CN115135302A - IgG:TGFβRII融合蛋白组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物组合物，特别是包含IgG:TGFβRII(例如抗PD‑L1:TGFβ抑制)融合蛋白的药物组合物。本发明还尤其涉及制造所述组合物的方法、包含所述组合物的试剂盒、包含所述组合物的包装、制造该包装的方法以及使用所述组合物和/或包装的治疗方法，尤其是癌症治疗。

Description

IgG：TGFβRII融合蛋白组合物
技术领域
本发明涉及药物组合物，具体是包含IgG：TGFβRII融合蛋白的药物组合物。本发明还尤其涉及制造该组合物的方法、包含该组合物的试剂盒、包含该组合物的容器或药物递送装置、制造该容器或药物递送装置的方法，和使用该组合物和/或容器或药物递送装置进行治疗(尤其是癌症治疗)的方法。
背景技术
WO2015118175描述了一种双功能IgG：TGFβRII融合蛋白，其将抗程序性死亡配体1(抗PD-L1)抗体与肿瘤生长因子β受体II型(TGFβRII)的可溶性胞外结构域组合为TGFβ中和性“阱”，成为一个分子。具体地，该蛋白质为异四聚体，由抗PD-L1抗体的两条免疫球蛋白轻链和两条重链构成，两条重链包含通过柔性甘氨酸-丝氨酸接头基因融合至人TGFβRII胞外域的抗PD-L1抗体重链(见图1)。这种抗PD-L1/TGFβ阱分子经设计以靶向肿瘤微环境中的两种主要免疫抑制机制，因此可用于治疗癌症或抑制肿瘤生长。
本发明的一个目的是提供IgG：TGFβRII融合蛋白的可行的药物组合物。在生物制剂，尤其是含有抗体或抗体片段的生物制剂的配制领域中，不可预测性是固有的，导致难以发现这种可行的药物组合物，因为给定生物药物的大多数制剂(如果所述制剂是任意选择的)在长时间内不稳定和/或处于压力条件下，这归因于对生物制剂(尤其是水性制剂)开放的多种降解途径。例如，降解因素可包括以下一项或多项(通常为两项或更多项，可能为三项或更多项)：
·物理作用，例如：
ο对相关蛋白质分子聚集的抑制不足；
ο对沉淀的抑制不足；
ο对相关蛋白质分子在水和空气界面或任何包装材料的接触表面的吸附抑制不足；
ο渗透压调节不足；
·化学作用，例如：
ο氧化调节不足；
ο光氧化抑制不足；
ο对酯键水解的抑制不足，导致形成酸、醛和过氧化物产物，从而影响融合蛋白的稳定性；
οpH的稳定性和维持不足；
ο对蛋白质片段化的抑制不足；
ο对蛋白质去折叠的抑制不足。
任何、一些或所有上述因素都可能导致不可行的药品(其在医学治疗中的使用可能不安全)或活性可变且不可预测的药品，特别是考虑到可变压力(搅拌、冻融、加热、光照)，不同批次的药品在生产、运输和储存过程中可能会暴露在环境中。
本发明优选地寻求解决一种或多种上述稳定性问题，并且由此提供可行的药物制剂。
发明内容
在一些实施方式中，提供了包含IgG：TGFβR融合蛋白的药物组合物。本发明的药物组合物可优选包含、由其组成或排除本文所述的任何、一些或所有成分(例如，包括缓冲剂、表面活性剂、糖组分、氨基酸组分、张力调节剂(tonicifier)、抗氧化剂、螯合剂中的任何一种；或实际上排除任何上述项)，其以本文所述的任何相关量存在，和/或可以优选地以本文所述的任何、一些或全部参数(例如pH、pI、重量渗透摩尔浓度)为特征。药物组合物可以是液体(例如水性)药物组合物。或者，药物组合物可以是冻干组合物。
在一些实施方式中，提供了一种容器或药物递送装置，其包含或含有如本文所定义的药物组合物。此类药物递送装置可以是例如小瓶、安瓿、注射器、预填充注射器、注射笔(例如基本上纳入注射器)、自动注射器或静脉输注袋，或包含上述任何一种的包装/容器。
在一些实施方式中，提供了一种组件试剂盒，其包括药物递送装置、本文定义的药物组合物，以及任选地具有关于药物组合物给药(例如静脉内、皮下)的说明的一组说明书。
在一些实施方式中，提供了制备药物组合物的方法，所述方法包括将IgG：TGFβR融合蛋白与一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或运载体混合在一起。
在一些实施方式中，提供了治疗需要此类治疗的患者的疾病或医学病症的方法，所述方法包括向所述患者给予治疗有效量的本文定义的药物组合物。
在一些实施方式中，提供了本文定义的药物组合物，其用于治疗需要此类治疗的患者的疾病或医学病症。
在一些实施方式中，提供了本文定义的药物组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。
在一些实施方式中，提供了治疗疾病或医学病症的方法、用于治疗疾病或医学病症的药物组合物，以及药物组合物在制备用于治疗本文定义的疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或医学病症是PD-L1相关疾病、TGFβ相关疾病和/或增殖性疾病或病症，优选癌症。
在一些实施方式中，所述治疗或疗法涉及联合治疗，其中所述药物组合物与一种或多种其它药物或生物药物活性物质联合给予；其中所述联合治疗涉及治疗的各个组分的同时、顺序或分开给药。在一些实施方式中，附加药物活性物质或生物药物活性物质可存在于本文定义的任何药物组合物中。
所有上述治疗方法、应用的一种或多种组合物和一种或多种组合物在制造药物中的用途同样适用于包含一种或多种所述组合物的相关容器、药物递送装置和试剂盒。
就本发明任何具体方面而言的任何特征(包括可选的、适宜的和优选的特征)也可为就本发明其他方面而言的特征(包括可选的、适宜的和优选的特征)，除非与之不相容。
附图简要说明
为了更好地理解本发明并且为了显示本发明的实施方式如何有效运作，作为举例，参考以下附图，其中：
图1A显示了一半的bintrafusp alfa融合蛋白的序列，其包含通过指定的接头连接至TGFβ受体II的细胞外结构域(ECD)的轻链(具有指定的VL和CL区)和重链(具有指定的VH、CH1、CH2和CH3区)。
图1B显示了一半的bintrafusp alfa融合蛋白的序列，其包含通过指定的接头连接至TGFβ受体II的细胞外结构域(ECD)的轻链(具有指定的VL和CL区)和重链(具有指定的VH、CH1、CH2和CH3区)。TGFβ受体II的各轻链、重链、接头和细胞外结构域的整体序列对于图1A和图1B而言都是相同的，而图1A和图1B，就整体序列而言，意在与“bintrafusp alfa”相对应，如本申请定义部分所定义的那样，其参考CAS登记号1918149-01-5。图1B与图1A相同，除了：图1A中CH2区的前三个氨基酸(PCP)是图1B的铰链区的末三个氨基酸(PCP)；并且，图1A的VL区的末三个氨基酸(GQP)是图1B的CL区的前三个氨基酸(GQP)。图1A和图1B中所示的具体区域的具体序列的分配是为了便于它们之间的比较。出于区域特异性比较的目的，可使用如图1A或图1B所示的具体序列对具体区域的分配。在一些实施方式中，可使用图1B所示的具体序列向具体区域的分配。
图2显示了含有8％海藻糖(菱形)、4％海藻糖(正方形)和2％海藻糖(三角形)的制剂的Tg′(以℃表示)和NaCl浓度之间关系的图示。从冻干时的实用性的角度来看，不希望Tg′值低于-40℃。
图3是等值线图，其中Tm3去折叠温度表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mLbintrafusp alfa)和pH的制剂空间(具有固定离子强度，95mM NaCl)内的等值线(范围从69.98-72.72)。
图4是等值线图，其中Tm3去折叠温度表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mLbintrafusp alfa)和离子强度(mM NaCl)的制剂空间(具有pH 6.25的固定pH)内的等值线(范围从69.98-72.72)。
图5是等值线图，其中40℃下4周后％LMW物质表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mLbintrafusp alfa)和pH的制剂空间(具有固定离子强度，95mM NaCl)内的等值线(范围从5.71-12.35)。数据通过CGE NR(即非还原条件下的CGE)获得。
图6是等值线图，其中40℃下4周后％LMW物质表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mLbintrafusp alfa)和离子强度(mM NaCl)的制剂空间(具有pH 6.25的固定pH)内的等值线(参见在6、6.5、7和7.5处的等值线)。数据由CGE NR获得。
图7是等值线图，其中40℃下4周后％HMW物质表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mLbintrafusp alfa)和pH的制剂空间(具有固定离子强度，95mM NaCl)内的等值线(范围从1.2-6.3)。数据由SE-UPLC获得。
图8是等值线图，其中40℃下4周后％HMW物质表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mLbintrafusp alfa)和离子强度(mM NaCl)的制剂空间(具有pH 6.25的固定pH)内的等值线(参见在1、2、3和4处的等值线)。数据由SE-UPLC获得。
图9是等值线图，其中40℃下4周后簇2(Cluster 2)同种型表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mL bintrafusp alfa)和pH的制剂空间(具有固定离子强度，95mM NaCl)内的等值线(范围从5.5-13.68)。数据通过cIEF识别和iCE3的同种型分布获得。
图10是等值线图，其中40℃下4周后Met516的％氧化水平表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mL bintrafusp alfa)和pH的制剂空间(具有固定离子强度，95mM NaCl)内的等值线(范围从5.77-8.76)。数据由RP-UPLC获得。
图11是等值线图，其中40℃下4周后Met516的％氧化表示为具有可变蛋白质浓度(mg/mL bintrafusp alfa)和离子强度(mM NaCl)的制剂空间(具有pH 6.25的固定pH)内的等值线(参见在6、6.2、6.4和6.6处的等值线)。数据由RP-UPLC获得。
图12是所有样品的散点图，其显示了光压力后％氧化对比bintrafusp alfa浓度的关系。
图13是所有样品的散点图，其显示了光压力后％氧化对比离子强度的关系。
图14是所有样品的散点图，其显示了光压力后％氧化对比pH的关系。
图15是2D和3D等值线图，其中合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为具有可变pH和离子强度(以mM NaCl给出)的制剂空间(具有固定蛋白质浓度：20mg/mL)内的等值线(2D图中)和曲面(3D图中)。这表明在该IgG：TGFβR2浓度下的最佳条件是pH5.7和40mM NaCl的离子强度。
图16是2D和3D等值线图，其中合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为具有可变pH和离子强度(以mM NaCl给出)的制剂空间(具有固定蛋白质浓度：40mg/mL)内的等值线(2D图中)和曲面(3D图中)。这表明在该IgG：TGFβR2浓度下的最佳条件是pH5.9和60mM NaCl的离子强度。
图17是2D和3D等值线图，其中合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为具有可变pH和离子强度(以mM NaCl给出)的制剂空间(具有固定蛋白质浓度：60mg/mL)内的等值线(2D图中)和曲面(3D图中)。这表明在该IgG：TGFβR2浓度下的最佳条件是pH5.9和150mM NaCl的离子强度。
图18是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的特定蛋白质浓度所用值时，40℃热压力4周后，％HMW如何随蛋白质浓度变化的图。
图19是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的特定蛋白质浓度所用值时，40℃热压力8周后，％HMW如何随蛋白质浓度变化的图。
图20是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的特定蛋白质浓度所用值时，40℃热压力4周后，主削波(Main Clipping)如何随蛋白质浓度变化的图。
图21是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20并且离子强度固定在适用于表3J中伴有聚山梨醇酯20的具体蛋白质浓度的任何NaCl浓度时，％LMW在40℃热压力4周后如何随“不同赋形剂”变化的图。测量值用圆圈表示，而基于测量值预测的值用正方形表示。
图22是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，40℃4周后，％脱酰胺形式如何随蛋白质浓度变化的图。
图23是显示对于表面活性剂聚山梨醇酯20(正方形指示预测值)和Kolliphor 188(三角形指示基于测量值的预测值，其用圆圈表示)，当蛋白质(bintrafusp alfa)浓度固定在40mg/mL时，在40℃4周后，％氧化形式如何随赋形剂变化的图。
图24是显示当蛋白质(bintrafusp alfa)浓度固定在40mg/mL时，40℃8周后，％氧化形式如何随赋形剂变化的图。
图25是显示当蛋白质(bintrafusp alfa)浓度固定在40mg/mL时，40℃热压力4周后，％簇1(通过iCE3)如何随赋形剂变化的图。圆圈代表测量值，正方形代表基于测量值的预测值。
图26是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，40℃4周后，％簇2(通过iCE3)如何随蛋白质浓度变化的图。
图27是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，光压力后，％NMW(通过SE-UPLC)如何随蛋白质浓度变化的图。
图28是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，光压力后，主削波(通过CGE)如何随蛋白质浓度变化的图。
图29是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，光压力后，％LMW(通过CGE)如何随蛋白质浓度变化的图。
