CN115336596A - 杀线虫剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种杀线虫剂及其制备方法和应用，涉及线虫防治技术领域。本发明提供的杀线虫剂，包括提取物和复合酶；提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.6～2.4份、黄花蒿1.6～2.4份、朴树枝1.6～2.4份、紫薇枝0.6～1.4份、圆叶泽兰0.6～1.4份、广木香0.6～1.4份和葫芦巴0.6～1.4份；复合酶包括纤维素酶、果胶酶和任选的中性蛋白酶。该杀线虫剂的提取物中组分之间存在协同配合的作用，对于线虫具有良好的杀伤性能；将复合酶与提取物配合使用能够共同作用于线虫表皮细胞膜的糖蛋白层，让其溶解，进一步提高对线虫的灭杀性能，且使用安全，无污染。

Description

杀线虫剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及线虫防治技术领域，尤其是涉及一种杀线虫剂及其制备方法和应用。
背景技术
线虫是危害农作物的重要病原生物之一。化学除线虫农药毒性高，造成环境污染，而且长期使用化学杀线虫剂容易导致线虫产生抗性，更难防除。
由于线虫种类很多，繁殖和生存能力强，目前国内的杀线虫剂要么长期使用实际效果不好，要么毒性很大。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种杀线虫剂，以解决上述问题中的至少一种。
本发明的第二目的在于提供上述杀线虫剂的制备方法。
本发明的第三目的在于提供上述杀线虫剂在线虫防治中的应用。
第一方面，本发明提供了一种杀线虫剂，包括提取物和复合酶；
所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.6～2.4份、黄花蒿1.6～2.4份、朴树枝1.6～2.4份、紫薇枝0.6～1.4份、圆叶泽兰0.6～1.4份、广木香0.6～1.4份和葫芦巴0.6～1.4份；
所述复合酶包括纤维素酶、果胶酶和任选的中性蛋白酶。
作为进一步技术方案，所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.8～2.2份、黄花蒿1.8～2.2份、朴树枝1.8～2.2份、紫薇枝0.8～1.2份、圆叶泽兰0.8～1.2份、广木香0.8～1.2份和葫芦巴0.8～1.2份；
优选地，所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜2份、黄花蒿2份、朴树枝2份、紫薇枝1份、圆叶泽兰1份、广木香1份和葫芦巴1份。
作为进一步技术方案，所述提取物的制备方法包括：采用溶剂对提取物的制备原料进行浸泡提取，固液分离后取清液，经干燥处理后制备得到所述提取物。
作为进一步技术方案，所述溶剂包括乙醇溶液，优选为体积百分比为80％的乙醇。
作为进一步技术方案，所述浸泡提取的温度为75～80℃，优选为80℃；
优选地，所述浸泡提取的时间为12-20h，优选为16h。
作为进一步技术方案，所述固液分离包括过滤和离心中的至少一种；
优选地，将所述清液浓缩后再进行干燥处理。
作为进一步技术方案，所述复合酶中纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶的质量比为(30～70)：(10～50)：(1～40)，优选为50:30:20。
作为进一步技术方案，所述提取物和复合酶的质量比为4:1～2:3，优选为3:2。
第二方面，本发明提供了上述杀线虫剂的制备方法，将配方量的提取物和复合酶混合，制备得到杀线虫剂。
第三方面，本发明提供了上述杀线虫剂在线虫防治中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的杀线虫剂使用安全，包括提取物和复合酶，其中，提取物主要由特定配比的鹧鸪菜、黄花蒿、朴树枝、紫薇枝、圆叶泽兰、广木香和葫芦巴提取得到，提取物中各个组分之间存在协同配合的作用，对于多种线虫具有良好的杀伤性能；复合酶包括纤维素酶、果胶酶和任选的中性蛋白酶，与提取物配合使用能够共同作用于线虫表皮细胞膜的糖蛋白层，让其溶解，进一步提高对线虫的灭杀能力。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面，本发明提供了一种杀线虫剂，包括提取物和复合酶；
所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.6～2.4份、黄花蒿1.6～2.4份、朴树枝1.6～2.4份、紫薇枝0.6～1.4份、圆叶泽兰0.6～1.4份、广木香0.6～1.4份和葫芦巴0.6～1.4份；
