CN115212132B - 一种寡肽冻干粉及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种寡肽冻干粉及其制备方法和应用，所述寡肽冻干粉的制备原料包括水、烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽‑1和甘油。本发明提供的寡肽冻干粉中各种成分相互配合，协同增效，可有效减少因外界环境导致的皮肤脆弱敏感的状态，增强肌肤抵抗力，改善皮肤弹性，减少皱纹，减少肌肤发红，增加皮肤水分，提高肌肤抗氧化能力，使肌肤保持光泽细腻的健康状态；还能够防止色素沉着，用后肌肤柔滑细致，白皙光泽，且更能针对敏感肌肤，通过调节皮肤生理功能，修复肌肤到达最佳生理状态，具有非常明显的修复和舒缓功效。

Description

一种寡肽冻干粉及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于护肤品技术领域，具体涉及一种寡肽冻干粉及其制备方法和应用。
背景技术
人体从约25岁开始，皮肤会逐步进入到自然老化状态，加之来自现代社会的多重压力和环境污染，皮肤衰老迹象主要表现是：细纹、浅层皱纹和干纹的出现，皮肤糖化现象明显，发黄粗糙，色素沉积，黯淡无光；角质层水分含量降低，皮肤干燥或毛孔粗大冒油；肌肤防御能力和血液循环能力下降，易敏感。
人们对皮肤修复产品的需求量日益增涨，皮肤修复产品必须可有效预防和延缓由内因和外因造成的肌肤受损问题。目前市面上的护肤品主要的功效还是以保湿为主，功效单一片面，对于皮肤修复方面的功效较为薄弱。
由于针对肌肤综合状态改善的护肤产品相对较少，并且还可能存在使用效果不佳或刺激性大的问题。且伴随着气候变化、空气污染及化妆品种类与成分复杂化，提高了皮肤受损程度，加上人们对皮肤健康意识的提高，如何全方位修复受损肌肤成为人们越来越关注的话题。
因此如何提供一种护肤品，使其具有改善和提升皮肤综合状态的功效，已经成为目前亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种寡肽冻干粉及其制备方法和应用。本发明提供的寡肽冻干粉中各种成分相互配合，协同增效，可以提高皮肤弹性，减少皱纹，增加皮肤水分，提高肌肤抗氧化能力；还能够防止色素沉着，用后肌肤柔滑细致，白皙光泽。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种寡肽冻干粉，所述寡肽冻干粉的制备原料包括水、烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油。
在本发明中，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计包括水90-96份(例如可以是90份、91份、92份、93份、94份、95份、96份等)、烟酰胺1.5-2.5份(例如可以是1.5份、1.7份、1.9份、2.1份、2.3份、2.5份等)、甘露糖醇1.5-2.5份(例如可以是1.5份、1.7份、1.9份、2.1份、2.3份、2.5份等)、水解胶原0.08-0.15份(例如可以是0.08份、0.09份、0.1份、0.11份、0.12份、0.13份、0.14份、0.15份等)、肌肽0.08-0.15份(例如可以是0.08份、0.09份、0.1份、0.11份、0.12份、0.13份、0.14份、0.15份等)、二裂酵母发酵产物溶胞产物0.08-0.15份(例如可以是0.08份、0.09份、0.1份、0.11份、0.12份、0.13份、0.14份、0.15份等)、寡肽-10.08-0.15份(例如可以是0.08份、0.09份、0.1份、0.11份、0.12份、0.13份、0.14份、0.15份等)和甘油0.05-0.15份(例如可以是0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.11份、0.12份、0.13份、0.14份、0.15份等)。
烟酰胺能够加速皮肤细胞的代谢，促进角质层的循环，让肌肤更年轻、更有活力，同时它具有一定的抗氧化作用，能使皮肤保持弹性；并且可以美白祛斑，阻止黑色素向角质形成细胞的转运；能够修复角质层，强化皮肤自身的防御能力，同时就有一定的锁水的功效。甘露糖醇其实是一种六元醇，属于多元醇类，其中所含的较多的羟基可以与水以氢键的形式结合，具有一定的锁水保湿功效。
水解胶原蛋白对于皮肤主要是能够起到抗自由基和美白皮肤的作用，使用胶原蛋白以后，能够增加皮肤的弹性，还能够使皮肤变得比较紧致，对于皮肤内的色素沉着也能够起到淡化的作用。肌肽能够预防皮肤衰老，也能美白肌肤，同时肌肽能防止自由基对皮肤的损伤，使细胞膜处于稳定状态。改善皮肤抵抗力，尽快排出皮肤中的代谢物，促进受损皮肤尽快恢复。此外可以净化皮肤，保持皮肤处于正常状态。
二裂酵母发酵产物溶胞物具有很强的抗免疫抑制活性，可有效保护皮肤，不受紫外线引起的损伤，并能促进DNA修复，用于乳化、水基及水醇体系的护肤、防晒及晒后护理产品，帮助预防表皮及真皮的老化。寡肽-1具有促进基底层组织生长，促进表皮及真皮细胞的整体代谢速度，加快皮肤屏障修复，提升肌肤的修护能力，改善痘痘、红血丝、粗糙暗沉等肌肤问题，使皮肤的弹性增加，呈现年轻健康肌。甘油涂在皮肤上可以使皮肤的表面形成一层无形的保护膜，使皮肤与外界的空气保持隔离，为皮肤抵挡外界环境所带来的侵袭，从而起到保护皮肤的作用。
在本发明中，烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油相互配合，协同增效，共同提高皮肤弹性，提高皮肤保湿效果，提高肌肤抗氧化能力，并具有美白功效。
