CN115305208A - 一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法 - Google Patents

一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115305208A
CN115305208A CN202211131192.0A CN202211131192A CN115305208A CN 115305208 A CN115305208 A CN 115305208A CN 202211131192 A CN202211131192 A CN 202211131192A CN 115305208 A CN115305208 A CN 115305208A
Authority
CN
China
Prior art keywords
rhizopus oryzae
solid
fermentation medium
state fermentation
sulfate heptahydrate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211131192.0A
Other languages
English (en)
Inventor
克里斯蒂安·阿尔贝托·帕切科·马丁内斯
梅纳赫姆·大卫·奎达
劳瑞纳斯·瓦修卡斯
方祯豪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Xinghuan Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Suzhou Xinghuan Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Xinghuan Biotechnology Co ltd filed Critical Suzhou Xinghuan Biotechnology Co ltd
Priority to CN202211131192.0A priority Critical patent/CN115305208A/zh
Publication of CN115305208A publication Critical patent/CN115305208A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/56—Lactic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/845—Rhizopus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法。固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖60‑75g/L、七水硫酸镁0.2‑0.45g/L、七水硫酸锌0.04‑0.07g/L、磷酸氢二钾0.2‑0.45g/L、硫酸铵0.1‑0.75g/L、碳酸钙40‑60g/L、氯化铁0.005‑0.011g/L、蛋白胨4‑5g/L、尿素1.2‑2.2g/L、琼脂12‑15g/L、L‑半胱氨酸S‑硫酸钠钠倍半水合物2.5‑3.5g/L、酵母提取物5.5‑6.5g/L。通过合理选择碳源、氮源、无机盐的种类，调整各类物质的配比，为米根霉提供了最佳的生长环境，利于米根霉的高效繁殖及生长。本发明制备得到的米根霉固态发酵培养基方便移动，高效便捷，相比于传统的液态培养基，该固态培育环境对液体的需求量大大减少，对资源和能源的消耗量减少，制备成本降低。

Description

一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及米根霉培养基技术领域，具体为一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法。
背景技术
生物发酵法是工业上生产乳酸的重要方法之一，发酵法使用的微生物主要是乳杆菌属和根霉菌属，米根霉属于根霉菌属，其是一种在土壤、空气及其他物质上常见的霉菌，米根霉菌落疏松或稠密，最初白色后变为灰褐至黑褐色，匍匐枝爬行，无色，假根发达，指状或根状分枝，囊托楔形，菌丝形成厚垣孢子，发育温度为30-37℃，能糖化淀粉、转化蔗糖，产生乳酸、反丁烯二酸及微量酒精，产L-乳酸能力强，且生产的乳酸品质相对较高，目前已成为乳酸工业化生产的重要菌种。
传统方法中培养米根霉的周期较长，培养需要大量的液体和大容积的发酵培养槽，同时发酵培养槽设备需要消耗大量能源，为此，本申请从传统工艺的不足出发，研究出一种米根霉的固态发酵培养基，该固态培养基可方便移动，高效便捷，同时大大缩短米根霉的发酵培养周期，减少液体和能源的消耗量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种米根霉固态发酵培养基，所述固态发酵培养基由碳源、氮源、无机盐、添加剂、酵母提取物、琼脂组成；
所述碳源为葡萄糖、马铃薯蔗糖、麦芽汁中的任意一种；
所述氮源为蛋白胨、尿素、硫酸铵中的任意一种或多种组合；
所述无机盐为七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、碳酸钙、硫酸铵、硫酸镁、硫酸锌、碳酸钙、氯化铁、氯化镁、氯化钙、氯化钾、氯化钠、碳酸氢钠中的任意一种或多种组合；
所述添加剂为L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物。
进一步的，所述培养基的各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物。
进一步的，所述培养基由以下成分组成：葡萄糖60-75g/L、七水硫酸镁0.2-0.45g/L、七水硫酸锌0.04-0.07g/L、磷酸氢二钾0.2-0.45g/L、硫酸铵0.1-0.75g/L、碳酸钙40-60g/L、氯化铁0.005-0.011g/L、蛋白胨4-5g/L、尿素1.2-2.2g/L、琼脂12-15g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.5-3.5g/L、酵母提取物5.5-6.5g/L。
进一步的，所述培养基由以下成分组成：葡萄糖70g/L、七水硫酸镁0.25g/L、七水硫酸锌0.05g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸铵0.4g/L、碳酸钙47g/L、氯化铁0.01g/L、蛋白胨4g/L、尿素1.6g/L、琼脂13g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.8g/L、酵母提取物6.1g/L。
进一步的，所述固态发酵培养基为圆柱体；所述培养基的直径为70-150mm，厚度为7-15mm。
