CN109776787B - 多臂靶向偶联物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多臂的、由水溶性聚合物修饰的脑靶向药物偶联物及其盐。该药物偶联物具有如下结构式：

Description

多臂靶向偶联物

技术领域

本发明总体上涉及多臂靶向偶联物。具体地，本发明涉及多臂PEG修饰的靶向抗癌偶联物，更具体地说，本发明为将脑靶向分子通过多臂PEG与抗癌药物连接成的偶联物。

背景技术

多年来，已经提出了用于改进生物活性剂的稳定性和递送的多种方法。与药用试剂的配制以及投递相关联的挑战可以包括：该药用试剂的差的水溶性、毒性、低的生物利用率、不稳定性、以及迅速的体内降解。尽管已经设计了许多办法来改进药用试剂的递送，但是没有一种单独的方法是没有其缺点的。例如，通常采用的药物递送方法的目标在于解决或至少改善一个或多个以下问题，包括如在一种脂质体、聚合物基质、或单分子胶束中的药物胶囊化、共价附接至一种水溶性聚合物如聚乙二醇上、基因靶向剂的使用、盐类的结构、等等。

WO2005028539、WO2010019233、WO2011063156、WO2011063158公开了一种处于临床三期的药物nktr 102，该药物主要用于转移性乳腺癌，由Nektar Therapeutics研发。该药物是一种水溶性的多支链聚合物药物前体，以提高药物的负载，结构如下：

该化合物是使用多臂PEG与伊立替康连接，以提高水溶性，增加载药量，在抗癌作用不变的情况下，降低副作用。但该药物仍具有缺点，比如，靶向性较差，不能作用于特定的癌细胞，在杀死癌细胞的同时，也会影响正常细胞的性能，而使不良反应发生率仍然比较高。

载脂蛋白E(APOE基因，apoE蛋白)除了在脂类代谢中的作用，近年研究聚焦于其在中枢神经系统疾病中的重要作用。由于apoE全蛋白分子量大，不能透过血脑屏障，体外合成来自受体结合域的拟apoE肽备受关注。

apoE系34kD的糖蛋白，由一个10kD的脂结合结构域和一个22kD的受体结构域(结合低密度脂蛋白家族的受体)组成。由于是天然的内源性蛋白，治疗人类疾病比较安全，在中枢神经系统生理、病理中的作用越来越受到重视。内源性apoE或脑室内注射apoE全蛋白通过下调中枢神经系统炎症反应、减轻氧化应激、抗兴奋性氨基酸毒性、直接增加神经营养等发挥神经保护作用。

但是由于完整的apoE分子量大，正常状态下不能通过血脑屏障，限制了其作为外源性药物的应用。因此学者们致力于合成来源于apoE受体结合域的小分子肽。

合成的小分子肽保留了受体结合域的大部分天然三维结构，保留了全蛋白的大部分特性，能与apoE全蛋白竞争巨噬细胞表面的受体结合位点，启动信号级联反应通路，从而发挥其神经保护作用。

传统的治疗肿瘤的药物普遍存在对肿瘤组织选择性差，毒副作用大等缺点，如何设计出良好的药物传递系统成为近年来的研究热点。

LRKLRKRLLLRKLRKRLL是一种apoE拟肽，可通过血脑屏障，发挥脑靶向肽的作用。

LRKLRKRLLLRKLRKRLL的结构如下：

发明内容

本发明公开了一种全新的具有靶向性的多臂药物偶联物，该偶联物如式(I)所示：

为进一步说明本发明的发明构思，上述偶联物可表述为式(Ⅱ)：

其中，R为有机中心，即偶联物结构中的

代表原子的连接处。从有机中心的中心碳原子出发，发出四条支链，每一条支链都是相同的。每一条支链由聚合物POLY、多价接头L、靶向分子T、活性剂D构成。

聚合物POLY为聚乙二醇，在本发明中，其具体为：

n为113，

代表原子的连接处，标“&”号的氧原子为与有机中心“R”连接的原子。

本领域技术人员应该知晓，在高分子领域，n代表所述的聚合物的聚合度，即聚合物大分子链上所含重复单元数目的平均值，其取决于所述的聚合物的分子量，例如，当n为113时，是指平均值为113。