图30是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”f图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，光压力后，％氧化形式(通过RO-UPLC)如何随蛋白质浓度变化的图。
图31是显示当表面活性剂固定为聚山梨醇酯20，并且NaCl浓度(离子强度)为表3J中针对伴有聚山梨醇酯20和图例所示“各种赋形剂”(图例是指基于测量值的预测值，在图中用圆圈表示)的具体蛋白质浓度所用值时，3个冻融循环后，％HMW如何随蛋白质浓度变化的图。
图32是柱状图，其显示机械压力(300rpm)3天之前和之后，％HMW(通过SE-UPLC)如何随制剂(对应于表3J的制剂编号在横轴中给出)变化。
图33是显示当所有其它因素被平均时％HMW(机械压力后)如何随表面活性剂变化的图。
图34是显示对于40mg/mL(显示为方块的预测值，其基于显示为圆圈的测量值)、50mg/mL(显示为三角形的预测值，其基于显示为圆圈的测量值)和60mg/mL(显示为菱形的预测值，其基于显示为圆圈的测量值)的蛋白质(bintrafusp alfa)浓度，总体合意性(基于多种因素、压力测试和结果的平衡)如何随赋形剂变化的图。
图35是显示当蛋白质浓度固定为40mg/mL时，对于表面活性剂聚山梨醇酯20(显示为正方形的预测值，其基于显示为圆圈的测量值)和Kolliphor188(显示为三角形的预测值，其基于显示为圆圈的测量值)，总体合意性(基于多种因素、压力测试和结果的平衡)如何随赋形剂变化的图。
图36的柱状图显示了对于表3K以及表2A的2A.5(2A.5)(称为“01-300518”)的各制剂，热压力后的％HMW增加(通过SE-UPLC)。
图37的柱状图显示了对于表3K以及表2A的2A.5(称为“01-300518”)的各制剂，热压力后的％LMW增加(通过CGE-NRED)。
图38的柱状图显示了对于表3K以及表2A的2A.5(称为“01-300518”)的各制剂，热压力后的％氧化(通过RP-UPLC)。
图39的柱状图显示了对于表3K以及表2A的2A.5(称为“01-300518”)的各制剂，热压力后的％脱酰胺(通过IEX)。
图40的柱状图显示对于表3K以及表2A的2A.5(称为“01-300518”)的各制剂，热压力后的％纯度(通过CGE-RED，即还原条件下的CGE)。
图41的柱状图显示了对于表3K以及表2A的2A.5(称为“01-300518”)的各制剂，热压力后的％主削波(通过CGE-RED)。
图42的柱状图显示了表3K的各制剂在光压力后的％HMW增加(通过SE-UPLC)。
图43的柱状图显示了表3K的各制剂在光压力后的％氧化(通过RP-UPLC)。
图44的柱状图显示了表3K的各制剂在光压力后的％LMW(通过CGE-NRED)。
图45的柱状图显示了表3K的各制剂在光压力后的％纯度(通过CGE-RED)。
图46的柱状图显示了表3K的各制剂在光压力后的％主削波(通过CGE-RED)。
图47的柱状图显示了表3K的各制剂在机械压力后的％HMW(通过SE-UPLC)。
图48的柱状图显示了表3K的各制剂在机械压力后的％LMW(通过CGE-NRED)。
图49的柱状图显示了表3K的各制剂在机械压力后的％纯度(通过CGE-RED)。
图50的柱状图显示了表3K的各制剂在机械压力后的％主削波(通过CGE-RED)。
图51显示时间对温度的曲线图，说明如何进行3个FT循环。
图52是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的pH如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
图53是显示制剂F1-F20中各自的重量渗透摩尔浓度的柱状图。
图54是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的浊度如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
图55是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的纳米DSC迹线的Tm2峰的温度如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
图56是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的纳米DSC迹线的起始温度Tm如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
图57是显示％HMW(通过SE-UPLC)如何随制剂变化的柱状图(对应于表5A的制剂编号在水平轴中给出)。(A)、(C)和(E)显示40℃4周之前和之后的％HMW，(B)、(D)和(F)显示时间＝0和40℃下4周后的％HMW差异。
图58是显示％LMW(通过CGE-NRED)如何随制剂变化的柱状图(对应于表5A的制剂编号在水平轴中给出)。(A)、(C)和(E)显示40℃4周之前和之后的％HMW，(B)、(D)和(F)显示时间＝0和40℃下4周后的％LMW差异。
图59是3D等值线图，其带有合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)，合意性参数在具有可变海藻糖浓度和离子强度(以mM NaCl给出)和固定精氨酸浓度的制剂空间内表示为曲面。
图60是3D等值线图，其带有合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)，合意性参数在具有可变精氨酸浓度和离子强度(以mM NaCl给出)和固定海藻糖浓度的制剂空间内表示为曲面。
图61是3D等值线图，其带有合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)，合意性参数在具有可变精氨酸和海藻糖浓度和固定离子强度浓度(以mM NaCl给出)的制剂空间内表示为曲面。
具体实施方式
定义
除非另有说明，说明书和权利要求所用下述术语具有下述含义。
在本说明书的全文描述和权利要求书中，词语“包括”和“包含”及其变体意指“包括但不限于”，并且它们不旨在(也不)排除其它部分、添加剂、分量、整数或步骤。贯穿本说明书的描述和权利要求，除非上下文另有要求，否则单数包括复数。特别地，在使用不定冠词的情况下，除非上下文另有要求，否则说明书将被理解为考虑复数以及单数。
在本文中，述及“抗体”，例如IgG(例如，当使用符号，例如IgG：TGFβR融合蛋白)时，优选地是指完整抗体或其抗原结合片段，其中抗原结合片段优选地包含至少Fv区或ScFv，更优选地包含至少Fab区或F(ab)2片段。然而，在更优选的实施方式中，述及“抗体”，例如IgG(或其任何亚型，例如IgG1、IgG4)，是指完整的抗体。
完整抗体通常在其单体形式中包含两个片段抗原结合(Fab)区(或Fab结构域)，任选标记为F(ab)2，通常通过铰链区连接到可结晶片段(Fc)区(或Fc结构域)。这种结构由四条多肽链组成——两条相同的重链和两条相同的轻链，它们都通过二硫键相互连接。各Fab结构域包含通过二硫键连接的单重链(例如VH-CH1)和单轻链(例如VL-CL)的部分的配对。Fc结构域包含重链的两个剩余部分(例如CH2-CH3)的配对。
完整的IgG是单体抗体并且具有上文关于完整抗体所述的结构。在完整IgG的情况下，各条相同的重链按从N端开始到C端结束的顺序包含可变重链区(VH)、第一恒定重链区(CH1)，第二恒定重链区(CH2)和第三恒定重链区(CH3)。同时，各条相同的轻链按从N端开始到C端结束的顺序包含可变轻链区(VL)和恒定轻链区(CL)。重链的VH-CH1部分和轻链的VL-CL通过二硫键桥连在一起，形成完整IgG的一对Fab区之一。通过二硫键桥接在一起，重链的两个相同的CH2-CH3部分形成完整IgG的Fc区。完整的IgG具有140kDa和180kDa之间的分子量，优选140-160kDa(更优选144-155kDa，最优选约146kDa)或165-175kDa(更优选168-172kDa，最优选约170kDa)。完整的IgG通常具有6至9.5的pI。
完整IgG抗体有四个不同的亚类，即IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。所有亚类都具有上述相同的核心区域，但略有不同，特别是在铰链区的氨基酸和/或二硫键数量方面。从结构的角度来看，可以认为IgG1和IgG4最相似。完整的IgG1、IgG2或IgG4通常具有140-160kDa(更优选144-155kDa，最优选约146kDa)的分子量，而完整IgG3通常具有165-175kDa(更多优选168-172kDa，最优选约170kDa)的分子量。通常，完整的IgG1的pI为8-9.4，更优选为8.2-9.2。通常，完整的IgG2的pI为6.5-8.5，更优选7.0-8.0。通常，完整的IgG3的pI为7-9.5，更优选7.5-9.0。通常，完整的IgG4的pI为6-8.5，更优选6.4-8。
例如，抗原结合片段可以包括：Fab区(例如，与其相应的轻链VL-CL配对的VH-CH1)或具有两个连接的Fab区的F(ab)2区；Fv区(例如，与其相应的可变轻链部分VL配对的VH)；和/或，单链可变片段ScFv结构域(例如，通过肽接头与VL连接的VH，优选包含约25个氨基酸)。就本发明而言，述及IgG，例如在IgG：TGFβR融合蛋白(包括更具体定义的融合蛋白，例如抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白)中述及时，可以是完整的IgG，例如融合至TGFβR2，或抗原结合片段(例如上述)，例如融合至TGFβR2。然而，最优选地，在这种融合蛋白中优选完整的IgG。
术语“TGF-β受体”(TGFβR)以及“TGF-β受体I”(TGFβR1)或“TGF-β受体II”(TGFβR2)是本领域公知的。就本文公开内容而言，这些受体包括能够结合TGF-β的完整受体及片段。优选地，它是受体的胞外结构域或能够结合TGF-β的胞外域片段。
术语“融合蛋白”为本领域所熟知。IgG：TGFβR融合蛋白是与TGF-β受体融合的IgG抗体(优选单克隆抗体，优选同源二聚体形式)。命名法抗PD-L1(IgG1)：TGFβR2融合蛋白表示抗PD-L1 IgG1抗体融合至TGF-β受体II(优选其能够结合TGF-β的胞外域片段)。
“bintrafusp alfa”在本领域中是众所周知的。bintrafusp alfa是一种抗PD-L1(IgG1)：TGFβR2融合蛋白，记述于CAS登记号1918149-01-5。另描述于参见WO 2015/118175、Lan等(Lan等，“M7824，一种同时靶向PD-L1和TGF-β的双官能融合蛋白的增强临床抗肿瘤活性”(“Enhanced preclinical antitumor activity of M7824，a bifunctional fusionprotein simultaneously targeting PD-L1 and TGF-β”)，Sci.Transl.Med.10，2018，第1-15页)。具体而言，bintrafusp alfa是抗人PD-L1完全人源免疫球蛋白G1(IgG1)单克隆抗体，其融合至人TGFβ受体II(TGFβR2)的细胞外结构域。因此，bintrafusp alfa是同时靶向PD-L1通路和TGFβ通路的双功能融合蛋白。具体地说，WO 2015118175第34页实施例1对bintrafusp alfa记载如下(bintrafusp alfa在其中称作“抗PD-L1/TGFβ阱”)：
抗“PD-L1/TGFβ阱指抗PD-L1抗体-TGFβ受体II融合蛋白。该分子的轻链与抗PD-L1抗体的轻链(SEQ ID NO：1)相同。该分子的重链(SEQ ID NO：3)是融合蛋白，其中包含的抗PD-L1抗体的重链(SEQ ID NO：2)通过柔性(Gly4Ser)4Gly接头(SEQ ID NO：11)在可溶性TGFβ受体II(SEQ ID NO：10)的N端与之融合。在融合连接处，抗体重链的C末端赖氨酸残基突变为丙氨酸从而降低蛋白酶切。”
出于本公开和摩尔计算的目的，认为bintrafusp alfa的分子量(Mw)是182千道尔顿(kDa)，或182,000g/mol。因此，含有10mg/mL bintrafusp alfa的液体药物组合物可以被认为是其0.055mM溶液，含有40mg/mL bintrafusp alfa的液体药物组合物可以被认为是其0.220mM溶液，含有50mg/mL bintrafusp alfa的液体药物组合物可以被认为是其0.275mM溶液。
本文提及的任何具体融合蛋白，包括本文所述的任何IgG：TGFβR融合蛋白(尤其是bintrafusp alfa)，包括相关的原始药物物质，无论它们是市售可得的、还是专利文件中描述或如本领域他处所述，以及其生物仿制药。
本文通过参考如本文所述定义的核苷酸或氨基酸序列(尤其是IgG：TGFβR2融合蛋白，更具体地是具有bintrafusp alfa的氨基酸序列的IgG：TGFβR2融合蛋白)所提及的任何具体的IgG：TGFβR融合蛋白，可以包括变体，其(1)与关于所述IgG：TGFβR融合蛋白公开的氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的氨基酸序列同一性，或(2)与关于所述IgG：TGFβR融合蛋白公开的那些具有不超过30％、不超过20％、不超过10％或不超过5％的氨基酸残基差异。优选地，本文提及通过参考本文描述的核苷酸或氨基酸序列(尤其是IgG：TGFβR2融合蛋白，更具体是具有bintrafusp alfa的氨基酸序列的IgG：TGFβR2融合蛋白)所定义的任何具体的IgG：TGFβR融合蛋白，指的是具有所述确切序列(而非其任何变体)的蛋白质。
术语序列同一性在本领域中是众所周知的。序列同一性可以使用用于两个序列的全局比对的Needleman-Wunsch算法确定(Needleman和Wunsch，“适用于搜索两种蛋白质氨基酸序列相似性的通用方法fA general method applicable to the search forsimilarities in the amino acid sequence of two proteins)”，J Mol Biol 48(3)，443-53.1970年3月)。
蛋白质存在一定量的氨基酸残基的“差异(不同)”的指示是指，与参考序列相比，该量的残基被插入、缺失和/或取代。
在本文中，术语“缓冲液”、“缓冲液系统”或“缓冲溶液”是指通常包含酸(通常为弱酸，例如乙酸、柠檬酸、咪唑鎓形式的组氨酸)的混合物的水溶液，及其共轭碱(例如乙酸盐或柠檬酸盐，例如乙酸钠、柠檬酸钠或组氨酸)或碱(通常是弱碱，例如组氨酸)及其共轭酸(例如质子化组氨酸盐)的混合物。归因于缓冲体系提供的“缓冲作用”，“缓冲溶液”的pH在添加少量强酸或强碱后只会发生轻微变化。缓冲溶液可包含一种或多种缓冲体系，但优选不超过两种缓冲体系(即双缓冲体系，例如组氨酸-柠檬酸盐、组氨酸-乙酸盐、柠檬酸盐-磷酸盐)，但最优选缓冲溶液包含一种和至多一种缓冲体系。
