CN115364025B

CN115364025B - 一种具有头皮护理功效的组合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN115364025B
Application number: CN202211030885.0A
Authority: CN
Inventors: 钟佩群; 宋伟东; 何嫦娥
Original assignee: Zhuhai Siyu Biotechnology Co ltd
Current assignee: Zhuhai Siyu Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-08-26
Filing date: 2022-08-26
Publication date: 2023-03-21
Anticipated expiration: 2042-08-26
Also published as: CN115364025A

Abstract

本发明涉及日用化妆品领域，具体涉及一种具有头皮护理功效的组合物及其制备方法和应用。本发明提供的具有头皮护理功效的组合物的制备方法如下：S1、将长角豆籽和铁皮石斛茎加入至液体发酵培养基中，得到混合发酵培养基；S2、将发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液接入至步骤S1所得的混合发酵培养基中发酵培养，得到混合发酵液；S3、对步骤S2所得的混合发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有头皮护理功效的组合物。本发明提供的具有头皮护理功效的组合物能够具有优异的头皮保湿、抗炎和修护的功效，可以应用于发用护理产品中。

Description

一种具有头皮护理功效的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及日用化妆品领域，具体涉及一种具有头皮护理功效的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

头发在我们的生活中不仅仅起到美化的作用，更是我们身体的一部分，发挥着一定的生理作用。头部的皮肤厚度比面部的皮肤薄很多，并且生长着大量的毛囊，这也就意味着头皮需要更多的保护，头发就是承担保护头皮责任的重要成员。头发不仅可以减少外界对头皮的机械性损伤以及紫外线损伤，还可以起到御寒和散热的作用，使我们的头皮处于一个相对健康的环境。头发是由发干和毛囊组成的，所以护发不仅仅只是保护发丝，头皮的养护更加重要。

随着生活水平的提高，人们的生活节奏也越来越快，因此也带来了作息不规律、精神压力大、经常性失眠、焦虑等问题，再加上环境的变化，人们越来越多的接触到各类化学物质，而这些问题同样会体现在人的头发上，再加上日晒、风沙、低温水洗、梳、吹、烫发等的影响，头发会出现一定程度的损伤，头发的损伤程度轻，会影响一个人的外在形象，损伤程度重，头发可能会出现病态发展，其中，脱发，头发枯黄和白发，头屑增多，是越来越常见的问题。消费者也对发用护理产品的要求越来越高了，逐渐开始关注头皮的护理。

目前，市场上销售的发用护理产品大多是以化学合成的活性物质作为头皮的护理剂来护理头皮头发，长期使用这种洗发水，会造成头发毛燥、干枯、断裂、分叉等问题，而且还会对身体造成各种潜移默化的伤害，而含有天然成分、安全无刺激的的头皮护理剂鲜有。

中国专利CN107412109B公开一种舒敏型头皮护理液，由龙胆提取物、龙舌兰茎提取物、小球藻提取物和红车轴草花提取物复合而成。中国专利CN108553382B公开一种头皮护理液及其头皮护理组合物及应用，头皮护理液由苦参提取物、三七提取物、艾叶提取物、蛇床子提取物、防风根提取物、侧柏叶提取物、马齿苋提取物、芦荟汁复合而成。上述的头皮护理液的提取物由每一植物单独提取得到，每一植物的提取工艺均不相同，导致头皮护理液的制备工艺十分繁琐，且头皮护理液护理效果不甚理想。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种具有头皮护理功效的组合物及其制备方法、应用，本发明提供的具有头皮护理功效的组合物能够具有优异的头皮保湿、抗炎和修护的功效，可以应用于发用护理产品中。

本发明的技术方案是：

一种具有头皮护理功效的组合物的制备方法，包括如下制备步骤：

S1、将长角豆籽和铁皮石斛茎加入至液体发酵培养基中，得到混合发酵培养基；

S2、将发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液接入至步骤S1所述的混合发酵培养基中发酵培养，得到混合发酵液；

S3、对步骤S2所述的混合发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有头皮护理功效的组合物。

本发明通过大量试验得到，使用发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌对长角豆籽和铁皮石斛茎共生发酵，制得的组合物可以起到很好的头皮保湿、修护和抗炎的功效。

