CN115137767B - 一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物及其制备方法，该中药组合物中，各种组分的重量份数比为：黄芪300～800份，制附子50～150份，当归50～200份，桂枝100～300份，茯苓100～400份，白芍100～400份，鸡血藤150～400份，牛膝150～400份，炙甘草150～400份。本发明利用各药物的功效产生协同作用，共奏益气温经，活血化瘀，通络止痛之功，从而有效地治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎。本发明的中药组合物配方合理，制备简单，临床疗效显著。

Description

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物及其 制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物及其制备方法。

背景技术

血栓闭塞性脉管炎简称脉管炎，是指周围脉管(中、小动脉及静脉)的一种慢性持续性、进行性的血管炎症病变，导致血栓形成使血管腔闭塞(在中医学中属“脱疽”范畴)。在我国北方各省多见，多发于男性青壮年。病变主要累及四肢远端的中、小动脉，伴行静脉和浅表静脉也常累及，以下肢为主。临床表现：患肢缺血、疼痛，间歇性跛行，受累动脉搏动减弱或消失，伴有游走性浅表性静脉炎，严重者可有肢端溃疡和坏死；舌象：舌质以淡红舌、紫舌为多,其次为红舌，舌苔以薄白为主。

临床上将本病的发展过程分三期：

初期(局部缺血期)：患肢麻木、发凉、怕冷、沉重，足趾有针样痛、小腿肌肉出现痉挛性疼痛、间歇性跛行、患肢动脉搏动微弱或消失、可游走性浅静脉炎，全身症状不显著。

中期(营养障碍期)：患肢麻木、发凉、怕冷、间歇性跛行加重，并有静息痛。患肢皮肤常呈潮红色、紫红色或苍白色、足部皮肤干燥、脱皮、趾甲生长缓慢、增厚变形、汗毛脱落、小腿肌肉有萎缩现象、患肢动脉搏动消失。可有情绪不安，头晕腰痛，筋骨松软之症。

后期(坏死期)：患肢由于严重的血液循环障碍，发生溃疡或坏死，大多数局限在足趾或足部，向上蔓延至踝关节或小腿者很少见。疼痛剧烈难忍，患者常抱膝而坐，捶胸顿足，号啕大叫，痛不欲生。坏疽的足趾脱落后，常遗留溃疡而经久不愈合。全身常伴有发热、口干、食欲减退、失眠、便秘、尿黄赤等症状。

脱疽证属中医证候诊断标准，本病是一全身性疾病，发病机理复杂，常与寒冷侵袭，肝肾不足，外伤，热毒内蕴等因素有关。由于脾肾阳气不足，不能温养四肢，复遇寒湿之邪，自外而入，气血凝滞，经络阻隔，气血不通则痛，四肢失于濡养而不温，渐至皮肉枯槁，最后坏死脱落。

辨证论治是中医学治疗各疾病的特色之一，关于辨证分型，目前尚无统一的标准。莫爵飞等将本病分为以下五种证型：寒凝型、血瘀型、湿热型、热毒型、气血两虚型，分别处以阳和汤合金匮肾气丸、当归活血汤、茵陈赤小豆汤、四妙勇安汤、人参养荣汤加减治疗，临床取得较好疗效。刘芳等将本病分为三型治疗，寒湿阻络证予以独活寄生汤加减，寒凝络痹证予以阳和汤和当归四逆汤加减，热毒炽盛证予以顾步汤加减。张延铭将本病辨证为四型，即阳虚寒凝型、气滞血瘀证、阴虚毒盛证、气血两虚证，分别处以阳和汤、血府逐瘀汤、四妙勇安汤、人参营养汤加减治疗。谢伟等将本病分为六型进行治疗，寒湿凝滞、气血不畅，予以温经散寒，祛湿通络之法，常用阳和汤进行加减；气机郁滞、血行瘀阻，予以行气止痛、通络活血之法，常用血府逐瘀汤加减，气血不足、经脉失养，予以补气养血、通利经脉，常用十全大补丸加减；脾气不足、肾阳虚衰，予以补益脾气、温肾助阳，常用金匮肾气丸加减；热毒炽盛、血脉瘀阻，予以清热解毒、凉血化瘀，常用五味消毒饮加减；下焦湿热、湿瘀互结，予以利湿清热、活血化瘀，常用四妙勇安汤加减。李志娟临床治疗将本病分为四型：1)寒凝血滞型：治以温经散寒、活血通络，此证若肢冷严重，疼痛剧烈患者，以乌头桂枝汤加减；若四肢皆冷，下肢较甚，疼痛轻者，予以附子汤加减；若四肢皆冷，偏于上肢者，予以当归四逆汤加减；2)气血瘀滞型：治以活血化瘀、理气行滞，此证予以身痛逐瘀汤加减；若血瘀色重，呈斑条状，质地偏硬者，当予以活络效灵汤加味；3)阳虚毒陷型：治以温肾助阳、散寒举陷，予以阳和汤加味；4)阴虚化热型：治以滋阴清热、解毒化瘀，予以四妙勇安汤加味。

