CN115209926B

CN115209926B - 用于眼内膜剥离术的制剂

Info

Publication number: CN115209926B
Application number: CN202180019145.4A
Authority: CN
Inventors: 久富智朗; 铃木喜义
Original assignee: Seikagaku Corp; Fukuoka University
Current assignee: Seikagaku Corp; Fukuoka University
Priority date: 2020-03-25
Filing date: 2021-03-24
Publication date: 2024-05-14
Anticipated expiration: 2041-03-24
Also published as: CN115209926A; JP2021154125A; CA3175025A1; US20230136938A1; EP4129353A4; WO2021193707A1; EP4129353A1

Abstract

本发明所要解决的技术问题在于，发现对去除眼内膜有用的手段。本发明涉及一种用于眼内膜剥离术的制剂，其包含含有水凝胶形成性材料的溶液，所述制剂在温度25～40℃、频率1Hz下测定的动态粘弹性中，满足下述式1。其中，式1中，V_max(Pa/秒)是凝胶化开始后的储能模量最大变化率。(式1)0＜V_max≤3。

Description

用于眼内膜剥离术的制剂

技术领域

本发明属于眼内膜(日语：眼内膜)剥离术领域。

背景技术

玻璃体视网膜手术(以下，也简称为“玻璃体手术”)的目的是为了去除各种玻璃体疾病中出血/浑浊的玻璃体、视网膜上形成的膜样组织或玻璃体膜、在眼内细胞增生而形成的增生膜等而进行的。

从防止疾病复发、预防诱发新的疾病等观点出发，期望更完整地去除残留在视网膜上的玻璃体膜、增生膜，但通常难以去除。

非专利文献1中记载了一种通过利用具备聚乙烯醇(PVA)片的镊子擦拭残留在视网膜上的玻璃体膜从而去除玻璃体膜的技术。然而，这种技术很难有效去除玻璃体膜。此外，物理摩擦视网膜可能会损坏视网膜。

专利文献1中公开了一种具备视网膜清洁部件的、用于清洁眼睛视网膜的视网膜清洁用具。视网膜清洁部件构成为通过擦拭视网膜来去除玻璃体膜。视网膜清洁部件包含聚合物水凝胶，任选包含交联聚合物水凝胶。然而，与非专利文献1同样地，这样的技术难以有效去除玻璃体膜。此外，由于是物理摩擦视网膜，有可能会损坏视网膜。

非专利文献2中记载了在玻璃体膜或增生膜与视网膜之间注入粘弹性液，使玻璃体膜或增生膜从视网膜剥离并去除这些的技术。作为粘弹性液，使用了透明质酸钠。然而，通过这种极其高难度的手术，难以将玻璃体膜或增生膜从视网膜上完全剥离，并且需要将通过粘弹性液不能剥离的部分切除。因此，操作变得复杂，而且有可能会损害视网膜。

专利文献2中记载了一种交联糖胺聚糖，其用作膀胱输尿管反流症等需要利用长期残留组织膨胀材料进行治疗的疾病的治疗材料。然而，专利文献2中没有记载这种交联糖胺聚糖用于眼内膜剥离术。

专利文件3中记载了一种交联聚合物组合物，其包括与包含多个亲电子基团的第二合成聚合物共价键合的包含多个亲核基团的第一合成聚合物。第一合成聚合物优选是合成多肽或聚乙二醇，其被修饰为包含多个亲核基团，例如伯氨基(-NH₂)或硫醇基(-SH)。第二合成聚合物也可以是亲水性或疏水性合成聚合物，其包含或衍生成包含两个以上的琥珀酰亚胺基等的亲电子基团。组合物也可以进一步包含例如天然存在的多糖或蛋白质(糖胺聚糖或胶原等)、生物活性剂等其他组分。交联聚合物组合物作为用于组织粘合的生物粘合剂等使用。然而，专利文献3中没有记载将这样的交联聚合物组合物用于眼内膜剥离术。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2019/108061号

专利文献2：日本特开2016-172783号公报

专利文献3：国际公开第97/22371号小册子

非专利文献

非专利文献1：Acta Ophthalmologica 2019：97：e747-e752

非专利文献2：眼科临床医报，85(9)：2408(1991)

发明内容

如上所述，希望更有效且简便地去除残留在视网膜上的玻璃体膜、增生膜等眼内膜。因此，本发明的技术问题在于发现对去除眼内膜有用的手段。

本发明是鉴于上述技术问题而完成的，为了解决上述技术问题，本发明人等对于对眼内膜的剥离有用的手段进行了深入研究。其结果是，发现了将制剂注入到眼睛中以形成粘附在眼内膜上的水凝胶并将该膜与该水凝胶一起剥离的方法。此外，发现了适合这种方法的材料。基于这样的发现，完成了本发明。

即，本发明涉及以下内容。

[1]一种用于眼内膜剥离术的制剂，其包含含有水凝胶形成性材料的溶液，

对于所述制剂在温度25～40℃、频率1Hz下测定的动态粘弹性，满足下述式1：

(式1)0＜V_max≤3

其中，式1中，V_max(Pa/秒)是凝胶化开始后的储能模量最大变化率。

[2]根据[1]所述的制剂，其中，所述水凝胶形成性材料包含聚合物。

[3]根据[2]所述的制剂，其中，所述聚合物包含选自多糖类衍生物、聚亚烷基二醇衍生物、胶原(collagen)衍生物、聚乙烯醇衍生物以及纤维蛋白原中的化合物。

[4]根据[2]所述的制剂，其中，所述聚合物包含选自多糖类衍生物和聚亚烷基二醇衍生物中的化合物。

[5]根据[1]至[4]中任一项所述的制剂，其中，所述凝胶化是通过交联反应进行的。

[6]根据[1]至[5]中任一项所述的制剂，其中，所述水凝胶形成性材料包含2种以上的化合物。

[7]根据[6]所述的制剂，其中，所述凝胶化通过混合所述2种以上的化合物而开始。

[8]根据[1]至[7]中任一项所述的制剂，其中，所述眼内膜为选自玻璃体膜和增生膜中的至少一种。

[9]根据[1]至[8]中任一项所述的制剂，其中，在凝胶化开始3分钟后使用质构仪(Texture Analyzer)测定的拉伸应力为-3×10^-4N/mm²以上。

[10]根据[1]至[9]中任一项所述的制剂，其中，所述制剂包含可视化剂(日语：可視化剤)。

[11]根据[1]至[10]中任一项所述的制剂，其中，对于所述制剂在温度25～40℃、频率1Hz下测定的动态粘弹性，满足下述式2：

(式2)0.05≤V_max≤2

其中，式2中，V_max(Pa/秒)与式1中同义。

[12]根据[1]至[11]中任一项所述的制剂，其中，所述V_max是从凝胶化开始到900秒为止的储能模量最大变化率。

[13]根据[1]至[12]中任一项所述的制剂，其中，所述水凝胶形成性材料包含下述糖胺聚糖衍生物A、以及选自下述糖胺聚糖衍生物B和化合物C中的一种：

(1)经由酰胺键和二价间隔基团，将SPAAC型反应性基团导入到糖胺聚糖的羧基上而得到的GAG衍生物A；

(2)经由酰胺键和二价间隔基团，将与(1)的反应性基团互补的反应性基团导入到羧基中而得到的糖胺聚糖衍生物B；

(3)由具有至少2个与(1)的反应性基团互补的反应性基团的下述结构定义的化合物C；

[化1]