多价接头L为：

符号“*”代表多价接头L通过半胱氨酸与靶向分子T的连接点，“#”代表多价接头L与活性剂D的连接点，“％”代表多价接头L与POLY的连接点。

靶向分子T为apoE拟肽LRKLRKRLLLRKLRKRLL，活性剂D为伊立替康，伊立替康结构如下：

本发明为一个多臂聚合物修饰的靶向抗癌偶联物，其中，水溶性的聚合物修饰可增强该偶联物的水溶性，提高载药量；靶向分子LRKLRKRLLLRKLRKRLL增加脑靶向性，使得该偶联物更易通过血脑屏障，挥脑靶向肽的作用，使其在目标组织的浓度更高；L为任意的连接接头，其作用是首先将靶向分子与抗癌药物连接起来，再将“靶向分子、抗癌药物与聚合物臂连接起来，使得整个偶联物形成一个有机的整体。本发明偶联物是典型的药物前体，通过水解作用或酶解作用，活性剂D被释放出来，与母体分离，发挥生理活性。

本发明偶联物呈现出高载荷能力，这样就可以降低总剂量来治疗一种特殊的疾病，例如癌症等。也就是说，本发明偶联物活性剂载体能够有效地和活性剂分子以共价键结合，允许每一定的偶联物量可以服用更多量的治疗剂型(也就是活性剂部分)。本发明偶联物通过水溶性聚合物的修饰，本质上是偶联物也是亲水的，特别是活性剂为水难溶药物时，提高偶联物的生物利用度。

相比未偶联的药物，本发明偶联物能够表现出更强的作用，在人体或其他动物体内组织更加富集。

本发明中偶联物药物前体含有许多独特的性质，尤其是在活性剂为一个抗癌化合物的情况下。这种药物前体能以较高效率来抑制肿瘤的生长。我们使用的这种小分子是一种已知具有抗癌特性的小分子。然而，通过如上所述与多支链聚合物结合，其疗效和药物代谢动力学与该小分子(例如，抗癌化合物本身)相比，有了很大的改进。

本发明偶联物，药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐，典型的盐包括硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、甲酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、醋酸盐、三氟乙酸盐、二氯乙酸盐、三氯乙酸盐、混合的氯氟乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、磺酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、庚烷磺酸盐等，其中优选三氟乙酸盐和庚烷磺酸盐。

典型的三氟乙酸盐包括一至四十八分子的三氟乙酸盐。优选每个支链分别结合十二分子三氟乙酸盐的偶联物，该优选的偶联物为四十八分子三氟乙酸盐：

典型的庚烷磺酸盐包括一至四十八分子的庚烷磺酸盐。优选每个支链分别结合十二分子庚烷磺酸盐的偶联物，该优选的偶联物为四十八分子庚烷磺酸盐：

本发明偶联物适用的实体肿瘤类型包括淋巴、乳房、胰腺、卵巢、结肠、肾、胆管、肺、胃、脑的恶性肉瘤、癌，尤其适用于治疗脑胶质瘤和乳腺癌脑转移。

具体实施例

在下面将对本发明进行详细描述。然而，本发明可能具体体现为许多不同的形式，而且它不应该被局限于此处所描述的实施例中，提供这些实施例中的目的是使所披露内容更完整与全面。所用试剂和原料，除了提供制备方法的除外，其余均为市售。4armPEG20K-SCM购自北京键凯科技有限公司，分子量约为20kDa左右。

除非另有定义，否则本文中所有科技术语具有的含义与权利要求主题所属技术领域人员通常理解的含义相同。

除非另有说明，本文中所用的术语具有如下的含义：

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DCM：二氯甲烷

Boc-Gly-OH：

DMAP：4-二甲氨基吡啶

DCC：二环己基碳二亚胺

IPA：异丙醇

TFA：三氟乙酸

TBME：叔丁基甲醚

EA：乙酸乙酯

DME：乙二醇二甲醚

HOSU：N-琥珀酰亚胺碳酸酯

THF：四氢呋喃

DIEA：N,N-二异丙基乙胺

DEPC：氰基磷酸二乙酯

DMSO：二甲基亚砜

HOBT：1-羟基苯并三唑

DIC：N,N-二异丙基碳二亚胺

TIS：三异丙基硅烷

PBS：磷酸盐缓冲液

EDC·HCl：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐

4armPEG20K-SCM：

实施例1化合物的制备

BP103a01的制备

氮气保护下，向1000ml三口瓶中加入200mL吡啶，120g BP103a00(1.0eq)，搅拌降温至0℃，分批加入151.8g TsCl(1.0eq)，搅拌1h，然后缓慢升至室温，继续搅拌3-4h。反应结束后，将反应液倒入冰的稀盐酸溶液，加EA萃取，EA层用稀盐酸洗一次，饱和碳酸氢钠洗涤，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得BP103a01纯品55g。

