰水浴下缓慢滴加三乙胺（2.7 mL，19.6 mmol）后搅拌10 min，再缓慢滴加三氟乙酸乙酯（0.8 mL，6.7 mmol），维持冰水浴下反应30 min。用二氯甲烷（20 mL）稀释，用10%的硫酸氢钾溶液（20 mL）、饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得白色固体（2.0 g，98%）。1H NMR (300MHz, Chloroform-d) δ 8.05 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 12.6 Hz, 1H),4.45 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.68-3.58 (m, 2H), 1.53 (dtt, J = 5.6, 3.0, 1.5 Hz,1H), 1.47-1.40 (m, 1H), 1.07 (t, J = 1.5 Hz, 3H), 1.02 (t, J = 1.6 Hz, 3H),0.95 (s, 9H)。
步骤十四：合成化合物S16
将原料S15（5.0 g，19.2 mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（100 mL）中，加入碘化钾（3.5 g，21.1 mmol）、碳酸氢钠（24.2 g，288 mmol）再滴加溴乙酸甲酯（1.8 mL，19.2mmol），室温反应24 h。减压除去溶剂，用四氢呋喃（100 mL）溶解，过滤，滤液移至冰水浴下，加入氯甲酸甲酯（1.5 mL，19.2 mmol）、三乙胺（2.7 mL，19.2 mmol），室温反应24 h。减压除去溶剂，用乙酸乙酯（100 mL）溶解，用10%的柠檬酸（50 mL）、饱和食盐水（50 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，用甲醇溶解，加入氨水（24.6 mL，192 mmol），室温搅拌4 h。减压除去溶剂，柱层析（PE：EA = 1:2）得无色油状液体化合物S16（4.5 g，62%）。1H NMR (300 MHz,Chloroform-d) δ 6.92 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.62 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.68 (dt, J = 8.6, 5.0 Hz, 1H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.69 (s,3H), 3.71-3.60 (m, 2H), 1.40 (s, 18H)。
步骤十五：合成化合物S17
将化合物S16（4.0 g，10.7 mmol）溶于乙醇（80 mL）中，滴加2 N的氢氧化钾溶液（5.4 mL，10.7 mmol），40℃反应2 h后，室温反应24 h，补加2 N的氢氧化钾溶液（2.7 mL，5.3 mmol）,40℃反应2 h。减压除去溶剂，加入乙酸乙酯（50 mL）和10%的柠檬酸溶液（20mL），有机相用饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，柱层析（PE：EA = 1:2）得无色液体化合物S17（1.1 g，30%）。1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.99 (s,1H), 5.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.68 (dt, J = 8.6, 5.2 Hz, 1H), 4.07 (d, J =12.3 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.78-3.66 (m, 2H), 1.40 (s, 18H)。
步骤十六：合成化合物S18
将化合物S17（1.0 g，3.0 mmol）溶于乙酸乙酯（20 mL）中，冰水浴下缓慢滴加氯化氢的乙酸乙酯溶液（10 mL，30 mmol），反应3 h后，减压除去溶剂，得白色固体S18（642 mg，96%）1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 9.01 (s, 1H), 4.06-3.98 (m, 3H), 3.94-3.86 (m, 2H), 3.84 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 13.7, 4.8 Hz, 1H), 3.64(dd, J = 13.7, 4.8 Hz, 1H)。
