CN115385865A - 一种具有cxcr2抑制活性的小分子抑制剂及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药领域，涉及一种具有CXCR2抑制活性的小分子抑制剂及其制备方法与应用。所述小分子抑制剂为式I所示化合物，或其药学上可接受的盐或互变异构体；其中，A为式II所示基团或式III所示基团，R为一个或多个苯环上的取代基，选自H、卤素、未取代或卤素取代的C1‑C4烷基、C1‑C4烷氧基或C1‑C4炔基。实验表明本发明提供的化合物对CXCR2具有一定的抑制活性，在高转移性的三阴性乳腺癌细胞中具有显著的抗肿瘤转移活性。
Figure DDA0003721482770000011

Description

一种具有CXCR2抑制活性的小分子抑制剂及其制备方法与 应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体地，涉及一种具有CXCR2抑制活性的小分子抑制剂及其制备方法与应用。
背景技术
趋化因子CXCs(Chemokine CXCs)是一类在免疫学和肿瘤微环境中都发挥着重要作用的细胞因子，靶向趋化因子CXCs的治疗策略在免疫疾病治疗和抗肿瘤治疗中拥有着巨大潜力。有研究表明，含谷氨酸-亮氨酸-精氨酸序列片段的趋化因子CXCs(ELR+ CXCs)可以诱导免疫细胞迁移，并且与肿瘤细胞的转移、凋亡、血管生成等进程密切相关。趋化因子受体2(CXCs receptor 2，CXCR2)属于G蛋白偶联受体(G-protein coupling receptors，GPCR)，可以与CXCs配体(CXC ligands，CXCLs)结合，进而激活GPCR的下游信号通路。如PI3K/AKT通路，NF-κB/MAPK/AKT通路，AKT/mTOR通路等。同时，还有研究表明，在肿瘤细胞中阻断CXCLs/CXCR2轴(CXCLs/CXCR2axis)可以显著降低肿瘤微环境中骨髓源性抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)的募集，而骨髓源性抑制细胞是一类肿瘤辅助细胞，可以帮助肿瘤细胞逃脱免疫监视。由于CXCLs/CXCR2轴在肿瘤微环境中的独特作用，靶向CXCLs/CXCR2轴可以作为肿瘤免疫治疗的有效策略。综上所述，CXCLs/CXCR2轴不仅可以直接影响肿瘤相关信号通路，还可以通过调节骨髓源性抑制细胞等免疫因子来辅助肿瘤治疗。因此，开发有效的CXCR2拮抗剂来阻断CXCLs/CXCR2轴对肿瘤免疫治疗至关重要。
近几十年来，各种含有不同化学结构的CXCR2抑制剂被开发出来，在炎症性疾病和癌症治疗中显示出了有效的治疗效果。目前已有的CXCR2拮抗剂按照化学结构主要可分为六大类，分别为二芳脲类，3,4-二氨基环丁基-3-烯-1,2-二酮类，胍类，硫脲类，三唑硫醇类，2-芳基丙酸及2-芳基丙酰胺类。其中一些CXCR2拮抗剂已处于临床研究阶段，如治疗头颈癌的AZD-5069，治疗转移性黑色素瘤的SX-682，治疗实体瘤的Navarixin等。除此以外，CXCR2拮抗剂与现有抗癌药物在各种肿瘤细胞中的联合治疗策略也被广泛应用，因为CXCR2拮抗剂可以提高抗癌药物的疗效，并改善其耐药性。比如，CXCR2抑制剂SB225002与抗肿瘤药物Sorafenib的联合用药策略，可以在卵巢癌细胞模型中显著增强Sorafenib的抗血管生成活性。鉴于CXCR2抑制剂的重要性，通过研究CXCR2拮抗剂的构效关系从而开发出有效的新型CXCR2小分子抑制剂的工作拥有着重要的意义和广泛的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供具有CXCR2抑制活性的小分子抑制剂及其制备方法与应用。
为了实现上述目的，本发明提供一种具有CXCR2抑制活性的小分子抑制剂，其为式I所示化合物，或其药学上可接受的盐或互变异构体；
Figure BDA0003721482750000021
其中，A为式II所示基团或式III所示基团，R为一个或多个苯环上的取代基，选自H、卤素、未取代或卤素取代的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4炔基；
Figure BDA0003721482750000022
优选地，R选自H、2-CH3、3-CH3、4-CH3、4-t-Bu、4-F、4-Cl、4-CF3、4-OCH3、2,4-Cl、3,4-Cl或4-乙炔基。
本发明的小分子抑制剂包括式Ⅰ-1所示的1,2,4-三唑-3-酮衍生物类化合物，或者式Ⅰ-2所示的哒嗪酮衍生物类化合物。
Figure BDA0003721482750000023
上述式I-1中，R1选自-H、2-CH3、3-CH3、4-CH3、4-t-Bu、4-F、4-Cl、4-CF3、2,4-Cl、3,4-Cl或4-乙炔基。
Figure BDA0003721482750000024
上述式Ⅰ-2中，R2选自-H、2-CH3、3-CH3、4-CH3、4-t-Bu、4-F、4-CF3、4-OCH3、2,4-Cl、3,4-Cl或4-乙炔基。
根据本发明一种实施方式，所述式I所示化合物包括但不仅限于下述任意一种：
Figure BDA0003721482750000031
Figure BDA0003721482750000041
根据本发明，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐；所述无机酸盐选自下述任意一种无机酸形成的盐：盐酸、硫酸和磷酸；所述有机酸盐选自下述任意一种有机酸形成的盐：乙酸、三氟乙酸、丙二酸、柠檬酸和对甲苯磺酸。
本发明还提供所述的小分子抑制剂的制备方法，包括下述步骤：式A所示化合物与N,N-二甲基-3-氨基-2-羟基苯酚在缩合剂以及碱存在下、在溶剂中进行反应获得式I所示化合物；
Figure BDA0003721482750000051
上述式I-1所示的1,2,4-三唑-3-酮衍生物可以通过式IA所示化合物与N,N-二甲基-3-氨基-2-羟基苯酚反应来制备。
Figure BDA0003721482750000052
上述式I-2所示的哒嗪酮衍生物可以通过式IB所示化合物与N,N-二甲基-3-氨基-2-羟基苯酚反应来制备。
Figure BDA0003721482750000053
反应一般是在缩合剂如1-羟基苯并三唑(1-Hydroxybenzotriazole，HOBt)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1-Ethyl-3-3-Dimethylaminopropyl)carbodiimide Hydrochloride，EDCI)以及碱如N,N-二异丙基乙胺(N,N-Diisopropylethylamine，DIPEA)存在下、在溶剂如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中、在室温下进行的。
