CN115356413A - 一种检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种采用高效液相色谱法检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，所述方法采用离液剂六氟磷酸盐‑有机相作为流动相进行梯度洗脱。本发明的方法专属性良好，并增加了杂质托品酸(杂质SM1‑ZA)的保留，对色谱柱影响小，适用于对氢溴酸东莨菪碱原料药有关物质的检测和对氢溴酸东莨菪碱的质量控制。

Description

一种检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法

技术领域

本发明涉及药品检测领域，具体地，涉及一种检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法。

背景技术

氢溴酸东莨菪碱是一种作用较强的抗胆碱药，能阻断M胆碱受体，临床上主要用于晕动病、躁狂性精神病、有机磷农药中毒等。氢溴酸东莨菪碱既可作为原料药，制备成片剂、注射液等剂型，也可作为起始原料，用于原料药的合成，应用较广泛。

中国药典、欧洲药典、美国药典均收载了氢溴酸东莨菪碱原料药质量标准和有关物质检测方法。例如，在美国药典收载的氢溴酸东莨菪碱有关物质方法中，采用高效液相色谱法，以十八烷硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸盐溶液(量取溶液(7.0g/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至3.3)606ml，加入3.5g十二烷基硫酸钠)为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，波长为210nm。在中国药典、欧洲药典中收载的氢溴酸东莨菪碱有关物质方法中，也采用高效液相色谱法，并采用辛烷硅烷键合硅胶作为固定相，以0.25％十二烷基硫酸钠溶液(pH2.5)-乙腈为流动相，进行等度洗脱。从欧洲药品质量管理局(EDQM)查找到的氢溴酸东莨菪碱有关物质的色谱图(参见图4)可知，杂质D保留时间为1.020分钟，保留较弱，不利于杂质定量。

另对比杂质谱，详见表1，欧洲药典收录已知杂质4个，中国药典未收录已知杂质，美国药典收录已知杂质5个，故重现美国药典方法。

表1杂质列表

然而，美国药典方法在实际应用中，存在以下不足：

1)用美国药典方法检测来自不同厂家的氢溴酸东莨菪碱时，发现存在未知杂质干扰已知杂质SM1-ZB的检测(陕西缔都医药化工有限公司，批号：HHB2103001图谱，见图5；陕西玉宁生物科技有限公司，批号：YN20211115图谱，见图6)，方法专属性差；

2)流动相A的体系复杂，其包括十二烷基硫酸钠、磷酸二氢钾、乙腈，配制较繁琐；

3)流动相A中采用离子对试剂十二烷基硫酸钠，其与色谱柱作用后，会直接吸附到固定相上且难以洗脱，从而导致色谱柱填料性能改变或者说导致色谱柱改性。色谱柱改性主要表现为改变色谱柱选择性，用过离子对试剂的色谱柱，在不含离子对试剂的体系中应用，可能会影响方法重现性。因此，用过离子对试剂的色谱柱不能应用于其他项目，因此色谱柱需专用，这导致企业耗材成本增加。

综上，在现有公开的美国药典中的氢溴酸东莨菪碱有关物质检测方法中，存在未知杂质干扰已知杂质SM1-ZB的情况，方法专属性不好；此外，流动相中含有离子对试剂，色谱柱平衡时间较长，且对色谱柱性能有影响。

因此，本领域亟需一种检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，其具有良好的专属性以及改进的色谱柱平衡时间，且对色谱柱性能没有影响或影响很小。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明旨在提供一种新的检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，所述方法不采用现有技术中采用的离子对试剂十二烷基硫酸钠作缓冲盐，并且其专属性强。

因此，本发明提供了一种采用高效液相色谱法检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，所述方法采用离液剂六氟磷酸盐-有机相作为流动相进行梯度洗脱，其中所述离液剂为六氟磷酸盐溶液。

本发明具有以下一个或者多个有益效果：

在本发明方法中，未知杂质不会干扰对已知杂质的检测，且各已知成分峰之间分离良好。

本发明方法专属性良好，且增加了杂质托品酸(杂质SM1-ZA)的保留，这利于杂质的定量。

与美国药典缓冲液体系比较，本发明方法中使用的六氟磷酸盐缓冲液的配制简便，色谱柱平衡时间较快，且适用于多种色谱柱，降低了方法应用成本。

六氟磷酸盐为离液剂，其在流动相中会先与化合物(溶质)结合，然后吸附到色谱柱固定相上，再通过解吸附过程从固定相中洗脱。因此，采用六氟磷酸盐几乎不会改变色谱柱的性质。