BP103a02的制备

向1000mL三口瓶中加入55g BP103a01(1.0eq)和160mL DMSO，搅拌均匀，然后加入NaN₃ 23.52g(2.0eq)，加热至50℃反应3小时，降温至室温，将反应液倒入水中，用EA萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩得BP103a02无色液体29.2g。

BP103a03的制备

向1L氢化反应釜中加入29g BP103a02，甲醇360mL，钯碳5.0g，搅拌，氮气置换，通入氢气反应3-4h，TLC监控反应完毕后，过滤反应液，将滤液浓缩得到BP103a03的油状物23.5g。

BP103a04的制备

向1L三口瓶中加入23.5g化合物BP103a03(1.0eq)，68.6g(Boc)₂O(2.0eq)，甲醇：三乙胺(9：1)的混合溶液500ml，搅拌升温至回流，反应1h，TLC监控反应完毕后，蒸去甲醇三乙胺，加水溶解，二氯甲烷萃取3次，合并有机层水洗一次，无水硫酸钠干燥，蒸除溶剂，干燥，得到固体BP103a04的34.8g。

BP103a05的制备

向1000mL三口瓶中加入34.8g化合物BP103a04(1.0eq)，甲苯和THF各150ml，溴乙酸58.2g(3eq)，搅拌，加热至45～50℃，再加入氢氧化钠33.5g(6eq)，反应过夜，TLC监控反应完毕后，蒸除反应液，加水和EA萃取，水相调节pH为3，水相用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥后浓缩得BP103a05油状物化合物18g。

BP103a的制备

向250mL三口瓶中加入18g化合物BP103a05，100ml EA，搅拌溶解后降温至0℃，加入150ml EA/HCl(3.5M)，保温0℃，TLC监控反应完毕，过滤，滤饼用TBME洗涤得白色固体BP103a 10.4g。

化合物2的制备

向100mL烧瓶加入3.0g BP103a(1.0eq)，化合物1 4.0g(1.0eq)，40mlDCM，4.0mlDIEA(2.0eq)，室温搅拌，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，柱层析得6.4g类油状物化合物25.2g。

化合物3的制备

向200mL三口瓶中加入9.00g化合物2(1.0eq),3.96gHOSU(1.53eq)，90ml DCM，6.60g EDC·HCl(1.53eq)，室温反应2h，TLC监控反应完毕后，DCM稀释后用pH＝6.0的50mmol/L的磷酸二氢钾水溶液洗涤2次，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得无色油状物5.9g化合物3。

化合物4的制备

向200mL烧瓶加入2.93g化合物NH₂-Lys(Boc)-OH(1.0eq)，60ml水，2.00g NaHCO₃(2.0eq)，搅拌，滴加5.9g化合物3(1.0eq)溶于60ml DME的溶液，补加60ml THF，搅拌过夜，TLC监控反应完毕，蒸去有机溶剂，用醋酸调节pH＝4，EA萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，得4.50g无色油状物化合物4。

化合物6的制备

向250mL圆底烧瓶中加入3.50g化合物5(1.0eq)，52.5mlDMF，加热至60℃溶解，5-10min后减压蒸去DMF，加入300ml正庚烷减压蒸馏，重复三次，旋干后加入105mlDCM，1.08gBoc-Gly-OH(1.2eq)，63mg DMAP(0.1eq)，滴加1.59gDCC(1.5eq)溶于10ml DCM的溶液，20℃反应4小时，TLC监控反应完毕后，过滤，浓缩至剩余25％体积时加入120ml IPA，蒸去75％的溶剂，加入150ml正庚烷，室温搅拌1小时，过滤，正庚烷洗涤2次，干燥得淡黄色固体4.02g化合物6。

化合物7的制备

向100mL三口瓶中加入4.02g化合物6，50ml DCM，搅拌溶解后滴加11.6mlTFA，室温反应2h，TLC监控反应完毕后加入150ml乙腈，减压蒸馏120ml溶剂后倒入320ml TBME溶液中，搅拌30min，过滤，滤饼用TBME洗涤得淡黄色固体化合物7 4.00g。

