CN115154538B - 一种具有降血尿酸作用的中药组合物及其应用 - Google Patents
一种具有降血尿酸作用的中药组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有降血尿酸作用的中药组合物及其应用。所述中药组合物包括以下原料:土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝;所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝质量比为2~4:2~5:2~3:1~3:1~3:1~3。所述中药组合物具有降血尿酸作用,治疗湿热内蕴证效果突出,同时具有标本兼治的功效,适合预防保健;所述中药组合物中土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝配合使用,具有协同增效的作用,组合物配方中各味药用量均低于临床用量,部分处方剂量仅相当于人日用量15g,大大降低用药剂量,避免因用量过大可能产生毒副作用,降低可能发生不良反应的风险;同时,也解决药用资源紧缺。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,具体涉及一种具有降血尿酸作用的中药组合物及其应用。
背景技术
高尿酸血症在我国的发病率已经达到10%,经济发达地区和沿海地区高尿酸血症的发病率更是高达20%以上,且总体呈现出高发生率、低龄化趋势。高尿酸血症是社会疾病谱变化的一种,是新的对人健康有害的潜在危险因素,尿酸升高不仅会导致痛风,还会引起各种代谢性疾病,是继高血压、高血糖、高血脂之后的第四高,危害广泛而严重。将高尿酸血症防治重心前移,提前对其进行干预预防,可大大降低其带来的风险。
已有的降血尿酸西药有抑制尿酸合成药物,如别嘌呤醇、非布司他;促尿酸排泄药物,如苯溴马隆、丙磺舒;还有碳酸氢钠和新型降尿酸药物。如上药物一般情况下会对肝肾功能造成一定的影响,治疗期间需定期监测复查血清尿酸(SUA)。现有技术也公开了可用于降血尿酸的中药组合物,但是其效果也一般,利用的中药成分用量较多。针对高尿酸血症的降血尿酸的治疗,十分有必要研究新的效果更好,用量更低的药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有针对高尿酸血症的降血尿酸药物用量较多的不足,提供一种具有降血尿酸作用的中药组合物及其应用。
本发明的目的在于提供一种具有降血尿酸作用的中药组合物。
本发明的目的在于提供一种中药组合物提取物的制备方法。
本发明的目的在于提供利用所述制备方法制备得到的中药组合物提取物。
本发明的目的还在于提供所述中药组合物在制备具有降血尿酸作用的药物中的应用。
本发明的目的还在于提供中药组合物提取物在制备具有降血尿酸作用的药物中的应用。
本发明的目的还在于提供一种具有降血尿酸作用的药物。
土茯苓甘淡渗利长于解毒除湿,又能通利关节。车前子甘寒性降,善通利水道,利水消肿通淋。两者相合,清热利湿,共为君药。茯苓为利水消肿要药,渗湿利水以祛邪,健运脾胃以扶正。菊苣性凉,健胃消食,利尿消肿,二者配伍,助君健脾利湿除痹,共为臣药。佐药葛根既能升发清阳,以助茯苓运化,有活血化瘀,兼以生津止渴,可防利水太过耗伤津液。川牛膝性善下行,归肝肾经,可利尿通淋,补益肝肾,通利关节,与茯苓配伍,既可助君祛湿除痹又可补肾健脾,是为使药。
本发明创造性地将土茯苓、茯苓、川牛膝、葛根、车前子和菊苣组合,得到一种治疗高尿酸血症的中药组合物。发明人发现,所述中药组合物能够治疗高尿酸血症、治疗湿热内蕴证、清利湿热、健脾利湿、利尿通淋、补肾健脾,能够标本兼治组合物各组分能够发挥协同增效作用。
本发明的中药组合物具有标本兼治的功效,适合预防保健。本发明的中药组合物可同时调节脾、肾、肝三脏,健脾、补肾、清热利湿和降血尿酸,药性较为平和,渗利水湿之中,兼有调补脾肾、顾护正气之意;没有配伍禁忌,相得益彰;共奏清利湿热、通利关节之功;发明应用辨证保健理论,通过本发明进行科学、综合调理,充分展现中医预防养生、治未病的优势。
本发明的中药组合物清利湿热,既能渗利水湿,健运脾胃以扶正,有效调节水液代谢,可治疗头身困重,纳呆食少,渴不多饮,胸脘痞闷,便溏不爽中两种或两种以上症状;同时能够清热,活血祛瘀,可治疗口苦、口腻、舌红、苔黄腻、脉滑数中两种或两种以上症状。
本发明的上述目的通过以下技术手段实现:
一种具有降血尿酸作用的中药组合物,包括以下原料:土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝。
