CN115300517A - 包含3’-o-唾液乳糖的人乳寡糖的混合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种人乳寡糖的混合物，其基本上由3’‑O‑唾液乳糖；组分A，其为3‑O‑岩藻糖基乳糖或乳糖‑N‑四糖；组分B，当组分A为3‑O‑岩藻糖基乳糖时其为3‑O‑岩藻糖基‑3’‑O‑唾液乳糖、当组分A为乳糖‑N‑四糖时其为唾液乳糖‑N‑四糖a；和任选地作为第四组分的乳糖组成。通过用α2,3‑转唾液酸酶处理3’‑O‑唾液乳糖和组分A来制备该混合物。该混合物用于抗细菌和抗病毒组合物中，并用于促进双歧杆菌(Bifidobacterium)和Barnesiella的发育。

Description

包含3’-O-唾液乳糖的人乳寡糖的混合物
本申请是2016年3月31日提交的发明名称为“包含3’-O-唾液乳糖的人乳寡糖的混合物”、申请号为“201680019455.5”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及人乳寡糖(“HMO”)的三元混合物，特别是3’-O-唾液乳糖(3’-SL)、组分A(其为3-O-岩藻糖基乳糖(3-FL)或乳糖-N-四糖(LNT))、和组分B(当组分A为3-FL时其为3-O-岩藻糖基-3’-O-唾液乳糖(FSL)、或当组分A为LNT时其为唾液乳糖-N-四糖a(LST-a))的混合物，用于制备该三元混合物的方法，以及该三元混合物在人类健康中的应用。
背景技术
HMO已经成为近年来极为关注的课题，因为其在人类机体中发生的许多生物学过程中发挥作用。哺乳动物乳汁包含这些复杂的低聚糖中的至少130种(Urashima等人:MilkOligosaccharides,Nova Biomedical Books,New York,2011,ISBN:978-1-61122-831-1)。
此前，HMO的唯一来源是主要包含水、以及55-70g/l乳糖、24-59g/l脂质、约13g/l蛋白质、5-15g/l HMO和约1.5g/l矿物质的哺乳动物乳汁。
然而，在过去十年中，开发用于合成这些低聚糖的方法的努力显著增加，因为其在许多人生物学过程中发挥作用。在这方面，已经开发出通过微生物发酵、酶法、化学合成或这些技术的组合来制备HMO的方法。例如，通过化学方法，可如WO 2011/100980和WO 2013/044928中所述制备LNnT，可如WO 2012/155916和WO 2013/044928中所述合成LNT，可如WO2013/091660中所述制备LNT和LNnT的混合物，可如WO 2010/115934和WO 2010/115935中所述制备2’-FL，可如WO 2013/139344中所述制备3-FL，且可如WO 2010/100979中所述制备6’-SL及其盐。作为生物技术方法的实例，WO 01/04341和WO 2007/101862描述了如何使用转基因大肠杆菌(E.coli)制备任选由岩藻糖或唾液酸取代的核心人乳低聚糖。作为酶法的一个实例，可如EP-A-577580中所述制备唾液酸化低聚糖。
还已经致力于开发用于酶合成HMO低聚糖的混合物的方法，而不必如WO 2012/156897和WO 2012/156898中所述合成混合物的所有低聚糖组分。这些方法已经提供了包含多种不同低聚糖的反应混合物。
然而，仍在寻求更好的用于合成HMO的混合物的方法，特别是由三种HMO(特别是3’-SL、3-FL和FSL或者3’-SL、LNT和LST-a)组成的混合物。
有证据表明，人消化道中被称为微生物组(microbiome)的微生物定居群落在健康和疾病中起着重要作用。当微生物组的正常组成失去平衡时，人宿主可能会遭受后果。最近的研究涉及到在例如癌症、肥胖、炎性肠病、银屑病、哮喘、以及甚至可能是自闭症的疾病中的微生物组的失衡。据信HMO积极地调节微生物组，并且将它们用于此目的越来越受到关注。然而，HMO的显著多样性，加上缺乏可得性，已经阻碍对单独HMO的特定功能的研究。明确需要特定的HMO或HMO的组合从而以期望的方式调节微生物组，以便解决特定的人类健康问题。
发明内容
本发明的一个方面涉及第一HMO混合物，其基本上由3’-O-唾液乳糖(3’-SL)、组分A(其为3-O-岩藻糖基乳糖(3-FL)或乳糖-N-四糖(LNT))、和组分B(当组分A为3-FL时其为3-O-岩藻糖基-3’-O-唾液乳糖(FSL)、或当组分A为LNT时其为唾液乳糖-N-四糖a(LST-a))组成。
本发明的另一方面涉及一种通过使3’-SL供体和组分A受体在α2,3-转唾液酸酶(transsialidase)的存在下反应然后从反应介质中除去乳糖和α2,3-转唾液酸酶而制备第一HMO混合物的方法。
本发明的另一方面涉及第二HMO混合物，其基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)、和乳糖组成。
本发明的另一方面涉及一种通过使3’-SL供体和组分C受体在α2,3-转唾液酸酶的存在下反应、然后从反应介质中除去α2,3-转唾液酸酶而制备第二HMO混合物的方法。所得混合物是本发明的第二HMO混合物。
本发明的一个方面涉及用于治疗病毒和/或细菌感染的抗感染组合物，其中所述组合物包含3’-SL、3-FL和FSL，或者3’-SL、LNT和LST-a。这些组合物包含具有新特性和生物学活性的多种不同HMO的混合物。具体地说，该组合物增加人微生物组的双歧杆菌(Bifidobacterium)丰度和Barnesiella丰度。此外，该组合物抑制病原体与宿主的结合，从而保护宿主免受感染。该组合物还能够用于治疗人的广泛的病毒和/或细菌感染和/或降低其风险。抗感染组合物有利地是本发明的第一或第二混合物，更有利地是如上所述的第一混合物。
本发明的另一方面涉及一种调节人(特别是非婴儿个体)的微生物组以增加双歧杆菌丰度和Barnesiella丰度的方法。该方法包括向所述人施用一种包含3’-SL、3-FL和FSL的混合物或3’-SL、LNT和LST-a的混合物的组合物，有利地是本发明的第一或第二混合物，更有利地是第一混合物，如上所述。
本发明的另一方面涉及一种预防或治疗人(特别是非婴儿个体)的病毒和/或细菌感染、特别是抗生素耐药性细菌感染的方法。该方法包括向人施用一种包含3’-SL、3-FL和FSL的混合物或3’-SL、LNT和LST-a的混合物的组合物，有利地是本发明的第一或第二混合物，更有利地是第一混合物，如上所述。
具体实施方式
本发明人惊奇地发现，3’-SL、3-FL和FSL的混合物以及3’-SL、LNT和LST-a的混合物具有抗感染活性，因此能够用作抗感染组合物，例如用于治疗细菌感染。该混合物能够增加微生物组的双歧杆菌丰度和Barnesiella丰度。该混合物还能够减少微生物组的厚壁菌门(Firmicutes)、特别是梭状芽孢杆菌(Clostridia)种的丰度。在其微生物组中双歧杆菌和Barnesiella丰度增加的人更能抵抗广泛的感染并从这些感染中更快地恢复。特别地，本发明的HMO混合物对于抗生素耐药性感染的保护和恢复是有效的。相信这种改善的耐受性和恢复性归因于由这些HMO引起的微生物组的健康促进变化。抑制病原体与宿主结合的能力赋予其他健康益处。
1.HMO混合物