此处，在本说明书的上下文中，“强酸”优选为具有-1.0或更低的pKa的酸，而“弱酸”优选为具有2.0或更大的pK。的酸。此处，在本说明书的上下文中，“强碱”优选是其共轭酸的pKa为12或更高(优选14或更高)的碱，而“弱碱”优选是其共轭酸的pKa为10或更低的碱。
除非另有说明，否则本文提及的“pKa”应解释为标准环境温度和压强(SATP)下的水中的pKa值，优选相关物质的共轭酸。
“氨基酸组分”是包含一种或多种氨基酸的一种或多种成分，而氨基酸组分可以由单一氨基酸组成。
除非另有说明，本文提及一种或多种“氨基酸”，无论是详指(例如精氨酸、组氨酸)还是泛指(例如任何氨基酸)，在它们存在或以其它方式存在于组合物(尤其是本发明的药物液体组合物)的情况中，涉及相应的游离氨基酸(不论其/它们的质子化状态和/或盐形式如何，不过为了一致性，优选通过参考游离氨基酸本身来计算量)。这可以优选地包括天然和/或人工氨基酸。除非有相反的说明，否则这些参考文献并不旨在涉及作为更大化合物(与包含多种化合物的组合物不同)的一部分共价整合的氨基酸残基，例如肽或蛋白质(其中此类氨基酸残基通过肽键连接)。因此，尽管蛋白质形式的抗体包含氨基酸残基，但不认为它包含任何“游离氨基酸”。例如，定义为“不含精氨酸”的组合物不包含任何游离精氨酸，但它仍可包含一种或多种本身包含精氨酸残基的蛋白质(例如bintrafusp alfa)。
除非另有说明，本文提及的任何一种或多种“氨基酸”，无论是详指的还是泛指的，优选涉及L-立体异构体或其外消旋体，最优选L-氨基酸。
本文中，“糖组分”是一种或多种成分，包括一种或多种糖和/或糖醇，不过糖组分可以由单一糖或糖醇组成。
在本文中，“非还原糖”是没有任何醛部分或没有形成醛部分(例如通过异构现象)的能力的糖。
在本文中，“张力调节剂”或“张力调节物”是指包含在组合物中有助于(或增加)组合物的总重量渗透摩尔浓度和容量渗透摩尔浓度的试剂。优选地，如本文所用的张力调节剂包括起到使溶液在渗透特性上与生理流体相似的作用的试剂。
本文中，“抗氧化剂”或“抗氧化剂组分”是包含一种或多种抗氧化剂化合物的一种或多种成分，不过抗氧化剂组分可以由单一抗氧化剂化合物组成。本发明组合物的上下文中的抗氧化剂优选减轻融合蛋白内可能易受氧化影响的基团的氧化。
“螯合剂”是本领域术语，指的是能够与各种基团、分子、原子或离子络合，优选以多齿方式络合的化合物，并且可以自身发挥抗氧化作用。
在本文中，当组合物被称为“以不存在[特定组分]为特征”时，这意味着所讨论的组合物基本上不含或完全不含所述组分。
术语“基本上不含”，当用于组合物的给定组分(例如，“基本上不含氨基酸组分的液体药物组合物”)时，是指其中基本上不添加所述组分的组合物。如上所述，这些述及内容与蛋白质结构中氨基酸残基的存在无关。当组合物“基本上不含”给定组分时，所述组合物优选包含不超过0.1重量％的所述组分，优选不超过0.01重量％的所述组分，优选不超过0.001重量％的所述组分，优选不超过0.0001重量％的所述组分，优选不超过0.00001重量％，优选不超过0.000001重量％，优选不超过0.0000001重量％，最优选不超过十亿分之0.0001份(以重量计)。
术语“完全不含”，当用于组合物的给定组分时(例如，“完全不含氨基酸组分的液体药物组合物”)，是指其中不含任何所述组分的组合物。如上所述，与药物组合物中存在的氨基酸有关的此类述及内容与蛋白质结构中氨基酸残基的存在无关。
优选地，除非另有说明，当述及可能取决于压强和/或温度的参数(例如pH、pKa等)或材料状态(例如液体、气体等)时，优选地，在没有进一步说明的情况下，这样的述及情况是指在标准环境温度和压强(SATP)下的所述参数。SATP的温度为298.15K(25℃，77°F)，绝对压强为100kPa(14.504psi，0.987atm)。
在本文中，述及组合物的给定组分，尤其是缓冲剂或缓冲体系、表面活性剂、糖组分、氨基酸组分、张力调节剂、抗氧化剂和/或螯合剂的具体量优选涉及相关组分的纯的无水形式的量(或通过使用所述量的纯的无水形式形成的组合物)，即使这样的组分在形成组合物时可以以非无水形式使用也是如此。任何对应的非无水形式(例如一水合物、二水合物等)的量可以通过简单地使用合适的乘数来容易地计算。例如，除非另有说明(根据实施例，当量涉及海藻糖二水合物时)，关于海藻糖规定的量是指海藻糖的无水形式(或通过使用规定量/浓度的无水海藻糖形成的组合物)，其分子量为342.296g/mol，因此要计算形成同一组合物所需的海藻糖二水合物的对应量(须添加更少的水)，需要将规定的量乘以378.33/342.296，因为378.33是海藻糖二水合物的分子量。本领域技术人员将容易理解如何根据所用组分的形式合理地调整稀释剂/水的量，以获得目标浓度。显然，在规定摩尔量的情况下，此问题不适用。
在本文中，术语“药物组合物”是指适用于哺乳动物治疗的制剂，例如，在它不包括过度毒性的成分的意义上。在本文中，述及“组合物”通常是指如本文定义的药物组合物。
在本文中，术语“稳定的”通常是指在保存/储存期间，组分(通常是活性物质或其组合物)的物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物稳定性。对于生物制品的水性组合物，储存稳定性可优选意味着当在2～8℃储存至少6个月、优选至少12个月、优选长达24个月。然而，加速稳定性研究可用于提供相关的稳定性信息。
应理解，述及“处置”或“治疗”包括预防以及已有症状的缓解。对状态、紊乱或病症的“处置”或“治疗”包括：(1)防止或者延迟所述状态、紊乱或病症在人对象中出现，所述人对象可患有或易患所述状态、紊乱或病症但尚未经历或显示所述状态、紊乱或病症的临床或亚临床症状，(2)抑制所述状态、紊乱或病症，即阻止、减少或延迟疾病的发生发展或其复发(就维持治疗而言)或其至少一种临床或亚临床症状，或者(3)消解或缓解疾病，即致使所述状态、紊乱或病症或其至少一种临床或亚临床症状发生消退。
在本发明的上下文中，药物组合物的“治疗有效量”或“有效量”是指当给予哺乳动物用于治疗疾病或病症时，在预防和治疗方面有效的量，且所述药物组合物有效于治疗相关疾病。“治疗有效量”将根据要治疗的哺乳动物的融合蛋白、疾病及其严重程度以及年龄、体重等而变化。
在本文中，对组分和成分规定的量，无论是否以“份”、ppm(百万分之几)、百分比(％，例如重量％)或比率的形式规定，都意在以重量计，除非另有说明。
当给定组合物的特定组分的量或浓度以重量百分比(wt％或％w/w)指定时，所述重量百分比是指所述组分相对于作为一个整体的组合物的总重量的重量百分比。本领域技术人员将理解组合物的所有组分(无论是否指定)的重量百分比总和将总计为100wt％。然而，在没有列出所有组分的情况下(例如，在组合物被称为“包含”一种或多种特定组分的情况下)，重量百分比平衡可任选地由未指定的成分(例如稀释剂，例如水、或其它非必要但合适的添加剂)构成。
在本文中，特定组分的量或浓度可以以重量/体积百分比的形式提供，例如表示为0到100之间的数字，后跟“％w/v”、“％(w/v)”、“w/v％”、“wt/vol％”或“％wt/vol”，尤其是当所述组分存在于液体组合物(合适地为水性溶液)中时。本领域技术人员将容易理解，给定的％w/v可以转换成其它重量/体积单位，例如“mg/mL”。当称一组分以1％(w/v)存在时，该组分以10mg/mL的浓度存在(即mg/mL的数字是％w/v给出的数字的10倍)。本领域技术人员还将理解，％w/v(尤其是％w/v范围)可以重新表示为wt％(即％w/w)(尤其是wt％范围)，其中整体组合物的密度约为1g/cm3。这适合本发明的药物组合物的情况。因此，组分之间的重量比可以从本申请中提供的信息中设想。
当称组合物包含多种规定的成分(任选地以规定的浓度量)时，所述组合物可以任选地包括除了规定的那些之外的其它成分。然而，在某些实施方式中，据称包含多种规定成分的组合物实际上可以基本上由或由全部规定成分(任选以规定的量)组成。在任一情况下，个体组分本身可包括、基本上由或由亚组分或一个或多个亚组分组成。在此，无论何时使用术语“包括/包含”，在与上下文相容的情况下，它都可以被替换为“基本上由......组成”或“由......组成”。
在本文中，当组合物被称为“基本上由”特定组分或多种组分“组成”时，所述组合物优选包含至少70重量％的所述组分，优选其至少90重量％，优选其至少95wt％，最优选其至少99wt％。优选地，被称为“基本上由”特定组分“组成”的组合物除了一种或多种痕量杂质外由所述组分组成。
“约”在用于修饰数值定义的参数(例如，pH)时表示该参数可以变化，例如，在确定该参数的实验精度范围内或±多达5％该参数的规定数值，最好是该参数的规定数值的±2％。在优选实施方式中，由术语“约”描述的参数对应于所述数值。
本文中，除非在给定的上下文中不相容，否则只要规定了能够电离(例如质子化或去质子化)的组分，所述组分的定义优选包括其任何合适的盐，优选其药学上可接受的盐。例如，这适用于本文对缓冲剂(例如柠檬酸或柠檬酸盐)、氨基酸等的任何引用。同样，除非在给定的上下文中不相容，否则只要规定了能够中和的成分，则所述成分的定义优选包括其中和形式——例如柠檬酸代替柠檬酸盐。
“等电点”(pI)表示从统计学角度，给定分子(或其部分)为电中性的pH——即不携带净电荷。pI与蛋白质特别相关，包括本发明的融合蛋白，因为它们包含的官能团可以是正的、负的、中性的和极性的，这取决于局部环境的主要pH。任何给定分子或其部分的pI可以通过本领域熟知的方法通过实验确定。然而，也可以使用本领域公知的各种方法计算pI。优选地，pI通过实验确定。
关于本发明的一般要点和优点
当开发可行的抗体制剂，尤其是抗体融合蛋白制剂时，普遍承认各种因素影响制剂的稳定性。在目前的情况下，抗体与受体的融合进一步使制剂开发复杂化，因为必须满足分子的两个部分。
本发明是在如下研究工作后产生的：对通常贫瘠的制剂空间进行熟练和直观的靶向和努力探索以揭示应该存在或不存在哪些关键赋形剂及其相对量，以便就加工和/或存储过程最好地补充相关的融合蛋白。如果没有这种针对性强且努力的方法，制剂科研人员不太可能设计出可行的制剂。
本发明的许多优点以及实际上在其构思和开发中所涉及的挑战将是不言而喻的。本公开中阐明的创造性努力代表了对本领域的重大贡献，鉴于尽管存在上述不可预测性，但本发明以本文提供的实施例和数据为基础建立了可行且可靠的制剂空间，因此本发明的贡献在保护范围上是相称的。
药物组合物
本发明提供了一种药物组合物。优选地，药物组合物是液体药物组合物，优选水性药物组合物(其因此包含水，优选注射用水，作为稀释剂)。然而，药物组合物也可以是冻干组合物(即并因此优选为固体冻干药物组合物)。这种冻干组合物可以优选被重建以提供液体药物组合物，优选水性药物组合物。本文给出的定义和量可涉及液体和/或冻干组合物之一或两者。当量以液体组合物中的浓度(例如，无论是重量百分比、每体积的重量，还是摩尔浓度(molarity)或质量摩尔浓度(molality))形式规定的情况下，其同样可以转换为固体组合物的浓度比率(无论是重量比还是摩尔比)，通过本领域已知的简单计算，例如，利用对相关成分的分子量的预知以实现两种常见单位(例如重量份或重量％，或摩尔)的转换。
药物组合物包含IgG：TGFβR融合蛋白，和任选的一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或运载体。优选地，所述药物组合物包含以下一种或多种：缓冲体系、表面活性剂、糖组分、氨基酸组分、张力调节剂、抗氧化剂和螯合剂。液体药物组合物(无论是原样配制还是冻干制剂的重建形式)优选包含稀释剂，例如水(例如注射用水)。优选地，药物组合物的特征在于pH为4-8。优选地，药物组合物的特征在于240-640mOsm/kg的重量渗透摩尔浓度，尤其是在该药物组合物意图被用于皮下注射而无需预先稀释时。
应理解，药物组合物的化合物可以发挥多于一种作用。例如，组氨酸，一种氨基酸组分，也可以作为缓冲体系的部分。因此，当述及包含缓冲体系和氨基酸组分的药物组合物时，这样的实施方式涵盖具有组氨酸缓冲体系并且另无其它氨基酸组分的药物组合物。因此，除非在给定的上下文中不相容，例如，作为指定药物组合物的相应特征的非重叠浓度范围的一个实施方式，否则药物组合物的所列特征可以通过一种或多种化合物满足多于一种所列特征(即多功能化合物)的方式来满足。在一些实施方式中，药物组合物的所列特征由分开的化合物实现。在一些实施方式中，药物组合物的所列特征由满足多于一个所列特征的一种或多种化合物来满足。
在特定的实施方式中，药物组合物包含(或由其组成，在水性组合物的情况下任选地连同注射用水一起)和/或其特征在于下述一种或多种：IgG：TGFβR融合蛋白；缓冲体系；pH4-8；表面活性剂；糖成分；氨基酸组分；张力调节剂；抗氧化剂；和/或螯合剂。
以下编号的段落A1至A9公开了本发明的特定实施方式。
A1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白。
A2.A1的药物组合物，其还包含张力调节剂。
A3.A1或A2的药物组合物，其特征还在于pH为4-8。
A4.如A1-A3中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系。
A5.如A1-A4中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂。
A6.如A1-A5中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分。
A7.如A1-A6中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂。
A8.如A1-A7中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分。
A9.如A1-A8中任一项所述的药物组合物，其还包含螯合剂。
融合蛋白
药物组合物包含IgG：TGFβR融合蛋白。
IgG：TGFβR融合蛋白优选地是IgG：TGFβR融合蛋白，其包含与TGFβR的可溶性胞外结构域、更优选TGFβR2的可溶性胞外结构域或其能够结合TGF-β的片段融合的IgG。
IgG：TGFβR融合蛋白优选是IgG：TGFβR融合蛋白，其中IgG具有8-10的pI，优选8.5-9.5的pI，而TGFβR具有4.5-6的pI，优选4.6-5.4的pI。
