CN115305249B - 一种电离辐射响应的lncRNA分子lnc1267及其在调控细胞放射敏感性中的应用 - Google Patents

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Abstract

一种电离辐射响应的lncRNA分子lnc1267及其在调控细胞放射敏感性中的应用，属于生物技术领域。为了研究lncRNA对电离辐射后细胞凋亡等生物学过程的调控作用，本发明筛选出了参与电离辐射应答响应的lncRNA lnc1267，并明确了人源lnc1267和小鼠源lnc1267的全长序列。并且通过照射实验发现电离辐射能够显著抑制人源lnc1267和小鼠源lnc1267表达，且在高剂量辐射中其表达水平呈现剂量依赖性降低，进而发现人源lnc1267和小鼠源lnc1267可作为电离辐射剂量估算的标志物。此外还发现，过表达人/小鼠源lnc1267能够显著降低放射诱导的细胞凋亡敏感性和提高细胞的放射抗性；敲低人/小鼠源lnc1267能够显著提高放射诱导的细胞凋亡敏感性和降低细胞的放射抗性；敲除小鼠源lnc1267能够显著降低放射后小鼠的存活率和提高小鼠放射敏感性。

Description

一种电离辐射响应的lncRNA分子lnc1267及其在调控细胞放 射敏感性中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种电离辐射响应的lncRNA分子lnc1267及其在调控细胞放射敏感性中的应用。
背景技术
LncRNA在许多细胞生物学过程中发挥重要作用，包括细胞周期进程，细胞凋亡，细胞增殖，个体发育等。近年来研究发现，多种参与电离辐射响应的lncRNA通过靶向关键信号通路参与放射后细胞凋亡、增殖、周期等生物学过程的调控，这些信号通路包括DNA损伤修复、细胞周期停滞、细胞凋亡等，这些lncRNA的表达水平改变会影响放射后的细胞进程和方向，例如：lncRNA LINP1的表达促进非同源末端连接途径从而促进DNA损伤修复，降低电离辐射诱导下宫颈癌细胞的细胞凋亡率(Wang X,Liu H,Shi L et al.LINP1 facilitatesDNA damage repair through non-homologous end joining(NHEJ)pathway andsubsequently decreases the sensitivity of cervical cancer cells to ionizingradiation[J].Cell Cycle,2018,17(4):439～447.)；HOTAIR在乳腺癌细胞和组织中上调，辐射后HOTAI表达增加，敲低HOTAIR会抑制细胞存活并增加电离辐射诱导的细胞凋亡，研究发现在HOTAIR敲低细胞中电离辐射诱导DNA损伤增加和细胞周期停滞(Hu X,Ding D,ZhangJ et al.Knockdown of lncRNA HOTAIR sensitizes breast cancer cells to ionizingradiation through activating miR-218[J].Biosci Rep,2019,39(4):)。LncRNA NEAT1可以通过竞争性结合miR-193b-3p来上调细胞周期蛋白D1的表达，从而促进宫颈癌细胞的存活和增加其辐射抗性(Han D,Wang J,Cheng G.LncRNA NEAT1 enhances the radio-resistance of cervical cancer via miR-193b-3p/CCND1 axis[J].Oncotarget,2018,9(2):2395～2409.)。LncRNA SNHG12可以促进CDK1表达，从而调节海绵状miR-148a表达，敲低SNHG12可以增加放射诱导宫颈癌细胞的细胞凋亡和细胞周期停滞(Wang C,Shao S,DengL et al.LncRNA SNHG12 regulates the radiosensitivity of cervical cancerthrough the miR-148a/CDK1 pathway[J].Cancer Cell Int,2020,20(1):554.)。本实验室研究发现LncRNA lnc-RI通过增强结直肠癌细胞的DNA损伤NHEJ修复途径显著提高了放射后细胞存活能力(Liu R,Zhang Q,Shen L et al.Long noncoding RNA lnc-RIregulates DNA damage repair and radiation sensitivity of CRC cells throughNHEJ pathway[J].Cell Biol Toxicol,2020,36(5):493-507.)。
综上可以看出，lncRNA能够参与放射后细胞凋亡、增殖、周期等生物学过程的调控，对lncRNA在电离辐射后功能开展研究，对于研究细胞电离辐射敏感性具有重要的研究意义，而且对开发电离辐射损伤防治药物及电离辐射急性放射病诊治具有重要的潜在价值。
发明内容
本发明为了研究lncRNA对放射后细胞凋亡等生物学过程的调控作用，以及其在细胞放射敏感性调控中作用，提供了一种参与电离辐射应答响应的长链非编码RNA lnc1267，所述lnc1267为核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的人源lnc1267，或核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示的小鼠源lnc1267。
本发明还提供了上述长链非编码RNAlnc1267在作为高剂量电离辐射剂量检测标志物中的应用。
进一步地限定，上述应用是通过获取小鼠源RNAlnc1267的表达量，检测小鼠受电离辐射剂量；所述电离辐射剂量的范围是2Gy～6Gy。
进一步地限定，上述应用是通过获取人源RNAlnc1267的表达量，检测人体细胞受电离辐射的剂量。
进一步地限定，上述电离辐射剂量的范围是4Gy～12Gy。
本发明还提供了过表达上述长链非编码RNA lnc1267，或能够促进上述长链非编码RNAlnc1267表达的物质在制备用于降低放射诱导的细胞凋亡敏感性的产品中的应用。
本发明还提供了过表达上述长链非编码RNA lnc1267，或能够促进上述长链非编码RNAlnc1267表达的物质在制备用于提高细胞放射抗性的产品中的应用。
本发明还提供了敲低上述长链非编码RNAlnc1267，或能够抑制上述长链非编码RNA lnc1267表达的物质在制备用于提高放射诱导的细胞凋亡敏感性的产品中的应用。
本发明还提供了敲低上述长链非编码RNAlnc1267，或能够抑制上述长链非编码RNA lnc1267表达的物质在制备用于降低细胞放射后细胞克隆形成能力的产品中的应用及降低细胞放射抗性的产品中的应用。
本发明还提供了敲低上述小鼠源lnc1267，或能够抑制上述小鼠源lnc1267表达的物质在制备用于提高小鼠放射敏感性的产品中的应用。
本发明的有益效果：
(1)本发明通过对电离辐射后小鼠PBMC进行基因芯片检测，筛选出参与电离辐射应答响应的lncRNAlnc1267，并利用cDNA末端快速扩增技术明确了人源lnc1267和小鼠源lnc1267的全长序列。
(2)通过对小鼠进行全身照射、小鼠淋巴细胞系L1210及人结直肠癌细胞系Hct116进行照射，发现人源lnc1267和小鼠源lnc1267在高剂量辐射中表达水平均呈现剂量依赖性降低，进而发现人源lnc1267和小鼠源lnc1267可作为电离辐射剂量估算的标志物。
(3)过表达人源和小鼠源lnc1267均能够降低辐射诱导的细胞凋亡敏感性，提高细胞的辐射抗性；敲低人源和小鼠源lnc1267均能够提高辐射诱导的细胞凋亡敏感性，降低细胞的辐射抗性。
附图说明：
图1为琼脂糖凝胶电泳检验人/小鼠源lnc-1267转录本的结果图；
图2为人/小鼠源lnc-1267转录本测序比对结果图；其中，图2中的A为人源lnc1267转录本测序结果比对(124bp)；图2中的B为小鼠源lnc1267转录本测序结果比对(124bp)；
图3为RACE技术确定人/小鼠源lnc1267全长；其中，图3中的A为RACE技术确定人源lnc1267全长，图3中的B为RACE技术确定小鼠源lnc1267全长；
图4为高剂量电离辐射对人/小鼠源lnc1267表达水平的影响结果图；其中，图4中的A为高剂量辐射对小鼠外周血PBMC、胸腺和脾脏中lnc1267表达水平的影响结果；图4中的B为高剂量辐射对小鼠白血病淋巴细胞系L1210中lnc1267表达水平的影响结果；图4中的C为高剂量辐射对人结直肠癌细胞系Hct116中lnc1267表达水平的影响结果；
图5为RT-qPCR检测人源lnc1267过表达效率的结果图；
图6为单机多靶模型分析过表达人源lnc1267对Hela细胞的放射敏感性的影响结果图；
图7为Annexin V-FITC/PI双染色法分析过表达人源lnc1267对辐射诱导的Hela细胞凋亡敏感性的影响结果图；
图8为RT-qPCR检测人源lnc1267敲除效率的结果图；
图9为单机多靶模型分析敲除人源lnc1267对Hct116细胞的放射敏感性的影响的结果图；
图10为Annexin V-FITC/PI双染色法分析敲除人源lnc1267对辐射诱导的Hct116细胞凋亡敏感性的影响结果图；
图11为单机多靶模型分析过表达小鼠源lnc1267对NIH/3T3细胞的放射敏感性影响的结果图；