本发明涉及合成的HMO混合物。术语“合成混合物”或“合成组合物”是指人工制备的混合物或组合物，优选是指含有至少一种化学地和/或生物地(例如，通过化学反应、酶促反应或重组)离体产生的化合物的混合物或组合物。在这方面，“合成”用于与“天然”相反，并且意味着本发明的合成混合物或组合物与天然组合物或混合物(如人乳汁)不相同，或者混合物或组合物中的至少一种HMO不是源于天然来源、例如人乳汁。
在一个实施方式中，HMO混合物能够是基本上由三种不同HMO，特别是3’-SL、HMO组分A(其为3-FL或LNT)和HMO组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)组成的第一HMO混合物。在另一个实施方式中，本发明的HMO混合物是基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)、和乳糖组成的第二混合物。
1.1.第一HMO混合物
在一个优选实施方式中，第一HMO混合物基本上由3’-SL、3-FL和FSL(第一混合物I)组成。第一混合物I中的HMO的摩尔比可变化。在一个实施方式中，FSL相对于组合3’-SL+3-FL的摩尔比为至少1:20。在另一个实施方式中，该比例可以为至少1:12。在一些实施方式中，第一混合物I中FSL相对于组合3’-SL+3-FL的某些比例(比如至少1:5或至少1:3)可以是优选的。在一些其它实施方式中，第一混合物I中3’-SL相对于LNT的摩尔比可以为0.05-5.3或0.17-3、优选为约1。
在另一个优选的实施方式中，第一HMO混合物基本上由3’-SL、LNT和LST-a(第一混合物II)组成。第一混合物II中的HMO的摩尔比可变化。在一个实施方式中，LST-a相对于组合3’-SL+LNT的摩尔比为至少1:10。在另一个实施方式中，该比例可以为至少1:7。在一些实施方式中，第一混合物II中LST-a相对于组合3’-SL+LNT的某些比例(比如至少1:5或约1:3)可以是优选的。第一混合物II中3’-SL相对于LNT的摩尔比还可以为0.05-11或0.13-7.7。在一个优选的实施方式中，3’-SL:LNT的摩尔比为约1。
上述第一HMO混合物中的任何一种都能够容易地通过一种方法获得，该方法包括用α-2,3转唾液酸酶处理3’-SL供体和组分A受体，然后从反应介质中除去乳糖和α2,3-转唾液酸酶。
在一个优选的实施方式中，制备第一混合物I的方法包括以下步骤：使3’-SL和3-FL以优选为1:3至3:1或1:2至2:1、比如约1:1的摩尔比与α2,3-转唾液酸酶接触，所述α2,3-转唾液酸酶对于3’-SL和3-FL的反应的转化率为至少20％至多约90％、优选为至少30％、比如至少30％至约80％、至少40％、至少50％、至少60％或至少70％。然后对通常含有FSL、乳糖、未反应的3’-SL和3-FL以及α2,3-转唾液酸酶的后一个反应后的反应介质进行常规的纯化步骤，以除去除了3’-SL、FSL和3-FL之外的物质，例如α2,3-转唾液酸酶和乳糖。如果在后的混合物通过原位酶促反应获得，则能够将α2,3-转唾液酸酶灭活并除去(例如通过变性然后离心或超滤)，以产生基本上由3’-SL、3-FL、FSL和乳糖组成的混合物。然后，能够例如通过级联超滤和/或纳滤将该混合物中的乳糖与3’-SL、3-FL和FSL分离，或者首先能够用乳糖酶处理乳糖以将其降解成葡萄糖和半乳糖，之后能够通过超滤和/或纳滤使它们与3’-SL、3-FL和FSL分离。在重组地制备后一种HMO混合物的情况下，即通过使用表达重组的α2,3-转唾液酸酶的转基因微生物(如细菌)的发酵方法，可以使用以下步骤进行HMO混合物的纯化：从发酵液除去细胞材料，然后除去非碳水化合物颗粒和污染物如盐、带电分子、蛋白质、DNA、着色/焦糖体等，以产生基本上由3’-SL、3-FL、FSL和乳糖组成的混合物。能够如上所述进行乳糖的分离。
在另一个优选的实施方式中，制备第一混合物II的方法包括以下步骤：使3’-SL和LNT的混合物与α-2,3转唾液酸酶接触，其中3’-SL与LNT的摩尔比在1:5至5:1的范围内，比如1:3至3:1、1:2至2:1、或1:1，所述α-2,3转唾液酸酶对于3’-SL和LNT的反应的转化率为至少30％至约80％、优选为至少40％、比如至少45％、至少50％、至少60％或更多。然后对通常含有LST-a、乳糖、未反应的3’-SL和LNT以及α2,3-转唾液酸酶的后一个反应后的反应介质进行常规的纯化步骤以除去除了3’-SL、LNT和LST-a的物质，例如α2,3-转唾液酸酶和乳糖。如果在后的混合物通过原位酶促反应获得，则能够将α2,3-转唾液酸酶灭活并除去(例如通过变性然后离心或超滤)，以产生基本上由3’-SL、LNT、LST-a和乳糖组成的混合物。能够使用本领域熟知的方法(例如通过级联超滤和/或纳滤)将该混合物中的乳糖与3’-SL、LNT和LST-a分离，或者首先能够用乳糖酶处理乳糖以将其降解成葡萄糖和半乳糖，之后能够通过超滤和/或纳滤使它们与3’-SL、LNT和LST-a分离。在重组地制备后一种HMO混合物的情况下，即通过使用表达重组的α2,3-转唾液酸酶的转基因微生物(如细菌)的发酵方法，可以使用以下步骤进行HMO混合物的纯化：从发酵液除去细胞材料，然后除去非碳水化合物颗粒和污染物如盐、带电分子、蛋白质、DNA、着色/焦糖体等，以产生基本上由3’-SL、LNT、LST-a和乳糖组成的混合物。可以如上所述进行乳糖的分离。
1.2.第二HMO混合物
本发明的第二HMO混合物能够通过进行如上所述的本发明的方法获得，该方法不包括从所获得的HMO混合物中除去乳糖的步骤。
在一个实施方式中，第二HMO混合物基本上由3’-SL、3-FL、FSL和乳糖(第二混合物I)组成。优选地，在该第二混合物I中：
-(3’-SL+3-FL)相对于FSL的摩尔比为1-18，并且
-乳糖相对于FSL的摩尔比为约1。
更优选地，3’-SL与FSL和3-FL与FSL的摩尔比中之一不大于3。
该第二HMO混合物I能够通过用摩尔比优选为1:3至3:1、更优选为1:2至2:1、甚至更优选为1:1的3’-SL和3-FL、并用α2,3-转唾液酸酶进行本发明的方法获得，所述α2,3-转唾液酸酶的转化率为至少20％至多约90％、优选为至少35％、更优选为至少50％。优选地，在第二HMO混合物中，3’-SL与3-FL的摩尔比为0.17-3。
在另一个实施方式中，本发明的第二混合物基本上由3’-SL、LNT、LST-a和乳糖(第二混合物II)组成。优选地，在该第二混合物II中：
-(3’-SL+LNT)相对于LST-a的摩尔比为0.8-9.5，并且
-乳糖相对于LST-a的摩尔比为约1。
更优选地，3’-SL与LST-a和LNT与LST-a的摩尔比中之一不大于2。
该第二HMO混合物II能够通过用摩尔比优选为1:5至5:1、更优选为1:3至3:1、甚至更优选为1:2至2:1、还甚至更优选为1:1的3’-SL和LNT、并用α2,3-转唾液酸酶进行本发明的方法获得，所述α2,3-转唾液酸酶的转化率为至少35％至多约80％、优选为至少40％、更优选为至少50％。优选地，在第二HMO混合物II中，3’-SL与LNT的摩尔比为0.09-11。
1.3.第一和第二HMO混合物的实施方式
