CN115252800A - 淋巴介导转运的紫杉醇类甘油三酯前药及脂质制剂 - Google Patents

淋巴介导转运的紫杉醇类甘油三酯前药及脂质制剂 Download PDF

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Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及基于淋巴介导转运的甘油三酯前药，具体涉及淋巴介导转运的不同脂肪酸链的紫杉醇类甘油三酯前药及其脂质制剂和在制备口服药物传递系统中的应用。本发明还提供了所述的紫杉醇类甘油三酯前药的脂质制剂，包含紫杉醇‑甘油三酯前药和辅料，所述辅料包括磷脂类乳化剂、短链醇或醚类助乳化剂、液态油类油相，按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的30％‑85％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的10％‑45％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％‑25％；紫杉醇‑甘油三酯前药占辅料总重量的1‑10％。本发明脂质制剂制备工艺简单，便于产业化，重复性强；为均一的油溶液状态，稳定性好，便于储存，且能明显提高紫杉醇的生物利用度。

Description

淋巴介导转运的紫杉醇类甘油三酯前药及脂质制剂
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及基于淋巴介导转运的类甘油三酯前药，具体涉及淋巴介导转运的不同脂肪酸链的紫杉醇类甘油三酯前药及其脂质制剂和在制备口服药物传递系统中的应用。
背景技术:
癌症严重威胁着全人类的健康。化疗是癌症治疗中最常用和最有效的策略之一，但是目前临床上应用的大部分化疗药都是细胞毒性药物，存在溶解度低、稳定性差、治疗窗窄和药动学性质不佳等缺点。口服给药因其不良反应小、给药方式简便、患者顺应性好，历来是新药研发以及临床治疗中的首选给药途径。然而，由于紫杉醇属于生物药剂学分类IV(Biopharmaceutics classification system IV，BCS IV)类药物，即水溶性差，膜透性差，并且体内生物半衰期较短，存在明显的肝脏首过代谢效应，且易被P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)外排，以致紫杉醇口服给药后，生物利用度极低，临床使用受到很大限制。因此，开发低毒高效的紫杉醇口服制剂仍然是研究的热点。韩国大化制药开发的紫杉醇口服自微乳制剂
Figure BDA0003045448690000011
(DHP107)通过增强粘膜黏附来提高紫杉醇的口服吸收，然而这也带来了一系列的问题，包括适应症有限，目前只适用于胃癌的治疗，此外，也带来了胃肠道副反应如腹泻和粘膜损伤。
淋巴转运能够避免首过效应，提高药物的口服生物利用度。在胃肠道中，高脂溶性的药物(LogD>5并且在长链甘油三酯的溶解度>50mg/g)可以通过参与脂蛋白组装进入淋巴循环。而引入脂肪酸链能在一定程度上增加疏水药物的亲脂性。甘油三酯在肠道内消化过程中，胰脂肪酶特异性水解1位和3位的脂肪酸，而2位脂肪酸几乎不水解，将2位脂肪酸置换成药物，使前药模拟甘油三酯在肠道中的消化过程，以2-甘油单酯前药的形式进入肠上皮细胞进行再酯化，参与脂蛋白的组装，进而促进淋巴转运。已有很多研究者做了类甘油三酯前药的实例。但是这些类甘油三酯前药的结构对紫杉醇-类甘油三酯前药的设计是无用的，由于不能有效地释放母药，前药的效能受到极大的影响。在中国专利CN106715456A中，发明人引入了自消除连接链，促进母药睾酮的系统释放。然而，对于紫杉醇，一个化疗药物，大量的系统暴露会带来严重的副反应，因此，该连接链对紫杉醇的口服递药系统的设计是无指导意义的。
