CN115245553A - 小续命汤提取物在防治脑卒中药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了小续命汤提取物(XXM)在防治脑卒中药物中的用途,属于医药技术领域。药理实验证明:XXM预防给药7天可显著改善MCAO局灶性脑缺血再灌注导致的体重降低、神经功能损伤、抓握能力损伤、脑缺血体积增大及脑水肿,具有显著的防治脑卒中再复发的药理活性。因此,该小续命汤提取物可用于制备预防和/或治疗脑卒中的药物,具有较高的临床应用价值和开发前景。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及中药复方小续命汤提取物在防治脑卒中药物中的用途。
背景技术
脑卒中是全球严重的公共卫生问题之一,是一种临床常见病和多发病,严重威胁人类健康。脑卒中也称为脑血管意外疾病,即各种诱导因素引起脑内动脉狭窄、闭塞或破裂的现象,以猝然昏倒,伴有口角歪斜、语言不利、半身不遂等现象。随着我国人口老龄化加速,原发性高血压、高血脂、糖尿病等危险因素的急剧增长,脑卒中患者日益增多,患者在初次脑卒中发作后的一段时间内,很容易再次发生脑卒中,即脑卒中复发。近年来国内外研究者对脑卒中复发进行了研究,发现脑卒中患者复发的可能性远远高于普通人,并且发病后的治疗也会很困难,复发患者的致残率、死亡率显著高于初发患者,不仅严重威胁患者的身心健康,同时增大了医疗费用,造成严重的经济和社会负担。因此,预防和治疗脑卒中的药物研发非常重要。
中药复方“小续命汤”首载于《千金要方》(唐·孙思邈),后收入《医方集解》和《汤头歌诀》等多种药学古籍,被广泛应用,是中医常用治疗中风的有效方剂。本方由麻黄、防己、人参、黄芩、桂枝、甘草、芍药、川芎、杏仁、附子、防风、生姜12味药材组成。小续命汤具有扶正祛邪、疏风痛络的作用。主治中风卒起,筋脉拘急,半身不遂,口目不正,舌强不能语,或神志闷乱等。
发明内容
本实验室在前期研究中,以中药复方有效成分组理论作为指导,获得小续命汤提取物(XXM),本发明提供了以下技术方案:
小续命汤提取物在制备预防和/或治疗脑卒中药物中的应用。
小续命汤提取物在制备抗脑卒中后体重降低药物中的应用。
小续命汤提取物在制备抗脑卒中后神经功能损伤药物中的应用。
小续命汤提取物在制备抗脑卒中后抓握能力损伤药物中的应用。
小续命汤提取物在制备抗脑卒中后脑缺血体积增大药物中的应用。小续命汤提取物在制备抗脑卒中后脑水肿药物中的应用。
一种药物组合物在制备预防和/或治疗脑卒中药物中的应用,所述的组合物选自发明中所述小续命汤提取物和药学上可接受的载体或附加剂。
并建立XXM制备工艺。
应用80%乙醇回流提取小续命汤获得提取液,石油醚萃取后除去石油醚层,分出滤渣(中间层),水层通过大孔树脂色谱柱梯度洗脱获得40%、60%乙醇洗脱液合并,减压浓缩至适量,真空干燥,粉碎成粉末,然后与中间层粉末混合即为XXM。
本发明应用大脑中动脉阻塞(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型,评价了XXM预防给药对MCAO局灶性脑缺血再灌注损伤的作用,发现XXM预防给药可以显著改善MCAO局灶性脑缺血再灌注导致的体重降低、神经功能损伤、运动功能损伤、脑缺血体积增大及脑水肿。
本发明要解决的问题之一是:提供XXM预防给药7天在改善MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠体重降低方面的用途。
本发明要解决的问题之二是:提供XXM预防给药7天在改善MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能损伤方面的用途。
本发明要解决的问题之三是:提供XXM预防给药7天在改善MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠抓握能力损伤方面的用途。
本发明要解决的问题之四是:提供XXM预防给药7天在改善MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑缺血体积方面的用途。
本发明要解决的问题之五是:提供XXM预防给药7天在改善MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿方面的用途。
本发明还涉及本发明小续命汤有效成分组和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。
本发明小续命汤有效成分组给药途径为口服给药。给药剂型是固体剂型。如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
有益技术效果:本小续命汤有效成分组药理活性突出,适用于脑卒中及神经系统多种疾病的用途。
附图说明
图1 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠体重的影响。数据表示为均值±SD.与对照组比较,##P<0.01;与LPS模型组比较,*P<0.05。
图2 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠mNSS神经功能评分的影响。数据表示为均值±SD.与对照组比较,##P<0.01;与LPS模型组比较,**P<0.01。