在不描述中间体和起始原料合成的情况下，这些化合物是可商业购买的，或可以利用标准方法或利用本文实施例的扩展方法、由可商业化购买的化合物来制备。
本发明制备的化合物经过高分辨质谱，核磁共振，熔点等测试，证明所制备的化合物正确无误。
本发明的再一方面提供所述的小分子抑制剂在制备下述产品中的应用：
1)CXC型趋化因子受体(CXCR)抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)真核生物肿瘤细胞转移抑制剂；
4)血管生成抑制剂；
5)预防和/或治疗肿瘤的药物。
所述CXC型趋化因子受体(CXCR)包括在哺乳细胞中已知的亚型，主要包括但不限于CXCR1或CXCR2；
所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞可以为白血病癌细胞、淋巴瘤细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞。优选为人乳腺癌细胞。
具体地，所述白血病癌细胞为人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562；所述淋巴瘤细胞为人组织细胞淋巴瘤细胞U937；所述肺癌细胞为人肺癌细胞株HCC827、A549、H1975和PC-9；所述乳腺癌细胞为人乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-231；所述卵巢癌细胞为A2780；所述宫颈癌细胞为人宫颈癌细胞系Hela；所述人脑胶质瘤细胞为U251；所述黑色素癌细胞为A375；所述胶质母细胞瘤细胞为人胶质母细胞瘤细胞A172和人脑星形胶质母细胞瘤细胞U-118MG；所述鼻咽癌细胞为鼻咽癌细胞株CNE-2；所述肝癌细胞为人肝癌细胞HepG2；所述结肠癌细胞为Caco-2和HCT116。
所述肿瘤为癌；所述癌具体为白血病、淋巴瘤、肺癌、黑色素癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、鼻咽癌、肝癌、乳腺癌、脑癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌或直肠癌。
本发明还提供一种产品，其活性成分为所述的小分子抑制剂；其中，所述产品为以下中的至少一种：
1)CXC型趋化因子受体(CXCR)抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)真核生物肿瘤细胞转移抑制剂；
4)血管生成抑制剂；
5)预防和/或治疗肿瘤的药物。
各产品的具体限定如前所述，在此不再赘述。
本发明式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐也可用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物。以式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐为有效成分制备的预防和/或治疗肿瘤的药物，也属于本发明的保护范围。
用式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐制备的CXC型趋化因子受体(CXCR)抑制剂、真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂以及预防和/或治疗肿瘤的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
用式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
经过CXC型趋化因子受体2(CXCR2)靶点活性测试以及体外抗肿瘤活性和机制测试，证明本发明提供的化合物对CXCR2具有一定的抑制活性，在高转移性的三阴性乳腺癌细胞中具有显著的抗肿瘤转移活性。本发明提供的化合物原料易得，制备方法简单，实验证明其有良好的抗癌效果，在抗肿瘤药物设计研发领域有着良好的应用前景。
本发明的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
通过结合附图对本发明示例性实施方式进行更详细的描述，本发明的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。
图1和图2示出了化合物18与CXCR2蛋白的分子对接结果。
图3示出了抗肿瘤迁移活性测试结果。
具体实施方式
下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为有机合成的常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均从商业途径获得。
实施例1A
4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000081
以苯胺(10mmol)为原料，参照Gong团队的已发表的工作(Eur J Med Chem,2016,123:431-446)得到4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(砖红色固体，560mg，产率99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝8.9Hz,1H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.28(t,J＝7.3Hz,1H),6.92(d,J＝8.9Hz,1H),3.43(s,3H).
实施例1B
1-(2-甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000082
以2-甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1B化合物(亮黄色固体，211mg,产率99％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.43–7.30(m,4H),3.61(s,3H),2.24(s,3H).
实施例1C
1-(3-甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000083
以3-甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1C化合物(白色固体，128mg,产率89％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.80–7.68(m,2H),7.33(t,J＝7.8Hz,1H),7.13(d,J＝7.2Hz,1H),3.57(s,3H),2.39(s,3H).
