CN115368329B - 二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 - Google Patents
二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115368329B CN115368329B CN202110544573.0A CN202110544573A CN115368329B CN 115368329 B CN115368329 B CN 115368329B CN 202110544573 A CN202110544573 A CN 202110544573A CN 115368329 B CN115368329 B CN 115368329B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- component
- eluting
- methanol
- collecting
- volume
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 35
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229930003839 sesquiterpene dimer Natural products 0.000 claims abstract description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 126
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 claims description 16
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 15
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 14
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 12
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 11
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 6
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 6
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 4
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims description 2
- 230000000078 anti-malarial effect Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 11
- 240000004274 Sarcandra glabra Species 0.000 description 8
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 6
- 235000010842 Sarcandra glabra Nutrition 0.000 description 6
- 229960004191 artemisinin Drugs 0.000 description 5
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 description 5
- BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N artemisinin Chemical compound C([C@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2OC(=O)[C@@H]4C BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N 0.000 description 5
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 4
- 241000736026 Sarcandra Species 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 3
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 241000758719 Chloranthaceae Species 0.000 description 2
- 238000005698 Diels-Alder reaction Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- KBMSVODXFLAQNJ-DXGHHDSJSA-N Linderane Chemical compound C1=2C(C)=COC=2C\C(C)=C\CC[C@@]23C(=O)O[C@@H]1[C@@H]2O3 KBMSVODXFLAQNJ-DXGHHDSJSA-N 0.000 description 2
- KBMSVODXFLAQNJ-ZEBDJQDSSA-N Linderane Natural products O=C1O[C@@H]2[C@@H]3O[C@]13CC/C=C(/C)\Cc1occ(C)c21 KBMSVODXFLAQNJ-ZEBDJQDSSA-N 0.000 description 2
- 241000223810 Plasmodium vivax Species 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- OFUFXTHGZWIDDB-UHFFFAOYSA-N 2-chloroquinoline Chemical compound C1=CC=CC2=NC(Cl)=CC=C21 OFUFXTHGZWIDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256186 Anopheles <genus> Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 244000270084 Chloranthus brachystachys Species 0.000 description 1