图12为lnc1267敲除小鼠全身照射后小鼠存活率及外周血淋巴细胞凋亡率检测结果图；其中，图12中的A为7.5Gy亚致死剂量全身照射lnc1267敲除小鼠后的存活率检测结果图，图12中的B为2Gy全身照射lnc1267敲除小鼠后外周血淋巴细胞血象检测结果图，图12中的C为2Gy全身照射lnc1267敲除小鼠后外周血淋巴细胞凋亡率检测结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。本发明所使用的药品、试剂、仪器、设备等如无特殊说明，均可通过商业化途径购买获得，涉及的PCR扩增等分子生物学实验操作如无特殊说明，均为本领域常规实验操作或依照相应试剂的产品说明书进行。
下述实施例中所用的实验动物为：SPF级雄性C57BL/6J小鼠(6～8周龄)，购买自北京斯贝福生物技术有限公司，在军事科学院军事医学研究院(北京)饲养。小鼠在特定的无病原体，控制温度、湿度(温度保持18-23℃；湿度为40％-60％)，12/12小时的光/暗循环下被置于统一的笼子中，实验前饲养至少一周，体重18～22g。动物的护理和处理按照《中国AMMS实验动物护理和使用指南》进行，所有动物实验均经北京放射医学研究所(北京)动物护理和使用委员会批准，编号为IACUC-DWZX-2020-551。
本发明用到的细胞为：NIH3T3细胞、Hela细胞、Hct116细胞、小鼠白血病淋巴细胞L1210和敲除lnc1267的Hct116细胞均为实验室保存，lnc1267过表达病毒购自上海吉凯基因化学技术有限公司。
本发明涉及的引物序列见表1。
表1引物序列
Figure BDA0003713676210000041
本发明涉及的实验方法如下：
1、细胞复苏及培养：
(1)从液氮中取出细胞后迅速置于37℃恒温水浴锅中解冻；
(2)将充分解冻后的细胞置于台式离心机中，1000rpm离心4min；
(3)弃旧培养液，加入1mL预热的完全培养基(含10％FBS，100units/mL青霉素及100μg/mL链霉素)重悬细胞；
(4)将细胞并移至10cm细胞培养皿中(10×10cm)，培养体系为10mL，轻轻摇匀；
(5)将细胞置于细胞培养箱中培养(37℃，含5％CO2)，第二天更换新鲜完全培养基，待细胞密度至90％时传代。
2、细胞传代：
(1)提前预热完全培养基、0.25％Trypsin-EDTA和PBS缓冲液；
(2)弃旧培养基，沿侧壁加入2mL PBS漂洗；
(3)弃PBS，向皿中加入2mL 0.25％Trypsin-EDTA，置于37℃培养箱中消化细胞；
(4)待细胞消化完全后加入2mL完全培养基终止消化，用微量移液器将细胞转移至10mL离心管中，置于台式离心机中1000rpm离心4min；
(5)弃上清，用相应的新鲜完全培养基重悬细胞后移至10cm培养皿中轻轻摇匀；
(6)将细胞置于细胞培养箱中培养(37℃，含5％CO2)，隔天传代。
3、细胞接种：
(1)取处于对数生长期的细胞，弃旧培养液，2mL PBS漂洗后加入2mL 0.25％Trypsin-EDTA于37℃培养箱中充分消化；
(2)加入2mL完全培养基中和胰酶，用微量移液器将细胞转移至10mL离心管中，置于台式离心机中1000rpm离心4min；
(3)弃上清，用适量完全培养基重悬细胞，使用血球计数板在倒置显微镜下进行细胞计数；
(4)根据实验所需接种细胞数目计算所需细胞悬液体积及相应培养体系所需培养基体积(6孔板：2mL；12孔板：1mL；24孔板：500μL；96孔板：100μL)；
(5)将细胞置于细胞培养箱中培养(37℃，含5％CO2)。
4、慢病毒感染：
(1)从冰箱取出病毒，冰上缓慢融化。用无抗含10％血清培养基将病毒稀释至滴度为1×108TU/mL。人源LV-Lnc1267原滴度为5×108TU/mL，LV-NC滴度为7.5×108TU/mL；小鼠源LV-Lnc1267原滴度为4×108TU/mL，LV-NC滴度为3×108TU/mL；
(2)查阅吉凯生物提供的MOI表，Hela、Hct116两种细胞MOI都为10，NIH3T3细胞MOI为20。采用HiTransG P感染液，配制感染液：Hct116感染4μL病毒/孔+20μL GP+476μL无抗含10％血清培养基，Hela感染5μL病毒/孔+20μL GP+475μL无抗含10％血清培养基；NIH3T3感染9uL病毒/孔+20uL GP+471uL无抗含10％血清培养基，轻轻混匀；
(3)用感染液替换原来培养基，放入37℃培养箱培养24小时进行传代，待病毒感染72h后收取部分细胞鉴定过表达效率，进而获得过表达细胞系。
5、细胞凋亡检测实验：
(1)用去离子水将凋亡检测试剂盒中10×Annexin V Binding Solution稀释为1×Annexin V Binding Solution，每个样品中加入100μL轻轻混匀；
(2)每个样本加入5μL Annexin V/FITC结合物轻轻混匀，再加入5μL PI Solution轻轻混匀后室温条件下避光孵育15min；
(3)上机前加入300μL 1×Annexin V Binding Solution混匀；
(4)上机检测：除待分析实验样本外，需设置空白对照组、单染色细胞组(AnnexinV-FITC和PI组)，空白组及单染组细胞均用H2O2处理诱导细胞凋亡，用于流式细胞分析时调整荧光补偿。
6、细胞克隆形成实验：
(1)接种克隆：
①病毒感染后72小时或转染24小时后将细胞重新接种于6孔板中，400、800个细胞/孔，每组设置三个复孔；
②将细胞置于细胞培养箱中培养两周至克隆长至合适大小，期间每3-5天更换一次新鲜完全培养基；
(2)细胞固定及染色：
①尽量弃旧培养基，加入1mL甲醇固定0.5-1小时；
②弃甲醇，加入1mL吉姆萨染液染色1小时；
③将吉姆萨回收，缓慢冲洗干净孔内残留的染液，自然晾干；
④手动计数克隆并统计，使用扫描仪扫描保存原始图片。
7、小鼠各脏器组织分离：
18只C57BL/6J小鼠，每组6只，分别用不同剂量(0、2、6Gy)照射小鼠，利用钴-60γ射线照射后24h取各组织(外周血、胸腺、脾脏)，提取总RNA后，做实时荧光相对定量PCR，观察Lnc1267在照射后各组织中相对表达量变化。
眼眶取外周血：左手拇指、食指和中指抓取小鼠的颈部头皮，小指和无名指固定尾巴；轻压需要摘取的眼部皮肤，使眼球充血突出；用镊子夹取眼球并快速摘取，并使血液从眼眶内流入抗凝管中。
外周血淋巴细胞分离：小鼠外周血淋巴细胞分离液试剂盒(中国灏洋华科生物科技有限公司，货号LTS1092、LTS10771)
①取一支离心管，先加入与稀释后样本等量的分离液(注：分离液最少不得少于3mL)；
②用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心20-30min(注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长)；本实验采用500g，30min。
③离心后，此刻离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层；
④用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，往离心管中加入10mL清洗液(产品编号：2010X1118)，混匀细胞；
⑤250g，离心10min；
⑥弃上清。
⑦用吸管以5mL清洗液(产品编号：2010X1118)重悬细胞；
⑧250g，离心10min；
⑨重复6，7，8，弃上清后加入1mLTrizol，冻存-80℃冰箱。
解剖小鼠，取各脏器：依次将小鼠各脏器(胸腺和脾脏)取出，并用分两份分别用锡箔纸包裹放入EP管中，冻存-80℃。
解剖小鼠取胸腺、脾脏：颈椎脱臼法处死小鼠(C57型小鼠)，表面喷洒75％酒精后将小鼠铺于超净台上一个消毒托盘上；依次将小鼠各脏器(胸腺、脾脏)取出。
8、RT-qPCR法检测lnc1267相对表达量：
总RNA的提取：
①轻轻反复吹打裂解液混匀后，然后室温条件下静置5min左右；
②加入200μL(约为体系的1/5)氯仿，手摇振荡20s左右，使其充分混匀，室温条件下静置约5min(此时会分为上下两层)；
③4℃，12000rpm，离心15min(此时会分为上中下三层：上层是RNA溶于的水相，中层为蛋白质等沉淀，下层为苯酚氯仿等有机层)然后小心的取出上清液至新的1.5mL EP管(RNase-free)，再加入等体积的异丙醇，轻轻上下摇匀，室温条件下静置l0 min；
④4℃，12000rpm，离心10min，弃除上清，此时可在管底见少量白色沉淀，然后先加入75％的无水乙醇；
⑤4℃，12000rpm，离心5min，尽量吸尽上清，然后打开EP管口，室温条件下风干10min左右，然后再加入20μLRNase-free水置于冰中待RNA沉淀充分溶解；
⑥取1μL在NanoDrop仪器上检测RNA浓度。
逆转录反应：
①将逆转录试剂和提取的RNA在置于冰中解冻；
②基因组DNA去除反应。试剂配制如表2所示，每个PCR管反应体系为10μL，置于PCR仪中设置反应条件为：42℃，2min；4℃，__/__；
表2
Figure BDA0003713676210000081
③逆转录反应。试剂配制如表3所示，然后将反应液加入步骤②的每个PCR管中，轻柔混合后(此时总反应体系2μL)设置反应条件如下：37℃，15min；85℃，5s；4℃，__/__。
表3
Figure BDA0003713676210000082
实时荧光定量PCR：