化合物8的制备

向200mL三口瓶中加入3.69g化合物7，100mlDCM，3.21g(1.05eq)化合物4，2.7mlDIEA(3.0eq)，1.2ml DEPC(1.5eq)，室温反应4h，TLC监控反应完毕后，DCM稀释后，水洗两次，饱和食盐水洗涤一次，干燥，浓缩，HPLC纯化后冻干得到淡黄色固体化合物8 1.85g。

化合物9的制备

向50mL圆底烧瓶中加入260mg化合物8，10ml的20％TFA/DCM，室温反应4h，TLC监控反应完毕后,倒入TBME中，离心，干燥并经HPLC制备纯化得淡黄色固体化合物9 210mg。

化合物10的制备

向10mL圆底烧瓶中加入51mg化合物9(4.0eq)，2ml DCM，11ulTEA(8.0eq)，201mg4armPEG20K-SCM(1.0eq)，室温反应过夜后，浓缩，加入TBME中，离心，经HPLC制备纯化、冻干得黄绿色固体化合物10 85mg。

PP04a的制备

PP04a的合成采用本专业人员熟知的Fmoc法固相合成，利用2-Cl-Trt Resin、采用20％的哌啶/DMF脱除Fmoc，偶联试剂采用HOBT/DIC，DMF为反应溶剂，反应监控采用茚三酮检测法，依次将下列保护氨基酸连接到树脂上：Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH，DMF洗涤、甲醇洗涤、DCM洗涤后干燥，加入裂解试剂(TFA：苯甲硫醚：苯酚：TIS＝85：5：5：5)，反应2小时后用冰TBME沉淀、离心，得到PP04a粗品，经HPLC制备纯化后冻干得PP04a纯品。

向10mL圆底烧瓶中加入500mg化合物10(1.0eq)，10ml pH＝7、0.01M的PBS，溶清后加入197mg(4.0eq)PP04a溶于5ml Ph＝7、0.01M的PBS的溶液，室温反应4小时后透析，浓缩，得到化合物11，甲醇溶解粗品，加入TFA调节pH＝5-6，浓缩，加入TBME中，固体析出，离心，干燥得黄色固体化合物12 462mg。

化合物11经反向HPLC纯化(硅胶：C18，300A；流动相：庚烷磺酸钠/水，乙腈)后，收集纯品后调节pH＝4～5，再经反向HPLC脱盐(硅胶：C18，300A；流动相：醋酸/水，乙腈)，收集纯品后浓缩除去有机溶剂，冻干得类白色粉末化合物13。

化合物11 MALDI-TOF检测分子量为34500.78。

化合物12 MALDI-TOF检测分子量为34531.86。

化合物13 MALDI-TOF检测分子量为34552.21。

实施例2对U87MG裸鼠脑原位模型生存率的影响

1.实验目的

评价受试化合物11对U87MG裸鼠脑原位模型生存率的影响。

2.实验材料

2.1供试品

伊立替康(原料药)系购买所得，nktr-102和受试化合物均由博瑞生物医药(苏州)股份有限公司提供。

其中，nktr-102的制备方法参考CN102711837A所公开的方法，如下：

将实施例中的化合物7(829mg,4.5eq)添加到250mL的反应瓶中，加入DCM(50mL)，三乙胺(221mg,9.0eq)，溶解后加入4arm-PEG20K-SCM(5.00g,1.0eq)添加到该反应瓶中。HPLC监控反应没有明显进展后，减压蒸馏出去约20mL DCM，将溶液倒入300mL TBME中搅拌沉淀，过滤，得到5.4g粗品，粗品经HPLC制备纯化，脱盐，用稀盐酸调节pH至5-6，冻干得到2.71g淡绿色粉末nktr-102。

2.2试剂

RPMI-1640培养液，胰蛋白酶，青-链双抗，生理盐水。

2.3实验动物

雌性BALB/c裸小鼠(只数：60只；周龄：6～8周)从北京维通利华实验动物技术有限公司购买，饲养于SPF动物房，温度20～25℃，相对湿度40％～70％，明暗照明各12小时；动物自由饮水及采食。正常喂养约1周后，经兽医检验，体征状况良好小鼠可入选本实验。分组前使用记号笔于动物尾根部进行标识，分组后每只动物均用耳部剪缺方式标识。

