CN112062871A - 一种红藻多糖的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于藻类多糖提取技术领域，本发明的一种红藻多糖的制备方法，以红藻纲植物为原料，将原料用水洗，碱处理，水洗到中性，晾干，粉碎后，加入蜂胶，经利用热酸提取法提取其中酸溶性多糖，再通过醇沉除去大分子多糖类成分，剩余溶液回收乙醇后，放冷，过滤除去蜂胶，滤液经超滤膜过滤，纳滤膜浓缩，冷冻干燥，得到红藻多糖。是一种有效降低红藻多糖中重金属含量的红藻多糖制备方法，结合了红藻多糖提取及重金属去除的技术。

Description

一种红藻多糖的制备方法
技术领域
本发明属于藻类多糖提取技术领域，具体涉及一种红藻多糖的制备方法。
背景技术
红藻多糖是从红藻纲海藻中提取出来的，多为富硫酸基多糖，目前应用较为广泛的主要是卡拉胶和琼胶。卡拉胶又称为麒麟菜胶、爱尔兰苔菜胶、鹿角菜胶、角叉菜胶，是从麒麟菜、石花菜、鹿角菜等红藻类海草中提炼出来的亲水性胶体，它的化学结构是由半乳糖及脱水半乳糖所组成的多糖类硫酸酯的钙、钾、钠、铵盐；琼胶又名琼脂、洋菜、冻粉、燕菜精、洋粉、寒天，是由红藻纲海藻(如石花菜)中提取的亲水性胶体，具有凝固性、稳定性、能与一些物质形成络合物，琼胶作为一种红藻多糖，黏度高，水溶性低，降解得到的琼胶寡糖，水溶性好。
藻类植物在海水中生长时易富集重金属，食品中重金属去除方法包括：离子交换法、络合法、超临界流体萃取技术、超声波法、膜分离法、化学法和酶-化学法以及利用吸附技术去除食品中的重金属。以上方法用以红藻多糖重金属去除中，需在红藻多糖提取完成后，再单独处理去除重金属。
目前缺少对藻类多糖提取过程中去除重金属有效控制方法，影响了产品的安全性。目前红藻多糖工业化生产中采用的方法主要是氢氧化钠-氯化钾分级处理、复配碱液梯度处理、酶法分离等。特别是红藻多糖具有金属离子络合作用，该多糖具有的网状结构带有一定的负电荷，且由于其较大的表面积同具有高度选择性的半透膜相匹配即具有了富集金属离子的特殊作用。
故红藻多糖对重金属有一定的吸附能力，生物医药领域重金属的限度是重要指标，现有技术的制备方法不能有效地去除红藻多糖中的重金属，易限制红藻多糖在生物医药中的使用。
蜂胶是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂，将其混入其上腭腺、蜡腺的分泌物加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。温度低于15℃时变硬、变脆、易粉碎；36℃时质软、有粘性和可塑性；温度达60～70℃时熔化成为粘稠流体，并分离出蜂蜡。比重随不同植物种类而异，一般在1.112～1.136之间。不溶于水，微溶于松节油，部分溶于乙醇，极易溶于乙醚和氯仿。溶于95％乙醇中呈透明的栗色，并有颗粒状沉淀。是蜜蜂科动物中华蜜蜂等修补蜂巢所分泌的黄褐色或黑褐色的粘性物质，可入药。其性平，味苦、辛、微甘，有润肤生肌，消炎止痛的功效，可治疗胃溃疡、口腔溃疡、烧烫伤、皮肤裂痛，防辐射等病症。目前对于蜂胶的利于主要在于食用和医用。现已成为各国科学研究的热点，并成为新兴的保健品倍受推崇。目前还未有蜂胶在其他方面的用途。
发明内容
本发明的目的在于提供一种有效降低红藻多糖中重金属含量的红藻多糖制备方法，该方法在提取红藻多糖的同时，降低重金属含量，结合了红藻多糖提取及重金属去除的技术。
本发明的技术方案是：
一种红藻多糖的制备方法，以红藻纲植物为原料，包括以下步骤：
(1)水洗：将原料用水浸泡洗净；
(2)碱处理：将水洗后的原料用氢氧化钠水溶液在50-60℃下碱处理10-24小时；过滤，水洗到中性，晾干，备用；
(3)热酸提取、蜂胶吸附：碱处理后的原料粉碎至10-80目，加入经冷冻后粉碎至20-60目的蜂胶，用盐酸溶液进行提取；提取吸附温度为50-80℃，提取吸附0.5-10小时，过滤，将滤液在0.085-0.098Mpa真空条件下蒸干，得酸提物；
(4)醇沉、除重金属：将酸提物边搅拌边加入体积比50-90％乙醇水溶液，在50-80℃温度下搅拌0.5-4小时，冷却至10-30℃，静置1-3小时，滤纸过滤，滤液在0.085-0.098Mpa真空条件下浓缩除去乙醇，冷却至5-10℃，静置5-12小时，滤纸过滤，除去蜂胶及其吸附的微量重金属；得醇沉液；