每个体系配制如表4所示，然后设置PCR仪程序为预变性(95℃，3min)；变性(95℃，10s)；退火/延伸(55℃，30s)；40个循环)。
表4
Figure BDA0003713676210000083
9、统计学分析：
所有数据采用SPSS 22.0软件分析。实验结果用x±s表示，设置三个重复组，对照组和实验组组间的差异比较用Student’s t检验，数据服从方差齐性正态分布。*，**和***表示分别在0.05、0.01和0.001水平上差异具有显著意义。文中采用Graphpad Prism 7.0和Adobe Photoshop CC2018软件进行作图。
实施例1：参与电离辐射应答响应的长链非编码RNAlnc1267的筛选
将8周龄C57BL/6J小鼠分为照射组(0.05Gy×10次、0.5Gy×1次)与假照射组(0Gy)，利用钴-60γ射线全身照射小鼠24小时后收取外周血并分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)进行基因芯片检测。基因芯片数据用RProgrammer Limma包处理，以FC>1.1、P<0.05为标准筛选出在照射方式下差异表达的RNAs。将2个照射组相对于假照射组共同差异表达lncRNAs序列与人类基因组序列(GRCh38)进行比对，筛选出候选的lncRNAs，我们将筛选到的一种功能未知的lncRNA(NONCODETRANSCRIPT ID：NONMMUT001267.2)命名为lnc1267(表5)，并利用cDNA为模板的RT-PCR，通过跨内含子设计引物(内参基因GAPDH人/小鼠基因组扩增产物长度为205bp/287bp，β-Actin人/小鼠基因组扩增产物长度为183bp/300bp)排除基因组污染，结合琼脂糖凝胶电泳以及测序技术对其人/小鼠转录本进行验证，发现lnc1267 RT-PCR产物的琼脂糖凝胶电泳在无基因组污染的情况下存在清晰的条带(见图1)，其RT-PCR产物测序结果也显示产物序列分别与人/小鼠基因序列一致(见图2)，表明lnc1267存在人/小鼠转录本。
表5lnc1267序列与人类基因组序列(GRCh38)比对结果
Figure BDA0003713676210000091
人/小鼠lnc1267全长RACE测定：根据
Figure BDA0003713676210000092
RACE 5’/3’试剂盒说明进行RACE试验，利用基因特异性引物和通用引物进行巢式PCR，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳后回收产物，利用无缝克隆技术将其转化入感受态大肠杆菌pUC19中，挑取单克隆摇菌后进行菌落PCR鉴定，将含有目标序列的阳性克隆进行测序，3’RACE和5’RACE克隆样品测序结果均与琼脂糖凝胶电泳图目标条带大小一致，并与前期分段扩增预测位点一致，根据3’RACE和5’RACE结果确定人源lnc1267全长序列全长为7531bp(见图3中的A)，小鼠源lnc1267全长序列全长为7252bp(见图3中的B)。人源lnc1267的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，小鼠源lnc1267的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
实施例2：高剂量电离辐射显著抑制人/小鼠源lnc1267表达
为了确定小鼠源lnc1267与电离辐射的关系，我们利用钴-60γ射线不同剂量(0、2Gy、6Gy)全身照射8周龄C57BL/6J小鼠24h后取外周血PBMC、胸腺、脾脏，利用RT-qPCR分析lnc1267表达量随照射剂量的变化规律，结果显示在高剂量急性电离辐射(2Gy、6Gy)后lnc1267表达显著受到抑制(见图4中的A)；进一步利用钴-60γ射线不同剂量(0、2Gy、6Gy)照射小鼠白血病淋巴细胞系L121024h、48h后收取细胞并检测lnc1267表达水平，结果显示高剂量电离辐射(2Gy、6Gy)也显著抑制lnc1267表达，其表达水平呈现剂量依赖性降低(见图4中的B)。
为了确定人源lnc1267与电离辐射的关系，我们随机选取人结直肠癌细胞系Hct116作为研究细胞系，利用钴-60γ射线不同剂量(0、4Gy、8Gy、12Gy)照射48h、72h、96h后收取细胞，并检测lnc1267表达量，结果显示高剂量急性电离辐射(4Gy、8Gy、12Gy)均能显著抑制lnc1267表达，其表达水平呈现一定的剂量依赖性(见图4中的C)。
可见，电离辐射能够抑制人源lnc1267和小鼠源lnc1267表达，且其表达具有一定的剂量依赖性，可作为电离辐射剂量估算的标志物。
实施例3：过表达人源lnc1267对放射诱导的细胞凋亡敏感性及放射抗性的影响
为了研究lnc1267对放射敏感性的影响，我们利用稳定过表达lnc1267Hela细胞系及稳定敲除lnc1267 Hct116细胞系，60Co-γ不同剂量照射后检测细胞克隆形成率，通过单机多靶模型拟合细胞存活曲线，并通过AnnexinV-FITC/PI双染色法检测电离辐射诱发的细胞凋亡率，共同分析人源lnc1267对细胞放射敏感性的调控作用。
利用lnc1267过表达病毒感染Hela细胞，嘌呤霉素(2ug/mL)处理细胞获得稳定过表达细胞系，最后利用RT-qPCR法鉴定lnc1267表达水平，结果显示稳定过表达lnc1267细胞系中lnc1267表达水平是感染对照病毒LV-NC细胞系的16.06±1.66倍(见图5)，表明稳定过表达lnc1267 Hela细胞系构建成功，可以用于后续实验。对上述稳定过表达Hela细胞系进行1Gy、2Gy、4Gy、6Gy不同剂量照射，计算克隆形成分数，根据单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算增敏比SER值为0.567，表明lnc1267表达能够显著增强细胞的辐射抗性(见图6)。对稳定过表达Hela细胞系进行不同剂量照射，AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率，结果显示8Gy、12Gy照射后48h，LV-lnc1267组凋亡率分别为13.610±0.552％和13.827±0.315％，较对照LV-NC组(15.690±0.555％和17.307±0.375％)显著降低(见图7)，差异有统计学意义(p<0.05)，表明lnc1267表达能够显著抑制辐射诱导的细胞凋亡敏感性。
实施例4：敲除人源lnc1267对放射诱导的细胞凋亡敏感性及放射抗性的影响
利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除lnc1267 Hct116细胞系，利用RT-qPCR法鉴定lnc1267表达水平，结果显示稳定敲除lnc1267细胞系Lnc1267 KO#1(-/-)和Lnc1267 KO#2(-/-)中lnc1267表达水平分别是对照组的0.00573±0.000671倍和0.000834±0.000585倍(见图8)，表明稳定敲除lnc1267 Hct116细胞系构建成功，可以用于后续实验。对上述稳定敲除Hct116细胞系进行1Gy、2Gy、4Gy、8Gy不同剂量照射，计算克隆形成分数，根据单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算增敏比SER值分别为2.088、2.120，表明lnc1267表达下调能够显著增强细胞的辐射敏感性(见图9)。对稳定敲除lnc1267 Hct116细胞系进行不同剂量照射，AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率，结果显示8Gy、12Gy照射后72h，Lnc1267KO#1(-/-)凋亡率分别为12.270±0.437％和12.130±0.321％，Lnc1267 KO#2(-/-)凋亡率分别为11.453±1.074％和12.337±0.840％，较对照Lnc1267 WT(+/+)组(7.813±0.280％和8.753±0.710％)显著增加(见图10)，差异有统计学意义(p<0.05)，表明下调lnc1267表达能够显著促进辐射诱导的细胞凋亡敏感性。
实施例5：过表达小鼠源lnc1267对放射诱导的细胞凋亡敏感性及放射抗性的影响
为了研究小鼠源lnc1267对放射敏感性的影响，我们利用稳定过表达小鼠源lnc1267NIH/3T3细胞系，60Co-γ不同剂量照射后检测细胞克隆形成率，并通过细胞存活分数单机多靶模型拟合分析细胞的放射敏感性。过表达lnc1267后对细胞进行1Gy、2Gy、4Gy、6Gy不同剂量照射，分析细胞克隆形成能力，结果显示在2Gy、4Gy、6Gy照射后克隆形成分数分别为0.859±0.0232、0.648±0.0320、0.170±0.0123个，较对照组0.610±0.0400、0.228±0.0211、0.0331±0.00301个显著增加(P＜0.05)，表明过表达小鼠源lnc1267能够显著增强克隆形成能力；根据单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算增敏比SER值为0.435，表明lnc1267表达能够显著增强细胞的辐射抗性(见图11)。
实施例6：敲除小鼠源lnc1267对放射后小鼠存活率和外周血淋巴细胞血象及凋亡率的影响