IgG：TGFβR融合蛋白的IgG优选选自抗PD-L1(IgG)和抗PD-1(IgG)，更优选其为抗PD-L1(IgG).在一些实施方式中，抗PD-L1(IgG)选自下组：(1)抗PD-L1(IgG)，其包含三个重链CDR和三个轻链CDR，所述三个重链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：19(CDR1)，SEQ ID NO：20(CDR2)和SEQ ID NO：21(CDR3)，而所述三个轻链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：22(CDR1)，SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ ID NO：24(CDR3)，(2)抗PD-L1(IgG)，其包含三个重链CDR和三个轻链CDR，所述三个重链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：1(CDRl)，SEQ ID NO：2(CDR2)和SEQ ID NO：3(CDR3)，而所述三个轻链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：4(CDR1)，SEQ ID NO：5(CDR2)和SEQ ID NO：6(CDR3)，和(3)抗PD-L1(IgG)，其包含三个重链CDR和三个轻链CDR，所述三个重链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：27(CDR1)，SEQ ID NO：28(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)，而所述三个轻链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：30(CDRl)，SEQ IDNO：31(CDR2)和SEQ ID NO：32(CDR3)。在优选实施方式中，抗PD-L1(IgG)包含重链CDR和轻链CDR，所述重链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：1，2和3，而所述轻链CDR具有氨基酸序列SEQ ID NO：4，5和6。一些实施方式中，抗PD-L1(IgG)的轻链可变区和重链可变区分别包含SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26。在一些实施方式中，抗PD-L1(IgG)的轻链序列和重链序列分别对应于(1)SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：16，(2)SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：14，或(3)SEQID NO：33和SEQ ID NO：35。IgG：TGFβR融合蛋白的IgG类别优选选自下组：IgG1、IgG2和IgG4，更优选其为IgG1或IgG4，且最优选其为IgG1。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的CH3结构域与bintrafusp alfa的CH3结构域的氨基酸序列具有大于或等于85％的序列同一性，大于或等于90％的序列同一性，大于或等于95％的序列同一性，或至少96％的序列同一性。优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的CH3结构域的氨基酸序列与bintrafusp alfa的CH3结构域具有不超过10个、不超过5个或不超过4个氨基酸残基的差异。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的CH1结构域与bintrafusp alfa的CH1结构域的氨基酸序列具有大于或等于80％的序列同一性，大于或等于85％的序列同一性，大于或等于90％的序列同一性，或至少91％的序列同一性。优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的CH1结构域与bintrafusp alfa的CH1结构域具有不超过20、不超过10或不超过7个氨基酸残基的差异。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的CH2结构域与bintrafusp alfa的CH2结构域的氨基酸序列具有大于或等于80％的序列同一性，大于或等于85％的序列同一性，大于或等于90％的序列同一性，或至少91％的序列同一性。优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的CH2结构域与bintrafusp alfa的CH2结构域具有不超过20、不超过10或不超过8个氨基酸残基的差异。
可变结构域(轻链和重链)和整个轻链的变异性是可容忍的。
IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR优选为TGFβR1或TGFβR2，更优选为TGFβR2。在一个优选的实施方式中，它是IgG：TGFβR2融合蛋白，其中IgG的pI为8.5-9.5，而TGFβR2的pI为4.6-5.4。在另一个优选的实施方式中，它是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，例如抗PD-L1(IgG1)：TGFβR2或抗PD-L1(IgG4)：TGFβR2。最优选地，它是抗PD-L1(IgG1)：TGFβR2。优选地，TGFβR2是TGFβR2的可溶性胞外结构域或其能够结合TGF-β的片段。优选地，TGFβR2缺乏TGFβR2的细胞质结构域。在一些实施方式中，TGFβR2对应于野生型人TGFβ受体2型同种型A序列(例如，NCBI参考序列(RefSeq)登录号NP_001020018(SEQ ID NO：9)的氨基酸序列)，或野生型人TGFβ受体2型同种型B序列(例如，NCBI RefSeq登录号NP_003233(SEQ ID NO：10)的氨基酸序列)。优选地，TGFβR2包含或由对应于SEQ ID NO：11的序列或其能够结合TGFβ的片段组成。例如，TGFβR2可以对应于SEQ ID NO：11的全长序列。或者，它可以具有N-末端缺失。例如，SEQ ID NO：11的N端氨基酸1-26，例如最N端氨基酸的14-21或14-26可缺失。在一些实施方式中，SEQ ID NO：11的N-末端14、19或21个氨基酸缺失。优选地，TGFβR2包含选自下组的序列或由其组成：SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13。优选地，TGFβR2与SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13之任一者的全长氨基酸序列具有至少80％序列同一性，至少90％序列同一性，或至少95％序列同一性。在另一优选实施方式中，TGFβR2与SEQID NO：11的全长氨基酸序列具有至少80％的序列同一性。在一个优选实施方式中，TGFβR2的氨基酸序列与SEQ ID NO：11具有不超过25个氨基酸的差异。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR与bintrafusp alfa的TGFβR的氨基酸序列具有大于或等于92％的序列同一性，大于或等于95％的序列同一性，大于或等于99％的序列同一性，或100％的序列同一性。优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR与bintrafusp alfa的TGFβR具有不超过50、不超过40或不超过25个氨基酸残基的差异。IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR优选具有100-160个氨基酸残基，更优选110-140个氨基酸残基。在一些实施方式中，TGFβR的氨基酸序列选自下组：对应于bintrafusp alfa的TGFβR的第1-136位的序列，对应于bintrafusp alfa的TGFβR的第20-136位的序列，和对应于bintrafusp alfa的TGFβR的第22-136位的序列。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR与bintrafusp alfa的TGFβR的氨基酸序列具有大于或等于98％的序列同一性，并且IgG：TGFβR融合蛋白的CH3结构域与bintrafuspalfa的CH3结构域的氨基酸序列具有大于或等于92％的序列同一性。优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR与bintrafusp alfa的TGFβR的氨基酸序列具有不多于25个氨基酸残基的差异，并且IgG：TGFβR融合蛋白的CH3结构域与bintrafusp alfa的CH3结构域的氨基酸序列具有不多于4个氨基酸残基的差异。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白在IgG与TGFβR之间包含接头，该接头优选包含5-50个氨基酸残基，10-30个氨基酸残基，或20-27个氨基酸残基。优选地，这种接头包含至多两种不同类型的氨基酸残基。优选地，接头包含甘氨酸氨基酸残基和/或丝氨酸氨基酸残基。优选地，这种接头由式(GlyxSer)yGly定义，其中x是1-6的整数，且y是2-7的整数。优选x是4。优选y是4或5。优选地，接头由式(GlyxSer)yGly定义，其中x为4，且y为4或5。
IgG：TGFβR融合蛋白优选地是IgG：TGFβR2融合蛋白，其包含在其N端融合至IgG抗体C端的TGFβR2，任选地通过接头。
优选地，IgG：TGFβR融合蛋白是WO2015/118175或WO2018/205985中公开的IgG：TGFβR融合蛋白之一。例如，IgG：TGFβR融合蛋白可以分别包含WO2015/118175的SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的轻链和重链。在另一个实施方式中，IgG：TGFβR融合蛋白是WO2018/205985的表2中列出的构建体之一，例如其构建体9或15。
优选地，IgG：TGFl3R融合蛋白的轻链序列和重链序列分别对应于(1)SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，(2)SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：NO：17，(3)SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18，或(4)SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。优选地，IgG：TGFβR融合蛋白的氨基酸序列与bintrafusp alfa的氨基酸序列等同。最优选地，IgG：TGFβR融合蛋白是bintrafusp alfa。
在一个具体实施方式中，IgG：TGFβR融合蛋白的特征在于：
·TGFβR，其与bintrafusp alfa的TGFβR的氨基酸序列具有大于或等于95％序列同一性；
·CH3结构域，其与bintrafusp alfa的CH3结构域的氨基酸序列具有大于或等于92％序列同一性；
·CH1结构域，其与bintrafusp alfa的CH1结构域的氨基酸序列具有大于或等于90％序列同一性；和
·CH2结构域，其与bintrafusp alfa的CH2结构域的氨基酸序列具有大于或等于90％序列同一性。
在一个具体实施方式中，IgG：TGFβR融合蛋白的特征在于：
·TGFβR，其与bintrafusp alfa的TGFβR的氨基酸序列具有不多于25个氨基酸残基的差异；
·CH3结构域，其与bintrafusp alfa的CH3结构域的氨基酸序列具有不多于4个氨基酸残基的差异；
·CH1结构域，其与bintrafusp alfa的CH1结构域的氨基酸序列具有不多于7个氨基酸残基的差异；和
·CH2结构域，其与bintrafusp alfa的CH2结构域的氨基酸序列具有不多于8个氨基酸残基的差异。
对于区域特异性的比较，例如关于bintrafusp alfa的CH1、CH2和/或CH3结构域(以及任选地还有TGF β R结构域)的氨基酸序列，可使用图1A或图1B中所示的具体序列向具体区域的分配。在一些实施方式中，出于区域特异性比较的目的，例如关于bintrafusp alfa的CH1、CH2和/或CH3结构域f以及任选地还有TGF βR结构域)的氨基酸序列，可使用图1B中所示的具体序列向具体区域的分配。
对于bintrafusp alfa的CH2结构域的氨基酸序列的区域特异性比较，可使用图1A或图1B中所示的分配给CH2结构域的序列。在一些实施方式中，对于bintrafusp alfa的CH2结构域的氨基酸序列的区域特异性比较，可使用图1B中所示的分配给CH2结构域的序列。
尽管图1A和图1B中示出了将具体序列分配给具体区域的情况，但可进行区域特异性比较，例如关于bintrafusp alfa的CH1、CH2和/或CH3结构域(以及任选地还有TGFβR结构域)的氨基酸序列，而不参考基于这些区域向抗体序列进行普通分配的这些附图中的任一者。
药物组合物优选以1-200mg/ml，5-150mg/mL，7-70mg/mL，5-15mg/mL，15-65mg/mL，15-30mg/mL，35-65mg/mL，35-45mg/mL，45-55mg/mL，55-65mg/mL，40-120mg/mL，75-115mg/mL或95-105mg/mL的量包含IgG：TGFβR融合蛋白(例如，具有bintrafusp alfa的序列的IgG：TGFβR或抗PD-L1(IgG)：TGFβR2)。在一些实施方式中，药物组合物包含约10mg/mL，约20mg/mL，约25mg/mL，约40mg/mL，约50mg/mL，约60mg/mL或约100mg/mL的抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白。
稀释剂
药物组合物优选包含稀释剂。所述组合物可以包含一种或多种药学上可接受的稀释剂，或其混合物。然而，最优选所述组合物是水性组合物。最优选地，稀释剂是水，并且优选地单独是水。水优选为注射用水(WFI)。
优选地，稀释剂可以构成任何组合物中的成分的平衡，例如使得所有成分的重量百分比总计为100％。优选地，本文给出的与组合物的任何组分相关的任何浓度表示所述组分在与任何其它组分混合(并且优选溶解在)的稀释剂中的浓度。
本发明的组合物优选为溶液并且优选(基本上或完全)不含微粒或沉淀物。
然而，在一个实施方式中，药物组合物不含水或包含至多10重量％的水，优选至多5重量％的水，优选至多2重量％的水，优选至多1重量％的水。这样的实施方式可以是固体药物组合物或冻干的药物组合物，例如，它们能够在使用、给予或(最好是短期)储存之前重建(优选通过添加水和/或其它相关稀释剂，例如，静脉输注液或盐水溶液)。此类冻干制剂可重建以提供本文公开的水性药物组合物(例如，具有以本文指定浓度存在或不存在的成分)。