西医治疗脉管炎主要以抗炎、镇痛的西药为主，西药确实可以改善病情，且起效快，对疼痛的缓解效果也较好，但是抗炎效果差、副作用较大，不能彻底治愈脉管炎，找不准病因、病机，往往用药时好转，一旦停药就会重新出现原来的症状。西医、西药的治疗无法从全身的症状入手，因为脉管炎不是一个局部疾病，全身的血管众多，一根出现问题就会引起全身的不适，所以要运用中医理论和中药进行全身的调理和治疗。

目前，治疗脉管炎的中药制剂普遍存在成分较多，含有名贵中药，成本高，而且中药制剂的成分多，浓缩难，导致中药制剂成形困难，如要成形则需要加入大量的辅料，增加成本，同时也增加了患者的服药剂量。目前现有方剂治则主要是针对病之标进行组方，即对血瘀、湿浊、湿浊化热的治疗，治则和用药在临床中往往将该病的三期混用和互用，造成治则和用药互相叠加，针对性和系统性不清晰，病因和病症不精准，有效性不足。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，针对目前从根本上治疗寒虚证引起的局部缺血期血栓闭塞性脉管炎的药物尚存在许多不足，如西医治疗仍以化学药物治疗为主，不但副作用比较大，而且治标不治本，不能从根本上解决病人的痛苦，而祖国医学千百年来积累了丰富的临床经验，本发明认为局部缺血期脉管炎临床表现为患肢麻木、发凉、怕冷、酸胀，随之出现间歇性跛行，是脉管炎发病之本，其主因为阳气不足，气血虚弱(寒虚证)引起。本发明采取温阳并注重补虚(补气虚、补血虚)同时注重引经归经，该治疗原则和用药组方更符合中医理论和中医药临床实践，组方用药更加精准有效。本发明结合寒虚证引起的局部缺血期血栓闭塞性脉管炎用于寒冷侵袭，肝肾不足等因素导致的中小动脉、浅静脉管腔阻塞的中成药制剂。本发明采用益气温经，活血化瘀，通络止痛的方法从根本上治疗脉管炎，发明了一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物。本发明的组合物经过药效学试验研究证明其有效性，并通过毒理安全性试验证明其安全可靠；本发明的中药组合物配方合理，制备简单，临床疗效显著，广泛应用于临床，解决患者的痛苦，并取得了理想的疗效。患者的临床症状、行走距离及足背动脉血流参数均明显改善，说明本发明的组合物能够有效促进下肢病变动脉的恢复，改善组织供血，是治疗血栓闭塞性脉管炎较好的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，各组份的重量份数比为：黄芪300～800份，制附子50～150份，当归50～200份，桂枝100～300份，茯苓100～400份，白芍100～400份，鸡血藤150～400份，牛膝150～400份，炙甘草150～400份。

所述治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，各组份的重量份数比可优选为：黄芪300～500份，制附子50～100份，当归50～100份，桂枝100～200份，茯苓100～200份，白芍100～300份，鸡血藤150～300份，牛膝150～300份，炙甘草150～300份。

所述治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，各组份的重量份数比也可优选为：黄芪500~700份，制附子80~150份，当归150~200份，桂枝150~300份，茯苓150~400份，白芍250~400份，鸡血藤250~400份，牛膝250~400份，炙甘草250~400份。

所述治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，各组份的重量份数比还可优选为：黄芪450～550份，制附子50～80份，当归60～90份，桂枝100～150份，茯苓150～200份，白芍150～200份，鸡血藤200～300份，牛膝200～300份，炙甘草200～300份。

所述治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，可以制备成任何一种常用的制剂。

所述治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，可以制备的制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、合剂、糖浆剂、煎膏剂、散剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。

本发明所述中药可以被有相同或相似功效的中药代替，并且这些药材均可以按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》炮制，比如牛膝可用川牛膝替换，炙甘草可以用甘草替换，制附子可以用附子替换，替换后的药效可比使用原药效果更佳，但均属于本发明内容。

为解决上述技术问题，本发明提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300～800份，制附子50～150份，当归50～200份，桂枝100～300份，茯苓100～400份，白芍100～400份，鸡血藤150～400份，牛膝150～400份，炙甘草150～400份，备用；

②取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加6～14倍生药量的水，加热回流提取1～6小时，加热回流提取1～3次，滤过，合并提取液，在40～90℃减压浓缩至密度1.01～1.20，备用；

③将步骤②的浓缩液在50～90℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

为解决上述技术问题，本发明又提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300～800份，制附子50～150份，当归50～200份，桂枝100～300份，茯苓100～400份，白芍100～400份，鸡血藤150～400份，牛膝150～400份，炙甘草150～400份，备用；

②取制附子、当归、桂枝三味药材粉碎成粗粉，备用；

③取黄芪、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加6～14倍生药量的水，加热回流提取1～6小时，加热回流提取1～3次，滤过，合并提取液，在40～90℃减压浓缩至密度1.01～1.20，备用；

④将步骤③的浓缩液在50～90℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，备用；

⑤将步骤②的粗粉与步骤④的物料混合均匀，制备成制剂，即得。

为解决上述技术问题，本发明还提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300～800份，制附子50～150份，当归50～200份，桂枝100～300份，茯苓100～400份，白芍100～400份，鸡血藤150～400份，牛膝150～400份，炙甘草150～400份，备用；

②取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加6～12倍生药量的50％～90％的乙醇，加热回流提取1～3小时，加热回流提取1～3次，滤过，合并提取液，在50～80℃减压浓缩至密度1.05～1.20，备用；

③将步骤②的浓缩液在50～90℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

为解决上述技术问题，本发明还提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300～800份，制附子50～150份，当归50～200份，桂枝100～300份，茯苓100～400份，白芍100～400份，鸡血藤150～400份，牛膝150～400份，炙甘草150～400份，备用；

②取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草粉碎成粉末，过筛，备用；

③将步骤②的粉末加入辅料，制备成制剂，即得。

为解决上述技术问题，本发明提供一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物在治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎中的应用。

附图说明

图1是雄性大鼠用药12周及恢复期4周各组间动物体重变化趋势图。

图2是雌性大鼠用药12周及恢复期4周各组间动物体重变化趋势图。

具体实施方式

下述实施例用于举例说明本发明药物的制备，但其不能对本发明的范围构成任何限制。

实施例1

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪400份，制附子100份，当归100份，桂枝150份，茯苓200份，白芍200份，鸡血藤300份，牛膝200份，炙甘草300份。

具体制备步骤：

①取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加12倍生药量的水，加热回流提取2小时，加热回流提取3次，滤过，合并提取液，在70℃减压浓缩至密度1.12，备用；

②将步骤①的浓缩液在70℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

实施例2

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪400份，制附子100份，当归100份，桂枝150份，茯苓200份，白芍200份，鸡血藤300份，牛膝200份，炙甘草300份。

具体制备步骤：

①取制附子、当归、桂枝三味药材粉碎成粗粉，备用；

②取黄芪、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加12倍生药量的水，加热回流提取2小时，加热回流提取3次，滤过，合并提取液，在70℃减压浓缩至密度1.15，备用；

③将步骤②的浓缩液在80℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，备用；

④将步骤①的粗粉与步骤③的物料混合均匀，制备成制剂，即得。

实施例3

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪500份，制附子120份，当归120份，桂枝150份，茯苓300份，白芍250份，鸡血藤320份，牛膝210份，炙甘草250份。

具体制备步骤：

①取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加10倍生药量的70％的乙醇，加热回流提取2小时，加热回流提取3次，滤过，合并提取液，在60℃减压浓缩至密度1.10，备用；

②将步骤①的浓缩液在70℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

实施例4

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪600份，制附子150份，当归150份，桂枝200份，茯苓250份，白芍200份，鸡血藤280份，牛膝240份，炙甘草250份。

具体制备步骤：

①取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草粉碎成粉末，过筛，备用；

②将步骤①的粉末加入辅料，制备成制剂，即得。

实施例5

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪450份，制附子110份，当归90份，桂枝140份，茯苓180份，白芍210份，鸡血藤310份，牛膝220份，炙甘草320份。

具体制备步骤：

①取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加12倍生药量的水，加热回流提取2小时，加热回流提取3次，滤过，合并提取液，在70℃减压浓缩至密度1.12，备用；

②将步骤①的浓缩液在70℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

实施例6

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪600份，制附子130份，当归150份，桂枝180份，茯苓250份，白芍300份，鸡血藤200份，牛膝250份，炙甘草350份。

具体制备步骤：

①取制附子、当归、桂枝三味药材粉碎成粗粉，备用；

②取黄芪、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加12倍生药量的水，加热回流提取2小时，加热回流提取3次，滤过，合并提取液，在70℃减压浓缩至密度1.15，备用；

③将步骤②的浓缩液在80℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，备用；

④将步骤①的粗粉与步骤③的物料混合均匀，制备成制剂，即得。

实施例7

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪700份，制附子90份，当归150份，桂枝550份，茯苓350份，白芍200份，鸡血藤300份，牛膝260份，炙甘草350份。

具体制备步骤：

①取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加10倍生药量的70％的乙醇，加热回流提取2小时，加热回流提取3次，滤过，合并提取液，在60℃减压浓缩至密度1.10，备用；

②将步骤①的浓缩液在70℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

实施例8

一种治疗寒虚证引起的局部缺血期性脉管炎的中药组合物，其原料以重量份计，包括黄芪800份，制附子50份，当归200份，桂枝300份，茯苓100份，白芍100份，鸡血藤400份，牛膝400份，炙甘草300份。

具体制备步骤：

①取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草粉碎成粉末，过筛，备用；

②将步骤①的粉末加入辅料，制备成制剂，即得。

本发明的中药组合物药效学研究：

本发明的中药组合物抗对小鼠耳廓微循环影响的试验：

目的：采用肾上腺素至小鼠耳廓微循环障碍模型，通过考察小鼠耳廓细动脉和细静脉管径及管径变化、细动脉血流态等指标，观察灌胃给本发明中药组合物对小鼠耳廓微循环的影响。

方法：取检疫合格的KM小鼠50只，4～5周龄，体重21.0～24.9g，雄雌各半，按体重和性别随机分为5组，即空白对照组、阳性对照组及供试品低、中、高剂量组，每组10只。供试品低、中、高剂量组分别给予本发明实施例1的中药组合物混悬液0.7、1.4、2.8g/kg，阳性对照组给予复方丹参片混悬液0.64g/kg，空白对照组给予0.5％羧甲基纤维素钠混悬液，灌胃给药，给药容积均为0.2mL/10g，每天给药1次，连续给药7天。于第7天给药结束后30min，腹腔注射3％水合氯醛0.15mL/10g体重麻醉动物，以医用橡皮膏轻贴轻拉除去耳廓被毛，将小鼠腹位固定于观察台上，调节有机玻璃制作的耳托高度，使耳廓平展于耳托上，在耳托和耳廓表面滴加少许石蜡油，将观察台置于显微镜载物台上，调节冷光源适当亮度，在透射光下观察小鼠耳廓微循环(10倍物镜)，记录药前耳廓微循环细动脉(A)、细静脉(V)管径及动脉血流流态，并在观察部位用苦味酸进行标记，以便再次观察。观察结束后立即尾静脉注射盐酸肾上腺素注射液10mg/kg，2min后再次测量上述指标。

结果：注射肾上腺素前，各组小鼠细动脉、细静脉管径无明显差异(P＞0.05)。注射肾上腺素后2min，各组小鼠细动脉、细静脉管径均相对减小，微循环障碍模型制备成功。与空白对照组相比，阳性对照(复方丹参片)组及本发明中药组合物中剂量组均可明显对抗小鼠耳廓细动脉、细静脉血管径的收缩(P＜0.05)，本发明中药组合物低剂量和高剂量组均可显著对抗小鼠耳廓细动脉、细静脉血管径的收缩(P＜0.01)。

注射肾上腺素前，各组小鼠的耳廓动脉血流流态未见差异，注射肾上腺素后2min，与空白对照组比较，阳性对照组和本发明中药组合物高剂量组有改善微循环障碍模型血流流态的趋势，中药组合物低、中剂量组改善效果不明显。试验结果详见表1～3。

表1中药组合物对肾上腺素致小鼠微循环障碍模型细动脉管径的影响(

μm)

备注：与空白对照组相比：*P＜0.05；**P＜0.01。

表2中药组合物对肾上腺素致小鼠微循环障碍模型细静脉管径的影响(

μm)

备注：与空白对照组相比：*P＜0.05；**P＜0.01。

表3中药组合物对肾上腺素致小鼠微循环障碍模型微循环血流流态的影响

结论：在本试验条件下，本发明中药组合物以0.7g/kg、1.4g/kg及2.8g/kg连续灌胃7天，可预防性改善肾上腺素致小鼠微循环障碍模型的耳廓微循环情况，显著对抗微静脉、微动脉管径的缩小，且中药组合物2.8g/kg有改善微循环障碍模型血流流态的趋势，按体表面积计算分别相当于临床拟用剂量的0.5、1和2倍。

本发明中药组合物对急性血瘀模型大鼠血液流变性的影响：

目的：采用大鼠急性血瘀模型，通过考察血液粘度、红细胞聚集指数、红细胞压积、红细胞变形指数、红细胞刚性指数等指标，观察灌胃给予本发明中药组合物对模型大鼠血液流变性的影响。

方法：取检疫合格的SD大鼠60只，6～7周龄，体重250±30g，雄雌各半，按性别随机分为6组，即正常对照组、血瘀模型组、阳性对照组及供试品低、中、高剂量组，每组10只。供试品低、中、高剂量组分别给予本发明实施例1的中药组合物混悬液0.5、1.0、2.0g/kg，阳性对照组给予复方丹参片混悬液0.32g/kg，正常对照组和血瘀模型组给予0.5％羧甲基纤维素钠混悬液，各组均灌胃给药，给药容积为1mL/100g，每天给药1次，连续给药7天。于第6天给药结束后进行造模，除正常对照组外，其余各组皮下注射盐酸肾上腺素(Adr)注射液0.8mg/kg体重，共2次，两次间隔4小时，在两次注射Adr之间(前后各间隔2小时)将大鼠浸入冰水(0～2℃)内5分钟，正常对照组不参与血瘀模型的制备，造模结束后所有动物禁食。第7天，各组动物正常给药后30分钟，腹腔注射3％戊巴比妥钠1.5mL/kg麻醉，使用负压式肝素抗凝采血管进行腹主动脉采血5ml。采用全自动血流变测试仪测定全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞压积、红细胞变形指数、红细胞刚性指数等指标。

试验结果以均数±标准差

表示，采用EXCEL软件进行组间T检验比较，检验水准P值为0.05。

结果：与正常对照组相比，血瘀模型组动物全血粘度在低切变率(1、5/s)、中切变率(50/s)和高切变率(100、200/s)条件下均明显升高(P＜0.01或0.05)，全血低切还原粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数均亦见不同程度的升高(P＜0.01或0.05)，且红细胞变形指数降低(P<0.05)，而全血高切还原粘度、红细胞压积、红细胞刚性指数无显著性变化，以上结果表明瘀模型制备成功。与血瘀模型组相比，给予本发明中药组合物三个剂量后，全血粘度于不同切变率下均有剂量依赖性降低的趋势，且高剂量组具有统计学差异(P<0.05，1/s切变率下除外)；全血低切还原粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数、红细胞变形指数等指标未见明显变化。本实验中阳性对照组可见降低全血粘度、全血低切还原粘度的趋势，且作用与本发明中药组合物中剂量组相当。试验结果见表4、表5。

表4中药组合物对急性大鼠血瘀模型全血粘度的影响

注：血瘀模型组与正常对照组相比：^△△P＜0.01，^△P＜0.05；给药组与血瘀模型组相比：*P＜0.05。

表5中药组合物对急性大鼠血瘀模型的血流变影响

注：低切，全血低切还原粘度；高切，全血高切还原粘度；红细聚集：红细胞聚集指数；红细变形：红细胞变形指数；压积：红细胞压积；红细刚性：红细胞刚性指数；血瘀模型组与正常对照组相比：^△△P＜0.01，^△P＜0.05；给药组与血瘀模型组相比：*P＜0.05。

结论：本发明的中药组合物2.0g/kg连续灌胃7天，可显著预防大鼠急性血瘀模型血液粘度的升高，按体表面积计算分别相当于临床拟用剂量的2倍。

本发明中药组合物急性毒性试验：

目的：考察本发明中药组合物给予KM小鼠后所产生的急性毒性反应和死亡情况，初步揭示受试物可能的毒性作用靶器官，为重复给药毒性试验和临床研究提供动物试验资料。

方法：试验采用最大给药量法，取检疫合格的KM小鼠20只，体重19.1～22.9g(方案预计体重为18～22g)，雄雌各半，按性别、体重随机分为2组，每组10只。试验前全部动物禁食约14小时，自由饮水。溶媒对照组动物给予0.5％羧甲基纤维素钠溶液，供试品组动物给予0.45g/mL本发明实施例1的中药组合物混悬液，全部动物均灌胃给药，连续2次，给药间隔约4h，给药容积为0.4mL/10g/次，即给药剂量为36g/kg，观察每次给药后0.5h内，末次给药后第1h、第2h、第4h小鼠的外观体征变化、毒性表现及死亡情况并记录。给药第2天起每天观察一次，连续14天，药后第7、14天称量体重，观察结束，全部动物进行大体解剖学检查，如有异常应做组织病理学检查，试验期间死亡动物应随时进行大体解剖学检查，如有异常应做组织病理学检查。

结果：供试品(本发明中药组合物)以最大给药量36g/kg给药后14天均未见动物死亡，与溶媒对照组相比体重无明显差异。大体解剖学检查显示，各组动物主要脏器未见明显毒性病理学改变。结果见表6。

表6中药组合物急性毒性试验中体重变化结果(g，Mean±SD)

结论：本试验条件下，本发明中药组合物总给药量36g/kg单日内连续2次灌胃给予KM小鼠后，连续观察14天动物未见明显毒性反应，最大无毒性剂量大于36g/kg，此剂量按公斤体重计算相当于人拟用剂量的225倍，按体表面积计算相当于人拟用剂量的24倍。

本发明中药组合物长期毒性试验：

目的：观察SD大鼠连续12周灌胃给予本发明中药组合物对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应的剂量，为临床研究和应用提供动物实验资料。

方法：检疫合格的SD大鼠84只(其中包括哨兵动物4只)，5～6周龄，体重检疫结束时体重为142.1～193.0g(方案预计体重为160～220g)，雌雄各半，试验前适应性饲养7天，试验时按性别、体重随机分成4组，溶媒对照组、供试品低、中、高剂量组，每组20只动物，雌雄各半，雌雄分笼饲养。供试品低、中、高剂量组分别给予本发明实施例1的中药组合物的混悬液2.25、4.5、9.0g/kg，溶媒对照组给予0.5％羧甲基纤维素钠混悬液，动物全部灌胃给药，灌胃容积为2mL/100g体重，每天给药1次，每周给药6天，休息1天，连续给药12周。给药期间每日观察动物外观体征、行为活动，每周测量一次体重和摄食量。连续给药12周后，按动物编号排序，每组选取动物编号较小的12只动物(雌雄各半)，禁食约16小时后，使用3％戊巴比妥钠1.5mL/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血观察动物血液学指标及血液生化指标的变化，而后进行大体解剖，对心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢、脑称重并计算脏器系数；对以下脏器进行组织病理学检查：脑(大脑、小脑、脑干)、脊髓(颈、胸、腰段)、垂体、胸腺、甲状腺、食管、胃、大肠和小肠、肝脏、肾脏、肾上腺、脾脏、胰腺、气管、肺、心脏、主动脉、睾丸、附睾、卵巢、子宫、前列腺(雄性)、乳腺(雌性)、坐骨神经、膀胱、骨髓、肠系膜淋巴结以及其它系统剖检发现的异常组织。剩余动物继续观察4周，观察期结束后，剖杀剩余动物，进行上述指标的检测。哨兵动物试验结束时亦全部剖杀，哨兵动物相应数据仅作为本中心背景数据，与本专题试验结果无关。

结果：一般状况及死亡：本发明中药组合物连续给药12周及停药恢复4周，供试品各剂量组动物均未见死亡，体征、外观行为、活动未见明显异常；摄食量：与溶媒对照组相比，本发明中药组合物连续给药12周及停药恢复4周，各剂量组均出现摄食量阶段性减少，其中以中、高剂量组给药期间较为明显。考虑可能与动物长期灌食大容量粘稠药液有关，而非受试品的毒性反应；体重：与溶媒对照组相比，供试品中剂量组雄性动物体重在给药后第8周出现一过性降低，但该项改变未见剂量及时间相关性，考虑与受试品无关；血液学检查：与溶媒对照组相比，本发明中药组合物连续给药12周，高剂量组平均血红蛋白浓度明显降低，平均红细胞容积及网织红细胞百分比明显升高；停药恢复4周后，各组血液学指标未见明显差异。上述改变均未超出本中心正常动物背景数据参考范围，亦未见未见明确的给药剂量相关性，故认为这些改变虽具有统计学意义，但不具有毒理学意义；血液生化学检查：与溶媒对照组相比，给药12周中剂量组丙氨酸氨基转移酶(ALT)明显降低，高剂量组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)明显降低，但这些指标改变均未超出本中心正常动物背景数据参考范围，且组织病理学检查未见与供试品毒性相关的肝脏损伤，提示上述指标在正常范围内的改变无毒理学意义；脏器重量及脏器系数：本发明中药组合物连续给药12周，低剂量组雌性动物肾上腺重量及脏体比系数降低，子宫重量及脏体比系数升高；中剂量组雌性动物肾上腺重量及脏体比降低，脑重量降低；高剂量组雌性动物卵巢重量及脏体比系数升高。停药恢复4周，中剂量组雄性动物肺脏及肝脏脏器重量减轻。上述改变具有统计学意义，但未见明确的剂量相关性，组织病理学检查亦未见相关的毒性病理学改变，故认为不具毒理学意义；病理学检查：本发明中药组合物连续给药12周和停药恢复4周，大体观察可见多例肾积水，其中给药12周，低剂量组2例(2/12)，中剂量组1例(1/12)，高剂量组3例(3/12)；停药恢复4周，低剂量组3例(3/8)，中剂量组1例(1/8)，高剂量组2例(2/8)。上述改变具有统计学差异，且具有剂量相关性，但组织病理学检查未见与受试品毒性相关的肾脏毒性病理学改变，血液生化学检查亦未见肾功能的异常(BUN，CRE)提示本发明中药组合物连续给药对大鼠排尿功能有一定影响，但临床提示意义不明确，建议临床试验予以关注。数据结果见图1和图2；表7、表8和表9。

表7中药组合物用药12周及恢复期4周对雄性SD大鼠体重的影响(g，Mean±SD)

备注：与溶媒对照组比较，*p<0.05。

表8中药组合物用药12周及恢复期4周对雌性SD大鼠体重的影响(g，Mean±SD)

表9组织病理学检查结果汇总表(发生例数/动物数)

病变分级：0级：无病变，1级：轻微病变，2级：轻度病变，3级：中度病变，4级：重度病变，5级：严重病变

表9(续)组织病理学检查结果汇总表(发生例数/动物数)

病变分级：0级：无病变，1级：轻微病变，2级：轻度病变，3级：中度病变，4级：重度病变，5级：严重病变

结论：中药组合物在本实验条件下用药是基本安全的，中药组合物在规定剂量下使用安全可靠。

本发明的中药组合物临床试验：

本发明的中药组合物临床应用的典型病例：

病例1：周某，男，33岁，2019年2月1日来院就诊。左下肢凉冷2年，加重一周，患者于2年前出现左下肢发凉、麻木，于当地医院经相关检查，诊断为“血栓闭塞性脉管炎”给予阿司匹林肠溶片应用，症状缓解。一周前无诱因，患者下肢冷凉较前加重，步行约500米左小腿酸困不适，来诊。左下肢皮色苍白，左足趾苍白，皮温低29.7度，左侧酸，周围动脉搏动正常，足动脉动脉弱。舌质淡，舌苔白，脉细。诊断为：局部缺血期血栓闭塞性脉管炎(寒虚型)。治疗服用本发明实施例1的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用4周后，2019年3月3日复查：肢体左下肢发凉、麻木消失，左足趾白，皮肤温度35.3度，步行1200米左小腿酸困消失。

病例2：吕某某，男，21岁，2019年1月14日来院就诊。双下肢麻木、冷凉，左下肢明显，疼痛2年，间歇性跛行1年，双下肢汗毛稀少，左足颜色白，足部温度28.1度，跛行距离450米，舌质暗、脉弦细。诊断为“局部缺血期血栓闭塞性脉管炎(寒虚型)”。治疗服用本发明实施例2的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用四周后2019年2月13日复查：左下肢麻木发凉明显缓解，右下肢麻木发凉消失，左足皮肤白，左足部温度32.2度，跛行距离为1300米。

病例3：袁某，男，36岁，2018年11月9日来院就诊，双下肢发凉，怕冷6年，加重伴右足趾疼痛1个月。双足颜色白，双足皮温凉，右足部温度28.2度，跛行距离500米，无舌质紫暗，苔黄腻，脉弦细。诊断为“局部缺血期血栓闭塞性脉管炎(寒虚型)”。治疗服用本发明实施例3的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用8周后2019年1月13日复查：双下肢仅偶尔发凉，双足白，右足部温度33度，跛行距离1000米。

病例4：李某某，男，64岁，2018年4月27日来医院就诊。双下肢发凉，发麻，一年有余，右侧明显，右足疼痛一个月，右侧足部温度29.2度，跛行距离30米，舌淡，苔白，脉弦细。诊断为“局部缺血期血栓闭塞性脉管炎(寒虚型)”。治疗服用本发明实施例4的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用8周后，2018年6月29日复查：双肢发凉改善，比正常穿的多，发凉缓解。右足皮肤颜色苍白，麻木轻微，右足部温度32.9度，跛行距离300米。

病例5：邢某某，男，44岁，2018年10月4日来医院就诊。2012年诊断为血栓闭塞性脉管炎。左下肢冷凉7年，伴随麻木，加重间歇性跛行1周。左下肢发育正常，左足皮肤颜色苍白，汗毛稀少，左足趾颜色白，左足足部温度29.2度，左侧股动脉搏动减弱，左侧腘胫后足背动脉搏动未触及。肢体麻木，间歇性跛行300米，舌淡，苔白，脉细。治疗服用本发明实施例5的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用四周后2018年11月13日复查：左下肢发凉改善，偶尔发凉。麻木消失，左足趾颜色发白，左足足部温度32.8度，运动后出现疼痛改善，间歇性跛行800米。

病例6：高某某，2019年1月8日来医院就诊。左下肢凉麻木4年，加重伴间歇性跛行1个月，患者于4年前出现左下肢凉麻，并进行性加重，当地医院诊断为“血栓闭塞性脉管炎”，给予药物服用症状好转，一个月前患者自觉凉麻较前加重，左下肢皮肤苍白，左足趾白，左足部温度29度，左侧四周动脉搏动正常，左侧胫后足背动脉搏动明显减弱，劳累后疼痛，间歇性跛行200米。治疗服用本发明实施例6的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用8周后2019年3月13日复查：左下肢发凉改善，偶尔发凉，左足部温度32.8度，麻木减轻，运动后疼痛减弱，间歇性跛行400米。

病例7：陈某，38岁，2018年12月18日来医院就诊，双下肢麻木，冷凉感明显，足趾疼痛明显。双下肢皮肤颜色苍白，汗毛稀少，双足颜色白，双小腿肌肉呈萎缩状，足部温度26.6度，右足背白，触痛明显，跛行距离200米，双肢，腘动脉搏动弱，双足背，胫后动脉搏动未触及。舌质淡，苔白腻，脉沉涩。诊断为“局部缺血期血栓闭塞性脉管炎(寒虚型)”。治疗服用本发明实施例7的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用8周后2019年2月19日复查：双肢偶尔发凉，足部温度31度，双足皮肤颜色苍白。麻木减轻，右足背皮肤白，右足疼痛偶尔出现，间歇性跛行450米。

病例8：吕某某，2019年5月14日来医院就诊，双下肢麻木，冰凉，左下肢明显，左上趾疼痛，双下肢汗毛稀少，左足颜色白，左上趾触痛明显。双肢持续性发凉，左足部温度28.1度，间歇性跛行450米，双肢动脉持续可触及，做侧腘，胫后，足背动脉未触及，舌质暗，苔白腻，脉沉，弦细。诊断为“局部缺血期血栓闭塞性脉管炎(寒虚型)”。治疗服用本发明实施例8的中药组合物，每日三次，一次一袋(8g/袋)，服用8周后2019年7月13日复查：四肢冰凉改善，发凉比正常穿衣多缓解，足部温度32.3度，四肢麻木减轻，左上趾疼痛消失，只是运动后产生疼痛，间歇性跛行1300米，足背胫后周围动脉搏动可触及。

Claims (9)

1.一种治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其特征在于，中药原料的重量份数比为：黄芪300~800份，制附子50~150份，当归50~200份，桂枝100~300份，茯苓100~400份，白芍100~400份，鸡血藤150~400份，牛膝150~400份，炙甘草150~400份。

2.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其特征在于，中药原料的重量份数比为：黄芪300~500份，制附子50~100份，当归50~100份，桂枝100~200份，茯苓100~200份，白芍100~300份，鸡血藤150~300份，牛膝150~300份，炙甘草150~300份。

3.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其特征在于，中药原料的重量份数比为：黄芪500~700份，制附子80~150份，当归150~200份，桂枝150~300份，茯苓150~400份，白芍250~400份，鸡血藤250~400份，牛膝250~400份，炙甘草250~400份。

4.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其特征在于，黄芪450~550份，制附子50~80份，当归60~90份，桂枝100~150份，茯苓150~200份，白芍150~200份，鸡血藤200~300份，牛膝200~300份，炙甘草200~300份。

5.根据权利要求1~4中任一项所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物制备成从片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、合剂、糖浆剂、煎膏剂、散剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、或注射剂中选出的任何一种常用的制剂。

6.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300~800份，制附子50~150份，当归50~200份，桂枝100~300份，茯苓100~400份，白芍100~400份，鸡血藤150~400份，牛膝150~400份，炙甘草150~400份，备用；

②取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加6~14倍生药量的水，加热回流提取1~6小时，加热回流提取1~3次，滤过，合并提取液，在40~90℃减压浓缩至密度1.01~1.20，备用；

③将步骤②的浓缩液在50~90℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

7.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300~800份，制附子50~150份，当归50~200份，桂枝100~300份，茯苓100~400份，白芍100~400份，鸡血藤150~400份，牛膝150~400份，炙甘草150~400份，备用；

②取制附子、当归、桂枝三味药材粉碎成粗粉，备用；

③取黄芪、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加6~14倍生药量的水，加热回流提取1~6小时，加热回流提取1~3次，滤过，合并提取液，在40~90℃减压浓缩至密度1.01~1.20，备用；

④将步骤③的浓缩液在50~90℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，备用；

⑤将步骤②的粗粉与步骤④的物料混合均匀，制备成制剂，即得。

8.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，其特征在于其制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300~800份，制附子50~150份，当归50~200份，桂枝100~300份，茯苓100~400份，白芍100~400份，鸡血藤150~400份，牛膝150~400份，炙甘草150~400份，备用；

②取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草，加6~12倍生药量的50%~90%的乙醇，加热回流提取1~3小时，加热回流提取1~3次，滤过，合并提取液，在50~80℃减压浓缩至密度1.05~1.20，备用；

③将步骤②的浓缩液在50~90℃干燥，干膏粉碎后加入辅料，制备成制剂，即得。

9.根据权利要求1所述的治疗寒虚证引起的局部缺血期脉管炎的中药组合物的制备方法，其特征在于该制备方法包括下列步骤：

①按配比称取各原料药黄芪300~800份，制附子50~150份，当归50~200份，桂枝100~300份，茯苓100~400份，白芍100~400份，鸡血藤150~400份，牛膝150~400份，炙甘草150~400份，备用；

②取黄芪、制附子、当归、桂枝、茯苓、白芍、鸡血藤、牛膝、炙甘草粉碎成粉末，过筛，备用；

③将步骤②的粉末加入辅料，制备成制剂，即得。

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