步骤十七：合成化合物S19
将化合物S18（640 mg，2.9 mmol）溶于甲醇（10 mL）中，滴加氨水（3.6 mL，29mmol），室温反应3 h。减压除去溶剂，得无色液体化合物S19（529 mg，98%）。1H NMR (300MHz, Chloroform-d) δ 9.02 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 8.1Hz, 1H), 4.00 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.93 (tt, J = 6.4, 4.2 Hz, 1H), 3.89 (d,J = 12.5 Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 14.1, 4.2 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 14.2, 4.1Hz, 1H), 3.42 (dd, J = 7.7, 6.4 Hz, 1H), 3.33 (dd, J = 7.6, 6.3 Hz, 1H)。
步骤十八：合成化合物S20
将化合物S19（500 mg，2.7 mmol）、化合物S14（979 mg，2.7 mmol）溶于N,N-二甲基甲酰胺（15 mL）中，0℃下加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲（1.2 g，3.2 mmol）和N,N-二异丙基乙胺（1.2 mL，8.1 mmol），维持0℃反应3 h。加入饱和氯化铵溶液（10 mL）淬灭，用乙酸乙酯（20 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制砂，柱层析纯化（DCM：MeOH = 15:1）得到白色固体化合物S20（589 mg，41%）。1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.99 (s, 1H), 8.05 (d, J = 12.7 Hz,1H), 7.80 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.3 Hz,1H), 4.65-4.55 (m, 2H), 4.41 (dt, J = 9.4, 4.7 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 11.4 Hz,2H), 3.70 (dd, J = 4.6, 2.3 Hz, 2H), 3.69-3.63 (m, 1H), 3.63-3.55 (m, 1H),1.50 (dtq, J = 5.8, 3.0, 1.4 Hz, 1H), 1.37 (ddp, J = 7.6, 5.4, 1.5 Hz, 1H),1.04 (dt, J = 15.0, 1.5 Hz, 6H), 0.95 (s, 9H)。
步骤十九：合成化合物1
将化合物S20（580 mg，1.1 mmol）和伯吉斯试剂（643 mg，2.7 mmol）溶于无水二氯甲烷（10 mL）中，室温反应4 h。加入饱和碳酸氢钠溶液（5 mL）淬灭，用二氯甲烷（20 mL×3）萃取，饱和食盐水（20 mL）洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，制砂，柱层析纯化（DCM：MeOH= 15:1）得到白色固体化合物1（463 mg，82%）。1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.99(s, 1H), 8.05 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.86 (dt, J =9.0, 4.1 Hz, 1H), 4.65-4.53 (m, 2H), 3.98 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 3.79-3.55 (m,4H), 1.50 (dtq, J = 5.8, 3.0, 1.4 Hz, 1H), 1.37 (dddd, J = 7.6, 3.9, 3.0, 1.5Hz, 1H), 1.04 (dt, J = 15.0, 1.5 Hz, 6H), 0.96 (s, 9H). MS (EI, m/z): 515 (M++1)。