实施例1D
1-(4-甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000091
以4-甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1D化合物(白色固体，140mg,产率97％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.78(d,J＝8.3Hz,2H),7.27(d,J＝7.9Hz,2H),3.56(s,3H),2.36(s,3H).
实施例1E
1-(4-叔丁基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000092
以4-叔丁基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1E化合物(白色固体，39mg,产率31％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.84(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(d,J＝8.5Hz,2H),3.58(s,3H),1.34(s,9H).
实施例1F
1-(4-氟苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000093
以4-氟苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1F化合物(白色固体，122mg,产率69％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.95(dd,J＝9.0,4.7Hz,2H),7.21(t,J＝8.7Hz,2H),3.57(s,3H).19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-117.49.
实施例1G
1-(4-氯苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000101
以4-氯苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1G化合物(白色固体，523mg,产率49％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.00–7.91(m,2H),7.49–7.41(m,2H),3.56(s,3H).
实施例1H
1-(4-三氟甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000102
以4-三氟甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1H化合物(白色固体，240mg,产率21％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.22(t,J＝7.5Hz,2H),7.77(t,J＝6.8Hz,2H),3.61–3.56(m,3H).19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-63.83.
实施例1I
1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000103
以2,4-二氯苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1I化合物(白色固体，401mg,产率88％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.73(d,J＝2.0Hz,1H),7.57–7.50(m,2H),3.60(s,3H).
实施例1J
1-(3,4-二氯苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000111
以3,4-二氯苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1J化合物(白色固体，446mg,产率41％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.21(d,J＝2.3Hz,1H),7.97–7.90(m,1H),7.59(d,J＝8.9Hz,1H),3.56(s,3H).
实施例1K
1-(4-炔基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000112
以4-炔基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例1A，得到实施例1K化合物(白色固体，155mg,产率72％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.00(d,J＝8.9Hz,1H),7.75(d,J＝8.9Hz,1H),5.73(dd,J＝150.1,2.1Hz,1H),3.57(s,1H).
实施例1L
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物1)
Figure BDA0003721482750000113
往Schlenk管中加入N,N-二甲氨基-3-氨基-2羟基苯酚(27mg,0.15mmol,1equiv)、实施例1A所得化合物(0.15mmol,1equiv)、HOBt(23mg,0.15mmol,1equiv)、EDCI(38mg,0.2mmol,1.33equiv)、DIPEA(75μL)和二甲基甲酰胺(2mL)，进行抽放气操作引入氩气保护后于室温下反应12小时。反应结束后，用二氯甲烷进行萃取，水层用二氯甲烷洗涤三遍，合并有机层并进行干燥，所得的有机溶液进行柱层析纯化(洗脱剂为二氯甲烷/甲醇＝100：3)，最终得到化合物1(黄色固体，17mg，产率35％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.93(s,1H),9.39(s,1H),8.41(d,J＝8.0Hz,1H),8.02(d,J＝8.0Hz,2H),7.47(t,J＝7.7Hz,2H),7.29(d,J＝7.4Hz,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),6.90(t,J＝8.0Hz,1H),3.72(s,3H),3.19(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.59,156.58,154.41,152.56,149.11,138.48,137.32,129.15,126.95,126.36,126.25,123.99,122.56,119.22,118.36,116.71,29.71,14.70.HRMS(ESI)m/z calcd.forC19H20O4N5[M+H]+＝382.1510,found 382.1507.
实施例1M
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(2-甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物2)
Figure BDA0003721482750000121
以实施例1B为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物2(棕色固体，17mg，产率29％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.29(s,1H),8.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(d,J＝5.2Hz,3H),7.30(s,1H),7.14(d,J＝8.9Hz,1H),6.90(t,J＝8.0Hz,1H),3.75(s,3H),3.18(s,6H),2.32(s,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.56,156.69,154.59,153.37,149.08,138.85,135.28,134.98,131.39,129.31,127.03,126.76,123.97,122.61,118.34,116.70,29.97,18.22,14.63.HRMS(ESI)m/z calcd.forC20H22O4N5[M+H]+＝396.1666,found 396.1664.
实施例1N
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(3-甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物3)
Figure BDA0003721482750000122
以实施例1C为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物3(亮棕色固体，18mg，产率31％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.95(s,1H),9.37(s,1H),8.39(d,J＝7.9Hz,1H),7.84–7.77(m,2H),7.34(t,J＝7.7Hz,1H),7.14(d,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝7.5Hz,1H),6.89(t,J＝7.9Hz,1H),3.71(s,3H),3.18(s,6H),2.42(s,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.56,154.43,152.55,148.99,139.17,138.36,137.22,128.97,127.20,126.95,123.97,122.54,119.82,118.40,116.82,116.44,29.68,21.62,14.70.HRMS(ESI)m/z calcd.for C20H22O4N5[M+H]+＝396.1666,found 396.1664.
实施例1O
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(4-甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物4)
Figure BDA0003721482750000131
以实施例1D为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物4(亮棕色固体，21mg，产率36％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.94(s,1H),9.37(s,1H),8.40(d,J＝7.9Hz,1H),7.87(d,J＝8.3Hz,2H),7.27(s,1H),7.25(s,1H),7.14(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(t,J＝8.0Hz,1H),3.71(s,3H),3.19(s,6H),2.37(s,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.59,156.63,154.46,152.52,149.05,138.24,136.22,136.11,134.90,129.67,126.97,123.96,122.55,119.27,118.37,116.74,29.69,21.04,14.70.HRMS(ESI)m/z calcd.forC20H22O4N5[M+H]+＝396.1666,found 396.1664.