采用本发明的方法得到的测定结果准确，适用于对氢溴酸东莨菪碱原料药有关物质的检测和对氢溴酸东莨菪碱的质量控制。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对说明书中所需要使用的附图作简单的介绍。

图1是使用本发明方法检测的系统适用性溶液的色谱图。

图2是使用本发明方法检测的供试品溶液的色谱图。

图3是使用高氯酸钠作为离液剂的方法检测的系统适用性溶液的色谱图。

图4是从EDQM查找到的氢溴酸东莨菪碱有关物质的色谱图。

图5是使用美国药典方法检测的供试品溶液(来自陕西缔都医药化工有限公司，批号：HHB2103001)的色谱图。

图6是使用美国药典方法检测的供试品溶液(来自陕西玉宁生物科技有限公司，批号：YN20211115)的色谱图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施方案和附图，对本发明进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本发明的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本发明中的实施方案，本领域普通技术人员可以获得的所有其他实施方案，都属于本发明保护的范围。除非另有定义，本文所使用的全部技术和科学术语都具有与本文的主题所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。

本发明旨在提供一种新的检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，以解决美国药典方法专属性不好的问题。

因此，本发明提供了一种采用高效液相色谱法检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，所述方法采用离液剂溶液-有机相进行梯度洗脱，其中所述离液剂为六氟磷酸盐。

在一个实施方案中，所述六氟磷酸盐为六氟磷酸钠、六氟磷酸钾、六氟磷酸铵。

在一个实施方案中，所述六氟磷酸盐的浓度为30mmol/L至50mmol/L，优选为35mmol/L。

在一个优选的实施方案中，所述离液剂溶液中还添加有酸，例如磷酸、和/或冰乙酸。在一个实施方案中，以体积比计，所述酸的加入量为0.02％至0.1％，优选为0.05％。

在一个实施方案中，所述方法采用的流速为0.8ml/min至1.2ml/min，优选为1.0ml/min。

在一个实施方案中，所述方法采用的进样量为5μl至10μl，优选为5μl。

在一个实施方案中，采用以辛烷基键合相或十八烷基键合相为固定相的色谱柱，优选采用以十八烷基键合相为固定相的色谱柱。

在一个实施方案中，所述色谱柱的温度为25℃至35℃，优选为30℃。

在一个实施方案中，所述色谱柱选自Agilent ZORBAX SB-C8、Waters SunFireC18、Agilent ZORBAX Extend-C18、Agilent ZORBAX SB-C18、Waters Xbridge C18、WatersSymmetry C18，优选为Waters SunFire C18。

在一个实施方案中，所述有机相为乙腈。

在一个最优选的实施方案中，所述方法在以下色谱条件下进行：

色谱柱：十八烷基键合相为固定相的色谱柱

流动相A：35mmol/L六氟磷酸盐溶液，其中含0.05％磷酸

流动相B：乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

波长：210nm

进样量：5μl

梯度：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	90	10
25	60	40
			35	70	60
35.1	90	10
			40	90	10

本发明方法采用离液剂-有机相进行梯度洗脱，未知杂质与已知杂质分离良好，各已知成分峰之间分离良好，解决了美国药典方法专属性不好的问题，同时增加了托品酸(杂质SM1-ZA)的保留。另外，在本发明方法中，流动相A采用六氟磷酸盐缓冲液，其组成简单，配制简便，且流动相中的六氟磷酸盐在固定相上保留极弱，几乎不改变色谱柱性质，色谱柱平衡时间较快，且可选择色谱柱类型多，降低了方法应用成本。再者，采用本发明的方法得到的测定结果准确，适用于氢溴酸东莨菪碱原料药有关物质的检测。

实施例

实施例1

采用如下色谱条件来检测系统适用性溶液和供试品溶液中的氢溴酸东莨菪碱有关物质：

色谱柱：以十八烷基键合相为固定相的色谱柱

流动相A：35mmol/L六氟磷酸铵溶液(含0.05％磷酸)

流动相B：乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

波长：210nm

进样量：5μl

梯度洗脱：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	90	10
25	60	40
			35	70	60
35.1	90	10
			40	90	10