所述复合酶包括纤维素酶、果胶酶和任选的中性蛋白酶。
需要说明书的，“任选的中性蛋白酶”是指复合酶中可以添加中性蛋白酶，也可以不添加中性蛋白酶。
鹧鸪菜为红叶藻科鹧鸪菜属植物美舌藻的藻体，具有驱蛔之功效。本发明以鹧鸪菜为原料制备提取物，按质量份数计，鹧鸪菜的用量例如可以为，但不限于1.6份、1.8份、2份、2.2份或2.4份。
黄花蒿，具有清热解疟、驱风止痒的作用。本发明以黄花蒿为原料制备提取物，按质量份数计，黄花蒿的用量例如可以为，但不限于1.6份、1.8份、2份、2.2份或2.4份。
本发明中，按质量份数计，朴树枝的用量例如可以为，但不限于1.6份、1.8份、2份、2.2份或2.4份。紫薇枝的用量例如可以为，但不限于0.6份、0.8份、1份、1.2份或1.4份。圆叶泽兰的用量例如可以为，但不限于0.6份、0.8份、1份、1.2份或1.4份。广木香的用量例如可以为，但不限于0.6份、0.8份、1份、1.2份或1.4份。葫芦巴的用量例如可以为，但不限于0.6份、0.8份、1份、1.2份或1.4份。
经发明人研究发现，以上述特定配比的组分制备得到的提取物对于线虫的杀伤性更好，将复合酶与提取物配合使用能够共同作用于线虫表皮细胞膜的糖蛋白层，让其溶解，进一步提高对线虫的灭杀。
在一些优选的实施方式中，所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.8～2.2份、黄花蒿1.8～2.2份、朴树枝1.8～2.2份、紫薇枝0.8～1.2份、圆叶泽兰0.8～1.2份、广木香0.8～1.2份和葫芦巴0.8～1.2份；
优选地，所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜2份、黄花蒿2份、朴树枝2份、紫薇枝1份、圆叶泽兰1份、广木香1份和葫芦巴1份。
通过对提取物制备原料配比的进一步优化和调整，使得提取物对于线虫的杀伤性能更好。
在一些优选的实施方式中，所述提取物的制备方法包括：采用溶剂对提取物的制备原料进行浸泡提取，固液分离后取清液，经干燥处理后制备得到所述提取物。
在一些优选的实施方式中，所述溶剂包括乙醇溶液，优选为体积百分比为80％的乙醇。经发明人研究发现，采用80％的乙醇对原料进行提取，能够最大限度的实现对原料中有效成分的提取，提高提取物对线虫的杀伤能力。
在一些优选的实施方式中，所述浸泡提取的温度例如可以为，但不限于75℃、76℃、77℃、78℃、79℃或80℃，优选为80℃；
优选地，所述浸泡提取的时间例如可以为，但不限于12h、14h、16h、18h或20h，优选为16h。
通过对浸泡提取温度和时间的进一步优化和调整，提高对原料中有效成分的提取效率。
在一些优选的实施方式中，所述固液分离包括但不限于过滤和离心，或者采用本领域技术人员所熟知的其他能够用于固液分离的方法；
优选地，将所述清液浓缩后再进行干燥处理。本发明中对于浓缩和干燥的方式不作具体限制，例如浓缩可以采用真空浓缩，干燥可以采用真空干燥。
在一些优选的实施方式中，所述复合酶中纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶的质量比例如可以为，但不限于30:50:1、40:40:10、50:30:20、60:20:30、70:10:40，优选为50:30:20。
在一些优选的实施方式中，所述提取物和复合酶的质量比例如可以为，但不限于4:1、3:2或2:3，优选为3:2。
通过对复合酶中纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶的质量配比，以及复合酶与提取物的质量配比的进一步优化和调整，使得本发明杀线虫剂的效果更好。
第二方面，本发明提供了上述杀线虫剂的制备方法，将配方量的提取物和复合酶混合，制备得到杀线虫剂。
在一些优选的实施方式中，将配方量的提取物和复合酶粉碎后再混合，有助于提高杀线虫剂的均一性，更好的发挥提取物和复合酶的配合作用。
该制备方法简单方便，成本低。
第三方面，本发明提供了上述杀线虫剂在线虫防治中的应用。例如用于山药田中线虫的防治或者地黄田中线虫的防治等。
本发明提供的杀线虫剂对于线虫具有良好的杀伤性能，使用安全，能够用于线虫防治。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg复合酶。其中，复合酶由50％的纤维素酶、30％的果胶酶和20％的中性蛋白酶组成；提取物采用如下制备方法制备得到：称取鹧鸪菜2.0kg，黄花蒿2.0kg，朴树枝2.0kg，紫薇枝1.0kg，圆叶泽兰1.0kg，广木香1.0kg，葫芦巴1.0kg，打粉过3号筛，然后将上述7种原料混合均匀后的粉末用100升80％的乙醇浸泡16h，于80℃回流提取2次，过滤后合并滤液离心，将离心清液真空浓缩后40-60℃真空烘干，制备得到提取物。