可选的，在一些实施方式中，在进行所述将发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液接入至所述混合发酵培养基中发酵，得到混合发酵液的步骤之前，还可以包括制备发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液：

将发酵乳杆菌种和副干酪乳杆菌种分别溶于无菌水，配制成发酵乳杆菌悬液和副干酪乳杆菌悬液；

将所述发酵乳杆菌悬液和所述乳酸菌悬液分别接种于固体培养基活化培养，得到活化的发酵乳杆菌和活化的副干酪乳杆菌；

将所述活化的发酵乳杆菌和活化的副干酪乳杆菌分别接种至种子培养基中进行扩培，得到所述发酵乳杆菌悬液和所述副干酪乳杆菌种子液。

可选的，在一些实施方式中，所述发酵乳杆菌的菌种编号为GDMCC 1.1796，所述发酵乳杆菌购于广东省微生物菌种保藏中心。

可选的，在一些实施方式中，所述副干酪乳杆菌的菌种编号为BNCC 337289，所述副干酪乳杆菌购于商城北纳创联生物科技有限公司。

可选的，在一些实施方式中，所述固体培养基为MRS琼脂培养基、营养琼脂培养基、LB肉汤培养基中的至少一种；优选为MRS琼脂培养基；

所述种子培养基选自MRS肉汤培养基、M17培养基、LBS培养基、酵母膏培养基、麦芽汁液体培养基中的至少一种；优选为MRS肉汤培养基。

可选的，在一些实施方式中，发酵乳杆菌悬液活化培养的温度为30~40℃，优选为35℃；发酵乳杆菌悬液活化培养的时间为24~72h，优选为48h；

副干酪乳杆菌悬液活化培养的温度为30~40℃，优选为37℃；副干酪乳杆菌悬液活化培养的时间为24~72h，优选为48h；

活化的发酵乳杆菌在种子培养基的扩培温度为30~40℃，优选为35℃；活化的发酵乳杆菌在种子培养基的扩培时间为24~72h，优选为48h；

活化的副干酪乳杆菌在种子培养基的扩培温度为30~40℃，优选为37℃；活化的副干酪乳杆菌在种子培养基的扩培时间为24~72h，优选为48h。

可选的，在一些实施方式中，所述发酵乳杆菌种子液的菌种浓度在10⁷~10¹⁰CFU/mL之间；副干酪乳杆菌种子液的菌种浓度在10⁷~10¹⁰CFU/mL之间。

可选的，在一些实施方式中，所述步骤S2中发酵乳杆菌种子液的接种量为混合发酵液质量的0.2~2%，优选为0.5%；副干酪乳杆菌种子液的接种量为混合发酵液质量的0.2~2%，优选为0.5%；

发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液接种量的质量比为1~3:1~3，优选为1:1。

可选的，在一些实施方式中，所述步骤S1中的长角豆籽和铁皮石斛茎占所述混合发酵液的总质量的0.5~4%；优选为1.5%；

所述长角豆籽和铁皮石斛茎质量比为3~8：1；优选为5：1。

可选的，在一些实施方式中，所述液体发酵培养基包括水、碳源、氮源和无机盐；

所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精中的至少一种，优选为葡萄糖；所述碳源的加入量为液体发酵培养基质量的0.5~3%，优选为2%；

所述氮源选自大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆中的至少一种，优选为胰蛋白胨；所述氮源的加入量为液体发酵培养基质量的0.4~3%，优选为1.5%；

所述无机盐选自Na₂HPO₄、NaH₂PO₄、K₂HPO₄、KH₂PO₄、MgSO₄中的至少一种，优选为MgSO₄；所述无机盐的加入量为液体发酵培养基质量的0.1~0.6%，优选为0.2%。

可选的，在一些实施方式中，所述发酵培养的温度为30~40℃，优选为37℃；

所述发酵时间为24 h~72 h，优选为40 h；

发酵培养时搅拌桨的转速为50~350 r/min；优选为150 r/min。

可选的，在一些实施方式中，所述步骤S3中对所述步骤S2得到的混合发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有头皮护理功效的组合物的步骤中：