- 241000307676 Diploprion bifasciatum Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- VGAJNILINWUWOP-UHFFFAOYSA-N Eudesmane Natural products COC(=O)C(=C)C1C(O)C2C(=O)CCC(O)C2(C)CC1OC(=O)C(=C)CO VGAJNILINWUWOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035500 Plasmodium falciparum infection Diseases 0.000 description 1
- 206010035503 Plasmodium vivax infection Diseases 0.000 description 1
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- DUEPRVBVGDRKAG-UHFFFAOYSA-N carbofuran Chemical compound CNC(=O)OC1=CC=CC2=C1OC(C)(C)C2 DUEPRVBVGDRKAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- DYEQPYSFRWUNNV-APIJFGDWSA-N eudesmane Chemical compound C1CC[C@@H](C)[C@@H]2C[C@H](C(C)C)CC[C@]21C DYEQPYSFRWUNNV-APIJFGDWSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000005311 nuclear magnetism Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/94—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom spiro-condensed with carbocyclic rings or ring systems, e.g. griseofulvins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/10—Spiro-condensed systems
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了如下的二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途。所述二聚倍半萜类化合物化学结构新颖、抗疟疾生物活性显著，具有很好的开发前景，有望发展成为新型的无交叉耐药性抗疟药物。
Description
技术领域
本发明属于天然药物制备领域，涉及二聚倍半萜类化合物，其制备方法及其在制备抗疟疾药物中的用途。
背景技术
疟疾是一种由疟原虫造成的，通过以按蚊为主要媒介传播的全球性急性寄生虫传染病，是全球三大传染病之一，严重危害人类健康、社会安定以及经济发展。据世界卫生组织《2019年世界疟疾报告》显示，全世界估计有2.29亿疟疾病例，导致超过40万人死亡，其中5岁以下儿童占比高达67％。在5种致病疟原虫中，以恶性疟原虫(Plasmodium.faleiparum)和间日疟原虫(P.vivax)最为常见，其中又以恶性疟原虫危害最大。虽然疟疾的患病率以及死亡率有了明显的降低，但是在非洲等地区，收入少，医疗水平低下，疟疾防治仍是一大挑战。由于缺少有效的疫苗，目前青蒿素联合治疗法仍是治疗疟疾的最有效手段。然而，随着恶性疟原虫对青蒿素在内的一线抗疟药都产生了临床耐药性，抗疟工作受阻，急需新型的无交叉耐药性抗疟药物。
天然产物是发现治疗重大疾病的药物或先导结构的重要来源。我国对疟疾的认识和治疗有着长久的历史，早在公元2000年前，《黄帝内经素问》中的《疟论篇》和《刺论篇》就对疟疾的病因、症状以及治疗方法进行了专篇论述。青蒿素的发现为世界抗疟工作作出了巨大贡献，也表明从传统药用植物的用途入手，以活性为导向分离提取有效成分，是药物候选物或先导结构的重要来源。
草珊瑚属(Sarcandra)隶属于金粟兰科(Chloranthaceae)，全世界仅有3种，我国有草珊瑚(S.glabra)和海南草珊瑚(S.glabra subsp.brachystachys)两种。海南草珊瑚为我国特有种，主要产于云南、海南和广东，多生长于山坡、沟谷林下荫湿处。
发明内容
本发明人对海南草珊瑚的化学成分进行了系统的研究，发现了一类二聚倍半萜类化合物，并且活性测试显示具有显著抗疟疾作用。一方面，本发明通过对金粟兰科草珊瑚属植物―海南草珊瑚的乙醇提取物进行化学成分研究，提供了一类结构新颖的二聚倍半萜类化合物，包括下述8个结构新颖的二聚倍半萜类化合物：
其中，化合物1-6的结构是两分子乌药烷型倍半萜单体通过endo Diels-Alder环加成形成的二聚体，化合物7和8的结构是一分子乌药烷型倍半萜单体和一分子桉叶烷型倍半萜单体通过endo Diels-Alder环加成形成的二聚体。
本发明另一方面提供一种制备所述二聚倍半萜类化合物的方法，所述方法可以从金粟兰科草珊瑚属植物草珊瑚中分离得到所述二聚倍半萜类化合物，包括如下步骤：
(1)对草珊瑚的全草粉末用乙醇水溶液在室温下提取，减压浓缩提取液得到浸膏；
(2)向步骤(1)得到的浸膏中加入水稀释，然后用乙酸乙酯萃取，有机相经减压浓缩后得到粗提物；
(3)将步骤(2)得到的粗提物经过大孔树脂柱，用体积分数30％、50％、80％、95％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集体积分数50％的乙醇水溶液洗脱得到的组分A，收集体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱得到的组分B；将组分A和组分B分别经过MCI柱，用体积比依次为3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇与水的混合溶液进行梯度洗脱，收集由组分A用体积比5:5和6:4的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分A2，收集由组分A用体积比8:2和9:1的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分A4，收集由组分B用体积比9:1的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分B3；