[式中，Y相同或不同，是与(1)的反应性基团互补的反应性基团；Z是n价的间隔基团；n是2或2以上的整数]。

[14]一种注射器，其填充有[1]至[13]中任一项所述的制剂。

[15]一种眼内膜的剥离方法，其包括将[1]至[13]中任一项所述的制剂施用到患者的眼内膜上的步骤。

[16]根据[15]所述的方法，其中，在从所述眼内给药起经过10秒以上之后，将所述眼内膜剥离。

[17]一种制剂，其包含含有水凝胶形成性材料的溶液，以注入到患者的眼内而形成粘附在眼内膜上的水凝胶、并将该膜与该水凝胶一起剥离的方式使用。

附图说明

图1是表示本发明的眼内膜的剥离方法的一个方式的示意图。图1的A表示眼内膜与内界膜粘连的状态。图1的B表示水凝胶形成性材料被注入到眼内膜上的状态。图1的C表示在眼内膜上形成有水凝胶的状态。图1的D表示剥离粘附在眼内膜上且凝胶化的水凝胶的状态。

图2是表示混合HA-DBCO与HA-AEA后的储能模量G'的时间变化的图。

图3是表示猪眼中的利用水凝胶的玻璃体膜剥离性能评价结果的图(附图代用照片)。图3的A是TA层形成时的照片，图3的B是刚排出水凝胶形成性材料的混合液后的照片，图3的C是留置5分钟后的水凝胶去除操作中的照片。

图4是表示猪眼中的利用水凝胶的玻璃体膜剥离性能评价结果的图(附图代用照片)，是去除水凝胶后的照片。

图5是表示增生性玻璃体视网膜症模型动物中的利用水凝胶的玻璃体膜以及增生膜剥离性能评价的结果的图(附图代用照片)，是添加水凝胶时的照片。

图6是表示增生性玻璃体视网膜症模型动物中的利用水凝胶的玻璃体膜以及增生膜剥离性能评价的结果的图(附图代用照片)，是水凝胶的去除操作中的照片。

图7是表示增生性玻璃体视网膜症模型动物中的利用水凝胶的玻璃体膜以及增生膜剥离性能评价的结果的图(附图代用照片)，是去除一部分水凝胶后的照片。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行说明，但本发明并不仅限于以下的实施方式。

本发明的用于眼内膜剥离术的制剂(以下，也称为“本发明的制剂”。)以及眼内膜剥离方法的眼内膜去除效果优异。另外，本发明的制剂以及剥离方法与以往的极其高难度的手术方式相比，简便性也优异。

<用于眼内膜剥离术的制剂>

本发明的一个方式涉及一种用于眼内膜剥离术的制剂，其包含含有水凝胶形成性材料(以下，有时称为“本发明的水凝胶形成性材料”)的溶液，

所述用于眼内膜剥离术的制剂在温度25～40℃、频率1Hz下测定的动态粘弹性中，满足下述式1：

(式1)0＜V_max≤3

在本说明书中，水凝胶形成性材料是指能够形成水凝胶的材料。另外，在本说明书中，水凝胶是包含水、并且难溶于水或不溶于水的凝胶。在本说明书中，“难溶于水”是指在水中浸渍1小时以上时，几乎看不到溶解，维持浸渍前的形状的意思。例如，水凝胶在水中的溶解度可以是在20℃下为1g/L以下。

如上所述，本发明人们深入研究的结果是，想到了使在玻璃体视网膜手术中残留成为问题的眼内膜粘附于粘弹性物质，并将眼内膜与粘弹性物质一起剥离的方法。进而，本发明人等想到了使用满足上述特定范围的储能模量最大变化率的水凝胶作为适合于这种方法的粘弹性物质，从而完成了本发明。

利用图1说明本发明的眼内膜的剥离方法的一个方式。图1的A示意地表示在玻璃体视网膜手术中残留的玻璃体膜、增生膜等眼内膜与相当于视网膜表面的内界膜粘连的状态。残留的玻璃体膜、通过细胞增生形成的增生膜容易收缩，由此有可能引起视网膜剥离等。因此，需要剥离去除残留玻璃体膜、增生膜等眼内膜。本发明的一个方式中，如图1的B所示，本发明的制剂中包含的水凝胶形成性材料被注入到眼内膜上。由于水凝胶形成性材料是溶液的形态，所以能够容易地注入玻璃体腔。如图1的C所示，在眼内膜上形成有水凝胶。如图1的D所示，以把持并剥离与玻璃体膜粘附且凝胶化的水凝胶的方式加以操作。这样，能够高效且容易地剥离眼内膜。如以上那样，本发明在作为狭小空间的眼内的眼内膜的剥离手术中，有效地辅助手术者的手术。

《储能模量最大变化率》

本发明的制剂包含含有特定的水凝胶形成性材料的溶液，并且本发明的制剂在凝胶化开始后满足上述特定范围的储能模量最大变化率，形成适合于剥离眼内膜的方法的水凝胶。

从与眼内膜的粘附性、与眼内膜一体化的水凝胶的把持/剥离的容易性、能够通过用于向眼内给药的针等且并迅速地凝胶化这样的操作的容易性等观点出发，本发明的制剂的凝胶化开始后的储能模量最大变化率V_max为超过0Pa/秒且3Pa/秒以下。优选的是，例如，V_max可以是0.01Pa/秒以上、0.05Pa/秒以上、0.3Pa/秒以上、0.4Pa/秒以上或0.6Pa/秒以上，以及2Pa/秒以下、1.5Pa/秒以下、1.0Pa/秒以下或0.8Pa/秒以下，也可以是这些的不矛盾的任意的组合。

本发明中所称的储能模量变化率是指由动态粘弹性的测定结果得到的储能模量G'(Pa)的每单位时间(秒)的变化率(Pa/秒)。

另外，本发明中所称的储能模量最大变化率是指在储能模量从增加转变为平稳或减少的时间范围内的储能模量变化率中的最大的值。即，储能模量最大变化率V_max是将纵轴设为储能模量G'，将横轴设为时间t而制成的时间变化曲线的切线的斜率(dG'/dt)的最大值。例如，在交联反应中，交联化物质的储能模量与交联密度成正比地增加，上述储能模量最大变化率能够视为代表基于交联反应的凝胶化开始后的规定的时间范围内的储能模量变化率的值。

从本发明的制剂适用于玻璃体手术的观点出发，上述时间范围例如可以为从凝胶化开始后(凝胶化开始超过0秒)至900秒、600秒、300秒、180秒、100秒或60秒，也可以为这些的不矛盾的任意的组合。

本发明中的储能模量G'(Pa)是基于通常的动态粘弹性的测定方法测定的值。具体而言，例如，能够使用以下的值，所述值为：使用以0.5mm的板间隔安装有平行板的流变仪作为动态粘弹性测定装置，使用凝胶化开始后的眼内膜剥离术用制剂作为试样，在频率1Hz、温度25～40℃中的任一温度(优选25℃)下测定的值。

本发明的制剂的储能模量最大变化率例如能够通过调节包含水凝胶形成性材料的溶液中的水凝胶形成性材料的浓度、或者在使用交联剂的情况下，调节水凝胶形成性材料与交联剂的比率等方法来控制。更具体而言，储能模量最大变化率例如能够通过提高包含水凝胶形成性材料的溶液中的水凝胶形成性材料的浓度来提高。

《拉伸应力》

从与眼内膜的粘附性、与眼内膜一体化的水凝胶的把持/剥离的容易性等观点出发，本发明的制剂优选具有适度的延展性。在一个实施方式中，本发明的制剂的延展性以凝胶化开始起3分钟后的拉伸应力计例如可以为-3×10^-4N/mm²以上、-2×10^-4N/mm²以上或-1.5×10^-4N/mm²以上，以及-0.1×10^-4N/mm²以下、-0.5×10^-4N/mm²或-0.6×10^-4N/mm²以下，可以为这些的不矛盾的任意的组合。

