CN115322237B

CN115322237B - 一种抑制rna病毒的化合物

Info

Publication number: CN115322237B
Application number: CN202211252582.3A
Authority: CN
Inventors: 沈振波; 曾皓宇
Original assignee: Guangdong Papien Biotechnology Co ltd
Current assignee: Guangdong Papien Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-10-13
Filing date: 2022-10-13
Publication date: 2023-03-10
Anticipated expiration: 2042-10-13
Also published as: CN115322237A

Abstract

本发明涉及一种抑制RNA聚合酶(RdRp)的化合物，可用于抑制RNA病毒，包括新冠病毒、流感病毒和丙肝病毒，还涉及到该化合物的制备方法，以及该化合物或其在药学上可接受的盐或酯在制备用于预防和/或治疗新冠病毒、流感病毒、丙肝病毒感染的药物中的用途。

Description

一种抑制RNA病毒的化合物

技术领域

本发明涉及基于一种化学合成的化合物，还涉及该化合物在抑制新冠病毒、流感病毒和丙肝病毒中的用途。

背景技术

病毒聚合酶是病毒催化合成自身遗传物质的一类酶的统称，虽然不同病毒的聚合酶有着迥异的氨基酸序列，但其蛋白的整体结构和功能基序在各类病毒中相对较保守。为抗病毒药物研发的重要靶点。不同病毒聚合酶的结构和功能有着许多相似之处，因此针对某一种病毒聚合酶设计的抑制剂往往对其他病毒也有较好的抑制作用。

靶向病毒聚合酶的抑制剂一般分为核苷类抑制剂、非核苷类抑制剂、蛋白一蛋白相互作用抑制剂和共价抑制剂。核苷类抑制剂的作用机理就是模仿机体内的核苷分子，通过与天然的核苷底物竞争进而掺人到新生成的病毒DNA或RNA链中，导致立即或延迟的链终止作用。

流感病毒的聚合酶是RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerise,RdRp)，为约250 kDa的异源三聚体化合物，参与流感病毒的复制和转录。流感病毒的RdRp由三个异源亚基组成:核酸内切酶( polymerise acidic,PA)、碱性聚合酶1 ( polymerisebasic 1 , PB 1)和碱性聚合酶2(polymerise basic 2，PB2)。RdRp

与核蛋白(NP)一起形成病毒核糖核蛋白复合体(vRNP)的支架，起到承载病毒遗传物质的作用。流感病毒的RdRp呈“U”形结构，状如半握的右手。其中，PB1亚基是RdRp的关键亚基，具有手掌、拇指和手指的亚结构以及合成病毒RNA的起始环。它的N末端与PA亚基的C末端结合组成聚合酶的拇指结构，C末端与PB2亚基的N末端结合组成聚合酶的手指结构。

法匹拉韦是针对流感病毒RNA聚合酶的PB2基团研发的核昔酸类似物，其在细胞酶的作用下转化为三磷酸活性形式，该活性结构可以被RdRp错误识别为嘌呤并整合到新生RNA中，最终导致病毒RNA链的致死合成。法匹拉韦对多种病毒都显示出较好的抑制活性，但是法匹拉韦具有潜在的致畸性，因此仅在日本获得有条件批准使用。

流感病毒一样，冠状病毒遗传物质的复制也是由RdRp复合物介导的。以SARS-CoV-2为例，其聚合酶复合体的结构包含1个非结构性蛋白I2,1个非结构性蛋白7

(NSP7)和2个非结构性蛋白8,四者共同完成冠状病毒RNA的复制过程。冠状病毒聚

合酶的核心催化部位是NSPL2，其RdRp结构域呈规范的右手状，包含手指、拇指和手掌3个子域。与流感病毒聚合酶不同的是，NSP12可以通过与NSP7和NSP8的结合稳定自身的闭合构象。