2.4移植性肿瘤瘤株

脑胶质瘤细胞U87MG，来源于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(CAS，本实验室液氮冻存)。

3.实验方法

NCI-N87细胞培养

在5％CO₂、37℃培养条件下，NCI-N87细胞在RPMI-1640培养液中进行常规细胞培养；以0.25％胰酶消化传代；根据细胞生长情况，每周传代1到2次，传代比例为1:2到1:6。

3.1动物模型制备

收取对数生长期NCI-N87细胞，细胞计数后重悬于无血清的RPMI-1640培养基中，调整细胞浓度至1×10⁸细胞/mL；用移液器吹打细胞使其分散均匀后装入50mL离心管中，将离心管置于冰盒中；用1mL注射器吸取细胞悬液，借助动物立体定向仪的引导，采用微注射方法将体外培养人脑胶质瘤细胞U87MG细胞1μL(1×10⁵细胞/只)，建立U87MG脑胶质瘤原位模型，接种后定期观察动物状态。接种后第12天，挑选动物24只，采用随机区组法分为4组(n＝6)。

3.2给药制剂配制

3.2.1伊立替康给药制剂配制

称取12.0mg的伊立替康，加入0.15mL的1％乳酸，涡旋振荡使药物完全溶解，再分别加入2.85mL的1％山梨糖醇水溶液，涡旋振荡混合均匀，溶液中1％乳酸、1％山梨糖醇水溶液的比例约为5:95(v/v)。溶液中伊立替康游离形式浓度为4.0mg·mL^-1。

3.2.2 nktr-102给药制剂配制

每次给药前，准确称量101.5mg的nktr-102，加入2.5mL的生理盐水，涡旋振荡使药物完全溶解，溶液中伊立替康游离形式浓度为4.0mg·mL^-1。

3.2.3化合物11给药制剂配制：分别准确称量，加入2.5mL的生理盐水，涡旋振荡使药物完全溶解，溶液中折算伊立替康浓度为4.0mg·mL^-1。

3.3动物分组及给药

动物分组及给药方案见表1。于分组当天开始第一次给药，给药体积均为10mL·kg^-1。第1组为溶剂对照组，尾静脉注射给予空白溶剂，每4天1次，共给药3次(Q7D×3)。第2-4组分别尾静脉注射给予受试样品伊立替康、nktr-102、受试化合物，给药剂量均为40mg·kg^-1(以伊立替康含量计算)，Q7D×3。

表1.裸鼠移植瘤模型药效实验给药方案

4.数据记录、计算公式

记录动物生存情况，计算中位生存时间。

5.统计分析方法

使用Log Rank时序检验比较生存率差异，统计过程采用SPSS 16.0统计软件进行，中位生存期使用graphpad 5.0软件计算。

6.结果

见表2

表2动物生存时间(天)

*与空白溶剂、伊立替康和nktr-102组的中位生存时间相比，P＜0.05

实验结果显示，本发明化合物对脑胶质瘤有良好抑制作用，能够显著延长动物的中位生存时间，且优于伊立替康和nktr-102。

实施例3人乳腺癌MDA-MB-231脑转移模型的抑制作用

1.实验目的

评价受试化合物11对人乳腺癌MDA-MB-231脑转移模型生存率的影响。

2.实验材料

2.1供试品

伊立替康(原料药)系购买所得，nktr-102和受试化合物均由博瑞生物医药(苏州)股份有限公司提供。

2.2试剂

RPMI-1640培养液，胰蛋白酶，青-链双抗，生理盐水。

2.3实验动物

雌性BALB/c裸小鼠(只数：60只；周龄：6～8周)从北京维通利华实验动物技术有限公司购买，饲养于SPF动物房，温度20～25℃，相对湿度40％～70％，明暗照明各12小时；动物自由饮水及采食。正常喂养约1周后，经兽医检验，体征状况良好小鼠可入选本实验。分组前使用记号笔于动物尾根部进行标识，分组后每只动物均用耳部剪缺方式标识。