现有技术中,常常将类甘油三酯前药制备成纳米乳剂，但是纳米乳剂具有储存不稳定，易分层，且制备繁琐，制剂重现性差的缺点，并且纳米乳剂中一般含有大量的脱氧胆酸钠作为助乳化剂，可能会带来严重的胃肠道副反应，不适宜长期多次给药。因此，需要设计一种安全简易的类甘油三酯前药口服剂型，从而提高口服紫杉醇的生物利用度。
发明内容：
为了克服现有技术的缺陷，提高紫杉醇的口服生物利用度，本发明基于天然甘油三酯淋巴转运机制，选择了不同链长和饱和度的1，3脂肪酸合成紫杉醇-类甘油三酯前药，以促进紫杉醇的淋巴转运，提高其口服利用度，并引入还原敏感连接键，在促进抗肿瘤药物口服吸收的同时，使其能够在靶部位特异性释放，提高疗效，降低毒性。
本发明通过如下技术方案实现：
本发明的第一个目的是提供式(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的紫杉醇-类甘油三酯前药或其几何异构体、药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物：
Figure BDA0003045448690000021
Figure BDA0003045448690000031
本发明的第二个目的是提供上述化合物的制备方法。具体制备方法如下：
(a)1,3-甘油二酯的合成：一定量的脂肪酸(辛酸，硬脂酸或油酸)溶于无水三氯甲烷中，在EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)和DMAP(4-二甲氨基吡啶)催化作用下与一定量的1，3-二羟基丙酮发生成酯反应，再经硼氢化钠氢化反应得1,3-甘油二酯。
(b)将4，4’-二硫代二丁酸溶于适量乙酸酐中，室温下搅拌成对应酸酐，与1,3-甘油二酯在EDCI及DMAP存在的条件下反应得到中间产物，与紫杉醇在DMAP及EDCI的催化条件下酯化反应得到(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)前药。
Figure BDA0003045448690000032
本发明的第三个目的是提供一种简单安全的含紫杉醇-甘油三酯前药的药物组合物，所述的药物组合物为紫杉醇-甘油三酯前药的脂质制剂，包含紫杉醇-甘油三酯前药和辅料，所述辅料包括磷脂类乳化剂、短链醇或醚类助乳化剂、液态油类油相，按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的30％-85％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的10％-45％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-25％；紫杉醇-甘油三酯前药占辅料总重量的1-10％。
进一步地，本发明所述的药物组合物按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的55％-85％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的10％-35％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％。
优选地，本发明所述的药物组合物按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的55％-80％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的15％-35％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％。
进一步地，紫杉醇-甘油三酯前药占辅料总重量的2-5％。
优选地，紫杉醇-甘油三酯前药占辅料总重量的3-4％。
其中，所述的磷脂为蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，合成磷脂类如1,2-二辛酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二癸酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，优选为蛋黄卵磷脂；
