CN115192730A - 一种靶向pd-l1的双特异性多肽纳米药物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种靶向PD‑L1的双特异性多肽纳米药物及其制备方法和应用，所述靶向PD‑L1的双特异性多肽纳米药物包括通过酰胺键依次连接的肿瘤微环境靶向调节单元、连接单元、自组装单元和PD‑L1阻断单元。本发明所涉及的双特异性多肽纳米药物一方面特异性结合肿瘤细胞表面过表达的CXCR4蛋白，阻断CXCR4/SDF‑1信号通路，改善肿瘤微环境，增加T细胞的浸润；另一方面特异性结合肿瘤细胞表面过表达的PD‑L1蛋白，阻断PD‑1与PD‑L1相互作用，恢复T细胞对肿瘤细胞的杀伤，增强膀胱癌的免疫治疗。与肿瘤细胞表面的蛋白结合后，具有组装能力的片段由于多肽分子的运动受到限制，降低了其自组装所需的活化熵进而触发其在原位的自组装形成纳米纤维，实现长效阻断受体的信号通路。

Description

一种靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，涉及一种肿瘤免疫药物及其制备方法和应用，具体涉及一种靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物及其制备方法和应用。
背景技术
膀胱癌是泌尿系统三大常见恶性肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中居第12位。免疫疗法为膀胱癌的治疗带来了重大突破，尤其是以PD-1/PD-L1为代表的免疫检查点抑制剂。针对PD-L1的免疫抑制剂的出现虽然相比PD-1要晚，但种类较多，atezolizumab、avelumab(MSB0010718C)、MP-DL3280A(RG7446)、durvalumab(MEDI4736)、AMP-514和AMP-22皆为能够识别和结合PD-L1的单抗，并且能取得与PD-1单抗类似的效果。至此，抑制检查点PD-1及其配体PD-L1的药物已经在许多肿瘤治疗中显示出了良好的治疗效果，尤其是膀胱癌。膀胱癌免疫检查点阻断治疗成果显著，但由于实体瘤内高度纤维化，T细胞浸润不足，依然面临患者治疗应答率低的严峻挑战。因此，探索一种增强膀胱癌免疫治疗的新方法已成为了临床上迫切需要解决的实际问题。
小分子多肽由于其具有的生物活性、特异性、化学可修饰性、靶向性和生物稳定性等特点成为首选的材料体系。靶向多肽是一种能够特异性结合肿瘤细胞或组织的多肽，具有高亲和力、高稳定性、低毒性等优点。可与抗癌药物偶联用于早期肿瘤病变部位的诊断和特异性给药，在治疗癌症方面有着良好前景。随着肿瘤学研究的深入，小分子肿瘤靶向多肽药物的筛选、合成以及新的靶点的发现和治疗均取得一定进展。Smriti Gurunga等人通过噬菌体展示技术筛选出来的靶向PD-L1的多肽分子具有靶向性强，特异性高的优点。
趋化因子受体4(CXCR4)属于趋化因子受体亚家族，是趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的特异性受体，具有七次跨膜结构，是一种G蛋白偶联受体，包含7个穿膜区、一个胞外N端和一个胞内C端。在膀胱癌细胞中，CXCR4呈现出高表达的状态，而在正常的膀胱黏膜中CXCR4几乎无表达。有研究表明，CXCR4的高表达与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、髓源性抑制细胞(MDSC)、调节性T细胞(Treg)、肿瘤相关中性粒细胞(TAN)等细胞的浸润相关，发挥促肿瘤作用。CXCR4已被证实可以通过募集Treg和MDSC促进血管生成来增强肿瘤免疫逃避，并促进肿瘤相关成纤维细胞(CAF)依赖性免疫抑制。CXCR4/SDF-1信号促进CAF的募集、激活及基质产生。以上结果均表明CXCR4在膀胱癌的免疫抑制过程中扮演着重要的角色，因此阻断CXCR4/SDF-1信号通路是辅助膀胱癌免疫治疗的一种潜在方法。