法匹拉韦最初用于治疗埃博拉和流感等RNA病毒感染，但一项随机临床试验发现其具有抗新冠病毒（SARS-CoV-2）的活性，其在体内转化为三磷酸活性形式。由于RNA病毒RdRp间相同的双金属催化机制，该药物也可以与SARS-CoV-2的RdRp金属催化位点相结合从而产生抑制活性，因此法匹拉韦在几个国家被紧急批准用于轻度新冠肺炎的治疗，目前该药物的单独使用以及与其他药物联合使用治疗新冠肺炎的临床试验正在进行中。

丙肝病毒的RdRp也被称为NSSB，其结构具有典型RNA聚合酶的“右手构象”，包括拇指，手指和手掌三个部。“手掌区”是聚合酶的中心部分，是基因组复制的催化中心;“手指区”负责捕获复制所需的三磷酸核昔酸;而“拇指区”，则是配合RNA复制的起始和延伸过程。丙肝病毒的RdRp核苷类似物抑制剂成为索非布韦，其为前药，在体内转化成三磷酸生物活性形式，可以模拟尿苷三磷酸“以假乱真”地掺人到HCV新生的RNA链中导致链终止。

瑞德西韦(remdesivir)最初是用于治疗丙肝的药物，但在2014年西非爆发埃博拉疫情期间，通过筛选发现该药物具有抗埃博拉病毒活性。后来它被证明是一种广谱的抗病毒药物。在新冠病毒的临床试验中，结果表明，瑞德西韦与安慰剂相比能够降低新冠肺炎患者的死亡率。

尽管近几十年来抗病毒药物取得了许多重大突破，但想彻底治愈病毒感染疾病仍然是一个巨大的挑战。病毒易发生基因突变，因此抗病毒药物无可避免地面临着耐药性的问题。针对新靶标新机制的广谱抗耐药性抗病毒药物研究依然是目前亟需解决的课题。

目前针对病毒聚合酶先导化合物的发现策略主要有高通量筛选、老药新用、基于聚合酶活性位点的虚拟筛选和基于靶点的全新药物设计等策略。

发明内容

本发明提供了一种核苷类抑制剂，该化合物对于新型冠状病毒（SARS-CoV-2）、流感病毒以及丙肝病毒均具有良好的抑制作用。

本发明的技术方案如下：

结构如式 1 所示化合物或其在药学上可接受的盐：

（式1）

另一方面，本发明提供了一种合成式1所述的化合物的方法，合成路径如下：

其中，化合物33-41上的Bn代表苄基，化合物37-39上的TMS代表三甲基硅基团，化合物19和化合物2上的Boc代表叔丁氧羰基。

进一步地，合上述成路径具体如下：

其中，上述合成路线中的缩写说明如下：

BnBr：溴化苄；DMF: 二甲基甲酰胺; EtOH：乙醇；DMP: 戴斯-马丁高碘烷;DCM:二氯甲烷；BrMg三TMS：三甲基硅基炔溴化镁； THF：四氢呋喃；DMAP:4-二甲基氨基吡啶;

AIBN：偶氮二异丁腈；Bu₃SnH：三正丁基氢化锡；TBAF：四丁基氟化铵；AcOH：乙酸；TPSCI：2,4,6-三异丙基苯磺酰；Et3N：三乙胺；MeCN：乙腈； DIPEA： N，N-二异丙基乙胺；EDCI: 碳二亚胺盐酸盐; TEA:三乙胺。

进一步地，其中化合物33转变成化合物34的具体操作如下：将化合物33、溴化苄、DMF降温至 15℃-20℃，分批加入氢化钠，控制 20℃-40℃反应 1h；加甲醇淬灭至无气泡产生，滴加水，析出固体，过滤，洗涤，干燥，即可得到化合物34。

进一步地，其中化合物34转变成化合物35的具体操作如下：将化合物 34、0.1mol/L KOH的 95%乙醇溶液，回流反应过夜；降温、减压浓缩干溶剂，萃取，洗涤，干燥，得到化合物35。