缓冲体系
药物组合物优选包含缓冲体系。当将少量(强)酸或(强)碱添加到所述药物组合物中(或在其中产生，可能是由于药物组合物的一种或多种成分(最可能为其融合蛋白)降解的结果)时，缓冲体系优选作为对pH变化产生惰性的pH缓冲剂。因此，缓冲体系优选地随时间保持基本恒定的组合物pH，从而优选地减轻pH触发的降解途径。优选地，药物组合物具有足够缓冲能力以至于抵抗在2-8℃储存6个月期间大于或等于1个pH单位的pH变化，优选抵抗大于或等于0.5个pH单位的pH变化，最优选抵抗大于或等于0.2个pH单位的pH变化(同等储存条件下)。
优选地，组合物是缓冲溶液，其pH通过缓冲剂稳定，缓冲剂是弱酸或弱碱，联合缓冲剂的共轭酸或共轭碱，这取决于缓冲剂是否本身分别是碱或酸。总而言之，缓冲剂及其酸/碱共轭物可被认为是“缓冲体系”，尽管在存在多于一种缓冲体系的一些实施方式中，组合物可包含多种不同的缓冲剂和相应的酸/碱共轭物。因此，所述组合物优选包含“缓冲体系”(优选包含缓冲剂及其酸/碱共轭物)，并且关于缓冲体系规定的任何浓度通常涉及一种或多种缓冲剂及其任何一种或多种酸/碱共轭物的联合浓度。
药物组合物优选包含缓冲体系，该缓冲体系包含一种或多种缓冲体系。例如，缓冲体系可以是双缓冲体系(例如组氨酸-乙酸盐、磷酸盐-柠檬酸盐)。药物组合物最优选包含仅包含一种缓冲体系的缓冲体系。然而，药物组合物的特征可以在于不存在缓冲体系(或本文中关于缓冲体系具体述及的那些中的任何一种或多种)。例如，药物组合物可以在没有缓冲体系的情况下足够稳定，其中融合蛋白提供足够的自缓冲，这优选在更高浓度的融合蛋白的情况下发生。
在一些实施方式中，缓冲体系选自单质子缓冲体系(例如乙酸盐缓冲液)、多质子缓冲体系(例如磷酸盐缓冲液)和两性缓冲体系(例如氨基酸缓冲液，例如组氨酸)、无机缓冲体系(例如铵缓冲液、碳酸氢盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液)、有机缓冲体系(例如羧酸盐缓冲液、有机铵缓冲液、链烷醇铵缓冲液、两性离子缓冲液、氨基酸缓冲剂、芳族氮缓冲剂、糖缓冲剂)及其任意组合。
在其它实施方式中，缓冲体系选自单羧酸盐缓冲体系(例如乙酸盐缓冲液、甲酸盐缓冲液、乳酸缓冲液、水杨酸盐缓冲液、苯甲酸盐缓冲液)、二羧酸盐缓冲体系(例如琥珀酸盐缓冲液、马来酸盐缓冲液)、苹果酸缓冲液、富马酸缓冲液、酒石酸缓冲液、己二酸(adipate)缓冲液、己二酸(hexanedioate)缓冲液)、三羧酸缓冲体系(例如柠檬酸缓冲液)、两性离子缓冲体系(例如氨基酸缓冲液、两性离子磺酸盐缓冲液，例如N-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸(ACES)缓冲液、2-氨基乙磺酸(AES)缓冲液、N-(1，1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸(AMPSO))缓冲液、N，N-双-(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(BES)缓冲液、3-(环己基氨基)-丙磺酸(CAPS))、氨基酸缓冲体系(例如组氨酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、赖氨酸缓冲液、甘氨酰甘氨酸缓冲液、N-[Tris(羟甲基)-甲基]-甘氨酸(tricine)缓冲液、谷氨酸缓冲液、天冬氨酸缓冲液、N，
Figure BDA0003807020880000251
-双(2-羟乙基)-甘氨酸(Bicine)缓冲液、N-(2-乙酰氨基)-亚氨基二乙酸(ADA)缓冲液)、芳香氮缓冲体系(例如咪唑、吡啶缓冲液)和链烷醇铵缓冲体系(例如氨基甲基丙醇(AMP)缓冲液、氨基甲基丙二醇(AMPD)缓冲液、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)缓冲液、[双-(2-羟乙基)-亚氨基]-三-(羟甲基甲烷)(BIS-Tris)缓冲液，1，3-双[三(羟甲基)-甲氨基]丙烷(双三丙烷)缓冲液)。
合适地，缓冲体系是选自下组的缓冲体系：组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、葡糖酸盐缓冲液、Tris缓冲液、天冬氨酸缓冲液、谷氨酸缓冲液、酒石酸缓冲液、苹果酸缓冲液、马来酸缓冲液、富马酸缓冲液、组氨酸-乙酸缓冲液、磷酸-柠檬酸缓冲液及其任何组合。优选地，缓冲体系是选自下组的缓冲体系：组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液及其任何组合。更优选地，缓冲体系是包含选自下组的单一缓冲液的缓冲体系：组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液。
药物组合物可包含1-100mM缓冲体系、2-70mM缓冲体系、3-50mM缓冲体系、4-30mM缓冲体系、5-20mM缓冲体系、6-14mM缓冲体系、或优选地，约10mM缓冲体系。
药物组合物可以下述缓冲体系与融合蛋白的摩尔比包含缓冲体系：1280∶1至3∶1、370∶1至9∶1、260∶1至11∶1、100∶1至15∶1，或优选70∶1至20∶1。
最优选地，缓冲体系是或包含组氨酸缓冲体系。例如，缓冲体系是或包含5-60mM组氨酸缓冲体系、5-15mM组氨酸缓冲体系，或优选约10mM组氨酸缓冲体系。在其它实施方式中，所述组合物以下述组氨酸缓冲体系与融合蛋白的摩尔比包含组氨酸缓冲体系：1280∶1至3∶1或370∶1至9∶1。
优选地，缓冲体系是或包含磷酸盐缓冲体系。例如，缓冲体系是或包含5-60mM磷酸盐缓冲体系或5-15mM磷酸盐缓冲体系。在其它实施方式中，所述组合物以下述磷酸盐缓冲体系与融合蛋白的摩尔比包含磷酸盐缓冲体系：1280∶1至3∶1或370∶1至9∶1。
优选地，缓冲体系是或包括琥珀酸盐缓冲体系。例如，缓冲体系是或包含5-60mM琥珀酸盐缓冲体系或5-15mM琥珀酸盐缓冲体系。在其它实施方式中，所述组合物以下述琥珀酸盐缓冲体系与融合蛋白的摩尔比包含琥珀酸盐缓冲体系：1280∶1至3∶1或370∶1至9∶1。
优选地，缓冲体系是或包括柠檬酸盐缓冲体系。例如，缓冲体系是或包含5-60mM柠檬酸盐缓冲体系或5-15mM柠檬酸盐缓冲体系。在其它实施方式中，所述组合物以下述柠檬酸盐缓冲体系与融合蛋白的摩尔比包含柠檬酸盐缓冲体系：1280∶1至3∶1或370∶1至9∶1。
优选地，缓冲体系不包含乙酸盐缓冲液。
与缓冲体系有关的量和浓度涉及所有缓冲体系的总量和浓度，除非仅规定单个缓冲体系。所述或任何特定缓冲体系的浓度可以用摩尔比代替。
pH
药物组合物优选具有4-9的pH。尽管药物组合物中的融合蛋白和任何赋形剂在一定的pH值范围内可以耐受并保持相当稳定，但某些pH是特别有利的，尤其是在存在具体赋形剂或其组合的情况下。
在一些实施方式中，药物组合物的pH为4-8，pH为4.8-7.8，pH为5-7，pH为4.9-6.8，pH为4.5-6.0，pH为4.8-6.5，pH为5-5.4，pH为5.2-6.2，pH为5.3-6.3，pH为5.2-5.8，pH为5.6-5.8，pH为5.9-6.1，pH为5.2-6.2，pH为5.4-6.0，或优选地，pH为5.4-5.6或pH为5.8-6.0。在一些实施方式中，药物组合物的pH为约5.5或约5.9。
在IgG：TGFβR融合蛋白组合物的配制过程中遇到的挑战之一是IgG部分的pI(pI通常为约8-10、8.5-9.5或约9.1)与TGFβR部分(pI通常约为4.5-6、4.6-5.4或约4.9)的显著差异。通常希望在离开生物制剂的pI或生物制剂相关部分的pI大于1-2个单位的pH下配制生物制剂。优化其功能部分显示显著差异的pI的双功能生物制剂的pH尤其困难。在IgG：TGFβR融合蛋白的情况中，TGFβR部分在制剂考虑方面具有很大影响，并且可能不如IgG部分稳定。特别是，发现bintrafusp alfa的IgG部分对压力条件具有相当的耐受性，并且即使在液体/非冻干形式中也长期稳定。与此不同，当bintrafusp alfa的IgG部分与TGFβR部分融合时，发现该分子更容易沉淀且观察到制剂中的颗粒形成以及相分离，这表明TGFβR部分不如IgG部分稳定或至少与IgG部分一起起不稳定作用。这强化了IgG：TGFβR融合蛋白的组合物的pH应具有尤其远离TGFβR部分的pI的pH，例如，pH在3.9-5.9之外。然而，令人吃惊的是，发现具有接近于IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR部分的pI的pH的药物组合物是高度稳定的。
鉴于此，药物组合物优选具有在融合蛋白的TGFβR部分的pI的2个pH单位内，更优选在1个pH单位内的pH(即组合物的pH与TGFβR部分的pI之间的差异分别小于2个单位或1个单位)。药物组合物优选具有与融合蛋白的IgG部分的pI相差大于或等于2个pH单位或更优选大于或等于3个pH单位的pH。例如，所述组合物可以具有5.4-6.0的pH，其中TGFβR部分的pI为4.4-5.0并且IgG部分的pI为8.4-9.5。
尽管本发明涵盖使用或不使用本文定义的任何缓冲体系，只要pH如本文定义即可，组氨酸缓冲体系是最优选的缓冲体系，最优选pH为5.2-6.2。
表面活性剂
药物组合物优选包含表面活性剂。药物组合物优选包含至多一种表面活性剂。在本发明的上下文中，表面活性剂可抑制融合蛋白或其组成部分的一种或多种降解途径，例如，去折叠(和随之而来的聚集)、聚集，有时甚至是片段化。表面活性剂可以促进融合蛋白的溶解。然而，药物组合物的特征可以在于不存在表面活性剂(或本文中关于表面活性剂具体述及的那些中的任何一种或多种)。
优选地，所述表面活性剂为非离子表面活性剂，例如选自下组：脂肪醇、脂肪醇醚、脂肪酸酯、脂肪酸酰胺、聚氧化烯烷基醚、聚氧乙烯烷基醚、非离子嵌段共聚物、α-生育酚及其任意组合，或选自下组：山梨糖醇酐酯(Span)、乙氧基化山梨糖醇酐酯(聚山梨醇酯)和嵌段烷氧基化物。
在一些实施例中，表面活性剂是乙氧基化脂肪酸酯表面活性剂。在其它实施方式中，表面活性剂是选自下组的表面活性剂：一种或多种聚山梨醇酯、一种或多种泊洛沙姆和一种或多种kolliphor。优选地，它是kolliphor表面活性剂或聚山梨醇酯表面活性剂。优选地，kolliphor是kolliphor 188，而聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80表面活性剂。最优选地，表面活性剂是聚山梨醇酯20。
药物组合物优选包含0.01-2mg/mL表面活性剂、0.05-1.5mg/mL表面活性剂、0.1-0.6mg/mL表面活性剂、0.25-0.75mg/mL表面活性剂、0.4-0.6mg/mL表面活性剂、0.4-1.2mg/mL表面活性剂或0.8-1.1mg/mL表面活性剂。
药物组合物优选包含表面活性剂，其表面活性剂与融合蛋白的摩尔比为30∶1至1∶70、12∶1至1∶3、17∶1至1∶1、5∶1至1∶2，或7∶1至1∶1。
药物组合物优选包含0.01-2mg/mL聚山梨醇酯20，0.05-1.5mg/mL聚山梨醇酯20，0.05-0.3mg/mL聚山梨醇酯20，0.05-0.15mg/mL聚山梨醇酯20，0.1-0.7mg/mL聚山梨醇酯20，0.3-0.7mg/mL聚山梨醇酯20，0.4-0.6mg/mL聚山梨醇酯20，0.4-1.3mg/mL聚山梨醇酯20，0.8-1.2mg/mL聚山梨醇酯20，0.9-1.1mg/mL聚山梨醇酯20，或最优选约0.5mg/mL聚山梨醇酯20。
药物组合物优选包含聚山梨醇酯20，聚山梨醇酯20与融合蛋白的摩尔比为30∶1至1∶70、12∶1至1∶3、17∶1至1∶1，5∶1至1∶2，或7∶1至1∶1。
与表面活性剂有关的量和浓度涉及所有表面活性剂的总量和浓度，除非仅规定单一表面活性剂。所述或任何具体表面活性剂的浓度可以用摩尔比代替。
糖组分
药物组合物优选包含糖组分，例如冻干保护剂糖组分。在本发明的上下文中，糖组分可在药物组合物中发挥一种或多种功能。例如，它们可以在冻干过程中用作冻干保护剂。例如，糖组分可以提供张力以使重量渗透摩尔浓度在所需范围内(例如，对于未经事先稀释的注射制剂的等渗张性——例如200-400mOsmol/L，更优选250-350mOsmol/L，最优选270-310mOsmol/L的重量渗透摩尔浓度)。在不太期望高离子强度的情况下，使用糖组分来促进张力可能尤其有用，尽管通常本发明的组合物倾向于对更高浓度的融合蛋白有利的更高离子强度。糖组分能促进融合蛋白和/或其它赋形剂在药物组合物中的溶解度。糖组分可以对药物组合物的融合蛋白给予稳定作用，例如，改善构象稳定性(例如减少可增加最终聚集可能性的蛋白质去折叠事件)、减少聚集和/或减少片段化。然而，在一些实施方式中，药物组合物的特征在于不存在糖组分(或本文关于糖组分具体述及的那些中的任何一种或多种)。
优选地，糖是非离子的和/或不含可离子化的基团。
在一些实施方式中，糖组分是非还原糖组分。糖组分还可包含一种或多种糖和/或糖醇。在一些实施方式中，糖组分包含一种或多种糖或一种或多种糖醇。优选地，糖组分由单一化合物组成。在其它实施方式中，糖组分包含至多一种糖或至多一种糖醇。
优选地，糖组分选自下组：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，更优选地选自海藻糖或蔗糖。
在一些实施方式中，糖组分是糖，其可选自下组：单糖、二糖、多糖和复合碳水化合物。优选地，糖组分是二糖，例如非还原性二糖。更优选地，糖组分是选自海藻糖或蔗糖的二糖。优选地，糖组分是蔗糖。优选地，糖组分是海藻糖。
在一些实施方式中，糖组分是糖醇，例如(3-12C)糖醇、(3-6C)糖醇或(5-6C)糖醇，其选自甘露糖醇、山梨糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇和肌醇。在一些实施方式中，糖组分是选自甘露糖醇或山梨糖醇的糖醇。
药物组合物优选包含30-400mM糖组分，40-300mM糖组分，40-100mM糖组分，40-60mM糖组分，90-290mM糖组分，100-200mM糖组分，130-170mM糖组分，200-300mM糖组分，230-270mM糖组分，约159mM糖组分，约100mM糖组分或约50mM糖组分。
药物组合物优选以下述糖组分与融合蛋白的摩尔比包含糖组分：7300∶1至50∶1，3700∶1至70∶1，1000∶1至100∶1，1000∶1至500∶1，500∶1至180∶1，2900∶1至2700∶1，800∶1至600∶1，500∶1至300∶1，或300∶1至100∶1。