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为20-50％进行本发明的方法时，能够制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-13并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.33-3的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为1:1并且转化率为20-50％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-8并且3’-SL与3-FL的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为30-50％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-12并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.2-5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为30-50％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-8并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.33-3的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为1:1并且转化率为30-50％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-5并且3’-SL与3-FL的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为30-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-12并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.17-6的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为30-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-8并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.29-3.5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为1:1并且转化率为30-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-4.67并且3’-SL与3-FL的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为25-35％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为3.7-14并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.25-4.1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为25-35％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为3.7-10并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.39-2.54的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为1:1并且转化率为25-35％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为3.7-6并且3’-SL与3-FL的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为3:1至2:1并且转化率为30-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为3-12并且3’-SL与3-FL的摩尔比为2.43-6的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为2:1至1:1并且转化率为20-50％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-13并且3’-SL与3-FL的摩尔比为1-3的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为1:1至1:2并且转化率为30-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-8并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.29-1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为1:2至1:3并且转化率为40-90％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为1.75-8并且3’-SL与3-FL的摩尔比为0.05-0.38的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与3-FL的摩尔比为2:1至1:3并且转化率为20-50％进行该方法时，可以制备(3’-SL+3-FL)与FSL的摩尔比为2-18并且3’-SL与3-FL的摩尔比为小于3.5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为35-70％进行本发明的方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.8-6.6并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.2-4.5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:1并且转化率为35-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.8-3.8并且3’-SL与LNT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为40-80％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.5-8并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.09-11的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为40-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.8-5.5并