一种米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为120-125℃、压力为0.11-0.14Mpa条件下高温高压灭菌，取出放入摇床中，处理3-5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物，搅拌均匀，冷却至25-40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基。
进一步的，一种米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为50-60℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为120-125℃、压力为0.11-0.14Mpa条件下高温高压灭菌60-80min，取出放入摇床中，控制转速为200-250r/min、温度为35-37℃，处理3-5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入琼脂、添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物，搅拌均匀，控制温度为95-105℃、压力为0.08-0.12mpa条件下，冷却至25-40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基。
进一步的，所述米根霉固态发酵培养基应在避光、干燥、环境温度为15-25℃条件下保存，备用。
上述制备方法得到的米根霉固态发酵培养基的应用，具体为固态发酵培养基可用于培养发酵米根霉；
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为32-37℃，pH为7.0-9.0条件下，发酵培养24-48h，得到发酵产物乳酸。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：本发明提供的米根霉固态发酵用培养基合理选择碳源、氮源、无机盐的种类，调整各类物质的配比，为米根霉提供了最佳的生长环境；琼脂固体培养基，在发酵培养过程染菌风险较低，有助于提升发酵产物的质量。另外，现有技术中，琼脂固体在制备固体培养基时常会出现，琼脂溶解不均匀，培养基易出现上、下分层，甚至于出现培养基开裂的现象。本申请中为了解决该问题，选择了添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物，作为氨基酸的衍生物，L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物可以增加琼脂与培养基体系的相容性，使其在体重中均匀分布，凝固成型后不会出现分层、断裂，从而避免了因分层、裂开带来的培养发酵产物不稳定、染菌的风险。另外，加入L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物还可为培养发酵过程提供更多的营养物质，利于米根霉的高效繁殖及生长，发酵过程染菌风险低。
本发明制备得到的米根霉固态发酵培养基方便移动，高效便捷，相比于传统的液态培养基，该固态培育环境对液体的需求量大大减少，对资源和能源的消耗量减少，制备成本降低，可用于规模化生产。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种米根霉固态发酵培养基各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物。
固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖60g/L、七水硫酸镁0.2g/L、七水硫酸锌0.07g/L、磷酸氢二钾0.2g/L、硫酸铵0.55g/L、碳酸钙42g/L、氯化铁0.005g/L、蛋白胨4g/L、尿素2.2g/L、琼脂12g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.5g/L、酵母提取物5.5g/L。
进一步的，所述固态发酵培养基为圆柱体；所述培养基的直径为100mm，厚度为10mm。
米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为50℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为120℃、压力为0.11Mpa条件下高温高压灭菌60min，取出放入摇床中，控制转速为200r/min、温度为35℃，处理3min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物(安琪酵母FM802)，搅拌均匀，控制温度为95℃、压力为0.08mpa条件下，冷却至25℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基，置于避光、干燥、环境温度为15℃条件下保存，备用。
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为32℃，pH为7.0条件下，发酵培养，得到发酵产物乳酸。
本实施例中使用米根霉为米根霉菌株HP25-3#，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12078。
实施例2
一种米根霉固态发酵培养基各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物。
固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖70g/L、七水硫酸镁0.25g/L、七水硫酸锌0.05g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸铵0.4g/L、碳酸钙47g/L、氯化铁0.01g/L、蛋白胨4g/L、尿素1.6g/L、琼脂13g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.8g/L、酵母提取物6.1g/L。
固态发酵培养基为圆柱体，培养基的直径为100mm，厚度为10mm。
米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为55℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为123℃、压力为0.12Mpa条件下高温高压灭菌65min，取出放入摇床中，控制转速为225r/min、温度为35℃，处理5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物(安琪酵母FM802)，搅拌均匀，控制温度为95℃、压力为0.1mpa条件下，冷却至30℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基，置于避光、干燥、环境温度为20℃条件下保存，备用。