在本发明中，所述寡肽冻干粉的制备原料还包括明串球菌/萝卜根发酵产物滤液、糖蛋白或可溶性胶原中的任意一种或至少两种的组合，优选为明串球菌/萝卜根发酵产物滤液、糖蛋白和可溶性胶原。
优选地，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计还包括明串球菌/萝卜根发酵产物滤液0.002-0.003份(例如可以是0.002份、0.0022份、0.0024份、0.0026份、0.0028份、0.003份等)、糖蛋白0.00001-0.0001份(例如可以是0.00001份、0.00002份、0.00003份、0.00004份、0.00005份、0.00006份、0.00007份、0.00008份、0.00009份、0.0001份等)和可溶性胶原0.00001-0.0001份(例如可以是0.00001份、0.00002份、0.00003份、0.00004份、0.00005份、0.00006份、0.00007份、0.00008份、0.00009份、0.0001份等)。
在本发明中，所述寡肽冻干粉的制备原料还包括其他肽类物质、其他醇类物质和无机盐。
优选地，所述其他肽类物质包括精氨酸/赖氨酸多肽、寡肽-3、寡肽-2、十肽-4或二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐中的任意一种或至少两种的组合，优选为精氨酸/赖氨酸多肽、寡肽-3、寡肽-2、十肽-4和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐。
优选地，所述寡肽冻干粉按重量份数计还包括精氨酸/赖氨酸多肽0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.006份、0.007份、0.008份、0.009份、0.01份、0.011份、0.012份、0.013份、0.014份、0.015份等)、寡肽-3 0.005-0.015份(例如可以是0.005份、0.006份、0.007份、0.008份、0.009份、0.01份、0.011份、0.012份、0.013份、0.014份、0.015份等)、寡肽-2 0.005-0.015份(例如可以是0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.11份、0.12份、0.13份、0.14份、0.15份等)、十肽-4 0.00001-0.0001份(例如可以是0.00001份、0.00002份、0.00003份、0.00004份、0.00005份、0.00006份、0.00007份、0.00008份、0.00009份、0.0001份等)和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐0.000005-0.000015份(例如可以是0.000005份、0.000007份、0.000009份、0.000011份、0.000013份、0.000015份等)。
在本发明中，所述其他醇类物质包括1,2-己二醇和/或乙基己基甘油，优选为1,2-己二醇和乙基己基甘油。
优选地，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计还包括1,2-己二醇0.0001-0.0005份(例如可以是0.0001份、0.0002份、0.0003份、0.0004份、0.0005份等)和乙基己基甘油0.00001-0.00005份(例如可以是0.00001份、0.00002份、0.00003份、0.00004份、0.00005份等)。
在本发明中，所述无机盐包括氯化钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠中的任意一种或至少两种的组合；优选为氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
优选地，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计还包括氯化钠0.004-0.005份(例如可以是0.004份、0.0042份、0.0044份、0.0046份、0.0048份、0.005份等)、磷酸氢二钠0.0007-0.0015份(例如可以是0.0007份、0.0009份、0.0011份、0.0013份、0.0015份等)和磷酸二氢钠0.0002-0.0004份(例如可以是0.0002份、0.0003份、0.0004份等)。
第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述寡肽冻干粉的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将水、烟酰胺和甘露糖醇进行混合，得到第一混合物；
(2)将步骤(1)得到的第一混合物、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油混合，得到第二混合物；
(3)将步骤(2)得到的第二混合物进行冷冻干燥，得到所述寡肽冻干粉。
在本发明中，步骤(1)中，所述混合的温度为90-100℃(例如可以是90℃、91℃、92℃、93℃、94℃、95℃、96℃、97℃、98℃、99℃、100℃等)，时间为20-30min(例如可以是20min、22min、24min、26min、28min、30min等)，转速为30-40rpm(例如可以是30rpm、32rpm、34rpm、36rpm、38rpm、40rpm等)。