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.2-4.5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:1并且转化率为40-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.8-3并且3’-SL与LNT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为50-80％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.5-6并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.09-11的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为50-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.8-4并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.2-4.5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:1并且转化率为50-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.8-2并且3’-SL与LNT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为3:1至1:3并且转化率为40-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为1.3-8并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.17-6的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为2:1至1:2并且转化率为40-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为2-6.6并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.25-3.5的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:1并且转化率为40-60％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为1.3-3并且3’-SL与LNT的摩尔比为1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为5:1至3:1并且转化率为50-80％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为3-10并且3’-SL与LNT的摩尔比为5-21的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为3:1至2:1并且转化率为40-80％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为1.75-8并且3’-SL与LNT的摩尔比为2.5-11的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为2:1至1:1并且转化率为35-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.86-6.6并且3’-SL与LNT的摩尔比为1-4.3的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:1至1:2并且转化率为35-70％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为0.86-6.6并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.23-1的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:2至1:3并且转化率为40-80％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为1.75-8并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.09-0.4的第一或第二HMO混合物。
当以3’-SL与LNT的摩尔比为1:3至1:5并且转化率为50-80％进行该方法时，可以制备(3’-SL+LNT)与LST-a的摩尔比为3-10并且3’-SL与LNT的摩尔比为0.05-0.2的第一或第二HMO混合物。
1.4.本发明的HMO混合物的酶促制备
根据本发明，术语“α2,3-转唾液酸酶”是指任何野生型或改造的唾液酸酶，其能够将唾液酸残基转移至式2的受体中的葡萄糖的3-位，转移至式1、1a或1b的受体中的N-乙酰基-葡糖胺的3-位，优选末端N-乙酰基-乳糖胺基，或者转移至式1、1a或1b的受体中的N-乙酰基-葡糖胺的4-位，优选末端乳糖-N-二糖基，其中式1和式2的化合物如下：
Figure BDA0003846908700000101
其中R1为岩藻糖基或H，
R2选自N-乙酰基-乳糖胺基和乳糖-N-二糖基，其中N-乙酰基-乳糖胺基可携带包括一个或多个N-乙酰基-乳糖胺基和/或一个或多个乳糖-N-二糖基的糖残基；任意N-乙酰基-乳糖胺基和乳糖-N-二糖基可以被一个或多个唾液酸残基和/或岩藻糖残基取代，
R3为H或N-乙酰基-乳糖胺基，其任选被包括一个或多个N-乙酰基-乳糖胺基和/或一个或多个乳糖-N-二糖基的糖残基取代；任意N-乙酰基-乳糖胺基和乳糖-N-二糖基可以被一个或多个唾液酸残基和/或岩藻糖残基取代，且
每个R4独立地为唾液酸基或H，
其条件是R1或R4中的至少一个不为H；
并且式1a和1b的化合物如下：
Figure BDA0003846908700000111
其中R1如上所定义，
R2a为N-乙酰基-乳糖胺基，其任选被包括一个N-乙酰基-乳糖胺基和/或一个乳糖-N-二糖基的糖残基取代；任意N-乙酰基-乳糖胺基和乳糖-N-二糖基可以被一个或多个唾液酸残基和/或岩藻糖残基取代，但优选不含唾液酸残基和/或岩藻糖残基，
R3a为H或N-乙酰基-乳糖胺基，其任选被乳糖-N-二糖基取代；任意N-乙酰基-乳糖胺基和乳糖-N-二糖基可以被一个或多个唾液酸残基和/或岩藻糖残基取代，但优选不含唾液酸残基和/或岩藻糖残基，
R2b为乳糖-N-二糖基，其任选被唾液酸残基和/或岩藻糖残基取代，但优选不含唾液酸残基和/或岩藻糖残基，且
R3b为H或N-乙酰基-乳糖胺基，其任选被一个或两个N-乙酰基-乳糖胺基和/或一个乳糖-N-二糖基取代；任意N-乙酰基-乳糖胺基和乳糖-N-二糖基可以被一个或多个唾液酸残基和/或岩藻糖残基取代，但优选不含唾液酸残基和/或岩藻糖残基。
优选地，式1a和1b的化合物具有以下连接键和修饰中的一个或多个：