本发明中的拉伸应力是基于通常的拉伸应力的测定方法测定的值。具体而言，例如能够采用基于Ippei Watanabe等,Chem.Pharm.Bull.67(3),277-283(2019)的测定方法。更具体而言，例如，能够使用以下的值，所述值为：使用质构仪作为拉伸应力试验装置，将从凝胶化开始起3分钟后的眼内膜剥离术用制剂作为试样液使用，在温度20℃～25℃中的任一温度(优选25℃)下测定的值。

本发明的制剂的拉伸应力例如能够通过选择水凝胶形成性材料的种类等来控制。

《水凝胶形成性材料》

水凝胶形成性材料只要是能够形成满足上述特定范围的储能模量最大变化率的水凝胶的材料即可，没有特别限定。在一个实施方式中，水凝胶形成性材料包含聚合物。作为聚合物，没有特别限定，例如能够示例将选自由多糖类、聚亚烷基二醇、胶原及聚乙烯醇等组成的组中的化合物作为基本骨架且导入了反应性官能团等而得到的衍生物、以及纤维蛋白原等，优选多糖类或聚亚烷基二醇。水凝胶形成性材料能够使用1种或组合两种以上使用。从玻璃体手术中的操作性的观点出发，水凝胶形成性材料优选包含多糖类，更优选包含后述的糖胺聚糖(GAG)。

作为多糖类，没有限定，能够示例出：透明质酸等糖胺聚糖(GAG)、海藻酸、纤维素类、葡聚糖类、壳聚糖、这些的医学上允许的盐等。

糖胺聚糖是具有由氨基糖(葡糖胺、半乳糖胺)和糖醛酸或半乳糖构成的二糖的重复结构单元的酸性多糖。作为这样的GAG的例子，可举出：透明质酸、肝素、硫酸乙酰肝素和硫酸角质素等。本发明中，其中特别优选透明质酸。

本发明中，海藻酸的来源没有特别限定。

作为纤维素类，可以使用公知的纤维素类，例如，可举出：纤维素、羧甲基纤维素等。本发明中，纤维素类的来源没有特别限定。

作为葡聚糖类，可以使用公知的葡聚糖类，例如，可举出：羧甲基葡聚糖等。本发明中，葡聚糖类的来源没有特别限定。

本发明中，壳聚糖的来源没有特别限定。本发明中，壳聚糖的脱乙酰度没有特别限定，例如能够为70～100％。

作为医学上允许的盐的例子，可举出：钠盐和钾盐等碱金属盐、镁盐和钙盐等碱土金属盐。

作为聚亚烷基二醇，没有限定，可举出作为聚亚烷基二醇的构成单元的亚烷基的碳原子数例如为2～4个，优选为2或3个，更优选为2个的聚亚烷基二醇。具体而言，可举出：聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇等。作为聚亚烷基二醇，优选举出聚乙二醇。另外，作为聚亚烷基二醇，也能够使用采取多支链聚亚烷基二醇结构的聚亚烷基二醇。

胶原是主要构成脊椎动物的真皮、韧带、肌腱、骨、软骨等的蛋白质，可举出：I型～XIX型等，均能够使用。本发明中，胶原的来源没有特别限定。

作为聚乙烯醇，没有限定，可举出：聚乙酸乙烯醇、聚甲酸乙烯醇、聚苯甲酸乙烯醇、聚硬脂酸乙烯醇、聚氯乙酸乙烯醇、聚氟乙酸乙烯醇以及聚丙酸乙烯醇等。作为聚乙烯醇，优选举出聚乙酸乙烯醇。另外，作为聚乙烯醇，也可以使用采取多支链聚乙烯醇结构的聚乙烯醇。

纤维蛋白原是与血液凝固相关的蛋白质。关于使作为酶的凝血酶作用于纤维蛋白原而形成的糊状凝块，市售有用于组织的封闭、脏器损伤部的粘接以及止血等的制剂(纤维蛋白糊)。

纤维蛋白原的种类没有特别限定，可以是来源于血液的纤维蛋白原，也可以是用重组技术制作的纤维蛋白原。也能够使用市售的纤维蛋白糊。作为本发明中使用的市售的纤维蛋白糊，没有限定，能够示例出：BOLHEAL(KM BIOLOGICS株式会社制造)、TISSEAL(Baxter制造)、BERIPLAST(CSL Behring制造)等。

本说明书中的衍生物可以是为了能够形成水凝胶而被衍生物化的衍生物等。

本发明的水凝胶形成性材料可以使用材料原本具有的反应性官能团来形成水凝胶，也可以是导入了能够形成水凝胶的反应性官能团而得到的衍生物。

作为为了能够形成水凝胶而被衍生物化的衍生物，没有限定，例如可以是具有反应性官能团的衍生物。作为反应性官能团，没有特别限制，只要是能够凝胶化的官能团即可。例如，可示例出碳二亚胺基、羰基咪唑基、磺酰氯基、氯代碳酸酯基、N-羟基琥珀酰亚胺基酯基、琥珀酰亚胺基酯基、磺胺琥珀酰亚胺基酯基、N-羟基乙氧基化琥珀酰亚胺基酯基、甲烷二异氰酸酯基、亚甲基-双(4-环己基异氰酸酯)基、异氰酸酯基、二异氰酸酯基、六亚甲基二异氰酸酯基、马来酰亚胺基、炔基、亚炔基、乙烯基、丙烯酰基、甲基丙烯酰基、氨基、羟基、羧基、硫醇基、叠氮基、酰肼基等亲电子性官能团以及亲核性官能团。反应性官能团的选择、导入等能够基于以往公知的方法进行。例如，多糖类衍生物中的基于反应性官能团的取代度(以百分率表示取代基的数量相对于重复单元的数量的值)通常为1～60％，优选为5～40％。

本发明中使用的水凝胶形成性材料的分子量，只要能够形成满足上述特定范围的储能模量最大变化率的水凝胶，就没有特别限定，例如能够使用重均分子量为500～10,000,000左右的材料。此外，本说明书中的水凝胶形成性材料的分子量是使用凝胶渗透色谱法(GPC)求出的值。

本发明的制剂包含：(1)水凝胶形成性材料预先以溶液的形态收容在容器中的形态、(2)收容在容器中的水凝胶形成性材料处于干燥状态并且在使用时被溶剂溶解的形态中的任一种形态。

作为在包含水凝胶形成性材料的溶液中使用的溶剂，没有特别限制，例如能够使用水、眼灌注液(BSS)、磷酸缓冲生理盐水(PBS)等。

包含水凝胶形成性材料的溶液中的水凝胶形成性材料的浓度没有特别限定，例如可以是0.2重量％以上、0.8重量％以上、0.9重量％以上或1.0重量％以上，且10重量％以下、3重量％以下、2重量％以下或1.5重量％以下，也可以是这些的不矛盾的任意的组合。

《凝胶化》

一般而言，在动态粘弹性的测定中，将储能模量G'(Pa)与损耗模量G”(Pa)的关系从G'≤G”转变为G”＜G'的时间点识别为凝胶化的开始点。

利用水凝胶形成性材料形成水凝胶的方法没有限定，例如，可以是通过在水凝胶形成性材料之间形成的交联，从而形成三维网状结构，并进行凝胶化的方法。本发明的一个优选实施方式中，使用基于交联反应而凝胶化的水凝胶形成性材料。

本发明的制剂可以是包含含有一种作为水凝胶形成性材料的化合物的溶液的制剂，也可以是包含多种溶液的制剂，所述多种溶液分别含有两种以上作为水凝胶形成性材料的化合物的组合中的任一种。在一个实施方式中，如果是两种作为水凝胶形成性材料的化合物的组合，则可以是包含含有组合中的一种的溶液(1)和含有组合中的另一种的溶液(2)的制剂。

在一个实施方式中，组合是指分别单独导入了成对形成交联结构的官能团(以下，有时称为“反应性官能团以及与该反应性官能团互补的反应性官能团”)的化合物的组合，通过该官能团间的交联反应形成了水凝胶。