当前，超分子组装策略已被广泛用作治疗膀胱癌的有前途的方法。这些基于超分子组装的纳米颗粒或粘膜粘附生物材料中的大多数都集中在延长药物保留时间和增强药物渗透性，以增强膀胱内化学药物递送的功效。尽管与单纯药物滴注相比观察到疗效有所提高，但由于其几乎没有活性的靶向能力，严重的副作用如尿道刺激，膀胱炎和血尿限制了其应用。因此，需要开发新的治疗方法以减少膀胱癌的术后复发。多肽自组装的主要推动力为弱作用力，例如：氢键、范德华力、静电相互作用等。并且通过氨基酸序列的设计，可实现特定形貌的可控超分子自组装。同时，多肽的组装可以在复杂的生理环境中实现。组装诱导滞留效应(Assembly Induced Retention,AIR)效应可以有效地优化生物活性分子在体内的生物分布，增加药物的肿瘤渗透性，为发展新型高效、低毒的生物材料提供新的思路。
因此，如何利用AIR效应在肿瘤细胞膜上原位构建基于多肽的纳米纤维，从而实现降低肿瘤微环境中的肿瘤相关成纤维细胞的密度，重塑肿瘤免疫微环境，促进T细胞的浸润；同时阻断PD-1/PD-L1的信号传递，从而使功能受抑制的T细胞恢复对肿瘤细胞的识别功能，通过自身免疫系统达到抗癌作用，最终增强膀胱癌的免疫治疗是目前急需解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种肿瘤免疫药物及其制备方法和应用，具体涉及一种靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，所述靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物包括通过酰胺键依次连接的肿瘤微环境靶向调节单元、连接单元、自组装单元和PD-L1阻断单元。
本发明所涉及的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物包含的肿瘤微环境靶向调节单元和PD-L1阻断单元，具有靶向识别功能、肿瘤微环境调节功能和免疫检查点阻断功能，通过分子的特异性主动靶向到肿瘤部位，一方面特异性结合肿瘤细胞表面过表达的CXCR4蛋白，阻断CXCR4/SDF-1信号通路，改善肿瘤微环境，增加T细胞的浸润；另一方面特异性结合肿瘤细胞表面过表达的PD-L1蛋白，阻断PD-1与PD-L1相互作用，恢复T细胞对肿瘤细胞的杀伤，增强膀胱癌的免疫治疗。与肿瘤细胞表面的蛋白结合后，具有组装能力的片段由于多肽分子的运动受到限制，降低了其自组装所需的活化熵进而触发其在原位的自组装形成纳米纤维，实现长效阻断受体的信号通路。该双特异性多肽纳米药物为肿瘤的免疫治疗提供了新的方法，同时其不会在体内产生明显副作用，具有良好的生物相容性。
该双特异性多肽纳米药物的设计原理如图1所示，双特异性多肽纳米药物通过肿瘤微环境靶向调节单元及PD-L1阻断单元分别靶向识别并结合肿瘤细胞的CXCR4及PD-L1蛋白，具有组装能力的片段由于多肽分子与靶蛋白结合，进而降低了其自组装所需的活化熵进而触发其在原位的自组装形成纳米纤维，实现分别长效阻断PD-1/PD-L1及CXCR4/SDF-1信号通路，激活T细胞，增加T细胞的浸润，促进T细胞对肿瘤细胞的杀伤，增强膀胱癌的免疫治疗效果。
优选地，所述肿瘤微环境靶向调节单元来自于特异性结合肿瘤基质相关蛋白的分子，包括AMD070、AMD3100、BL-8040、LY2510924、POL5551、SP-13786、Talabostat或Linagliptin中的任意一种。
优选地，所述肿瘤微环境靶向调节单元来自于AMD070或SP-13786。
所述分子AMD070对应的靶向受体为CXCR4；所述分子SP-13786对应的靶向受体为FAP。
优选地，所述PD-L1阻断单元来自于靶向识别并结合PD-L1蛋白的多肽，包括CVRARTR、CLQKTPKQC、WHRSYYTWNLNT或FSGTVTTAGLLF中的任意一种。
优选地，所述PD-L1阻断单元来自于多肽序列CVRARTR。
优选地，所述自组装单元来自于具有组装能力的多肽，包括KLVFFG、KLVFF、FF、YFFGNNQQNY、GSNKGAIIGLM、ITSVV、SYSSYGQS、GNNQQNY、GNQQQQY或GNNNQNY中的任意一种。
优选地，所述自组装单元来自于多肽序列KLVFFG或GNNQQNY。
上述具有组装能力的片段由于多肽分子的运动受到限制，降低了其自组装所需的活化熵进而触发其在原位的自组装形成纳米纤维，实现长效阻断受体的信号通路。