图3 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠抓握能力的影响。数据表示为均值±SD.与对照组比较,##P<0.01;与LPS模型组比较,**P<0.01。
图4 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑缺血体积的影响。数据表示为均值±SD.与对照组比较,##P<0.01;与LPS模型组比较,*P<0.05。
图5 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿的影响。数据表示为均值±SD.与对照组比较,##P<0.01;与LPS模型组比较,**P<0.01。
具体实施方式
实施例1小续命汤提取物制备方法
麻黄0.3Kg、桂枝0.3Kg、川芎0.3Kg、人参0.3Kg、甘草0.3Kg、白附片0.3Kg、黄芩0.6Kg、防己0.6Kg、防风0.6Kg、白芍0.9Kg、苦杏仁0.9Kg、干姜0.9Kg 12种药材(购自北京同仁堂有限公司),用8倍80%乙醇回流提取3次,每次提取1.5小时,滤过,合并滤液,滤液减压浓缩调整至2.52千克(相对密度约为1.15,70℃),放冷,加石油醚(60~90℃)900毫升剧烈搅拌,加盖,静置过夜。用100目筛网滤过,分出滤渣(中间层,备用),滤液转入萃取罐中分出水层,备用,除去石油醚层。中间层部位真空干燥,粉碎,备用。取水层通过HP-20大孔树脂色谱柱(填料3Kg),加水15升洗脱(至色谱柱顶端水液澄清),弃去水液,再加40%乙醇15升洗脱,弃去初洗脱液3升,收集续洗脱液12升(约12.4千克),继加60%乙醇洗脱,收集洗脱液8升(约7.4千克),合并40%、60%乙醇洗脱液,减压回收溶剂,浓缩至适量(相对密度约为1.2),真空干燥,粉碎,即为XXM。
实施例2 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠的作用
实验方法
1.动物分组及给药
成年SD大鼠(合格证号:SCXK(京)2016-0006)购自北京维通利华实验动物技术有限公司。正常条件下饲养,温度(25±1℃),相对湿度55%~65%,12h光照周期,自由进食进水。预适应3天后按体重随机分为假手术组、脑缺血/再灌注模型组和XXM 150mg/kg给药组。XXM使用0.5%CMC-Na配置,脑缺血/再灌注模型+XXM 150mg/kg给药组每天灌胃XXM150mg/kg,假手术组、模型组给予等体积0.5%CMC-Na溶液,连续给药7天,第7次给药后进行脑缺血再灌注手术。
脑缺血再灌注大鼠模型制备:大鼠术前禁食12小时,10%水合氯醛腹腔注射(0.38mL/100g)麻醉,固定于手术板上。剪开SD大鼠颈部皮肤,钝性分离右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,并用1号线将颈总轻轻提起,在颈外动脉埋入三根0号细线,结扎远心端。动脉夹夹闭颈外动脉,用眼科剪在远心端的两根细线中剪一个斜行的小口,插入栓线,滑至颈内,向大脑中动脉插入至标记处黑点,使黑点停留在颈内、颈外与颈总交叉处,此时线栓的深度约为18mm-20mm,固定栓线,松开四肢,颈部开口处盖一块润湿的纱布防止伤口过于干燥。缺血90min后轻轻拔出线栓并结扎颈外动脉,缝合伤口后置于鼠笼中。假手术组只分离出颈总动脉而不插入栓线,其它操作与模型组动物相同。模型成功标准:大鼠术后苏醒后,出现左侧偏瘫,且以左上肢最为明显,大鼠提尾时出现左前肢内收屈曲,不能完全伸展,大鼠清醒后爬行时向左转圈,严重时向左跌倒。术后24小时进行各项检测。
2.mNSS评分法检测大鼠神经功能
mNSS评分细则如下:
3.悬挂试验检测大鼠抓握能力
将大鼠前爪悬挂于直径5mm的粗绳上,记录落地时间,研究大鼠前爪抓握能力。停留时间越短说明抓握能力损伤越严重。
4.TTC染色检测脑梗死体积
行为学测评结束后麻醉断头处死大鼠,取出脑组织,于-20℃冰箱冷冻后,去除小脑和低位脑干,依次切出6片脑片,2mm每片。将脑片放置于六孔板中,2%TTC溶液浸没脑片,于37℃避光孵育30min,然后将TTC溶液倒出加入4%多聚甲醛溶液固定24h。小心取出脑片排列于黑色底板上,将四周液体吸干净后进行拍照,使用Image J软件计算缺血区面积,梗死侧(右侧)总面积及梗死对侧(左侧)总面积。为消除脑水肿影响,大鼠脑梗死体积百分比以如下公式计算:脑梗死体积百分比(%)=[梗死对侧正常脑组织面积–(梗死侧总面积–梗死面积)]/梗死对侧面积,将梗死体积百分比的数值转入GraphPad Prism 7.0进行统计分析。
5.脑水肿测定
TTC拍照完成后,将脑片吸干水分置于称量纸上称量,记录称量纸的重量M0和放上脑片后的总重量M。于烘箱中烘干,直至1h内脑片的重量无明显变化后将烘干脑片取出称重记为M1,则水肿程度表示为:水肿百分比(%)=(M-M1)/(M-M0),将水肿百分比的数值转入GraphPad Prism 7.0进行统计分析。
实验结果
1.XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠体重的影响