所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝质量比为2~4:2~5:2~3:1~3:1~3:1~3。所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝组合物的提取物对降血尿酸具有协同增效的作用。
优选地,所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝质量比为3:3:3:2:2:2。
一种中药组合物提取物的制备方法,将土茯苓、茯苓、川牛膝、葛根、车前子和菊苣加水煎煮,充分提取,过滤即得;所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝质量比为2~4:2~5:2~3:1~3:1~3:1~3。
优选地,所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝质量比为3:3:3:2:2:2。
进一步优选地,所述充分提取是加水煎煮两次。
优选地,所述制备方法中,车前子的提取是通过包煎。
利用所述制备方法制备得到的中药组合物提取物也在本发明的保护范围之内。
所述中药组合物在制备具有降血尿酸作用的药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
所述中药组合物提取物在制备具有降血尿酸作用的药物中的应用也在本发明的保护范围之内。
所述中药组合物及其提取物能够降低高尿酸血症大鼠血清中SUA的含量,具有降尿酸作用;能够提升NO、6-Keto-PGF1α,降低ET-1、TX-B2的含量,具有保护血管内皮的功能,可以防治由高尿酸血症引起的心血管疾病以及慢性肾脏病;能够降低XOD、ADA,提升OAT的含量,既能通过抑制尿酸的生成,又能促进尿酸的排泄来发挥降血尿酸作用;能够降低肾脏组织中URAT蛋白的表达,提升ABCG2蛋白的表达,提高肾脏代谢尿酸的能力;能够降低血清中HSP-70、TNF-α、IL-1β、IL-4的表达,具有清热的功效;能够降低结肠组织中TLR4、NF-kβp65的表达,说明清热功效的机制可能是TLR4-NF-kβp65通路;能够降低AQP4的表达,具有利湿的功效;同时能够促进GAS、MTL、Na+-K+-ATP的表达,具有健运脾胃、利湿的功效;降低IgG、IgM的表达,可以缓解湿热证候引起的免疫功能亢进,从而调节免疫功能。
一种具有降血尿酸作用的药物,利用含有所述中药组合物制备得到。
一种具有降血尿酸作用的药物,利用含有所述中药组合物提取物制备得到。
优选地,所述药物的剂型为固体剂型或液体剂型。
进一步优选地,所述固体剂型为颗粒剂;所述液体剂型为口服液。
作为一个具体实施例,一种中药组合物提取物的制备方法,将土茯苓2g、茯苓2g、菊苣2g、车前子3g、葛根3g、川牛膝3g一起加水煎煮提取2次,其中车前子包煎,第一次加12倍总质量的水煎煮1.5h,第二次加10倍总质量的水煎煮1h,过滤合并即得。
相比现有技术,本发明具有以下有益效果:
1、本发明的中药组合物具有降血尿酸作用,治疗湿热内蕴证效果突出
发明中药组合物可同时调节湿邪、热邪的指标,降血尿酸作用明显;清利湿热的效果突出,既能渗利水湿,健运脾胃以扶正,有效调节水液代谢;尿酸升高是导致痛风最重要的危险因素,有效控制尿酸水平,可以减少痛风以及尿酸性肾病、心血管疾病等危险,对提高人类生活质量具有重要意义;
2、显著的协同增效
本发明的中药组合物中土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝配合使用,具有协同增效的作用;
3、降低用药量,节约药用资源
本发明组合物配方中各味药用量均低于临床用量,部分处方剂量仅相当于人日用量15g,大大降低用药剂量,避免因用量过大可能产生毒副作用,降低可能发生不良反应的风险;同时,也解决药用资源紧缺。
附图说明
图1为本发明湿热内蕴型高尿酸血症大鼠肾脏组织URAT、ABCG2蛋白表达结果,其中,1为空白组,2为复合模型组,3为阳性药组,4为低剂量组,5为中剂量组,6为高剂量组;β-Actin为内参蛋白。
图2为本发明湿热内蕴型高尿酸血症大鼠肾脏组织H&E染色结果,其中A为空白组,B为复合模型(×200)。
图3为本发明湿热内蕴型高尿酸血症大鼠结肠组织中TLR4、NF-kβp65表达量测定结果,其中1为空白组,2为复合模型组,3为阳性药组,4为低剂量组,5为中剂量组,6为高剂量组;β-Actin为内参蛋白。
图4为本发明各组大鼠造模给药后胃、肠组织AQP3的免疫组化结果,其中,A为胃组织,B为肠组织,1)空白组;2)复合模型组;3)阳性药;4)低剂量组;5)中剂量组;6)高剂量组;(×200)。
图5为本发明各组大鼠造模给药后胃、肠组织AQP4的免疫组化结果如图5所示,其中,A为胃组织,B为肠组织,1)空白组;2)复合模型组;3)阳性药;4)低剂量组;5)中剂量组;6)高剂量组;(×200)。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,以下实施例所用试剂和材料均为市购。