所述灭活处理的温度为60~90℃，所述灭活处理的时间为15~30min；

所述纯化处理包括对所述混合发酵液进行过滤去渣和/或过微滤膜；所述过滤去渣是指利用板框压滤机过滤去渣；所述过微滤膜的步骤包括将所述混合发酵液依次经过10μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱以除去所述混合发酵液的杂质。

本发明还提供一种具有头皮护理功效的组合物，所述具有头皮护理功效的组合物采用如前所述的制备方法制备得到。

本发明还提供一种具有头皮护理功效的组合物的应用，尤其是在制备具有头皮保湿、抗炎和修护功效的发用护理产品中的应用。

在本发明中，具有头皮护理功效的组合物在发用护理产品中的质量百分比为0.5~10%。

长角豆为豆科植物。长角豆富含脂肪、淀粉、蛋白质、维生素及鞣酸等，具有极高的营养价值和药用价值。长角豆籽中富含的氨基酸和肽能促进自身皮肤透明质酸的表达、促进真表皮之间水的交换，从而起到补水、锁水的作用。

铁皮石斛富含石斛多糖、石斛碱、多酚、菲类、联节类、荀酮化合物、氨基酸以及微量元素等多种生物活性物，是我国传统的名贵中草药。根据植物化学及植物药理学研究发明，铁皮石斛主要的活性成分为石斛多糖，具有免疫调节、抗肿瘤、抗疲劳、抗敏消炎、抗氧化、抗衰老以及补水保湿等功效。

本发明进行了大量的实验研究，发现将长角豆籽和铁皮石斛茎按照特定的比例组合，与发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌种进行共生发酵，可以得到的富含丰富活性物质的组合物，具有优异的保湿、抗炎和修护等头皮护理功效。与此同时，本发明选用发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌对长角豆籽和铁皮石斛茎共生发酵，得到的组合物对人体无害，刺激性较低且对环境无污染。

与现有技术相比，本发明提供的具有头皮护理功效的组合物具有以下优势：

（1）本发明提供的制备方法得到的组合物中富含长角豆籽和铁皮石斛茎中的活性物质。同时采用发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌对长角豆籽和铁皮石斛茎进行共生发酵，得到的组合物的具有优异的保湿、抗炎和修护效果，明显优于水提法和醇提法。

（2）本发明提供的制备方法中将长角豆籽和铁皮石斛茎与发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌种共生发酵，不仅避免了单独将每一种植物进行发酵，大大简化了制备工艺，缩短制程时间，降低生产成本，而且两种植物之间存在协同作用得到的组合物的效果优于单一植物、单一菌种的发酵的效果。

（3）本发明提供的具有头皮保湿、抗炎和修护功效的组合物的制备过程不使用任何有机溶剂，是一个环境友善的绿色安全制备过程，对人体安全和环境无害，有利于环保，且操作简单，成本较低，适合应该用于工业生产。

附图说明

为了更清楚地说明本发明中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为使用本发明提供的实施例和对比例的发用精华液后头皮水分含量的变化率的效果图。

图2为使用本发明提供的实施例和对比例的发用精华液后头皮水分散失率的变化率的效果图。

图3为本发明提供的实施例和对比例的抗炎测试（3%水溶液时TNF-α含量测定）效果图。

图4为本发明提供的实施例和对比例的抗炎测试（5%水溶液时TNF-α含量测定）效果图。

图5为本发明提供的实施例和对比例的发用精华液人体功效测试抗炎效果图。

图6为本发明提供的实施例和对比例的发用精华液人体功效测试修护效果图。

图7为本发明提供的实施例和对比例的发用精华液人体功效测试去屑效果图。

图8为本发明提供的实施例和对比例的发用精华液人体功效测试止痒效果图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。

以下实施例和对比例中，未作特别说明的试剂为常规试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买。

实施例1

1）制备发酵乳杆菌种子液

将发酵乳杆菌溶于无菌水制成副干酪乳杆菌悬液，移取10 μL发酵乳杆菌悬液在MRS琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度35℃，培养时间48 h，获得活化后的发酵乳杆菌。