手术前各组大鼠体重无现显著性差异。而MCAO脑缺血再灌注24h后大鼠体重出现差异,与假手术组相比,模型组组大鼠体重显著降低(P<0.01);与模型组比较,XXM 150mg/kg给药组大鼠体重显著升高(P<0.05),说明XXM预防给药可以改善脑缺血再灌注损伤造成的大鼠体重降低。(表1、图1)。
表1 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠体重的影响
组别 | 体重(克) |
假手术组 | 311.7±7.0 |
模型组 | 276.1±11.8## |
模型+XXM 150mg/kg组 | 295.2±11.1* |
2.XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠神经功能的影响
与假手术组相比,模型组组大鼠mNSS神经功能评分显著增高(P<0.01);与模型组比较,XXM 150mg/kg给药组大鼠神经功能评分显著降低(P<0.01),说明XXM预防给药可以改善脑缺血再灌注损伤造成的大鼠神经功能损伤(表2、图2)。
表2 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠体重的影响
组别 | mNSS评分(分数) |
假手术组 | 0 |
模型组 | 10.33±2.42## |
模型+XXM 150mg/kg组 | 4.167±2.14** |
3.XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠抓握能力的影响
与假手术组相比,模型组组大鼠抓握能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,XXM150mg/kg给药组大鼠抓握能力显著升高(P<0.05),说明XXM预防给药可以改善脑缺血再灌注损伤造成的抓握能力损伤(表3、图3)。
表3 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠抓握能力的影响
组别 | 抓握时间(秒) |
假手术组 | 16.5±5.3 |
模型组 | 1.5±0.5## |
模型+XXM 150mg/kg组 | 10.0±2.8** |
4.XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积的影响
与假手术组相比,模型组组大鼠体重脑梗死体积显著增大(P<0.01);与模型组比较,XXM 150mg/kg给药组大鼠脑梗死体积显著降低(P<0.05),说明XXM预防给药可以显著缩小脑缺血再灌注损伤造成脑梗死体积。(表1、图1)。
表4 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积的影响
5.XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿的影响
与假手术组相比,模型组组大鼠脑水肿显著增高(P<0.01);与模型组比较,XXM150mg/kg给药组大鼠体重显著升高(P<0.01),说明XXM预防给药可以改善脑缺血再灌注损伤造成的脑水肿(表5、图5)。
表5 XXM预防给药7天对MCAO局灶性脑缺血再灌注大鼠脑水肿的影响
组别 | 脑水肿体积(%) |
假手术组 | 76.13±1.04 |
模型组 | 77.38±0.43## |
模型+XXM 150mg/kg组 | 75.83±0.68** |
。
Claims (7)
1.小续命汤提取物在制备预防和/或治疗脑卒中药物中的应用。
2.小续命汤提取物在制备抗脑卒中后体重降低药物中的应用。
3.小续命汤提取物在制备抗脑卒中后神经功能损伤药物中的应用。
4.小续命汤提取物在制备抗脑卒中后抓握能力损伤药物中的应用。
5.小续命汤提取物在制备抗脑卒中后脑缺血体积增大药物中的应用。
6.小续命汤提取物在制备抗脑卒中后脑水肿药物中的应用。
7.一种药物组合物在制备预防和/或治疗脑卒中药物中的应用,其特征在于,所述的组合物包括权利要求1所述小续命汤提取物和药学上可接受的载体或附加剂。
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CN202110459016.9A Pending CN115245553A (zh) | 2021-04-27 | 2021-04-27 | 小续命汤提取物在防治脑卒中药物中的用途 |
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2021
- 2021-04-27 CN CN202110459016.9A patent/CN115245553A/zh active Pending
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Title |
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叶映月等: "小续命汤对出血性中风脑水肿作用机理探讨", 中国实验方剂学杂志, vol. 5, no. 03, pages 48 - 49 * |
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