CN115354012A - 细胞传代工艺方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供一种细胞传代工艺方法，旨在解决现有的细胞传代工艺在细胞传代分配过程中，会导致后边培养器皿内的细胞数量越来越少的问题。为此，本发明的细胞传代工艺方法包括：S100：将细胞液进行离心分离作业；S200：排除细胞液经离心分离后的分离废液；S300：向离心分离后的细胞液中加入培养液以使分离得到的细胞与培养液混合得到细胞悬液；S400：将细胞悬液全部置于一个培养器皿中；S500：使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合；S600：在所述培养器皿中留存部分细胞悬液并将其余的细胞悬液转移至另一个培养器皿中。能够将细胞均匀地分配至多个培养器皿中，避免出现后边培养器皿中的细胞数量越来越少的情况。

Description

细胞传代工艺方法
技术领域
本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供一种细胞传代工艺方法。
背景技术
传统细胞是人工培养活动，其需要多名工作人员穿戴洁净服、口罩等防护用品并进行彻底消毒后进入洁净室内进行细胞培养。但是人工操作过程中，会将粉尘及细菌带入实验室，存在潜在污染风险且会占用过多的劳动力，工作效率较低，实验室的无菌环境及一些有毒药品及尖锐器材也会造成人员劳动强度及加大危险性。
近年来，不断涌现出自动化细胞培养相关设备，实现了细胞的自动化培养。然而，现有的自动化细胞培养还存在一些问题，例如，在细胞传代分配过程中，会导致后边培养器皿中的细胞数量越来越少。
因此，本领域需要一种新的技术方案来解决上述问题。
发明内容
本发明旨在解决上述技术问题，即，解决现有的细胞传代工艺在细胞传代分配过程中，会导致后边培养器皿中的细胞数量越来越少的问题。
在第一方面，本发明提供一种细胞传代工艺方法，包括以下步骤：
S100：将细胞液进行离心分离作业；
S200：排除细胞液经离心分离后的分离废液；
S300：向离心分离后的细胞液中加入培养液以使分离得到的细胞与培养液混合得到细胞悬液；
S400：将细胞悬液全部置于一个培养器皿中；
S500：使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合；
S600：在所述培养器皿中留存部分细胞悬液并将其余的细胞悬液转移至另一个培养器皿中。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，“向离心后的细胞液中加入培养液”的步骤具体包括：
向离心后的细胞液中加入第一预设数量的培养液；
其中，所述第一预设数量的培养液小于培养细胞所需要的培养液的总量；
在执行完步骤S600之后，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：
S700：向所述培养器皿中加入第二预设数量的培养液以使所述培养器皿中的培养液满足所述培养器皿中的细胞的培养需求。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，在执行完步骤S700之后，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：
S800：使所述培养器皿中的细胞悬液与新加入的培养液混合均匀。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，所述培养器皿上设置有电子标签，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：
扫描位于所述培养器皿上的所述电子标签。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，所述电子标签内存储有细胞名称、细胞批次、培养时间和/或培养方案。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，“使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合”的步骤具体包括：