将活化后的发酵乳杆菌通过接种环接种至MRS肉汤培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为35℃。培养48 h后，得到发酵乳杆菌种子液。在种子液中，发酵乳杆菌的浓度约为10⁸CFU/mL。

2）制备副干酪乳杆菌种子液

将副干酪乳杆菌溶于无菌水制成副干酪乳杆菌悬液，移取10 μL副干酪乳杆菌悬液在MRS琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度37℃，培养时间48 h，获得活化后的副干酪乳杆菌。

将活化后的副干酪乳杆菌通过接种环接种至MRS肉汤培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为37℃。培养48 h后，得到副干酪乳杆菌种子液。在种子液中，副干酪乳杆菌的浓度约为10⁸CFU/mL。

3）制备混合发酵培养基

将质量分数为液体发酵培养基2%的葡萄糖、质量分数为液体发酵培养基1.5%的胰蛋白胨、质量分数为液体发酵培养基0.2%的MgSO₄和质量分数为液体发酵培养基96.3%的水加入至锥形瓶中，混合均匀，得到液体发酵培养基。

称取1.25kg干燥的长角豆籽、0.25kg干燥的铁皮石斛茎，打碎，过60目筛网，注入97.5kg的液体发酵培养基，将发酵罐密闭，升温至121℃，保持30 min进行灭菌处理，然后降温至室温，得到混合发酵培养基。

4）制备混合发酵液

0.5kg的发酵乳杆菌种子液和0.5kg的副干酪乳杆菌种子液接种至混合发酵培养基中，在37℃、自然pH、搅拌桨的转速为150 r/min下发酵40 h，得到混合发酵液。

5）对混合发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有头皮护理功效的组合物

在80℃的条件下对混合发酵液进行灭活处理，灭活处理的时间为20min。待混合发酵液完成降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除杂质，得到具有头皮护理功效的组合物。

实施例2

将实施例1的步骤3）中1.25kg干燥的长角豆籽、0.25kg干燥的铁皮石斛茎改为1.2kg干燥的长角豆籽、0.3kg干燥的铁皮石斛茎，其余的步骤与实施例1均相同。

即在实施例2中，长角豆籽和铁皮石斛茎的质量比为4:1。

实施例3

将实施例1的步骤3）中的1.5%胰蛋白胨改为1.5%的大豆蛋白胨，其余的步骤与实施例1均相同。

实施例4

1）制备发酵乳杆菌种子液

将发酵乳杆菌溶于无菌水制成副干酪乳杆菌悬液，移取10 μL发酵乳杆菌悬液在MRS琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度34℃，培养时间50 h，获得活化后的发酵乳杆菌。

将活化后的发酵乳杆菌通过接种环接种至MRS肉汤培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为34℃。培养52 h后，得到发酵乳杆菌种子液。在种子液中，发酵乳杆菌的浓度约为10⁷CFU/mL。

2）制备副干酪乳杆菌种子液

3）制备混合发酵培养基

将质量分数为液体发酵培养基1.5%的麦芽糖、质量分数为液体发酵培养基2.0%的玉米浆、质量分数为液体发酵培养基0.15%的KH₂PO₄和质量分数为液体发酵培养基96.35%的水加入至锥形瓶中，混合均匀，得到液体发酵培养基。

4）制备混合发酵液

1kg的发酵乳杆菌种子液和0.5kg的副干酪乳杆菌种子液接种至混合发酵培养基中，在37℃、自然pH、搅拌桨的转速为100 r/min下发酵50 h，得到混合发酵液。

在70℃的条件下对混合发酵液进行灭活处理，灭活处理的时间为30min。待混合发酵液完成降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除杂质，得到具有头皮护理功效的组合物。

实施例5

1）制备发酵乳杆菌种子液

将发酵乳杆菌溶于无菌水制成副干酪乳杆菌悬液，移取10 μL发酵乳杆菌悬液在MRS琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度36℃，培养时间48 h，获得活化后的发酵乳杆菌。

将活化后的发酵乳杆菌通过接种环接种至MRS肉汤培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为36℃。培养48 h后，得到发酵乳杆菌种子液。在种子液中，发酵乳杆菌的浓度约为10⁷CFU/mL。