进一步地，其中化合物35转变成化合物36的具体操作如下：将化合物 35、二氯甲烷冰浴搅拌，分批加入戴斯马丁氧化剂，升至室温反应过夜；饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，过滤，洗涤，分液萃取，洗涤，干燥，得到化合物36。

进一步地，其中化合物36转变成化合物37的具体操作如下：将化合物 36和THF溶液搅拌降温至-20℃，滴加三甲基硅基炔溴化镁溶液反应 1h；饱和氯化铵淬灭反应，分液萃取，洗涤，干燥化合物 37。

进一步地，其中化合物37转变成化合物38的具体操作如下：将化合物 37、DMAP、DCM冰浴下滴加4-二甲氨基吡啶，室温反应 1h；加水淬灭，分液萃取，洗涤，浓缩，得到化合物38。

进一步地，其中化合物38转变成化合物39的具体操作如下：将化合物 38、AIBN、三正丁基氢化锡和甲苯在110℃下回流 4h；减压浓缩得到化合物 39。

进一步地，其中化合物39转变成化合物40的具体操作如下：将化合物 39、乙酸、THF冰浴搅拌，滴加 TBAF，滴完室温搅拌 2h；分液萃取，洗涤，干燥，得到化合物 40。

进一步地，其中化合物40转变成化合物41的具体操作如下：将化合物 40、DMAP、三乙胺、乙腈混合，分批加入 TPSCl，室温反应 1h，加入氨水反应过夜；减压浓缩，分液萃取，洗涤，干燥，得到化合物 41。

进一步地，其中化合物41转变成化合物42的具体操作如下：将化合物 41加入到溶剂二氯甲烷中，冰浴下滴加三氯化硼溶液，滴完升温至室温反应 2h；降温至冰浴，缓慢加入氨水，调 PH为8-9，减压浓缩，得到化合物 42。

进一步地，其中化合物42转变成式1所示化合物的具体操作如下：将化合物 42、化合物23、氯化镁、乙腈、DMF，升温至 50℃，反应 10min，滴加 DIPEA，反应 4h；降温至室温，萃取，洗涤，干燥，得到式1所示化合物。

另一方面，本发明提供了式1所示化合物或其在药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗流感病毒的药物中的用途。

另一方面，本发明提供了式1所示化合物或其在药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗新冠病毒的药物中的用途。

另一方面，本发明提供了式1所示化合物或其在药学上可接受的盐或酯在制备用于预防和/或治疗丙肝病毒的药物中的用途。

（1）本发明的化合物是一种RNA聚合酶抑制剂，可与天然核糖核苷酸竞争。本发

明的化合物进入受病毒感染的真核细胞后，可以转化为活性三磷酸形式，结合在RNA聚合酶（RdRP）的活性部位，从而可抑制RNA链的进一步延伸并终止RNA的复制。

（2）初步试验数据显示，本发明所述的化合物或其在药学上可接受的盐具有广谱

抑制RNA病毒的作用，尤其抑制新冠病毒、流感以及丙肝病毒。

（3）相对于其他核苷酸类抑制剂，本发明的化合物容易合成，且合成效率高。

附图说明

图1为本发明实施例3新冠病毒抑制实验的荧光检测结果图。

具体实施方式

为了更充分的理解本发明的技术内容，下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步介绍和说明。

实施例1 ：合成本发明式1所示化合物

化合物 34 的合成：脱水尿苷 33（70.0g，1eq），溴化苄（2.2eq），210ml DMF，降

温至 15℃-20℃，分批加入氢化钠（60%，2.2eq），控制 20℃-40℃反应 1h。后处理：加甲醇淬灭至无气泡产生，滴加 630ml 水，析出大量固体，过滤，固体用 210ml 水洗涤2 次，固体加入 210m 异丙醇和 105ml 石油醚搅拌 0.5h，过滤，用 70ml 异丙醇：石油醚=2：1 洗涤 2 次固体，60℃真空干燥得固体 53.0g，收率：42.1%。