为了进一步明确小鼠源lnc1267对放射敏感性的影响，我们利用CRISPR/Cas9技术构建敲除lnc1267 C57BL/6J小鼠模型，并继续繁殖、鉴定及建立稳定遗传的lnc1267基因敲除小鼠品系。首先观察全身照射后30天小鼠生存率，将同批繁殖的9周龄雄性小鼠分为7.5Gy敲除lnc1267组(lnc1267-/-，n＝10)和野生组(lnc1267+/+，n＝10)以及0Gy敲除lnc1267组(lnc1267-/-，n＝8)和野生组(lnc1267+/+，n＝5)，利用钴-60γ射线7.5Gy剂量全身照射，记录30天内每组死亡小鼠数量。在观察过程中，当任何小鼠体重减轻20％或出现垂死状态时，对其实施安乐死并计为死亡。结果发现在7.5Gy照射后30天内lnc1267-/-组小鼠全部死亡，lnc1267+/+组小鼠只有2只死亡，0Gy对照组没有小鼠死亡，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线(见图12中的A)，并采用log-rank检验显示7.5Gy照射的lnc1267-/-和lnc1267+/+组曲线间具有统计学差异(p＜0.0001)，表明敲除lnc1267能够显著增强了小鼠放射敏感性。
为了进一步研究lnc1267表达对小鼠细胞放射敏感性的影响，通过2Gy全身照射9周龄lnc1267-/-和lnc1267+/+雄性小鼠后观察小鼠1、3、7、11、14、20、25天血象以及AnnexinV-FITC/PI法检测1天的外周血淋巴细胞凋亡率。外周血淋巴细胞血象结果显示，2Gy照射后从第3天开始lnc1267-/-组血象恢复速度显著低于lnc1267+/+组小鼠(p＜0.05)(见图12中的B)。从照射后第1天小鼠外周血淋巴细胞凋亡率可以看出，在假照射组lnc1267-/-和lnc1267+/+小鼠无显著区别，而在2Gy照射后，lnc1267-/-组较lnc1267+/+组小鼠外周血淋巴细胞凋亡率显著提高(p＜0.01)(见图12中的C)，以上结果表明敲除lnc1267能够显著增强了小鼠外周血淋巴细胞的放射敏感性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
<120> 一种电离辐射响应的lncRNA分子lnc1267及其在调控细胞放射敏感性中的应
用
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 7531
<212> DNA
<213> 人
<400> 1
gtcacacgcg gcctaatgga cgccctcctc gagatcccac ggctgcgcgg agaaccgaac 60
ggagggaggg agtttgggga gggggaagag caggaggagg agaaaaggga gggggaagac 120
tacaaactag caaggatggg gtggggggtg gggagggaag ggaagggggg ggaagagaag 180
cgatcgcgag agaaaaaaat gcaacctccc aaaataaaga gcaaagattg cattaggagc 240
gaacagcgct gcagaaatag atggcagctt cgtgtcagtg agtttgcatc ccccttcctg 300
atccacgagc tggagtgatt agagccctgg aagggaattg ttactcccgt ggagaagtcc 360
ccttttcctg gcagtcgtct gcactgtaca cgctggatgc ctctctccat ccaccccact 420
cactcgctcc tctctcacct cctctctccc tctcctgcat tgattttttt ttttcctttt 480
tagttgactg aaacaaaaca aaacaaaagg gccactggat gtctgccttc ttggggggtg 540
agccagacag actgacaaac aaacagcccc aactgtgttc gggggagggt ttcgcctccc 600
gttttgcccg gcagcagcag catggacgtg ttggctagtt atagtatatt ccaggagcta 660
caacttgtcc acgacaccgg ctacttctca gctttaccat ccctggagga gacctggcag 720
caggtgaatg atttaaatta cttgtgtaaa tcgtgtggtg gcggcggaga cgcaggggct 780
gcgttggtgt gggctctggg ttgaaatttt tgtttgtttg tttgactttt ttttcttcct 840
ttttggctgt ctgttgttga aaatgttttc tgaaacagtc atctgcgctt acctctccac 900
ccacccctaa cctcgtagag tgccgagctg agcagccggt gcgagctgcc tgcgtttcag 960
tcgccaacac acatccctgc gcacacgttg tcgggtttgc tgtcccctat cagagacctg 1020
ccgaacttct ggggttcgga ggagccgggt gggaaggtgg tttggggtgt taggagcgat 1080
tgctgacagg gaccacgttc tcgcatgcat gagctctacc cacttgatac ctgaaatcag 1140
gttcatctgt ttcaactggt gcttatgacc atcggatggg gggcggggga gggtgggcag 1200
gagcaaagcg gagtgttttt cagtaattag cgagtgtcaa taaagaatag gagcttgatt 1260
ttgagattag aaggtaggca aaagagagaa gagcccactg acaaaagata ctcaaggagg 1320
acgggaagat gtagctgagg ctgacaatga attgtaggtt ttcccagtgt gatccctcca 1380
gaaagagaac accctctatg cgtgtccttg tttctctttt ttgtttaggg tccttctcta 1440
gttaggcagc acaacctcgg acaaaggctg atgtgtgctt ccatgccttt gactttgtct 1500
tagaggacta gttaagaaac tcccaggatg ctgaagggca ccgatgccaa gttggctagc 1560
cgtcccaggg aggatgaagt ggggctggtg acaagttcac tgggctttgt gaagtggaat 1620
aaagaaagtg ctggtcagtg gaaagtgctg gctctgctgc ggaaacagtg gtttttttca 1680
gcagcgatta ggagctgctg aggggacatt ctgcaggaaa gatggtgggt gggggcgggg 1740
ggacacgggt atttaaaaat tgtacagtgt gcaccatgga aagtccaaga agacagtccg 1800
gatttgcaca taggaagtgt gaacttgtac agtccgtcct ggagaaaccc gcttgccctt 1860
ggggggaggg ctgtgagagg ctcggtgtgt ggctgctcgt gtaatttctt cgcttagtga 1920
cagcagcttg ttaaggctaa tgaacggctg aatttcctct gccgggatcc aaagcaggat 1980
ttgccagctt gaggctgaga tgtaacagtc tctgctttag caaaagaggt ttggcttttg 2040
gtataaggag ccgagtggca aggcggatcc tttaactgta ccattgttgc tagttcactt 2100
ctggtcagag gctgtgagtt ttcctccagg tattggcgtc tggtgtctct gtgtccacac 2160
atgcattctt gtccaaggac gctagcagat gcttgactct gtctctctgt aaacacatac 2220
acagttcaca tatttttaga ataaagtctt tcttcaatgc atccttttcc ttatccttaa 2280
cgagagtgtg tctcatgaag ggtctcactg gatctttttc ttccttttat ttccaatgct 2340
aattaaacca aaatcttctg aaatagcctt catttcacac tgtcagccca ctggtatgga 2400
atcggttgca tattaacaac tgtctagaca ggttagagaa gggaatctgt tgatttagtc 2460
agcctgccca aggcagccct tgtttgtgac taactgttaa gcagtgttag aaggaagaaa 2520
gttggcttta tttgttagaa cgttccctac tgatgaatca tgcaactttg ttttggttca 2580