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为35℃，pH为7.4条件下，发酵培养，得到发酵产物乳酸。
本实施例中使用米根霉为米根霉菌株HP25-3#，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12078。
实施例3
一种米根霉固态发酵培养基各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物。
固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖75g/L、七水硫酸镁0.45g/L、七水硫酸锌0.04g/L、磷酸氢二钾0.45g/L、硫酸铵0.2g/L、碳酸钙60g/L、氯化铁0.011g/L、蛋白胨4g/L、尿素2.0g/L、琼脂15g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物3.5g/L、酵母提取物6.5g/L。
进一步的，所述固态发酵培养基为圆柱体；所述培养基的直径为12mm，厚度为8mm。
米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为60℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为125℃、压力为0.14Mpa条件下高温高压灭菌80min，取出放入摇床中，控制转速为250r/min、温度为37℃，处理5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物(安琪酵母FM802)，搅拌均匀，控制温度为105℃、压力为0.12mpa条件下，冷却至40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基，置于避光、干燥、环境温度为25℃条件下保存，备用。
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为37℃，pH为9.0条件下，发酵培养，得到发酵产物乳酸。
本实施例中使用米根霉为米根霉菌株HP25-3#，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12078。
实施例4
一种米根霉固态发酵培养基各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物。
固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖70g/L、七水硫酸镁0.25g/L、七水硫酸锌0.05g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸铵0.4g/L、碳酸钙47g/L、氯化铁0.01g/L、蛋白胨4g/L、尿素1.6g/L、琼脂13g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.8g/L、酵母提取物6.1g/L。
进一步的，所述固态发酵培养基为圆柱体；所述培养基的直径为100mm，厚度为10mm。
米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为60℃条件下，加入硫酸镁、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为125℃、压力为0.14Mpa条件下高温高压灭菌80min，取出放入摇床中，控制转速为250r/min、温度为37℃，处理5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物(安琪酵母FM802)，搅拌均匀，控制温度为105℃、压力为0.12mpa条件下，冷却至40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基，置于避光、干燥、环境温度为25℃条件下保存，备用。
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为35℃，pH为7.4条件下，发酵培养，得到发酵产物乳酸。
本实施例中使用米根霉为米根霉菌株HP25-3#，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12078。
实施例5
一种米根霉固态发酵培养基各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、酵母提取物。
固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖70g/L、七水硫酸镁0.25g/L、七水硫酸锌0.05g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸铵0.4g/L、碳酸钙47g/L、氯化铁0.01g/L、蛋白胨4g/L、尿素1.6g/L、琼脂13g/L、酵母提取物6.1g/L。
固态发酵培养基为圆柱体，培养基的直径为100mm，厚度为10mm。
米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为55℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为123℃、压力为0.12Mpa条件下高温高压灭菌65min，取出放入摇床中，控制转速为225r/min、温度为35℃，处理5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入酵母提取物(安琪酵母FM802)，搅拌均匀，控制温度为95℃、压力为0.1mpa条件下，冷却至30℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基，置于避光、干燥、环境温度为20℃条件下保存，备用。
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为37℃，pH为9.0条件下，发酵培养，得到发酵产物乳酸。
本实施例中使用米根霉为米根霉菌株HP25-3#，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12078。
实施例6
一种米根霉固态发酵培养基各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、色氨酸、酵母提取物。