1.实验药物
氧嗪酸钾(上海源叶生物科技有限公司,M06HS188389);别嘌呤醇(合肥久联制药有限公司,20211002);羧甲基纤维素钠(上海源叶生物科技有限公司,J20GS155245);土茯苓(广东慧达康制药有限公司,HDK210901);茯苓(安国市一方药业有限公司,Y21070304);葛根(安国市一方药业有限公司,Y21062301);菊苣(江山市万里中药材有限公司,WLJJ211001);川牛膝(四川新荷花中药饮片股份有限公司,D2107106-3);车前草(四川新荷花中药饮片股份有限公司,2112053);泽泻(四川新荷花中药饮片股份有限公司,D2202050);薏苡仁(四川新荷花中药饮片股份有限公司,2112015);车前子:(江山市万里中药材有限公司,WL-CQZ210901);四妙丸(批准文号Z22024960,吉林紫鑫药业股份有限公司),蜂蜜(上海冠生园蜂制品有限公司),红星二锅头酒(北京红星股份有限公司),猪油脂(许可证号:SCXK(北京)2019-0010,斯贝福(北京)生物技术有限公司)。
2.实验动物
SPF级健康雄性SD大鼠,体质量180±20g,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,许可证号:SCXK(北京)2019-0010。饲养于北京中医药大学SPF级动物房。动物房室温为20~22℃,相对湿度60~70%,12h灯照、黑暗模拟昼夜交替。实验符合相关伦理要求。
3.主要仪器
台式离心机(型号:TGL-16c,上海安亭科学仪器厂);冷冻离心机(型号:neofuge15R,heal force);全自动放免技术仪(型号:XH-6020,西安核仪器厂);Chemray240全自动生化分析仪(深圳雷杜生命科技);酶标分析仪(型号:DR-200BS,无锡华卫德朗仪器有限公司)。
4.主要试剂
实施例1具有降血尿酸作用的中药组合物提取物的制备
将土茯苓3g、茯苓3g、菊苣3g、车前子2g、葛根2g、川牛膝2g一起加水煎煮提取2次,其中车前子包煎,第一次加12倍总质量的水煎煮1.5h,第二次加10倍总质量的水煎煮1h,过滤合并提取物即得。
实施例2具有降血尿酸作用的中药组合物提取物的制备
将土茯苓2g、茯苓2g、菊苣2g、车前子3g、葛根3g、川牛膝3g一起加水煎煮提取2次,其中车前子包煎,第一次加12倍总质量的水煎煮1.5h,第二次加10倍总质量的水煎煮1h,过滤合并提取物即得。
实施例3具有降血尿酸作用的中药组合物提取物的制备
将土茯苓4g、茯苓5g、菊苣3g、车前子1g、葛根1g、川牛膝1g一起加水煎煮提取2次,其中车前子包煎,第一次加12倍总质量的水煎煮1.5h,第二次加10倍总质量的水煎煮1h,过滤合并提取物即得。
实施例4具有降血尿酸作用的中药组合物颗粒的制备
将实施例1~3制备的提取物浓缩后的浓缩液添加麦芽糊精,经喷雾干燥后得到干膏粉,然后经过粉碎、过筛后与过筛后的麦芽糖醇混合均匀后制备得到具有降血尿酸作用的中药组合物颗粒,分别记为实施例1中药组合物颗粒、实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒。
对比例1土茯苓提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成15g土茯苓,并按照实施例1的方法制备土茯苓提取物。
对比例2茯苓提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成15g茯苓,并按照实施例1的方法制备茯苓提取物。
对比例3菊苣提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成15g菊苣,并按照实施例1的方法制备菊苣提取物。
对比例4车前子提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成15g车前子,车前子包煎,并按照实施例1的方法制备车前子提取物。
对比例5葛根提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成15g葛根,并按照实施例1的方法制备葛根提取物。
对比例6川牛膝提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成10g川牛膝,并按照实施例1的方法制备川牛膝提取物。
对比例7菊苣根、茯苓和川牛膝组合物提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成菊苣根6g,茯苓10g,川牛膝2g,其中车前子包煎,添加10倍总质量的纯化水,煮沸后回流提取6h,过滤合并提取物,即得菊苣根、茯苓和川牛膝组合物提取物。