所述液态油选自长链甘油三酯、混合长链甘油酯、中链甘油三酯或其组合，包括：橄榄油、杏仁油、介花油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、棕榈仁油、棕榈油、花生油、菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、大豆油、向日葵油、氢化椰子油、氢化棉籽油、氢化棕榈油、氢化大豆油、部分氢化大豆油、氢化植物油、Maisine、peceol中的一种或几种，其中优选橄榄油。
所述短链醇或醚类助乳化剂为二乙二醇单乙基醚(Transcutol HP)、乙醇、丙二醇等，其中优选Transcutol HP。
更进一步地，所述的短链醇或醚类助乳化剂、磷脂类乳化剂、液态油相的重量比为：1：2-4：5-20。
本发明所述的紫杉醇-甘油三酯前药的脂质制剂通过如下方法制备：
将紫杉醇-甘油三酯前药、短链醇或醚类助乳化剂、磷脂类乳化剂、液态油类油相混合，超声使辅料和前药混合均一，即得到前药的脂质制剂。
或将磷脂类乳化剂和短链醇或醚类助乳化剂溶于液态油中，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂。取紫杉醇-甘油三酯前药，加入上述空白制剂，超声使前药完全溶于其中，即得到均一的脂质口服制剂。
当所述的磷脂类乳化剂为蛋黄卵磷脂、短链醇或醚类助乳化剂为二乙二醇单乙基醚、液态油类油相为橄榄油时，且液态油类油相占脂质制剂的55％-80％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的15％-35％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％时，所得到的紫杉醇-甘油三酯前药的脂质制剂具有最佳的粒径和粒径分布，具有最好的稳定性，且能明显提高紫杉醇的口服生物利用度。
本发明所提供的脂质制剂首次将橄榄油、磷脂以及二乙二醇单乙基醚进行均匀混合，制备成空白脂质制剂，并将所合成的紫杉醇-类甘油三酯前药溶解到上述制剂中，制备方法简单，无需高温加热，探头超声等工序，只需简单的搅拌或超声溶解，工艺简单，便于产业化，重复性强；得到的脂质制剂为均一的油溶液状态，相对纳米制剂的热力学不稳定状态，本发明提供的脂质制剂更稳定，便于储存；本发明所提供的脂质制剂所使用的辅料均为FDA批准的药用辅料，且避免了脱氧胆酸钠的使用，口服后不会对机体造成胃肠道毒性，且本发明所述制剂载药量相对现有技术大大提升。
本发明的优势在于：
1、本发明基于天然甘油三酯吸收的机制，设计了紫杉醇-类甘油三酯前药，促进了紫杉醇的淋巴转运，避免了首过效应，进而提高了其口服生物利用度。
2、本发明设计了三种不同脂肪酸取代的紫杉醇-类甘油三酯前药，并在连接键中引入还原敏感的二硫键，选择不同碳链长度和不饱和度的1，3位脂肪酸，在提高淋巴转运的同时，使紫杉醇能够在肿瘤细胞内高还原环境下释放，从而提高了紫杉醇的淋巴转运及口服生物利用度。
3、本发明以还原敏感的二硫键连接桥连接甘油三酯骨架和紫杉醇，在促进紫杉醇口服吸收的同时，使药物能够在靶部位特异性释放，增效减毒。
4、本发明根据紫杉醇-类甘油三酯前药的性质，将其制备成脂质制剂的药物组合物，高度适用于所制备的紫杉醇类甘油三酯前药，制备工艺简单，易于产业化，均一稳定，相较于纳米乳剂，避免了脱氧胆酸钠的使用，简化了制备工艺，无加热过程和探头超声，便于工业化生产。
附图说明
图1为紫杉醇-类甘油三酯前药的高分辨质谱图；
(I)为PTX-S-S-TG(OcA)；(II)为PTX-S-S-TG(OA)；(III)为PTX-S-S-TG(SA)。
图2为紫杉醇-甘油三酯前药的1H-NMR谱；
(I)为PTX-S-S-TG(OcA)；(II)为PTX-S-S-TG(OA)；(III)为PTX-S-S-TG(SA)。
图3为紫杉醇-类甘油三酯前药脂质制剂的胃肠道细胞毒。
图4为紫杉醇-类甘油三酯前药脂质制剂在大鼠药动实验中的药时曲线；