优选地，步骤(2)中，所述混合的温度为35-45℃(例如可以是35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃等)。
优选地，步骤(3)中，所述冷冻干燥的温度为-50～-65℃(例如可以是-50℃、-53℃、-55℃、-57℃、-60℃、-63℃、-65℃等)。
优选地，步骤(2)中，所述混合还包括明串球菌/萝卜根发酵产物滤液、糖蛋白、可溶性胶原、精氨酸/赖氨酸多肽、寡肽-3、寡肽-2、十肽-4、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、1,2-己二醇、乙基己基甘油、氯化钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠中的任意一种或至少两种的组合。
第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的寡肽冻干粉在制备化妆品中的应用。
第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品包括冻干粉溶媒液和根据第一方面所述的寡肽冻干粉。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的寡肽冻干粉中各种成分相互配合，协同增效，可有效减少因外界环境导致的皮肤脆弱敏感的状态，增强肌肤抵抗力，改善皮肤弹性，减少皱纹，减少肌肤发红，增加皮肤水分，提高肌肤抗氧化能力，使肌肤保持光泽细腻的健康状态；
(2)本发明提供的寡肽冻干粉各种成分相互配合，共同调节肌肤的代谢，能够渗入肌肤，帮助分解代谢杂质，防止色素沉着，用后肌肤柔滑细致，白皙光泽，且更能针对敏感肌肤，通过调节皮肤生理功能，修复肌肤到达最佳生理状态，具有非常明显的修复和舒缓功效。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
以下实施例中各组分标准中文名称和INCI名称的对应表如下所示：
以下测试例中冻干粉溶酶液均购买自广州丽彦妆生物科技有限公司(厂家)，货号为LYZ20220615001。
实施例1
本实施例提供一种寡肽冻干粉，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计包括以下组分：
所述寡肽冻干粉的制备方法包括以下步骤：将水、烟酰胺和甘露糖醇加入乳化锅，开搅拌35r/min，加热至95℃后，保温搅拌25分钟。开启冷却水，冷却至40℃后，将剩余原料分别加入乳化锅中搅拌均匀。冷却至常温后检测出料，待检测合格后灌装。灌装完后将西林瓶全部放置至冻干机，急速冷冻至-50℃，再慢慢升温，冻干机抽真空，待料体里面的水分完全升华完后停机，出料，包装完成后送检，检测合格后入库。
实施例2
本实施例提供一种寡肽冻干粉，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计包括以下组分：
所述寡肽冻干粉的制备方法包括以下步骤：将水、烟酰胺和甘露糖醇加入乳化锅，开搅拌30r/min，加热至100℃后，保温搅拌20分钟。开启冷却水，冷却至35℃后，将剩余原料分别加入乳化锅中搅拌均匀。冷却至常温后检测出料，待检测合格后灌装。灌装完后将西林瓶全部放置至冻干机，急速冷冻至-55℃，再慢慢升温，冻干机抽真空，待料体里面的水分完全升华完后停机，出料，包装完成后送检，检测合格后入库。
实施例3
本实施例提供一种寡肽冻干粉，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计包括以下组分：
所述寡肽冻干粉的制备方法包括以下步骤：将水、烟酰胺和甘露糖醇加入乳化锅，开搅拌40r/min，加热至90℃后，保温搅拌30分钟。开启冷却水，冷却至45℃后，将剩余原料分别加入乳化锅中搅拌均匀。冷却至常温后检测出料，待检测合格后灌装。灌装完后将西林瓶全部放置至冻干机，急速冷冻至-65℃，再慢慢升温，冻干机抽真空，待料体里面的水分完全升华完后停机，出料，包装完成后送检，检测合格后入库。
实施例4
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有明串球菌/萝卜根发酵产物滤液，将糖蛋白的重量份数增加至0.00125份，将可溶性胶原的重量份数增加至0.00125份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例5
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有糖蛋白，将可溶性胶原的重量份数增加至0.0001份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例6
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有可溶性胶原，将糖蛋白的重量份数增加至0.0001份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例7
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有精氨酸/赖氨酸多肽，将寡肽-3的重量份数增加至0.015份，将寡肽-2的重量份数增加至0.015份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例8