药物组合物优选包含40-300mM海藻糖，40-100mM海藻糖，40-60mM海藻糖，65-85mM海藻糖，70-130mM海藻糖，90-110mM海藻糖，100-200mM海藻糖，140-180mM海藻糖，或150-170mM海藻糖。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约50mM，约75mM，约100mM或约159mM的海藻糖。药物组合物优选以下述海藻糖与融合蛋白的摩尔比包含海藻糖：7300∶1至50∶1，3700∶1至70∶1，1000∶1至100∶1，1000∶1至500∶1，或500∶1至180∶1。最优选地，药物组合物包含海藻糖作为唯一的糖组分，最优选浓度为40-200mM。
药物组合物优选包含50-300mM蔗糖、150-290mM蔗糖、220-280mM蔗糖或240-260mM蔗糖。
药物组合物优选包含40-300mM甘露醇，40-100mM甘露醇，40-60mM甘露醇，80-120mM甘露醇，100-200mM甘露醇，210-290mM甘露醇，或240-260mM甘露醇。
药物组合物优选包含40-300mM山梨糖醇，40-100mM山梨糖醇，40-60mM山梨糖醇，80-120mM山梨糖醇，100-200mM山梨糖醇，210-290mM山梨糖醇，或240-260mM山梨糖醇。
与糖组分有关的量和浓度涉及所有糖组分的总量和浓度，除非仅规定单一糖组分。所述或任何具体糖组分的浓度可以用摩尔比代替。
氨基酸组分
药物组合物优选包含氨基酸组分。氨基酸可用于调节药物组合物的重量渗透摩尔浓度，例如，使重量渗透摩尔浓度在优选范围内(例如，对于未经事先稀释的注射制剂的等张性——例如200-400mOsmol/L，更多优选250-350mOsmol/L，最优选270-310mOsmol/L的重量渗透摩尔浓度)。氨基酸还可以促进融合蛋白和/或其它赋形剂在药物组合物中的溶解度。氨基酸还可向药物组合物的融合蛋白提供稳定作用，例如，提高构象稳定性(例如减少可增加最终聚集可能性的蛋白质去折叠事件)、减少聚集和/或减少片段化。一种或多种氨基酸(例如如精氨酸)或其任何盐(例如盐酸精氨酸)可以替代一些或全部的张力调节剂(例如NaCl)和/或一些或全部的糖组分(例如海藻糖)。优选地，药物组合物还包含除组氨酸以外的氨基酸组分，其中组氨酸用作缓冲体系或其部分，和/或其中甲硫氨酸用作抗氧化剂组分或其部分。
然而，药物组合物的特征可以是不存在氨基酸组分(或本文中关于氨基酸组分具体述及的那些中的任何一种或多种)，优选以组氨酸作为任选的例外，其中组氨酸用作缓冲体系或其部分，或者以甲硫氨酸作为任选的例外，其中甲硫氨酸用作抗氧化剂组分或其部分，优选以组氨酸和甲硫氨酸作为任选的例外，其中它们分别用作缓冲体系或其部分和用作抗氧化剂组分或其部分。
优选地，氨基酸组分包含一种或多种氨基酸，特别是不同于组氨酸的一种或多种氨基酸(其中组氨酸包括在内)，例如作为缓冲体系或其部分，和/或不同于甲硫氨酸的一种或多种氨基酸(其中甲硫氨酸包括在内)，例如作为抗氧化剂组分或其部分。优选地，氨基酸组分包含至多一种氨基酸或不同于组氨酸的至多一种氨基酸(其中组氨酸包括在内)，例如，作为缓冲体系或其部分，和/或不同于甲硫氨酸的至多一种氨基酸(其中甲硫氨酸包括在内)，例如，作为抗氧化剂组分或其部分。优选地，氨基酸组分包含单种氨基酸，或不同于组氨酸的单种氨基酸(其中组氨酸包括在内)，例如作为缓冲体系或其部分，和/或不同于甲硫氨酸的单种氨基酸(其中甲硫氨酸包括在内)，例如作为或抗氧化剂组分或其部分。优选地，氨基酸组分包含L-氨基酸。优选构成氨基酸组分的氨基酸是L-氨基酸。
氨基酸组分或其中的任何氨基酸可以是其药学上可接受的盐。例如，在精氨酸的情况下，精氨酸实际上可以以精氨酸一盐酸盐的形式提供。
优选地，氨基酸组分包含选自下组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸及其任意组合。优选地，氨基酸组分包含选自下组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸及其任意组合。
优选地，氨基酸组分包含精氨酸。
优选地，氨基酸组分包含赖氨酸。
优选地，氨基酸组分包含脯氨酸。
优选地，氨基酸组分包括谷氨酸。
氨基酸优选地是带电荷的氨基酸(即，氨基酸带有净正电荷或负电荷)。优选地，氨基酸组分包含氨基酸盐(例如，精氨酸盐酸盐)。
药物组合物优选包含10-300mM氨基酸组分、20-260mM氨基酸组分、30-110mM氨基酸组分、30-60mM氨基酸组分、35-95mM氨基酸组分、40-170mM氨基酸组分、50-200mM氨基酸组分、60-140mM氨基酸组分、110-190mM氨基酸组分、140-180mM氨基酸组分或约50mM氨基酸组分。
药物组合物优选以下述氨基酸组分与融合蛋白的摩尔比包含氨基酸组分：5500∶1至18∶1、2000∶1至54∶1、3500∶1至200∶1、500∶1至100∶1，或900∶1至400∶1。
药物组合物优选包含20-300mM精氨酸、30-60mM精氨酸、30-50mM精氨酸、40-60mM精氨酸、60-80mM精氨酸、35-95mM精氨酸、80-120mM精氨酸、100-140mM精氨酸、120-180mM精氨酸、150-170mM精氨酸、200-300mM精氨酸，或优选约50mM精氨酸或约75mM精氨酸。药物组合物优选以下述精氨酸与融合蛋白的摩尔比包含精氨酸：5500∶1至18∶1、2000∶1至54∶1、3500∶1至200∶1、500∶1至100∶1，或900∶1至400∶1。
药物组合物优选包含20-200mM赖氨酸、30-150mM赖氨酸、30-80mM赖氨酸、40-60mM赖氨酸、60-90mM赖氨酸、70-130mM赖氨酸或90-110mM赖氨酸。
药物组合物优选包含20-200mM脯氨酸、30-150mM脯氨酸、30-80mM脯氨酸、40-60mM脯氨酸、60-90mM脯氨酸、70-130mM脯氨酸或90-110mM脯氨酸。
药物组合物优选包含20-200mM谷氨酸、30-150mM谷氨酸、30-80mM谷氨酸、40-60mM谷氨酸、60-90mM谷氨酸、70-130mM谷氨酸或90-110mM谷氨酸。
与氨基酸组分有关的量和浓度涉及所有氨基酸组分的总量和浓度，除非仅规定单一氨基酸组分。所述或任何具体氨基酸组分的浓度可以用摩尔比代替。
离子强度
本发明的药物组合物优选具有非零离子强度。认为离子强度促进融合蛋白的溶解性，特别是其TGFβR部分。一定程度的离子强度可以减少片段化。一定程度的离子强度可以减少聚集。
离子强度可以优选地定义为“摩尔离子强度(I)”，其是存在于给定组合物(其优选为溶液，优选水溶液)内的所有离子浓度的函数。摩尔离子强度(I)可由以下等式定义：
Figure BDA0003807020880000321
其中ci是离子i的摩尔浓度(mol/L)，zi是离子i的电荷数。1/2乘数说明了对所有离子进行求和的事实，因此包括极性、阴离子和阳离子。
举例而言，如果NaCl是对组合物的离子强度有贡献的唯一电解质，则离子强度等于NaCl的浓度(即100mM NaCl＝100mM离子强度)，因为各NaCl的阳离子和阴离子是单荷电的——因此对于60mM NaCl溶液，离子强度如下：
Figure BDA0003807020880000322
如果盐(例如MgSO4)是对组合物的离子强度有贡献的唯一电解质，则离子强度是氯化钠等效摩尔浓度的四倍，因为阳离子和阴离子中的各者都是双荷电的——因此对于60mM MgSO4溶液，离子强度如下：
Figure BDA0003807020880000323
因此，多价离子比单价离子贡献相对更多的离子强度。
氨基酸盐(例如精氨酸一盐酸盐)也可有助于离子强度。缓冲剂(或其离子缓冲物质——例如共轭酸和/或共轭碱)也可能有助于离子强度。
组合物的离子强度合适地等于来自张力调节剂和(如果存在)缓冲体系的离子贡献的总和(由上述方程定义)。组合物的离子强度可以等于本文定义的与张力调节剂有关的任何浓度加上任何缓冲体系的摩尔浓度。
在一些实施方式中，本发明的组合物可以以非缓冲(或基于张力调节剂的)离子强度为特征。在这种情况下，组合物的非缓冲(或基于张力调节剂的)离子强度优选等于本文定义的与张力调节剂有关的任何浓度。此外，在这种情况下，非缓冲(或基于张力调节剂的)离子强度与融合蛋白的摩尔浓度之比优选与本文定义的张力调节剂与融合蛋白的任何摩尔比相同。
药物组合物的离子强度优选为5-250mM、10-200mM、20-170mM、20-80mM、20-60mM、30-50mM、30-130mM、80-150mM、90-100mM、100-170mM、110-130mM、150-170mM、130-170mM、约40mM、约60mM或约100mM。
药物组合物优选以下述离子强度与融合蛋白的摩尔比具有离子强度：3700∶1至15∶1，1000∶1至70∶1，910∶1至200∶1，910∶1至540∶1，320∶1至220∶1，410∶1至320∶1，520∶1至390∶1，700∶1至450∶1，680∶1至720∶1，460∶1至420∶1，或290∶1至250∶1。
离子强度优选至少部分或全部由氯化钠提供。离子强度优选至少部分或全部由氯化钠和精氨酸(或其盐)提供。离子强度优选至少部分或全部由氯化钠和/或氨基酸盐(例如精氨酸或精氨酸盐)提供。
张力调节剂
药物组合物优选包含张力调节剂，例如非缓冲张力调节剂(即不提供pH缓冲作用的张力调节剂，不像缓冲盐，其本身可能在一定程度上有助于总体张力)。在本发明的上下文中，张力调节剂可用于调节药物组合物的重量渗透摩尔浓度，例如，使重量渗透摩尔浓度在优选范围内(例如，对于未经预先稀释的注射制剂的等张性——例如200-400mOsmol/L，更优选250-350mOsmol/L，最优选270-310mOsmol/L的重量渗透摩尔浓度)。类似地，张力调节剂，尤其是离子张力调节剂(例如盐张力调节剂)可用于提供离子强度。张力调节剂还可以促进融合蛋白和/或其它赋形剂在药物组合物中的溶解度。张力调节剂还可以对药物组合物的融合蛋白提供稳定作用，例如，改善构象稳定性(例如减少可增加最终聚集可能性的蛋白质去折叠事件)、减少聚集和/或减少片段化。
然而，在一些实施方式中，药物组合物的特征在于不存在(非缓冲)张力调节剂(或本文中关于张力调节剂具体述及的那些中的任何一种或多种)。或者，一些张力调节剂，尤其是非缓冲盐张力调节剂(例如NaCl)，可以被一些氨基酸组分和/或一些糖组分替代，尤其是在所述组分提供它们自身的张力调节作用的情况下。
张力调节剂可以是或包含张力调节性冻干保护剂。张力调节性冻干保护剂是提供组合物张力调节作用同时还例如在冻干期间(特别是其干燥阶段)作为冻干保护剂的一种或多种化合物。冻干保护作用在本领域中是众所周知的，例如，可以包括在冻干的干燥阶段稳定活性成分和/或稳定冻干饼(例如防止其在干燥时塌陷)的化合物。张力调节性冻干保护剂可包含糖或糖多元醇或由其组成，例如本文关于“糖组分”定义的糖或糖多元醇。张力调节性冻干保护剂可包含氨基酸或由其组成，例如本文定义的“氨基酸组分”。海藻糖是张力调节性冻干保护剂的一个例子。精氨酸也可以作为冻干保护剂。组合物含有海藻糖和精氨酸的组合可能是有利的。
优选地，所述张力调节剂包括选自下组的张力调节剂：盐张力调节剂、金属盐张力调节剂、非缓冲盐张力调节剂、金属卤化物盐张力调节剂、碱金属或碱土金属卤化物盐张力调节剂、碱金属卤化物盐张力剂，以及选自氯化钠或氯化钾的碱金属卤化物盐张力调节剂，优选氯化钠，及其任意组合。
优选地，所述张力调节剂是离子张力调节剂并且因此直接有助于所述组合物的离子强度。优选地，张力调节剂是非缓冲离子张力调节剂。
药物组合物优选包含5-250mM张力调节剂、10-200mM张力调节剂、20-170mM张力调节剂、20-80mM张力调节剂、20-60mM张力调节剂、50-70mM张力调节剂、30-50mM张力调节剂、30-130mM张力调节剂，80-150mM张力调节剂，90-110mM张力调节剂，90-100mM张力调节剂，100-170mM张力调节剂，110-130mM张力调节剂，150-170mM张力调节剂，130-170mM张力调节剂，约40mM张力调节剂，约60mM张力调节剂，或约100mM张力调节剂。
药物组合物优选以下述张力调节剂与融合蛋白的摩尔比包含张力调节剂：3700∶1至15∶1，1000∶1至70∶1，910∶1至200∶1，910∶1至540∶1，320∶1至220∶1，410∶1至320∶1，520∶1至390∶1，700∶1至450∶1，680∶1至720∶1，460∶1至420∶1，或290∶1至250∶1。
药物组合物优选包含5-250mM氯化钠，10-200mM氯化钠，20-170mM氯化钠，30-90mM氯化钠，20-60mM氯化钠，30-50mM氯化钠，50-70mM氯化钠，35-45mM氯化钠，30-130mM氯化钠，80-150mM氯化钠，90-110mM氯化钠，100-200mM氯化钠，110-130mM氯化钠，150-170mM氯化钠，130-170mM氯化钠，约40mM氯化钠，约60mM氯化钠，或约100mM氯化钠。
药物组合物优选以下述氯化钠与融合蛋白的摩尔比包含氯化钠：3700∶1至15∶1，1000∶1至70∶1，910∶1至200∶1，910∶1至540∶1，600∶1至250∶1，320∶1至220∶1，410∶1至320∶1，520∶1至390∶1，700∶1至450∶1，680∶1至720∶1，460∶1至420∶1，或290∶1至250∶1。
与张力调节剂有关的量和浓度涉及所有张力调节剂的总量和浓度，除非仅规定单一张力调节剂。所述或任何具体张力调节剂的浓度可以用摩尔比代替。
通常，在本发明的制剂的上下文中，除了缓冲体系之外，用于提供离子强度的唯一可行的组分是一种或多种张力调节剂，例如氯化钠和/或带电荷的氨基酸(例如精氨酸，或精氨酸盐酸盐，或其它氨基酸盐)。作为张力调节剂的NaCl被认为是一种尤其有利的成分，因为它通常有助于融合蛋白在水性介质中的溶解性，尽管它也可能参与电荷遮蔽，尤其是融合蛋白受体部分的某些基团的电荷遮蔽。实验经常证明，随着融合蛋白浓度的增加，制剂通常受益于更高浓度的NaCl。例如，5-15mg/mL融合蛋白可能受益于30-50mM NaCl；35-55mg/mL融合蛋白可能受益于50-70mM NaCl；50-70mg/mL融合蛋白可能受益于130-170mMNaCl。
抗氧化剂
药物组合物优选包含抗氧化剂。抗氧化剂可以抑制对融合蛋白和/或药物组合物中的其它成分开放的氧化降解途径。例如，抗氧化剂可以抑制融合蛋白的氧化，例如通过抑制融合蛋白内某些可氧化氨基酸残基的氧化，和/或抑制氧化脱氨途径。
然而，在一些实施方式中，药物组合物的特征在于不存在抗氧化剂(或本文中关于抗氧化剂具体述及的那些中的任何一种或多种)。
优选地，抗氧化剂包括选自下组：氨基酸或肽抗氧化剂、矿物质抗氧化剂、维生素抗氧化剂、类胡萝卜素抗氧化剂、多酚抗氧化剂、芳香族或酚类抗氧化剂、螯合剂抗氧化剂、硫醇抗氧化剂及其任何组合。
优选地，抗氧化剂包括由单一化合物组成的抗氧化剂。
优选地，所述抗氧化剂包括氨基酸抗氧化剂，例如选自下组的氨基酸抗氧化剂：甲硫氨酸、N-乙酰基-1-半胱氨酸、半胱氨酸和谷胱甘肽。