A：紫杉醇类甘油三酯前药、DHP107及多紫杉醇溶液剂的游离紫杉醇血药浓度-时间曲线图；
B：紫杉醇类甘油三酯前药中紫杉醇总量的血药浓度-时间曲线图；
C：PTX-S-S-TG(OcA)的血药浓度-时间曲线图；
D：PTX-S-S-TG(OA)的血药浓度-时间曲线图；
E：PTX-S-S-TG(SA)的血药浓度-时间曲线图。
图5为紫杉醇-甘油三酯前药脂质制剂的体内口服抗肿瘤实验图；
A：紫杉醇类甘油三酯前药、DHP107及紫杉醇溶液剂的肿瘤生长曲线图；
B：紫杉醇类甘油三酯前药、DHP107及紫杉醇溶液剂的体重变化；
C：紫杉醇类甘油三酯前药、DHP107及紫杉醇溶液剂的荷瘤率。。
具体实施方式
本发明通过以下实施例对本发明作进一步阐述，但并不受限于此。
实例1紫杉醇-类甘油三酯前药制备
Figure BDA0003045448690000061
将40mmol辛酸或油酸或硬脂酸溶于无水三氯甲烷中，在EDCI和DMAP催化作用下与20mmol 1，3-二羟基丙酮发生成酯反应，再经硼氢化钠氢化反应得1，3-DG，经柱层析分离得纯品(分离条件正己烷：乙酸乙酯＝30：1-15：1)。将8.8mmol 4,4’-二硫代二丁酸溶于适量乙酸酐中，于室温下反应2.5h，旋蒸溶剂浓缩并复溶于适量无水二氯甲烷中，并加入0.8mmol1，3-DG，DMAP。抽真空氮气保护于室温反应24小时。旋蒸除溶剂，柱层析分离条件得到中间产物(分离条件为正己烷：乙酸乙酯＝12：1-8：1)。将1mmol中间产物溶解于适量无水三氯甲烷中，加入EDCI，DMAP，0.8mmol紫杉醇，抽真空氮气保护于室温反应24小时。旋蒸除溶剂，制备液相分离得到终产物(分离条件为纯乙腈)。
采用高分辨质谱测定实例1中前药的分子量，结果如图1所示：
化合物Ⅰ(PTX-S-S-TG(OcA))：ESI-HRMS:Calcd.For C74H91NNaO21S2[M-H+]1399.5995found 1399.6012。
化合物Ⅱ(PTX-S-S-TG(OA))：ESI-HRMS:Calcd.For C94H133NNaO21S2[M-Na+]1675.8812found 1675.8811。
化合物Ⅲ(PTX-S-S-TG(SA))：ESI-HRMS:Calcd.For C94H137NNaO21S2[M+Na+]1679.9125found 1679.9154。
采用核磁共振测定1H-NMR氢谱来确定实施例1中前药的结构，选用的溶剂为CDCl3，结果如图2所示。
1H NMR of化合物ⅠPTX-S-S-TG(OcA)(600MHz,CDCl3,ppm)
δ8.14(d,J＝7.6Hz,2H),7.74(d,J＝7.5Hz,2H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H),7.51(dd,J＝15.7,7.8Hz,3H),7.46–7.32(m,7H),6.92(d,1H),6.30(s,1H),6.26(t,1H),5.98(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),5.69(d,1H),5.51(d,1H),5.24(m,1H),4.98(d,1H),4.45(dd,J＝10.9,6.7Hz,1H),4.39–4.17(m,4H),4.13(dd,J＝12.0,5.8Hz,2H),3.82(d,1H),2.66(m,2H),2.64-2.49(m,4H),2.47(s,3H),2.44(t,2H),2.38(dd,J＝15.3,9.4Hz,1H),2.30(t,4H),2.23(s,3H),2.17(dd,J＝15.3,8.9Hz,1H),2.00(m,4H),1.95(s,3H),1.89(t,1H),1.68(s,3H),1.62–1.57(m,4H),1.30–1.25(m,18H),1.23(s,3H),1.14(s,3H),0.88(t,J＝7.0Hz,6H)。
