CN115260545A - 一种小粒径琼脂糖凝胶、其制备方法及应用 - Google Patents

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CN115260545A CN202210954976.7A CN202210954976A CN115260545A CN 115260545 A CN115260545 A CN 115260545A CN 202210954976 A CN202210954976 A CN 202210954976A CN 115260545 A CN115260545 A CN 115260545A
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Abstract

本发明公开一种小粒径琼脂糖凝胶、其制备方法及应用，属于医学美容和生物医疗技术领域。本发明的琼脂糖凝胶由如下方法制备而成：将非交联琼脂糖微球、交联剂和分散剂混合，加入碱性溶液，在55～65℃下进行非静态交联，交联时间为7～15h，待交联完成后，清洗，获得琼脂糖凝胶。本发明制备的琼脂糖凝胶，其粒径小、低残留，质地柔软，粘弹性好，具有较好的生物相容性，因此可将其制备成美容注射剂，用于面部填充塑性，以增加美容效果，应用前景广阔。

Description

一种小粒径琼脂糖凝胶、其制备方法及应用
技术领域
本发明属于医学美容和生物医疗技术领域，具体涉及一种小粒径琼脂糖凝胶、其制备方法及应用。
背景技术
面部填充剂近年来广泛应用于颌面部美容，用于除皱、修饰面部轮廓等方面。微整形提供的美容效果大多是非永久性的，治疗方案一般是持续的而非一次性的。一支常规规格的透明质酸的价格在800-10000元不等，而透明质酸和肉毒素等物质由于会被人体代谢，需要持续注射来维持填充效果，一般每6至12个月需要重新注射，所需花费较高。因常用透明质酸钠凝胶降解过快，并且患者对美容产品的功效也提出了更多的需求，大多研究者已经在尝试用其它可填充物质来达到更长久的填充效果。
高分子面部填充剂分为可吸收和不可吸收两类。可吸收填充剂包括胶原蛋白、透明质酸和左旋聚乳酸等；不可吸收填充剂包括聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、硅胶和琼脂糖等。不可吸收填充剂的最大优势体现在可以永久塑性，一劳永逸，无需再次补针。
琼脂糖是一种从红藻等藻类中提取的纯天然的多糖材料，具有良好的生物相溶性以及可生物降解性，从原料来源方面考虑，与其它不可吸收的填充物质相比，琼脂糖的生物安全性更高。这种天然碳水化合物聚合物与细胞外基质的相似性使得人们对其在真皮填料领域的用途产生了浓厚的兴趣。琼脂糖是一种生物相容性多糖，可立即产生持久的临床效果。琼脂糖与透明质酸钠的不同之处在于，它在体内是稳定的，并且在组织植入后，可维持更为持久的效果。
专利CN109897202A公开了一种琼脂糖微球的制备方法，但该方法制备的琼脂糖微球，其粒径较大(400～1000μm)且粒径分部范围较广，有机试剂与交联剂用量都较大，增加去除难度且可能导致交联度较大，如用该方法制备的琼脂糖微球或凝胶进行填充，患者可能会出现红肿等炎症，增加感染风险。
专利CN105713212A提供了一种边成球边交联制备琼脂糖凝胶微球的方法。但在该方法中，交联剂环氧氯丙烷的加入量是琼脂糖固体质量的3倍，而大量的交联剂会使琼脂糖凝胶微球有较大的交联度，且交联剂难以去除干净。如用该法制备注射用的琼脂糖凝胶，会增加患者炎症发生的概率。
专利CN104774337A提供了一种注射用含琼脂糖微球交联透明质酸钠凝胶的制备方法，在该方法中，交联剂用量也较大，导致凝胶交联度较高，且可能会有较多交联剂残留，从而会增加炎症反应发生的概率。而且，根据该专利所述，该凝胶用于整形美容手术中对于浅层皮肤的填充。
发明内容
本发明提供了一种琼脂糖凝胶的制备方法，该方法采用非交联琼脂糖微球与交联剂进行交联，所制备的琼脂糖凝胶粒径较小，且交联剂用量小、残留低。具体地，本发明的技术方案如下所示：
一种琼脂糖凝胶的制备方法，步骤如下：
将非交联琼脂糖微球、交联剂和分散剂混合，加入碱性溶液，在55～65℃下进行非静态交联，交联时间为7～15h，待交联完成后，清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述技术方案中，交联剂选自环氧氯丙烷或BDDE，或两者的混合物。
上述技术方案中，分散剂选自DMSO或无水乙醇，或两者的混合物。
上述技术方案中，碱性溶液选自氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液，或两者的混合溶液；碱性溶液浓度选自0.5～2.0M，优选为0.8～1.5M。
上述技术方案中，非静态交联选自在回旋震荡或往复震荡条件下进行交联。
上述技术方案中，采用盐溶液对交联物进行清洗；盐溶液选自磷酸氢二钠溶液、磷酸二氢钠溶液或氯化钠溶液，或任意两者或三者的混合溶液；盐溶液的pH选自6.8～7.6，渗透压选自280～350mOsmol/L。
上述技术方案中，清洗还可包括离心或抽滤的步骤。
上述技术方案中，所制备的琼脂糖凝胶，其质量浓度选自2～6％。