在一个实施方式中，具有反应性官能团的水凝胶形成性材料和具有与该反应性官能团互补的反应性官能团的化合物分别收容在不同的容器中。在更具体的一个实施方式中，该具有互补的反应性官能团的化合物也是水凝胶形成性材料。

本发明的制剂中使用两种以上的化合物的情况下，例如可以是包含具有反应性官能团的水凝胶形成性材料和具有与该反应性官能团互补的反应性官能团的水凝胶形成性材料的组合的制剂，也可以是包含具有反应性官能团的水凝胶形成性材料和交联剂的组合的制剂。

在使用两种以上的化合物作为水凝胶形成性材料的情况下，例如，可以是通过该两种以上的化合物的混合而开始凝胶化的制剂。

在使用两种以上的化合物的情况下，其配合量能够根据反应性官能团的种类、作为目标的水凝胶的性能等适当选择，能够配合成：反应性官能团以及与该反应性官能团互补的反应性官能团以摩尔比计以4：1～1：4、2：1～1：2或1：1的摩尔比存在。

上述溶液(1)包含上述组合中的一种，溶液(2)包含上述组合中的另一种，但各个溶液还可以包含形成水凝胶的材料的其他组合。即，除了1个溶液包含1个材料的一溶液一溶质的形态以外，1个溶液包含两个以上溶质的一溶液多溶质的形态也可以作为本发明中的溶液而加以利用，只要在一溶液中不产生不希望的现象即可。

另外，在本方式中，利用包含形成水凝胶的至少两种化合物的组合中的一种的溶液(1)和包含另一种的溶液(2)，但并不意味着仅利用这两种溶液。因此，只要不损害水凝胶的形成，也可以进一步追加利用包含形成水凝胶的化合物的其他组合的溶液。

即，溶液的组合可以是1个或多个，将包含与溶液(1)和溶液(2)中所包含的组合不同的组合的化合物的、与溶液(1)和溶液(2)不同的溶液与溶液(1)和溶液(2)一起使用的实施方式也包含在本方式中。

上述成对形成交联结构的不同的两种官能团没有限定，优选的一个例子是发生点击反应的官能团的组合等，例如，可举出：叠氮与炔的组合(叠氮-炔加成环化(Huisgen加成环化))等。

作为这样的发生点击反应的官能团的组合，本发明中能够利用的水凝胶之一可举出：日本特开2016-172783号公报中记载的、通过将在透明质酸等GAG中导入了SPAAC(strain-promoted azide-alkyne cycloaddition)型反应性(官能)基团而得到的衍生物供于SPAAC反应而得到的GAG交联体。按照日本特开2016-172783号公报的教导，能够通过调节包含各衍生物的溶液的性质并混合，进行凝胶化。

更具体而言，本发明中能够利用的水凝胶之一是由以下的交联体形成的水凝胶。

在第一GAG分子的羧基与第二GAG分子的羧基之间借助酰胺键键合有下述基团的GAG交联体(第一GAG分子与第二GAG分子可以是相同分子)：

-CONH-R¹-X-R²-NHCO-，或

-CONH-R³-X-R⁴-X'-R⁵-NHCO-

[式中，

两端的-CONH和NHCO-是指借助GAG分子的羧基形成的酰胺键，

R¹、R²、R³、R⁴和R⁵相同或不同，表示亚烷基、亚烯基或亚炔基，该基团中的-CH₂-可以被>C＝O(即，-(C＝O)-)、-CONH-、亚芳基、-O-或-S-取代；

X和X'相同或不同，表示式：

[化2]

所示的结构，A、B键的朝向可以是任意的；

其中，A和B表示键合部位；

Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵和Y⁶相同或不同，表示-CR⁶R⁶'-、-C(-R⁶)＝、-NR⁷-、＝N-、-O-或-S-，-NR⁷-、＝N-、-O-以及-S-不相邻；

R⁶和R⁶'相同或不同，表示氢原子、卤原子、羟基、可以被烷基单或二取代的氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基或羧基，或者一起形成氧代基团，该烷基、烯基、炔基或烷氧基中的-CH₂-可以被>C＝O、-CONH-、亚芳基、-O-或-S-取代；

R⁷表示烷基、烯基或炔基，该烷基、烯基或炔基中的-CH₂-可以被>C＝O、-CONH-、亚芳基、-O-或-S-取代；或者，

在Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵和Y⁶中的相邻的两个基团中，R⁶和R⁶'能够与键合的环原子一起形成饱和或不饱和的3～6元环，上述键B也能够与该3～6元环键合]。

作为上述GAG交联体的一个方式，具有式：

[化3]

[式中，

R⁸和R⁹表示氢原子或羟基；其中，R⁸为羟基时，R⁹为氢原子，而R⁸为氢原子时，R⁹为羟基；

R¹⁰表示R¹¹或此前记载的交联；

R¹¹为ONa或OH]

表示的结构单元的重复结构作为基本骨架，R⁸为羟基时，能够优选举出该结构单元中的至少1个羟基为-OSO₃Na或-OSO₃H的GAG交联体。

作为水凝胶形成性材料，本发明的制剂可以是包含下述(1)GAG衍生物A、以及选自(2)GAG衍生物B和(3)化合物C中的一种的制剂，

(1)经由酰胺键和二价间隔基团，将SPAAC型反应性基团导入到GAG的羧基中得到的GAG衍生物A；

(2)经由酰胺键和二价间隔基团，将与(1)的反应性基团互补的反应性基团导入到羧基中得到的GAG衍生物B；

(3)由具有至少两个与(1)的反应性基团互补的反应性基团的以下结构定义的化合物C。

[化4]

[式中，

Y相同或不同，是与(1)的反应性基团互补的反应性基团；

Z为n价的间隔基团，

n为2或2以上的整数]。即，本发明的一个实施方式的制剂包含：(1)GAG衍生物A和(2)GAG衍生物B的组合；或(1)GAG衍生物A和(3)化合物C的组合。

在构成本发明的制剂的GAG衍生物A和B中，SPAAC型反应性基团或与该反应性基团互补的反应性基团借助二价的间隔基团与GAG的羧基形成酰胺键。该二价的间隔基团只要不阻碍SPAAC型反应性基团和与该反应性基团互补的反应性基团的反应，就能够使用任意的链状基团。作为这样的二价间隔基团，能够使用上述GAG交联体中使用的基团R¹、R²、R³、R⁴和R⁵，即亚烷基、亚烯基或亚炔基，该基团中的-CH₂-可以被>C＝O、-CONH-、亚芳基、-O-或-S-取代。

构成本发明的制剂的化合物C所具有的n价的间隔基团也与二价的间隔基团相同，能够使用由烷基、烯基或炔基衍生的n价的基团，该基团中的-CH₂-可以被>C＝O、-CONH-、亚芳基、-O-或-S-取代。在此，作为亚芳基，能够使用1,2-亚苯基、1,3-亚苯基或1,4-亚苯基等亚苯基，其中能够优选使用1,4-亚苯基。在此，n为2或2以上的整数，优选为2。

本发明的制剂中，GAG衍生物A和B以及化合物C具有SPAAC型反应性基团或与该反应性基团互补的反应性基团。SPAAC型反应是指在使叠氮基与亚炔基反应而形成1,2,3-三唑环的点击型反应中，使用亚环炔基作为亚炔基的反应。点击型反应不会产生不希望的副产物，能够快速且简单、有效地形成1,2,3-三唑环。通过使用亚环炔基作为亚炔基，不需要铜催化剂，由于环结构所具有的应变，所以迅速且高选择性地进行交联反应。本发明的制剂中能够采用的GAG衍生物A和B以及化合物C能够具有任意的SPAAC型反应性基团或与该反应性基团互补的反应性基团。SPAAC型反应性基团或与该反应性基团互补的反应性基团具体能够使用由碳原子数7～9、优选碳原子数7或8、更优选碳原子数8的亚环炔基衍生的基团与叠氮基的组合。作为该亚环炔基，能够举出式：