1H NMR of化合物ⅡPTX-S-S-TG(OA)(600MHz,CDCl3,ppm)
δ8.15(d,J＝7.4Hz,2H),7.74(d,J＝7.4Hz,2H),7.61(t,J＝7.3Hz,1H),7.55–7.49(m,3H),7.45–7.33(m,7H),6.92(d,1H),6.30(s,1H),6.25(t,1H),5.98(dd,J＝9.2,2.5Hz,1H),5.69(d,1H),5.52(d,1H),5.29(s,4H),5.24(m,1H),4.98(d,1H),4.45(m,1H),4.34–4.19(m,4H),4.13(dd,J＝11.9,5.7Hz,2H),3.82(d,1H),2.66(m,2H),2.63–2.51(m,4H),2.46(s,3H),2.43(t,2H),2.40–2.34(m,1H),2.30(t,4H),2.23(s,3H),2.18–2.13(m,1H),2.05–1.96(m,12H),1.95(s,3H),1.87(t,1H),1.69(s,3H),1.64-1.56(m,4H),1.38-1.26(m,42H),1.23(s,3H),1.14(s,3H),0.88(t,6H)。
1H NMR of化合物ⅢPTX-S-S-TG(SA)(600MHz,CDCl3,ppm)
δ8.15(d,J＝7.2Hz,2H)7.74(d,J＝7.2Hz,2H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H),7.51(dd,J＝12.8,7.5Hz,3H),7.47–7.32(m,7H),6.92(d,1H),6.30(s,1H),6.26(t,1H),5.98(dd,J＝9.3,3.0Hz,1H),5.69(d,1H),5.52(d,1H),5.28–5.15(m,1H),4.98(d,1H),4.45(m,1H),4.34–4.19(m,4H),4.15(d,J＝5.8Hz,1H),4.12(d,J＝5.8Hz,1H),3.82(d,1H),2.67(m,2H),2.61–2.49(m,4H),2.46(s,3H),2.44(t,2H),2.40–2.34(m,1H),2.30(t,4H),2.23(s,3H),2.17(dd,J＝15.4,9.0Hz,1H),2.00(m,4H),1.95(s,3H),1.93–1.84(m,1H),1.69(s,3H),1.63-1.57(m,4H),1.25(m,58H),1.23(s,3H),1.14(s,3H),0.88(t,J＝6.8Hz,6H)。
上述前药具体合成路线如下所示：
Figure BDA0003045448690000081
实例2紫杉醇-甘油三酯前药的处方筛选
将12mg紫杉醇-甘油三酯前药溶解于400mg橄榄油中，预热至60℃。称取120mg蛋黄卵磷脂，40mg脱氧胆酸钠，溶解于4ml去离子水中，预热至60℃。将油相缓慢滴入搅拌的水相中，持续搅拌3min形成初乳，将初乳冰浴探头超声10min，超声功率500W，制备紫杉醇类甘油三酯前药纳米乳剂，PTX-S-S-TG(OA)为例，结果发现乳剂粒径在第5天出现了分层的现象，暴露出了乳剂具有不稳定性的缺陷。纳米乳剂的载药量仅为0.260％，将紫杉醇类甘油三酯前药制备成纳米乳剂，不仅载药量低，而且稳定性差。
2.1油相的选择
以三个前药中的PTX-S-S-TG(OA)为例，进行处方筛选，对PTX-S-S-TG(OA)在几种LCT基础得植物油中的溶解度测定，结果如表1。
表1.PTX-S-S-TG(OA)在几种植物油中的溶解度
Figure BDA0003045448690000091
根据溶解度结果，脂质制剂的油相选择橄榄油。
2.2助乳化剂的选择
磷脂可以帮助改善类甘油三酯前药的口服吸收，因此初步选择蛋黄卵磷脂作为乳化剂，筛选助乳化剂。将乳化剂和助乳化剂溶于油相中，油相：乳化剂：助乳化剂质量比为65：25：10，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂。