(5)膜过滤：将醇沉液用超滤膜过滤红藻多糖，再通过纳滤膜浓缩，冷冻干燥，即得红藻多糖。
优选的，步骤(5)中超滤膜过滤的红藻多糖截留分子量为5000-25000道尔顿。
优选的，所述红藻纲植物包括石花菜属、江篱属、麒麟菜属植物。
优选的，步骤(1)中原料用水浸泡5-8小时。
优选的，步骤(3)中，每1kg原料，加5-50g蜂胶和20-100L盐酸溶液。
优选的，步骤(3)中盐酸摩尔浓度为0.05-0.1mol/L。
优选的，步骤(2)中氢氧化钠水溶液浓度为0.1mol/L
与现有技术相比，本发明的有益效果有：
1、本发明在提取红藻多糖的过程中完成重金属去除，直接从原料提取低重金属含量的红藻多糖，区别于现有技术先提取后单独去除重金属的工艺。
2、竞争性吸附有效去除重金属；红藻多糖对重金属有一定的吸附能力，且一但吸附络合后很难被去除，常规提取方法原理都是清洗溶解等再过滤去除，都不是竞争性吸附后再滤除的原理，很难达到有效去除，只有通过蜂胶这种可以和红糖多糖竞争吸附重金属且蜂胶吸附重金属络合后更难被去除的特性，才能更有效去除重金属。巧妙利用蜂胶在较高温度条件下的强吸附力将红藻多糖中的重金属进行竞争性吸附，再利用蜂胶溶解度在低温度下显著降低的特性将其去除，蜂胶是《中国药典》现行版收载的中药材，可用为生物医药的原料；
3、采用本发明方法生产出的红藻多糖的分子量为5000-25000道尔顿，红藻多糖提取物重金属含量极低，其中砷不超过0.1mg/kg，铅不超过0.5mg/kg，汞不超过0.1mg/kg，镉不超过0.2mg/kg，铜不超过0.2mg/kg，满足医药器械的原料要求。
附图说明
图1为本发明红藻多糖制备的步骤(1)至(3)流程图；
图2为本发明红藻多糖制备的步骤(4)至(5)流程图。
具体实施方式
本发明用下列实施例来进一步说明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
实施例1
一种红藻多糖的制备方法，以红藻纲中麒麟菜属的麒麟菜为原料，将麒麟菜用水洗，碱处理，水洗到中性，晾干，粉碎后，加入蜂胶，经利用热酸提取法提取其中酸溶性多糖，再通过醇沉除去大分子多糖类成分，剩余溶液回收乙醇后，放冷，过滤除去蜂胶，滤液经超滤膜过滤，纳滤膜浓缩，冷冻干燥，得到红藻多糖。红藻纲植物包括石花菜属、江篱属、麒麟菜属植物，其他红藻纲植物也可同样提取红藻多糖。
具体方法如下：
(1)水洗：称取1kg麒麟菜，将麒麟菜用生活饮用水10L，浸泡6小时，再用生活饮用水洗净肉眼可见杂物。浸泡时间根据原料含水量程度及季节冷的热程度浸泡5-8小时，若原料本身含水量低或在冬季则浸泡时间较长，可达8小时，若原料含水量略高或在夏季则浸泡时间较短，可浸泡5小时。
(2)碱处理：将水洗后的麒麟菜用0.1mol/L氢氧化钠水溶液10L，在55℃下浸泡16小时。过滤，用生活饮用水洗到中性，晾干，备用。此处可浸泡10-24小时，主要根据氢氧化钠浓度、天气温度进行选择，若氢氧化钠浓度高或温度高，则时间较短，反之亦然。
(3)热酸提取、蜂胶吸附：碱处理后的麒麟菜粉碎至40目，加入经冷冻后粉碎到40目的蜂胶40g，用摩尔浓度为0.1mol/L盐酸溶液30L进行提取，提取吸附温度为70℃，提取吸附2小时，过滤，将滤液在0.09Mpa真空条件下蒸干，得酸提物。此处麒麟菜可粉碎至10-80目，蜂胶粉碎至20-60目，粉碎较细利于提取，较粗也可提取，但会增加提取时间也影响提取率。
每1kg原料，加5-50g蜂胶和20-100L盐酸溶液。盐酸摩尔浓度可选0.05-0.1mol/L。滤液蒸干真空条件为0.085-0.098Mpa。每批原料含重金属量不同，甚至差别较大，一般重金属含量较低则添加较少蜂胶1kg原料匹配5g蜂胶，若含量大，则可匹配50g。
合理的盐酸浓度，能保证有效提取溶液中的有效成分红藻多糖。盐酸浓度超过该范围，可能导致有效成分红藻多糖提取率低。盐酸溶液的量根据盐酸溶液浓度选择，浓度越高，加入可相对减少，反之亦然。
提取吸附温度可为50-80℃。温度太低可能影响提取效率，太高可能破坏分子结构。
提取吸附为0.5-10小时，根据提取时的各材料粉碎程度、盐酸浓度、提取温度选择提取时间。粉碎越细、盐酸浓度越高、提取温度越高，则提取吸附时间越短，反之亦然。
步骤(1)至(3)流程图如附图1。
