CN115152849A - 一种抑制胰脂肪酶活性的酶解燕麦乳及其制备方法 - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
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Abstract
本发明公开了一种抑制胰脂肪酶活性的酶解燕麦乳及其制备方法。包括:(1)浸泡;(2)打浆;(3)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解;(4)蛋白酶酶解;(5)碱性蛋白酶复合酶解;(6)均质灭菌。本发明在保证燕麦乳生产品质的同时,提高了燕麦乳的胰脂肪酶抑制活性,起到抑制脂肪分解吸收、防止肥胖的效果,工艺简单,适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域,具体涉及一种抑制胰脂肪酶活性的酶解燕麦乳及其制备方法。
背景技术
燕麦是一种兼具食疗功能的作物。裸燕麦中蛋白质、脂肪、矿物质元素总量及不饱和脂肪酸含量均居谷物之首,燕麦中的可溶性膳食纤维含量也高于小麦及其他谷物,研究证明燕麦具有降低机体胆固醇的功效。
当干燥的燕麦吸水溶胀后,休眠的酶被活化导致代谢活性增加,产生初级和次级代谢产物,使籽粒发生复杂的物理、化学和结构变化,从而改善燕麦的营养和功能特性。浸泡不仅是种子吸胀的过程,还可以引起种子中一些抗营养成分及矿物质含量的变化,同时一些易溶于水的营养和活性物质又会溶到浸麦水中,同时浸泡使得燕麦籽粒变软,提高燕麦中蛋白和葡聚糖的溶解率。
胰脂肪酶是水解膳食脂肪最重要的酶,可水解50%~70%的食物脂肪。胰脂肪酶抑制剂可通过抑制胰脂肪酶的活性,减少人体对饮食中脂肪的水解和吸收,对治疗肥胖症及预防其并发症有良好的效果。很多天然植物中存在安全、副作用小的胰脂肪酶抑制剂,其主要成分包括黄酮、多酚等,但鲜有研究涉及燕麦组分抑制胰脂肪酶的活性。燕麦作为一种药食同源作物,具有减肥降脂的功效。研究表明燕麦麸具有降低总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量以及提高人类血浆高密度脂蛋白(HDL-C)水平的能力。燕麦水溶性膳食纤维通过抑制胰岛素的分泌、促进促甲状腺激素的分泌、增加肝酯酶和脂蛋白酯酶的活性等来调节肝脏脂代谢紊乱,达到促进脂肪分解的目的。燕麦β-葡聚糖既可以抑制胃饥饿激素的分泌,还能刺激降低食欲的十二指肠胆囊收缩素、胰高血糖素样肽的分泌,进而达到减肥的效果。
发明内容
本发明的目的是利用“蛋白酶和葡聚糖酶限制性酶解”的组合,提供一种抑制胰脂肪酶活性的酶解燕麦乳及其制备方法,提高燕麦乳对胰脂肪酶的抑制率。
本发明所提供的抑制胰脂肪酶活性的酶解燕麦乳,通过包括如下步骤的方法制备得到:
(1)浸泡:将燕麦置于清水中浸泡;
(2)打浆:将浸泡后的燕麦加水打浆,浆液过筛,得到带渣燕麦乳;
(3)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:向带渣燕麦乳中加入80-160U/mL葡聚糖酶(每1mL带渣燕麦乳中加入80-160U葡聚糖酶,下同),30-40U/mL果胶酶、2-10U/mLα-淀粉酶和2-10U/mL糖化酶,酶解,灭酶活,过筛,得到酶解燕麦乳1;
(4)蛋白酶酶解:向酶解燕麦乳1中加入质量分数为0.05-0.1%(每100质量份的酶解燕麦乳1中加入0.05-0.1质量份的木瓜蛋白酶,下同)的木瓜蛋白酶,酶解,灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(5)碱性蛋白酶复合酶解:调整pH至9-10,向酶解燕麦乳2中加入质量分数为0.5-1%的碱性蛋白酶,酶解,灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
所述步骤(3)、(4)和(5)中所用的酶为:
葡聚糖酶:沧州夏盛酶生物技术有限公司,酶活力140000U/g;
木瓜蛋白酶:南宁庞博生物工程有限公司,酶活力100000U/g;
碱性蛋白酶:沧州夏盛酶生物技术有限公司,酶活力200000U/g;
果胶酶:山东隆科特酶制剂有限公司,酶活力30000U/g;
α-淀粉酶:北京奥博星生物技术有限责任公司,酶活力>3700U/g;
糖化酶:北京博奥拓达科技有限公司(Biotopped),酶活力100000U/g;