取200mg PTX-S-S-TG(OA)前药加入到1g上述空白制剂中，测定PTX-S-S-TG(OA)前药在空白制剂中的平衡溶解度。
另取30mg的PTX-S-S-TG(OA)前药，加入到1g的上述空白制剂，超声使前药完全溶于其中，得到均一的脂质口服制剂。按照上述方法制备PTX-S-S-TG(OA)脂质制剂，并取500mg各含药制剂加到5mL模拟胃液中，搅拌5min以模拟胃蠕动，测定粒径和分布，不同助乳化剂的结果见表2。
表2.不同助溶剂制备的PTX-S-S-TG(OA)脂质制剂性质
Figure BDA0003045448690000092
结果表明，加入不同的助乳化剂，制备的脂质制剂性能不同，而当助乳化剂为Transcutol HP时，制备的PTX-S-S-TG(OA)前药脂质制剂具有最佳的载药量、粒径和分布。
2.3磷脂的选择
以橄榄油为油相，以Transcutol HP作为助乳化剂，对磷脂种类进行筛选，选择蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，1,2-二辛酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，1,2-二癸酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，按照2.2的方法制备PTX-S-S-TG(OA)脂质制剂，测定PTX-S-S-TG(OA)前药在空白制剂中的平衡溶解度，并取500mg各含药制剂加到5mL模拟胃液中，搅拌5min以模拟胃蠕动，测定粒径和分布，不同磷脂所制备的脂质制剂的各指标均无显著差异，蛋黄卵磷脂相对较好。
实例3 PTX-S-S-TG(OA)前药脂质制剂的制备
按照实例2中2.2的方法制备PTX-S-S-TG(OA)前药脂质制剂，得到不同组方的前药脂质制剂，如表3所示。将500mg脂质制剂加到5mL模拟胃液中，搅拌5min模拟胃蠕动，测定粒径和分布，另取上述脂质制剂与模拟胃液混合物1mL与5mL胰液-胆汁混合，孵育2h后，低温离心(10000rpm，10min)，取中间层液体，测定消化后粒径，以及PTX-S-S-TG(OA)在中间层的占比，结果如表4所示：
表3.不同组方的PTX-S-S-TG(OA)脂质制剂
Figure BDA0003045448690000101
表4.不同组方的PTX-S-S-TG(OA)脂质制剂的性质
Figure BDA0003045448690000102
Figure BDA0003045448690000111
如表4所示，当橄榄油占比小于50％时(处方1-3)，蛋黄卵磷脂和TranscutolHP占比较高，对PTX-S-S-TG(OA)的溶解度高，因此载药量高，此外，由于乳化剂和助乳化剂的强表面活性作用，经模拟胃液混合搅拌后，得到了粒子粒径小而均匀，但是当与胰液-胆汁混合模拟消化后，得到的中间层的水相的粒径较大，且PTX-S-S-TG(OA)前药在中间层的占比小于50％，对于类甘油三酯脂质制剂，最初的体外粒径并不能准确预测出体内的口服吸收，而经模拟消化后的中间水相相当于体内肠液的溶解相，其粒径越小，前药在中间水相中的占比越大，可能会有利于体内吸收。当橄榄油占比超过80％，蛋黄卵磷脂占比低于15％时，尽管体内模拟的结果仍在可接受范围，但是最初的模拟胃液乳化粒径大于300nm，这可能会延迟后续的肠道消化过程，进而影响口服吸收；当TrancutolHP低于5％时，橄榄油与蛋黄卵磷脂不相容，无法形成均一的脂质制剂。
当橄榄油在30％-85％，蛋黄卵磷脂在10％-45％，TrancutolHP在5％-25％时，可以形成均一稳定的脂质制剂，其粒径均小于400nm。
当橄榄油在55％-85％，蛋黄卵磷脂在10％-35％，TrancutolHP在5％-10％时，可以形成均一稳定的脂质制剂，其粒径均小于400nm，PTX-S-S-TG(OA)在中间层占比大，有利于体内吸收。
当橄榄油在55％-80％，蛋黄卵磷脂在15％-35％，TrancutolHP在5％-10％时，可以形成均一稳定的脂质制剂，其粒径均小于300nm，且最有利于体内吸收。