2）制备副干酪乳杆菌种子液。

将副干酪乳杆菌溶于无菌水制成副干酪乳杆菌悬液，移取10 μL副干酪乳杆菌悬液在MRS琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度38℃，培养时间48 h，获得活化后的副干酪乳杆菌。

将活化后的副干酪乳杆菌通过接种环接种至MRS肉汤培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为38℃。培养48 h后，得到副干酪乳杆菌种子液。在种子液中，副干酪乳杆菌的浓度约为10⁸CFU/mL。

3）制备混合发酵培养基。

将质量分数为液体发酵培养基2.5%的蔗糖、质量分数为液体发酵培养基1%的酵母膏、质量分数为液体发酵培养基0.25%的NaH₂PO₄和质量分数为液体发酵培养基96.25%的水加入至锥形瓶中，混合均匀，得到液体发酵培养基。

4）制备混合发酵液

0.5kg的发酵乳杆菌种子液和1kg的副干酪乳杆菌种子液接种至混合发酵培养基中，在37℃、自然pH、搅拌桨的转速为250 r/min下发酵48 h，得到混合发酵液。

在90℃的条件下对混合发酵液进行灭活处理，灭活处理的时间为15min。待混合发酵液完成降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除杂质，得到具有头皮护理功效的组合物。

对比例1

采用水提法制备长角豆籽和铁皮石斛茎的提取液

称取干燥的长角豆籽1.25kg，干燥的铁皮石斛茎0.25kg，用粉碎机打碎，过60目筛网，加入水至总质量为100kg。在90℃、匀速150 r/min搅拌条件下提取6 h。待提取液降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10μm、5.0μm及2.5μm的聚丙烯微滤膜滤柱除去杂质，得到长角豆籽和铁皮石斛茎的提取液。

对比例2

采用醇提法制备长角豆籽和铁皮石斛茎的提取液

称取干燥的长角豆籽1.25kg，干燥的铁皮石斛茎0.25kg，用粉碎机打碎，过60目筛网，加入无水乙醇至总质量为100kg。在90℃、匀速150 r/min搅拌条件下提取6 h。待提取液降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10μm、5.0μm及2.5μm的聚丙烯微滤膜滤柱除去杂质，得到长角豆籽和铁皮石斛茎的提取液。

对比例3

将实施例1步骤4）中的0.5kg的发酵乳杆菌种子液和0.5kg的副干酪乳杆菌种子液更换为1kg的发酵乳杆菌种子液，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例3与实施例1的区别在于：对比例3仅用发酵乳杆菌发酵长角豆籽和铁皮石斛茎。

对比例4

将实施例1步骤4）中的0.5kg的发酵乳杆菌种子液和0.5kg的副干酪乳杆菌种子液更换为1kg的副干酪乳杆菌种子液，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例4与实施例1的区别在于：对比例4仅用副干酪乳杆菌发酵长角豆籽和铁皮石斛茎。

对比例5

将实施例1中1.25kg干燥的长角豆籽、0.25kg干燥的铁皮石斛茎改为1.5kg干燥的长角豆籽，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例5与实施例1的区别在于：对比例5仅用长角豆籽进行发酵。

对比例6

将实施例1中1.25kg干燥的长角豆籽、0.25kg干燥的铁皮石斛茎改为1.5kg干燥的铁皮石斛茎，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例6与实施例1的区别在于：对比例6仅用铁皮石斛茎进行发酵。

对比例7

将实施例1中1.25kg干燥的长角豆籽改为1.25kg干燥的长角豆叶，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例7与实施例1的区别在于：对比例7用长角豆叶与铁皮石斛茎共生发酵。

对比例8

将实施例1中1.25kg干燥的长角豆籽改为1.25kg干燥的长角豆果，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例8与实施例1的区别在于：对比例8用长角豆果与铁皮石斛茎共生发酵。