对所述培养器皿中的液体进行吹打。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，所述第一预设数量不大于15毫升。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，所述第二预设数量不小于5毫升且不大于50毫升。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，所述第二预设数量不小于12毫升且不大于15毫升。
在上述细胞传代工艺方法的优选技术方案中，“将细胞液进行离心分离作业”的步骤具体包括：
通过离心机对细胞液进行离心分离作业。
在采用上述技术方案的情况下，本发明的细胞传代工艺方法，包括以下步骤：S100：将细胞液进行离心分离作业；S200：排除细胞液经离心分离后的分离废液；S300：向离心分离后的细胞液中加入培养液以使分离得到的细胞与培养液混合得到细胞悬液；S400：将细胞悬液全部置于一个培养器皿中；S500：使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合；S600：在所述培养器皿中留存部分细胞悬液并将其余的细胞悬液转移至另一个培养器皿中。通过这样的设置，能够将细胞均匀地分配至多个培养器皿中，避免出现后边培养器皿中的细胞数量越来越少的情况。
进一步地，“向离心后的细胞液中加入培养液”的步骤具体包括：向离心后的细胞液中加入第一预设数量的培养液；其中，所述第一预设数量的培养液小于培养细胞所需要的培养液的总量；在执行完步骤S600之后，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：S700：向所述培养器皿中加入第二预设数量的培养液以使所述培养器皿中的培养液满足所述培养器皿中的细胞的培养需求。通过这样的设置，即通过将培养细胞需要的培养液分两次进行加注，与在执行步骤S300时直接将培养液全部加入到离心容器中相比，在执行步骤S300时，先加注少量的培养液，更容易使细胞与培养液混合均匀，从而更有利于将细胞均匀分配。
附图说明
下面结合附图来描述本发明的优选实施方式，附图中：
图1是本发明的细胞传代工艺方法的流程图。
具体实施方式
下面参照附图来描述本发明的优选实施方式。本领域技术人员应当理解的是，这些实施方式仅仅用于解释本发明的技术原理，并非旨在限制本发明的保护范围。
基于背景技术指出的现有的细胞传代工艺在细胞传代分配过程中，会导致后边培养器皿中的细胞数量越来越少的问题。本发明提供了一种细胞传代工艺方法，旨在通过本发明的细胞传代工艺方法能够将细胞均匀地分配至培养器皿中。
具体地，如图1所示，本发明的细胞传代工艺方法包括以下步骤：
S100：将细胞液进行离心分离作业。
离心作业的主要目的是将细胞液中的细胞与培养液分离出来。
示例性地，将细胞液放入离心容器中，然后对细胞液进行离心分离作业，使细胞贴附在离心容器的内壁上。
需要说明的是，在实际应用中，本领域技术人员可以将细胞液放入离心管里，然后将离心管放到离心机上，通过离心机对离心管内的细胞液进行离心作业，使细胞贴附在离心管的内壁上；或者，也可以采用其他方式进行离心作业，这种灵活地调整和改变并不偏离本发明的原理和范围，均应限定在本发明的保护范围之内。
优选地，“将细胞液进行离心作业”的步骤具体包括：通过离心机对细胞液进行离心分离作业。
通过采用离心机对细胞液进行离心分离作业，离心效率高，从而能够提高细胞培养的工作效率。
需要说明的是，在实际应用中，可以通过离心机同时仅对一个离心容器进行离心作业，或者，也可以通过离心机同时对多个离心容器进行离心作业，等等，这种灵活地调整和改变并不偏离本发明的原理和范围，均应限定在本发明的保护范围之内。
S200：排除细胞液经离心分离后的分离废液。
在完成离心作业之后，需要先将离心分离后的分离废液排除。
示例性地，在离心容器中完成离心作业，分离后的细胞贴附在离心容器的内壁上，只需将离心容器中的分离废液全部倒掉即可，使离心容器中仅剩下贴附在离心容器内壁上的细胞，当然，可能也会有少量的细胞液残留。
S300：向离心分离后的细胞液中加入培养液以使分离得到的细胞与培养液混合得到细胞悬液。
在排除掉分离废液后，需要向细胞液中加入新的培养液。