agttttcaga gtagtaaagc cagatttgga ggaaggtctc ttcacaggaa acctgctttt 2640
ctagatctgg ctagaccatc caggacaaac tctagatctg caaagaaaca tcatcggttt 2700
gacaactaga ggatgtatta gatctattgt ttcctaagaa gccatctctg ctcttccttc 2760
tcccctcctc cccctgctcc tctgcctcct ccccattcag ggaagctcta gtttagtttc 2820
tacaggcaaa ggatttttca cccctcggaa ccccctcatt ttttgcctta accctctcca 2880
actgccagcc actctcacct taaaaccctt agccaactta ttcagcgtca tgcttatagc 2940
caatgctgat gcatagcttg tggggaagca ctaataaaca atatatcact ccagtgagct 3000
ttatgttctg gactccgtaa tcacaactgc tctatataaa ggcgactagg accataggtt 3060
tacactgatg acaaaacctt taacctctag cccttccttc ttccccctcc caaaaccgtc 3120
ttgctgcttc tgagtataag gggtggtgat ggtgatatgc aactgttagt tccaaatcaa 3180
ctatcggata atgaaatttt gagactcttt tgctcaaaac agctcaacag ggtttctgca 3240
aagaacccca gacaggaaga agtttcttta tgctctgggg taatcagatt ttagaggtca 3300
aatgaggagt aattattaga tgttcttctt aaagtgaaca atgtacctgg gctcatggag 3360
atgagcaaaa tgtggagact ctgataatct gacttggttt ctagagaaag agtggcttcg 3420
atgataaact caagaacatt tttacgtttg aaaattgaag ataaacaatt tggggatttt 3480
attttaaact taggatatgg gataattgtc ctgcttaata gtcagtgagc ctgtgacaaa 3540
gtcactgact gtggcagggc tccctctcgt cacggagatc ctcgttttga cattggattt 3600
tctggcaatg atgccttagc cacatagctc caagtctgaa aataatcgtt gctggtataa 3660
ttctgaaatc caaatggaca tcacacatta acagctctcc attcctgggc tctgactgca 3720
tacttaagca ctcggcccaa gtaacatcat ctttctgcct gtcatataac tgtaaattac 3780
actgtgctta tgtggtctat tattttatag aattcagctg acgcgcaatt cttaagacta 3840
ccagccttaa gcgctttgaa aacttgtagg aaaatttcca agagctgtct gagcaaaagt 3900
aggaaaaggt caagggtagg acagaaacca gagtttctta tggggtacca cttgattatg 3960
agtaaaggga aactcattca tgactttttt tgccaataga aatcataatc ttttttttta 4020
gacacactgc tgacttggaa aataaaaaga atttgataca atgcttttat tttcttcttg 4080
aatatacaaa gacttttaga acttttatat gttttatctc tagtctgcta tttcatgagt 4140
gcaggtcaag cagtgatgat ctaagtctta tttggactta gctttgcgtc gtgtcattga 4200
ggagcatcgc atgtttgctt gaaaagtctt atggaattat gtttgttgtt aatgctgatt 4260
cataattggc agatggggtc agtttcaggc ctctctttgc tcagagaaaa ttttccactg 4320
ctactggaaa caaataaata aatcatagaa cattcttctc tcctccccca ttcccctatt 4380
gttttaaact aatggcatac ttggctactg taaggactaa agtgtcccca taacactgca 4440
atttcatctt ggtttcaggc accctgaaac actttttatg agggcctttg gtataaggaa 4500
tctctagggg aaaacgtaca gaaatggttg cattccaaga acagcctcat ggtaccaggg 4560
atgggatttg gtctgtgagc cacattgctt ctccttttat gtgaagatct tgcctttgca 4620
cttccttctg caggcctggg ctgccaggtg ctatatcagc caggaaaaca aagcaaactg 4680
tagggtctgt ccatccgtag gtttgcctca gtccccaatt cgcagatagc cttgtcatga 4740
attagaattt cttggcaaca gcaccaccca gggaaatttg tagacacaaa ggagccttgc 4800
tagccacact gaaaggataa aataactgtt tttttttggt atgtgatttg tgtgttcttc 4860
agttactgta aatctgtttc tttatttgaa acagcaactt ggtagatgaa ataaaaatat 4920
aactgcccgt tacccagaat ttatctttat gaagatgcaa tcactaaata gatgtaactc 4980
tacaaatgaa agcacatgtg actgcaatca atcacacact tagcctttaa tagattcatt 5040
tccatgttcc tttaacagac acatctttgt gtagatttag gggcttcaaa cattatcatt 5100
cagtctacct gtttgcagtt tggtatttta aagtgggcaa acattataat gcagttattt 5160
tttactacat ctgtccttag tagggggaaa aggaggtcac tattctttgt tctccatgaa 5220
cttcccaccc ccactcctta ccctgaggag aatgggatgt tggggtccca tccatttaaa 5280
aggcagagca gaagatgcaa gatgacagcc ttgccctgaa atgatttatg tatgggtgtg 5340
tcagagacct taagcatcca aatgtgggct gcttctttct gccagcccat tctaaacata 5400
aatgccagtg ggggctaatt tgcctctcta cttaaatgga gatagttcag agagggtcct 5460
aatggggcct ttaatagcca ttcttttatg aatcttcaca ttgtactctc ttcagagaat 5520
tcttgcgttt taacttttgg agtacaagaa gacattgcaa tcttctttaa ttgctctctg 5580
tgcctgttga ggaaagaaga atacaatttc ctctggccag tcccatctgg ctcaagttga 5640
taggatagct ggtctgattc cagacggggt cggtggatac cccttatctt ttcattttat 5700
agtattgtgc aatgggcttt taattatctt tgctggaccc cacgactggc aaatgcagaa 5760
aatcgctctg tgattccagt tcactcgata tatcagttag cctatgtgtt agaactgcga 5820
tttgctgaaa gtttaggaca gctccccaac ttaacttgaa tggtgccaga gggtgagggg 5880
cagagatttc ctctgtccag tagtcccttt gttctcccaa atcaactgac tgcttgctta 5940
gcataaacga ttgggggtag gggggcggaa tgttttaacc ccaaaatgcc gaatcttacc 6000