杀线虫剂的制备方法包括：称取3.0提取物和2.0kg复合酶，经搅拌均匀超微粉碎后制备得到杀线虫剂。
实施例2
一种杀线虫剂，包括2.0kg提取物和3.0kg复合酶。其中，复合酶由30％的纤维素酶、50％的果胶酶和20％的中性蛋白酶组成；提取物采用如下制备方法制备得到：称取鹧鸪菜1.6kg，黄花蒿2.4kg，朴树枝1.6kg，紫薇枝1.4kg，圆叶泽兰0.6kg，广木香1.4kg，葫芦巴0.6kg，打粉过3号筛，然后将上述7种原料混合均匀后的粉末用100升80％的乙醇浸泡12h，于75℃回流提取2次，过滤后合并滤液离心，将离心清液真空浓缩后40-60℃真空烘干，制备得到提取物。
杀线虫剂的制备方法包括：称取2.0提取物和3.0kg复合酶，经搅拌均匀超微粉碎后制备得到杀线虫剂。
实施例3
一种杀线虫剂，包括4.0kg提取物和1.0kg复合酶。其中，复合酶由70％的纤维素酶、100％的果胶酶和20％的中性蛋白酶组成；提取物采用如下制备方法制备得到：称取鹧鸪菜2.4kg，黄花蒿1.6kg，朴树枝2.4kg，紫薇枝0.6kg，圆叶泽兰1.4kg，广木香0.6kg，葫芦巴1.4kg，打粉过3号筛，然后将上述7种原料混合均匀后的粉末用100升80％的乙醇浸泡20h，于80℃回流提取2次，过滤后合并滤液离心，将离心清液真空浓缩后40-60℃真空烘干，制备得到提取物。
杀线虫剂的制备方法包括：称取4.0提取物和1.0kg复合酶，经搅拌均匀超微粉碎后制备得到杀线虫剂。
对比例1
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg复合酶，与实施例1的区别在于，提取物制备原料中不包括鹧鸪菜和朴树枝。
对比例2
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg复合酶，与实施例1的区别在于，提取物制备原料中不包括紫薇枝和圆叶泽兰。
对比例3
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg复合酶，与实施例1的区别在于，提取物制备原料中不包括广木香和葫芦巴。
对比例4
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg纤维素酶，提取物及杀线虫剂制备方法与实施例1相同。
对比例5
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg复合酶，与实施例1的区别在于，复合酶不含果胶酶。
对比例6
一种杀线虫剂，包括3.0kg提取物和2.0kg复合酶，与实施例1的区别在于，复合酶不含中性蛋白酶。
试验例1实验室实验
从土壤中提取得到线虫，然后将这批线虫分配到多个培养皿中，每个培养皿中线虫数量大概为30只左右；
实验室线虫剂配制：取实施例1-3和对比例1-6的杀线虫剂5g，加入100ml纯水中搅拌均匀；
分别取0.1ml的上述杀线虫剂加入上述含有线虫的培养皿中摇晃震荡均匀，同时设置添加等量清水的对照组，观察不同处理时间的线虫数量，结果如表1所示。
表1培养皿中线虫数量统计(单位：条)
Figure BDA0003826797130000081
Figure BDA0003826797130000091
从表1的结果可以看出，本发明提供的杀线虫剂24h内对杀线虫的平均杀伤效果高达95％左右，2次加药后杀伤效果高达100％。
试验例2山药大田实验
设置正常地块、13个山药重茬地块。其中5个山药重茬地块采用实施例1提供的杀线虫剂处理24h，6个山药重茬地块分别采用对比例1-6提供的杀线虫剂处理24h。以上处理杀线虫剂用量：每亩2kg，分两次使用。
大田取样检测试验步骤：
1.在一块土壤中，随机取三个取样点，每个点按0-10cm，10-20cm，20-30cm，30-40cm，40-50cm，50-60cm和60-90cm深度取样。同深度的三个取样点合成一个土样，带回实验室。
2.每个土层摇匀称50g，用四层纱布包裹土壤并系紧，放在加水的漏斗中，加水的量以漫过土壤表面即可，漏斗下接有10cm长的胶管，胶管下端接有止水夹。静置24h。
3.24h后，用离心管接漏斗下端液体10ml，以2000r/min离心2min，用吸管将上清液去掉至剩下2ml液体，放入培养皿内观察。
4.将洗脱下来的线虫(即步骤3中2ml液体中的线虫)分到16个培养皿(直径8.5cm)中，观察每个培养皿中的线虫数量并记录，结果如表2所示。
表2山药田土壤种各深度土层线虫数量统计表(单位：条)
Figure BDA0003826797130000092