实施例2：合成化合物2
采用实施例1类似的合成方法，可以合成得到化合物2，其化学名称为：(1R, 2S,5S)-N-((S) -1- 氰基-2-(2,4-二氧咪唑烷-1-基)乙基)-3-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰氨基) 丁酰基) -6,6- 二(甲基-d3)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酰胺，化学结构式为：
Figure 948726DEST_PATH_IMAGE011
，
经测定，化合物2的谱图数据为：1H NMR (300 MHz, Chloroform-d) δ 8.99 (s,1H), 8.05 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.85 (dt, J = 9.0,4.1 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.98 (d, J= 11.9 Hz, 2H), 3.82-3.54 (m, 4H), 1.37 (dd, J = 7.6, 5.4 Hz, 1H), 1.11 (ddd,J = 5.4, 4.4, 2.6 Hz, 1H), 0.95 (s, 9H). MS (EI, m/z): 521 (M++1)。
实施例3：片剂制备
将实施例1中制得的化合物1（50 g）、羟丙甲基纤维素E（150 g）、淀粉（200 g）、聚维酮（适量）和硬脂酸镁（1 g）混合，制粒，压片。
此外，可以根据药典2015版常规制剂法，将实施例1制得的化合物赋予不同的药物辅料制成胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、注射剂、糖浆剂、口服液、吸入剂、软膏剂、栓剂或贴剂等。
实施例4：SARS-CoV-2 3CLpro酶抑制实验
1）SARS-CoV-2 3CLpro蛋白表达与纯化
将全长SARS-CoV-2 3CLpro蛋白构建在表达载体pET28a(+)中并转入大肠杆菌BL21(DE3)，在终浓度0.5 mM IPTG，25℃条件下诱导12小时后用His-NTA柱纯化，用不同浓度的咪唑溶液梯度洗脱以纯化目的蛋白。各浓度咪唑洗脱液经SDS-PAGE凝胶电泳检测，收集纯度大于90%的部分用于进一步纯化。将纯化后的蛋白经超滤管浓缩后加入PreScission酶过夜酶切，之后反挂His-NTA柱，取过滤液得到3CL蛋白并进一步用GE蛋白质层析纯化系统AKTA Pure的Superdex 200 10/300 GL纯化，得到纯度大于95%的蛋白，经超滤管多心离心使得浓度大于10 mg/mL后，液氮速冻以备后续的蛋白结晶与活性测试实验。
2）化合物对SARS-CoV-2 3CLpro抑制能力的初步筛选
合成荧光标记多肽底物Dabcyl-KTSAVLQ↓SGFRKME-Edans（3CLpro裂解位点如箭头所示）作为反应底物，通过荧光共振能量转移（FRET）技术进行抑制剂的筛选，当该底物被SARS-CoV-2 3CLpro切断后，Edans不再被Dabcyl淬灭，随即可检测到Edans荧光，以此可以检测SARS-CoV-2 3CLpro的活性，而SARS-CoV-2 3CLpro抑制剂的有效性可凭借Edans荧光强度的变化进行监测。
将待筛选的化合物用100% 的DMSO溶解，将10 μL浓度为10 μM的化合物与40 μL的SARS-CoV-2 3CLpro（终浓度为0.6 μM）在室温下于Buffer A（20 mM Tris pH 7.5, 150 mMNaCl, 10 mM EDTA）中孵育10分钟，通过添加50 μL的荧光底物（终浓度为20 μM）引发反应。使用多功能酶标仪检测由于SARS-CoV-2 3CLpro催化底物裂解产生的荧光强度信号。若抑制剂对SARS-CoV-2 3CLpro有抑制效果，则相同时间内的荧光强度变化值实验组应小于无抑制剂的阴性对照组。
检测条件：
荧光检测的最大激发波长（ƛex）和最大发射波长（ƛem）分别为340 nm和490 nm，总检测时间为10 min，检测时间间隔为30 s，检测温度25 ℃。
数据处理：
相同条件下，某一抑制剂浓度对应的同一时间段内发生的荧光强度变化值代表该抑制剂浓度下对应的酶活性，即E（抑制剂浓度），阴性对照组对应的酶活性为E（0），SARS-CoV-23CLpro的酶活力用（E（抑制剂浓度）/ E（0））*100% 表示，则该浓度下抑制剂的抑制率I（抑制剂浓度）为（1-E（抑制剂浓度）/ E（0））*100%，每个抑制剂做三组平行实验，并取三次实验的初筛抑制率平均值作为最终结果。