aagtacagtg attagaaaac tcaactacta atggtgttaa agttggtgaa acaaattata 6060
gtgtctaatt attcatgtta catgtaacat tgacaagtta aaaaacactc ctctctgtat 6120
actcattgta gaatatacat atccttattc tatctaaaat tccccaaata aacaaaatgt 6180
tgccattact gggacatgct tttacctaag attgtttgtg attttgctgt gccccacctt 6240
gcccagatta gttcctgcta attggcagaa ttatttctac caccctacat ccctttagtt 6300
ttccttctcg gggtatttgg tgtgacccta agaacttggt cccgtttaaa cgactcatgt 6360
ccatcccccc tccattcgag cagtaccaca tgcttgatat ataaatgtta cagctgagcg 6420
tttgcagtag ccttgagatc tgagtctagt atcagcccaa atgaggtgcg agtgacttct 6480
gatttcaggg ggataccatt cttcattgag ctggtagatg gacctagtca cactttgtgg 6540
gatttttgtt gtttatattc aagtatagaa aatattccac agtaaatact tcattcctta 6600
agcccttttt atgtgcataa tactgtattt gggcaatgca aaattgaatt ggatatagaa 6660
tctgccctct aggagcttga ctgtagtaag gcagagaaag catgttcaaa attaagttaa 6720
acagaataga gcatgagtgc cagaaagaag gaaagaaaga aagaaacatt cagttctgtg 6780
ttggaacact gacctgtgcc tatctgtatt acccacatag ttccaacctt gtttataaaa 6840
catacttgag atttactaag ttctgttgtg aaaaagcttt cagccaatgt catgttgtgg 6900
gctggatact tttagggcag atgagtatac aatgtgaata cacatatcca taatggccag 6960
gaaacagtgc ccatgtctgt gccattcgga aatgattaga ggtaattaaa ataacgtaga 7020
gccatatgcg atatctattt ttgaatgtgg gtgtattgac atttcctgag ggtcattttg 7080
aaagtcaggt tctcagcctt gtaccaaagc gaggaacata gaatctcaga atttcaaatc 7140
ttgaaagggt cttggtttcc tcaactctaa aatactgggt tgaactaagt gattgttaaa 7200
gccagatgag gcattgcact ctccaaggtc acacagctta ttaacactga tggtttcagg 7260
gcccaggact ctcagatgcc cagaccagtt tacttgcttt ctgtcacctg aatatacctt 7320
gactcacttc tgattctttt ctctttcttt tttgccttca aaggaggcaa gaaaattccc 7380
tttttacttt taagactact ggttcatgga attttgggat tggctaggtt ctagaacaag 7440
ttatcgaata ttttggagaa ggcttacttg tgtaatttga ttctttttcc acttttaatg 7500
tgtgctaaat tggaaaatat acactgtacc g 7531
<210> 2
<211> 7252
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 2
gcattaggag cgaacagcgc tgcagatata gatggcagct tcgtgtcagt gagtttgcgt 60
tccccttcct gatccacgcg ctggagtgat tagagccctg gaagggaatt gttactcccg 120
tgaagtcccc ttttcctggc agtcatctgc actgtacacg ctggatccct ctctccgatc 180
caccccactc actcgctcct ctctcacctc ctctctcacc tcctctctct ccctcctctc 240
tcacctcctc tctccctctc tcctgcattg attttttttc tctccttttt ttagttgact 300
gaaacaaaac aaaacaaaag ggccactgga tgtctgcctt cttggggggt gagccagaca 360
gactgacaaa caaacagacc cagctgagct cgggggaggg tttctcctcc ggttttgccc 420
ggcagcagca gcatggacgt gttggctagt tatagtatat tccaggagct acaacttgtc 480
cacgacaccg gctacttctc agctttgcca tccctggagg agacctggca gcaggtgaat 540
gatttaaatt acttgtgtaa atcgtgtggc ggcggcggag acgcaggggc tgcgtttggt 600
gtgggctttg agttgaaatt tttttaatta attttttctt tttatttatt tatttatttt 660
ttggctgtgt gttgtttaaa atgttttgtg aaacaatcat atgcgcttac ctctccaccc 720
acccctagcc ccttagtgtg ttgagctgag ccggtcctag ctgcctgcat ttctgtcacc 780
aacacacatc cttgcgcaca cgttgtcggc tcgctgtccc ctagcagaga attgctggcg 840
aacttctcgg gtttggagga gccgggtggg aaggtggtcg agcaatggtt gacaggatac 900
cacgttccta gatgcaggag ttctgacctt agtacttaaa tcagctttat ccatttcaac 960
tggtcctgaa gaccgtcaag gggggtgggg ggaagcacgg agtgtttttc ccagtaattt 1020
actgagtgtc aataaagaat aggagcttga tttttagata caaggtgagc tgtacgaaga 1080
gaagccaggt gacaaaagat gcttaaggat atgtacaagg aagatgagaa gatatgtctc 1140
tcttaggctg acaatgtatt gtatggtttc tctagctaat gcctccagag agagcagcct 1200
gtactgtgtc cttgcttttt gtttgtttgt ttggggtgcc tctcaggtta gcaccacctt 1260
ggacaaaggg tggtgtgtgc ttccttgctt ccctactttg tcttagagga ctagttaaga 1320
aaactcctag gatgctaaag ggtaccggtg ccaagttctc ttggcatctc cgggaggttg 1380
aagcctgact ggggacaagt tcactgggct ttgtgaagtg gaataaagaa agtgctggtc 1440
agtggaaagt gctgggtctg ctacggaaac agtggttttt ccagccgcga ttaggaggtg 1500
ctgaggggga cattctgcag gaaagatggt ggtgggtggg ggcggggcgg ctggggatag 1560
ggacaccacg ggtgtttaaa aactctacag tgtgcaccgt ggaaagtcca ggaagacagt 1620
ctggatttgc acgttcagag tgtgaatttg tacagtccat cctggagaga gagagagaga 1680
gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga gagagagaga 1740
gaaaccttgc ccttggggag ggccctggga tccttggtgt gtggctgctc atgtaacttc 1800
tctgctcagt gacagcagct tgttaaggct aatgaacggc tgagtttcct ttgccaggat 1860