Figure BDA0003826797130000101
试验例3地黄大田实验
设置2个正常地块、13个山药重茬地块。其中1个正常地块采用实施例1提供的杀线虫剂处理24h，5个山药重茬地块采用实施例1提供的杀线虫剂处理24h，6个山药重茬地块分别采用对比例1-6提供的杀线虫剂处理24h。以上处理杀线虫剂用量：每亩2kg，分两次使用。
大田取样检测试验步骤：
1.在一块土壤中，随机取三个取样点，每个点按0-10cm，10-20cm，20-30cm，30-40cm，40-50cm，50-60cm和60-90cm深度取样。同深度的三个取样点合成一个土样，带回实验室。
2.每个土层摇匀称50g，用四层纱布包裹土壤并系紧，放在加水的漏斗中，加水的量以漫过土壤表面即可，漏斗下接有10cm长的胶管，胶管下端接有止水夹。静置24h。
3.24h后，用离心管接漏斗下端液体10ml，以2000r/min离心2min，用吸管将上清液去掉至剩下2ml液体，放入培养皿内观察。
4.将洗脱下来的线虫(即步骤3中2ml液体中的线虫)分到16个培养皿(直径8.5cm)中，观察每个培养皿中的线虫数量并记录，结果如表3所示。
表3地黄田土壤中各深度土层线虫数量(单位：条)
地块种类 0-10cm 10-20cm 20-30cm 30-40cm 40-50cm 50-60cm
正常地ck1 56 36 19 7 5 2
重茬地ck2 65 55 30 39 8 6
重茬地ck3 51 53 32 36 9 5
实施例1(重茬) 6 4 3 2 1 0
实施例1(重茬) 5 5 3 2 1 1
实施例1(重茬) 5 4 3 3 1 1
实施例1(重茬) 6 5 2 3 0 0
实施例1(重茬) 5 4 3 3 1 1
实施例1(正常) 4 2 2 1 1 1
对比例1 7 5 6 6 3 2
对比例2 8 6 6 5 2 1
对比例3 7 6 5 4 3 1
对比例4 9 5 6 5 2 1
对比例5 8 6 7 4 2 0
对比例6 9 7 7 4 2 1
从表2和表3的结果可以看出，本发明提供的杀线虫剂处理24h后，对于土层深度30cm以上线虫的灭杀效果高达90％以上。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种杀线虫剂，其特征在于，包括提取物和复合酶；
所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.6～2.4份、黄花蒿1.6～2.4份、朴树枝1.6～2.4份、紫薇枝0.6～1.4份、圆叶泽兰0.6～1.4份、广木香0.6～1.4份和葫芦巴0.6～1.4份；
所述复合酶包括纤维素酶、果胶酶和任选的中性蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的杀线虫剂，其特征在于，所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜1.8～2.2份、黄花蒿1.8～2.2份、朴树枝1.8～2.2份、紫薇枝0.8～1.2份、圆叶泽兰0.8～1.2份、广木香0.8～1.2份和葫芦巴0.8～1.2份；
优选地，所述提取物主要由按质量份数计的如下原料制备得到：鹧鸪菜2份、黄花蒿2份、朴树枝2份、紫薇枝1份、圆叶泽兰1份、广木香1份和葫芦巴1份。
3.根据权利要求1所述的杀线虫剂，其特征在于，所述提取物的制备方法包括：采用溶剂对提取物的制备原料进行浸泡提取，固液分离后取清液，经干燥处理后制备得到所述提取物。
4.根据权利要求3所述的杀线虫剂，其特征在于，所述溶剂包括乙醇溶液，优选为体积百分比为80％的乙醇。
5.根据权利要求3所述的杀线虫剂，其特征在于，所述浸泡提取的温度为75～80℃，优选为80℃；
优选地，所述浸泡提取的时间为12-20h，优选为16h。
6.根据权利要求3所述的杀线虫剂，其特征在于，所述固液分离包括过滤和离心中的至少一种；
优选地，将所述清液浓缩后再进行干燥处理。
7.根据权利要求1所述的杀线虫剂，其特征在于，所述复合酶中纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶的质量比为(30～70)：(10～50)：(1～40)，优选为50:30:20。
8.根据权利要求1所述的杀线虫剂，其特征在于，所述提取物和复合酶的质量比为4:1～2:3，优选为3:2。
9.权利要求1～8任一项所述的杀线虫剂的制备方法，其特征在于，将配方量的提取物和复合酶混合，制备得到杀线虫剂。
10.权利要求1～8任一项所述的杀线虫剂在线虫防治中的应用。
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