2）化合物对SARS-CoV-2 3Clpro半数抑制浓度（IC50）的检测
通过初筛结果选出高抑制活性的化合物（选择10 μM时抑制率大于80 %的化合物），使用 Buffer A（20 mM Tris pH 7.5, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA）将同一抑制剂按照三倍稀释法稀释14个浓度梯度，随后使用与初筛时相同的反应体系检测不同浓度抑制剂对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制率。
数据处理：
在相同条件下，不同抑制剂浓度对应的酶活性为E（抑制剂梯度），分别计算出不同抑制剂浓度下对SARS-CoV-2 3CLpro的抑制率I（抑制剂梯度），每个抑制剂均做三组平行实验，将所得抑制率数据导入GraphPad Prism8软件，通过非线性拟合得出抑制剂的IC50曲线及IC50数值。
表1为本发明化合物及PF-07321332对SARS-CoV-2 3CLpro酶抑制活性结果：
Figure 227260DEST_PATH_IMAGE012
由以上结果可知，受试化合物1和2显示出较高的抗SARS-CoV-2 3CLpro酶活性，其中化合物2对3CLpro酶的抑制活性约是阳性药PF-07321332的5.7倍，化合物1对3CLpro酶的抑制活性也达到了阳性药PF-07321332的2.2倍。因此，化合物1或2可以用作制备治疗和/或预防SARS-CoV-2病毒感染疾病的药物，且具有更突出的疗效。
实施例4：药物处理CPE观察
检测试剂：SARS-CoV-2病毒（代次：P6；滴度：2×105 TCID50/mL）、Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞得自ATCC，流感A/Hawaii/70/2019（H1N1）、流感A/Hong Kong/45/2019（H3N2）由国家流感中心提供病毒、DMEM基础培养基（Gibco）、胎牛血清（Gibco）、青霉素-链霉素双抗（Bioind）、0.25%胰酶-EDTA。
试验操作：
1）接种细胞：取处于对数生长期的Vero-E6细胞，使用使用0.25%胰酶-EDTA消化细胞，细胞计数，获得细胞密度为：1×106个/mL的细胞悬液；取上述细胞4 mL，加入完全培养基（DMEM with 10% FBS）6 mL，制备得到细胞密度为 4×105个/mL的细胞悬液， 接种到96孔板中，每孔100 μL，每孔细胞数4×104个。放入37 ℃二氧化碳培养箱中持续培养过夜。
2）细胞药物预处理：病毒感染前，使用维持培养基（DMEM with 2% FBS） 稀释药物至相应浓度，每孔加入100 μL含有相应浓度药物的培养基，放入37 ℃二氧化碳培养箱中持续培养1小时。
3）测试药物稀释：每孔加入2倍终浓度稀释药物60 μL，同时设置细胞对照，加入维持培养基120 μL；病毒对照，加入维持培养基 60 μL。
4）病毒稀释：病毒储存液滴度为 2.5×105 TCID50/mL，取病毒储存液 200 μL，加入25 mL维持培养基，充分混匀，将病毒稀释至 100 TCID50/50μL。
5）滴加病毒：垂直悬滴病毒（细胞对照除外）至 96 孔板内，加样体积60μL /孔，最终病毒-药物混合液 120 μL。
6）将加好的病毒-抗体在震荡器上混匀后，吸去接种有细胞的培养板上清液（100μL），随后将病毒-药物混合液吸取 100μL /孔加入其中。
7）根据细胞病变观察药物抗病毒能力：将细胞放入 37 ℃ CO2培养箱中持续培养48小时，使用倒置显微镜观察细胞病变，记录、统计分析结果。
8）接种细胞：取处于对数生长期的Huh 7细胞，使用0.25%胰酶-EDTA消化细胞，接种于孔板中。
9）药物处理：使用通式I的化合物分别处理Huh 7细胞，药物处理浓度为20μM。
10）收集细胞：48小时后收集细胞，Western blot检测蛋白表达。
结果显示，化合物1和2相对于对照组对SARS-CoV-2感染的Vero E6细胞能较好的抑制细胞病变的情况发生。证明化合物1和2对SARS-CoV-2有一定的抑制作用。
实施例5：抗流感病毒、抗SARS-CoV-2病毒及细胞毒性实验
1）抗流感病毒实验
细胞与病毒株：Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞得自ATCC，流感A/Hawaii/70/2019（H1N1）由国家流感中心提供