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有寡肽-3，将精氨酸/赖氨酸多肽的重量份数增加至0.015份，将寡肽-2的重量份数增加至0.015份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例9
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有寡肽-2，将精氨酸/赖氨酸多肽的重量份数增加至0.015份，将寡肽-3的重量份数增加至0.015份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例10
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有十肽-4，将二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的重量份数增加至0.00006份，其他组分及其制备方法同实施例1。
实施例11
本实施例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐，将十肽-4的重量份数增加至0.00006份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例1
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有烟酰胺，将甘露糖醇的重量份数增加至4份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例2
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有甘露糖醇，将烟酰胺的重量份数增加至4份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例3
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有水解胶原，将肌肽的重量份数增加至0.15份，将二裂酵母发酵产物溶胞产物的重量份数增加至0.1476份，将寡肽-1的重量份数增加至0.15份，将甘油的重量份数增加至0.1305份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例4
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有肌肽，将水解胶原的重量份数增加至0.15份，将二裂酵母发酵产物溶胞产物的重量份数增加至0.1476份，将寡肽-1的重量份数增加至0.15份，将甘油的重量份数增加至0.1305份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例5
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有二裂酵母发酵产物溶胞产物，将水解胶原的重量份数增加至0.15份，将肌肽的重量份数增加至0.1476份，将寡肽-1的重量份数增加至0.15份，将甘油的重量份数增加至0.1305份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例6
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有寡肽-1，将水解胶原的重量份数增加至0.15份，将肌肽的重量份数增加至0.15份，将二裂酵母发酵产物溶胞产物的重量份数增加至0.1476份，将甘油的重量份数增加至0.1305份，其他组分及其制备方法同实施例1。
对比例7
本对比例提供一种寡肽冻干粉，与实施例1的区别仅在于，不含有甘油，将水解胶原的重量份数增加至0.145份，将肌肽的重量份数增加至0.145份，将二裂酵母发酵产物溶胞产物的重量份数增加至0.1426份，将寡肽-1的重量份数增加至0.1455份，其他组分及其制备方法同实施例1。
测试例1
保湿效果测试
测试样本：实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉。
测试方法：选取180名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成18组，每组5名男性、5名女性，分别使用实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉。志愿者洁面后，按2mg/cm2的用量称取冻干粉，使用乳胶手套将冻干粉推入冻干粉溶酶液内，轻轻摇晃，然后将冻干粉均匀涂抹于测试区域内，每天早上洗完脸后使用一次，连续使用30天，通过皮肤测试仪(MC750，德国CK)测定志愿者使用前和使用后皮肤含水量；
在使用前以及连续使用30天后分别测试各位受试者的面部皮肤含水量，每个数据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位，按照如下公式计算皮肤含水量变化率：
面部皮肤含水量变化率(％)＝【(使用后30天面部皮肤含水量-使用前面部皮肤含水量)/使用前面部皮肤含水量】×100％；
测试结果如表1所示：
表1
由表1的测试结果可以看出，采用实施例1-11提供的寡肽冻干粉面部含水量变化率在37.6％以上，高于采用对比例1-7提供的寡肽冻干粉。这说明本发明中烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油各组分相互配合，协同增效，提高面部含水量，帮助强化和恢复肌肤保湿状态。