对比例9

将实施例1中1.25kg干燥的长角豆籽、0.25kg干燥的铁皮石斛茎改为0.75kg干燥的长角豆籽和0.75kg干燥的铁皮石斛茎，其余的步骤与实施例1均相同。

对比例9与实施例1的区别在于：对比例9中长角豆籽和铁皮石斛茎的质量比为1:1。

试验例一、头皮保湿性能测试

1. 试验对象：将实施例1-3，对比例1-9的组合物或提取物制备成发用精华液，作为本次测试的样品。所述发用精华液的配方如表1所示。

表1

所述发用精华液的制备方法，包括如下制备步骤：

将A1相、A2相、A3相中的物质混合均匀。将A1相、A2相、A3相、A4相加入主锅中，升温至80℃，搅拌保温15-20分钟，均质至完全溶解。将B相组分加入主锅中，搅拌均质5-8分钟至分散完全。降温至50℃，依次加入C相组分、D相组分、E相组分物料搅拌均匀。降温至38℃以下出料，得到测试用的发用精华液。

2. 志愿者的选取：130名（每10名志愿者用一款发用精华液），年龄在19至50岁；头皮具有炎症；志愿者进行试验前3个月不得进行染发。

3. 试验方法：

志愿者每次取3~5ml的发用精华液，均匀涂抹于头皮和头发，并适当按摩以促进吸收。每天使用2次，连续使用4周。使用前和使用4周后用皮肤水分测试仪CM825和皮肤水分流失测试仪TM300测试头皮水分含量和头皮水分散失率，计算头皮水分含量的变化率和头皮水分散失率的变化率。

以初始值与终值的变化率进行比较，所述头皮水分含量变化率=(使用4周后头皮水分含量-使用前头皮水分含量)/使用前头皮水分含量*100%；头皮水分含量的变化率增大，说明头皮水分含量升高。所述头皮水分散失率的变化率=(使用4周后头皮水分散失率-使用前头皮水分散失率)/使用前头皮水分散失率*100%，头皮水分散失率的变化率降低，说明单位时间内头皮角质层的水分散失量减少，角质屏障得到修复，变化率越大表明角质屏障修复效果越好。

4. 所述实施例和对比例的发用精华液的保湿功效试验结果如表2和图1-2所示。

表2

如表2和图1和2所示，实施例1-3和对比例1-9的效果均优于空白对照，说明加入组合物或提取物的发用精华液可以具有保湿和修护屏障的作用。实施例1-3的保湿、屏障修护效果优于对比例1和2，说明以微生物发酵方式制备长角豆籽和铁皮石斛茎的组合物的保湿效果和屏障修护效果优于水提法和醇提法。实施例1-3的保湿、屏障修护效果优于对比例3-4，说明发酵过程中，发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌之间存在协同作用，两者共同发酵长角豆籽和铁皮石斛茎得到的组合物保湿、屏障修护效果更好。实施例1-3的保湿、屏障修护效果优于对比例5-8，说明长角豆籽和铁皮石斛茎之间存在协同作用，两者共同发酵得到的组合物的效果优于任一植物的单独发酵，也优于铁皮石斛茎与长角豆其他部位的发酵。实施例1、2的保湿、屏障修护效果优于对比例9，说明长角豆籽和铁皮石斛茎的质量比影响发酵效果，影响组合物的保湿、屏障修护功效。在本发明中，长角豆籽和铁皮石斛茎的质量宜设置为长角豆籽:铁皮石斛茎=3~8：1，最优选为长角豆籽:铁皮石斛茎=5:1。

试验例二、抗炎测试--TNF-α含量测定

1. 试验原理：巨噬细胞是免疫效应细胞，具有多种免疫调节功能，因此常被作为一种理想的模型来评价一些生物活性物质的免疫调节性能。当机体中存在过量的细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）时，会诱导巨噬细胞巨噬细胞释放 TNF-α、NO、 ILs 等炎症介质，进而引发机体的炎症反应。其中，TNF-α可以促进 T 细胞产生各种炎症因子促进炎症反应，是重要的炎症因子之一。通过 LPS 体外刺激巨噬细胞建立炎症模型，研究化妆品原料的抗炎功效，是研究炎症因子的经典细胞模型。