2.4移植性肿瘤瘤株

人乳腺癌MDA-MB-231-Luc购于上海中科院细胞生物研究所。

3.实验方法

MDA-MB-231-Luc培养于DMEM培养基(GIBCO,美国)，含10％胎牛血清FBS(GIBCO，美国)，培养于含5％CO₂的37℃培养箱。

3.1脑转移MDA-MB-231-Luc细胞制备

收取对数生长期MDA-MB-231-Luc细胞，细胞计数后重悬于无血清的RPMI-1640培养基中，心脏注射5×10⁵个细胞。心脏注射3～4周后，使用生物成像的方法挑选出脑转移裸鼠，分离脑转移的MDA-MB-231-Luc细胞。接种分离的MDA-MB-231-Luc细胞到裸鼠心脏，使用生物成像的方法挑选出脑转移裸鼠，分离脑转移的MDA-MB-231-Luc细胞。重复8次，直到在其它组织无MDA-MB-231-Luc细胞转移。

3.2给药制剂配制

3.2.1伊立替康给药制剂配制

称取12.0mg的伊立替康，加入0.15mL的1％乳酸，涡旋振荡使药物完全溶解，再分别加入2.85mL的1％山梨糖醇水溶液，涡旋振荡混合均匀，溶液中1％乳酸、1％山梨糖醇水溶液的比例约为5:95(v/v)。溶液中伊立替康游离形式浓度为4.0mg·mL^-1。

3.2.2 nktr-102给药制剂配制

每次给药前，准确称量101.5mg的nktr-102，加入2.5mL的生理盐水，涡旋振荡使药物完全溶解，溶液中伊立替康游离形式浓度为4.0mg·mL^-1。

3.2.3化合物11给药制剂配制：分别准确称量，加入2.5mL的生理盐水，涡旋振荡使药物完全溶解，溶液中折算伊立替康浓度为4.0mg·mL^-1。

3.3动物分组及给药

动物分组及给药方案见表3。动物心脏接种先前制备的脑转移MDA-MB-231-Luc细胞5×10⁵/只。于接种后21天使用生物成像的方法确认脑转移情况，挑选确认脑转移的裸鼠，分组当天开始第一次给药，给药体积均为10mL·kg^-1。第1组为溶剂对照组，尾静脉注射给予空白溶剂，每4天1次，共给药3次(Q7D×3)。第2-4组分别尾静脉注射给予受试样品伊立替康、nktr-102、受试化合物，给药剂量均为40mg·kg^-1(以伊立替康含量计算)，Q7D×3。

表3.裸鼠移植瘤模型药效实验给药方案

4.数据记录、计算公式

记录动物生存情况，计算中位生存时间。

5.统计分析方法

使用Log Rank时序检验比较生存率差异，统计过程采用SPSS 16.0统计软件进行，中位生存期使用graphpad 5.0软件计算。

6.结果

见表4

表4动物生存时间(天)

*与空白溶剂、伊立替康和nktr-102组的中位生存时间相比，P＜0.05

实验结果显示，本发明化合物对MDA-MB-231-Luc脑转移有良好抑制作用，能够显著延长动物的中位生存时间，且优于伊立替康和nktr-102。

在这里需要说明的是，由于本发明偶联物进入人体或动物体内，实际起抗癌作用的是游离态偶联物，与本发明偶联物具体成哪一种盐无直接关系，故可以使用游离的偶联物的药理数据来证明偶联物及其盐的抗癌作用。

Claims (11)

1.具有如下结构式的多支链药物偶联物或其药学上可接受的盐：

；

其中LRKLRKRLLLRKLRKRLL的结构为

其中

代表原子的连接处。

2.如权利要求1所述的多支链药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐包括硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、甲酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、醋酸盐、三氟乙酸盐、二氯乙酸盐、三氯乙酸盐、混合的氯氟乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、庚烷磺酸盐。

3.如权利要求2所述的多支链药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐为具有如下结构所示的四十八分子三氟乙酸盐或四十八分子庚烷磺酸盐：

4.如权利要求1所述的多支链药物偶联物或其药学上可接受的盐的制备方法为：

其中，PP04a的结构为：

5.如权利要求1-3任一所述的多支链药物偶联物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗癌症的药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述癌症包括淋巴癌、乳房癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌、胆管癌、肺癌、胃癌、脑癌。

7.如权利要求6所述的的应用，其特征在于，所述癌症为脑胶质瘤。

8.一种药学上可接受的组合物，其包含权利要求1-3任一所述的多支链药物偶联物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。

9.如权利要求8所述的组合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述癌症包括淋巴癌、乳房癌、胰腺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌、胆管癌、肺癌、胃癌、脑癌。

11.如权利要求10所述的的应用，其特征在于，所述癌症为脑胶质瘤。