CN115381966B

CN115381966B - 一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液及其质量检测方法

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Publication number: CN115381966B
Application number: CN202210280890.0A
Authority: CN
Inventors: 许馨文
Original assignee: Guoren Health Pharmaceutical Beijing Co ltd
Current assignee: Guoren Health Pharmaceutical Beijing Co ltd
Priority date: 2022-03-12
Filing date: 2022-03-12
Publication date: 2023-12-01
Anticipated expiration: 2042-03-12
Also published as: CN115381966A

Abstract

本发明提供一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液及其制备方法，同时进一步控制该口服溶液的质量，提供该口服溶液质量检测方法，该检测方法中以口服溶液中葡萄糖降解产物含量的变化考察、评价制剂工艺，并选取最具代表性的降解产物5‑羟甲基糠醛、乙酰丙酸进入产品质量标准，一方面可以有效控制和评价产品的降解程度，更重要的是为临床使用提供更可靠的质量保证。

Description

一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液及其质量检测方法

技术领域

本发明涉及葡萄糖口服溶液制备及质量检测领域，具体涉及一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液制备及其质量检测方法。

背景技术

我国糖尿病患者数较2013年增加1，120万，达1.096亿，根据目前的发展趋势，预计到2040年中国糖尿病患者数将达1.507亿。糖尿病的早期诊断可以预防和延缓长期并发症的发生。目前全球未诊断糖尿病患者达1.928亿，其中81％的患者居住于中低收入国家，非洲的未诊断率最高(66.7％，950万)；但即使是在高收入国家，也有35.8％的患者未被及时诊断为糖尿病。在这些地区应加强筛查和糖尿病风险评分测试。

糖耐量受损显著增加2型糖尿病发病风险，且与心血管疾病的发生紧密相关。2015年全球约有3.18亿(6.7％)成年糖耐量受损患者，其中69.2％的患者来自中低收入国家，50.1％的患者年龄在50岁以下，近1/3的患者年龄在20-39岁。预计2040年糖耐量受损的成人将达到4.82亿，占全球总人口的7.8％。

而口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test，OGTT)是糖尿病筛查和诊断的金标准，因此临床检测数量庞大，一次检测费用约在30-100左右，以患病人群一亿人检测预估，市场规模约为30-100亿，如果再加上特殊人群，糖尿病早期糖耐量异常，孕妇，儿童等，市场规模巨大。

ADA(美国糖尿病学会)制定的“糖尿病医学诊疗标准”中所说的葡萄糖是75g的葡萄糖。在美国，有多家公司提供商品化的GCT和OGTT的饮料，均是FDA认证，例如FisherScientific，MedSupply Partners，Aero-Med等。50g，75g，100g等都是容量为10OZ.的饮料，即296mL。

目前我国该试验中所用的为葡萄糖粉或者使用注射用葡萄糖，通常还需要患者自行配制，而国内通用的医用葡萄糖或者注射液很多其实是一水葡萄糖(C₆H₁₂O₁₂·H₂O)，分子量为198.17。在做OGTT时并需注意到这个换算问题，即按照我国通用的一水葡萄糖来进行计算，理论上的成人75g OGTT试验不应该使用75g，而应该使用(75g/180.16)*198.17＝82.5g！

美国OGTT分为3种葡萄糖(备注：此处及后文提及的美国葡萄糖均为无水葡萄糖)剂量：50g，75g和100g。

孕妇50g葡萄糖试验——GCT

75g与100g葡萄糖耐量试验——OGTT

体重＜43kg青少年的OGTT换算

对于体重小于43kg的青少年，需要使用公式换算减少葡萄糖的使用量，此换算只适用于75g葡萄糖的OGTT。

葡萄糖的需要量(g)＝体重(kg)*1.75g葡萄糖/kg，如果计算结果超过75g，则还是使用75g的葡萄糖。例如：某少年体重40kg，则此少年的葡萄糖需要量＝40*1.75＝70g。

由此可见，现有技术存在以下缺点：1)葡萄糖粉服用时需要患者准备好水，然后打开包装倒入葡萄糖粉溶解，溶解速度与水量有关系(水多溶解快，水少溶解慢)，前期的准备工作繁琐耗时。2)同时葡萄糖粉溶解所需的水量患者自己不容易掌控，水太多了可能延长喝水时间，水太少了葡萄糖溶解不完全或溶解较慢。