示例性地，将离心容器中的分离废液全部倒掉后，向离心容器中加入新的培养液，以使离心容器中的细胞和培养液混合得到细胞悬液。
需要说明的是，在实际应用中，可以通过移液装置对离心容器中的液体进行吹打，以使离心容器中的细胞与培养液混合成细胞悬液，或者，也可以通过其他方式使离心容器中的细胞与培养液混合成细胞悬液，等等，这种灵活地调整和改变也并不偏离本发明的原理和范围，均应限定在本发明的保护范围之内。
优选通过移液装置对离心容器中的液体进行吹打，以使分离得到的细胞与培养液混合得到细胞悬液。
具体地，可以通过移液装置将离心容器中的液体吸出然后再注回，反复几次，以使离心容器中的细胞与培养液充分混合成细胞悬液。
通过移液装置对离心容器中的液体进行吹打以使离心容器中的细胞与培养液充分混合，效果更佳。
S400：将细胞悬液全部置于一个培养器皿中。
示例性地，在使离心容器中分离得到的细胞与培养液混合成细胞悬液后，通过移液装置将离心容器中的细胞悬液全部吸出，移液装置包括移液管，移液装置将离心容器中的细胞悬液全部吸出后暂存在移液管内。
通过移液装置将离心容器中的细胞悬液全部吸出之后，细胞悬液暂存在移液装置的移液管内，然后取一个空的培养器皿，再使移液装置将细胞悬液全部注入该培养器皿中。
需要说明的是，在实际应用中，可以提前向该培养器皿中加入适量的培养液，这种灵活地调整和改变并不偏离本发明的原理和范围，均应限定在本发明的保护范围之内。
S500：使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合。
在将细胞悬液全部注入培养器皿后，需要使培养器皿中的细胞和培养液充分混合，以避免因培养器皿中的细胞沉积而导致细胞分配不均。
需要说明的是，在实际应用中，可以通过对培养器皿中的液体进行吹打，以使培养器皿中的细胞与培养液充分混合，或者，也可以通过其他方式使培养器皿中的细胞与培养液充分混合，等等，这种灵活地调整和改变也并不偏离本发明的原理和范围，均应限定在本发明的保护范围之内。
优选地，“使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合”的步骤具体包括：对所述培养器皿中的液体进行吹打。
示例性地，通过移液装置对培养器皿中的液体进行吹打，以使培养器皿中的细胞与培养液充分混合，具体地，可以通过移液装置将培养器皿中的液体吸出然后再注回，反复几次，以使培养器皿中的细胞与培养液充分混合。
S600：在所述培养器皿中留存部分细胞悬液并将其余的细胞悬液转移至另一个培养器皿中。
示例性地，在使培养器皿中的细胞与培养液充分混合后，通过移液装置将除了传代部分的细胞悬液以外的细胞悬液吸出，并转移至另一个空的培养器皿中。
这样一来，能够将细胞均匀地分配至多个培养器皿中，避免出现后边培养器皿中的细胞数量越来越少的情况。
需要说明的是，执行完步骤S600后，返回执行步骤500，直至将细胞分配完成。
以将原细胞液中的细胞分配至3个培养器皿中为例，在移液装置将细胞悬液全部注入一个空的培养器皿中后，先使培养器皿中的细胞与培养液充分混合，然后通过移液装置将培养器皿中三分之二的细胞悬液吸出，留存三分之一的细胞悬液作为传代部分。
然后再重复步骤S500和S600，即，使所述移液装置将其余的细胞悬液全部注入另一个空的培养器皿中，然后使该培养器皿中的细胞和培养液充分混合，然后通过移液装置将培养器皿中二分之一的细胞悬液吸出，留存二分之一的细胞悬液作为传代部分。
最后，再使所述移液装置将剩余的细胞悬液全部注入另一个空的培养器皿中，完成细胞传代。
需要说明的是，在执行步骤S300时，可以将培养细胞需要的培养液全部加入离心分离后的细胞液中，或者，也可以先将一部分培养液加入离心分离后的细胞液中，在执行完步骤S600后，再将剩余的培养液加入培养器皿中，等等，这种灵活地调整和改变并不偏离本发明的原理和范围，均应限定在本发明的保护范围之内。
在一种优选的实施方式中，“向离心分离后的细胞液中加入培养液”的步骤具体包括：向离心分离后的细胞液中加入第一预设数量的培养液。其中，所述第一预设数量的培养液小于培养细胞所需要的培养液的总量。
在执行完步骤S600之后，本实施例的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：S700：向所述培养器皿中加入第二预设数量的培养液以使所述培养器皿中的培养液满足所述培养器皿中的细胞的培养需求。