各组方的脂质制剂在15天时无分层沉淀，具有较好的稳定性。
实例4紫杉醇-甘油三酯前药脂质制剂的制备
称取300mg蛋黄卵磷脂溶于1g橄榄油中，同时加入100mg的二乙二醇单乙基醚，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂。精确称取40mg实例1所述前药，加入1g的空白制剂，超声使前药完全溶于其中，分别制备PTX-S-S-TG(SA)、PTX-S-S-TG(OcA)、PTX-S-S-TG(OA)三种均一的前药脂质制剂。精密称取适量紫杉醇母药，加入到上述空白制剂中，即得到紫杉醇脂质制剂。
实例5紫杉醇-甘油三酯前药脂质制剂的胃肠道细胞毒
采用MTT法考察紫杉醇-类甘油三酯前药脂质制剂对人克隆结肠腺癌细胞(CaCo-2)的细胞毒性。以1000cells/孔的密度将细胞接种到96孔板中，置培养箱中孵育24h使其贴壁。待细胞贴壁后加入系列浓度的紫杉醇溶液剂、市售紫杉醇自微乳DHP107和实施例4中制备的紫杉醇-类甘油三酯前药脂质制剂。加药12h后，MTT法测定细胞存活率。
结果如图3所示，紫杉醇-类甘油三酯前药脂质制剂对人克隆结肠腺癌细胞的细胞毒性都弱于紫杉醇溶液剂和市售紫杉醇自微乳DHP107，说明前药的脂质制剂对于胃肠道细胞无明显损伤，显著降低了紫杉醇的胃肠道毒性，前药的脂质制剂降低毒性的作用是PTX-S-S-TG(SA)＞PTX-S-S-TG(OcA)＞PTX-S-S-TG(OA)。
实例6紫杉醇-甘油三酯前药脂质制剂的药动学实验
以SD大鼠为模型，口服含有紫杉醇-甘油三酯前药油溶液及含有紫杉醇油溶液，剂量为10mg/kg，定时眼眶采血，测定血浆中紫杉醇母药的浓度，根据测定的浓度分别进行了药-时曲线的绘制及相应药动学参数的计算(表2)。为了计算绝对生物利用度，静脉给予紫杉醇溶液剂，剂量为5mg/kg，测定血浆中紫杉醇的含量。如图4和表5所示，口服PTX-S-S-TG(OA)前药脂质制剂组、口服PTX-S-S-TG(SA)前药脂质制剂组的AUC(0-12h)分为为PTX溶液口服组的3.34倍和4.29倍，是市售DHP107组的1.65倍和2.12倍。口服PTX-S-S-TG(OcA)前药脂质制剂组、口服PTX-S-S-TG(OA)前药脂质制剂组、口服PTX-S-S-TG(SA)前药脂质制剂组的口服相对生物利用度(Frel)分别为129.05％、333.9％和428.85％。与口服PTX溶液的4.95％相比，3种前药的口服绝对生物利用度(Fab)分别为6.39％、16.52％和21.22％，口服生物利用度均有所提高。PTX脂质制剂口服吸收与PTX-S-S-TG(OcA)前药相近，Fab％为7.05％。紫杉醇-类甘油三酯前药组中的绝对生物利用度比较结果为：PTX-S-S-TG(SA)>PTX-S-S-TG(OA)>PTX-S-S-TG(OcA)。紫杉醇-类甘油三酯前药在血浆中测得的游离紫杉醇含量有限，所以用适当方法测得前药中含有的紫杉醇总量如表6所示，1，3位被硬脂酸取代的紫杉醇-类甘油三酯前药在血浆中紫杉醇总量最高。
表5.紫杉醇-甘油三酯前药主要药动学参数
Figure BDA0003045448690000121
表6.紫杉醇-甘油三酯前药中紫杉醇总量
Figure BDA0003045448690000131
实例7紫杉醇类甘油三酯前药脂质制剂的药效学行为
以4T1异位荷瘤Balb/c小鼠模型，三种不同口服紫杉醇类甘油三酯前药的脂质制剂、紫杉醇脂质制剂、紫杉醇溶液剂，给药剂量为16mg/kg(紫杉醇等效剂量)，每天给药；设置紫杉醇溶液剂静注组为阳性对照，给药剂量为10mg/kg，每隔两天给一次药；设置PBS组为空白对照。结果如图5所示，三种类甘油三酯前药脂质制剂组肿瘤体积比较为:PTX-S-S-TG(SA)>PTX-S-S-TG(OA)>PTX-S-S-TG(OcA)，1，3位被硬脂酸取代的紫杉醇-类甘油三酯前药与对照组相比有显著性差异，且小鼠荷瘤率最低，而体重无明显变化，表明其具有可靠的安全性且抗肿瘤效果好。

Claims (10)