发明内容

本发明为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种糖耐量检测试验的所用的葡萄糖口服溶液的制备方法，该口服溶液具有以下优点：

1.节省时间：而葡萄糖口服溶液无需前面的准备工作，能够为患者节省时间。

2.用量准确：本葡萄糖口服溶液是定量服用，用量准确，确保用药安全

3.服用方便：本葡萄糖口服溶液开盖后可以直接服用，患者用药的顺应性好，服用方便。

4.口感好：可以制成不同口味(橙味、草莓味、苹果味、芒果味等)的葡萄糖口服溶液，患者的选择性多，适应性好。

具体的，本发明提供一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液，其含葡萄糖50-100g，枸橼酸0.2-1.5g，苯甲酸钠0.05-0.5g，适量水。

优选的，提供一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液，所述各物质含量为：无水葡萄糖60-80g，无水枸橼酸0.5-1.0g，苯甲酸钠0.09-0.18g，加纯化水至300ml。

进一步优选，所述糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液，所述各物质含量为无水葡萄糖75g，无水枸橼酸0.78g，苯甲酸钠0.15g，适量水，加纯化水至300ml。

同时本发明进一步控制该口服溶液的质量，具体提供该口服溶液质量检测方法，该检测方法中以口服溶液中葡萄糖降解产物含量的变化考察、评价制剂工艺，并选取最具代表性的降解产物5-羟甲基糠醛、乙酰丙酸进入产品质量标准，一方面可以有效控制和评价产品的降解程度，更重要的是为临床使用提供更可靠的质量保证。

进一步提供一种葡萄糖口服溶液的质量检测方法，其主要检测5-羟甲基糠醛的限度为0.02％，并同时控制5-羟甲基糠醛的降解产物乙酰丙酸、甲酸。

所述葡萄糖口服溶液的质量检测方法，其采用高效液相色谱法，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱、辛烷基键合硅胶柱；流动相：水相和有机相，所述水相为磷酸盐缓冲液、磷酸缓冲液、乙酸盐缓冲液，所述有机相为甲醇或乙腈。