对比例8土茯苓、菊苣、车前草、薏苡仁、葛根和泽泻组合物提取物的制备
将实施例1的土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝替换成土茯苓25g,菊苣12g,车前草12g,薏苡仁15g,葛根6g,泽泻3g一起水煎煮提取,其中车前子包煎;第一次加12倍总质量的水煎煮1.5h,第二次加8倍总质量的水煎煮1h;过滤合并提取物即得土茯苓、菊苣、车前草、薏苡仁、葛根和泽泻组合物提取物。
实施例5中药组合物对高尿酸血症大鼠的血清尿酸的影响
1.药物制备
将实施例1制备的中药组合物提取物及对比例1~5的提取物浓缩至0.125g/mL,对比例6的提取物浓缩至0.083g/mL,实施例1、对比例1~5的提取物浓缩液按照人体5倍量(15/60*5=1.25g/kg),对比例6的提取物浓缩液按照人体5倍量(10/60*5=0.83g/kg);对比例7的提取物浓缩至0.15g/mL,按照人体5倍量(18/60*5=1.5g/kg);对比例8的提取物浓缩至0.608g/mL,按照人体5倍量(73/60*5=6.08g/kg)。剂量以生药材用量折算。2020版《中国药典》规定,川牛膝用法用量为5~10g,即川牛膝最大用量不得超过10g,本实验在规定范围内采用最大用量,可以保证药物的安全性和有效性。
2.分组和给药
(1)造模处理
分别对SD大鼠进行灌胃处理,每天上午(8:00)灌胃氧嗪酸钾1000mg/kg(氧嗪酸钾溶于0.5%羧甲基纤维素钠配制成浓度100mg/mL的造模药),连续30天建立高尿酸血症动物模型;空白组每天上午(8:00)灌胃等体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-NA)。
(2)雄性SD大鼠适应性喂养3天后,禁食12h以上眼眶采血检测血清尿酸(SUA)值,即为实验第0天尿酸值。将144只雄性SD大鼠按实验第0天尿酸值随机分为空白组、模型组、阳性药组(别嘌呤醇)和实验组(实施例1、对比例1~8),每组12只,每组的尿酸值水平接近,边造模边给药,每天造模处理后,空白组、模型组每天下午(16:00)灌胃等剂量蒸馏水;阳性药组每天下午(16:00)灌胃别嘌呤醇20mg/kg(别嘌呤醇溶于0.5%CMC-NA制备成浓度2mg/mL的阳性药);实验组每天下午(16:00)灌胃实验药实施例1和对比例1~5浓缩液1.25g/kg,对比例6浓缩液0.83g/kg,对比例7浓缩液1.5g/kg,对比例8浓缩液6.08g/kg;均为人体5倍量,灌胃剂量均为1ml/100g大鼠,根据体重变化调整灌胃量,每天给药1次,连续给药30天。
给药第7、14、21、28天,采用异氟烷麻醉大鼠,0.9mm毛细管眼内眦静脉采血,静置2~3h,以3000r/min离心15min后取血清,在全自动生化仪上检测血清尿酸(SUA)含量。
(3)各组大鼠第0、7、14、21、28天血清尿酸(SUA)含量如表1所示,实验数据用均数±标准差(x±s)的形式表示,运用SPSS Statistics 20.0进行数据的处理与分析,数据进行正态分布及方差齐性检验,当数据呈正态分布,组间数据比较用单因素方差分析法(One-way ANOVA)分析;两两比较方差齐时采用LSD进行统计分析,方差不齐时采用Dunnett’s T3进行统计分析,各统计结果以P<0.05为差异有统计学意义。
表1
注:与空白组相比,aP<0.05,aaP<0.01,aaaP<0.001;与模型组相比,bP<0.05,bbP<0.01,bbbP<0.001,与实施例1相比,cP<0.05,ccP<0.01,cccP<0.001。
表1结果显示,与空白组相比,实验第7、14、21、28天,模型组血清SUA显著升高,说明建模成功;
与模型组相比,实验第7天,阳性药组(P<0.01)、实施例1(P<0.01)、对比例7(P<0.05)、对比例8(P<0.01)的大鼠血清SUA显著降低,说明阳性药、实施例1提取物、对比例7提取物、对比例8提取物均有显著降低血清尿酸的作用实验,第14天,阳性药(P<0.01)、实施例1(P<0.01)、对比例8(P<0.01)的大鼠血清SUA显著降低,说明阳性药、实施例1提取物、对比例8提取物均有显著降低血清尿酸的作用,实验第21、28天,阳性药、实施例1、对比例1~8的大鼠血清SUA均显著降低,说明阳性药、实施例1提取物、对比例1~8的提取物均有显著降低血清尿酸的作用;