测试例2
抗衰祛皱效果测试
测试样本：实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉。
测试方法：
促进弹性蛋白生成实验：将人成纤维细胞按照2×104个/孔的密度接种在96孔板上，加入新鲜培养基在37℃培养箱中培养24h，待细胞贴壁后，更换新的培养基，并分别加入实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉(控制样品终浓度为50mg/mL)，以20mmol/L的PBS溶液作为空白对照，然后在37℃培养箱中培养2天。
培养结束后，利用细胞裂解液将细胞洗脱下来，并超声破碎。采用Biocolor弹性蛋白检测试剂盒对弹性蛋白的含量进行检测：用弹性蛋白沉淀剂处理样本，使弹性蛋白沉淀下来，离心分离，去除上清液，向沉淀中加入染料和反应液，反应形成弹性蛋白-染料复合物，离心分离并用PBS溶液洗涤三次，去除未结合的染料，添加染料释放剂，使弹性蛋白-染料复合物中的染料释放出来，采用分光光度计测定样品在513nm处的吸光度。根据吸光度-染料浓度标准曲线计算弹性蛋白的表达量(实施例和对比例中弹性蛋白表达量是相对于空白组的相对表达量，空白组的表达量计为1)，测试结果见表2。
表2
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由表2的测试结果可以看出，采用实施例1-11提供的寡肽冻干粉弹性蛋白表达量在6.2以上，弹性蛋白表达量远远高于采用对比例1-7提供的寡肽冻干粉。这充分说明本发明中烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油各组分相互配合，协同增效，共同促进弹性蛋白的表达，修复皮肤屏障，具有很好的抗衰祛皱功效。
测试例3
抗氧化效果测试
测试样本：实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉。
测试方法：将测试样本用DMSO稀释为质量分数2％的待测样品，进行下面试验，向试管中加入质量浓度为45.8mg/L的DPPH测试液2.0mL和一定量的待测样品，总体积用无水乙醇补充至3mL，摇匀，避光反应30min后，用1cm比色皿在517nm波长处测定吸光度，记为A10；向试管中加入无水乙醇2mL和相应体积的待测样品，总体积用无水乙醇补充至3mL，测得的吸光度记为A11；向试管中加入DPPH测试液2mL和无水乙醇1mL，测得的吸光度记为A12，计算待测液对DPPH自由基清除率(Y')；
DPPH自由基清除率的计算公式为：
测试结果如下表3所示：
表3
/>
由表3数据可知，本实施例1-11提供的寡肽冻干粉DPPH自由基清除率在55.7％以上。说明本发明提供的寡肽冻干粉中，烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油相互配合，协同增效，具有很好的清除自由基的功效，恢复皮肤抗氧化的保护能力。
测试例4
美白效果测试(酪氨酸酶活性以及黑色素合成抑制实验)
测试样本：实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉。
测试方法：
酪氨酸酶是黑色素代谢中目前唯一己知的酶，它是一种含铜的金属酶，由黑素细胞合成的，在黑色素产生的过程中饰演了举足轻重的角色。酪氨酸酶活性增加，黑色素细胞产生黑色素的能力就相应增强；反之相应降低。若抑制酪氨酸酶的活性，从而其吸光度发生变化，液体褪色程度与酶抑制成化学计量关系，可用分光光度法进行定量分析。
酪氨酸酶活性抑制试验：取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞，接种于6孔细胞培养板，培养过夜。分别加入终体积分数为1％的受试样品，以未处理组作细胞对照组，每组2个复孔。培养48h后用PBS洗涤1次，每孔加入100uL裂解液，刮取收集细胞，离心取上清液。取50uL细胞上清液至96孔板，再加入50uL1％L-多巴溶液，于37℃孵育1h，M3读板仪于475nm处读取吸光度值。
相对酪氨酸酶活性(％)＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)×100％。
黑色素合成抑制实验：取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞，接种于T25细胞培养瓶，培养过夜。分别加入终体积分数为1％的受试样品，以未处理组作为细胞对照组。培养48h后用PBS洗涤1次，加入1mL 1mol/L NaOH溶液，刮取收集细胞，放入80℃水浴中30min，取上清液加入96孔板，M3读板仪于475nm处读取吸光度值。
相对黑色素含量(％)＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)×100％。酪氨酸酶活性以及黑色素合成抑制实验结果如下表4所示，其中对照组的酪氨酸酶活性为100％，对照组的黑色素含量为100％。
表4
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由表4结果可知，本发明提供的寡肽冻干粉对酪氨酸酶的抑制效果较好，同时也能明显降低细胞中的黑色素含量。通过实施例1与对比例1-7比较可知，本发明提供的寡肽冻干粉中，烟酰胺、甘露糖醇、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油相互配合，协同增效，可以抑制酪氨酸活性，降低细胞中的黑色素含量。