-式1a中R2a的糖残基中的N-乙酰基-乳糖胺基通过1-3糖苷间键连接到另一个N-乙酰基-乳糖胺基，
-式1a中R2a的糖残基中的乳糖-N-二糖基通过1-3糖苷间键连接到N-乙酰基-乳糖胺基，
-式1a中R3a的糖残基中的乳糖-N-二糖基通过1-3糖苷间键连接到N-乙酰基-乳糖胺基，
-式1b中R3b的糖残基中的N-乙酰基-乳糖胺基通过1-3或1-6糖苷间键连接到另一个N-乙酰基-乳糖胺基，以及
-式1b中R3b的糖残基中的乳糖-N-二糖基通过1-3糖苷间键连接到N-乙酰基-乳糖胺基。
用于本发明的方法中的α2,3-转唾液酸酶优选为来自克氏锥虫(Trypanosomacruzi)的α2,3-转唾液酸酶(TcTS)。然而，能够使用如WO 2012/156898中所述的来自其它微生物比如蓝氏锥虫(T.rangeli)、布氏冈比亚锥虫(T.brucei gambiense)、布氏罗得西亚锥虫(T.brucei rhodesiense)，布氏布氏锥虫(T.brucei brucei)、刚果锥虫(T.congolense)和白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)的α2,3-转唾液酸酶，以及来自鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、新城疫病毒(Newcastle disease virus)和霍乱弧菌(Vibrio cholera)的α2,3-转唾液酸酶。此外，还能够使用与来自克氏锥虫(T.cruzi)的α2,3-转唾液酸酶具有至少60％、优选至少70％、更优选至少80％、特别是至少90％同一性的其它α2,3-转唾液酸酶。
优选地，α2,3-转唾液酸酶的转唾液酸酶活性大于其水解活性。在
Figure BDA0003846908700000121
或
Figure BDA0003846908700000122
反应过程中，FSL或LST-a的水解在某一时间点能够变得显著，原因是FSL或LST-a的浓度增加，然后它们分别降解成3-FL或LNT，以及唾液酸。为了制备本发明的HMO混合物，应该在产生显著的产物水解之前停止反应。这个时间点能够通过公知的酶动力学测量来容易地确定。
用于制备本发明的HMO混合物的α2,3-转唾液酸酶优选自缺乏水解活性、或至少具有显著降低的水解活性的α2,3转唾液酸酶。这样的酶能够通过在一个或多个氨基酸位置改变主要是野生型α2,3-转唾液酸酶的氨基酸序列来制备，使得突变的氨基酸序列产生改善的转唾液酸酶活性和/或降低的水解活性。
在实施本发明的过程中，3’-SL供体、3-FL或LNT受体、α2,3-转唾液酸酶、水性溶剂和培养缓冲液(例如50mM Na3PO4或100mM KHPO4)的特定相对浓度并不是关键的。在这方面，该方法能够适当地在室温(例如15-50℃、优选地20-37℃)进行，pH为6-8、优选6.5-7，持续15分钟至24小时。
在一个优选的实施方式中，本发明的HMO混合物中的任何一种通过如上所述的经转基因以表达α2,3-转唾液酸酶的微生物制备。用于生物活性分子的重组制备和酶分子的分子操作的微生物的遗传修饰的方法是本领域公知的，参见例如Green MR和Sambrook J：Molecular Cloning:A Laboratory Manual，第四版，2012，CSHL出版社。
2.本发明的HMO混合物的用途
令人惊奇的是，包含3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、和组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)的HMO混合物(如本文所述的任何一种)是抗感染组合物，因此它们能够有利地用于治疗病毒和/或细菌感染。优选地，抗感染组合物包含基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、和组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)组成的HMO的混合物。还优选地，抗感染组合物包含基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)、和乳糖组成的HMO。
因此，在一个实施方式中，本发明的抗感染组合物能够是药物组合物。药物组合物还可包含药学上可接受的载体，例如磷酸缓冲盐溶液、乙醇在水中的混合物、水和乳液如油/水或水/油乳液，以及各种润湿剂或赋形剂。本发明的药物组合物还可包含其他材料，当将其施用于患者时不产生不良反应、过敏反应或其他不希望的反应。载体和其它材料能够包括溶剂、分散剂、涂层、吸收促进剂、控释剂、和一种或多种惰性赋形剂，比如淀粉、多元醇、成粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。如果需要，抗感染组合物的片剂剂量能够通过标准的水性或非水性技术进行包衣。
在另一个实施方式中，本发明的抗感染组合物能够是营养组合物。例如，本发明的营养组合物可配制为补液溶液、或老年人或免疫受损个体的膳食维持或补充剂。常量营养素如可食用脂肪、碳水化合物和蛋白质也能够包括在这种营养组合物中。可食用脂肪包括例如椰子油、大豆油和单甘油酯和甘油二酯。碳水化合物包括例如葡萄糖、可食用乳糖和水解玉米淀粉。蛋白质包括例如大豆蛋白、乳清和脱脂乳。维生素和矿物质(例如钙、磷、钾、钠、氯、镁、锰、铁、铜、锌、硒、碘和维生素A、E、D、C和B复合物)也能够包括在这种营养组合物中。
本发明的抗感染组合物可以口服给药，例如，作为包含预定量的第一和第二混合物的片剂、胶囊或小丸剂，或作为包含预定浓度的第一和第二混合物的粉末剂或颗粒剂，或包含预定浓度的第一和第二混合物的在水性或非水性液体中的凝胶、糊剂、溶液、混悬液、乳剂、糖浆、大丸剂、药糖剂或膏剂。口服给药的组合物可以包括粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、调味剂和保湿剂。口服给药的组合物如片剂可以任选地进行包衣，并且可以配制成对其中的第一和第二混合物提供持续、延迟或控制释放。
本发明的抗感染组合物、有利地是药物组合物，还能够通过直肠栓剂、气溶胶管、鼻胃管或直接输注到胃肠道或胃中施用。
本发明的抗感染药物组合物能够另外包括其他治疗剂如抗病毒剂、抗生素、益生菌、止痛剂和抗炎剂。
对于患者，这些抗感染组合物的合适剂量可以基于如患者的免疫状态、体重和年龄等因素以常规方式来确定。在一些情况下，剂量的浓度将与人母乳中发现的3’-SL、3-FL和/或FSL、或者3’-SL、LNT和/或LST-a的浓度相似。所需量通常在每天约200mg至约20g的范围内，在某些实施方式中为每天约300mg至约15g、每天约400mg至约10g，在某些实施方式中为每天约500mg至约10g，在某些实施方式中为每天约1g至约10g。合适的剂量方案可以通过本领域技术人员已知的方法来确定。