(4)组分A2经硅胶柱层析，使用体积比100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比70:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分A2b；
组分A2b经凝胶柱层析纯化后进一步用半制备型HPLC纯化，用体积分数35％乙腈水溶液等度洗脱，得到化合物6；
(5)组分A4经硅胶柱层析，使用体积比500:1、100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比50:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分A4e；
组分A4e经凝胶柱层析纯化后用半制备型HPLC纯化，用体积分数45％乙腈水溶液等度洗脱，得到化合物5和8；
(6)组分B3经硅胶柱层析，用体积比10:1、8:1、6:1、5:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3的石油醚与丙酮的混合溶剂进行梯度洗脱后，收集体积比2:1和1:1石油醚与丙酮的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h；
组分B3h经凝胶柱层析纯化，用乙醇洗脱，根据TLC点板监测，按洗脱时间顺序，分为四个组分B3h1～B3h4；
组分B3h1使用体积比100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比50:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h1b；
组分B3h1b进一步用半制备型HPLC纯化，用体积分数55％乙腈水溶液等度洗脱，得到化合物2和4；
组分B3h3使用体积比100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比70:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h3b；
组分B3h3b经凝胶柱层析纯化，用甲醇洗脱，根据TLC点板监测，按洗脱时间顺序，分为两个组分B3h3b1和B3h3b2；
组分B3h3b1通过半制备HPLC纯化，用体积分数55％乙腈水溶液等度洗脱得到化合物1和7；
组分B3h3b2通过半制备HPLC纯化，用体积分数65％甲醇水溶液等度洗脱得到化合物3。
在上述方法中，步骤(1)中所述的乙醇水溶液可以为70％v/v以上的乙醇水溶液，优选为85％v/v以上的乙醇水溶液，更特别为95％v/v以上的乙醇水溶液；室温提取的时间没有特殊限制，例如可以为4小时以上，10小时以上，或24小时以上；提取可以进行一次或多次，例如1、2、3次或3次以上。
对上述化合物1–8进行了抗疟疾活性筛选，具体活性数据见表4。所述化合物化学结构新颖、生物活性显著，具有很好的开发前景，有望发展成为新型的无交叉耐药性抗疟药。
本发明另一方面提供了一种药物组合物，其包含选自上述二聚倍半萜类化合物中的一种或多种作为活性成分，任选地，该组合物可以进一步包括药剂学上可接受的药物辅料，例如载体、赋形剂、佐剂和/或稀释剂等。所述药物组合物可以用作抗疟疾药物。
本发明另一方面还提供了所述二聚倍半萜类化合物或药物组合物在制备抗疟疾药物中的用途。
本发明再一方面还提供了一种治疗疟疾的方法，其包括向需要该治疗的患者给药选自上述二聚倍半萜类化合物中的一种或多种作为抗疟疾活性成分，或者上述药物组合物。
在上文中已经详细地描述了本发明，但是上述实施方式本质上仅是例示性，且并不欲限制本发明。此外，本文并不受前述现有技术或发明内容或以下实施例中所描述的任何理论的限制。
除非另有明确说明，在整个申请文件中的数值范围包括其中的任何子范围和以其中给定值的最小子单位递增的任何数值。除非另有明确说明，在整个申请文件中的数值表示对包括与给定值的微小偏差以及具有大约所提及的值以及具有所提及的精确值的实施方案的范围的近似度量或限制。除了在详细描述最后提供的工作实施例之外，本申请文件(包括所附权利要求)中的参数(例如，数量或条件)的所有数值在所有情况下都应被理解为被术语“大约”修饰，不管“大约”是否实际出现在该数值之前。“大约”表示所述的数值允许稍微不精确(在该值上有一些接近精确；大约或合理地接近该值；近似)。如果“大约”提供的不精确性在本领域中没有以这个普通含义来理解，则本文所用的“大约”至少表示可以通过测量和使用这些参数的普通方法产生的变化。例如，“大约”可以包括小于或等于10％，小于或等于5％，小于或等于4％，小于或等于3％，小于或等于2％，小于或等于1％或者小于或等于0.5％的变化。
具体实施方式
以下通过具体实施例来进一步说明本发明化合物的制备步骤和药理实验过程。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限定本发明的范围，本领域的技术人员可以对此作出种种修改和变化，在不背离本发明的精神和范围的情况下，所有这些修改都涵盖在所附的权利要求书限定的本发明范围内。
实验仪器和试剂：
仪器和设备：红外：Scientific Nicolet iS 5傅立叶变换红外光谱仪(KBr晶片)；紫外：shimadzu UV-2550紫外-可见分光光度计；旋光：Autopol VI旋光仪；核磁：BrukerAvance III500/600核磁共振色谱仪，以TMS为内标；质谱：LR(±)ESI质谱，BrukerDaltonics Esquire 3000plus型质谱仪；HRESI(±)MS，Waters Q-TOF Ultima Global型质谱仪；半制备HPLC：Waters1525双泵，Waters 2489检测器(210nm)，YMC-Pack ODS-A色谱柱(250×10mm，S-5μm，12nm)。
试剂和材料：预制TLC硅胶板(GF254)和层析硅胶：使用200-300和300-400目硅胶为载体，青岛海洋化学股份有限公司；D101大孔树脂：上海华凌树脂有限公司；CHP20P MCIgel(75–150μM)：三菱化工有限公司；Sephadex LH-20凝胶：Amersham Biosciences；分析纯溶剂：国药集团化学试剂有限公司；HPLC级溶剂：百灵威科技有限公司。
实施例1本发明中化合物1-8的制备