实施例1P
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(4-叔丁基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物5)
Figure BDA0003721482750000132
以实施例1E为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物5(亮黄色固体，16mg，产率25％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.93(s,1H),9.38(s,1H),8.42(d,J＝7.5Hz,1H),7.90(d,J＝7.5Hz,2H),7.82(d,J＝7.4Hz,1H),7.49(s,1H),7.15(d,J＝7.4Hz,1H),6.92(d,J＝7.5Hz,1H),3.73(s,3H),3.20(s,6H),1.34(s,9H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.63,156.65,154.51,152.59,149.58,149.21,138.32,134.76,126.97,126.04,125.99,123.96,122.59,119.22,118.32,116.57,31.36,29.71,14.70.HRMS(ESI)m/z calcd.for C23H28O4N5[M+H]+＝438.2136,found 438.2133.
实施例1Q
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(4-氟苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物6)
Figure BDA0003721482750000141
以实施例1F为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物6(棕色固体，13mg，产率22％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.99(s,1H),9.35(s,1H),8.41(s,1H),7.99(s,2H),7.92(s,1H),7.15(s,2H),6.90(s,1H),3.72(s,3H),3.19(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.58,160.80(d,J＝246.0Hz),156.46,154.28,152.47,149.14,138.51,133.45,126.87,124.05,122.57,121.04(dd,J＝8.2,2.9Hz),118.36,116.62,115.93(dd,J＝22.9Hz),29.77,14.69.19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-115.41.HRMS(ESI)m/zcalcd.For C19H19O4N5F[M+H]+＝400.1416,found 400.1413.
实施例1R
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(4-氯苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物7)
Figure BDA0003721482750000142
以实施例1G为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物7(白色固体，32mg，产率59％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.02(s,1H),9.36(s,1H),8.41(d,J＝6.9Hz,1H),8.01(d,J＝6.8Hz,2H),7.43(d,J＝7.1Hz,2H),7.16(d,J＝6.7Hz,1H),6.91(s,1H),3.72(s,3H),3.20(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.58,163.76,154.21,152.40,149.21,138.67,135.86,131.72,130.90,129.27,126.84,124.09,122.58,120.26,118.35,116.56,38.65,29.77.HRMS(ESI)m/z calcd.for C19H18O4N5ClNa[M+Na]+＝438.0940,found438.0938.
实施例1S
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(4-三氟甲基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物8)
Figure BDA0003721482750000151
以实施例1H为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物8(粉色固体，13mg，产率19％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ11.05(s,1H),9.38(s,1H),8.41(d,J＝7.5Hz,1H),8.21(d,J＝7.4Hz,2H),8.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.17(d,J＝7.5Hz,1H),6.96–6.90(m,1H),3.73(s,3H),3.20(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.57,156.29,154.08,152.48,149.22,144.50,139.98,139.17(d,J＝4.6Hz),126.78,126.41(q,J＝7.2,3.5Hz),124.17,122.59,120.98(q,J＝247.3Hz),118.73,118.61,118.36,116.59,29.79,14.68.19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-62.30.HRMS(ESI)m/z calcd.For C20H19O4N5F3[M+H]+＝450.1384,found 450.1379.
实施例1T
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物9)
Figure BDA0003721482750000152
以实施例1I为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物9(浅橙色固体，30mg，产率48％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.90(s,1H),9.25(s,1H),8.40(d,J＝6.8Hz,1H),7.56(s,1H),7.43(s,1H),7.39(s,1H),7.14(d,J＝6.8Hz,1H),6.89(t,J＝7.0Hz,1H),3.73(s,3H),3.17(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.55,154.27,153.06,149.10,139.58,136.00,132.88,132.35,130.65,129.91,128.01,126.83,124.07,122.62,118.35,116.67,30.07,14.61.HRMS(ESI)m/z calcd.for C19H18O4N5Cl2[M+H]+＝450.0730,found 450.0726.
实施例1U
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(3,4-二氯苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物10)
Figure BDA0003721482750000161
以实施例1J为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物10(浅橙色固体，16mg，产率24％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.60(s,1H),9.32(s,1H),8.32(d,J＝7.9Hz,1H),8.16(s,1H),7.91(d,J＝10.7Hz,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),7.19(d,J＝7.7Hz,1H),6.96(s,1H),3.74(s,3H),3.22(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.49,154.05,152.49,148.77,138.98,136.20,133.34,130.92,126.27,124.45,122.98,120.91,118.77,118.30,117.34,115.74,29.96,27.25.HRMS(ESI)m/z calcd.for C19H18O4N5Cl2[M+H]+＝450.0730,found 450.0728.
实施例1V
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-1-(4-炔基苯基)-4-甲基-5-氧-1-苯基-4,5-二氢-1H-1,2,4-三唑-3-酰胺(化合物11)
Figure BDA0003721482750000162
以实施例1K为原料，合成方法参照实施例1L，得到化合物11(白色固体，16mg，产率27％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.76(s,1H),9.36(s,1H),8.36(d,J＝7.7Hz,1H),8.02(d,J＝8.0Hz,2H),7.73(d,J＝8.1Hz,2H),7.17(d,J＝7.6Hz,1H),6.93(d,J＝7.3Hz,1H),5.68(d,J＝102.2Hz,1H),3.74(s,3H),3.20(s,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.53,162.16,154.22,152.64,148.88,141.34,139.01,138.74,137.51,134.96,127.31,126.73,126.22,124.25,122.78,118.86,115.71,113.06,29.86,14.65.HRMS(ESI)m/zcalcd.for C21H20O4N5[M+H]+＝406.1510,found 406.1508.