另一方面，本发明提供一种调节人(特别是非婴儿)微生物组以增加双歧杆菌丰度和Barnesiella丰度的方法，该方法包括向人施用包含3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、和组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)的混合物，优选为基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、和组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)组成的混合物，或基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、组分B(其当组分A为3-FL时为FSL、或当组分A为LNT时为LST-a)、和乳糖组成的混合物。
“非婴儿人”、“非婴儿个体”或“非婴儿”优选地是指3岁及以上的人。非婴儿人能够是儿童、青少年、成人或老人。
在另一方面，本发明提供一种预防或治疗人(特别是非婴儿)的病毒和/或细菌感染、特别是抗生素耐药性细菌感染的方法，该方法包括向人施用包含3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、和组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)的混合物，优选为基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、和组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)组成的混合物，或基本上由3’-SL、组分A(其为3-FL或LNT)、组分B(当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a)、和乳糖组成的混合物。
虽然已经参照优选实施方式描述了本发明，但是应当理解，在本发明的范围内可以进行各种修改。
在本说明书中，除非有明确的相反说明，当符合所述条件的两者中任一个或两个时，从操作者的意义上使用“或者/或(or)”一词以还原真实意义，而不是操作者的仅需要符合条件中的一个的“异或(exclusive or)”。“包括(comprising)”一词用于“包含(including)”的意义，而不是意指“由…组成”。以上承认的所有在先的教导并入本文以供参考。不应将本文承认的任何在先公开的文件视为认可或表示其教导在澳大利亚或其他地方在其公开日期为公知常识。
实施例
在下面的实施例中，使用来自克氏锥虫(T.cruzi)的α2,3-转唾液酸酶(TcTS)制备本发明的混合物。
实施例1
Figure BDA0003846908700000151
在Gibco PBS 1-X缓冲液(pH＝7.5，25℃，200μl)中进行测试，酶提取物＝0.05mg/ml。HPLC条件：使用70％乙腈和30％甲酸铵(8mM)，使用TSK Gel amide 80(Tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速为1.1ml/min。通过CAD和/或UV检测在195nm处检测底物和产物的洗脱。
下表示出所获得的混合物的组成。乳糖与FSL等摩尔。
3′-SL/3-FL比例：3/4
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
1.5 12％ 38％ 52％ 5％
2.5 18％ 35％ 49％ 8％
5 25％ 32％ 46％ 11％
21 36％ 27％ 42％ 15％
3′-SL/3-FL比例：1/2
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
21 23％ 26％ 59％ 8％
实施例2
Figure BDA0003846908700000161
在Gibco PBS 1-X缓冲液(pH＝7.5，25℃，200μl)中进行测试，酶提取物＝1mg/ml。HPLC条件：使用70％乙腈和30％甲酸铵(8mM)，使用TSK Gel amide 80(Tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速为1.1ml/min。通过CAD和/或UV检测在195nm处检测底物和产物的洗脱。
下表示出所获得的混合物的组成。乳糖与FSL等摩尔。
3′-SL/3-FL比例：1/1
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
0.25 9％ 46％ 45％ 5％
0.50 13％ 44％ 44％ 6％
0.75 16％ 48％ 39％ 7％
1.00 17％ 42％ 41％ 9％
1.67 23％ 39％ 39％ 12％
2.67 28％ 36％ 38％ 15％
4.5 34％ 32％ 35％ 18％
6 39％ 31％ 33％ 21％
9 40％ 28％ 31％ 21％
3′-SL/3-FL比例：2/1
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
0.25 10％ 60％ 31％ 4％
0.50 16％ 59％ 29％ 5％
0.75 21％ 57％ 28％ 7％
1.00 22％ 57％ 28％ 8％
1.67 28％ 53％ 26％ 10％
2.67 35％ 50％ 24％ 13％
4.5 41％ 48％ 22％ 15％
6 47％ 46％ 21％ 18％
9 51％ 39％ 20％ 21％
3′-SL/3-FL比例：3/1
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
0.25 11％ 68％ 24％ 3％
0.50 18％ 67％ 22％ 5％
0.75 22％ 65％ 22％ 6％
1.00 24％ 67％ 21％ 7％
1.67 32％ 61％ 20％ 9％
2.67 39％ 59％ 18％ 12％
4.5 45％ 56％ 16％ 13％
6 51％ 54％ 15％ 16％
9 53％ 47％ 16％ 17％
3′-SL/3-FL比例：1/2
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
0.25 17％ 30％ 59％ 6％
0.50 24％ 27％ 57％ 9％
0.75 27％ 26％ 56％ 9％
1.00 32％ 25％ 55％ 11％
1.67 41％ 21％ 52％ 14％
2.67 48％ 18％ 49％ 17％
4.5 59％ 14％ 49％ 19％
6 64％ 13％ 46％ 23％
9 73％ 9％ 40％ 24％
3′-SL/3-FL比例：1/3
时间(h) FSL转化率 3’-SL(mol％) 3-FL(mol％) FSL(mol％)
0.25 25％ 20％ 67％ 7％
0.50 33％ 18％ 67％ 9％
0.75 41％ 16％ 63％ 11％
1.00 45％ 15％ 63％ 12％
1.67 58％ 11％ 61％ 15％
2.67 68％ 8％ 58％ 17％
4.5 78％ 6％ 55％ 20％
6 80％ 6％ 54％ 22％
9 84％ 4％ 54％ 20％
实施例3
Figure BDA0003846908700000181
在Gibco PBS 1-X缓冲液(pH＝7.5，25℃，200μl)中进行测试，酶提取物＝0.05mg/ml。HPLC条件：使用70％乙腈和30％甲酸铵，使用TSK Gel amide 80(Tosoh，3μm，150×4.6mm)，流速为1.1ml/min。通过CAD和/或UV检测在195nm处检测底物和产物的洗脱。