TNF-α含量的测定采用酶联免疫方法（ELISA），具体原理为：TNF-α与包被在酶标板上的 TNF-α 抗体特异性结合后，与带有底物标记的抗 TNF-α 抗体结合，底物被酶催化后，生成有色产物，TNF-α 含量与有色产物颜色的深浅呈正相关。用酶标仪 450 nm波长下测定光密度值（OD），计算 TNF-α 含量。

2. 试验对象：实施例1-3和对比例1-9的组合物或提取物（3%和5%的水溶液）

3. 试验方法：

（1）细胞培养：将巨噬细胞接种于 96 孔细胞培养板，每孔细胞数为3×10⁴个，培养24h。

（2）暴露：弃去孔中原培养液，将巨噬细胞分为实施例1-3组，对比例1-9组，LPS组，空白组，阳性对照组，各组的添加物质及添加量如表3所示：

表3

（3）ELISA测试：培养24小时后，吸取各组培养基，离心取上清，测试上清液中 TNF-α的含量。TNF-α的含量越低，说明抗炎效果越好。

4. 所述实施例和对比例的TNF-α相对含量的试验结果如表4和图3-4所示。

表4

如表4和图3-4所示，在浓度为3%、5%的范围内，实施例1-3的组合物表现出抑制炎症因子TNF-α生成的能力。实施例1-3的抗炎效果优于对比例1和2，说明以微生物发酵方式制备长角豆籽和铁皮石斛茎的组合物的保湿效果和屏障修护效果优于水提法和醇提法。实施例1-3的抗炎效果优于对比例3-4，说明发酵过程中，发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌之间存在协同作用，两者共同发酵长角豆籽和铁皮石斛茎得到的组合物抗炎效果更好。实施例1-3的抗炎效果优于对比例5-8，说明长角豆籽和铁皮石斛茎之间存在协同作用，两者共同发酵得到的组合物的效果优于任一植物的单独发酵，也优于铁皮石斛茎与长角豆其他部位的发酵。实施例1、2的抗炎效果优于对比例9，说明长角豆籽和铁皮石斛茎的质量比影响发酵效果，影响组合物的抗炎效果。在本发明中，长角豆籽和铁皮石斛茎的质量宜设置为长角豆籽:铁皮石斛茎=3~8：1，最优选为长角豆籽:铁皮石斛茎=5:1。

试验例三、抗炎测试-人体功效测试

1. 测试对象：将实施例1-3，对比例1-9的组合物或提取物制备成发用精华液，作为本次测试的样品。发用精华液的制备方法参考试验例一。

2. 志愿者的选取：130名（每10名志愿者用一款发用精华液，其中10志愿者使用空白对照的发用精华），年龄在19至50岁；头皮具有炎症；志愿者进行试验前3个月不得进行染发。

3. 测试方法：志愿者每次取3~5ml的发用精华液，均匀涂抹于头皮，并适当按摩以促进吸收。每天使用2次，连续使用4周。在使用前和使用4周后进行回访，评价头皮改善情况。

评价包括：抗炎效果、修护效果、去屑效果、止痒效果，从没有效果（0分）至效果显著（10分）进行评价。评价包括使用4周后头皮状态评分、使用者使用后评分，上述评分求平均值。

4. 所述发用精华液使用效果如表5和图5-8所示。

表5

如表5和图5-8所示，实施例1-3和对比例1-9的抗炎、修护、去屑和止痒效果均优于空白对照，说明加入组合物或提取物的发用精华液可以具有抗炎、修护、去屑和止痒的作用。实施例1-3的抗炎、修护、去屑和止痒效果优于对比例1和2，说明以微生物发酵方式制备长角豆籽和铁皮石斛茎的组合物的保湿效果和屏障修护效果优于水提法和醇提法。实施例1-3的的抗炎、修护、去屑和止痒效果优于对比例3-4，说明发酵过程中，发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌之间存在协同作用，两者共同发酵长角豆籽和铁皮石斛茎得到的组合物抗炎、修护、去屑和止痒效果更好。实施例1-3的保湿、屏障修护效果优于对比例5-8，说明长角豆籽和铁皮石斛茎之间存在协同作用，两者共同发酵得到的组合物的效果优于任一植物的单独发酵，也优于铁皮石斛茎与长角豆其他部位的发酵。实施例1、2的抗炎、修护、去屑和止痒效果优于对比例9，说明长角豆籽和铁皮石斛茎的质量比影响发酵效果，影响组合物的抗炎、修护、去屑和止痒功效。在本发明中，长角豆籽和铁皮石斛茎的质量宜设置为长角豆籽:铁皮石斛茎=3~8：1，最优选为长角豆籽:铁皮石斛茎=5:1。