实施例2A
4-甲基-6-氧-1-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000171
以苯胺(10mmol)为原料，参照Gong团队的已发表的工作(Eur J Med Chem,2014,83:581-593)得到4-甲基-6-氧-1-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸(白色固体，126mg，产率70％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57–7.40(m,5H),6.97(s,1H),2.37(s,3H).
实施例2B
4-甲基-6-氧-(2-甲基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000172
以2-甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2B化合物(白色固体，188mg,产率98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.42–7.26(m,4H),6.98(d,J＝1.2Hz,1H),2.39(s,3H),2.03(s,3H).
实施例2C
4-甲基-6-氧-(3-甲基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000173
以3-甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2C化合物(白色固体，160mg,产率84％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.40–7.23(m,4H),6.96(d,J＝1.2Hz,1H),2.37(d,J＝1.2Hz,3H),2.35(s,3H).
实施例2D
4-甲基-6-氧-(4-甲基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000181
以4-甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2D化合物(白色固体，77mg,产率59％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.40(d,J＝8.3Hz,2H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),6.94(s,1H),2.36(s,3H),2.35(s,3H).
实施例2E
4-甲基-6-氧-(4-叔丁基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000182
以4-叔丁基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2E化合物(白色固体，160mg,产率72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.55–7.37(m,4H),6.94(d,J＝11.1Hz,1H),2.36(d,J＝11.5Hz,3H),1.29(d,J＝12.2Hz,9H).
实施例2F
4-甲基-6-氧-(4-氟苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000183
以4-氟苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2F化合物(白色固体，160mg,产率72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.55–7.37(m,4H),6.94(d,J＝11.1Hz,1H),2.36(d,J＝11.5Hz,3H),1.29(d,J＝12.2Hz,9H).
实施例2G
4-甲基-6-氧-(4-三氟甲基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000191
以4-三氟甲基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2G化合物(黄色固体，671mg,产率99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,J＝8.6Hz,2H),7.84(d,J＝8.6Hz,2H),7.02(d,J＝1.2Hz,1H),2.40–2.36(m,3H).19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-61.01.
实施例2H
4-甲基-6-氧-(4-甲氧基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000192
以4-甲氧基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2H化合物(白色固体，73mg,产率76％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.49(d,J＝8.2Hz,2H),7.03(d,J＝8.1Hz,2H),6.91(s,1H),3.85(s,3H),2.49(s,3H).
实施例2I
4-甲基-6-氧-(2,4-二氯苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000193
以2,4-二氯苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2I化合物(白色固体，385mg,产率77％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.70(s,1H),7.52(s,2H),6.97(s,1H),2.51(d,J＝1.3Hz,3H).
实施例2J
4-甲基-6-氧-(3,4-二氯苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000201
以3,4-二氯苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2J化合物(砖红色固体，26mg,产率26％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.91(d,J＝2.3Hz,1H),7.69–7.61(m,2H),6.94(d,J＝1.2Hz,1H),2.49(s,3H).
实施例2K
4-甲基-6-氧-(4-炔基苯基)-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-羧酸
Figure BDA0003721482750000202
以4-炔基苯胺(10mmol)为原料，合成方法同实施例2A，得到实施例2K化合物(黄色固体，56mg,产率64％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.62(q,J＝8.3Hz,4H),6.93(s,1H),3.63(s,1H),2.49(s,3H).
实施例2L
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-苯基-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物12)
Figure BDA0003721482750000203
往Schlenk管中加入N,N-二甲氨基-3-氨基-2羟基苯酚(27mg,0.15mmol,1equiv)、实施例2A化合物(0.15mmol,1equiv)、HOBt(23mg,0.15mmol,1equiv)、EDCI(38mg,0.2mmol,1.33equiv)、DIPEA(75μL)和二甲基甲酰胺(2mL)，进行抽放气操作引入氩气保护后于室温下反应12小时。反应结束后，用二氯甲烷进行萃取，水层用二氯甲烷洗涤三遍，合并有机层并进行干燥，所得的有机溶液进行柱层析纯化(洗脱剂为二氯甲烷/甲醇＝100：3)，最终得到实施例2L化合物(黄色固体，19mg，产率49％)。
实施例2M
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(2-甲基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物13)
Figure BDA0003721482750000211
以实施例2B为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物13(黄色固体，45mg，产率56％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.98–7.84(m,1H),7.36–7.18(m,4H),6.98(s,1H),6.78(d,J＝6.4Hz,1H),6.60(s,1H),2.76(s,6H),2.41(s,3H),2.04(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.82,161.47,159.14,144.02,141.15,140.64,135.01,132.95,131.03,129.97,129.70,129.48,127.96,127.62,127.13,125.71,124.04,121.77,19.46,17.63,15.05.HRMS(ESI)m/z calcd.for C22H23O4N4[M+H]+＝407.1714,found 407.1712.