上述技术方案中，非交联琼脂糖微球、交联剂和分散剂的质量比选自100:0.6～1.2:10～20。
上述技术方案中，非交联琼脂糖微球与碱性溶液的质量体积比选自1:0.5～1:1.5，g/mL；优选为1:1。
上述技术方案中，非交联琼脂糖微球由如下方法制备而成：
将琼脂糖置于水中，95～130℃加热溶解，形成琼脂糖水溶液，作为水相；将乳化剂置于液体石蜡中，65～75℃加热，搅拌均匀，作为油相；将油相和水相混合，65～75℃均质30s～20min，将均质物降温至10℃以下，置于0～4℃低温环境中固化1～2h，经过清洗后，获得非交联琼脂糖微球。
上述技术方案中，琼脂糖水溶液的质量分数为2～8％。
上述技术方案中，乳化剂选自司盘80、司盘85或吐温80，或任意两者的混合物。
上述技术方案中，乳化剂和液体石蜡的体积比为1:20～1:25。
上述技术方案中，油相和水相的体积比为1:1～2:1。
上述技术方案中，均质温度选自65～75℃；均质时间选自7～15min。
上述技术方案中，降温手段可选用水浴降温或冰水浴降温。
上述技术方案中，清洗选自用乙醇、二甲亚砜水溶液、乙酸乙酯水溶液或盐溶液对固化物进行清洗。其中，盐溶液选自氯化钠溶液、磷酸二氢钠溶液或磷酸氢二钠溶液，或者任意两者或三者的混合溶液；所述盐溶液的渗透压选自280～350mOsmol/L。
为方便对固化物进行清洗，在清洗前，可对固化物进行一次离心，即不加入任何物质，直接进行离心，并倾倒出大部分油相和乳化剂，保留滤饼。之后，再采用离心或抽滤的方法对滤饼进行清洗，直到洗净油相、乳化剂和乙醇等物质，并且确保琼脂糖微球的质量分数保持在合理范围内。
上述方法制备的琼脂糖凝胶，其粒径小、低残留，质地柔软，粘弹性好，具有较好的生物相容性，因此可将其制备成美容注射剂，用于面部填充塑性，以增加美容效果。
本发明的有益效果为：
未经改性的琼脂糖溶液在室温状态下会保持半固体的凝胶状，硬度较大，粘性较差，医用或美容注射时操控难度较大，且注射部位凹凸感较强。
本发明通过均质以及调节油水比等方式，使制备的琼脂糖微球粒径较小，粒径范围在0～200μm，其中，D90≤55μm；且在制备过程中不含有交联步骤；同时，在制备琼脂糖凝胶过程中，琼脂糖微球的粒径并未发生变化，依旧维持较小的优良状态，且在制备过程中，交联剂使用较少，不易残留，这充分提高了琼脂糖凝胶的生物相容性和有效性，使琼脂糖凝胶质地柔软，具有较好的粘弹性，推挤时可连续挤出，便于操作，从而使其在填充后的效果显得更加自然，塑性效果长久有效。
同时，本发明制备的琼脂糖凝胶，与同类产品相比不仅适合鼻唇沟、法令纹、颈纹、手纹等部位的填充塑性，同时因粒径D90≤55μm，更适合进行细微皱纹处的填充，美容效果广泛而有效。
附图说明
图1为实施例1所述非交联琼脂糖微球的显微镜图；
图2为实施例1所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图；
图3为实施例2所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图；
图4为实施例3所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图；
图5为实施例4所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图；
图6为对比例4所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图；
图7为对比例5所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图；
图8为对比例6所述琼脂糖凝胶中非交联琼脂糖微球的激光粒度仪粒径检测结果图。
具体实施方式
在本发明中，D90指的是一个样品的累计粒度分布百分数达到90％时所对应的粒径，其物理意义是粒径小于此数值的颗粒占90％。D10、D50等指标，以此类推。
本发明中所使用的其它术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质10min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。本实施例制备的非交联琼脂糖微球，其显微镜观察结果如图1所示。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.1g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表1所示：
表1
Figure BDA0003790902420000041
实施例2
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质7min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的二甲亚砜水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.1g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表2所示：
表2
