CN115466700A - 一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方及其培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其是一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方及其培养方法。所述发酵培养基配方为：玉米淀粉1050‑1100g、黄豆饼粉950‑1000g、中性蛋白酶18‑21g、中性淀粉酶9‑11g、碳酸钙70‑80g、氯化钠20‑25g、玉米浆150‑160g、磷酸二氢钾24‑26g及硫酸锰2.0‑2.5g，水20‑25L；所述培养方法为：a)种子液的制备、b)配制液体发酵培养基、c)发酵培养。采用本发酵培养基配方和发酵方法发酵的地衣芽孢杆菌的活菌数可达368*108cfu/g，极大的提高了活菌数。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其是一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方及其培养方法。
背景技术
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是芽孢杆菌中较具应用潜力的菌种之一。其属于革兰氏阳性杆状细菌，可产生内生芽孢，抗逆性强，可在高温以及酸性等不利的外界环境中以内生孢子的形式存在，生存期长且不消耗养分，不失活，转移到合适的环境中后能够萌发生成活细胞，继续发挥营养作用。随着研究的不断深入，地衣芽孢杆菌已广泛应用于畜牧业及农业等领域，近年来，地衣芽孢杆菌的应用研究日益增多。地衣芽孢杆菌作为饲料添加剂被广泛应用在饲料中。此外，地衣芽孢杆菌在农业上也有其应用价值。地衣芽孢杆菌通过与病原菌竞争营养和生存空间，产生抑制病原菌生长的代谢产物，如抗菌蛋白及几丁质酶等，作用于致病菌细胞壁、细胞膜，抑制常见植物致病菌活性，减少植物病害。地衣芽孢杆菌也可以应用在环境污染治理，降解水体及空气中的污染物，可以维持水中菌群平衡；可调节氨氮、亚硝酸盐氮的含量，使氮磷比达到平衡；可降解水中粪便、悬浮物，清洁水体。
但是，在现有技术中，地衣芽孢杆菌发酵的活菌数很低，严重影响了地衣芽孢杆菌在生产生活中的研究和应用，因此我们急需提高地衣芽孢杆菌发酵的活菌数，扩大地衣芽孢杆菌的生产应用。
发明内容
为了解决上述技术问题，提高地衣芽孢杆菌发酵的活菌数，本发明提供了一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方及其培养方法。
本发明提供的一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方，包括玉米淀粉1050-1100g、黄豆饼粉950-1000g、中性蛋白酶18-21g、中性淀粉酶9-11g、碳酸钙70-80g、氯化钠20-25g、玉米浆150-160g、磷酸二氢钾24-26g及硫酸锰2.0-2.5g，水20-25L。
一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养方法，包括以下步骤：
a)种子液的制备
将-80℃甘油管保藏的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃的温度，200r/min摇床培养7h，备用；
b)配制液体发酵培养基
按照玉米淀粉1050-1100g、黄豆饼粉950-1000g、中性蛋白酶18-21g、中性淀粉酶9-11g、碳酸钙70-80g、氯化钠20-25g、玉米浆150-160g、磷酸二氢钾24-26g及硫酸锰2.0-2.5g，水20-25L配制液体发酵培养基；
c)发酵培养
按4-5*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中进行发酵培养，发酵温度为35-39℃，pH值为6.5-7.5，发酵压力为0.04-0.05MPa，转速为200-600r/min。
优选的，所述地衣芽孢杆菌购买于广东省微生物菌种保藏中心，其拉丁名为Bacillus licheniformis，保藏号为GDMCC1.11。
优选的，在发酵培养中的发酵温度为37℃，发酵pH为7.0，发酵压力为0.05MPa，转速为400r/min。
综上所述，本发明具有如下的有益技术效果：
1.采用本发酵培养基配方和发酵方法发酵的地衣芽孢杆菌的活菌数可达368*108cfu/g，极大的提高了活菌数。
2.该发酵采用的原料成本低，发酵流程简单，降低了生产成本，为地衣芽胞杆菌扩大生产应用提供了可能。
附图说明
图1是在不同条件下发酵后的活菌数。
具体实施方式
实施例1
1)种子液制备
将-80℃甘油管保藏的编号为GDMCC1.11的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min的条件下摇床培养7h，备用。
2)配制液体发酵培养基
用玉米淀粉1050g、黄豆饼粉950g、中性蛋白酶18g、中性淀粉酶9g、碳酸钙70g、氯化钠25g、玉米浆150g、磷酸二氢钾24g、硫酸锰2.0g、水20L配制液体发酵培养基。
3)发酵培养
按4*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中，在37℃恒温、转速400r/min、pH7.0、发酵压力为0.05MPa的条件下进行发酵。发酵后进行活菌计数，活菌数为368*108cfu/g。
实施例2
1)种子液制备
将-80℃甘油管保藏的编号为GDMCC1.11的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min的条件下摇床培养7h，备用。
2)配制液体发酵培养基
用玉米淀粉1050g、黄豆饼粉950g、中性蛋白酶18g、中性淀粉酶9g、碳酸钙70g、氯化钠25g、玉米浆150g、磷酸二氢钾24g、硫酸锰2.0g、水20L配制液体发酵培养基。
3)发酵培养
按4*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中，在35℃恒温、转速200r/min、pH6.5、发酵压力为0.04MPa的条件下进行发酵。发酵后进行活菌计数，活菌数为338*108cfu/g。