也就是说，分两次加注培养液。在执行步骤S300时，先加注一次培养液，加注量为第一预设数量，本次加注培养液的目的主要是为了便于将分离后的细胞均匀分配至多个培养器皿中，在完成细胞的分配后，再将剩余的培养期注入到培养器皿中。
示例性地，培养细胞所需要的培养液的总量为45毫升，需要将细胞分配至三个培养器皿中进行培养，每个培养器皿中需要15毫升的培养液，第一预设数量为6毫升，第二预设数量为13毫升。
在执行步骤S300时，先向离心容器中加入6毫升的培养液，吹打混匀，使离心容器中的细胞与6毫升的培养液混合成细胞悬液，通过移液装置将离心容器中6毫升的细胞悬液全部吸出，然后使移液装置将6毫升的细胞悬液全部注入第一个空的培养器皿中，吹打混匀，使该培养器皿中的细胞与培养液充分混合，然后使移液装置吸出4毫升的细胞悬液，第一个培养器皿中留存2毫升的细胞悬液，然后执行步骤S700，向该培养器皿中加入13毫升的培养液。
再使移液装置将剩余的4毫升细胞悬液全部注入第二个空的培养器皿中，吹打混匀，使该培养器皿中的细胞与培养液充分混合，然后使移液装置吸出2毫升的细胞悬液，第二个培养器皿中也留存2毫升的细胞悬液，然后执行步骤S900，向该培养器皿中加入13毫升的培养液。
最后，再使移液装置将剩余的2毫升细胞悬液全部注入第三个空的培养器皿中，再向该培养器皿中加入13毫升的培养液即可。
需要说明的是，第一预设数量的具体数值并不限于上述的6毫升，在实际应用中，本领域技术人员可以根据试验或者经验灵活地设定第一预设数量的具体数值。
优选地，第一预设数量不大于15毫升。
需要说明的是，第二预设数量的具体数值也并不限于上述的15毫升，在实际应用中，本领域技术人员可以根据试验或者经验灵活地设定第二预设数量的具体数值。
优选地，第二预设数量不小于5毫升且不大于50毫升。进一步优选地，第二预设数量不小于12毫升且不大于15毫升。
优选地，在执行完步骤S700之后，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：S800：使所述培养器皿中的细胞悬液与新加入的培养液混合均匀。
将剩余的培养液全部加入培养器皿中后，使培养器皿中的细胞悬液与新加入的培养液混合均匀，例如，可以轻微摇晃培养器皿。
优选地，本发明在培养器皿上设置有电子标签，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：扫描位于所述培养器皿上的所述电子标签。
其中，电子标签内可以存储细胞名称、细胞批次、培养时间以及培养方案等信息，本领域技术人员在实际应用中可以灵活地设置电子标签内存储的信息。
最后，结合自动化细胞培养设备再对本发明的细胞传代工艺进行详细地介绍。
具体地，自动化细胞培养设备包括密闭的箱体，箱体的内部空间分为存储室、操作室以及培养室。
其中，存储室内安装有存储架和储液装置，存储架上存储有多个空的培养器皿，如培养瓶，储液装置内存储有培养液。操作室内安装有蠕动泵、离心机、机械手以及移液装置，培养室内安装有培养箱。
机械手夹持住装有细胞液的离心容器(如离心管)，将离心容器放置到离心机上，通过离心机对所述离心容器中的细胞液进行离心作业。
在完成离心作业之后，机械手将离心容器从离心机上取下，然后将离心容器中的废液全部倒掉，离心容器中仅剩贴附在离心容器内壁上的细胞。
将离心容器中的废液全部倒掉后，机械手将离心容器移动至蠕动泵的下方，蠕动泵与储液装置连通，通过蠕动泵将储液装置内的培养液加入到离心容器中，加入第一预设数量的培养液。
向离心容器中加入新的培养液后，机械手将离心容器移动至移液装置的下方，通过所述移液装置对所述离心容器中的液体进行吹打，以使离心容器中的细胞与新加入的培养液充分混合成细胞悬液。
在使离心容器中的细胞与培养液充分混合成细胞悬液后，通过移液装置将离心容器中的细胞悬液全部吸出。机械手将该离心容器丢掉，然后从存储架上夹持一个空的培养器皿，并将培养器皿移动至移液装置的下方，使所述移液装置将细胞悬液全部注入该空的培养器皿中。
在将细胞悬液全部注入培养器皿后，通过所述移液装置对所述培养器皿中的液体进行吹打，以使培养器皿中的细胞与培养液充分混合。