实施例2N
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(3-甲基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物14)
Figure BDA0003721482750000212
以实施例2C为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物14(黄色固体，39mg，产率48％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.89(s,1H),7.38(s,2H),7.24(s,1H),7.15(s,1H),6.91(s,1H),6.82(s,1H),6.71(s,1H),2.77(s,6H),2.36(s,3H),2.27(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.46,161.56,159.16,143.63,141.18,140.86,138.57,130.15,129.23,128.82,127.80,127.59,126.39,125.97,124.02,123.10,122.20,117.63,21.33,19.27,15.05.HRMS(ESI)m/z calcd.for C22H23O4N4[M+H]+＝407.1714,found 407.1712.
实施例2O
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(4-甲基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物15)
Figure BDA0003721482750000221
以实施例2D为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物15(黄色固体，46mg，产率57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,2H),7.15(d,J＝7.2Hz,2H),6.90(s,1H),6.82(d,J＝6.9Hz,1H),6.74–6.67(m,1H),2.77(s,6H),2.37(s,3H),2.27(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.54,161.46,159.15,147.70,143.55,140.68,138.82,138.01,130.09,129.46,129.38,127.91,127.60,125.95,125.59,123.85,121.84,117.31,21.14,19.28,15.05.HRMS(ESI)m/z calcd.for C22H23O4N4[M+H]+＝407.1714,found 407.1712.
实施例2P
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(4-叔丁基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物16)
Figure BDA0003721482750000222
以实施例2E为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物16(黄色固体，30mg，产率34％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),7.92(d,J＝7.5Hz,1H),7.53(d,J＝8.0Hz,2H),7.40(d,J＝8.1Hz,2H),6.95(s,1H),6.85(d,J＝7.0Hz,1H),6.78–6.71(m,1H),2.79(s,6H),2.39(s,3H),1.26(s,9H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.30,161.58,159.21,156.38,151.17,147.14,143.69,140.58,138.74,130.18,127.72,126.09,125.80,125.52,124.06,122.33,118.07,34.91,31.54,29.51,19.36.HRMS(ESI)m/z calcd.for C25H29O4N4[M+H]+＝449.2183,found 449.2181.
实施例2Q
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(4-氟苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物17)
Figure BDA0003721482750000231
以实施例2F为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物17(黄色固体，19mg，产率56％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.76(s,1H),9.59(s,1H),8.42(d,J＝7.4Hz,1H),7.69(s,2H),7.20(s,2H),7.09(d,J＝6.8Hz,1H),6.88(s,2H),3.17(s,6H),2.65(s,3H).13CNMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.66,162.20(d,J＝249.0Hz),160.41,159.42,149.04,144.43,138.59,136.76(d,J＝3.2Hz),130.86,129.95,127.54,127.42,126.85(d,J＝8.7Hz),123.45,122.23,118.36,116.68,115.84(d,J＝23.0Hz),20.29,14.79.19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-112.23.HRMS(ESI)m/z calcd.for C21H20O4N4F[M+H]+＝411.1463,found 411.1460.
实施例2R
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(4-三氟甲基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物18)
Figure BDA0003721482750000232
以实施例2G为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物18(黄色固体，38mg，产率41％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.84(s,1H),9.62(s,1H),8.43(d,J＝9.3Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(d,J＝9.4Hz,2H),7.11(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),6.91(s,1H),6.88(d,J＝8.1Hz,1H),3.17(s,6H),2.66(s,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.65,162.35,160.19,159.24,149.10,144.65,143.40,139.67,139.09,131.08,130.74,130.49(q,J＝33.0Hz),126.12(q,J＝3.7Hz),125.15,123.74(q,J＝272.4Hz),123.52,122.18,118.37,116.55,20.29,14.77.19F NMR(376MHz,Chloroform-d)δ-62.62.HRMS(ESI)m/zcalcd.for C22H20O4N4F3[M+H]+＝461.1431,found 461.1430.
实施例2S
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(4-甲氧基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物19)
Figure BDA0003721482750000241
以实施例2H为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物19(白色固体，41mg，产率49％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.14(s,1H),9.86(s,1H),7.87(d,J＝7.3Hz,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,2H),7.02(d,J＝8.6Hz,2H),6.98(s,1H),6.90(dt,J＝15.3,7.3Hz,2H),3.38(s,3H),2.86(s,6H),2.41(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.68,162.01,159.38,159.29,149.00,145.13,143.54,143.02,140.40,134.35,130.09,127.43,127.29,126.29,124.22,123.32,120.00,114.21,56.00,19.24,15.05.HRMS(ESI)m/z calcd.for C22H23O5N4[M+H]+＝423.1663,found 423.1662.
实施例2T
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(2,4-二氯苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物20)
Figure BDA0003721482750000242
以实施例2I为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物20(黄色固体，58mg，产率63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.77(s,1H),9.71(s,1H),7.97–7.82(m,2H),7.72(d,J＝8.5Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.08(s,1H),6.94(d,J＝7.1Hz,1H),6.88(t,J＝7.6Hz,1H),2.86(s,6H),2.46(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.50,161.53,158.76,145.07,144.84,141.06,137.90,135.30,132.31,131.59,130.09,129.73,129.03,127.01,125.65,124.43,123.30,120.11,19.59,15.01.HRMS(ESI)m/z calcd.for C21H19O4N4Cl2[M+H]+＝461.0778,found 461.0779.