与模型组相比,实验第7、14、21、28天,阳性药组与实施例1的大鼠血清尿酸无显著差异,说明阳性药与实施例1提取物的降血清尿酸的作用效果接近;对比例1~6的大鼠血清尿酸含量显著高于实施例1,实施例1为总量相同的对比例1~6各单药材的复配组合物,实施例1的降尿酸作用显著优于对比例1~6,说明实施例1的复配组合具有协同增效的作用。
综上可知,本试验例成功构建了高尿酸血症模型;与模型组相比,各给药组大鼠血清尿酸均有降低,说明各给药组的药物均有不同程度缓解高尿酸血症的效果,其中,实施例1组合物提取物效果相对显著且稳定,相较于总量相同的对比例1~6各单味药均有显著更优的降低血清尿酸的作用说明实施例1的组合物具有协同增效的作用。实施例1由土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根、川牛膝六种中药成分组成,即土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根、川牛膝具有协同增效的作用。而且上表可知,实施例1的降尿酸的效果优于或接近对比例7和8,而实施例1组合物使用剂量明显低于对比例7和8,实施例1使用原料重量相对较小,可以达到节约资源的效果。
实施例2和3的组合物提取物与实施例1组合物提取物一致,复配组合同样具有协同增效的作用。
实施例6中药组合物对湿热内蕴型高尿酸血症大鼠的影响
1.造模
雄性SD大鼠每天上午(9:00)灌胃氧嗪酸钾750mg·kg-1·d-1(氧嗪酸钾溶于0.5%羧甲基纤维素钠配制成浓度75mg/mL的造模药),并复合以油脂(5g/kg)和52%红星二锅头(5ml/kg)交替联合灌胃,予100g/L蜂蜜水自由饮用,饲喂高脂高糖饲料,构建中医证候模型+高尿酸血症模型的复合模型组;空白对照组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,普通饲料喂养,自由饮用蒸馏水连续30天。中医证候模型+高尿酸血症模型即湿热内蕴型高尿酸血症模型。
2.分组和给药
雄性SD大鼠适应性喂养一周后随机分为6组,按体重将动物随机分为空白组、复合模型组、阳性药组(四妙丸,1.2g/kg,相当于人12g/天),实施例4制备的实施例1中药组合物颗粒低剂量组(低剂量组)1.25g/kg(以人体5倍剂量)、实施例4制备的实施例1中药组合物颗粒中剂量组(中剂量组)2.5g/kg(以人体10倍剂量)和实施例4制备的实施例1中药组合物颗粒高剂量组(高剂量组)5g/kg(以人体20倍剂量)。边造模边给药,每天造模处理后,空白组和复合模型组每天下午(15:00)分别灌胃等体积生理盐水,阳性药组每天下午(15:00)灌胃给予四妙丸,实施例4制备的实施例1中药组合物颗粒各组每天下午(15:00)分别灌胃同体积的不同剂量组合物,灌胃剂量为1ml/100g,根据体重变化调整灌胃量,连续给药30天。剂量以生药材用量折算。3.记录各组大鼠造模给药后毛发、精神活动状态以及体质量的变化
适应性喂养期间,大鼠的饮食、二便以及精神状况都良好。给药后,相比空白组,各组大鼠饮水量增加,复合模型组大鼠出现大便稀溏,肛周污秽,阴囊脱垂,毛发干枯发黄,精神状态差等症状,与复合模型组相比,给药组大鼠精神状态较好。
各组湿热内蕴型高尿酸血症大鼠体重结果如表2所示,
表2
表2结果显示,与空白组相比,复合模型组在造模第7天、14天、21天、28天体重显著下降,说明和空白组相比,模型组大鼠状态受到影响。
与复合模型组相比,造模第7天,中剂量、高剂量组体重显著上升(P<0.01);造模第14天,高剂量组体重显著上升(P<0.05),造模第21天,中剂量组体重显著上升(P<0.05),造模第28天,各给药组与复合模型组无统计学差异。
4.各组大鼠造模给药后血清尿酸(SUA)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)含量
造模第15天,采用戊巴比妥钠麻醉大鼠,0.9mm毛细管眼内眦静脉采血,静置2~3h,以3000r/min离心15min后取血清,在全自动生化仪上检测各指标含量。造模第30天,采用戊巴比妥钠麻醉大鼠,腹主动脉采血,以3000r/min离心15min后取血清,在全自动生化仪上检测各指标含量。
造模第15天各组湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清SUA、BUN、Scr的含量如表3所示;造模第30天各组湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清SUA、BUN、Scr的含量如表4所示。
表3
表4
表3和表4结果显示,造模第15、30天,与空白组相比,复合模型组大鼠血清SUA含量显著升高(P<0.001),说明造模成功;