固态发酵培养基由以下成分组成：葡萄糖70g/L、七水硫酸镁0.25g/L、七水硫酸锌0.05g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸铵0.4g/L、碳酸钙47g/L、氯化铁0.01g/L、蛋白胨4g/L、尿素1.6g/L、琼脂13g/L、色氨酸2.8g/L、酵母提取物6.1g/L。
进一步的，所述固态发酵培养基为圆柱体；所述培养基的直径为100mm，厚度为10mm。
米根霉固态发酵培养基的制备方法包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为60℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为125℃、压力为0.14Mpa条件下高温高压灭菌80min，取出放入摇床中，控制转速为250r/min、温度为37℃，处理5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂色氨酸、酵母提取物(安琪酵母FM802)，搅拌均匀，控制温度为105℃、压力为0.12mpa条件下，冷却至40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基，置于避光、干燥、环境温度为25℃条件下保存，备用。
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为37℃，pH为9.0条件下，发酵培养，得到发酵产物乳酸。
本实施例中使用米根霉为米根霉菌株HP25-3#，保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.12078。
实验数据与分析
实施例1-6中米根霉种子培养液的配比均相同，种子培养液中总糖含量为8％，总氮含量为0.3％。取实施例1-6制备得到的固态发酵培养基，在无菌超净工作台中使用平板划线法将种子培养液接种至实施例1-6制备得到的固态发酵培养基。采用米根霉菌菌落在固体培养基表面生长面积占培养基总界面积的占比来表征转化率，各组培养基发酵检测数据如下表1；
菌落数 转化率，％
实施例1 143 80.2
实施例2 153 83.3
实施例3 147 81.4
实施例4 125 76.7
实施例5 130 78.7
实施例6 119 75.1
表1
从表1数据可知，实施例1-3制备得到的固态发酵培养基中米根霉菌培养转化率达到80％以上，综合来看实施例1-3制备得到的固态发酵培养基发酵培养米根霉菌的培养菌落数比实施例4-6中的菌落数多，培养转化率更高。因此也说明了本申请方案制备得到的固态发酵培养基更利于米根霉菌的生产，培养效果更好，效率更高。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种米根霉固态发酵培养基，其特征在于：所述固态发酵培养基由碳源、氮源、无机盐、添加剂、酵母提取物、琼脂组成；
所述碳源为葡萄糖、马铃薯蔗糖、麦芽汁中的任意一种；
所述氮源为蛋白胨、尿素、硫酸铵中的任意一种或多种组合；
所述无机盐为七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、碳酸钙、硫酸铵、硫酸镁、硫酸锌、碳酸钙、氯化铁、氯化镁、氯化钙、氯化钾、氯化钠、碳酸氢钠中的任意一种或多种组合；
所述添加剂为L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物。
2.根据权利要求1所述的一种米根霉固态发酵培养基，其特征在于：所述培养基的各组分如下：葡萄糖、七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、氯化铁、蛋白胨、尿素、琼脂、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物。
3.根据权利要求2所述的一种米根霉发酵用培养基，其特征在于：所述培养基由以下成分组成：葡萄糖60-75g/L、七水硫酸镁0.2-0.45g/L、七水硫酸锌0.04-0.07g/L、磷酸氢二钾0.2-0.45g/L、硫酸铵0.1-0.75g/L、碳酸钙40-60g/L、氯化铁0.005-0.011g/L、蛋白胨4-5g/L、尿素1.2-2.2g/L、琼脂12-15g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.5-3.5g/L、酵母提取物5.5-6.5g/L。
4.根据权利要求3所述的一种米根霉发酵用培养基，其特征在于：所述培养基由以下成分组成：葡萄糖70g/L、七水硫酸镁0.25g/L、七水硫酸锌0.05g/L、磷酸氢二钾0.3g/L、硫酸铵0.4g/L、碳酸钙47g/L、氯化铁0.01g/L、蛋白胨4g/L、尿素1.6g/L、琼脂13g/L、L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物2.8g/L、酵母提取物6.1g/L。
5.根据权利要求1所述的一种米根霉固态发酵培养基，其特征在于：所述固态发酵培养基为圆柱体；所述培养基的直径为70-150mm，厚度为7-15mm。
6.一种米根霉固态发酵培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为120-125℃、压力为0.11-0.14Mpa条件下高温高压灭菌，取出放入摇床中，处理3-5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物，搅拌均匀，冷却至25-40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基。
7.根据权利要求6所述的一种米根霉固态发酵培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)取葡萄糖、蛋白胨，搅拌均匀，在温度为50-60℃条件下，加入七水硫酸镁、七水硫酸锌、磷酸氢二钾、硫酸铵、碳酸钙、尿素、氯化铁，混合均匀，加入琼脂，在温度为120-125℃、压力为0.11-0.14Mpa条件下高温高压灭菌60-80min，取出放入摇床中，控制转速为200-250r/min、温度为35-37℃，处理3-5min，制得混合液；
2)向步骤1)制得的混合液中加入添加剂L-半胱氨酸S-硫酸钠钠倍半水合物、酵母提取物，搅拌均匀，控制温度为95-105℃、压力为0.08-0.12mpa条件下，冷却至25-40℃，静置至琼脂完全凝固，制得米根霉固态发酵培养基。
8.根据权利要求7所述的一种米根霉固态发酵培养基的制备方法，其特征在于：所述米根霉固态发酵培养基应在避光、干燥、环境温度为15-25℃条件下保存，备用。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的米根霉固态发酵培养基的应用，其特征在于：所述固态发酵培养基可用于培养发酵米根霉；
所述固态发酵培养发酵米根霉的步骤如下：取米根霉菌株接种到种子培养基上，获得米根霉种子培养液；