进一步的，所述缓冲盐的浓度优选为0.05mol/L磷酸二氢钾、0.2％磷酸、0.15％磷酸、0.25％磷酸。

同时本发明提供一种葡萄糖口服溶液的制备方法，其特征在于：①称量：量取全量体积80％的纯化水，称取处方量的无水葡萄糖、无水枸橼酸、苯甲酸钠，备用；

②配液：依次将处方量的无水葡萄糖、无水枸橼酸、苯甲酸钠加入到全量体积80％量的纯化水中，搅拌使溶解，补加纯化水至全量；

③过滤：分别用0.45μm和0.22μm聚醚砜材质的滤膜先后过滤。取中间体溶液检测性状、pH值和含量；

④灌装：根据含量计算理论装量，灌入聚丙烯瓶中，封口；

⑤全检：按质量标准草案进行全检。

进一步的本发明提供所述葡萄糖口服溶液在制备糖耐量检测试验所用的组合物中的应用。

相比已有的技术，本专利主要取得了如下改进：

1、处方组成参考美国上市产品，因本品主要用于孕妇的糖耐量检测试验，因此去掉了美国上市产品中的色素与香精，保证了孕妇用药的依从性和安全性。

2、本品采用溶液直接灌装的工艺进行样品制备，未进行灭菌，可以保证产品的质量及稳定性与美国上市产品一致。

3、本品处方中加入了苯甲酸钠作为抑菌剂，可以保证产品的微生物限度在效期内符合质量标准规定。

3、选取最具代表性的降解产物5-羟甲基糠醛、乙酰丙酸进入产品质量标准，一方面可以有效控制和评价产品的降解程度，质量标准比较严格，产品质量可以得到较好的控制。

附图说明：

图1：乙酸铵溶液-乙腈(90∶10)色谱分离图

图2：磷酸二氢钾-甲醇(95∶5)分离色谱图

图3：磷酸二氢钾-甲醇(93∶7)分离色谱图

图4：0.2％磷酸-甲醇(梯度洗脱)分离色谱图

具体实施方式

实施例1：50g无水葡萄糖口服溶液

50g无水葡萄糖量的糖耐量检测试验的葡萄糖口服溶液，其配方如下：

实施例2：75g无水葡萄糖口服溶液

75g无水葡萄糖量的糖耐量检测试验的葡萄糖口服溶液，其配方如下：

实施例3：100g无水葡萄糖口服溶液

100g无水葡萄糖量的糖耐量检测试验的葡萄糖口服溶液，其配方如下：

2.同时本发明提供所述葡萄糖口服溶液的制备工艺：

①称量：量取全量体积80％的纯化水，称取处方量的无水葡萄糖、无水枸橼酸、苯甲酸钠，备用。

②配液：依次将处方量的无水葡萄糖、无水枸橼酸、苯甲酸钠加入到全量体积80％量的纯化水中，搅拌使溶解，补加纯化水至全量。

③过滤：分别用0.45μm和0.22μm聚醚砜材质的滤膜先后过滤。取中间体溶液检测性状、pH值和含量。

④灌装：根据含量计算理论装量，灌入聚丙烯瓶中，封口。

⑤全检：按质量标准草案进行全检。

3.进一步提供一种葡萄糖口服溶液的质量检测方法，其主要检测5-羟甲基糠醛(其是葡萄糖脱水生成的化学物质)，并同时控制5-羟甲基糠醛的降解产物乙酰丙酸，经发明人检索该方法是本研究人员首次提出的，并付出了创造性劳动所得到，对该口服溶液的质量控制具有重要作用。

所述葡萄糖口服溶液的质量检测方法，其采用高效液相色谱法，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：缓冲盐溶液和有机相，所述缓冲盐溶液为磷酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液，所述有机相为甲醇或乙腈。

通常本领域技术人员知晓，在质量检测方法的筛选试验中，流动相的结构组成对于分离物质的检测起到决定性的重要作用，因此，研究人员重点对各相关参数进行了筛选试验。其中葡萄糖口服溶液的流动相的选择试验如下：

3.1选用流动相：乙酸铵溶液-乙腈(90∶10)

色谱柱：Inertsil ODS-SP(4.6*250mm，5μm)

流动相：0.02mol/L乙酸铵溶液-乙腈(90∶10)

检测波长：224nm、284nm、215nm

流速：1.0ml/min

进样量：10μl

柱温：30℃

b.溶液配制

空白溶剂：水

样品配制：精密量取本发明的葡萄糖口服溶液2.0ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀后即得。

c.测定结果(说明书附图：图1：乙酸铵溶液-乙腈(90∶10)色谱分离图)

结论：从上述结果中可以看出，甲酸、无水葡萄糖不出峰，故需继续筛选方法及色谱条件。

3.2选用流动相：磷酸二氢钾-甲醇(95∶5)

a.色谱条件

色谱柱：Phenomenex Prodigy^TM LC Colum ODS C18(4.6×150mm，5μm)

检测波长：284nm

流动相：0.05mol/L pH2.8磷酸二氢钾-甲醇(95∶5)

流速：1.0ml/min

进样量：50μl

c.测定结果

乙酰丙酸与5-羟甲基糠醛分离情况良好

结论：从实验结果来看，乙酰丙酸色谱峰保留时间为6.6min，5-羟甲基糠醛色谱峰保留时间为9.7min，在此色谱条件下，乙酰丙酸与5-羟甲基糠醛分离情况良好。此方法可作为乙酰丙酸与5羟甲基糠醛检测方法。(说明书附图：图2：磷酸二氢钾-甲醇(95∶5)色谱分离图)

3.3选用流动相：磷酸二氢钾-甲醇(93∶7)

色谱柱：Phenomenex Prodigy^TM LC Colum ODS C18(4.6×150mm，5μm)

检测波长：215nm

流动相：0.05mol/L pH2.8磷酸二氢钾-甲醇(93∶7)

流速：1.0ml/min

进样量：50μl

b.溶液配制

空白溶剂：0.05mol/L pH2.0磷酸二氢钾-甲醇(93∶7)。

甲酸：精密称取甲酸约25mg置100ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为甲酸对照溶液。

c.测定结果

空白溶剂对甲酸检测无干扰

结论：空白溶剂不干扰甲酸检测，较好的分离。(说明书附图：图3：磷酸二氢钾-甲醇(93∶7)色谱分离图)

3.4选用流动相：流动相A：0.2％磷酸，流动相B：甲醇

按下表进行梯度洗脱：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	80	20
10	80	20
			10.01	60	40
30	60	40