化合物 35 的合成：化合物 34（50.0g，1eq）， 500ml 0.1mol/L KOH 的 95%乙醇溶

液，回流反应过夜。后处理：降温至室温，减压浓缩干溶剂，加入水和乙酸乙酯，分液萃取，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩干得固体化合物 35，45.0g，收率：86.2%。

化合物 36 的合成：化合物 35（45.0g，1eq），900ml 二氯甲烷，冰浴搅拌，分三批

加入戴斯马丁氧化剂（2eq），自然升至室温反应过夜。后处理：饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，过滤不溶絮状物，二氯甲烷洗涤滤饼，分液萃取，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过柱得化合物 36，36.0g，收率：85.3%。

化合物 37 的合成：化合物 36（36.0g，1eq），360ml THF 溶液，搅拌降温至-20℃，

滴加三甲基硅基炔溴化镁溶液（3eq，1mol/L in THF）反应 1h。后处理：饱和氯化铵淬灭反应，加入适量水和乙酸乙酯，分液萃取，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过柱得化合物37，16.8g，收率：37.8%。

化合物 38 的合成：化合物 37（16.8g，1eq），DMAP（2eq），170ml DCM，冰浴下

滴加4-二甲氨基吡啶（2eq），室温反应 1h。后处理：加水淬灭，二氯甲烷分液萃取，水洗三次，盐水洗两次，有机相干燥浓缩得粗品化合物 38，18.9g，收率：96.9%。

化合物 39 的合成：化合物 38（18.9g，1eq），0.9g AIBN，三正丁基氢化锡（4eq），

380ml 甲苯，110℃回流 4h。后处理：减压浓缩过柱得化合物 39，9.5g，收率：60.4%。

化合物 40 的合成：化合物 39（9.2g，1eq），乙酸（1eq），100ml THF，冰浴搅拌，

滴加 TBAF（1mol/L in THF，2eq），滴完室温搅拌 2h。后处理：加入乙酸乙酯和水，萃取分液，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓过柱得化合物 40，6.7g，收率：84.8%。

化合物 41 的合成：化合物 40（6.9g，1eq），DMAP（2eq），三乙胺（2eq），70ml

乙腈，分批加入 TPSCl（2eq），室温反应 1h，TLC 监控原料反应消耗情况，原料消耗 80%以上后，加入 70ml 氨水反应过夜。后处理：减压浓缩约 50%体积溶剂，加入适量水和乙酸乙酯，分液萃取，有机相用 10%柠檬酸洗涤 3 次，饱和碳酸氢钠洗涤 1 次，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩过柱得化合物 41，4.7g，收率 68.1%。

化合物 42 的合成：化合物 41（3.2g，1eq），100ml 二氯甲烷作溶剂，冰浴下滴加

三氯化硼（4eq）溶液，滴完升温至室温反应 2h。后处理：降温至冰浴，缓慢加入氨水调 PH=8-9，直接减压浓缩干过柱得化合物 42，2.1g，收率：77.7%。

化合物 20 的合成：将异丁醇、化合N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸、EDCI（1.1eq），DMAP（0.1eq），搅拌溶解于 40ml 的二氯甲烷溶液中，室温下搅拌 3 小时。后处理：加入适量水和二氯甲烷萃取分液，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压过柱得化合物 20 ，4.1g，收率：57.6%。

化合物 21 的合成：化合物 20（4.1g，1eq）冰浴搅拌溶解于 30ml 二氧六环中，滴加氯化氢的二六环溶液（1mol/L，3eq），滴加完成后自然升至室温反应过夜。后处理：减压浓缩干得化合物 21，3.0g，收率：97.1%。

化合物 23 的合成：化合物 21（3g，1eq）溶解于 40ml DCM 中，冷却至-78℃，加入二氯磷酸苯酯（1eq），再逐滴加入 TEA（2eq）。滴加完成后在-78℃下搅拌 15min，自然升温至室温搅拌 2h。然后将反应体系冷却至-20℃，加入 TEA（1.15eq），再缓慢加入对硝基苯酚（0.9eq）的二氯甲烷溶液。滴加完成后升温至室温搅拌过夜。后处理：加入适量的水淬灭反应，二氯甲烷萃取分液，盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩过柱