最优选地，抗氧化剂是甲硫氨酸。
药物组合物优选包含0.1-50mM抗氧化剂、1-30mM抗氧化剂、2-20mM抗氧化剂、3-10mM抗氧化剂或4-6mM抗氧化剂。
药物组合物优选以下述抗氧化剂与融合蛋白的摩尔比包含抗氧化剂：910∶1至1∶6、365∶1至3∶1、182∶1至5∶1、100∶1至7∶1，或50∶1至10∶1。
药物组合物优选包含1-30mM甲硫氨酸、2-20mM甲硫氨酸、3-12mM甲硫氨酸、4-6mM甲硫氨酸或约5mM甲硫氨酸。
药物组合物优选以下述甲硫氨酸与融合蛋白的摩尔比包含甲硫氨酸：910∶1至1∶6、365∶1至3∶1、182∶1至5∶1、或100∶1至7∶1，或50∶1至10∶1。
与抗氧化剂有关的量和浓度涉及所有抗氧化剂的总量和浓度，除非仅规定单一抗氧化剂。所述或任何具体抗氧化剂的浓度可以用摩尔比代替。
螯合剂
药物组合物还可包含螯合剂。在本发明的上下文中，螯合剂如EDTA(其它螯合剂，在本领域中是众所周知的并且可以起到相似或相同的功能)可增加药物组合物的稳定性，特别是抑制融合蛋白的降解。例如，螯合剂可以降低聚集的可能性，也可以作为抗氧化剂。螯合剂还能螯合残留金属，否则这些残留金属会促进融合蛋白和/或药物组合物中存在的其它成分的降解。
然而，在一些实施方式中，药物组合物的特征在于不存在螯合剂(或本文中关于螯合剂具体述及的那些中的任何一种或多种)。
优选地，螯合剂包括EDTA或EGTA，更优选地，螯合剂包括EDTA。
药物组合物优选包含0.001-0.5mM螯合剂、0.01-0.2mM螯合剂或0.025-0.075mM螯合剂。药物组合物优选以下述螯合剂与融合蛋白的摩尔比包含螯合剂：10∶1至1∶550、4∶1至1∶55或1.5∶1至1∶22。
药物组合物优选包含0.001-0.5mM EDTA、0.01-0.2mM EDTA或0.025-0.075mMEDTA。药物组合物优选以下述EDTA与融合蛋白的摩尔比包含EDTA：10∶1至1∶550、4∶1至1∶55或1.5∶1至1∶22。
与螯合剂有关的量和浓度涉及所有螯合剂的总量和浓度，除非仅规定单一螯合剂。所述或任何具体螯合剂的浓度可以用摩尔比代替。
重量渗透摩尔浓度
通常，药物组合物的重量渗透摩尔浓度不太重要，它由稳定制剂所需的渗透剂的量决定。在希望药物制剂于没有预先稀释的情况下用于注射的情况下，例如皮下注射，所述制剂优选地是基本上等张的以避免皮肤刺激。在一些实施方式中，为了提供具有所需重量渗透摩尔浓度的组合物，融合蛋白的浓度可以与张力调节剂(例如NaCl)、氨基酸组分(例如精氨酸/精氨酸盐酸盐)、糖组分(例如海藻糖)的浓度仔细平衡。在一些实施方式中，药物制剂优选具有240-640mOsm/kg、200-400mOsm/kg、250-420mOsm/kg、250-350mOsm/kg、255-345mOsm/kg或270-310mOsm/kg的重量渗透压浓度。
具体实施方式
本文呈现的实施例和数据表明某些技术效果可能来自某些特征或特征的组合，根据这些特征或特征组合将在下文讨论各种具体实施方式。
pH
实验结果表明，具有在融合蛋白的TGFβR2部分的pI的2个pH单位内、合适地在1.5个pH单位内、并且合适地甚至在1个pH单位内的pH的液体组合物出人意料地稳定。优选地，pH大于或等于pH4，更优选地大于或等于pH5。然而，高pH会导致蛋白质稳定性和蛋白质溶解度问题，因此，液体组合物优选具有小于或等于pH7，更优选小于或等于pH6.3的pH。特别优选的pH范围是pH 5.3-6.3。
以下编号的段落E1至E12公开了本发明的具体实施方式。
E1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH在融合蛋白的TGFβR部分的pI的2个pH单位内。
E2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH在融合蛋白的TGFβR部分的pI的1.5个pH单位内。
E3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH在融合蛋白的TGFβR部分的pI的1个pH单位内。
E4.一种药物组合物，包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为4-7。
E5.一种药物组合物，包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为5.2-6.1。
E6.如E1至E5中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
E7.如E1至E6中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
E8.如E1至E7中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
E9.如E1至E8中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
E10.如E1至E9中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
E11.如E1至E10中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
E12.如E1至E11中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
水性制剂和离子强度
制剂研究揭示了关于IgG：TGFβR融合蛋白的特定水溶性挑战，不希望受理论束缚，认为其源于抗体部分的pI和融合的TGFβR部分的pI之间的显著差异。令人吃惊的是，离子强度对融合蛋白的水溶性有显著影响。离子强度似乎也在蛋白质稳定方面起作用。
在制剂研究的早期阶段，从长期储存稳定性的角度来看，认为冻干制剂是唯一可行的制剂选择，如下所述，这些似乎施加了某些限制。然而，随着研究的进展，也发现液体制剂是不可行的，但出于实际原因，其通常是优选的(例如，它避免了能量密集的冻干和医护人员手动重建)。
如上文关于“离子强度”部分所述，组合物的特征在于离子强度，其合适地包括来自组合物中所有离子种类的贡献。然而，在一些实施方式中，组合物的特征可以在于非缓冲(或基于张力剂的)离子强度，在这种情况下，离子强度合适地包括来自除缓冲体系的那些之外的所有离子种类的贡献。由于缓冲体系可以以相对低的浓度使用，因此以下实施方式可以适用于离子强度的任一定义。
优选地，组合物的离子强度为至少20mM，而在意在用于皮下使用而无需事先稀释的药物组合物的情况下，其最大值优选地由重量渗透摩尔浓度要求控制以避免任何过度的高张性。在一个优选实施方式中，最大离子强度为200mM，更优选160mM。
虽然离子强度可以由多种带电或离子赋形剂提供，但离子强度合适地由一种或多种离子张力调节剂提供，例如氯化钠和/或带电氨基酸(例如精氨酸或精氨酸盐)，其中氯化钠是最优选的。
氯化钠可以是离子强度的唯一非缓冲贡献者。在一些实施方式中，药物组合物包含氨基酸组分，其与张力调节剂(例如，NaCl)分开定义，并且可以例如包括带电或离子化合物，例如精氨酸或精氨酸盐。在这种情况下，应理解氨基酸组分有助于整体离子强度和实际上的张力。
以下编号的段落F1至F12公开了本发明的特定实施方式。
F1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白并且其特征在于离子强度(任选地非缓冲离子强度)大于或等于20mM。
F2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于离子强度(任选地非缓冲离子强度)大于或等于20mM和255-345mOsm/kg的重量渗透摩尔浓度。
F3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于20至200mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
F4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的离子张力调节剂。
F5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的氯化钠。
F6.如F1至F5中任一项所述的药物组合物，其特征还在于如E1至E5中任一项所定义的pH。
F7.如F1至F6中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
F8.如F1至F7中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
F9.如F1至F8中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
F10.如F1至F9中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
F11.如F1至F10中任一项的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
F12.如F1至F11中任一项的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
冻干和离子强度
早期研究集中在冻干制剂上，从长期储存的角度来看，其当时被视为最可行的选择。因此，在溶解度和等张性(液体形式)、稳定性(冻干和重建的液体形式)和冻干性之间寻求平衡。根据上述“水性制剂和离子强度”部分，离子强度，特别是当以氯化钠形式提供给组合物时，有助于满足张力、稳定性和溶解度要求。然而，研究发现使用过多的氯化钠会影响冻干并导致冻干饼体塌陷。虽然加入冻干保护剂，如海藻糖，可以在一定程度上减轻这种情况，但就满足冻干制剂的上述各目标而言似乎存在氯化钠的最大可耐受量。由于如下文将要讨论的，较高的蛋白质浓度通常需要较高浓度的氯化钠的支持，因此对氯化钠量的这种限制也潜在地限制了融合蛋白的浓度。
以下编号的段落G1至G21公开了本发明的特定实施方式。
G1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，并且其特征在于20至50mM之间的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
G2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于20-50mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)和255-345mOsm/kg的重量渗透摩尔浓度。
G3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和20至50mM的离子张力调节剂。
G4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和20至50mM氯化钠。
G5.如G1至G4中任一项所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂(或氯化钠)的浓度为35-45mM。
G6.G1至G4中任一项所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂(或氯化钠)的浓度为约40mM。
G7.如G1至G6任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白的浓度为5-25mM。
G8.如G1至G7中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白的浓度为约10mM。
G9.一种药物组合物，其以下述离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和离子张力调节剂：180∶1至9110∶1。
G10.一种药物组合物，其以下述离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和离子张力调节剂：360∶1至911∶1。
G11.一种药物组合物，其以下述氯化钠与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和氯化钠：180∶1至9110∶1。
G12.一种药物组合物，其以下述氯化钠与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和氯化钠：360∶1至911∶1。
G13.如G1至G12中任一项所述的药物组合物，其特征还在于如E1至E5中任一项所定义的pH。
G14.如G1至G13中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
G15.如G1至G14中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
G16.如G1至G15中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
G17.如G1至G16中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
G18.如G1至G17中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
G19.如G1至G18中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
G20.如G1至G19中任一项所述的药物组合物，其为重建的冻干药物组合物。
G21.如G1至G19中任一项所述的药物组合物，其为适合重建的固体冻干药物组合物。
张力调节性冻干保护剂
在冻干制剂的情况下，发现加入张力调节性冻干保护剂有助于在溶解度和等张性(液体形式)、稳定性(冻干和重建的液体形式)和冻干性之间取得合理的平衡。张力调节性冻干保护剂可以在不损害冻干性的情况下提供张力，这与离子强度提供剂(例如氯化钠)会损坏冻干饼体不同，因此允许使用最少但足够高量的离子强度提供剂(例如NaCl)以促进蛋白质的溶解度和稳定性。在许多情况下，使用张力调节性冻干保护剂可以至少在一定程度上抵消离子张力调节剂(例如NaCl)对冻干的负面影响。
合适的张力调节性冻干保护剂包括糖组分和/或氨基酸组分，例如海藻糖和/或精氨酸，但更优选糖组分(优选单一糖组分)。优选的糖组分在本文中描述，尽管最合适的糖组分是海藻糖。
以下编号的段落H1至H34公开了本发明的具体实施方式。
H1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如上定义的糖组分和/或氨基酸组分)和离子张力调节剂。