干燥的海南草珊瑚全草粉末(8Kg)用95％乙醇室温提取3次，减压浓缩提取液得到500g浸膏，用适量蒸馏水稀释后用乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯部位经减压浓缩后得到250g粗提物，该部分经大孔树脂柱梯度洗脱(洗脱液为体积分数依次为30％、50％、80％、95％的乙醇水溶液)后，收集体积分数为50％的乙醇水溶液洗脱得到的组分A(60g)，收集体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱得到的组分B(65g)，组分A和组分B分别经MCI柱梯度洗脱(洗脱液为体积比依次为3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇与水的混合溶液)，收集由组分A用体积比5:5和6:4的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分A2(8g)，收集由组分A用体积比8:2和9:1的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分A4(10g)，收集由组分B用体积比9:1的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分B3(15g)。
组分A2(8g)经硅胶柱层析(200～300目)(氯仿/甲醇(v/v)：100:1、70:1、50:1、20:1、10:1)梯度洗脱后，收集体积比70:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分A2b。组分A2b(800mg)经凝胶柱层析(Sephadex LH-20，乙醇洗脱)纯化后进一步用半制备型HPLC纯化(体积分数35％乙腈水溶液等度洗脱)得到化合物6(1.5mg)。
组分A4(10g)经硅胶柱层析(200-300目)(氯仿/甲醇(v/v)：500:1、100:1、70:1、50:1、20:1、10:1)梯度洗脱后，收集体积比50:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分A4e。组分A4e(400mg)经凝胶柱层析(Sephadex LH-20，甲醇洗脱)纯化后进一步用半制备型HPLC纯化(体积分数45％乙腈水溶液等度洗脱)得到化合物5(5.1mg)和8(2.0mg)。
组分B3(15g)通过硅胶柱层析(200～300目)(石油醚/丙酮(v/v)：10:1、8:1、6:1、5:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3)梯度洗脱，收集体积比2:1和1:1的石油醚与丙酮的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h。组分B3h(2g)经凝胶柱层析纯化，用乙醇洗脱，按洗脱时间顺序，根据TLC点板监测，分为四个组分B3h1～B3h4。
组分B3h1(500mg)经硅胶柱层析(300～400目)(氯仿/甲醇(v/v)：100:1、70:1、50:1、20:1、10:1)梯度洗脱，收集体积比50:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h1b。
组分B3h1b(50mg)最后经半制备HPLC纯化(体积分数55％乙腈水溶液等度洗脱)得到化合物2(8.1mg)和4(2.1mg)。
组分B3h3(400mg)经硅胶柱层析(300～400目)(氯仿/甲醇(v/v)：100:1、70:1、50:1、20:1、10:1)梯度洗脱，收集体积比70:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h3b。
组分B3h3b(150mg)经凝胶柱层析纯化，用甲醇洗脱，按洗脱时间顺序，根据TLC点板监测，分为两个组分B3h3b1和B3h3b2。
组分B3h3b1(30mg)通过半制备HPLC纯化，用体积分数55％乙腈水溶液等度洗脱得到化合物1(1.2mg)和7(10.2mg)。
组分B3h3b2(17mg)通过半制备HPLC纯化，用体积分数65％甲醇水溶液等度洗脱得到化合物3(3.0mg)。
化合物的部分物理和化学数据如下：
表1.本发明中化合物1–4的1HNMR(CDCl3)数据
a用600MHz核磁共振仪测量；b用500MHz核磁共振仪测量。
表2.本发明中化合物5–8的1HNMR(600MHz,CDCl3)数据
表3.本发明中化合物1–8的13CNMR(CDCl3)数据
*在相应纵栏中信号可互换；a用125MHz核磁共振仪测量；b用150MHz核磁共振仪测量。
实施例2本发明化合物的抗疟疾活性测试
实验原理：
抗疟实验：对恶性疟原虫(P.falciparum)氯喹啉耐药株系Dd2的剂量-依赖性的生长抑制作用测定是参考现有技术中的方法，即用稍加修改的基于疟疾SYBR Green I的荧光法来测试疟原虫在抑制剂存在下72小时的生长情况，以青蒿素作为阳性对照。操作方法可简单表述为：取疟原虫环状体时期培养基置于96孔板中，加入不同浓度的药液，以实现每孔总容积为100μL，含有1％hematocrit(红细胞血液)和1％parasitaemia(寄生虫感染的血液)。随后将96孔板维持在由5％CO2、5％O2和90％N2组成的混合气体中，在37℃条件下培养72h。72小时候后，培养基中的疟原虫的生存率是通过SYBR Green I荧光检测法测定DNA含量来得到的。半数有效浓度(half-maximum effective concentration,EC50)是使用GraphPad Prism(GraphPad Software,Inc.)软件进行非线性回归曲线拟合，报告的数据是对至少三次平行试验结果的平均值，采用10倍系列稀释法进行测试，给出标准误值(Standard Error of Mean,SEM)。
表4.本发明中化合物1–8的抗疟疾活性结果
本发明中化合物的抗疟疾活性数据如表4所示。其中化合物1的抗疟疾活性非常显著，EC50为0.0043±0.0003nM，比青蒿素(4.0±4.2nM)的活性强1000倍。
Claims (6)
1.选自如下化合物的二聚倍半萜类化合物：
2.一种二聚倍半萜类化合物的制备方法，所述二聚倍半萜类化合物选自以下化合物：
所述制备方法包括如下步骤：
(1)对草珊瑚的全草粉末用乙醇水溶液在室温下提取，减压浓缩提取液得到浸膏；
(2)向步骤(1)得到的浸膏中加入水稀释，然后用乙酸乙酯萃取，有机相经减压浓缩后得到粗提物；