测试例5
安全性测试
测试样本：实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉。
测试方法：参考《化妆品卫生规范》进行人体皮肤斑贴试验。选择18-60岁身体健康、无过敏性疾病的180名志愿者作为受试对象，受试对象分为18组，每组10人，试验期间不能使用其他护肤产品。选用面积为6mm×6mm的斑试器，将受试物放入斑试器小室内，用量为0.025g，将加有受试物的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。分别于去除受试物斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h。按表5所示标准观察皮肤反应，并记录观察结果。
表5
评分等级 皮肤反应
0 阴性反应
1 可疑反应，仅有微弱红斑
2 红斑、浸润、水肿、可有丘疹
3 红斑、浸润、水肿、丘疹、拖疹；反应可超出受试区
4 明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹；反应超出变试区
测试结果显示本发明实施例1-11和对比例1-7提供的寡肽冻干粉评分等级均为0，表明本发明提供的寡肽冻干粉非常温和，对皮肤无刺激性。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种寡肽冻干粉及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (13)

1.一种寡肽冻干粉，其特征在于，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计包括水90-96份、烟酰胺1.5-2.5份、甘露糖醇1.5-2.5份、水解胶原0.08-0.15份、肌肽0.08-0.15份、二裂酵母发酵产物溶胞产物0.08-0.15份、寡肽-1 0.08-0.15份、甘油0.05-0.15份、明串球菌/萝卜根发酵产物滤液0.002-0.003份、糖蛋白0.00001-0.0001份、可溶性胶原0.00001-0.0001份、精氨酸/赖氨酸多肽0.005-0.015份、寡肽-3 0.005-0.015份、寡肽-2 0.005-0.015份、十肽-4 0.00001-0.0001份和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐0.000005-0.000015份。
2.根据权利要求1所述的寡肽冻干粉，其特征在于，所述寡肽冻干粉的制备原料还包括其他醇类物质和无机盐；
所述其他醇类物质为1,2-己二醇和乙基己基甘油。
3.根据权利要求2所述的寡肽冻干粉，其特征在于，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计还包括1,2-己二醇0.0001-0.0005份和乙基己基甘油0.00001-0.00005份。
4.根据权利要求2所述的寡肽冻干粉，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠中的任意一种或至少两种的组合。
5.根据权利要求4所述的寡肽冻干粉，其特征在于，所述无机盐为氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。
6.根据权利要求5所述的寡肽冻干粉，其特征在于，所述寡肽冻干粉的制备原料按重量份数计还包括氯化钠0.004-0.005份、磷酸氢二钠0.0007-0.0015份和磷酸二氢钠0.0002-0.0004份。
7.一种根据权利要求1所述寡肽冻干粉的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）将水、烟酰胺和甘露糖醇进行混合，得到第一混合物；
（2）将步骤（1）得到的第一混合物、水解胶原、肌肽、二裂酵母发酵产物溶胞产物、寡肽-1和甘油混合，得到第二混合物；
（3）将步骤（2）得到的第二混合物进行冷冻干燥，得到所述寡肽冻干粉；
步骤（2）所述混合还包括明串球菌/萝卜根发酵产物滤液、糖蛋白、可溶性胶原、精氨酸/赖氨酸多肽、寡肽-3、寡肽-2、十肽-4和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述混合的温度为90-100℃，时间为20-30 min，转速为30-40 rpm。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述混合的温度为35-45℃。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述冷冻干燥的温度为-50~-65℃。
11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述混合还包括1,2-己二醇、乙基己基甘油、氯化钠、磷酸氢二钠或磷酸二氢钠中的任意一种或至少两种的组合。
12.一种根据权利要求1-6任一项所述的寡肽冻干粉在制备化妆品中的应用。
13.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括冻干粉溶媒液和根据权利要求1-6任一项所述的寡肽冻干粉。
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