溶液的配制：

稀释剂：乙腈-水(20:80)。

系统适用性溶液：分别取氢溴酸东莨菪碱、杂质SM1-ZA、杂质SM1-ZB、杂质SM1-ZC、杂质SM1-ZD、杂质SM1-ZE适量，精密称定，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含氢溴酸东莨菪碱2mg，杂质SM1-ZA、杂质SM1-ZB、杂质SM1-ZC、杂质SM1-ZD、杂质SM1-ZE各2μg的溶液。

供试品溶液：取氢溴酸东莨菪碱约20mg，精密称定，置10ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

系统适用性要求：系统适用性溶液中，杂质SM1-ZA、杂质SM1-ZB、氢溴酸东莨菪碱、杂质SM1-ZC、杂质SM1-ZD、杂质SM1-ZE依次出峰，各成分峰之间的分离度均不得小于1.5。

图1示出采用系统适用性溶液进行高效液相色谱得到的色谱图，图2示出采用供试品溶液进行高效液相色谱得到的色谱图。从这两幅图中可见，在本发明的方法下，未知杂质不干扰已知杂质检测，各已知成分峰之间分离良好，且杂质托品酸的保留增加。

实施例2

基于实施例1的结果，发明人进一步对六氟磷酸铵的浓度选择进行了试验，其中除了六氟磷酸铵的浓度外，其他的条件均与实施例1中相同。

结果如下表2所示：

表2六氟磷酸铵的浓度选择

结果表明，系统适用性溶液中各成分峰之间的最小分离度随六氟磷酸铵缓冲液浓度的增加而变大，并且在六氟磷酸铵浓度在最低点(30mmol/L)时的最小分离度为3.21，该分离度已经满足检测要求；在供试品溶液中，杂质SM1-ZB、杂质SM1-ZB相邻未知杂质含量在各条件下，相差不大。故缓冲液浓度优选为30mmol/L至50mmol/L。

实施例3

发明人还试验了采用离液剂高氯酸钠作为流动相A的高效液相色谱法，其中使用如下色谱条件对系统适用性溶液(同实施例1)进行检测：

色谱柱：以十八烷基键合相为固定相的色谱柱

流动相A：30mmol/L高氯酸钠溶液

流动相B：乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

波长：210nm

进样量：10μl

梯度洗脱：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	95	10
5	90	10
			25	70	30
30	20	80
			30.1	90	10
35	90	10

图3示出了该高效液相色谱法得到的色谱图。从图中可见，在系统适用性溶液中，有一已知杂质未被检出(应为5个杂质峰)。由此可见，采用高氯酸钠作为流动相A的方法专属性差，故不推荐采用该体系。

Claims (10)

1.一种采用高效液相色谱法检测氢溴酸东莨菪碱有关物质的方法，其特征在于，所述方法采用离液剂-有机相作为流动相进行梯度洗脱，其中所述离液剂为六氟磷酸盐溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸盐为六氟磷酸钠、六氟磷酸钾、或六氟磷酸铵。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其特征在于，所述六氟磷酸盐的浓度为30mmol/L至50mmol/L，优选为35mmol/L；优选地，所述离液剂溶液中还添加有以体积比计的0.02％至0.1％、优选为0.05％的酸如磷酸、和/或冰乙酸。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8ml/min至1.2ml/min，优选为1.0ml/min。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法采用的进样量为5μl至10μl，优选为5μl。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，采用以辛烷基键合相或十八烷基键合相为固定相的色谱柱，优选采用以十八烷基键合相为固定相的色谱柱。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的温度为25℃至35℃，优选为30℃。

8.如权利要求6-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述色谱柱选自Agilent ZORBAXSB-C8、Waters SunFire C18、Agilent ZORBAX Extend-C18、Agilent ZORBAX SB-C18、Waters Xbridge C18、Waters Symmetry C18，优选为Waters SunFire C18。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，所述有机相为乙腈。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法在以下色谱条件下进行：

色谱柱：十八烷基键合相为固定相的色谱柱

流动相A：35mmol/L六氟磷酸盐溶液，其中含0.05％磷酸

流动相B：乙腈

流速：1.0ml/min

柱温：30℃

波长：210nm

进样量：5μl

梯度：

时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 0 90 10 25 60 40 35 70 60 35.1 90 10 40 90 10

。

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