Figure BDA0003790902420000051
实施例3
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质15min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.1g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表3所示：
表3
Figure BDA0003790902420000061
实施例4
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质7min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.06g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联7h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表4所示：
表4
Figure BDA0003790902420000062
对比例1
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质10min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖-透明质酸钠凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。向琼脂糖凝胶中加入1g透明质酸钠并进行充分的搅拌溶解，获得琼脂糖-透明质酸钠凝胶。在本实施案例中，透明质酸钠可增加成品的润滑度。
上述琼脂糖-透明质酸钠凝胶进行推挤力检测时，安装30G针头和27G针头均出现爆针现象，无法正常测试。从注射器中挖出部分凝胶，发现凝胶呈块状，质地较硬，不适合进行注射和美容填充。
对比例2
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质10min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.02g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶存在结块，说明交联不充分，凝胶的热稳定性较差。
对比例3
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质10min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.05g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶出现分层现象，说明交联不充分，凝胶的热稳定性较差。
对比例4
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质7min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.2g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表5所示：
表5
Figure BDA0003790902420000081
对比例5
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将18.7g司盘85置于400mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用均质机均质10min，将均质物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用一定浓度的乙酸乙酯水溶液、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.2g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表6所示：
表6
Figure BDA0003790902420000091
对比例6
制备非交联琼脂糖微球：
将9.6g琼脂糖置于160mL水中，采用灭菌锅(121℃、30min)进行加热溶解，溶解后取出放置在65℃水浴中保温，作为水相。将14g司盘85置于300mL液体石蜡中，65℃下搅拌混合30min，作为油相。将油相和水相混合，利用聚四氟乙烯搅拌桨搅拌2h，将反应物置于冰水浴中降温至10℃以下，转移至4℃冰箱中固化1h。固化完成后，依次用乙酸乙酯、纯化水清洗固化物，获得非交联琼脂糖微球。
制备琼脂糖凝胶：
将10g非交联琼脂糖微球、0.2g环氧氯丙烷和2g二甲亚砜混合，加入10mL氢氧化钠溶液(1M)，在60℃下震荡交联10h，待交联完成后，用PBS溶液(pH＝7.2)进行清洗，获得琼脂糖凝胶。
上述琼脂糖凝胶理化性能，如表7所示：
表7
Figure BDA0003790902420000092
Figure BDA0003790902420000101
(一)细胞毒性试验
选取实施例1-4和对比例4-5制备的琼脂糖凝胶进行细胞毒试验，试验方法如下：