综上，本发明将干燥的长角豆籽和铁皮石斛茎，用副干酪乳杆菌共生发酵，最终制备得到的组合物对具有良好的头皮保湿、抗炎和修护的功效。本发明制备的组合物适合应用于发用护理产品中，优选添加的质量百分比为0.5~10%。

另外，本发明提供的组合物具有头皮保湿、抗炎和修护的功效，且本发明提供的组合物对人体安全和环境无害，有利于环保。

以上对本发明所提供的一种具有头皮护理功效的组合物及其制备方法和应用进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施例进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims

1.一种具有头皮护理功效的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

S3、对步骤S2所述的混合发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有头皮护理功效的组合物；

所述步骤S1中的长角豆籽和铁皮石斛茎质量比为3~8：1；

所述步骤S1中的长角豆籽和铁皮石斛茎占所述混合发酵液的总质量的0.5~4%；

所述步骤S1中的液体发酵培养基包括水、碳源、氮源和无机盐；

所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精中的至少一种；所述碳源的加入量为液体发酵培养基质量的0.5~3%；

所述氮源选自大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆中的至少一种；所述氮源的加入量为液体发酵培养基质量的0.4~3%；

所述无机盐选自Na₂HPO₄、NaH₂PO₄、K₂HPO₄、KH₂PO₄、MgSO₄中的至少一种；所述无机盐的加入量为液体发酵培养基质量的0.1~0.6%；

所述步骤S2中发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液的制备方法，包括如下步骤：

将所述活化的发酵乳杆菌和活化的副干酪乳杆菌分别接种至种子培养基中进行扩培，得到所述发酵乳杆菌悬液和所述副干酪乳杆菌种子液；

所述固体培养基为MRS琼脂培养基、营养琼脂培养基、LB肉汤培养基中的至少一种；所述种子培养基选自MRS肉汤培养基、M17培养基、LBS培养基、酵母膏培养基、麦芽汁液体培养基中的至少一种；

所述发酵乳杆菌悬液活化培养的温度为30~40℃；活化培养的时间为24~72h；

所述副干酪乳杆菌悬液活化培养的温度为30~40℃；活化培养的时间为24~72h；

所述活化的发酵乳杆菌在种子培养基的扩培温度为30~40℃；扩培时间为24~72h；

所述活化的副干酪乳杆菌在种子培养基的扩培温度为30~40℃；扩培时间为24~72h；

所述步骤S2中发酵乳杆菌种子液的接种量为混合发酵液质量的0.2~2%；副干酪乳杆菌种子液的接种量为混合发酵液质量的0.2~2%；

所述步骤S2中的发酵培养的温度为30~40℃；所述发酵时间为24h~72 h；发酵培养时搅拌桨的转速为50~350r/min；

所述步骤S3中的灭活处理的温度为60~90℃，灭活处理的时间为15~30min；

所述步骤S3中的纯化处理包括对所述混合发酵液进行过滤去渣和/或过微滤膜；

所述过滤去渣是指利用板框压滤机过滤去渣；

所述过微滤膜的步骤包括将所述发酵液依次经过10μm、5.0μm及2.5μm的聚丙烯微滤膜滤柱以除去所述混合发酵液的杂质。

2.如权利要求1所述的具有头皮护理功效的组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中的长角豆籽和铁皮石斛茎质量比为5：1。

3.如权利要求1所述的具有头皮护理功效的组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中发酵乳杆菌种子液和副干酪乳杆菌种子液接种量的质量比为1~3:1~3。

4.一种如权利要求1~3任一项所述的制备方法制得的具有头皮护理功效的组合物。

5.一种如权利要求4所述的具有头皮护理功效的组合物在制备具有头皮保湿、抗炎和修护功效的发用护理产品中的应用。