将米根霉种子培养液接种到上述制备得到的固态发酵培养基中，控制温度为32-37℃，pH为7.0-9.0条件下，发酵培养24-48h，得到发酵产物乳酸。
CN202211131192.0A 2022-09-16 2022-09-16 一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法 Pending CN115305208A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211131192.0A CN115305208A (zh) 2022-09-16 2022-09-16 一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211131192.0A CN115305208A (zh) 2022-09-16 2022-09-16 一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115305208A true CN115305208A (zh) 2022-11-08

Family

ID=83867176

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211131192.0A Pending CN115305208A (zh) 2022-09-16 2022-09-16 一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115305208A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101050471A (zh) * 2007-04-26 2007-10-10 合肥学院 米根霉固态发酵薯渣生产乳酸新工艺
US20150337258A1 (en) * 2012-11-14 2015-11-26 Merck Patent Gmbh Cell culture media
CN110144298A (zh) * 2019-06-06 2019-08-20 劲牌有限公司 一种新型米根霉菌株g1及其培养方法和应用
CN112501107A (zh) * 2020-12-02 2021-03-16 台州学院 一种驯化米根霉的方法及生产乳酸的方法
CN112795531A (zh) * 2021-04-11 2021-05-14 依科赛生物科技（太仓）有限公司 一种cho细胞无血清无蛋白培养基及其用途
CN115029392A (zh) * 2022-06-27 2022-09-09 苏州星寰生物科技有限公司 一种利用米根霉发酵厨余垃圾制备乳酸的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101050471A (zh) * 2007-04-26 2007-10-10 合肥学院 米根霉固态发酵薯渣生产乳酸新工艺
US20150337258A1 (en) * 2012-11-14 2015-11-26 Merck Patent Gmbh Cell culture media
CN110144298A (zh) * 2019-06-06 2019-08-20 劲牌有限公司 一种新型米根霉菌株g1及其培养方法和应用
CN112501107A (zh) * 2020-12-02 2021-03-16 台州学院 一种驯化米根霉的方法及生产乳酸的方法
CN112795531A (zh) * 2021-04-11 2021-05-14 依科赛生物科技（太仓）有限公司 一种cho细胞无血清无蛋白培养基及其用途
CN115029392A (zh) * 2022-06-27 2022-09-09 苏州星寰生物科技有限公司 一种利用米根霉发酵厨余垃圾制备乳酸的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
焦凌霞;孔瑾;: "添加半胱氨酸对提高发酵型酸豆乳中益生菌存活力的研究", 食品工业科技, no. 05, pages 88 - 89 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102660461A (zh) 一种缩短烟叶发酵周期的微生物制剂及其应用
CN102653724B (zh) 一株干酪乳杆菌及其在发酵产l-乳酸中的应用
CN101709263B (zh) 一种恒化器连续培养装置
CN105385644A (zh) 降解乳酸合成己酸的功能微生物菌剂及其在窖泥养护中的应用
CN107034165B (zh) 粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺
CN106947715A (zh) 一种高活菌数、高芽孢形成率的枯草芽孢杆菌的发酵方法
CN105907661B (zh) 一种枯草芽胞杆菌的工业发酵方法
CN111394280A (zh) 一种适合地衣芽孢杆菌生长的培养基及其应用
CN101696394A (zh) 一种高活性的枯草芽孢杆菌发酵方法及发酵产品
CN103497914A (zh) 枯草芽孢杆菌菌株及利用该菌株生产γ-PGA的方法
CN112831437B (zh) 枯草芽孢杆菌及高产吲哚乙酸、高芽孢形成率的发酵方法
CN105441354B (zh) 一种高活性凝结芽胞杆菌活菌制剂的制备方法
CN115466700A (zh) 一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方及其培养方法
CN116286428A (zh) 一种降解农药残留的复合微生物菌剂的生产方法
CN102127515B (zh) 一株高产l-脯氨酸短波单胞杆菌(jnpp-1)的筛选及应用
CN108823123A (zh) 一种调控褐黄孢链霉菌发酵生产纳他霉素的制备方法
CN115305208A (zh) 一种米根霉固态发酵培养基及其制备方法
CN109055284B (zh) 一种酿酒用海洋产酸菌株及其应用
CN105420130A (zh) 一种饲用酿酒酵母液固两相发酵方法
CN103305437A (zh) 一株l-乳酸铵耐受菌及其应用
CN101659970B (zh) 阿维菌素发酵废水和侧耳素发酵废水循环处理方法
CN110218687B (zh) 一种新型红曲废渣微生态制剂的制备方法
CN114686399A (zh) 一种用于土壤改良的微生物菌剂配方及其制备方法
CN107523512A (zh) 一种高芽孢率的地衣芽孢杆菌发酵方法
CN112481324A (zh) 一种新型氨基酸发酵灭菌的工艺

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20221108

RJ01 Rejection of invention patent application after publication