在使培养器皿中的细胞与培养液充分混合后，使移液装置将所述培养器皿中的细胞悬液吸出并在所述培养器皿中留存传代部分。
机械手将该培养器皿再次移动至蠕动泵的下方，通过蠕动泵向所述培养器皿中加入第二预设数量的培养液以使所述培养器皿中的细胞液满足所述培养器皿中的细胞的培养需求。
然后使机械手轻微摇晃该培养器皿，使培养器皿中的细胞悬液与新加入的培养液混合均匀，在将细胞均匀的分配至各个培养器皿中后，将培养器皿放置于培养箱内进行培养。
机械手再去抓取一个空的培养器皿并移动至移液装置的下方，完成后续的细胞传代作业。
至此，已经结合附图所示的优选实施方式描述了本发明的技术方案，但是，本领域技术人员容易理解的是，本发明的保护范围显然不局限于这些具体实施方式。在不偏离本发明的原理的前提下，本领域技术人员可以对相关技术特征作出等同的更改或替换，这些更改或替换之后的技术方案都将落入本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种细胞传代工艺方法，其特征在于，包括以下步骤：
S100：将细胞液进行离心分离作业；
S200：排除细胞液经离心分离后的分离废液；
S300：向离心分离后的细胞液中加入培养液以使分离得到的细胞与培养液混合得到细胞悬液；
S400：将细胞悬液全部置于一个培养器皿中；
S500：使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合；
S600：在所述培养器皿中留存部分细胞悬液并将其余的细胞悬液转移至另一个培养器皿中。
2.根据权利要求1所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，“向离心后的细胞液中加入培养液”的步骤具体包括：
向离心后的细胞液中加入第一预设数量的培养液；
其中，所述第一预设数量的培养液小于培养细胞所需要的培养液的总量；
在执行完步骤S600之后，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：
S700：向所述培养器皿中加入第二预设数量的培养液以使所述培养器皿中的培养液满足所述培养器皿中的细胞的培养需求。
3.根据权利要求2所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，在执行完步骤S700之后，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：
S800：使所述培养器皿中的细胞悬液与新加入的培养液混合均匀。
4.根据权利要求1所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，所述培养器皿上设置有电子标签，本发明的细胞传代工艺方法还包括以下步骤：
扫描位于所述培养器皿上的所述电子标签。
5.根据权利要求4所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，所述电子标签内存储有细胞名称、细胞批次、培养时间和/或培养方案。
6.根据权利要求1所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，“使所述培养器皿中的细胞和培养液充分混合”的步骤具体包括：
对所述培养器皿中的液体进行吹打。
7.根据权利要求2所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，所述第一预设数量不大于15毫升。
8.根据权利要求2所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，所述第二预设数量不小于5毫升且不大于50毫升。
9.根据权利要求8所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，所述第二预设数量不小于12毫升且不大于15毫升。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的细胞传代工艺方法，其特征在于，“将细胞液进行离心分离作业”的步骤具体包括：
通过离心机对细胞液进行离心分离作业。
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