(3)将步骤(2)得到的粗提物经过大孔树脂柱，用体积分数30％、50％、80％、95％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，收集体积分数50％的乙醇水溶液洗脱得到的组分A，收集体积分数为80％的乙醇水溶液洗脱得到的组分B；将组分A和组分B分别经过MCI柱，用体积比依次为3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇与水的混合溶液进行梯度洗脱，收集由组分A用体积比5:5和6:4的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分A2，收集由组分A用体积比8:2和9:1的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分A4，收集由组分B用体积比9:1的甲醇与水的混合溶液洗脱得到的组分B3；
(4)组分A2经硅胶柱层析，使用体积比100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比70:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分A2b；
组分A2b经凝胶柱层析纯化后进一步用半制备型HPLC纯化，用体积分数35％乙腈水溶液等度洗脱，得到化合物6；
(5)组分A4经硅胶柱层析，使用体积比500:1、100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比50:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分A4e；
组分A4e经凝胶柱层析纯化后用半制备型HPLC纯化，用体积分数45％乙腈水溶液等度洗脱，得到化合物5和8；
(6)组分B3经硅胶柱层析，用体积比10:1、8:1、6:1、5:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3的石油醚与丙酮的混合溶剂进行梯度洗脱后，收集体积比2:1和1:1石油醚与丙酮的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h；
组分B3h经凝胶柱层析纯化，用乙醇洗脱，按洗脱时间顺序，根据TLC点板监测，分为四个组分B3h1～B3h4；
组分B3h1使用体积比100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比50:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h1b；
组分B3h1b进一步用半制备型HPLC纯化，用体积分数55％乙腈水溶液等度洗脱，得到化合物2和4；
组分B3h3使用体积比100:1、70:1、50:1、20:1、10:1的氯仿与甲醇的混合溶剂进行梯度洗脱，收集体积比70:1的氯仿与甲醇的混合溶剂洗脱的洗脱液得到组分B3h3b；
组分B3h3b经凝胶柱层析纯化，用纯甲醇洗脱，按洗脱时间顺序，根据TLC点板监测，分为两个组分B3h3b1和B3h3b2；
组分B3h3b1通过半制备HPLC纯化，用体积分数55％乙腈水溶液等度洗脱得到化合物1和7；
组分B3h3b2通过半制备HPLC纯化，用体积分数65％甲醇水溶液等度洗脱得到化合物3。
3.一种药物组合物，其包含选自权利要求1所述二聚倍半萜类化合物的一种或多种作为活性成分。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其进一步包括药剂学上可接受的药物辅料。
5.如权利要求3或4所述的药物组合物，其为抗疟疾药物。
6.权利要求1所述的二聚倍半萜类化合物或权利要求3或4所述的药物组合物用于制备抗疟疾药物的用途。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110544573.0A CN115368329B (zh) | 2021-05-19 | 2021-05-19 | 二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 |
| PCT/CN2022/093207 WO2022242620A1 (zh) | 2021-05-19 | 2022-05-17 | 二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110544573.0A CN115368329B (zh) | 2021-05-19 | 2021-05-19 | 二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115368329A CN115368329A (zh) | 2022-11-22 |
| CN115368329B true CN115368329B (zh) | 2023-11-28 |
Family
ID=84058238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110544573.0A Active CN115368329B (zh) | 2021-05-19 | 2021-05-19 | 二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115368329B (zh) |
| WO (1) | WO2022242620A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117327042B (zh) * | 2023-12-01 | 2024-02-02 | 四川省中医药科学院 | 一种规模化制备8,8″-亚甲基-双射干苷元-5′-磺酸钠的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107865865A (zh) * | 2016-09-23 | 2018-04-03 | 中国科学院上海药物研究所 | 一类乌药烷型二聚倍半萜类化合物在制备抗疟药物中的用途 |
| CN107868068A (zh) * | 2016-09-23 | 2018-04-03 | 中国科学院上海药物研究所 | 一类乌药烷型二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101671346B (zh) * | 2009-10-13 | 2012-05-02 | 中国科学院昆明植物研究所 | 乌药烷型二聚倍半萜类化合物,其制备方法及其在制药中的应用 |
-
2021
- 2021-05-19 CN CN202110544573.0A patent/CN115368329B/zh active Active