实施例2U
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(3,4-二氯苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物21)
Figure BDA0003721482750000251
以实施例2J为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物21(砖红色固体，20mg，产率50％)。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ10.80(s,1H),9.57(s,1H),8.42(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝2.0Hz,1H),7.66–7.61(m,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),7.12(d,J＝7.8Hz,1H),6.92–6.84(m,2H),3.18(s,6H),2.65(s,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.64,160.13,159.10,149.11,144.63,139.75,139.06,132.93,132.73,131.01,130.53,127.43,126.81,124.03,123.57,122.23,118.37,116.60,29.73,20.28.HRMS(ESI)m/z calcd.forC21H19O4N4Cl2[M+H]+＝461.0778,found 461.0776.
实施例2V
N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基-苯基)-4-甲基-6-氧-1-(4-炔基苯基)-1,6-二氢哒嗪-3-酰胺(化合物22)
Figure BDA0003721482750000252
以实施例2K为原料，合成方法参照实施例2L，得到化合物22(黄色固体，47mg，产率57％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.92(s,1H),9.70(s,1H),7.86(d,J＝7.7Hz,1H),7.75(d,J＝8.6Hz,2H),7.62(d,J＝8.5Hz,2H),7.04(s,1H),6.96(d,J＝7.5Hz,1H),6.90(t,J＝7.7Hz,1H),4.33(s,1H),2.88(s,6H),2.44(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.57,161.82,159.11,145.23,144.02,141.38,140.67,133.61,132.52,130.41,127.12,126.20,125.73,124.42,123.44,122.08,120.31,120.13,115.67,83.23,82.43,19.37,15.05.HRMS(ESI)m/z calcd.for C23H20O4N4Na[M+Na]+＝439.1377,found 439.1376.
实施例3抗CXCR2靶点活性测试
使用钙流法(FLIPR assay)对CXCR2靶点拮抗活性进行测定。CXCR2稳转株由药明康德公司提供。含不同取代基的1,2,4-三唑-3-酮衍生物1-11和哒嗪酮衍生物12-22的CXCR2拮抗活性结果见表1和表2。
表1 化合物1-11的CXCR2靶点拮抗活性
Figure BDA0003721482750000261
*抑制率是指药物在10μM的抑制百分比
表2 化合物12-22的CXCR2靶点拮抗活性
Figure BDA0003721482750000271
实施例4化合物18与CXCR2蛋白的分子对接研究
从RSCB蛋白数据库中下载CXCR2的三维结构(PDB代码为6lfl)。分别使用Schrodinger's Maestro molecular modeling suit的蛋白质准备模块和Glide dockingprogram的对接程序进行蛋白质准备和对接模拟，小分子配体由Chem3D绘制。通过Maestrointerface对对接相互作用进行分析。结果如图1和图2所示。
分子对接结果表明，化合物18与CXCR2蛋白具有优异的结合模式。其六元哒嗪环上右朝向的羰基与LYS-320和PHE-321形成了两个氢键，而4-三氟甲基苯基取代基则占据了结合袋的疏水区域。5原子链接上的另一个羰基也与ARG-144和THR-83形成了两个氢键，N-(3-(二甲基氨基)羰基)-2-羟基苯基片段的苯环与LYS-246发生π-π堆积作用，且苯环上的氧原子与LYS-320和SER-81形成了两个氢键。二甲胺基附近的第三个羰基与ARG-153也形成氢键。
实施例5化合物18的抗肿瘤迁移活性试验
(1)划痕愈合实验
将MDA-MB-231细胞接种于96孔板，并融合生长至单层。用10μL无菌移液管针尖在单层细胞上制造划痕，分离的细胞用磷酸盐缓冲盐水冲洗两次。随后分别往细胞中加入0.1％DMSO溶液(空白对照组，Control)、2μM浓度的化合物18的DMSO溶液(给药组)或2μM浓度的SB225002的DMSO溶液(阳性药对照组)。分别在0小时和24小时的时候用100倍显微镜采集图像，并计算细胞迁移率，如图3的A所示。
细胞迁移率％＝1-(24小时的空白区域宽度/0小时的空白区域宽度)％。
(2)Transwell实验
Transwell实验所使用的为孔径为8μm的Tranwell小室。将MDA-MB-231细胞按5×104个细胞/孔的密度植入小室的上室，并用无血清的DMEM培养基培养，之后分别加入0.1％DMSO溶液(空白对照组，Control)、2μM浓度的化合物18的DMSO溶液(给药组)或2μM浓度的SB225002的DMSO溶液(阳性药对照组)。小室的下室浸入含有含10％胎牛血清的DMEM培养基作为化学引诱剂。细胞在37℃条件下迁移24小时后，迁移至下室的细胞用4％的多聚甲醛溶液固定30分钟，并用结晶紫染色15分钟。用棉签擦去上室剩余细胞后，将小室倒置置于100倍显微镜下。随机选取三个区域进行拍照取样，并用Image J软件分析穿过小室滤膜的细胞数量，如图3的B所示。
如图3所示。在划痕愈合实验中，与空白对照的平均细胞迁移率54.0％相比，经过化合物18和SB225002处理后的平均细胞迁移率分别为25.9％和25.8％，分别降低了52.0％和52.3％。同时，Transwell实验进一步验证了化合物18和SB225002的抗肿瘤转移活性，与空白对照组的平均迁移细胞数530个相比，经过化合物18和SB225002处理后Transwell小室内平均迁移细胞数量分别为266和297个，分别减少了49.7％和44.0％。划痕愈合实验和Transwell实验结果表明，化合物18在高转移性的三阴性乳腺癌细胞中具有显著的抗肿瘤转移活性，且活性与CXCR2抑制剂SB225002相当。