[化5]

[式中，

其中，B表示与间隔基团(例如，二价的间隔基团)的键合部位；

在Y¹、Y²、Y³、Y⁴、Y⁵和Y⁶中相邻的两个基团中，R⁶和R⁶'可以与键合的环原子一起形成饱和或不饱和的3～6元环，上述键B也能够与该3～6元环键合]

所表示的环状基团。作为该3～6元环，能够举出：3～6元的环烷基环、苯基环或5～6元的杂芳基环等。

作为该SPAAC型反应性基团或与该反应性基团互补的反应性基团的具体例，能够优选举出具有下述骨架的反应性基团与叠氮基的组合。

[化6]

能够更优选举出下述基团与叠氮基的组合。

[化7]

GAG衍生物A和B中，作为具有亚环炔基作为SPAAC型反应性基团的GAG衍生物，能够优选举出选自下述物质：

[化8]

中的环辛炔衍生物胺的氨基与GAG的羧基形成酰胺键而得到的GAG衍生物。

另外，GAG衍生物A和B中，作为具有叠氮基作为SPAAC型反应性基团的GAG衍生物，能够优选举出选自下述物质：

N₃-CH₂-CH₂-NH₂；

N₃-CH₂-CH₂-CH₂-NH₂；

N₃-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-NH₂；

N₃-CH₂-C(＝O)-NH-CH₂-CH₂-NH₂；

N₃-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-NH₂；

N₃-CH₂-[CH₂-O-CH₂]_2-10-CH₂-NH₂

中的叠氮胺的氨基与GAG的羧基进行缩合反应而得到的GAG衍生物。

另外，作为化合物C，能够优选举出下述化合物。

[化9]

本发明的制剂中，GAG衍生物A、B和化合物C所具有的SPAAC型反应性基团以及与该反应性基团互补的反应性基团以1：1～1：4的摩尔比存在，优选以1：1的摩尔比存在。

本发明中能够利用的另一种水凝胶是国际公开第97/22371号小册子中记载的将包含伯氨基(-NH₂)或硫醇基(-SH)等多个亲核基团的第一合成聚合物与包含琥珀酰亚胺基等多个亲电子基团的第二合成聚合物键合而得到的凝胶。根据国际公开第97/22371号小册子的教导，能够通过调节包含各衍生物的溶液的性质并混合，从而进行凝胶化。

本发明中能够利用的另一种水凝胶是由多支链聚亚烷基二醇(Multi-arm-PEG)衍生物、优选包含N-羟基琥珀酰亚胺酯基的多支链聚乙二醇(PEG)衍生物和包含与N-羟基琥珀酰亚胺酯基互补的反应性官能团的化合物的组合形成的水凝胶。多支链PEG衍生物是指多个具有反应性官能团的PEG衍生物以与反应性官能团相反的末端键合而成的化合物。多支链聚亚烷基二醇衍生物以及包含与N-羟基琥珀酰亚胺基酯基互补的反应性官能团的化合物例如能够使用市售的化合物。

此外，对PEG的支链数和取代基的种类没有特别的限制。因此，能够根据市售的多支链PEG衍生物的合成法任意地制备在市售的多支链PEG衍生物中观察不到的结构，例如具有马来酰亚胺基的8支链PEG衍生物或具有硫醇基的6支链PEG衍生物等，本发明中也能够利用这样的多支链PEG衍生物。

本发明中能够利用的另一种水凝胶是由包含硫醇基的透明质酸衍生物和包含与硫醇基互补的反应性官能团的化合物的组合形成的水凝胶。包含硫醇基的透明质酸衍生物和包含与硫醇基互补的反应性官能团的化合物能够使用例如市售的物质。

《对象》

本发明的制剂的使用对象可举出：可能患有眼睛疾病的任意动物，例如人以及非人动物(例如狗、猫、兔、大鼠或小鼠等)。

本发明中的玻璃体手术是指在治疗、预防、防止再次发生眼睛疾病的基础上剥离眼内膜的手术。在此，眼内膜例如可举出：玻璃体膜或增生膜等。

作为眼睛疾病，没有限定，例如，可举出：视网膜剥离、糖尿病视网膜症、增生性玻璃体视网膜症、增生性糖尿病视网膜症、黄斑部疾病(黄斑裂孔、黄斑前膜、玻璃体黄斑牵拉综合征、黄斑浮肿、老年黄斑变性)等。

本发明的制剂的给药量根据给药的患者的症状，特别是眼睛的状态、年龄、给药方法等而不同，但只要是将眼内膜剥离术用制剂给药于玻璃体腔而能够视觉辨认眼内膜的量即可。虽然没有限定，但例如用于眼内膜剥离术的制剂在玻璃体手术时通常可举出1～100mg。

《可视化剂》

本发明的制剂除了上述成分以外，还可以包含作为玻璃体手术时的辅助剂的玻璃体的可视化剂。在使用了本发明的制剂的眼内膜的剥离方法中，可视化剂通过玻璃体的可视化来辅助眼内膜的剥离。

作为可视化剂，只要是作为玻璃体手术时的辅助剂使用的可视化剂即可，没有特别限定，例如，可举出：亮蓝G这样的色素或曲安奈德(Triamcinolone Acetonide)等。关于应用等，能够参照玻璃体手术中使用的方法来应用。

<注射器>

本发明的一个方式是本发明的用于眼内膜剥离术的制剂，其中，凝胶化开始后的制剂能够注射。

另外，本发明的另一方式涉及填充有本发明的制剂的注射器(以下，有时称为“本发明的注射器”)。此外，上述用于眼内膜剥离术的制剂中说明的事项全部适用于本发明的注射器的说明。

本发明的制剂是在玻璃体手术中向玻璃体腔进行给药，并适合用于眼内膜剥离术的制剂，因此其给药方式优选注射给药，特别优选通过注射的局部给药。

例如，本发明的注射器在注射器腔中收纳有本发明的制剂，在注射器腔的基端侧连接有柱塞。在注射器腔的另一个基端侧具有眼内膜剥离术用制剂的排出口。该排出口也可以设有用于连接注射针的连接部。

此外，作为注射器的材料，只要是能够稳定地保持包含水凝胶形成性材料的溶液的材料即可，没有限定，能够使用视觉辨认性优异的玻璃、聚乙烯或聚丙烯等聚烯烃类塑料、聚对苯二甲酸乙二醇酯或聚碳酸酯等塑料等。

在凝胶化通过两种以上的化合物的混合而开始的情况下，本发明的注射器优选使用以下注射器，所述注射器能够以如下方式混合：在注射器中具有两种以上的腔室，并分别收纳有本发明的制剂，当使柱塞前进时，两种以上的化合物被混合，从而形成水凝胶。

在一个实施方式中，将包含具有反应性官能团的水凝胶形成性材料的溶液和包含具有与该反应性官能团互补的反应性官能团的化合物的溶液分别收容在不同的注射器腔中。在更具体的一个实施方式中，该具有互补的反应性官能团的化合物也是水凝胶形成性材料。在进一步的实施方式中，在设置于注射器腔的一个基端侧的排出口中，分别收容于不同的注射器腔的两种以上的溶液被混合，通过该混合开始凝胶化。

注射针只要能够使水凝胶突出即可，没有限定，例如，能够应用25G～27G的注射针。

<眼内膜的剥离方法>

本发明的一个方式涉及眼内膜的剥离方法(以下，有时称为“本发明的眼内膜的剥离方法”)，其包括将本发明的制剂应用于患者的眼内膜上。此外，上述用于眼内膜剥离术的制剂、注射器中说明的事项全部适用于本发明的眼内膜的剥离方法的说明。