下表示出所获得的混合物的组成。乳糖与LST-a等摩尔。
3′-SL/LNT比例：1/1
时间(h) LST-a转化率 3’-SL(mol％) LNT(mol％) LST-a(mol％)
0 0 51％ 49％ 0％
0.25 13％ 44％ 44％ 6％
0.5 16％ 41％ 41％ 8％
2 38％ 30％ 31％ 19％
3 43％ 29％ 28％ 21％
4 46％ 28％ 25％ 22％
5 47％ 27％ 26％ 23％
6 49％ 26％ 23％ 22％
3′-SL/LNT比例：2/1
时间(h) LST-a转化率 3’-SL(mol％) LNT(mol％) LST-a(mol％)
0 0 68％ 32％ 0％
0.25 21％ 59％ 26％ 7％
0.5 27％ 58％ 24％ 9％
2 53％ 51％ 15％ 16％
3 58％ 48％ 13％ 19％
4 65％ 47％ 11％ 20％
5 67％ 46％ 11％ 22％
6 66％ 48％ 9％ 17％
7 64％ 47％ 10％ 18％
3′-SL/LNT比例：3/1
时间(h) LST-a转化率 3’-SL(mol％) LNT(mol％) LST-a(mol％)
0 0 73％ 27％ 0％
0，25 23％ 66％ 20％ 6％
0，5 34％ 63％ 17％ 9％
2 60％ 58％ 10％ 15％
3 66％ 56％ 9％ 17％
4 70％ 56％ 7％ 16％
5 66％ 54％ 8％ 15％
6 77％ 56％ 5％ 17％
24 73％ 53％ 7％ 19％
3′-SL/LNT比例：1/2
时间(h) LST-a转化率 3’-SL(mol％) LNT(mol％) LST-a(mol％)
0 0％ 31％ 69％ 0％
0.25 23％ 24％ 61％ 7％
0.5 33％ 20％ 59％ 10％
2 62％ 11％ 49％ 19％
3 67％ 10％ 48％ 21％
4 68％ 10％ 47％ 22％
5 66％ 10％ 47％ 20％
6 63％ 10％ 46％ 16％
7 64％ 11％ 44％ 19％
3′-SL/LNT比例：1/3
时间(h) LST-a转化率 3’-SL(mol％) LNT(mol％) LST-a(mol％)
0 0％ 41％ 59％ 0％
0.25 24％ 22％ 61％ 7％
0.5 40％ 18％ 56％ 12％
2 72％ 9％ 45％ 22％
3 73％ 7％ 53％ 19％
4 71％ 7％ 56％ 17％
5 71％ 5％ 63％ 13％
6 73％ 7％ 46％ 19％
7 70％ 9％ 46％ 20％
实施例4
在该研究中招募总共30名男性和女性患者参加。经筛查访问和测试(run-in)期1-2周后，选择患者并随机分为3组，每组10名患者。分别对2组施用包含5克的以下组合：3-FL、3’-SL和FSL、以及3’-SL、LNT和LST-a，且对1组施用安慰剂产品(2克葡萄糖)，均施用8周。产品和安慰剂在单位剂量容器中呈粉末形式。
如果患者年满18周岁，则有资格参加。所有招募的患者都能够并愿意了解并遵守研究程序。如果有以下情况，则将患者排除：患者在筛查访问前一个月内已经参加了临床研究；患者在筛查测试中具有临床上与参加研究有关的异常结果；患者正患有严重的疾病，如恶性肿瘤、糖尿病、严重冠心病、肾脏疾病、神经系统疾病或严重的精神疾病或任何可能混淆研究结果的病症；在研究前使用高剂量的益生菌补充剂(允许使用酸奶)3个月；在研究前服用抗生素药物3个月；在研究前2周内定期服用任何可能干扰症状评估的药物；和怀孕或泌乳。
在筛查访问时，登记病史和伴随药物，并收集血液样本用于安全性分析。分发粪便样本试剂盒。要求患者将样本保存在冰箱中，直到下一次访问。
在第二次访问时，检查资格标准，并且将合格的受试者随机分配到试验中的三组(arms)。收集粪便样本并分发用于新样本的装置。使患者熟悉网络互动功能系统(interactive internet enabled system)，每天记录数据，并提供给治疗或对照产品。提醒受试者在研究过程中不要改变他们惯常的饮食。收集血液样本用于生物标志物研究。将粪便样本储存在-80℃直到分析。将粪便样本进行16S RNA测序分析。
该研究进行8周，患者每天服用安慰剂或治疗产品。患者被指示在早晨与早餐一起服用产品。通过网络互动功能系统监控顺应性(compliance)。患者还使用系统记录：
-Bristol粪便形态分类(Bristol Stool Form Scale)(BSF)信息，
-症状信息如腹痛、腹部不适、腹部绞痛、腹胀和腹部饱胀感，
-额外的胃肠症状评定量表(Gastrointestinal Symptom Rating Scale)(GSRS)信息。
该调查问卷包括覆盖五个方面(腹痛、消化不良、反流、腹泻、便秘)的15项，并使用七级李克特量表(seven-graded Likert scale)。
在研究结束时，每个病人都有医疗团队的退出访问。如前所述收集和分析粪便样本和血液样本。
粪便分析表明，治疗患者的双歧杆菌和Barnesiella的丰度增加。
实施例5
各自单独地安置30只7周龄的C57BL/6J雌性小鼠以避免小鼠之间的污染并提供给经辐照的食物和水。将小鼠分为3组，每组10只小鼠，2组治疗组和1组安慰剂组。
在饮用水中用氨苄青霉素(0.5g/l)处理小鼠，每3天更换一次。1周后，停止将氨苄青霉素加入到饮用水中。此后，分别将3-FL、3’-SL和FSL、以及3’-SL、LNT和LST-a以40mg/ml的总浓度加入到治疗组的饮用水中。对照组给予白开水。每天给予新鲜的水，并且所有小鼠都可以自由接近饮用水。以啮齿动物食物喂养小鼠，并每天给予新鲜的食物。
在氨苄青霉素处理结束两天后，各组小鼠用万古霉素耐药性屎肠球菌(Enterococcus faecium)菌株(VRE)通过口服强饲法进行感染。通过在具有万古霉素的肠球菌(Enterococcosel)琼脂平板上铺种连续稀释的粪便丸粒，而在不同的时间点测定VRE水平。通过外观识别VRE菌落，并通过革兰氏染色确认。赋予万古霉素耐药性的vanA基因的PCR用于确认感染小鼠中VRE的存在。
监测小鼠2周，然后将其安乐死。在将小鼠安乐死之前获得新鲜的粪便丸粒。将样本立即冷冻并储存在-80℃。使用96孔PowerSoil DNA分离试剂盒(MO-BIO)提取DNA。在PCR期间每个板最少一个样本-孔保持为空，以用作阴性对照。使用附带的Illumina适配器用正向引物S-D-Bact-0341-b-S-17和反向引物S-D-Bact-0785-a-A-21(Klindworth等人，Nucleic Acids Res.41,e1(2013))进行PCR。这些是以V3-V4区域为靶向的通用的细菌16SrDNA引物。使用以下PCR程序：98℃进行30秒，25×(98℃进行10秒，55℃进行20秒，72℃进行20秒)，72℃进行5分钟。通过将产物在1％琼脂糖凝胶上跑胶来验证扩增。在使用NexteraIndex Kit V2(Illumina)的嵌套PCR中加入条形码，使用以下PCR程序：98℃进行30秒，8×(98℃进行10秒，55℃进行20秒，72℃进行20秒)，72℃进行5分钟。通过将产物在1％琼脂糖凝胶上跑胶来验证引物的附着。