造模第15、30天,与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒各剂量给药组大鼠血清SUA含量显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),说明实施例1中药组合物颗粒各剂量均具有降尿酸作用。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒也具有降尿酸作用,其效果与实施例1相当。
5.各组大鼠造模给药后血清NO、ET-1、TX-B2、6-keto-PGF1α、XOD、ADA、UAT、OAT含量的变化
造模第30天,采用戊巴比妥麻醉大鼠,腹主动脉采血,静置2~3h,3500r/min离心15min,用移液枪吸取上层血清。采用酶联免疫法按试剂盒说明测定各指标含量。
(1)造模第30天各组湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清NO、ET-1、TX-B2、6-keto-PGF1α的含量如表5所示。
表5
表5结果显示,造模第30天,与空白组相比,复合模型组大鼠血清NO、6-Keto-PGF1α含量显著下降(P<0.001),ET-1、TX-B2含量显著上升(P<0.001)。说明尿酸升高导致了内皮细胞功能紊乱。
造模第30天,与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒各剂量给药组大鼠血清NO、6-Keto-PGF1α含量显著上升(P<0.01);ET-1、TX-B2含量显著下降。说明实施例1中药组合物颗粒具有保护血管内皮的功能,可以防治由高尿酸血症引起的心血管疾病以及慢性肾脏病。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样具有保护血管内皮的功能,其效果与实施例1相当。
(2)造模第30天各组湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清尿酸代谢相关酶(XOD、ADA、UAT、OAT)的含量如表6所示。
表6
注:与空白组相比,aP<0.05,aaP<0.01,aaaP<0.001;与复合模型组相比,dP<0.05,ddP<0.01,dddP<0.001;x±s,n=8。
表6结果显示,造模第30天,与空白组相比,复合模型组大鼠血清XOD、ADA含量显著升高(P<0.01,P<0.001),OAT含量显著下降(P<0.05)。
造模第30天,与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒中剂量给药组大鼠血清XOD含量显著下降(P<0.01),低剂量和高剂量给药组有下降趋势;低剂量和高剂量给药组ADA含量显著下降(P<0.01),中剂量给药组有下降趋势;中剂量和高剂量给药组OAT含量显著上升(P<0.05,P<0.01),说明实施例1中药组合物颗粒既能通过抑制尿酸的生成,又能促进尿酸的排泄来发挥降血尿酸作用。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样既能通过抑制尿酸的生成,又能促进尿酸的排泄来发挥降血尿酸作用。,其效果与实施例1相当。
6.Western Blot技术检测各组大鼠造模给药后肾脏组织URAT、ABCG2蛋白表达检测
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠肾脏组织URAT、ABCG2蛋白表达结果如图1所示,其中,1为空白组,2为复合模型组,3为阳性药组,4为低剂量组,5为中剂量组,6为高剂量组;β-Actin为内参蛋白;湿热内蕴型高尿酸血症大鼠肾脏组织URAT、ABCG2蛋白表达量如表7所示,
表7
注:与空白组相比,aP<0.05,aaP<0.01,aaaP<0.001;与复合模型组相比,dP<0.05,ddP<0.01,dddP<0.001;x±s,n=3。
图1和表7结果显示,与空白组相比,复合模型组大鼠肾脏组织中URAT表达量升高(P<0.01),ABCG2表达量下降(P<0.01),说明肾脏排泄尿酸的能力下降。
与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒各剂量给药组URAT蛋白表达量均明显降低(P<0.05,P<0.01)。ABCG2蛋白的表达量均明显升高,说明实施例1中药组合物颗粒能够提高肾脏代谢尿酸的能力。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样能够提高肾脏代谢尿酸的能力,其效果与实施例1相当。
7.采用PCR技术检测各组大鼠造模给药后肾脏组织URAT、ABCG2、GLUT9mRNA表达检测