优选地，所述连接单元来自于调节分子长短及亲疏水平衡的多肽，包括DPGLGYL、D(OEG)4或D(OEG)8中的任意一种。
优选地，所述连接单元来自于多肽序列DPGLGYL或D(OEG)4。
作为本发明的优选技术方案，所述靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物具有如式I、式II或式III中任意一种所示的结构。
Figure BDA0003744254970000051
在本发明中，式I所示结构的分子为(AMD070)DPGLGYLKLVFFGCVRARTR，式II所示结构的分子为(AMD070)DPGLGYLGNNQQNYCVRARTR，式III所示结构的分子为(AMD070)D-(OEG)4-KLVFFGCVRARTR，其中KLVFFG和GNNQQNY为自组装序列，可以实现在肿瘤细胞膜上的原位组装，从而实现对肿瘤相关靶点的长效阻断；其中DPGLGYL和D(OEG)4为连接分子，其目的是连接分子的不同单元、调节分子的长短及亲疏水平衡，从而改善分子的性质。
第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物的制备方法，所述制备方法包括：
以末端氨基和侧链氨基均得到保护的氨基酸以及肿瘤微环境靶向调节分子为原料，通过固相合成法(SPPS)，合成所述PD-L1阻断单元、自组装单元和连接单元并连接，而后连接肿瘤微环境靶向调节分子，得到所述靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物。
示例性地，在本发明中，式I所示结构的分子合成步骤如下所述：
(1)将载体树脂进行溶胀；采用末端氨基得到Fmoc保护、侧链氨基得到Boc保护的氨基酸为原料，首先，将第一个氨基酸(精氨酸)的C端固定于树脂上，N端利用Fmoc进行保护；
(2)脱去步骤(1)中第一个氨基酸的N端保护，而后连接下一个氨基酸进行反应；最终将所有氨基酸连接成固定于树脂的多肽；
(3)将步骤(2)所述的多肽与小分子AMD070通过酰胺缩合反应偶联，经裂解纯化得到式I所示结构的分子。
优选地，步骤(1)中所述树脂为0.35mM修饰密度的Wang树脂。
优选地，步骤(2)中脱去N端保护的试剂为在二甲基甲酰胺(DMF)中体积分数为20％的六氢吡啶。
优选地，步骤(2)中脱保护检测试剂为茚三酮。
优选地，步骤(2)中连接氨基酸制备得到多肽所用的方法为：将要连接上的氨基酸与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)混合，用N-甲基吗啉(NMM)和DMF溶解，加入到脱去保护的树脂中反应，而后依次连接氨基酸得到多肽。
优选地，步骤(3)多肽与AMD070的反应条件为水合肼:DMF(v/v＝2/98)脱除多肽主链天冬氨酸侧链ODmab保护基，多肽脱保护裸露的羧基与AMD070分子上的氨基通过酰胺缩合反应连接。
优选地，步骤(3)中多肽与AMD070反应的摩尔比为1:5。
本发明中所述式II与式III的合成步骤参照式I的合成方法进行。
第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物在制备肿瘤免疫药物中的应用。
第四方面，本发明提供一种根据第一方面所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选地，所述肿瘤包括膀胱癌、胰腺癌或胃癌。
第五方面，本发明提供一种肿瘤免疫治疗方法，所述方法包括给予患者治疗有效剂量的第一方面所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物。
优选地，所述双特异性多肽纳米药物的给药方式为静脉给药。