使用SequalPrep Normalization Plate Kit对来自嵌套PCR的产物进行归一化和合并。通过蒸发浓缩合并的基因库，并使用Qubit High Sensitivity Assay Kit(ThermoFisher Scientific)在Qubit荧光计上测量合并的基因库的DNA浓度。使用用于2×300bp配对末端测序的MiSeq Reagent Kit V3(Illumina)在MiSeq桌面测序仪上进行测序。使用64位版本的USEARCH(Edgar，2013)用于序列数据的生物信息学分析。
在HMO处理的小鼠中，VRE定植在14天内降至不可检测的水平。VRE的密度在5天内降低。未治疗的小鼠在结肠中继续存在大量的VRE。小鼠的治疗组也显示出紫单胞菌科(Porphyromonadaceae)、特别是Barnesiella的增加的丰度。

Claims (26)

1.一种人乳寡糖(HMO)的混合物，其基本上由以下组分组成：
-3’-O-唾液乳糖(3’-SL)，
-组分A，其为3-O-岩藻糖基乳糖(3-FL)或乳糖-N-四糖(LNT)，以及
-组分B，当组分A为3-FL时其为3-O-岩藻糖基-3’-O-唾液乳糖(FSL)、或当组分A为LNT时其为唾液乳糖-N-四糖a(LST-a)。
2.根据权利要求1所述的混合物，其基本上由3’-SL、3-FL和FSL组成。
3.根据权利要求2所述的混合物，其中FSL相对于(3’-SL+3-FL)的摩尔比为至少1:20、优选为至少1:12、更优选为至少1:5、甚至更优选为至少1:3。
4.根据权利要求2或3所述的混合物，其中3’-SL相对于3-FL的摩尔比为0.05-5.3、优选为0.17-3、更优选为大约1。
5.根据权利要求1所述的混合物，其基本上由3’-SL、LNT和LST-a组成。
6.根据权利要求5所述的混合物，其中LST-a相对于(3’-SL+LNT)的摩尔比为至少1:10、优选为至少1:7、更优选为至少1:5、甚至更优选为至少1:3。
7.根据权利要求5或6所述的混合物，其中3’-SL相对于LNT的摩尔比为0.05-11、优选为0.13-7.7、更优选为大约1。
8.一种HMO的混合物，其基本上由以下组分组成：
-3’-SL，
-组分A，其为3-FL或LNT，
-组分B，当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a，以及
-乳糖。
9.根据权利要求8所述的混合物，其基本上由3’-SL、3-FL、FSL和乳糖组成。
10.根据权利要求9所述的混合物，其中：
-(3’-SL+3-FL)相对于FSL的摩尔比为1-18，并且
-乳糖相对于FSL的摩尔比为大约1。
11.根据权利要求9或10所述的混合物，其中3’-SL与FSL和3-FL与FSL的摩尔比中之一不大于3。
12.根据权利要求9至11所述的混合物，其中3’-SL与3-FL的摩尔比为0.05-5.3。
13.根据权利要求8所述的混合物，其基本上由3’-SL、LNT、LST-a和乳糖组成。
14.根据权利要求13所述的混合物，其中：
-(3’-SL+LNT)相对于LST-a的摩尔比为0.8-9.50，并且
-乳糖相对于LST-a的摩尔比为大约1。
15.根据权利要求13或14所述的混合物，其中3’-SL与LST-a和LNT与LST-a的摩尔比中之一不大于2。
16.根据权利要求13至15所述的混合物，其中3’-SL与LNT的摩尔比为0.09-11。
17.一种用于获得根据权利要求1至7中任一项所述的混合物的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和组分A反应以产生反应介质，然后从所述反应介质中除去乳糖和所述α2,3-转唾液酸酶。
18.一种用于获得根据权利要求8至16中任一项所述的混合物的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和组分A反应以产生反应介质，然后从所述反应介质中除去所述α2,3-转唾液酸酶。
19.根据权利要求18所述的用于获得根据权利要求9至12中任一项所述的混合物的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和3-FL以1:3至3:1、优选为1:2至2:1、更优选为1:1的摩尔比反应，所述α2,3-转唾液酸酶对于3’-SL和3-FL的反应的转化率为至少20％、优选为至少30％、更优选为至少40％，至多大约90％。
20.根据权利要求19所述的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和3-FL以1:3至2:1的摩尔比反应，所述α2,3-转唾液酸酶对于3’-SL和3-FL的反应的转化率为至少20％、优选为至少30％、更优选为至少40％，至多大约50％。
21.根据权利要求19所述的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和3-FL以1:2至1:3的摩尔比反应，所述α2,3-转唾液酸酶对于3’-SL和3-FL的反应的转化率为40-90％。
22.根据权利要求18所述的用于获得根据权利要求13至16中任一项所述的混合物的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和LNT以1:5至5:1、优选为1:3至3:1、更优选为1:2至2:1、甚至更优选为1:1的摩尔比反应，所述α2,3-转唾液酸酶对于3’-SL和LNT的反应的转化率为至少35％、优选为至少40％、更优选为至少50％，至多大约80％。
23.根据权利要求22所述的方法，其包括以下步骤：在α2,3-转唾液酸酶的存在下，使3’-SL和LNT以1:3至3:1、优选为1:2至2:1、更优选为1:1的摩尔比反应，所述α2,3-转唾液酸酶对于3’-SL和LNT的反应的转化率为至少35％、优选为至少40％、更优选为至少50％，至多大约80％。
24.一种用于治疗细菌感染的抗感染组合物，其包含3’-SL；组分A，其为3-FL或LNT；和组分B，当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a，所述抗感染组合物优选为根据权利要求1或权利要求8所述的混合物。
25.一种调节人微生物群以增加Bifidobacterium丰度和Barnesiella丰度的方法，所述方法包括向人施用一种混合物，所述混合物包含3’-SL；组分A，其为3-FL或LNT；和组分B，当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a，所述混合物优选为根据权利要求1或权利要求8所述的混合物。
26.一种预防或治疗人的病毒和/或细菌感染、特别是抗生素耐药性细菌感染的方法，所述方法包括向人施用一种混合物，所述混合物包含3’-SL；组分A，其为3-FL或LNT；和组分B，当组分A为3-FL时其为FSL、或当组分A为LNT时其为LST-a，所述混合物优选为根据权利要求1或权利要求8所述的混合物。
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