(6)将酶解燕麦乳3加入或不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
上述方法步骤(1)中,所述燕麦为表面光亮饱满、颗粒完整的燕麦;
所述浸泡在室温下进行,浸泡使燕麦吸水膨胀至原质量的1.5-2倍;
上述方法步骤(2)中,燕麦与水的重量比为1:8-10,以燕麦干重计算;
打浆用水的水温可为70-90℃;
所述过筛为过60-100目筛;
上述方法步骤(3)中,所述酶解的温度可为50-55℃,时间可为0.5-1.0h,
所述灭酶活为在100℃保温处理8-10min;
所述过筛为过100-200目筛;
上述方法步骤(4)中,所述酶解的温度可为50-55℃,时间可为1.0-3.0h,
所述灭酶活为在100℃保温处理8-10min;
上述方法步骤(5)中,所述酶解的温度可为50-55℃,时间可为1.0-3.0h,
所述灭酶活为在100℃保温处理8-10min。
由上述方法制备得到的酶解燕麦乳也属于本发明的保护范围。
上述酶解燕麦乳用于制备具有胰脂肪酶抑制功能的产品和/或治疗和/或预防肥胖的产品。
本发明取得的优点和积极效果为:通过蛋白酶和葡聚糖酶限制性酶解的协同作用,获得具有合适分子量大小的燕麦多肽和燕麦β-葡聚糖,辅以α-淀粉酶和糖化酶处理降解淀粉,在保证燕麦乳生产品质的同时,有效地提高了燕麦乳的胰脂肪酶抑制活性,起到抑制脂肪分解吸收、防止肥胖的效果,工艺简单,适合工业化生产方式。
附图说明
图1为实施例1HPLC图谱;
图2为实施例2HPLC图谱;
图3为对比例1HPLC图谱;
图4为对比例2HPLC图谱;
图5为对比例3HPLC图谱;
图6为对比例4HPLC图谱;
图7为对比例5HPLC图谱;
图8为对比例6HPLC图谱;
图9为葡萄糖含量标准曲线;
图10为蛋白质含量标准曲线;
图11为葡聚糖相对分子量标准曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南,并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例1和2及对比例1-3中的酶来自:
葡聚糖酶:沧州夏盛酶生物技术有限公司,酶活力140000U/g;
木瓜蛋白酶:南宁庞博生物工程有限公司,酶活力100000U/g;
碱性蛋白酶:沧州夏盛酶生物技术有限公司,酶活力200000U/g;
果胶酶:山东隆科特酶制剂有限公司,酶活力30000U/g;
α-淀粉酶:北京奥博星生物技术有限责任公司,酶活力>3700U/g;
糖化酶:北京博奥拓达科技有限公司(Biotopped),酶活力100000U/g。
实施例1
(1)选料:选取表面光亮饱满、颗粒完整的燕麦;
(2)浸泡:将选好的燕麦放置于清水中室温浸泡,使其吸水膨胀至原质量的1.8倍;
(3)打浆:将浸泡后的燕麦按1:8(以燕麦干重计算)比例加水(水温90℃)打浆,使渣过100目,得到带渣燕麦乳;
(4)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:带渣燕麦乳中加入80U/mL葡聚糖酶、36U/mL果胶酶、10U/mLα-淀粉酶和10U/mL糖化酶一起于55℃酶解0.5h后100℃保温10min灭酶活,过滤200目筛,得到酶解燕麦乳1;
(5)蛋白酶酶解:将酶解燕麦乳1加入质量分数为0.05%的木瓜蛋白酶于50℃酶解1h后100℃保温10min灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(6)碱性蛋白酶复合酶解:调整酶解燕麦乳2的pH为9,加入质量分数为0.5%的碱性蛋白酶,于50℃酶解1h后100℃保温1min灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
(7)将酶解燕麦乳3不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
实施例2
(1)选料:同实施例1;
(2)浸泡:同实施例1;
(3)打浆:同实施例1;
(4)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:带渣燕麦乳中加入160U/mL葡聚糖酶、36U/mL果胶酶、10U/mLα-淀粉酶和10U/mL糖化酶一起于55℃酶解0.5h后100℃保温10min灭酶活,过滤200目筛,得到酶解燕麦乳1;