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。

Claims (10)

1.一种具有CXCR2抑制活性的小分子抑制剂，其特征在于，其为式I所示化合物，或其药学上可接受的盐或互变异构体；
Figure FDA0003721482740000011
其中，A为式II所示基团或式III所示基团，R为一个或多个苯环上的取代基，选自H、卤素、未取代或卤素取代的C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4炔基；
Figure FDA0003721482740000012
2.根据权利要求1所述的小分子抑制剂，其特征在于，R选自H、2-CH3、3-CH3、4-CH3、4-t-Bu、4-F、4-Cl、4-CF3、4-OCH3、2,4-Cl、3,4-Cl或4-乙炔基。
3.根据权利要求1所述的小分子抑制剂，其特征在于，所述式I所示化合物选自下述任意一种：
Figure FDA0003721482740000013
Figure FDA0003721482740000021
Figure FDA0003721482740000031
。
4.根据权利要求1所述的小分子抑制剂，其特征在于，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐；
所述无机酸盐选自下述任意一种无机酸形成的盐：盐酸、硫酸和磷酸；
所述有机酸盐选自下述任意一种有机酸形成的盐：乙酸、三氟乙酸、丙二酸、柠檬酸和对甲苯磺酸。
5.一种权利要求1至4中任一项所述的小分子抑制剂的制备方法，包括下述步骤：式A所示化合物与N,N-二甲基-3-氨基-2-羟基苯酚在缩合剂以及碱存在下、在溶剂中进行反应，获得式I所示化合物；
Figure FDA0003721482740000041
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述缩合剂选自1-羟基苯并三唑和/或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，所述碱为N,N-二异丙基乙胺，所述溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。
7.权利要求1至4中任一项所述的小分子抑制剂在制备下述产品中的应用：
1)CXC型趋化因子受体(CXCR)抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)真核生物肿瘤细胞转移抑制剂；
4)血管生成抑制剂；
5)预防和/或治疗肿瘤的药物。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，
所述CXC型趋化因子受体(CXCR)为CXCR1或CXCR2；
所述真核生物为哺乳动物；
所述肿瘤细胞为癌细胞；
所述癌细胞为白血病癌细胞、淋巴瘤细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞；
所述白血病癌细胞为人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562；
所述淋巴瘤细胞为人组织细胞淋巴瘤细胞U937；
所述肺癌细胞为人肺癌细胞株HCC827、A549、H1975和PC-9；
所述乳腺癌细胞为人乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-231；
所述卵巢癌细胞为A2780；
所述宫颈癌细胞为人宫颈癌细胞系Hela；
所述人脑胶质瘤细胞为U251；
所述黑色素癌细胞为A375；
所述胶质母细胞瘤细胞为人胶质母细胞瘤细胞A172和人脑星形胶质母细胞瘤细胞U-118MG；
所述鼻咽癌细胞为鼻咽癌细胞株CNE-2；
所述肝癌细胞为人肝癌细胞HepG2；
所述结肠癌细胞为Caco-2和HCT116；
所述肿瘤为癌；
所述癌为白血病、淋巴瘤、肺癌、黑色素癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、鼻咽癌、肝癌、乳腺癌、脑癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌或直肠癌。
9.一种产品，其活性成分为权利要求1至4中任一项所述的小分子抑制剂；其中，所述产品为以下中的至少一种：
1)CXC型趋化因子受体(CXCR)抑制剂；
2)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
3)真核生物肿瘤细胞转移抑制剂；
4)血管生成抑制剂；
5)预防和/或治疗肿瘤的药物。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，
所述CXC型趋化因子受体(CXCR)为CXCR1或CXCR2；
所述真核生物为哺乳动物；
所述肿瘤细胞为癌细胞；
所述癌细胞为白血病癌细胞、淋巴瘤细胞、肺癌细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、人脑胶质瘤细胞、黑色素癌细胞、胶质母细胞瘤细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、睾丸癌细胞、皮肤癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞或直肠癌细胞；
所述白血病癌细胞为人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系K562；
所述淋巴瘤细胞为人组织细胞淋巴瘤细胞U937；
所述肺癌细胞为人肺癌细胞株HCC827、A549、H1975和PC-9；
所述乳腺癌细胞为人乳腺癌细胞MCF-7、T47D和MDA-MB-231；
所述卵巢癌细胞为A2780；
所述宫颈癌细胞为人宫颈癌细胞系Hela；
所述人脑胶质瘤细胞为U251；
所述黑色素癌细胞为A375；
所述胶质母细胞瘤细胞为人胶质母细胞瘤细胞A172和人脑星形胶质母细胞瘤细胞U-118MG；
所述鼻咽癌细胞为鼻咽癌细胞株CNE-2；
所述肝癌细胞为人肝癌细胞HepG2；
所述结肠癌细胞为Caco-2和HCT116；
所述肿瘤为癌；
所述癌为白血病、淋巴瘤、肺癌、黑色素癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、鼻咽癌、肝癌、乳腺癌、脑癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、睾丸癌、皮肤癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌或直肠癌。
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