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠肾脏组织URAT、ABCG2、GLUT9 mRNA表达量如表8所示,
表8
表8结果显示,与空白组相比,复合模型组URAT mRNA和GLUT9 mRNA表达量上升(P<0.001),ABCG2 mRNA表达量下降(P<0.05),说明了大鼠肾脏中转录相关蛋白的基因出现异常。
与复合模型组相比,阳性药组、实施例1中药组合物颗粒中剂量和高剂量给药组URAT mRNA表达量显著升高(P<0.05,P<0.01);各给药组GLUT9 mRNA表达量显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001);各给药组ABCG2 mRNA表达量显著上升(P<0.001),说明给药组能调节URAT mRNA、ABCG2 mRNA表达水平趋于正常。
8.各组大鼠造模给药后肾脏组织病理观察
利用H&E染色观察肾脏病理切片。
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠肾脏组织H&E染色结果如图2所示,其中A为空白组,B为复合模型(×200)。
图2结果显示,空白组和复合模型组肾脏组织未见明显异常。空白组和复合模型组肾脏病理切片都无明显异常,说明本实施例造模较轻,没有造成肾炎及肾脏的相关性疾病,符合保健用药安全性的原则。
9.各组大鼠造模给药后血清HSP-70、TNF-α、IL-1β含量的检测(热邪相关指标)
造模第30天取血清,采用酶联免疫法按试剂盒说明书检测HSP70、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4含量。
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清HSP70、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-4含量测定结果如表9所示,
表9
表9结果显示,与空白组相比,复合模型组大鼠血清HSP-70、TNF-α、IL-1β、IL-4含量均显著升高(P<0.01,P<0.001);说明此造模方法导致大鼠体内炎性因子发生紊乱,产生热邪。
与复合模型组相比,各给药组HSP-70含量均显著降低(P<0.01,P<0.001),实施例1中药组合物颗粒高剂量给药组TNF-α含量显著降低(P<0.05),实施例1中药组合物颗粒中剂量和高剂量给药组IL-1β、IL-4含量均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),说明实施例1中药组合物颗粒具有清热的功效。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样具有清热的功效,其效果与实施例1相当。
10.各组大鼠造模给药后结肠组织中TLR4、NF-kβp65表达量的检测(热邪相关指标)
造模结束后,取各组大鼠结肠组织,采用Western blot测定结肠组织中TLR4、NF-kβp65表达量。
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠结肠组织中TLR4、NF-kβp65表达量测定结果如表图3所示,其中1为空白组,2为复合模型组,3为阳性药组,4为低剂量组,5为中剂量组,6为高剂量组;β-Actin为内参蛋白;湿热内蕴型高尿酸血症大鼠结肠组织中TLR4、NF-kβp65含量测定结果如表10所示,
表10
图3和表10结果显示,与空白组相比,复合模型组TLR4、NF-kβp65表达量显著升高(P<0.05,P<0.001),说明了热邪的产生可能与TLR4-NF-kβp65通路有关。与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒各剂量给药组TLR4表达量显著下降(P<0.01,P<0.001),实施例1中药组合物颗粒中剂量和高剂量给药组NF-kβp65表达量显著下降(P<0.05),说明了实施例1中药组合物颗粒清热功效的机制可能是TLR4-NF-kβp65通路。
11.各组大鼠造模给药后胃组织AQP3、AQP4,肠组织AQP3、AQP4含量的测定(湿邪相关指标)
造模结束后,取湿热内蕴型高尿酸血症大鼠胃组织及肠组织,利用免疫组化法,并通过Image Pro Plus软件进行分析。
各组大鼠造模给药后胃、肠组织AQP3的免疫组化结果如图4所示,其中,A为胃组织,B为肠组织,1)空白组;2)复合模型组;3)阳性药;4)低剂量组;5)中剂量组;6)高剂量组;(×200);各组大鼠造模给药后胃、肠组织AQP4的免疫组化结果如图5所示,其中,A为胃组织,B为肠组织,1)空白组;2)复合模型组;3)阳性药;4)低剂量组;5)中剂量组;6)高剂量组;(×200)。