(5)蛋白酶酶解:将酶解燕麦乳1加入质量分数为0.1%的木瓜蛋白酶于50℃酶解1h后100℃保温10min灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(6)碱性蛋白酶复合酶解:调整pH为9,将酶解燕麦乳2加入质量分数为0.75%的碱性蛋白酶,于50℃酶解1h后100℃保温1min灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
(7)将酶解燕麦乳3不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
对比例1
(1)选料:同实施例1;
(2)浸泡:同实施例1;
(3)打浆:同实施例1;
(4)淀粉全酶解:带渣燕麦乳中加入36U/mL果胶酶、10U/mLα-淀粉酶和10U/mL糖化酶一起于55℃酶解0.5h后100℃保温10min灭酶活,过滤200目筛,得到酶解燕麦乳1;
(5)将酶解燕麦乳1不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
对比例2
(1)选料:同实施例1;
(2)打浆:同实施例1;
(3)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:带渣燕麦乳中加入80U/mL葡聚糖酶、36U/mL果胶酶、10U/mLα-淀粉酶和10U/mL糖化酶一起于55℃酶解0.5h后100℃保温10min灭酶活,过滤200目筛,得到酶解燕麦乳1;
(4)蛋白酶酶解:将酶解燕麦乳1加入质量分数为0.05%的木瓜蛋白酶于50℃酶解1h后100℃保温10min灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(5)碱性蛋白酶复合酶解:调整pH为9,将酶解燕麦乳2加入质量分数为0.5%的碱性蛋白酶,于50℃酶解1h后100℃保温1min灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
(6)将酶解燕麦乳3不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
对比例3
(1)选料:同实施例1;
(2)浸泡:同实施例1;
(3)打浆:同实施例1;
(4)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:带渣燕麦乳中加入640U/mL葡聚糖酶、36U/mL果胶酶、10U/mLα-淀粉酶和10U/mL糖化酶一起于55℃酶解0.5h后100℃保温10min灭酶活,过滤200目筛,得到酶解燕麦乳1;
(5)蛋白酶酶解:将酶解燕麦乳1加入质量分数为0.15%的木瓜蛋白酶于50℃酶解1h后100℃保温10min灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(6)碱性蛋白酶复合酶解:调整pH为9,将酶解燕麦乳2加入质量分数为1.2%的碱性蛋白酶,于50℃酶解1h后100℃保温1min灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
(7)将酶解燕麦乳3不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
对比例4
(1)选料:同实施例1;
(2)浸泡:同实施例1;
(3)打浆:同实施例1;
(4)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:带渣燕麦乳中加入80U/mL葡聚糖酶、36U/mL果胶酶、10U/mLα-淀粉酶和10U/mL糖化酶一起于55℃酶解0.5h后100℃保温10min灭酶活,过滤200目筛,得到酶解燕麦乳1;
(5)蛋白酶酶解:将酶解燕麦乳1加入质量分数为0.05%的木瓜蛋白酶于50℃酶解1h后100℃保温10min灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(6)碱性蛋白酶复合酶解:调整pH为9,将酶解燕麦乳2加入质量分数为0.5%的碱性蛋白酶,于50℃酶解1h后100℃保温1min灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