实验过程：将MDCK细胞接种于96孔板中，每孔细胞数为2×105/mL，待细胞长成单层后，感染一定数量的病毒（100TCID50），在37℃下吸附2 h后，用MEM进行冲洗，换上不同浓度梯度的小分子化合物（0-500 μg/mL）的维持液，在37℃，5%的二氧化碳的环境下进行孵育，同时设不含受试小分子化合物的病毒对照组和正常细胞对照组。当病毒对照组的细胞病变（CPE）达到4+时，观察并记录各组的CPE结果。抗病毒的活性采用Reed & Muench方法计算，EC50 = Antilog[A+(50-B)/(C-B)×D]，其中A：log＜50%累加抑制剂的药物浓度；B：＜50%累加抑制率；C：＞50%累加抑制率；D：log稀释倍数。
2）抗SARS-CoV-2病毒实验
细胞与病毒株：非洲绿猴肾细胞（Vero E6）得自ATCC，2019BetaCoV/ Wuhan/WIV04/ 2019由中国科学院病毒所分离得到
实验过程：将Vero E6细胞种于96孔板中，每孔3×105个细胞，在37℃，5%的二氧化碳的培养箱中过夜培养。待细胞长成单层后，用PBS洗涤一次，加入SARS-CoV-2病毒（MOI=0.03），吸附2 h后弃病毒液，用PBS洗3次后加入含有梯度稀释的小分子化合物的2%低熔点琼脂糖-DMEM（4%FBS）培养基。在37℃，5%的二氧化碳的培养箱中培养4天后采用4%的多聚甲醛固定15 min，清洗3次，加入0.8%结晶紫染色10 min，清洗三次并烘干。采用酶联荧光斑点分析仪（CTL，Immunospot S6 Universal）进行图片采集并对噬斑进行统计。根据噬斑数绘制剂量反应曲线，计算半数有效浓度EC50。
3）细胞毒性实验
取处于指数生长期的MDCK细胞和Vero E6细胞种在96孔板上，每孔2×104个细胞，然后给予受试小分子化合物，质量浓度范围为0-2000 μg/mL，在37℃，5%的二氧化碳的培养箱中培养2天。MDCK细胞和Vero E6细胞的毒性试验采用CPE法，受试小分子化合物对细胞的半数细胞毒性浓度CC50采用Reed & Muench方法计算，CC50 = Antilog[A+(50-B)/(C-B)×D]，其中A：log＜50%累加抑制剂的药物浓度；B：＜50%累加抑制率；C：＞50%累加抑制率；D：log稀释倍数。
表2为本发明化合物及PF-07321332对流感病毒、SARS-CoV-2病毒的活性和细胞毒性结果：
Figure 453973DEST_PATH_IMAGE013
上述细胞实验证明，受试化合物1和2在细胞水平上显示出较高的抗RNA病毒效果。在抗H1N1病毒实验中，化合物1和2的抗病毒效果约是阳性药PF-07321332的2.2和4.2倍；在抗SARS-CoV-2病毒实验中，化合物1和2的抗病毒效果约是阳性药PF-07321332的2.9和4.2倍。在MDCK细胞系和Vero E6细胞系中，化合物1和2与阳性药相同，都展现出较高的CC50，具有较高的安全性。因此，化合物1或2可以用作制备治疗和/或预防RNA病毒感染疾病的药物，具有较优的疗效，安全性高。
实施例6：人肝微粒体代谢稳定性实验
1）设备与材料：高速冷冻离心机（Thermo Fisher Scientific）、UltiMate 3000型超高效液相色谱系统（Dionex）、Q-Exactive组合型四级杆Orbitrap质谱仪、混合性别人源肝微粒体来自瑞德肝脏疾病研究（上海）有限公司
2）实验过程
孵育体系总体积300 μL，包括50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH=7.4）、5 mmol/L氯化镁、0.75 g/L肝微粒体、10 μmol/L 待检测化合物。在37℃、250 r/min的条件下预孵育5 min，加入NADPH溶液（终浓度为1 mmol/L），同时进行无NADPH溶液的对照，分别于0.25、2、4、6、10、20、40、60分钟的时间点，将20 μL的等分试样的孵育液用100μL含有内标吲哚美辛（50 ng/mL）的乙腈终止反应，剧烈震荡15 min，离心（22000 r/min，4℃，15 min，离心半径6.12 cm），上清液过0.2 μm微孔滤膜，再用含有0.2%甲酸的等体积水稀释，待测。样本经LC-MS分析，利用分析软件（Sciex，Framingham，MA）测量峰面积，计算化合物与内标物的峰面积比值，使用EWorkBook v10计算底物消耗半衰期（t1/2）和内在清除率（CLlit）。
半衰期（t1/2）的计算：将各时间点剩余百分比的自然对数与孵育时间作图，经直线回归得到斜率k，由公式体外消除半衰期t1/2=-0.693/k，计算得到化合物经人微粒体代谢的t1/2。