ccaaagcagg gtttgccagc ttgaggctgg gatgtaacag ttgctgcttt aggaagagat 1920
gctaagctca cggtataggg agccagtggt aaagcgctca atcttaagac tgtgccattg 1980
ttactagttg ttgcctggct ggtagctgcg ggagttttcc tccaggtatt cgctgcccgt 2040
gtctgtgtgt ctgtgtagcg catggattcc agttggaagg ctggcagatg ctgtcctttg 2100
ctaaacacgc aggcagagta ctcacatcgt ttcctatata catcctttcc tgctgccctt 2160
aagaagagta tgtctcatgt cggatctccc tacatccttt cttttgtatt ttgatatgaa 2220
gcaagccaaa atgttgccag aatctcgttt tttttgtttt gtttttaggt tttttttccc 2280
cccctaaaca gccttctttt caccctgtca gcccactggt gtggaatcag ttgcatatta 2340
actacagtct agactagtta gggaagggaa tctgttgatt tagtcagcat gcccgaggca 2400
ggccttgttt gtgactaact gttaagtagt gttggaggga agaaagttgg ctttatttgt 2460
tacaacgttc cctccagatg aatcacacaa ctttgttttg gttccagttt tcagggtagt 2520
aaagcctgct cgtggggctg ggggtggggg cttctttaga ggaaacctgc ttttctagat 2580
ctgcctggag gatccagaag gtacagcttc aaggaaacat cactggcttg acaattaggg 2640
atgtattaga tctattgttt cctcagaagc cagctctgct cttcctctcc ccctcctcct 2700
tctccctcct cccccttata gaaacctagc ttagtttttt tttttaaaca catcgccagg 2760
caaaggaatt ttcacttcca ccctctttct tatttcttgt ctcaactgtc tccagctgcc 2820
atcttctctc atcttaatac ccctccccaa gtccacatgg aaacataact tgcaggcaag 2880
cacttctaaa caaggtacca tggcctggag caccctgctc aggactctgt tctaggatcc 2940
tgagttcatg ctgatgacga aacctttagc ctttatctct tccttcctcc ccatctccac 3000
agccccttgc ttctgactct taggggggta gcggtggttt tatgcaactg ctagctcaaa 3060
attaaccaga tggtgaaatt ctgagactcc tttgctcaaa acagctcaag aaggttgcta 3120
caaaaacccc aggcagaagg aagtttcccg atgctctggg gtaatcagat tttagaggtc 3180
aaatgaggaa tcattattgg atgtttttct taaagcgagc aatatactcg gggacatgcg 3240
cccaggagga gggtgtgtgt gtgtgtggag atcctgataa tctaatttgg tttctagaga 3300
atggctttga atgataaacc caagaacatc tgtgcattgg aaaaccgagg agggactgtt 3360
tgtccatgtc gcttcaaact taggccctgg gatagtttcc tctgtcagtg agcctatggc 3420
aaaggcagcg atggagacag tactaccttg tgtcacttta atgtgaattc gtggacaggg 3480
atactcaacc aggattccag ctcccagatg gacatcccag atccactgct ctccatctct 3540
gagctctaac tgcatgccca agcacttggc ccaagtaata tcatctctgc ctgtcgtgta 3600
actgtaaatt atactgtgtt tatgtgccta tgtggtctgt tatttatgac attcatctga 3660
cacagctctg aaggctgccg gcctgaaaac ttataggaaa tatttcaaaa gctgtttgat 3720
caaacgttga aaacagttga gattaggacg gaagctagag tagattttag ggtaccattt 3780
gatgataaag ggagatacat ccacaatgtt acaagagaag ttggactctt tgaactggct 3840
actgactcag aaagtaaaaa gcacttcata tataacactt tcattttctt ccagattcta 3900
cagagctgta gaatttttat agtctttatt cccagcatgc tgtttcataa ggacagtcca 3960
agtaatgatt ctgagtattg tttgctccat gccattggga agcatggcat gcttacttga 4020
aaactcctat ggcattatga tcactgttaa tgctgattca taattggcaa atggggtcaa 4080
tttcaggcct ccgttttgct tggagaaaaa ttttccactg ctactggaaa caaataaata 4140
aatcatagaa cattctaccc tcctccccca gtcccccatt gttttaaact aatggcacac 4200
ttggcttctg taaggattga agtgtccctg taactctgca atttcatctt ggtttcaggc 4260
atcctgaaac actttttatg agggcttttg gtatgaggca tctctagggg aaaacctaca 4320
gaaatggttg ccttccaaga acagcctcat agtaccggga gctgggattt ggtctgtgag 4380
ccacgtttct tctccctcta tgtgatcttc ccctcccatt gccttccaca gaccgggcag 4440
ccaggtgctg tctcaaccag aaagacaaag caaactgcag ggtctgtgta tccgcaggtt 4500
tgccactgtc ccaatttgca gaaaacctta tcattaatta gaatttcttg gcagcagcac 4560
caccctgaga aatttgtaga cacaaaggag ccttggtaac cacattgaaa gaataaaata 4620
gctggctatt tatttattta tttttgtatg tgatttgtgt gttcgtcaat tactgtaaat 4680
cttttttttt tttttgaaac agaatcaaaa ctgccctgat tctccagctt ttctttataa 4740
agatgcagcc actacagaaa cgtggcttta aaaatgagag cacgtgtgag tgccatcagt 4800
cacacactta gcctttttgt aatagattca tttttatgtt cttttcatac acacatcttc 4860
atgtgggcac ttaatccttc agtctacctg tctgccattt ggtgttttaa agtaagaaag 4920
gatgtcagtg cagatgttgc ttctacacct gtccttagta agggagagga actcaccctt 4980
ctttgttctc catgtatcac acacccctac tcaccaccct gaggagagag ggatgatggg 5040
gggggggtcc tatccattta aaaggcgaag tagaagatac aggctgacag ctttgccctg 5100
agatgattta tggatgggca tgttggagac cttaagtgtt caaatgtggg ctcttctctc 5160
ccagccccct tctaaataga aatgcctgtt gaagctaatt tgcttctcca cttaaatgga 5220
gatagtttaa agagggtcag aatggagctt ttaatagcca ttctcttacc aatctgaaaa 5280
gtcccccttc acagaatccc tcttgtttag tacaaagcat actttggcca gtcccagcca 5340