所用葡聚糖酶购自诺维信生物技术有限公司复配耐温Max型β-葡聚糖酶100000U/g,700EGU/g;木瓜蛋白酶购自南宁恒东华道生物科技有限责任公司,酶活力100000U/g;所用碱性蛋白酶购自诺维信诺维信生物技术有限公司食品级碱性蛋白酶Alcalase 2.4L,酶活力200000U/g;果胶酶购自山东隆科特酶制剂有限公司,酶活力30000U/g;α-淀粉酶购自北京奥博星生物技术有限责任公司,酶活力>3700U/g;糖化酶购自北京博奥拓达科技有限公司(Biotopped),酶活力100000U/g;
(7)将酶解燕麦乳3不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
对比例5
(1)制样:根据对比例1中多糖含量配置燕麦β-葡聚糖(纯品)溶液。燕麦β-葡聚糖购自浙江深友生物技术有限公司。
对比例6
(1)制样:根据对比例1中多糖含量配置燕麦β-葡聚糖(纯品)溶液;
(2)葡聚糖的限制性酶解:参考实施例1,添加80U/mL的葡聚糖酶于55℃酶解0.5h后,100℃保温10min灭酶活,得到燕麦β-葡聚糖酶解液。
本发明的相关检测方法和结果如下所示:
将实施例和对比例所得产品进行多糖、多肽含量分析、胰脂肪酶抑制活性分析和多糖分子量分析。
1、多糖含量的测定:
分别取实施例和对比例制得的产品4mL,添加4倍体积无水乙醇醇沉、过夜、烘干,复溶到2mL去离子水中,得到燕麦乳粗多糖溶液。采用苯酚硫酸法测定多糖含量。
(1)标准曲线的绘制:准确吸取0.1mg/mL葡萄糖标准液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于试管中,并补水至1.0mL,加入0.5mL质量分数为6%的苯酚溶液后,沿试管壁缓慢加入5mL浓硫酸溶液,混匀,沸水浴5min,冷却至室温。以1.0mL蒸馏水为空白对照,紫外分光光度计测定490nm波长处吸光度值,三次重复取平均值后,以葡萄糖含量为横坐标,以OD490nm为纵坐标,绘制标准曲线如图9。可知标准曲线线性回归方程为y=8.2243x-0.0087,R2=0.999,式中y为吸光值,x为葡萄糖含量(mg/mL)。
(2)样品溶液多糖的测定:准确吸取1mL稀释200倍的实施例和对比例制得的粗多糖溶液,加入0.5mL质量分数为6%的苯酚溶液后,沿试管壁缓慢加入5mL浓硫酸溶液,混匀,沸水浴5min,冷却至室温。以试剂空白为参比,紫外分光光度计测定490nm波长处吸光度值。根据标准曲线算得溶液中多糖含量。
2、多肽含量的测定:
分别取实施例和对比例制得的产品5mL,加入5mL质量分数10%的三氯乙酸溶液,8000r/min离心3min后取上清液待测。
(1)标准曲线的绘制:准确吸取10mg/mL牛血清白蛋白标准液0.16、0.32、0.48、0.64、0.8mL于试管中,并补水至0.8mL,加入3.2mL双缩脲试剂,混匀,于25℃下反应30min。以1.0mL蒸馏水为空白对照,紫外分光光度计测定540nm波长处吸光度值,三次重复取平均值后,以蛋白含量为横坐标,以OD540nm为纵坐标,绘制标准曲线如图10。可知标准曲线线性回归方程为y=0.0537x-0.002,R2=0.9999,式中y为吸光值,x为蛋白含量(mg/mL)。
(2)样品溶液多肽的测定:准确吸取0.8mL待测样品溶液,加入3.2mL双缩脲试剂,混匀,于25℃下反应30min。以试剂空白为参比,紫外分光光度计测定540nm波长处吸光度值。根据标准曲线算得溶液中多肽含量。
3、胰脂肪酶活抑制率的测定
精确称取10mg胰脂肪酶于100mL容量瓶中,用pH 7.5的磷酸缓冲液定容。称取10g聚合度1750±50的聚乙烯醇(PVA),不断搅拌下用250mL蒸馏水将聚乙烯醇全部溶解,多层纱布过滤,得到4%PVA溶液。取PVA溶液150mL,加50mL橄榄油,用高速组织捣碎机搅动6min,即成乳白色聚乙烯醇橄榄油乳化液。取1mL实施例和对比例制得的产品,4mL磷酸缓冲液和4mL乳化液混合于40℃预热10min。加入5mL胰脂肪酶溶液,40℃反应20min后用15mL 95%乙醇终止反应。加入3滴酚酞,用0.05mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至微红色,记录滴定用去NaOH溶液的体积V1。以加胰脂肪酶之前先加入95%乙醇使酶失活为实验空白组测定V2,不加样品为对照组测定V3,不加样品且先加95%乙醇为空白组测定V4。胰脂肪酶活性(u/g)=[(V1-V2)-(V3-V4)]×25。