实施例3
1)种子液制备
将-80℃甘油管保藏的编号为GDMCC1.11的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min的条件下摇床培养7h，备用。
2)配制液体发酵培养基
用玉米淀粉1050g、黄豆饼粉950g、中性蛋白酶18g、中性淀粉酶9g、碳酸钙70g、氯化钠25g、玉米浆150g、磷酸二氢钾24g、硫酸锰2.0g、水20L配制液体发酵培养基。
3)发酵培养
按4*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中，在39℃恒温、转速600r/min、pH7.5、发酵压力为0.05MPa的条件下进行发酵。发酵后进行活菌计数，活菌数为341*108cfu/g。
对比例1
1)种子液制备
将-80℃甘油管保藏的编号为GDMCC1.11的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min的条件下摇床培养7h，备用。
2)配制液体发酵培养基
用葡萄糖500g，蛋白胨250g，牛肉膏100g，酵母粉130g，磷酸二氢钾40g，氯化钠20g，水20L配制液体发酵培养基。
3)发酵培养
按4*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中，在37℃恒温、转速400r/min、pH7.0、发酵压力为0.05MPa的条件下进行发酵。发酵后进行活菌计数，活菌数为78*108cfu/g。
对比例2
1)种子液制备
将-80℃甘油管保藏的编号为GDMCC1.11的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min的条件下摇床培养7h，备用。
2)配制液体发酵培养基
用葡萄糖300g、蛋白胨15g、氯化钙15g、硫酸锰12g、水20L配制液体发酵培养基。
3)发酵培养
按4*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中，在37℃恒温、转速400r/min、pH7.0、发酵压力为0.05MPa的条件下进行发酵。发酵后进行活菌计数，活菌数为102*108cfu/g。
对比例3
1)种子液制备
将-80℃甘油管保藏的编号为GDMCC1.11的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min的条件下摇床培养7h，备用。
2)配制液体发酵培养基
用葡萄糖200g、黄豆粉700g、玉米淀粉600g、硫酸锰6g、碳酸钙6g、氯化钠100g、水20L配制液体发酵培养基。
3)发酵培养
按4*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中，在37℃恒温、转速400r/min、pH7.0、发酵压力为0.05MPa的条件下进行发酵。发酵后进行活菌计数，活菌数为103*108cfu/g。
本发明实施例与对比例的对比如下：
从以上数据以及图1可以看出，在液体发酵培养基相同的情况下，实施例1的活菌数高于实施例3，实施例3高于实施例2，在发酵温度为37℃、发酵pH7.0、发酵转速400r/min、发酵压力0.05MPa的条件下发酵培养的活菌数最多；对比实施例1、对比例1、对比例2、对比例3的活菌数，对比例1、对比例2、对比例3、实施例1的活菌数依次升高，由此可说明实施例1的液体发酵培养基发酵培养的活菌数最多，且至少提高257％。
为了更好的理解本发明的技术方案，以上结合具体的实施例对本发明做进一步的阐述说明，但不应将此理解为本发明所述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
Claims (4)
1.一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养基配方，其特征在于：包括玉米淀粉1050-1100g、黄豆饼粉950-1000g、中性蛋白酶18-21g、中性淀粉酶9-11g、碳酸钙70-80g、氯化钠20-25g、玉米浆150-160g、磷酸二氢钾24-26g及硫酸锰2.0-2.5g，水20-25L。
2.一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
a)种子液的制备
将-80℃甘油管保藏的地衣芽孢杆菌接种于LB培养基的三角瓶中，在37℃的温度，200r/min摇床培养7h，备用；
b)配制液体发酵培养基
按照玉米淀粉1050-1100g、黄豆饼粉950-1000g、中性蛋白酶18-21g、中性淀粉酶9-11g、碳酸钙70-80g、氯化钠20-25g、玉米浆150-160g、磷酸二氢钾24-26g及硫酸锰2.0-2.5g，水20-25L配制液体发酵培养基；
c)发酵培养
按4-5*106cfu/g的接种量将地衣芽孢杆菌的菌液接入到液体发酵培养基中进行发酵培养，发酵温度为35-39℃，pH值为6.5-7.5，发酵压力为0.04-0.05MPa，转速为200-600r/min。
3.根据权利要求2所述的一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养方法，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌购买于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC1.11。
4.根据权利要求2所述的一种新型地衣芽孢杆菌的发酵培养方法，其特征在于：在发酵培养中的发酵温度为37℃，发酵pH为7.0，发酵压力为0.05MPa，转速为400r/min。
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2022
- 2022-10-10 CN CN202211233879.5A patent/CN115466700B/zh active Active
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