得化合物 23，3.8g。

式1所示化合物（称为PPN-303）的合成:化合物 42（2.1g，1eq），化合物片段 23（1.2eq），氯化镁（1.5eq），50ml 乙腈，20ml DMF，升温至 50℃反应 10min，滴加 DIPEA（3.5eq），反应 4h。后处理：降温至室温，加入水和乙酸乙酯，萃取，饱和碳

酸氢钠和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过柱得化合物 PPN-303，560mg，收率：12.5%。

上述合成路线中所采用的试剂都是低毒性的，没有剧毒物质，生物安全性高，而且本发明合成方法的相对得率比较高。

实施例2：细胞毒性检测方案

Vero E6细胞接种于96孔细胞培养板中，培养过夜，待融合度达到80-90%时用于实验。向各孔加入不同剂量的待测药物PPN303、PPN311、PPN314和PPN315（终浓度为1.0mM、100μM、10μM、1.0μM、0.1μM、10nM），对照孔加入等体积培养基，孵育72h后通过CCK-8方法检测细胞活力，计算CC50评估化合物对细胞生长的影响。

表1：对Vero E6细胞毒性的实验数据

化合物PPN311的化学结构式如下：

化合物PPN314的化学结构式如下：

化合物PPN315的化学结构式如下：

实施例3：对新冠病毒抑制效果

Vero E6细胞进行96孔细胞板铺板，1.6×10⁴cells/well，D10 培养基进行37℃、5%CO₂培养过夜。吸弃细胞培养上清，每孔加入不同浓度的待测药物，每种药物设6个浓度梯度（100μM、33.3μM、11.1μM、3.7μM、1.2μM、0.4μM），每个梯度4个重复孔，37℃，5%CO2培养箱中孵育1h。然后每孔加入等体积新冠病毒（SARS-CoV-2 Omicron）稀释上清（MOI=0.1），同时设置溶媒对照、不含药物和病毒的阴性对照、阳性对照。37℃，5%CO₂培养箱中感染1h后，吸弃病毒-待测药物混合培养基，并用1×PBS清洗后换成只含待测药物的培养基继续培养，设6个浓度梯度（100μM、33.3μM、11.1μM、3.7μM、1.2μM、0.4μM），每个梯度4个重复孔，同时设置阳性对照、溶媒对照和阴性对照。37℃，5% CO2分别培养24h后，

①收集细胞上清液，提取病毒RNA，用于Real-time PCR病毒定量，计算药物对病毒复制的抑制率。

②细胞板内弃去培养上清，加入4% PFA 200 μL/well，室温固定大于3h。Triton打孔破膜封闭后，SARS-N兔单抗作为一抗作用1h，A488 anti-Rabbit IgG为二

抗作用1h，洗板，荧光观察。新冠病毒在Vero E6细胞中复制的抑制实验数据（24h）结果图1所示。

新冠病毒在Vero E6细胞中复制的抑制实验数据（24h）实验结果如下表2所示。

表2

由对新冠病毒的抑制实验可知，本发明所述化合物PPN303相对于其他化合物PPN311、PPN314和PPN315可有效抑制新冠病毒，本发明所述的化合物或其在药学上可接受的盐或酯可用于制备治疗新冠病毒感染的药物。

小鼠攻毒药效性检测

构建K18-hACE2小鼠模型，采用5~14 周龄的K18-hACE2小鼠（集萃药康）的小鼠，体重20 ~30 g，随机分为8组，每组8只小鼠，正常对照组、新冠病毒感染组、PPN303组、PPN311组、PPN314组和PPN315组。新冠病毒（Delta）滴鼻感染K18-hACE2转基因小鼠，感染剂量初步为10⁵PFU。感染后2小时，药物组小鼠灌胃给予受试物，连续5日，1次/日。感染后每日记录体重变化，记录感染5天内动物死亡情况。