gctcatgttg gtgggatacc tgctctgcta tttggccagc tagttggtag atgttcccac 5400
ctctggttaa catagaatgt ctggaggttt taatcactgt cactggatcc atcgttgatg 5460
attgcataca gtgtctccct gatgctggct cactcgctgt agctccaact cacttgctgt 5520
tggagttaca gctgcagcta cagttacagc ggtagctctg actccaacag catgcatgtt 5580
taggatttgc tgaaagttta ggacagctcc ctaatttaat gggagccatg cctggacggt 5640
gagggcagag actttgtgtc cctttgttct cccaagtcag cttagtgctt gcttagcata 5700
aacaggtaaa aatgtgttca cctcaattgc cagtccactc tgccaaaaaa ggacccagaa 5760
aactctagag ctcctcctga tacctaatcg gaatgtatat aacactgaca agctagaaaa 5820
cactactttc tcccctctta gaacatcctc atgagaaaat attcttatta aatctcatgt 5880
aggagtcccc cacataaagt attgtcactt tttagaagtg tgtgtgcctg agtggtcctg 5940
atcttcctct cttgatgttc ctgcctctta ccttgcaaca tcacttctac tgcctcgggt 6000
agtatgctac ccaagatgct ggcttgtcat ttgatgtgag cctaagaact tggtctggtg 6060
gtctgcagtc tgtctgtcct actctctgtt ataggagctc tgtctgccac atgctatagg 6120
tgtgtgcaga gtcagcagct gccttgggaa atgagtccca gtgttcacct ccttgagatg 6180
agaatggggg aaaaaccatt cctgattgag ctgccagtag acccagtgtg gcagtgtgag 6240
actttgctct caataaagta ttctgtataa aactatatta agtctattcc gtgttaaatg 6300
tttaatttcc taagccctta tttatgcaga ctgttctgtt tgggtgatgc aaagttaaaa 6360
aggatgtaga ttctgcccca cttcattcta gaagagggca catttaaaat taattgatat 6420
agaataagag aacactgaaa aaatgaactc ttcagtactg tttttgaata ctagtctgcc 6480
ttgtcttatt ttttgttttg tttttttttg tttaaaaaac aaacaaaacc catggggctt 6540
gtttatataa accaggcatg agatttgctt agctctgttg tgggcatgct tttagctctg 6600
ggcatagtgg gggctggtaa gcaacagtgt gacttcacat gtccataatg tccaggaaat 6660
ggcgtttgtg tctgtgtcat tcggaaatga cttgacgtaa ttaaaacaat taatgttgag 6720
ccacatgcaa tatctatttc tgaatatgga ttcattaaca tttcctgagg gtcatcttga 6780
aagtctggcc tctagcttga aacagagctc agaacctgga attttatcat ttcaaatcct 6840
gaaaggggtt ttggtttatt tagctctgaa gtactagagt tgaatcactg tggatgtcac 6900
agccaaagga ggtgttacat tcttcaggtt catgttagca ctgttgattc tgagacccag 6960
ggctcagaca ctggagtaag tttcaaacca atgcttattt ctcatcctac catttaaaga 7020
gacatgagaa aatattcctg ttacttctgt gtaccagtat cagacaaaca aacaaagtaa 7080
ctaactaact aacaaacaca ttggcattgc ctgggcccta gatcaaagca tagagtagtt 7140
taatgtcatc cttctccaac tctcaatact ctgtagtaat tttgaaacag taaaaatatg 7200
ttctttttat gtgtggggga aggcaagagc ccccaaagta ataatgctac tc 7252
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 3
ccaggtgcta tatcagccag ga 22
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 4
gtggtgctgt tgccaagaaa ttc 23
<210> 5
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 5
ccctggcacc cagcac 16
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 6
gccgatccac acggagtac 19
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 7
atttcaggcc tccgttttgc 20
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 8
cagaagccaa gtgtgccatt agt 23
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 9
aagatcaaga tcattgctcc tcc 23
<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 10
gactcatcgt actcctgctt gc 22

Claims (6)

1.一种长链非编码RNA lnc1267在作为高剂量电离辐射剂量检测标志物中的应用，其特征在于，所述lnc1267为核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的人源lnc1267，或核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的小鼠源lnc1267；
当所述lnc1267为人源lnc1267时，所述应用为通过获取人源RNA lnc1267的表达量，检测人体细胞受电离辐射的剂量，电离辐射剂量的范围是4 Gy~12 Gy；
当所述lnc1267为鼠源lnc1267时，所述应用为通过获取小鼠源RNA lnc1267的表达量，检测小鼠受电离辐射的剂量，电离辐射剂量的范围是2 Gy~6 Gy；
所述应用为非疾病诊断或治疗目的的应用。
2.过表达权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267，或能够促进权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267表达的物质在制备用于降低放射诱导的细胞凋亡敏感性的产品中的应用。
3.过表达权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267，或能够促进权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267表达的物质在制备用于提高细胞放射抗性的产品中的应用。
4.敲低权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267，或能够抑制权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267表达的物质在制备用于提高放射诱导的细胞凋亡敏感性的产品中的应用。
5.敲低权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267，或能够抑制权利要求1所述长链非编码RNA lnc1267表达的物质在制备用于降低细胞放射后细胞克隆形成能力的产品中的应用及降低细胞放射抗性的产品中的应用。
6.敲低权利要求1所述小鼠源lnc1267，或能够抑制权利要求1所述小鼠源lnc1267表达的物质在制备用于提高小鼠放射敏感性的产品中的应用。
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