1.式(Ⅰ)、(Ⅱ)或(Ⅲ)所示的紫杉醇-甘油三酯前药或其药学上可接受的盐或其几何异构体、水合物、溶剂化物：
Figure FDA0003045448680000011
2.如权利要求1所述的紫杉醇-甘油三酯前药的制备方法，其特征在于，
(a)1,3-甘油二酯的合成：辛酸、硬脂酸或油酸溶于无水三氯甲烷中，在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶催化作用下与1，3-二羟基丙酮发生成酯反应，再经硼氢化钠氢化反应得1,3-甘油二酯；
(b)将4，4’-二硫代二丁酸溶于乙酸酐中，室温下搅拌成酸酐，与1,3-甘油二酯反应得到中间产物，再与紫杉醇发生酯化反应即得。
3.紫杉醇-甘油三酯前药的脂质制剂，其特征在于，包含权利要求1所述的紫杉醇-甘油三酯前药和辅料，所述辅料包括磷脂类乳化剂、短链醇或醚类助乳化剂、液态油类油相，按重量百分比计，液态油类油相占脂质制剂的30％-85％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的10％-45％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-25％；优选地，液态油类油相占脂质制剂的55％-85％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的10％-35％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％；更优选地，液态油类油相占脂质制剂的55％-80％，磷脂类乳化剂占脂质制剂的15％-35％，短链醇或醚类助乳化剂占脂质制剂的5％-10％。
4.如权利要求3所述的紫杉醇-甘油三酯前药的脂质制剂，其特征在于，紫杉醇-甘油三酯前药占辅料总重量的1-10％，优选为2-5％。
5.如权利要求3或4所述的紫杉醇-甘油三酯的脂质制剂，其特征在于，所述的磷脂为蛋黄卵磷脂，大豆卵磷脂，合成磷脂；所述液态油选自长链甘油三酯、混合长链甘油酯、中链甘油三酯或其组合，优选为：橄榄油、杏仁油、介花油、蓖麻油、椰子油、玉米油、棉籽油、鱼油、棕榈仁油、棕榈油、花生油、菜籽油、红花油、芝麻油、鲨鱼肝油、大豆油、向日葵油、氢化椰子油、氢化棉籽油、氢化棕榈油、氢化大豆油、部分氢化大豆油、氢化植物油、Maisine、peceol中的一种或几种；所述短链醇或醚类助乳化剂为二乙二醇单乙基醚、乙醇、丙二醇，短链醇或醚类助乳化剂、磷脂类乳化剂、液态油相的重量比为1：2-4：5-20。
6.如权利要求3-5任何一项所述的紫杉醇-甘油三酯的脂质制剂，其特征在于，包含紫杉醇-甘油三酯前药、蛋黄卵磷脂、橄榄油和二乙二醇单乙基醚，橄榄油占脂质制剂的55％-80％，蛋黄卵磷脂占脂质制剂的15％-35％，TrancutolHP占脂质制剂的5％-10％，紫杉醇甘油三酯前药占辅料总量的3-4％。
7.如权利要求3-6任何一项所述的紫杉醇-甘油三酯的脂质制剂的制备方法，其特征在于，
将紫杉醇-甘油三酯前药、短链醇或醚类助乳化剂、磷脂类乳化剂、液态油类油相混合，超声使辅料和前药混合均一，即得；
或将磷脂类乳化剂和短链醇或醚类助乳化剂溶于液态油中，超声使其混合均匀，得到均一空白制剂；取紫杉醇-甘油三酯前药，加入上述空白制剂，超声使前药完全溶于其中，即得。
8.权利要求1所述的紫杉醇-甘油三酯前药化合物及其药学上可接受的盐或权利要求3-6任何一项所述的紫杉醇-甘油三酯的脂质制剂在制备口服药物传递系统中的应用。
9.权利要求1所述的紫杉醇-甘油三酯前药及其药学上可接受的盐或权利要求3-6任何一项所述的紫杉醇-甘油三酯的脂质制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.权利要求1所述的紫杉醇-甘油三酯前药及其药学上可接受的盐或权利要求3-6任何一项所述的紫杉醇-甘油三酯的脂质制剂在制备提高疗效，降低毒性药物中的应用。
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