优选地，所述给药浓度小于800μM，优选为200～500μM。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明所涉及的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物精准定位癌细胞，符合当下“精准医疗”的理念，其包含的肿瘤微环境靶向调节单元和PD-L1阻断单元，具有靶向识别功能、肿瘤微环境调节功能和免疫检查点阻断功能，通过分子的特异性主动靶向到肿瘤部位，一方面特异性结合肿瘤细胞表面过表达的CXCR4蛋白，阻断CXCR4/SDF-1信号通路，改善肿瘤微环境，增加T细胞的浸润；另一方面特异性结合肿瘤细胞表面过表达的PD-L1蛋白，阻断PD-1与PD-L1相互作用，恢复T细胞对肿瘤细胞的杀伤，增强膀胱癌的免疫治疗。与肿瘤细胞表面的蛋白结合后，具有组装能力的片段由于多肽分子的运动受到限制，降低了其自组装所需的活化熵进而触发其在原位的自组装形成纳米纤维，实现长效阻断受体的信号通路。该双特异性多肽纳米药物为肿瘤的免疫治疗提供了新的方法，同时其不会在体内产生明显副作用，具有良好的生物相容性。
附图说明
图1为双特异性多肽纳米药物的设计原理图。
图2为实施例1中双特异性多肽纳米药物的质谱表征图。
图3为多肽1(Cy)在MB49细胞表面的富集荧光信号图。
图4为多肽1在MB49细胞表面形貌的结果图。
图5为多肽1抑制膀胱癌细胞侵袭能力的结果图。
图6为多肽1(Cy)在小鼠皮下瘤模型的肿瘤靶向富集荧光信号图。
图7为多肽1在小鼠皮下瘤模型中抑制肿瘤生长的结果图。
图8为多肽1在小鼠皮下瘤模型中的小鼠的生存曲线图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例所涉及的实验仪器、材料、实验溶液具体如下：
实验仪器与材料：
二甲基甲酰胺(DMF)，哌啶，Wang树脂，二氯甲烷(DCM)，茚三酮反应试剂(茚三酮，维生素C和苯酚)，苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)，六氢吡啶，三异丙基硅烷(TIS)，乙二硫醇(EDT)，无水乙醚，三氟乙酸(TFA)，N-甲基吗啉(NMM)，N-芴甲氧羰基-6-氨基己酸(Fmoc-e-Acp-OH)，甲醇，Fmoc-丙氨酸(Fmoc-Ala-OH)，Fmoc-半胱氨酸(Fmoc-Cys(Trt)-OH)，Fmoc-天冬氨酸(Fmoc-Asp(OtBu)-OH)，Fmoc-苯丙氨酸(Fmoc-Phe-OH)，Fmoc-甘氨酸(Fmoc-Gly-OH)，Fmoc-赖氨酸(Fmoc-Lys(Boc)-OH)，Fmoc-亮氨酸(Fmoc-Leu-OH)，Fmoc-天冬氨酸(Fmoc-Asn(Trt)-OH)，Fmoc-脯氨酸(Fmoc-Pro-OH)，Fmoc-精氨酸(Fmoc-Arg(Pbf)-OH)，Fmoc-苏氨酸(Fmoc-Thr(tBu)-OH)，Fmoc-缬氨酸(Fmoc-Val-OH)，Fmoc-酪氨酸(Fmoc-Tyr(Trt)-OH)，AMD070，菁染料(Cy)，多肽固相合成管等。
实验溶液的配制：
脱保护液——将六氢吡啶与DMF的按照体积比1:4进行混合；
反应液——将NMM与DMF的体积比1:24进行混合；
裂解液——将TFA、TIS和EDT混合，混合后各溶液的体积分数为：92.5％TFA、2.5％TIS和2.5％EDT；
茚三酮测试液——茚三酮、维生素C和苯酚各一滴；
实施例1
本实施例提供一种双特异性多肽纳米药物(AMD070)DPGLGYLKLVFFGCVRARTR，其结构式可由式I表示，并通过多肽固相合成法制备(后续简记为多肽1)。
Figure BDA0003744254970000101
利用多肽固相合成法合成的步骤如下：
(1)Fmoc(芴甲氧羰酰基)脱保护：称量0.1g Wang树脂并投入到多肽固相合成管中，加入DMF溶胀30min。抽掉DMF，用脱保护液进行Fmoc去保护反应，于摇床上放置10min。抽掉脱保护液，用DMF、DCM洗涤3次，从多肽固相合成管中取10mg Wang树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测呈深蓝色即为阳性结果后，准备接入第一个氨基酸(R)，进入氨基酸缩合反应。
(2)氨基酸缩合：分别按照上述的氨基酸序列顺序取10倍当量的氨基酸和HBTU，用7mL反应液溶解，投入到多肽固相合成管中，搅拌反应。1h后，从多肽固相合成管中取10mgWang树脂于试管中，用乙醇洗涤2次，茚三酮法检测未变色即为阴性结果后证明缩合反应成功。抽掉多肽固相合成管中的液体，用DMF、DCM各洗涤2次，得到第一个氨基酸缩合后的肽树脂。