内在清除率（CLlit）的计算：应用well-stirred模型的公式CLlit=（0.693/t1/2）×（孵育体系体积/肝微粒体质量）×（肝微粒体质量/肝质量）×（肝质量/体质量）和CLh=（Qh×CLlit）/(Qh+CLlit)对数据进行外推。
表3为本发明化合物及PF-07321332对人肝微粒体代谢稳定性试验结果：
Figure 275299DEST_PATH_IMAGE014
由以上结果可知，相对于阳性对照药，受试化合物1和2具有更优的药代动力学性质，半衰期时间和内在清除率有了显著提高。添加NADPH后，阳性药PF-07321332半衰期下降明显，内在清除率升高，但是化合物1和2基本不受影响。因此，化合物1和2用作制备治疗和/或预防RNA病毒感染疾病的药物可以实现单独给药，具备无需同CYP3A4酶抑制剂联用的潜力。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种拟肽类衍生物或其盐，其特征在于，所述化合物的化学结构式如式(I)所示：
Figure 752056DEST_PATH_IMAGE002
式I中：
A为
Figure 200355DEST_PATH_IMAGE003
，
R1选自C1-6烷基或氘代C1-6烷基。
2.根据权利要求1所述的拟肽类衍生物或其盐，其特征在于，所述化合物及其衍生物为以下化合物：
Figure 511251DEST_PATH_IMAGE004
。
3.一种权利要求1和2任一所述的拟肽类衍生物或其盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：
原料S1与硼氢化钠溶于甲醇中，还原得到化合物S2；化合物S2在四氢呋喃溶液中与苯甲醛反应得到化合物S3；化合物S3与苯基氯化硒、双（三甲基硅烷基氨基钾）反应，得到硒醚中间体S4；化合物S4用过氧化氢氧化，通过Grieco消除得到化合物S5；化合物S5与2,2-二氯丙烷或2,2-二氯氘代丙烷在锌粉、溴化锌、溴化钴和配体的存在下成环得到化合物S6；化合物S6通过氢化铝锂还原得到化合物S7；化合物S7脱去苄基，再用二叔丁基二碳酸酯保护得到化合物S8；将化合物S8的羟基氧化为羧酸得到化合物S9；化合物S9在甲醇溶液中与氯化亚砜反应得到关键中间体S10；化合物S10与N-Boc-L-叔亮氨酸溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲和N,N-二异丙基乙胺条件下缩合得到化合物S11；化合物通过氢氧化锂水溶液水解，再酸化得到化合物S12；化合物S12在盐酸甲醇溶液中脱除保护基得到S13；化合物S13与三氟乙酸乙酯、N,N-二异丙基乙胺在甲醇溶液中反应得到化合物S14；
原料S15与氯甲酸甲酯、溴乙酸乙酯和氨甲醇溶液反应得到化合物S16；化合物S16在碱性条件下关环得到化合物S17；酸性条件下，脱去保护基得到化合物S18；化合物S18与氨甲醇溶液反应得到化合物S19；化合物S19与化合物S14、N,N,N’,N’-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲、N,N-二异丙基乙胺在N,N-二甲基甲酰胺中反应，得到化合物S20；化合物S20经伯吉斯试剂脱水得到目标产物(I)。
Figure 719509DEST_PATH_IMAGE005
Figure 65040DEST_PATH_IMAGE006
Figure 418661DEST_PATH_IMAGE007
Figure 482432DEST_PATH_IMAGE008
。
4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1-2中任一所述的拟肽类衍生物或其盐以及药学上可接受的载体。
5.一种如权利要求1-2任一项所述拟肽类衍生物或其盐在制备RNA病毒的3C样半胱氨酸蛋白酶抑制剂中的应用。
6.一种权利要求4所述的药物组合物在制备RNA病毒的3C样半胱氨酸蛋白酶抑制剂中的应用。
7.一种如权利要求1-2任一项所述拟肽类衍生物或其盐在制备治疗和/或预防病毒感染疾病药物中的应用。
8.一种权利要求4所述的药物组合物在制备治疗和/或预防病毒感染疾病药物中的应用。
9.一种如权利要求1-2任一项所述拟肽类衍生物或其盐在制备疫苗佐剂中的应用，所述的疫苗佐剂为用于治疗病毒感染的疫苗佐剂。
10.权利要求7-9所述病毒选自H1N1、SARS-CoV、MERS-CoV或SARS-CoV-2中的一种或多种。
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