色谱柱：GL Sciences Inertsil ODS-SP 5μm 4.6×250mm(UP)

检测波长：215nm

流速：1.0ml/min

进样量：20μl

b.溶液配制

空白溶剂：水。

5-羟甲基糠醛母液：精密称取5-羟甲基糠醛对照品约12.5mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

甲酸母液：精密称取甲酸对照品约125mg，置已预先加入适量水的50ml量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

乙酰丙酸母液：精密称取乙酰丙酸对照品约50mg，置已预先加入适量水100ml量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，即得。

苯甲酸钠母液：精密称取苯甲酸钠约30mg，置10ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

枸橼酸母液：精密称取无水枸橼酸约75mg，置10ml量瓶中，加水溶解并定量稀释至刻度，摇匀，即得。

系统适用性溶液：精密量取5-羟甲基糠醛母液1ml、甲酸母液2.5ml、乙酰丙酸母液2.5ml、枸橼酸母液2.5ml、苯甲酸钠母2.5ml，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

c.测定结果

空白溶剂对甲酸、乙酰丙酸、5-羟甲基糠醛、枸橼酸、苯甲酸钠检测无干扰，系统适用性分离度良好。

结论：从实验结果来看，在此色谱条件下，空白溶剂不干扰甲酸、乙酰丙酸、5-羟甲基糠醛的检测，系统适用性分离情况良好。此方法可作为葡萄糖口服溶液有关物质的检测方法。(说明书附图：图4：0.2％磷酸-甲醇(梯度洗脱)色谱分离图)

同时研发人员采用磷酸二氢钾-甲醇(95∶5)进行了分离，取得较好的分离检测效果。汇总以上涉及3种不同比例的磷酸二氢钾-甲醇部分实验结果，如下：

进一步的研发人员还选择KH₂PO₄-乙腈作为流动相进行了分离，并相应改变部分流动相的配比；同时还对磷酸水溶液-甲醇体系进行研究，适当更换色谱柱、流动相初始比例、柱温、流速、磷酸水溶液浓度，其中磷酸水溶液-甲醇体系试验以3.3项下色谱条件为标准条件，进行色谱条件耐用性试验，实验结果对比如下：

由上表可知，采用KH₂PO₄-甲醇97∶3-80∶20以及KH₂PO₄-乙腈95∶5-85∶15时葡萄糖口服溶液中5-羟甲基糠醛、乙酰丙酸能够较好的分离。

3.3项下色谱条件作为标准条件结果汇总如下：

由上表可知1：在标准条件下流速由0.2ml/min至1.2ml/min，柱温25℃至35℃，流动相A中磷酸浓度由0.15％到0.25％，流动相A-流动相B初始比例由99∶1至80∶20条件下系统适用性良好。

2：将标准条件下流动相B更换为乙腈，在0.2ml/min、流动相A-流动相B初始比例95∶5至99∶1条件下系统适用性良好。

3：Ultimate AQ-C18 4.6×250mm 5μm和Agilent ZORBAX SB-C18 4.6×250mm 5μm在标准色谱条件，系统适用性良好。

4.Agilent SB-C8 4.6×250mm，5μm色谱柱在标准条件下、柱温由25℃至40℃、流速由0.2ml/min至1.2ml/min、流动相A-流动相B初始比例95∶5至80∶20条件下，系统适用性良好。

5.Waters Symmety C18 4.6×250mm 5μm及Phenomenex Gemini C18 4.6×250mm5μm色谱柱系统适用性差。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式或变更均应包含在本发明的保护范围之内。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims

1.一种糖耐量检测试验用的葡萄糖口服溶液的质量检测方法，其主要检测5-羟甲基糠醛的限度为0.2％，并同时控制5-羟甲基糠醛的降解产物乙酰丙酸、甲酸，其中所述葡萄糖口服溶液组成如下：

无水葡萄糖60-80g，无水枸橼酸0.5-1.0g，苯甲酸钠0.09-0.18g，加纯化水至300ml；其特征在于采用高效液相色谱法，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相组成为：流动相A为0.15％-0.25％磷酸，流动相B为甲醇；采用如下的梯度洗脱方法：

。

2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于；其中流动相A为0.2％磷酸。

3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于：流速为0.2ml/min至1.2ml/min，柱温25℃至35℃。