(3)对所得肽树脂重复进行以上“Fmoc脱保护-氨基酸缩合”反应步骤，至最后一个氨基酸(天冬氨酸)反应完毕，加入2％的水合肼于摇床摇15min脱去ODmab保护基，再取5倍当量的AMD070和HBTU，用7mL反应液溶解，投入到多肽固相合成管中，摇床摇45min，通过酰胺缩合连接上AMD070，得到目标序列的多肽。反应完毕后，DMF、DCM各洗涤树脂3次，甲醇洗2次，继续抽干20min。多肽固相合成管中取出合成的肽树脂，在室温下于裂解液中裂解2h，裂解液先冰浴20min。将树脂过滤后，于旋蒸仪蒸干，冰浴条件下用无水乙醚洗3次。粗肽使用制备型反相HPLC纯化，使用HPLC检测纯度>94.7％，所得到的纯肽使用质谱(MS,electrospray)进行鉴定，如图2所示，所测量得到的分子量结果与目标分子量相同。由此推出合成了目标分子，表明如上式结构的多肽纳米药物被成功合成。冻干后-20℃保存待用。
实施例2
本实施例一种双特异性多肽纳米药物(AMD070)DPGLGYLGNNQQNYCVRARTR，其结构式可由式II表示，并通过多肽固相合成法制备。
Figure BDA0003744254970000111
其制备方法参照实施例1。
实施例3
本实施例一种双特异性多肽纳米药物(AMD070)D-(OEG)4-KLVFFGCVRARTR，其结构式可由式III表示，并通过多肽固相合成法制备。
Figure BDA0003744254970000121
其制备方法参照实施例1。
实施例4
细胞水平特异性识别实验：
首先制备Cy修饰的多肽纳米药物(后续简记为多肽1(Cy))，具体操作为：将多肽1与荧光分子Cy溶解在Tris HCL溶液中室温搅拌过夜，再通过萃取、透析等操作提纯得到多肽1(Cy)。
实验所选细胞为CXCR4及PD-L1均高表达的小鼠膀胱癌细胞MB49。
将细胞接种到confocal培养皿中于培养箱中孵育24h，然后使用上述Cy修饰的多肽纳米药物与MB49细胞共孵育30min，在多光束激光共聚焦成像系统(U-Vox)对细胞进行观察，如图3所示(左图为荧光场图，右图为荧光场与明场叠加图)，如图可知，在MB49细胞表面观察到明显的荧光，说明该多肽纳米药物能特异性结合在MB49细胞的细胞膜，因此初步验证了其靶向性。
实施例5
细胞表面形貌观察实验：
实验所选细胞为CXCR4及PD-L1均高表达的小鼠膀胱癌细胞MB49。
将MB49细胞接种到放有硅片的24孔板中在培养箱中孵育24h，随后使用实施例1制得的多肽纳米药物与细胞共孵育6h，用4％多聚甲醛进行固定30min，用PBS洗两遍，之后分别用10％，30％，50％，70％，90％，100％的乙醇溶液脱水10min，最后干燥后喷金用可溯源计量型扫描电子显微镜(JC-Zeiss)进行观察，结果如图4所示，发现多肽纳米药物在细胞膜表面形成短棒状的纤维结构。
实施例6
侵袭性抑制能力实验：
实验所选细胞为CXCR4及PD-L1均高表达的小鼠膀胱癌细胞MB49。
Transwell侵袭迁移培养皿下室加入600μL含20％血清的培养基，上室加入200μL分别含多肽1、AMD070、PBS的细胞悬液，在孵箱培养24h，之后将下表面浸泡在4％多聚甲醛溶液中，固定30min，用结晶紫染色，在显微镜下对细胞进行观察，结果图5所示，多肽纳米药物处理的MB49细胞组，其穿透的细胞数较PBS组及AMD070组显著降低，表明多肽纳米药物具有良好的侵袭性抑制能力。
实施例7
动物水平的特异性识别及长效滞留实验：
实验所选动物为C57BL/6雌性小鼠，周龄为6周。
小鼠皮下瘤模型的构建：用膀胱癌细胞进行小鼠皮下移植瘤的建立，取5×106个/只MB49细胞注射到小鼠右腿皮下，2周后肿瘤成型，得到小鼠皮下瘤模型。
用实施例4所述制得的多肽1(Cy)通过小鼠的尾静脉注射到体内，用小动物活体成像仪(IVIS Spectrum)进行成像，成像结果如图6所示，多肽1(Cy)在肿瘤组织处具有明显的信号聚集，并长效滞留可达120小时。
实施例8
动物水平的皮下瘤种植抑制实验：
实验所选动物为C57BL/6雌性小鼠，周龄为6周。
小鼠皮下瘤模型的构建：用膀胱癌细胞进行小鼠皮下移植瘤的建立，取5×106个/只MB49细胞注射到小鼠右腿皮下，2周后肿瘤成型，得到小鼠皮下瘤模型。