分别称取1.0g样品置于30mL细胞培养液中，37℃条件下，60rpm震荡浸提24h制备浸提液，将浸提液离心取上清作为待测液。使用小鼠成纤维细胞L929，购自中国科学院典型培养物保藏委员会昆明细胞库，试验采用传代48-72h生长旺盛的细胞，制备细胞悬液，培养箱中孵育24h形成近汇合单层细胞，确保各板孔细胞增长相对相等，吸出原培养液，每列各6孔分别加入100μL待测液，置于细胞培养箱中培养24h，在显微镜下观察每个孔板细胞形态。去除培养基后加入50μL MTT培养基，在细胞培养箱中继续培养2h后加入异丙醇，用酶标仪测定吸光度，按照公式：存活率(％)＝(100×OD样品)/OD介质，计算存活率。
设置阴性对照、阳性对照和介质对照。阳性对照组为10％DMSO溶液，现配现用；阴性对照组为聚乙烯，按照每6cm2阴性对照加1mL细胞培养液的比例，在60rpm条件下37℃浸提24h；介质对照组为不含试验样品的细胞培养液，处理同试验组。
试验结果如表8所示：
表8
样品 存活率
实施例1 95％
实施例2 96％
实施例3 95％
实施例4 97％
对比例4 86％
对比例5 79％
介质对照组 -
阴性对照组 98％
阳性对照组 7％
(二)皮内反应试验
将上述实施例1和对比例4的琼脂糖凝胶制备成注射剂，制备方法为：将琼脂糖凝胶灌装在预灌封注射器中，灭菌。将所得注射剂依据GB/T 14233.2-2005、GB/T 16886.10-2005《医疗器械生物学评价第10部分：刺激与迟发型超敏反应试验》进行家兔最大剂量试验，用以评价该产品潜在的皮内反应。
红斑和水肿记分标准如表9所示：
表9
反应 记分
红斑 记分
无红斑现象 0
极轻微红斑(勉强可见) 1
清晰红斑 2
中度红斑 3
重度红斑(紫红色)至焦痂形成 4
水肿 记分
无水肿 0
极轻微水肿(勉强可见) 1
清晰水肿(肿起，不超出区域边缘) 2
中度水肿(肿起约1mm) 3
重度水肿(肿起大于1mm，并超出接触区) 4
刺激最高记分 8
注：记录并报告注射部位的其他异常情况
在(72±2)h评分后，分别将每只动物试验样品或空白对照的(24±2)h、(48±2)h和(72±2)h的全部红斑与水肿记分相加，再除以15[3(记分时间点)×5(试验样品或空白对照注射点)]，计算出每只动物试验样品或空白对照的记分。3只动物记分相加后除以3得出每一试验样品和相应空白对照的总平均记分。试验样品记分减去空白对照记分可得出试验样品最终记分。
评分结果如表10所示：
表10
Figure BDA0003790902420000111
Figure BDA0003790902420000121
由表10可知，实施例1制备的凝胶样品皮内反应0分，符合国标要求，对比例4制备的凝胶计分为3.5分，不符合标准要求。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种琼脂糖凝胶的制备方法，其特征在于，步骤如下：
将非交联琼脂糖微球、交联剂和分散剂混合，加入碱性溶液，在55～65℃下进行非静态交联，交联时间为7～15h，待交联完成后，清洗，获得琼脂糖凝胶。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，非交联琼脂糖微球、交联剂和分散剂的质量比选自100:0.6～1.2:10～20。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，非交联琼脂糖微球与碱性溶液的质量体积比选自1:0.5～1:1.5。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，交联剂选自环氧氯丙烷、BDDE中的一种或两种；分散剂选自是DMSO、无水乙醇中的一种或两种；碱性溶液选自氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液中的一种或两种。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，非交联琼脂糖微球由如下方法制备而成：
将琼脂糖置于水中，95～130℃加热溶解，形成琼脂糖水溶液，作为水相；将乳化剂置于液体石蜡中，65～75℃加热，搅拌均匀，作为油相；将油相和水相混合，65～75℃均质30s～20min，将均质物降温至10℃以下，置于0～4℃低温环境中固化1～2h，经过清洗后，获得非交联琼脂糖微球。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，乳化剂和液体石蜡的体积比为1:20～1:25。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，乳化剂选自司盘80、司盘85、吐温80中的一种或几种。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，油相和水相的体积比为1:1～2:1。
9.权利要求1～8所述方法制备的琼脂糖凝胶。
10.权利要求9所述琼脂糖凝胶在制备美容注射剂中的应用。
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