表3：小鼠存活情况情况

天数	正常对照组	新冠病毒感染组	PPN303	PPN311	PPN314	PPN315
							1	8	8	8	8	8	8
2	8	5	7	4	5	3
							3	8	2	6	1	3	3
4	8	0	5	0	1	1
							5	8	0	5	0	0	0

实施例4 ：对流感病毒抑制效果

病毒感染性测定（TCID50的测定）

取出病毒液溶解后，用无血清无双抗培养基进行连续10倍的梯度稀释，可稀释为10¹～10⁹（可按情况增加或减少稀释度）将各稀释度的病毒接种于相应的宿主细胞中，其中流感病毒H1N1、H3N2接种于MDCK(NBL-2)细胞，每个稀释度设6-8个复孔，将不同浓度的病毒液分别接种到相应的长成单层细胞的96孔板中，每孔100μL，置于5% CO2恒温培养箱内，于35℃，吸附1-2h后弃上清，以PBS洗1-2次；加细胞维持液每孔100μL继续培养，同时设正常细胞对照组6-8个，分别置35℃、37℃ 5%CO2培养箱培养，每日观察病毒生长情况，在倒置显微镜下观察细胞的形态变化并记录特征性细胞病变(CPE)的孔数，3-7d后记录结果，细胞病变率达50%及以上的培养孔计为病变孔，细胞病变率小于50%者计为非病变孔。

细胞出现病变(CPE)程度按6级标准记录：

-：细胞生长正常，无病变出现；

±：细胞病变少于整个单层细胞的10%；

+：细胞病变少于整个单层细胞的25%；

++：细胞病变少于整个单层细胞的50%；

+++：细胞病变少于整个单层细胞的75%；

++++：细胞病变占整个单层细胞的75%以上。

结果判定及计算方法：

根据Reed-Muench法，计算病毒的半数感染量TCID50。

比例距离（PD）=（病变高于50%的百分数-50%）/（病变高于50%的百分数-病变低于50%的百分数）

其中细胞病变率达50%及以上的培养孔计为病变孔，细胞病变率小于50%者计为非病变孔。

体外抗病毒试验

(1)实验方法

待96孔板细胞长成单层后进行体外抗病毒试验。病毒攻击量为10～100TCID50。病毒吸附单层细胞1～2h后，洗去病毒液，各孔分别加入100μL药液和100μL维持液，同时设病毒对照，空白细胞对照。置于相应温度的CO2培养箱内培养，每天在倒置显微镜下观察病变，连续观察数天，记录各孔CPE。当病毒对照组细胞病变达到“ ++++”，且正常细胞对照组无病变时，确定为CCK-8检测的最适时间点，进行CCK-8检测，在酶标仪450nm波长处测定吸光度值。实验重复2次，计算3次实验结果的平均值。

（2）计算方法：

根据 Reed-Muench 法，计算药物 50%有效浓度（IC50）和治疗指数（TI）。

病毒抑制率=（药物组 OD450-病毒对照组 OD450）/（正常细胞对照组 OD450-病毒对照组 OD450）。

TI= TC50/ IC50。

表4：对H1N1病毒的抑制效果

化合物名称	浓度	H1N1病毒抑制率
			PPN303	10μM	71.36
PPN311	10 μM	50.61
			PPN314	10 μM	48.62
PPN315	10 μM	27.65

表5：对H3N2病毒的抑制效果

化合物名称	浓度	H3N2病毒抑制率
			PPN303	10μM	61.36
PPN311	10 μM	20.16
			PPN314	10 μM	28.26
PPN315	10 μM	37.59

由对流感病毒的抑制实验可知，本发明所述化合物PPN303相对于其他化合物PPN311、PPN314和PPN315可有效抑制流感病毒H1N1和H3N2，本发明所述的化合物或其在药学上可接受的盐或酯可用于制备治疗流感病毒感染的药物。