将实施例1制得的多肽纳米药物通过小鼠的尾静脉注射到体内，所用小鼠为6只/组。然后统计记录小鼠皮下瘤生长状态及小鼠的生存情况，结果如图7及图8所示，图7结果显示多肽纳米药物预处理的肿瘤生长明显被抑制，图8结果显示该多肽纳米药物能够显著延长小鼠的生存期。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.一种靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，其特征在于，所述靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物包括通过酰胺键依次连接的肿瘤微环境靶向调节单元、连接单元、自组装单元和PD-L1阻断单元。
2.根据权利要求1所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，其特征在于，所述肿瘤微环境靶向调节单元来自于特异性结合肿瘤基质相关蛋白的分子，包括AMD070、AMD3100、BL-8040、LY2510924、POL5551、SP-13786、Talabostat或Linagliptin中的任意一种；
优选地，所述肿瘤微环境靶向调节单元来自于AMD070或SP-13786。
3.根据权利要求1或2所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，其特征在于，所述PD-L1阻断单元来自于靶向识别并结合PD-L1蛋白的多肽，包括CVRARTR、CLQKTPKQC、WHRSYYTWNLNT或FSGTVTTAGLLF中的任意一种；
优选地，所述PD-L1阻断单元来自于多肽序列CVRARTR。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，其特征在于，所述自组装单元来自于具有组装能力的多肽，包括KLVFFG、KLVFF、FF、YFFGNNQQNY、GSNKGAIIGLM、ITSVV、SYSSYGQS、GNNQQNY、GNQQQQY或GNNNQNY中的任意一种；
优选地，所述自组装单元来自于多肽序列KLVFFG或GNNQQNY。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，其特征在于，所述连接单元来自于调节分子长短及亲疏水平衡的多肽，包括DPGLGYL、D(OEG)4或D(OEG)8中的任意一种；
优选地，所述连接单元来自于多肽序列DPGLGYL或D(OEG)4。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物，其特征在于，所述靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物具有如式I、式II或式III中任意一种所示的结构。
Figure FDA0003744254960000021
7.根据权利要求1-6中任一项所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
以末端氨基和侧链氨基均得到保护的氨基酸以及肿瘤微环境靶向调节分子为原料，通过固相合成法，合成所述PD-L1阻断单元、自组装单元和连接单元并连接，而后连接肿瘤微环境靶向调节分子，得到所述靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物在制备肿瘤免疫药物中的应用。
9.根据权利要求1-6中任一项所述的靶向PD-L1的双特异性多肽纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括膀胱癌、胰腺癌或胃癌。
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CN116355048A (zh) * 2023-03-30 2023-06-30 上海市第六人民医院 一种靶向治疗角膜新生血管的多肽纳米材料及其制备方法和应用
CN117024517A (zh) * 2023-08-17 2023-11-10 南开大学 一种碱性磷酸酶响应和可转化的超分子双特异性细胞接合剂多肽及其制备方法和应用

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