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠胃、肠组织中AQP3、AQP4含量如表11所示,
表11
图3和4及表11结果显示,与空白组相比,复合模型组胃组织AQP3含量显著下降(P<0.01),肠组织AQP3表达量有下降的趋势;胃、肠组织AQP4表达量均显著升高(P<0.01,P<0.001),说明了此造模方法导致大鼠体内水液代谢的紊乱,导致体内湿邪的产生。
与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒中剂量和高剂量给药组胃组织AQP3含量有上升的趋势;各给药组胃组织AQP4含量均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),实施例1中药组合物颗粒各剂量给药组肠组织AQP4含量均显著降低(P<0.05,P<0.01),说明了实施例1中药组合物颗粒具有利湿的功效。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样具有利湿的功效,其效果与实施例1相当。
12.各组大鼠造模给药后血清GAS、血浆MTL、肝脏组织Na+-K+-ATP含量测定(湿邪相关指标)
造模结束后取血清,采用酶联免疫法按试剂盒说明书检测GAS含量;
造模结束后取血浆,采用酶联免疫法按试剂盒说明书检测MTL含量;
造模结束后,将肝脏组织取出放入冻存管并至于-80℃冰箱冻存,检测时进行解冻,以3500r/min离心15min后,取上清液,采用酶联免疫法按照试剂盒说明检测Na+-K+-ATP含量。
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清GAS、血浆MTL、肝脏组织Na+-K+-ATP含量测定结果如表12所示,
表12
表12结果显示,与空白组相比,复合模型组大鼠血清GAS显著降低(P<0.001),血浆MTL含量明显下降,肝脏组织NA+-K+-ATP含量显著下降(P<0.05),说明调节胃肠的主要激素发生紊乱。
与复合模型组相比,各给药组血清GAS含量显著升高(P<0.01,P<0.001),血浆MTL含量有上升趋势,各给药组肝脏组织NA+-K+-ATP含量显著上升(P<0.05,P<0.01,P<0.001),说明实施例1中药组合物颗粒具有健运脾胃、利湿的功效。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样具有健运脾胃、利湿的功效,其效果与实施例1相当。
13.各组大鼠造模给药后血清IgG、IgM含量测定(免疫指标)
造模结束后取血清,采用酶联免疫法按试剂盒说明书检测IgG、IgM含量。
湿热内蕴型高尿酸血症大鼠血清IgG、IgM含量测定结果如表13所示,
表13
表13结果显示,与空白组相比,复合模型组大鼠血清IgG、IgM含量显著升高(P<0.05,P<0.01),说明了复合模型组大鼠受到外界刺激,免疫系统被激活,出现免疫功能亢进。
与复合模型组相比,实施例1中药组合物颗粒各剂量给药组大鼠血清IgG含量显著降低(P<0.05,P<0.01),实施例1中药组合物颗粒中剂量和高剂量给药组IgM含量显著降低(P<0.05),说明了实施例1中药组合物颗粒可以缓解湿热证候引起的免疫功能亢进,从而调节免疫功能。
实施例4制备的实施例2中药组合物颗粒和实施例3中药组合物颗粒同样可以缓解湿热证候引起的免疫功能亢进,从而调节免疫功能,其效果与实施例1相当。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种治疗高尿酸血症的中药组合物,其特征在于,由以下原料组成:土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝,所述土茯苓、茯苓、菊苣、车前子、葛根和川牛膝质量比为2~4:2~5:2~3:1~3:1~3:1~3。
2.如权利要求1的中药组合物的提取物的制备方法,其特征在于,将权利要求1所述中药组合物加水煎煮两次,其中车前子包煎,过滤合并提取物即得。
3.权利要求1所述中药组合物在制备治疗高尿酸血症的药物中的应用。
4.一种治疗高尿酸血症的药物,其特征在于,由权利要求1所述中药组合物制备得到。
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2022
- 2022-08-02 CN CN202210923957.8A patent/CN115154538B/zh active Active
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