另外，本发明的另一优选方式是一种眼内膜的剥离方法，其还包括剥离眼内膜。眼内膜的剥离方法除了使用水凝胶以外，还可以使用以往公知的玻璃体手术中的眼内膜剥离方法，但通过使用本发明的制剂，剥离粘附有水凝胶的眼内膜，因此与剥离眼内膜本身的情况相比，能够有效地剥离眼内膜。

虽然没有限定，但从操作性等观点出发，可以从本发明的制剂的眼内给药开始起例如经过10秒以上、20秒以上或30秒以上后剥离所述眼内膜。眼内膜的剥离可以在从本发明的制剂的眼内给药开始起例如1小时以内、30分钟以内或15分钟以内进行。

实施例

以下，使用实施例对本发明的优选实施方式进行更详细的说明，但本发明的技术范围并不限定于下述实施例。

(实施例1)

1-1.水凝胶形成性材料的制备

按照日本特开2016-172783号公报中记载的方法，制备了二液混合型的水凝胶形成性材料。具体的方法如下所示。

制备了透明质酸钠(重均分子量：约30万)的50％(v/v)乙醇水溶液(透明质酸钠的终浓度5mg/mL、HA反应溶液)。

制备了氮杂二苯并环辛炔胺(DBCO-amine)的0.5M盐酸/乙醇的混合溶液(1：1(v/v))(DBCO-amine的终浓度0.12mmol/g、DBCO-amine溶液)。在存在缩合剂(4-(4,6-二甲氧基－1,3,5－三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐；DMT-MM)的情况下，向HA反应溶液(60mL)中添加1mL的DBCO-amine溶液。将反应溶液在25℃下搅拌一夜后，用氢氧化钠水溶液将pH调节到11以上而使反应停止。进而，利用醋酸水溶液将反应液的pH调节为6～7。将1.5g的氯化钠和90mL的乙醇添加到反应液中，使生成物沉淀。去除上清后，用乙醇清洗沉淀3次。使得到的沉淀干燥，得到HA-DBCO(水凝胶形成性材料1)。

制备2-叠氮乙胺盐酸盐(AEA)的50％(v/v)乙醇水溶液(AEA的终浓度0.12mmol/g、AEA溶液)。在存在缩合剂(DMT-MM)的情况下，向HA反应溶液(60mL)中添加1mL的AEA溶液。然后，进行与上述HA-DBCO的制备方法相同的处理，得到HA-AEA(水凝胶形成性材料2)。

1-2.动态粘弹性的测定

准备用0.0184％的BSS PLUS 500眼灌注液(BSS、Alcon公司)制备成各种浓度的HA-DBCO溶液以及HA-AEA溶液。作为各种浓度的水凝胶形成性材料的凝胶化指标，以HA-DBCO和HA-AEA等重量的方式混合两溶液后，立即测定动态粘弹性。此外，作为动态粘弹性的测定中使用的试验试样，在混合HA-DBCO溶液以及HA-AEA溶液时添加亮蓝G(终浓度：0.27mg/mL、BBG)作为可视化剂。

(测定器具)

流变仪：Modular Compact Rheometer MCR302(Anton Paar)

探针：PPT25-SN38699[流变仪的试样台表面与探针表面之间的距离：0.5mm]

试样量：280μL

测定温度：25℃

频率：1Hz

测定时间：900秒

间隔：1秒

分析软件：RHEOPLUS/32V3.62。

1-3.体外剥离性能评价

以作为玻璃体手术时的可视化材料使用的曲安奈德(TA)制剂(MaQaid(注册商标)等、WAKAMOTO PHARMACEUTICAL CO.,LTD.)为模型，对各种浓度的水凝胶形成性材料评价剥离性能。

使40mg的MaQaid(注册商标)以成为10mg/mL的方式悬浮于BSS，得到TA母液。在24孔板中分别注入2mL/孔的BSS。将进行了旋涡处理的TA母液以200μL分注到各孔中(2mg的TA/孔)，在孔底面形成TA层。将350μL通过与上述1-2同样的方法制备的HA-DBCO与HA-AEA的混合液(搅拌后5～10秒)以覆盖TA层整个面的方式迅速排出。在留置任意时间形成水凝胶后，使用镊子将水凝胶从孔中去除。将残留在孔中的TA回收到微离心管中，通过离心分离(＞9200×g、5分钟)去除上清。将沉淀的TA悬浮于水中，用分光光度计测定浊度(OD660nm)。以1mg/mL的TA/BSS悬浮液的浊度为对照组，求出各孔中的TA残留量。由分注于孔中的TA和TA残留量计算出剥离率。

剥离率(％)＝(2mg-TA残留量)/2mg×100

1-4.结果

留置时间5分钟的结果示于图2。在将HA-DBCO与HA-AEA混合后，立即开始凝胶化。如图2所示，各试验试样的储能模量的变化示出了sigmoid曲线那样的形状。由动态粘弹性的测定结果计算出储能模量(G'(Pa))的每单位时间(秒)的最大变化率(V_max(Pa/秒))。

结果示于表1。水凝胶形成性材料的浓度是指HA-DBCO和HA-AEA的合计量。留置时间表示留置水凝胶形成性材料的时间。剥离率是用Duplicate进行的剥离性能评价的平均值。

[表1]

暗示了通过使用凝胶化开始后的V_max超过0且3以下的含有水凝胶形成性材料的溶液能够有效地剥离眼内膜。

此外，市售的作为白内障手术/眼内镜植入手术辅助剂(1％透明质酸钠制剂)的OPEGAN Hi(注册商标)的储能模量不随时间变化(V_max为0.00(Pa/秒))，不能够去除TA。

(实施例2)

2-1.在体剥离性能评价

将新鲜猪眼在眼球赤道部前后切断，一边注意使玻璃体膜残留在视网膜上一边剥离去除玻璃体。将0.05mL的Kenacort(注册商标、40mg/mL的TA悬浮制剂、Bristol MyersSquibb株式会社)涂布在玻璃体膜上而形成TA层。然后，将通过与上述1-2同样的方法制备的0.1mL的HA-DBCO和HA-AEA的等重量混合液(以HA-DBCO和HA-AEA的总量计，为1.20重量％)，以覆盖TA层整个面的方式快速排出。留置5分钟而形成水凝胶后，使用镊子从猪眼中去除水凝胶。

2-2.结果

将TA层形成时(图3的A)、刚排出混合液后(图3的B)以及留置3分钟后(图3的C)的水凝胶去除作业中的猪眼用实体显微镜(倍率：8倍)进行观察。另外，将去除水凝胶后的猪眼用光学显微镜(倍率：32倍、图4)进行观察。图3的A中，中央部的白色部分是形成的TA层。图3的B中，中央部的深色部分是排出的混合液。在图3的C和图4中，箭头表示水凝胶所形成的边界。

如图3的C和图4所示，通过去除水凝胶，能够将玻璃体膜与TA层一起剥离干净。

(实施例3)

3-1.体内剥离性能评价

使用家兔来评价水凝胶形成性材料的玻璃体膜剥离性能和增生膜剥离性能。眼内膜剥离术在九州大学材料中心及附属的手术室中进行。

用于眼内膜剥离术的手术显微镜使用Zeiss公司的OPMI，玻璃体手术器械使用Alcon公司的Aguilas，以与通常的临床手术相同的设定进行。

后部玻璃体模型动物通过在眼内膜剥离术的两周前，对家兔(成熟家兔Dutch品系、雄)进行玻璃体内注射0.1mL的室内清洁空气来制作。

增生性玻璃体视网膜症模型动物是对上述制作的后部玻璃体模型动物进一步进行玻璃体内注射培养色素上皮细胞。注射细胞后，饲养家兔28天，通过眼底检查确认到增生膜的形成后，进行眼内膜剥离术。