-
2022
- 2022-05-17 WO PCT/CN2022/093207 patent/WO2022242620A1/zh unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107865865A (zh) * | 2016-09-23 | 2018-04-03 | 中国科学院上海药物研究所 | 一类乌药烷型二聚倍半萜类化合物在制备抗疟药物中的用途 |
| CN107868068A (zh) * | 2016-09-23 | 2018-04-03 | 中国科学院上海药物研究所 | 一类乌药烷型二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| esquiterpenes from Chloranthus japonicus;Qiu-Hong Wang等;J. Nat. Prod.;第74卷(第1期);第16-20页 * |
| Fortunoids A−C, Three Sesquiterpenoid Dimers with Different Carbon Skeletons from Chloranthus fortunei;Bin Zhou等;Org. Lett.;第19卷;第734-737页 * |
| Qiu-Hong Wang等.esquiterpenes from Chloranthus japonicus.J. Nat. Prod..2010,第74卷(第1期),第16-20页. * |
| 全缘金粟兰及草珊瑚的化学成分研究;徐丽丽;中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生特辑(第8期);第10页 * |
| 徐丽丽.全缘金粟兰及草珊瑚的化学成分研究.中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生特辑.2016,(第8期),第10页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115368329A (zh) | 2022-11-22 |
| WO2022242620A1 (zh) | 2022-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bilia et al. | Simultaneous analysis of artemisinin and flavonoids of several extracts of Artemisia annua L. obtained from a commercial sample and a selected cultivar | |
| Fan et al. | Anti-inflammatory, antiviral and quantitative study of quercetin-3-O-β-D-glucuronide in Polygonum perfoliatum L. | |
| CN107868068B (zh) | 一类乌药烷型二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 | |
| Zhang et al. | Anticomplementary principles of a Chinese multiherb remedy for the treatment and prevention of SARS | |
| US8951581B2 (en) | Bioactive water fraction from Gomphostema niveum | |
| CN104370871B (zh) | 从紫红獐牙菜中分离的口山酮类及抑制乙型肝炎病毒的应用 | |
| CN115368329B (zh) | 二聚倍半萜类化合物、其制备方法及用途 | |
| CN106008502A (zh) | 马齿苋中新骨架生物碱化合物及其提取分离方法 | |
| CN109942649B (zh) | 一种吲哚苷类化合物及其提取分离方法和应用 | |
| CA2982200C (en) | Phillygenin glucuronic acid derivative as well as preparation method and application thereof | |
| US7854946B1 (en) | Anti-inflammatory and anti-HIV compositions and methods of use | |
| CN106083556A (zh) | 马齿苋中甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法 | |
| CN113717105B (zh) | 一种二萜生物碱型化合物及其提取方法和应用 | |
| CN105503979B (zh) | 一种化合物及其制备方法和应用 | |
| CN113499337A (zh) | 苦参酮在制备抗水产病原菌药物或饲料添加剂中的应用 | |
| CN111983095A (zh) | 一种菊花中五种重要药用成分含量的uplc-ms/uv检测方法 | |
| CN114668773B (zh) | 重楼提取物在抗克里米亚刚果出血热病毒中的应用 | |
| CN113880820B (zh) | 丁烯内酯衍生物及其应用以及一种药物组合物 | |
| CN114617922B (zh) | 黑果枸杞在制备抗神经退行性疾病药物中的应用 | |
| Cai et al. | Simultaneous determination of ten active components in 12 Chinese Piper species by HPLC | |
| CN112321479B (zh) | 一种桑寄生中具有抑菌活性的吲哚-4-甲醛化合物、制备方法及其应用 | |
| CN115403550B (zh) | 一种蜂房活性成分的制备和分析方法 | |
| CN114853712B (zh) | 一种色烷型或色烯型杂萜类化合物及其提取方法和应用 | |
| CN110393712B (zh) | 从大麻叶泽兰中提取的抗肿瘤有效部位及其制备方法和应用 | |
| CN105646427A (zh) | 一种盐酸金刚烷胺的药物组合物及其医药用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |