CN115137703B - 载药微凝胶球、载药支架及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种载药微凝胶球，所载药物为双硫仑药物，所述双硫仑药物包括双硫仑或双硫仑衍生物，所述载药微凝胶球用于治疗及缓解骨关节炎的症状。还提供一种载药微凝胶球的制备方法，包括：提供双硫仑药物纳米颗粒；提供甲基丙烯酸酐改性明胶；将所述甲基丙烯酸酐改性明胶和所述双硫仑药物按照等质量比的关系混合，得到水相；将HFE7500与表面活性剂混合，得到油相；将所述水相和油相通过微流控芯片技术混合制备而成。还提供一种由载药微凝胶球经光交联反应而成的载药支架。本发明的载药微凝胶球和载药支架能够治疗及缓解骨关节炎的症状，制备方法简单，载药支架具有双重缓释的效果，药效发挥效果更佳，同时提供了双硫仑药物的新应用。

Description

载药微凝胶球、载药支架及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种载药微凝胶球、载药支架及其 制备方法。
背景技术
骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质 增生为特征的慢性关节病，是严重的医学问题，是我国第四大致残疾病和欧美 第三大致残疾病。
软骨下骨是关节的骨床，关节软骨位于其上。传统上，骨关节炎(OA)被 认为是关节软骨的磨损和撕裂，但最近的证据表明，软骨下骨紊乱和滑膜炎症 可以引发并导致疾病进展。
骨关节炎的特征是炎症、免疫和中枢神经系统功能障碍在整个关节损伤、 损伤进展、疼痛和残疾中起核心作用的多种疾病。而软骨下骨硬化、增厚则是 骨关节炎的主要诱因之一。软骨下骨是骨软骨连接处的过渡部分，介于软组织 和硬组织之间，用于吸收关节加载过程中的应力，当加载异常时，则会导致骨 软骨连接处的微骨折，出现骨质塌陷，随后则出现软骨下骨硬化现象。很多实验证明，软骨下骨重朔或者硬化发生在关节软骨退变之前，关节软骨的完整性 取决于其下方骨床的生物力学特性，因此软骨下骨硬化可能是OA发病的始发 因素。
现有技术通过向骨关节炎部位注射生物凝胶的方式来改善骨关节炎的症状， 利用凝胶本身的细胞粘附性和良好的细胞相容性，对关节软骨的修复起到一定 的作用。但生物凝胶本身不含治疗性药物，其关节修复能力有限，治疗效果欠 佳。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，并提供一种载药微凝胶球、 载药支架及其制备方法，该载药微凝胶球及载药支架能够增强或诱导软骨下骨 重朔，恢复关节骨床，从而治疗及缓解骨关节炎的症状，使双硫仑药物在治疗 骨关节炎方面得到了新的应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种载药微凝胶球，所载药物为双硫仑药物，所述双硫仑药物包括双硫仑 或双硫仑衍生物，所述载药微凝胶球用于治疗及缓解骨关节炎的症状。
对上述技术方案的进一步改进是：
所述载药微凝胶球为通过注射至病灶部位的方式进行使用。
所述载药微凝胶球的粒径范围为200-300μm。
本发明还提供一种载药微凝胶球的制备方法，包括以下步骤：
提供双硫仑药物纳米颗粒，所述双硫仑药物包括双硫仑或双硫仑衍生物；
提供甲基丙烯酸酐改性明胶；
将所述甲基丙烯酸酐改性明胶与所述双硫仑药物纳米颗粒按照等质量比的 关系混合，得到水相；
将HFE7500与表面活性剂混合，得到油相；
将所述水相和油相通过微流控芯片技术混合制备成所述载药微凝胶球；
所述载药微凝胶球用于治疗及缓解骨关节炎的症状。
进一步地，所述双硫仑药物纳米颗粒由以下方法制备而成：
按照质量配比的要求分别称取PLGA、PLGA-b-PEG和药物，并完全溶解于 DCM中，形成浓度为8％-12％w/v的第一混合物；所述PLGA、PLGA-b-PEG、以及 药物的质量比为25-50：25-50：10；所述药物包括双硫仑或双硫仑衍生物；
按照体积比1：5-100，将所述第一混合物与PVA溶液进行混合、搅拌，得 到第二混合物；
将所述第二混合物与PVA溶液按照体积比1-20：10-100进行避光搅拌，去 除残留的DCM，得到第三混合物；
对所述第三混合物进行离心、洗涤，去除残留的PVA，得到所述双硫仑药 物纳米颗粒。
进一步地，所述PVA溶液的浓度为1％w/v；所述PLGA的重均分子量为35kDa。
进一步地，所述甲基丙烯酸酐改性明胶由以下方法制备而成：
将明胶完全溶解于DPBS中，形成浓度为8％-12％w/v的第一物质；
在所述第一物质中加入MA，并避光搅拌，再加入DPBS进行稀释，形成第 二物质；其中所述第一物质、MA、以及DPBS的体积比为100-150：1：100；
将所述第二物质置于透析袋中进行透析后，形成所述甲基丙烯酸酐改性明 胶。
进一步地，所述透析袋的截留分子量MW的范围为8000-14000。
进一步地，所述微流控芯片技术的微流控芯片包括PDMS和固化剂。
本发明还提供一种载药支架，由上述的制备方法制备的载药微凝胶球经光 交联反应而成。
根据本发明的技术方案可知，本发明的载药微凝胶球和载药支架，通过凝 胶包载药物的形式，使药物能够缓慢释放，特别是光交联后的载药支架能够起 到双重缓释的效果，更有利于药物的吸收，提高生物利用度，载药微凝胶球和 载药支架通过局部注射的方式能够直达病灶部位，通过微凝胶和双硫仑药物共 同作用，进一步提高增强或诱导软骨下骨重朔的效果，提高疗效的同时，减少了全身的毒副作用，在治疗骨关节炎方面具有重大的意义，且具有广阔的应用 前景。
附图说明
图1为本发明实施例2的载药支架的制备方法流程示意图。
图2为采用不同浓度的PVA制备双硫仑药物纳米颗粒的粒径分布图。
图3为本发明实施例1的双硫仑药物纳米颗粒的电位图。
图4为本发明实施例1的双硫仑药物纳米颗粒在37℃摇床中的药物释放曲 线。
图5为本发明实施例1的载药微凝胶球在37℃摇床中的药物释放曲线。
图6为本发明实施例的双硫仑药物纳米颗粒和载药微凝胶球经荧光标记后 在关节内的荧光强度变化曲线图。
图7为本申请实施例1的载药微凝胶球包载药物成功的荧光显示图。
图8为大鼠碘乙酸骨关节炎模型建立后21天，采用不同组合物治疗4周后 对软骨下骨重朔重要参数测定的对比图。
图9为注射载药支架1至3天时，软骨细胞的数量与正常数量的对比图。
图10为本申请实施例2的载药支架的剪切特性图。
图11为本申请实施例2的载药支架的模量特性图。
图12为本申请实施例2的载药支架的温度与粘度的关系图。
图13为本申请实施例2的载药支架的温度与模量的关系图。
图14为对OA动物胫骨平台和股骨髁进行H&E染色和Safranin-O染色组织 学分析图。
图15为对膝关节组织切片进行免疫组化染色后Aggrecan与CollagenⅡ 的表达评估图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。 附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实 现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本 发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术 领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术 语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
实施例1：本实施例提供一种载药微凝胶球及其制备方法，所载药物为双 硫仑药物，所述双硫仑药物包括双硫仑或双硫仑衍生物，所述载药微凝胶球用 于治疗及缓解骨关节炎的症状。所述载药微凝胶球为通过注射至病灶部位的方 式进行使用。所述载药微凝胶球的粒径范围为200-300μm。
如图1所示，所述载药微凝胶球由以下方法制备而成：
S1、提供双硫仑药物纳米颗粒，所述双硫仑药物包括双硫仑或双硫仑衍生 物；具体制备方法如下：
S1.1、将PLGA(聚乳酸羟基乙酸共聚物)、PLGA-b-PEG、和药物按照质量 比25-50：25-50：10完全溶解于DCM(二氯甲烷)中，形成浓度为8％-12％w/v 的第一混合物；所述药物包括双硫仑(DSF)或双硫仑衍生物。
S1.2、按照体积比1：5-100，将所述第一混合物与PVA(聚乙烯醇)溶液 进行混合、搅拌，得到第二混合物。
S1.3、将所述第二混合物与PVA溶液按照体积比1-20：10-100进行避光搅 拌，去除残留的DCM，得到第三混合物。
S1.4、对所述第三混合物进行离心、洗涤，去除残留的PVA，形成双硫仑 药物纳米颗粒。
具体地，在本实施例中，称取45mg的PLGA35k和45mg的PLGA55k-b-PEG5k， 以及10mg的药物，并将称取的上述物质溶于DCM中，制成浓度为10％w/v的第 一混合物。
量取1ml的所述第一混合物缓慢滴加入10ml的PVA溶液中进行混合、搅 拌，形成第一乳液。所述磁力搅拌器的转速为600转，所述PVA溶液的浓度为 1％w/v，所述PVA的重均分子量Mw为25kDa。搅拌时，首先在磁力搅拌器中高 速涡旋搅拌1min后，再于60％的功率下进行超声搅拌，所述超声搅拌的次数为 10次，每次超声搅拌的时间为5s,每次超声搅拌结束后5秒钟再进行下一次超 声搅拌。整个混合、搅拌的反应过程均于0℃的温度下进行，比如可以将盛放 有第一混合物和PVA溶液的容器置于冰水混合物中。
超声搅拌结束后，将第一乳液滴加到50ml的PVA溶液中，在室温下进行避 光搅拌6小时，以去除残留的DCM，形成第二乳液。所述PVA溶液的浓度为 1％w/v，避光搅拌可采用不透光的锡箔包覆容器的方式进行。所述避光搅拌可 于离心机上进行，
对所述第二乳液进行离心、洗涤，以去除残留的PVA，得到所述双硫仑药 物纳米颗粒。离心时，离心机的速率为10000g-14000g，离心时的温度为1- 15℃，离心时间为5-30min。具体地，在本实施例中，离心机的速率为14000g， 离心时的温度为4℃，离心时间为10min。用蒸馏水对第二乳液进行洗涤，反复 洗涤三次后，将所述双硫仑药物纳米颗粒于-80℃以下进行保存。
如图2所示，为采用不同浓度的PVA制备双硫仑药物纳米颗粒的粒径分布 图，由图中能够看出，当采用浓度为1％的PVA制备的双硫仑药物纳米颗粒，其 直径均在500nm以下，大部分颗粒直径分布在200-300nm左右，且粒径分布较 为均匀，而采用浓度为0.5％和0.2％的PVA进行制备时，则粒径相对较大，最大 值接近1μm。
如图3所示，为双硫仑药物纳米颗粒的电位图，由图中可以看出，通过动 态光散射(DLS)Zeta点位分析显示纳米颗粒的表面带负电(-31.5mV)。而负电材料具有一定的成骨作用。
S2、提供甲基丙烯酸酐改性明胶，具体的制备方法如下：
S2.1、将明胶完全溶解于DPBS(磷酸盐缓冲溶液)中，形成浓度为8％- 12％w/v的第一物质。
S2.2、在所述第一物质中加入MA(甲基丙烯酸酐)，并避光搅拌，再加入 DPBS进行稀释，形成第二物质；其中所述第一物质、MA、以及DPBS的体积比为100-150：1：100。
S2.3、将所述第二物质置于透析袋中进行透析后，形成所述甲基丙烯酸酐 改性明胶。
具体地，在本实施例中，称量20g的Gelatin(明胶)和200ml的DPBS， 于60℃的条件下搅拌至完全溶解，形成浓度为10％w/v的第一物质。
将所述第一物质降温至50℃的条件下，边搅拌边逐滴加入到1.6ml的MA 中，再避光搅拌1-4小时后(本实施例中避光搅拌的时间具体为2小时)，加入 100ml的DPBS进行稀释，形成第二物质。
将所述第二物质置于透析袋中进行透析，所述透析袋的型号为MD34，透析 袋截留的分子量Mw＝8000-14000，透析的介质为ddH2O(二次蒸馏水)，透析时 间为2-10天，在本实施例中透析的具体时间为7天，且每天换2-3次ddH2O， 透析时的温度范围为22-50℃，本实施例中的透析于40℃的恒温摇床中进行， 形成所述甲基丙烯酸酐改性明胶，将所述甲基丙烯酸酐改性明胶于-80℃以下 的条件下进行冷冻干燥保存。
S3、微流控混合成形：
S3.1、将光引发交联剂LAP与冻干后的所述甲基丙烯酸酐改性明胶混合， 于恒温摇床中溶解，即得到所述光敏感性水凝胶；将所述光敏感性水凝胶和所 述双硫仑药物纳米颗粒按照等质量比的关系混合，得到水相；所述LAP溶于蒸 馏水的浓度范围为0.1％-10％，所述LAP与所述甲基丙烯酸酐改性明胶的质量比 为0.1-10：1000
具体地，在本实施例中，称取0.05-1mg的LAP，在本实施例中LAP的重量 具体为0.1mg，并将其溶于10ml的蒸馏水中，然后加入步骤S2.2.3制备的冷 冻干燥后的甲基丙烯酸酐改性明胶，所述冷冻干燥后的甲基丙烯酸酐改性明胶 的质量为1g，于37℃的恒温摇床中溶解30分钟-1小时后得到所述光敏感性水 凝胶，将所述光敏感性水凝胶于4℃的冰箱中进行保存。在本实施例中，所述 光敏感性水凝胶的氨基取代度为60％，所述LAP的具体型号为A2959。
S3.2、将HFE7500(氟化醚)与表面活性剂混合，得到油相。
S3.3、将所述水相、油相，通过气压控制流速，利用微流控技术混合制备 成微球状的载药微凝胶球。
具体地，在本实施例中，以光敏感性水凝胶为水相。
取HFE7500和10％浓度的表面活性剂FluoSurf进行混合，得到油相。
将上述水相和油相通过微流控芯片，于200pa的压力下，形成200-300μm 的微球，光交联后即得到空载微凝胶。所述微流控芯片包括PDMS(聚二甲基硅 氧烷)和1-30％的固化剂。
将等质量的光敏感性水凝胶和双硫仑药物纳米颗粒进行等比例混合，作为 水相；在本实施例中具体光敏感性水凝胶的浓度为100mg/ml，双硫仑药物纳米 颗粒的浓度为2mg/ml。油相为矿物油，具体为HFE3500，其中含有10％的表面 活性剂。将上述的水相和油相通过微流控芯片，于200pa的压力下，形成200- 300μm的微球，即得到载药微凝胶球。所述微流控芯片包括PDMS(聚二甲基硅 氧烷)和1-30％的固化剂。
实施例2：本实施例提供一种载药支架及其制备方法，所述载药支架由实 施例1的载药微凝胶球经光交联反应而成。
将制备好的载药微凝胶球通过紫外光照射1分钟左右，进行光交联，即可 得到稳定的载药支架，所述载药支架具有双重缓释效果。
空载微凝胶球的制备：为便于对比本实施例的载药支架的治疗效果，特制 备空载微凝胶球作为对比例，具体步骤如下:
以光敏感性水凝胶作为水相。
取HFE7500和10％浓度的表面活性剂FluoSurf进行混合，得到油相。
将上述水相和油相通过微流控芯片，于200pa的压力下，形成200-300μm 的微球，光交联后即得到空载微凝胶。
为证明本实施例药物包载成功，特进行药物释放检测，具体的检测方法如 下：采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC) 进行鉴定：
分别取3ml上述实施例制备的双硫仑药物纳米颗粒和载药支架作为检测样 品，将检测样品分别置于透析袋中(n＝5)，透析袋置于装有33ml去离子水的试 管中，温度为37℃，在不同的时间间隔(16h,1,2,4,6天，8天，10天， 12天，14天)，从试管中收集0.3mL样品溶液冷冻用于后续分析，每次更换 0.3ml水，随后用HPLC进行分析，分析结果分别如图4和图5所示，通过图4 和图5的释放检测结果可知双硫仑药物纳米颗粒和载药支架包载药物成功，药 物随时间的增加缓慢释放，以载药支架的药物缓释效果更佳。
如图6所示，为经荧光标记的双硫仑药物纳米颗粒和载药支架在关节内的 荧光强度变化曲线。其中NPs/DSF代表双硫仑药物纳米颗粒标记组，GelMA- NPs/DSF代表载药支架标记组。分别为第一天第1小时、第一天第12小时、第 一天第24小时、第二天、第四天、第六天、第八天、第十天、第十二天、第十四天、第十六天、第二十一天和第二十八天时的荧光强度变化值。
由图7也可以直观地观察到药物包载成功，图7中NPs代表香豆素-6荧光 标记的双硫仑纳米颗粒的荧光显示图；GelMA代表罗丹明B荧光标记的甲基丙 烯酸酐改性明胶的荧光显示图；merge代表制备后的载药微凝胶球的荧光显示图。由图片可以看出，双硫仑纳米颗粒包载成功。
通过对大鼠损伤性关节炎的治疗效果证明本实施例制备的双硫仑药物纳米 颗粒和载药支架对治疗骨关节炎及改善软骨细胞功能切实有效，具体如下：
大鼠碘乙酸骨关节炎模型建立：采用8个月龄的SD大鼠，使用腹膜内注 射戊巴比妥麻醉，取仰卧位，显露膝关节，将100ul碘乙酸(浓度为 4.8mg/60μL)注射入大鼠膝关节内，术后2周，关节囊肿大，关节表面暗淡， 术后4周关节软骨发黄，关节内出现小裂缝，第6周可以摸到骨刺和关节韧带 粘连。
大鼠碘乙酸骨关节炎模型上组合物治疗：大鼠碘乙酸骨关节炎模型建立后 21天，使用组合物(空载微凝胶球、双硫仑药物纳米颗粒或载药支架)治疗4 周，进行改善骨小梁平均厚度、骨小梁数量、骨小梁分离度、骨密度/骨矿物 质密度等关节状态关键参数的测定。具体检测结果如图7所示。
图8为大鼠碘乙酸骨关节炎模型建立后21天，治疗4周后对软骨下骨重朔 重要参数的测定，其中，图8A为Tb.Th(骨小梁平均厚度)测定，图8B为Tb.N (骨小梁数)测定，图8C为Tb.Sp(骨小梁分离数)测定，图8D为BMD(骨密 度/骨矿物质密度)测定，图8E为BV/TV(相对骨体积/骨体积分数)测定。分 组如下：NC代表正常大鼠组，OA代表21天时的碘乙酸大鼠骨关节炎模型组，GelMA代表空载微凝胶球治疗组，NPs/DSF代表双硫仑药物纳米颗粒治疗组，GelMA-NPs/DSF代表载药支架治疗组。
由图8A可以看到OA组的骨小梁平均厚度相比NC(正常)组下降，而NPs/DSF 组和GelMA-NPs/DSF组则相比OA组上升，接近NC(正常)组。由图8B可以看 到OA组的骨小梁数相比NC(正常)组下降，而NPs/DSF组和GelMA-NPs/DSF组 则相比OA组上升，接近NC(正常)组。由图8C可以看到OA组的骨小梁分离数相比NC(正常)组上升，而NPs/DSF组和GelMA-NPs/DSF组则相比OA组下降， 接近NC(正常)组。由图8D可以看到OA组的骨密度/骨矿物质密度相比NC(正 常)组下降，而NPs/DSF组和GelMA-NPs/DSF组则相比OA组上升，接近NC(正 常)组。由图8E可以看到OA组的相对骨体积/骨体积分数相比NC(正常)组下 降，而NPs/DSF组和GelMA-NPs/DSF组则相比OA组上升，接近NC(正常)组。
由上述结果可知，本实施例制备的双硫仑药物纳米颗粒和载药支架对治疗 骨关节炎、以及改善软骨细胞功能均有效果，且由于载药支架具有突出的长期 缓释效果，因此载药支架对骨关节炎的治疗、改善效果更为显著。
图9为注射载药支架1至3天时，载药支架对软骨细胞数量的影响图。其 中，NC-D1表示第一天正常软骨细胞的数量，NC-D2表示第二天正常软骨细胞的 数量，NC-D3表示第三天正常软骨细胞的数量，GelMA-D1表示注射载药支架一天时软骨细胞的数量，GelMA-D2表示注射载药支架两天时软骨细胞的数量， GelMA-D3表示注射载药支架三天时软骨细胞的数量。由图中可以看到，载药支 架对软骨细胞生长没有刺激生长或抑制生长的作用。
图10为本申请实施例2的载药支架的剪切特性图，其中，横坐标代表剪切 速率，纵坐标为粘度可得，由图中可以看出，载药支架的剪切变稀特性，说明 载药支架能够注射使用。
图11为本申请实施例2的载药支架的模量特性图，其中，横坐标代表角速 度，纵坐标代表模量，由图中可以看出载药支架的储存模量大于损耗模量，说 明载药支架为弹性材料。
图12为本申请实施例2的载药支架的温度与粘度的关系图，其中，横坐标 为温度值，纵坐标为粘度值。由图中可以看出，载药支架的粘度几乎不受温度 的影响。
图13为本申请实施例2的载药支架的温度与模量的关系图，其中，横坐标 为温度值，纵坐标为模量值。由图中可以看出，载药支架的模量几乎不受温度 的影响。由图12和图13能够说明载药支架的性能几乎不受温度影响。
如图14所示，为对OA动物胫骨平台和股骨髁进行H&E染色和Safranin-O 染色组织学分析图。其中，OA代表骨关节炎组，GelMA代表空载微凝胶球治疗 组，DSF/NPs代表双硫仑药物纳米颗粒治疗组，GelMA-DSF/NPs代表载药支架治 疗组。由彩图能够看出，根据其组织病理学检查显示，成骨呈绿色，软骨呈红 色，OA组蛋白多糖(红色)含量下降。可以看到，OA组中关节软骨层表面粗糙， 完整性破坏，出现部分基质纤维化，及可见的纤维肉芽组织填充；而相比较于 载药支架治疗组可见明显减少OA相关软骨变形性(关节面光滑)，软骨破坏和蛋白多糖损失也明显减少。
如图15所示，为对膝关节组织切片进行免疫组化染色后Aggrecan与 CollagenⅡ的表达评估图。Aggrecan又称蛋白聚糖，存在于结缔组织胞外基 质中的大分子蛋白聚糖，为软骨的主要结构大分子；collagenⅡ又称二型骨胶 质，是软骨和关节的主要有机成分，富含骨骼结缔组织特需的氨基酸，可帮助 人体软骨组织再生，在软骨修复的评估中应用广泛。由图中可以看出，治疗组 相比较于OA组中阳性表达蛋白明显升高，载药支架治疗组中aggrecan和 CollagenⅡ均明显表达增多。软骨细胞的形态和数量也相对于OA组增加。通过以上结果可以推断，本发明的双硫仑药物纳米颗粒、载药微凝胶球、以及载药 支架能够显著的缓解骨关节炎对软骨的炎症损伤，有效的治疗骨关节炎，修复软骨。
通过上述实验数据能够说明双硫仑药物对治疗骨关节炎具有一定的有效性， 为双硫仑药物打开了新的应用场景，使双硫仑药物的应用更为广泛。
本发明实施例采用关节腔等局部注射的方式导入载药支架，促进了软骨下 骨的重朔，进而达到治疗骨关节炎的目的。且通过实验检测证实了载药支架能 够诱导、增强软骨下骨重塑，改善骨小梁平均厚度、骨小梁数量、骨小梁分离 度、骨密度/骨矿物质密度等关节状态关键参数，证实了双硫仑搭载可注射微凝胶可以诱导、增强软骨下骨重塑，从而治疗骨关节炎。本发明的载药支架为 治疗骨关节炎提供了一种全新且安全有效的治疗方法，在骨关节炎的治疗上具 有重大意义，其具有广阔的应用前景。
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述 实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特 征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上实施例仅表达了本发明的优选的实施方式，其描述较为具体和详细， 但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改 进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权 利要求为准。

Claims (7)

1.一种载药微凝胶球，其特征在于：所载药物为双硫仑药物，所述双硫仑药物包括双硫仑或双硫仑衍生物，所述载药微凝胶球将水相和油相通过微流控芯片技术混合制备而成，所述水相由甲基丙烯酸酐改性明胶与双硫仑药物纳米颗粒按照等质量比的关系混合而成，所述油相由HFE7500与表面活性剂混合而成；所述载药微凝胶球的粒径范围为200-300μm，所述载药微凝胶球用于治疗及缓解骨关节炎的症状；
其中，所述甲基丙烯酸酐改性明胶由以下方法制备而成：
将明胶完全溶解于DPBS中，形成浓度为8％-12％w/v的第一物质；
在所述第一物质中加入甲基丙烯酸酐MA，并避光搅拌，再加入DPBS进行稀释，形成第二物质；其中所述第一物质、甲基丙烯酸酐MA、以及DPBS的体积比为100-150：1：100；
将所述第二物质置于透析袋中进行透析后，形成所述甲基丙烯酸酐改性明胶；
所述双硫仑药物为双硫仑药物纳米颗粒，所述双硫仑药物纳米颗粒由以下方法制备而成：
按照质量配比的要求分别称取PLGA、PLGA-b-PEG和药物，并完全溶解于DCM中，形成浓度为8％-12％w/v的第一混合物；所述PLGA、PLGA-b-PEG、以及药物的质量比为25-50：25-50：10；所述药物包括双硫仑或双硫仑衍生物；
按照体积比1：5-100，将所述第一混合物与PVA溶液进行混合、搅拌，得到第二混合物；
将所述第二混合物与PVA溶液按照体积比1-20：10-100进行避光搅拌，去除残留的DCM，得到第三混合物；
对所述第三混合物进行离心、洗涤，去除残留的PVA，得到所述双硫仑药物纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的载药微凝胶球，其特征在于：所述载药微凝胶球为通过注射至病灶部位的方式进行使用。
3.一种载药微凝胶球的制备方法，用于制备如权利要求1至2任一项所述的载药微凝胶球，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
提供双硫仑药物纳米颗粒，所述双硫仑药物包括双硫仑或双硫仑衍生物；
提供甲基丙烯酸酐改性明胶；
将所述甲基丙烯酸酐改性明胶与所述双硫仑药物纳米颗粒按照等质量比的关系混合，得到水相；
将HFE7500与表面活性剂混合，得到油相；
将所述水相和油相通过微流控芯片技术混合制备成所述载药微凝胶球；
所述载药微凝胶球的粒径范围为200-300μm，所述载药微凝胶球用于治疗及缓解骨关节炎的症状；
其中，所述双硫仑药物纳米颗粒由以下方法制备而成：
按照质量配比的要求分别称取PLGA、PLGA-b-PEG和药物，并完全溶解于DCM中，形成浓度为8％-12％w/v的第一混合物；所述PLGA、PLGA-b-PEG、以及药物的质量比为25-50：25-50：10；所述药物包括双硫仑或双硫仑衍生物；
按照体积比1：5-100，将所述第一混合物与PVA溶液进行混合、搅拌，得到第二混合物；
将所述第二混合物与PVA溶液按照体积比1-20：10-100进行避光搅拌，去除残留的DCM，得到第三混合物；
对所述第三混合物进行离心、洗涤，去除残留的PVA，得到所述双硫仑药物纳米颗粒。
4.根据权利要求3所述的载药微凝胶球的制备方法，其特征在于：所述PVA溶液的浓度为1％w/v；所述PLGA的重均分子量为35kDa。
5.根据权利要求3所述的载药微凝胶球的制备方法，其特征在于：所述透析袋的截留分子量MW的范围为8000-14000。
6.根据权利要求3所述的载药微凝胶球的制备方法，其特征在于：所述微流控芯片技术的微流控芯片包括PDMS和固化剂。
7.一种载药支架，其特征在于：由权利要求3-6任意一项的制备方法制备的载药微凝胶球经光交联反应而成。
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