实施例5 ：对丙肝抑制效果

实施例5的基本步骤同实施例4，只是将病毒更换为丙肝病毒。其中，丙肝病毒于37℃吸附1-2h后弃上清。各化合物对丙肝病毒抑制效果如下表6所示。

表6

化合物名称	浓度	丙肝病毒抑制率
			PPN303	10μM	68.32
PPN311	10 μM	40.61
			PPN314	10 μM	48.52
PPN315	10 μM	37.65

由对丙肝病毒的抑制实验可知，本发明所述化合物PPN303相对于其他化合物PPN311、PPN314和PPN315可有效抑制丙肝病毒，本发明所述的化合物或其在药学上可接受的盐或酯可用于制备治疗丙肝病毒感染的药物。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.结构如式 1所示化合物或其在药学上可接受的盐：

（式1）。

2.一种合成如权利要求1所述的化合物的方法，合成路径如下：

其中，化合物34-41上的Bn代表苄基，化合物37-39上的TMS代表三甲基硅基团，化合物20和化合物2上的Boc代表叔丁氧羰基。

3.如权利要求2所述的方法，合成路径如下：

。

4.如权利要求3所述的方法，其中，化合物33转变成化合物34的具体操作如下：

将化合物33、溴化苄、DMF降温至 15℃-20℃，分批加入氢化钠，控制 20℃-40℃反应1h；加甲醇淬灭至无气泡产生，滴加水，析出固体，过滤，洗涤，干燥，即可得到化合物34。

5.如权利要求3所述的方法，其中，化合物34转变成化合物35的具体操作如下：

将化合物 34、0.1mol/L KOH的 95%乙醇溶液，回流反应过夜；降温、减压浓缩干溶剂，萃取，洗涤，干燥，得到化合物35。

6.如权利要求3所述的方法，其中，化合物35转变成化合物36的具体操作如下：

将化合物 35、二氯甲烷冰浴搅拌，分批加入戴斯-马丁高碘烷，升至室温反应过夜；饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，过滤，洗涤，分液萃取，洗涤，干燥，得到化合物36。

7.如权利要求3所述的方法，其中，化合物36转变成化合物37的具体操作如下：

将化合物 36和THF 溶液搅拌降温至-20℃，滴加三甲基硅基炔溴化镁溶液反应 1h；饱和氯化铵淬灭反应，分液萃取，洗涤，干燥化合物 37。

8.如权利要求3所述的方法，其中，化合物38转变成化合物39的具体操作如下：

将化合物 38、AIBN、三正丁基氢化锡和甲苯在110℃下回流 4h；减压浓缩得到化合物39。

9.如权利要求3所述的方法，其中，化合物39转变成化合物40的具体操作如下：

将化合物 39、乙酸、THF冰浴搅拌，滴加 TBAF，滴完室温搅拌 2h；分液萃取，洗涤，干燥，得到化合物 40。

10.如权利要求3所述的方法，其中，化合物40转变成化合物41的具体操作如下：

将化合物 40、DMAP、三乙胺、乙腈混合，分批加入 TPSCl，室温反应 1h，加入氨水反应过夜；减压浓缩，分液萃取，洗涤，干燥，得到化合物 41。

11.如权利要求3所述的方法，其中，化合物41转变成化合物42的具体操作如下：

将化合物 41加入到溶剂二氯甲烷中，冰浴下滴加三氯化硼溶液，滴完升温至室温反应2h；降温至冰浴，缓慢加入氨水，调 PH为8-9，减压浓缩，得到化合物 42。

12.如权利要求3所述的方法，其中，化合物42转变成式1所示化合物的具体操作如下：

将化合物 42、化合物23、氯化镁、乙腈、DMF，升温至 50℃，反应 10min，滴加 DIPEA，反应 4h；降温至室温，萃取，洗涤，干燥，得到式1所示化合物。

13.如权利要求1所述化合物或其在药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗流感病毒的药物中的用途。

14.如权利要求1所述化合物或其在药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗新冠病毒的药物中的用途。

15.如权利要求1所述化合物或其在药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗丙肝病毒的药物中的用途。