在眼内膜剥离术中，在巩膜上安装4根套管针。在4根套管针中的2根上设置吊灯照明系统，1根上设置灌注系统，剩余的1处作为端口使用。接着，进行玻璃体切除，露出后部玻璃体以及增生膜(增生性玻璃体视网膜症模型动物的情况)后，向玻璃体腔注射Kenacort(注册商标)并吸除多余的浮游Kenacort。使用注射器和27G注射针，以覆盖Kenacort的方式在混合后30秒以内滴加0.1mL的采用与上述1-2同样的方法制备的HA-DBCO和HA-AEA的等重量混合液(以HA-DBCO和HA-AEA的总量计，为1.15重量％)(图5、虚线内为水凝胶形成性材料的存在区域)。在显微镜观察下观察3分钟，使用玻璃体手术用镊子剥离后部玻璃体膜以及增生膜(增生性玻璃体视网膜症模型动物的情况)，使用玻璃体切割器切除吸掉这些。实验后的眼球在家兔安乐死后摘出，进行病理学评价。

3-2.结果

注射到家兔眼中的试验试样在3分钟内水凝胶化，固化成能够用玻璃体手术用镊子把持的硬度。水凝胶与后部玻璃体膜或增生膜一体地凝胶化。若以把持并剥离水凝胶的方式进行操作，则能够切开后部玻璃体膜进行剥离。在增生膜中也是同样地，能够通过把持水凝胶而去除(图6、虚线内是水凝胶的形成区域)。剥离的玻璃体膜以及水凝胶能够用玻璃体切割器容易地切除/吸掉，认为对玻璃体手术高效化是有效的(图7、虚线内是水凝胶的形成区域)。

(实施例4)

4-1.安全性评价

以体内方式评价水凝胶形成性材料的安全性。手术显微镜使用Zeiss公司OPMI。作为试验试样，使用通过与上述3-1同样的方法制备的HA-DBCO和HA-AEA的等重量混合液。

在手术时制作侧端口并调节眼压后，使用注射器和27G注射针将0.1mL试验试样注入玻璃体腔内。术后立即观察眼底，确认了试验试样。在术后1天、3天、5天、7天，使用接触式眼压计(iCare)测定眼压，确认前眼部后，滴注散瞳药(1滴Midrin P滴眼液)后观察眼底。

4-2.结果

整个试验期间，没有发现角膜浮肿、玻璃体、视网膜的病态变化。关于眼压，在术后1～3天在正常范围内观察到轻度上升，但在7日之前正常化。试验试样在刚注入后与玻璃体粘附，但逐渐膨化、溶解，在第5天之前浮游在玻璃体腔中，在第7天消失。观察期后，使用光学显微镜和电子显微镜进行病理学观察，未见明显的病态变化。

(实施例5)

5-1.使用市售的水凝胶形成性材料的剥离性能评价(1)

使用聚乙二醇衍生物作为水凝胶形成性材料，评价作为眼内膜剥离术用制剂的应用性。在试验中，使用包含N-羟基琥珀酰亚胺酯-聚乙二醇(NHS-PEG)和三赖氨酸胺溶液(交联剂)的试剂盒化的市售的硬膜密封剂(DuraSeal；Covidien Inc.)。

将试剂盒中所包含的NHS-PEG和交联剂分别用BSS稀释4倍。将稀释NHS-PEG与稀释交联剂以1：1(体积比)或1：0.9(体积比)混合，制成试验试样。将稀释NHS-PEG与稀释交联剂混合后，立即开始凝胶化。

按照上述1-2及1-3，进行动态粘弹性的测定以及体外剥离性能评价。

5-2.结果

混合NHS-PEG与交联剂后，立即开始凝胶化。由动态粘弹性的测定结果计算出储能模量(G'(Pa))的每单位时间(秒)的最大变化率(V_max(Pa/秒))。

结果示于表2。

[表2]

示出了：即使在使用聚乙二醇衍生物作为水凝胶形成性材料的情况下，通过稀释或调节交联剂添加量等，将制剂的凝胶化开始后的V_max调节为超过0且3以下，由此能够作为眼内膜剥离术用制剂而进行应用。

另一方面，示出了：在水凝胶形成性材料仅为聚乙二醇衍生物的情况下，剥离时的延展性高，在狭窄的眼内空间中的操作性方面，包含糖胺聚糖衍生物的制剂更优异。

(实施例6)

6-1.使用市售的水凝胶形成性材料的剥离性能评价(2)

使用市售的基于透明质酸的细胞的三维培养用支架材料作为水凝胶形成性材料，评价作为眼内膜剥离术用制剂的应用性。在试验中，使用包含硫醇修饰透明质酸(Glycosil)和硫醇反应性聚乙二醇二丙烯酸酯(Extralink)的试剂盒化的市售的三维培养用支架材料(HyStem；Advanced BioMatrix)。

将试剂盒中所含有的Glycosil用BSS稀释，制备2重量％Glycosil溶液。另外，将Extralink用BSS稀释，配制成1重量％、2重量％或3重量％的Extralink溶液。将Extralink溶液和Glycosil溶液以1：2(体积比)混合，制成试验试样。混合Extralink溶液和Glycosil溶液后，立即开始凝胶化。

按照上述1-2，测定动态粘弹性。另外，按照上述1-3，将3重量％Extralink溶液与Glycosil溶液的混合液作为试验试样，进行体外剥离性能评价(留置时间5分钟)。

6-2.结果

由动态粘弹性的测定结果计算出储能模量(G'(Pa))的每单位时间(秒)的最大变化率(V_max(Pa/秒))。结果示于表3。

[表3]

-：未实施

通过稀释或调节反应当量等，将制剂的凝胶化开始后的V_max调节为大于0且3以下，由此能够作为眼内膜剥离术用制剂而加以应用。

(实施例7)

7-1.延展性的测定

将通过与上述1-2同样的方法制备的HA-DBCO和HA-AEA的等重量混合液(以HA-DBCO和HA-AEA的总量计，为1.1重量％、糖胺聚糖衍生物1)以及上述5-1所述的稀释了4倍的市售的硬膜密封剂(稀释NHS-PEG：稀释交联剂＝1：1(体积比)、聚乙二醇衍生物)、以及6-1所述的细胞支架材料(2重量％Glycosil溶液：3重量％Extralink溶液＝2：1(体积比)糖胺聚糖衍生物+聚乙二醇衍生物)作为试验试样，测定制剂的延展性。

延展性的测定是使用由聚甲醛制作的圆筒形的探针(接触面面积：78.5mm²)的质构仪(TA.XT plus,Stable Micro Systems,英国)，按照渡边等人的方法(文献：IppeiWatanabe et.al,Chem.Pharm.Bull.67(3),277-283(2019))通过压缩试验法而进行。测定在20℃～25℃下进行。具体而言，将聚苯乙烯制灭菌皿(外径：90mm)固定在测定台上，向其中央分注试验试样(0.1mL)。留置3分钟后，使探针以0.5mm/sec向下方移动，与试验试样粘附，立即以0.5mm/sec向上方移动8秒钟。测定各试验试样的延展性发生断裂(试验试样自身断裂或试验试样从与探针或培养皿的接触面剥离)的时刻的力。拉伸应力(N/mm²)通过将测定值除以探针的单位面积而计算出。

7-2.结果

延展性的测定结果示于表4。

[表4]

表4

在仅使用聚乙二醇衍生物的情况下，在测定期间未观察到断裂，其拉伸应力小于-1.34×10^-3N/mm²。

包含糖胺聚糖衍生物的眼内膜剥离术用制剂的拉伸应力均为-3×10^-4N/mm²以上。

显示出：在制剂的凝胶化开始起3分钟后的拉伸应力为-3×10^-4N/mm²以上时，特别适合作为眼内膜剥离术用制剂。

(实施例8)