4、多糖分子量的测定:
取燕麦乳酶解后的上清液4mL,添加4倍体积无水乙醇醇沉、过夜、烘干,复溶到2mL去离子水中,得到燕麦乳粗多糖溶液。
使用HPLC测定多糖分子量。条件如下:
色谱仪:Agilent 1260;色谱柱:AgiLent PL aquageL-OH MIXED-M(300mm×8mm);检测器:示差折光检测器;流动相:0.1mol/LNaNO3溶液;流速:1.0mL/min;进样量:20μL;柱温:30℃。
用0.1mol/L的NaNO3溶液分别溶解分子量为3620、12600、30200、63300、126000g/mol的葡聚糖标准品,将其过0.22μm微孔过滤器后依次进样。以LgMw为纵坐标,保留时间为横坐标绘制标准曲线,结果如图11所示。多糖相对分子量与保留时间的计算公式为:y=-0.5281x+8.9252,R2=0.9911,其中x为保留时间。
将粗多糖溶液使用0.1mol/L的NaNO3溶液稀释,使多糖含量为1.8mg/mL,过0.22μm微孔过滤器,进样,记录保留时间。计算多糖的相对分子质量。
本发明实施例和对比例多糖含量、多肽含量、胰脂肪酶活抑制率和多糖分子量的测定结果如下:
从表1中可以看出,与对比例1相比,采用适量的葡聚糖酶和蛋白酶酶解(实施例1和实施例2)可使多糖溶出量和肽得率显著提高,多糖含量提高2.48-3.43倍,多肽含量提高1.57-1.72倍,胰脂肪酶抑制活性提高5.16-6.62倍;
干燕麦进行本专利的全酶解(对比例2)与只浸泡且不加蛋白酶和葡聚糖酶处理(对比例1)相比,蛋白酶和葡聚糖酶酶解后多糖含量和多肽含量与对比例1相比均显著提高,胰脂肪酶抑制活性也提高4.01倍,表明本专利的酶解技术具有良好的提高胰脂肪酶抑制活性能力;对比例2与实施例相比,进一步发现采用干燕麦制作酶解燕麦乳的多糖、多肽含量和胰脂肪酶抑制活性相对低,表明浸泡处理仍是激活燕麦内源酶并使活性物质释放的重要处理方法之一。然而干燕麦酶解乳由于缺乏浸泡过程,燕麦内源酶没有激活,因此胰脂肪酶抑制活性低于实施例,说明浸泡对于促进燕麦中具有抑制脂肪酶活性物质的释放是必要的。
对比例3采用更高添加量的葡聚糖酶和复合蛋白酶,结果表明多糖含量和多肽含量显著提高,然而高酶活性酶解燕麦乳的胰脂肪酶抑制活性显著下降,表明只有一定分子量的多糖和多肽才具有抑制胰脂肪酶活性,过低分子量后活性锐减。
对比例4使用其它公司的相同酶活性单位的酶解燕麦乳,其多糖含量稍高于实施例,但多肽含量减少,根据表2可知对比例4中大分子量的多糖占比更高,而多肽含量更低,抑制胰脂肪酶活性低于实施例,有可能是多糖分子量偏大和多肽含量少引起的,进一步证明通过本专利特征性酶组合获得的酶解燕麦乳才具有较高的胰脂肪酶抑制活性。
与对比例1相同多糖含量的燕麦提取多糖(对比例5)没有胰脂肪酶抑制活性,而对燕麦多糖采用与实施例2相同的葡聚糖酶进行适度酶解(对比例6),获得的酶解葡聚糖具有一定的胰脂肪酶抑制活性,表明一定的特性葡聚糖酶解可以提高燕麦多糖的胰脂肪酶活性;同时也证明本专利实施例中所获多肽也同时具有胰脂肪酶抑制活性。
表1本发明实施例和对比例中多糖含量、多肽含量和胰脂肪酶活抑制率
从表2中可以看出,对比例1为浸泡燕麦只采用果胶酶、淀粉酶、糖化酶酶解后打浆获得的普通酶解燕麦乳,本专利实施例进一步采用葡聚糖酶和复合蛋白酶酶解后,18-20KDa分子量多糖占比均高于对比例1;对比例1中没有13-14KDa分子量多糖成分;7-8KDa分子量多糖占比与对比例1相近,而实施例中700Da左右分子量比例明显少于对比例1,表明本专利所用复合酶酶解技术提高了燕麦多糖中13-14KDa分子量葡聚糖的占比。
对比例2为采用干燕麦直接打浆并进行全部专利技术进行酶解,与只浸泡的未采用蛋白酶和葡聚糖酶酶解的燕麦乳(对比例1)相比,该酶组合水解产生了对比例1中不存在的13-14KDa分子量多糖,显示本专利采用葡聚糖酶适度酶解可获得特征性分子量的稍低聚合度的有抑制脂肪酶活性的葡聚糖。