(4)醇沉、除重金属：将酸提物边搅拌边加入75％(乙醇与水体积比)乙醇溶液，在70℃温度下搅拌1小时，冷至20℃，静置2.5小时，滤纸过滤，滤液在0.085-0.098Mpa真空条件下浓缩除去乙醇，冷至10℃，静置8小时，过滤除去蜂胶及其吸附的微量重金属。得醇沉液。
可选体积比为50-90％的乙醇水溶液，在50-80℃温度下搅拌0.5-4小时，该温度利于蜂胶溶解及吸附反应，反应时间根据具体温度、重金属含量而定，冷至10-30℃，静置1-3小时，静置待吸附有重金属的蜂胶析出，滤纸过滤出去大部分蜂胶及重金属，滤液浓缩除去乙醇，冷至5-10℃，静置5-12小时，静置待吸附有重金属的蜂胶析出，滤纸过滤除去蜂胶及其吸附的微量重金属。静置时间太短不利于蜂胶完全析出。
(5)膜过滤：将醇沉液用超滤膜过滤红藻多糖，再通过纳滤膜浓缩，冷冻干燥，即得。超滤膜过滤截留分子量为5000-25000道尔顿的红藻多糖。
步骤(4)至(5)流程图如附图2。
本实施例生产的红藻多糖重金属极低，其中砷未检出，铅0.1mg/kg，汞未检出，镉0.03mg/kg，铜不超过0.01mg/kg。
实施例2
取1kg实施例1相同批次麒麟菜原料，除无添加蜂胶外，其他步骤完全按实施例1方法进行。生产出的红藻多糖与实施例1对比如下：
Figure BDA0002723537600000041
结论：从两个实施例对比可以看出，加入蜂胶可有效降低红藻多糖总金属含量。
本发明将红藻纲植物，碱处理，水洗到中性，晾干，粉碎后，加入蜂胶，经利用热酸提取法提取其中酸溶性多糖，再通过醇沉除去大分子多糖类成分，剩余溶液回收乙醇后，放冷，过滤除去蜂胶，滤液经超滤膜过滤，纳滤膜浓缩，冷冻干燥，得到红藻多糖。本发明竞争性吸附有效去除了大部分重金属。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (7)

1.一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，以红藻纲植物为原料，包括以下步骤：
(1)水洗：将原料用水浸泡洗净；
(2)碱处理：将水洗后的原料用氢氧化钠水溶液在50-60℃下碱处理10-24小时；过滤，水洗到中性，晾干，备用；
(3)热酸提取、蜂胶吸附：碱处理后的原料粉碎至10-80目，加入经冷冻后粉碎至20-60目的蜂胶，用盐酸溶液进行提取；提取吸附温度为50-80℃，提取吸附0.5-10小时，过滤，将滤液在0.085-0.098Mpa真空条件下蒸干，得酸提物；
(4)醇沉、除重金属：将酸提物边搅拌边加入体积比50-90％乙醇水溶液，在50-80℃温度下搅拌0.5-4小时，冷却至10-30℃，静置1-3小时，滤纸过滤，滤液在0.085-0.098Mpa真空条件下浓缩除去乙醇，冷却至5-10℃，静置5-12小时，滤纸过滤除去蜂胶及其吸附的微量重金属；得醇沉液；
(5)膜过滤：将醇沉液用超滤膜过滤红藻多糖，再通过纳滤膜浓缩，冷冻干燥，即得红藻多糖。
2.根据权利要求1所述的一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，所述膜过滤中超滤膜过滤红藻多糖截留分子量为5000-25000道尔顿。
3.根据权利要求1所述的一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，所述红藻纲植物包括石花菜属、江篱属及麒麟菜属植物。
4.根据权利要求1所述的一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，所述原料用水浸泡5-8小时。
5.根据权利要求1所述的一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，每1kg原料，加5-50g蜂胶和20-100L盐酸溶液。
6.根据权利要求1所述的一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中盐酸摩尔浓度为0.05-0.1mol/L。
7.根据权利要求1所述的一种红藻多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中氢氧化钠水溶液浓度为0.1mol/L。
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