8-1.水凝胶形成性材料的制备

除了将相对于HA反应溶液(60mL)的DBCO-amine溶液的添加量变更为3mL以外，按照实施例1的方法，得到HA-DBCO(水凝胶形成性材料3)。另外，除了将相对于HA反应溶液(60mL)的AEA溶液的添加量变更为3mL以外，按照实施例1的方法，得到HA-AEA(水凝胶形成性材料4)。

按照上述1-2，测定动态粘弹性。另外，根据上述1-3，进行体外剥离性能评价(留置时间5分钟，水凝胶形成性材料的浓度＝0.78重量％)。

8-2.反应性官能团的取代度

使用实施例1和8中制备的HA-DBCO，通过¹H-NMR解析求出反应性官能团(亚环炔基)的每HA二糖单位的取代度(DS)。具体而言，将约10mg的HA-DBCO溶解于1mL的重水(D₂O)中，将其冷冻干燥。将冷冻干燥粉末再溶解于0.7mL的D₂O中，转移到NMR管中。使用NMR装置(Bruker AVANCE III 500，500MHz型)取得¹H-NMR数据，并分析数据。在HA-DBCO的¹H-NMR解析中，在7-8ppm处检测出来自作为亚环炔基的部分结构的芳香族质子的化学位移。

对于实施例1和8中制备的HA-AEA，反应性官能团(叠氮基)的每透明质酸二糖单位的取代度(DS)按照以下顺序确定。具体而言，通过使HA-AEA与过量的DBCO-Amine进行点击反应，使HA-AEA的AEA残基变更为下述结构(下述结构中，*表示与亚乙基的键合部位。)。对于通过点击反应得到的生成物，与HA-DBCO时同样地取得¹H-NMR数据。在该¹H-NMR分析中，在7-8ppm处检测出来自芳香族质子的化学位移。

[化10]

通过计算出芳香族质子与来源于作为透明质酸二糖的部分结构的N-乙酰基的质子(1.9-2.1ppm)的相对峰面积(积分值)的比率，求出DS(用百分率表示取代基的数量相对于透明质酸二糖重复单元的数量的值)(下述式3～5)。另外，式3中的芳香族质子的数目使用8作为常数，式4中的来源于N-乙酰基的质子的数目使用3作为常数。其结果示于表5。

(式3)值A＝[芳香族质子的各峰面积的相加值]/[芳香族质子的数量]

(式4)值B＝[来自N-乙酰基的质子的峰面积的相加值]/[来自N-乙酰基的质子的数量]

(式5)DS[％]＝(值A/值B)×100

[表5]

表5

8-3.结果

将HA-DBCO和HA-AEA混合后，立即开始凝胶化(V_max为0.70(Pa/秒)，剥离率为79％)。以上示出了：通过提高反应性官能团的取代度，即使水凝胶形成性材料为低浓度，也能够提高V_max。

(实施例9)

9-1.使用市售的水凝胶形成性材料的剥离性能评价(3)

稀释市售的纤维蛋白原制剂(纤维蛋白糊)，作为水凝胶形成性材料使用，评价作为眼内膜剥离术用制剂的应用性。在试验中，使用包含纤维蛋白原和凝血酶的试剂盒化的市售的血浆分级制剂(Beriplast P Combi-Set组织粘附用；CSL Behring)。

按照上述1-2和7-1.进行动态粘弹性和延展性的测定。

根据上述1-3，在24孔板的孔底面形成TA层。将试剂盒中所含的纤维蛋白原含有液(组合A)和凝血酶含有液(组合B)用BSS分别稀释10倍。将175μL的稀释纤维蛋白原含有液与10μL的BBG溶液(10mg/mL)的混合液重叠在TA层上。然后，再重叠175μL的稀释凝血酶含有液。在稀释纤维蛋白原含有液上重叠稀释凝血酶含有液后，立即开始凝胶化。按照上述1-3.，求出留置5分钟后的剥离率。

9-2.结果

由动态粘弹性的测定结果计算出储能模量(G′(Pa))的每单位时间(秒)的最大变化率(V_max(Pa/秒))。另外，由延展性的测定结果算出拉伸应力(N/mm²)。

结果示于表6。

[表6]

表6

V_max(Pa/秒)	拉伸应力(N/mm²)	剥离率(％)
			0.02	-2.89×10^-4	97

如上所述，显示出能够作为眼内膜剥离术用制剂而加以应用。

[产业上的可利用性]

本发明的用于眼内膜剥离术的制剂以及眼内膜的剥离方法能够简便且有效地剥离眼内膜，因此作为玻璃体视网膜手术等中的眼内膜的剥离剂有用。

与具体的实施例和各种实施方式相关联地对本发明进行了记载，但是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可实现本说明书中记载的实施方式的多种改变或应用，这对于本领域技术人员来说是容易理解的。

本申请主张基于2020年3月25日向日本专利局提交的日本特愿2020-54641号的优先权，其内容通过参照作为整体加入本申请。

Claims

1.水凝胶形成性材料在制备用于眼内膜剥离术的制剂中的用途，其特征在于，

所述水凝胶形成性材料包含具有反应性官能团的糖胺聚糖衍生物和具有与所述反应性官能团互补的反应性官能团的化合物，

所述反应性官能团和所述互补的反应性官能团是发生点击反应的官能团的组合，

所述水凝胶形成性材料是能够通过混合所述具有反应性官能团的糖胺聚糖衍生物和所述具有互补的反应型性官能团的化合物而使交联反应开始、从而形成水凝胶的材料，

所述用于眼内膜剥离术的制剂在凝胶化开始3分钟后使用质构仪测定的拉伸应力为-3×10^-4～-0.1×10^-4N/mm²；并且在温度25～40℃、频率1Hz下测定的动态粘弹性中，满足下述式1：

(式1)0＜V_max≤3

其中，式1中，V_max是凝胶化开始后的储能模量最大变化率，单位为Pa/秒。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述糖胺聚糖衍生物包含透明质酸或其医学上允许的盐。

3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述眼内膜为选自玻璃体膜和增生膜中的至少一者。

4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述制剂包含可视化剂。

5.根据权利要求1所述的用途，其中，所述制剂在温度25～40℃、频率1Hz下测定的动态粘弹性中，满足下述式2：

(式2)0.05≤V_max≤2

其中，式2中，V_max与式1中相同，单位为Pa/秒。

6.根据权利要求1所述的用途，其中，所述V_max为0.3Pa/秒以上。

7.根据权利要求1所述的用途，其中，所述V_max为1.5Pa/秒以下。

8.根据权利要求1所述的用途，其中，所述V_max是从凝胶化开始到900秒为止的储能模量最大变化率。

9.根据权利要求1所述的用途，其中，所述水凝胶形成性材料包含下述糖胺聚糖衍生物A、以及选自下述糖胺聚糖衍生物B和化合物C中的一种：

(1)经由酰胺键和二价间隔基团，将SPAAC型反应性基团导入到糖胺聚糖的羧基上而得到的糖胺聚糖衍生物A；

(2)经由酰胺键和二价间隔基团，将与(1)的反应性基团互补的反应性基团导入到羧基上而得到的糖胺聚糖衍生物B；

(3)由具有至少2个与(1)的反应性基团互补的反应性基团的下述结构定义的化合物C，

上式中，Y相同或不同，是与(1)的反应性基团互补的反应性基团；Z是n价的间隔基团；n是2以上的整数。

10.根据权利要求1所述的用途，其中，所述发生点击反应的官能团的组合是叠氮基和亚环炔基的组合。

11.根据权利要求1所述的用途，其中，所述水凝胶形成性材料是预先以溶液形态收容在容器中的形态，或者，收容在容器中的干燥状态的所述水凝胶形成性材料在使用时是溶解在溶剂中的形态。