实施例与对比例2相比,浸泡后的酶解燕麦乳(实施例)中高分子量葡聚糖(18-20KDa)比例比干燕麦酶解制得酶解燕麦乳(对比例2)少,而实施例中本专利酶组合产生的特征性的13-14KDa分子量多糖占比也高于对比例2,表明本专利采用浸泡燕麦进行酶解处理比干燕麦直接打浆后产生的特征活性成分比例更高,因此抑制脂肪酶活性高。
对比例3采用更高添加量的葡聚糖酶和蛋白酶进行酶解获得燕麦乳,结果表明过量的酶添加使得18-20KDa和13-14KDa分子量的多糖完全酶解,使得7KDa左右分子量的低聚糖含量显著增加,表明过多酶添加不利于获得适量分子量的葡聚糖。
表2本发明实施例和对比例中多糖分子量测定
----:没有检测到峰
对比例4采用与实施例相同的酶添加量,但葡聚糖酶和蛋白酶来自不同厂家。结果表明,对比例4与实施例相比,18-20KDa分子量葡聚糖比例高于实施例,其它分子量葡聚糖所占比例与实施例相近,表明相同酶活来源不同厂家的葡聚糖酶水解燕麦乳可以获得一定分子量的燕麦葡聚糖,但不同厂家葡聚糖酶是不同的酶的混合物,包括不同比例的内切酶、外切酶,同时也含有微量的非葡聚糖水解酶类,因此特定厂家的酶的添加量对于保持葡聚糖的胰脂肪酶抑制活性是必要的。
对比例6与对比例5相比进一步证明一定比例的特性葡聚糖酶可以将11-12KDa的葡聚糖水解为分子量4.5KDa的聚糖。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说,在不脱离本发明的宗旨和范围,以及无需进行不必要的实验情况下,可在等同参数、浓度和条件下,在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例,应该理解为,可以对本发明作进一步的改进。总之,按本发明的原理,本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进,包括脱离了本申请中已公开范围,而用本领域已知的常规技术进行的改变。
Claims (4)
1.一种制备酶解燕麦乳的方法,包括如下步骤:
(1)浸泡:将燕麦置于清水中浸泡;
(2)打浆:将浸泡后的燕麦加水打浆,浆液过筛,得到带渣燕麦乳;
(3)淀粉全酶解和葡聚糖的限制性酶解:向带渣燕麦乳中加入80-160U/mL葡聚糖酶,30-40U/mL果胶酶、2-10U/mLα-淀粉酶和2-10U/mL糖化酶,酶解,灭酶活,过筛,得到酶解燕麦乳1;
(4)蛋白酶酶解:向酶解燕麦乳1中加入质量分数为0.05-0.1%的木瓜蛋白酶,酶解,灭酶活,得到酶解燕麦乳2;
(5)碱性蛋白酶复合酶解:调整pH至9-10,向酶解燕麦乳2中加入质量分数为0.5-1%的碱性蛋白酶,酶解,灭酶活,得到酶解燕麦乳3;
所述步骤(3)、(4)和(5)中所用的酶为:
葡聚糖酶:沧州夏盛酶生物技术有限公司,酶活力140000U/g;
木瓜蛋白酶:南宁庞博生物工程有限公司,酶活力100000U/g;
碱性蛋白酶:沧州夏盛酶生物技术有限公司,酶活力200000U/g;
果胶酶:山东隆科特酶制剂有限公司,酶活力30000U/g;
α-淀粉酶:北京奥博星生物技术有限责任公司,酶活力>3700U/g;
糖化酶:北京博奥拓达科技有限公司(Biotopped),酶活力100000U/g;
(6)将酶解燕麦乳3加入或不加入甜味剂,调整温度至70℃,于30Mpa进行均质后,于121℃灭菌15min,得到酶解燕麦乳。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述浸泡在室温下进行,浸泡使燕麦吸水膨胀至原质量的1.5-2倍;
步骤(2)中,燕麦与水的重量比为1:8-10,以燕麦干重计算;
打浆用水的水温为70-90℃;
所述过筛为过60-100目筛;
步骤(3)中,所述酶解的温度为50-55℃,时间为0.5-1.0h,
所述灭酶活为在100℃保温处理8-10min;
所述过筛为过100-200目筛;
上述方法步骤(4)中,所述酶解的温度为50-55℃,时间为1.0-3.0h,
所述灭酶活为在100℃保温处理8-10min;
上述方法步骤(5)中,所述酶解的温度为50-55℃,时间为1.0-3.0h,
所述灭酶活为在100℃保温处理8-10min。
3.由权利要求1或2所述方法制备得到的酶解燕麦乳。
4.权利要求3所述酶解燕麦乳在制备具有胰脂肪酶抑制功能的产品和/或治疗和/或预防肥胖的产品中的应用。
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