H2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如，如上定义的糖组分和/或氨基酸组分)和离子张力调节剂，且张力调节性冻干保护剂与离子张力调节剂的摩尔比为10∶1至1∶2。
H3.一种药物组合物，其以下述海藻糖与氯化钠的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和氯化钠：10∶1至1∶2。
H4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如，如上定义的糖组分和/或氨基酸组分)和20至50mM的离子张力调节剂。
H5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如糖组分和/或氨基酸组分)和20至50mM氯化钠。
H6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和20至50mM的离子张力调节剂。
H7.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和20至50mM氯化钠。
H8.如H1至H7中任一项所述的药物组合物，其中所述张力调节性冻干保护剂以100-200mM，优选130-170mM的浓度存在。
H9.如H1至H8中任一项的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白的浓度为5-25mM。
H10.如H1至H9中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白的浓度为约10mM。
H11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如糖组分和/或氨基酸组分)和离子张力调节剂，且离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比为180∶1至9110∶1。
H12.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如糖组分和/或氨基酸组分)和离子张力调节剂，且离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比为360∶1至911∶1。
H13.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如糖组分和/或氨基酸组分)和氯化钠，且氯化钠与融合蛋白的摩尔比为180∶1至9110∶1。
H14.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、张力调节性冻干保护剂(例如糖组分和/或氨基酸组分)和氯化钠，且氯化钠与融合蛋白的摩尔比为360∶1至911∶1。
H15.一种药物组合物，其以下述离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和离子张力调节剂：180∶1至9110∶1。
H16.一种药物组合物，其以下述离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和离子张力调节剂：360∶1至911∶1。
H17.一种药物组合物，其以下述氯化钠与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和氯化钠：180∶1至9110∶1。
H18.一种药物组合物，其以下述氯化钠与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和氯化钠：360∶1至911∶1。
H19.如H1至H18中任一项所述的药物组合物，其中所述张力调节性冻干保护剂选自下组：海藻糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、精氨酸及其任意组合。
H20.如H1至H19中任一项的药物组合物，其中张力调节性冻干保护剂是海藻糖和精氨酸的组合。
H21.如H1至H20中任一项所述的药物组合物，其中张力调节性冻干保护剂仅为海藻糖。
H22.如H1至H21中任一项所述的药物组合物，其中张力调节性冻干保护剂与离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比为910-36430∶180-9110∶1。
H23.H1至H22中任一项的药物组合物，其中张力调节性冻干保护剂与离子张力调节剂与融合蛋白的摩尔比为1820-3643∶360-911∶1。
H24.如H1至H23中任一项所述的药物组合物，其中海藻糖与氯化钠与融合蛋白的摩尔比为1820-3643∶360-911∶1。
H25.如H1至H24中任一项所述的药物组合物，其进一步特征在于如E1至E5中任一项所定义的pH。
H26.如H1至H25中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
H27.如H1至H26中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
H28.如H1至H27中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
H29.如H1至H28中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
H30.如H1至H29中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
H31.如H1至H30中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
H32.如H1至H31中任一项所述的药物组合物，其是重建的冻干药物组合物。
H33.如H1至H31中任一项所述的药物组合物，其是适合重建的固体冻干药物组合物。
H34.如H1至H33中任一项所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂是非缓冲离子张力调节剂。
pH和离子强度
如前所述，离子强度(特别是当由NaCl提供时)可以提高融合蛋白在所有pH下的溶解度，但是这种效果在较高pH下特别显著。
以下编号的段落I1至I14公开了本发明的具体实施方式。
I1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的离子性张力调节剂，且其特征在于pH为5-7。
I2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的氯化钠，且其特征在于pH为5-7。
I3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的离子性张力调节剂，且其特征在于pH为5.4-6.4。
I4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的氯化钠，且其特征在于pH为5.4-6.4。
I5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的离子性张力调节剂，且其特征在于pH为5.8-6.8。
I6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和大于或等于20mM的氯化钠，且其特征在于pH为5.8-6.8。
I7.如I1至I6中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
I8.如I1至I7中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
I9.如I1至I8中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
I10.如I1至I9中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
I11.如I1至I10中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
I12.如I1至I11中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
I13.如I1至I12中任一项所述的药物组合物，其为液体药物组合物。
I14.如I1至I13中任一项所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂是非缓冲离子张力调节剂。
融合蛋白浓度
虽然早期研究表明，冻干制剂中的融合蛋白浓度可能受到冻干过程耐受的最大氯化钠量的限制，但后来的研究证明了液体制剂的长期活力，这进一步释放了更高的融合蛋白浓度(尤其是在离子强度增加的适当支持下)的潜力。
以下编号的段落J1至J12公开了本发明的具体实施方式。
J1.一种药物组合物，其包含超过20mg/mL、优选超过80mg/mL的IgG：TGFβR融合蛋白。
J2.一种药物组合物，其包含超过20mg/mL，优选超过80mg/mL的IgG：TGFβR融合蛋白，以及超过或等于20mM的离子性张力调节剂。
J3.一种药物组合物，其包含超过20mg/mL，优选超过80mg/mL的IgG：TGFβR融合蛋白，和超过或等于20mM的离子性张力调节剂，其特征在于pH为4-8。
J4.如J1至J3中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
J5.如J1至J4中任一项所述的药物组合物，其特征在于如E1至E5中任一项所定义的pH。
J6.如J1至J5中任一项所述的药物组合物，还包含张力调节剂，优选氯化钠。
J7.如J1至J6中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
J8.如J1至J7中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
J9.如J1至J8中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
J10.如J1至J9中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
J11.如J1至J10中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
J12.如J1至J11中任一项所述的药物组合物，其为液体药物组合物。
融合蛋白浓度和离子强度
研究发现可以实现更高浓度的融合蛋白，但优选通过增加离子强度来支持。结合融合蛋白浓度增加离子强度(尤其是氯化钠浓度)可确保更高的蛋白质溶解度和稳定性。在某些情况下，发现糖组分(例如海藻糖)可以部分补偿NaCl的缺乏，通常优选离子强度提供剂的存在。
以下编号的段落K1至K27公开了本发明的具体实施方式。
K1.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于5-250mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
K2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，且其特征还在于离子强度与融合蛋白的摩尔比为1000∶1至70∶1的离子强度。
K3.一种药物组合物，其包含5-25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于20-50mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
K4.一种药物组合物，其包含25-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于40-80mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
K5.一种药物组合物，其包含至少25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于至少50mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
K6.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于80-170mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
K7.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于80-120mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)，优选其中糖组分(最优选海藻糖)也存在。
K8.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于120-170mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)，优选其中不存在糖组分(最优选海藻糖)。
K9.一种药物组合物，其包含65-115mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于100-200mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)。
K10.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和10-200mM张力调节剂(优选10-200mM氯化钠)。
K11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和张力调节剂(优选氯化钠)，张力调节剂(优选氯化钠)与融合蛋白的摩尔比为910∶1至200∶1。
K12.一种药物组合物，其包含5-25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和20-50mM张力调节剂(优选20-50mM氯化钠)。
K13.一种药物组合物，其包含25-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和40-80mM张力调节剂(优选40-80mM氯化钠)。
K14.一种药物组合物，其包含至少25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和至少50mM张力调节剂(优选至少50mM氯化钠)。
K15.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和80-170mM张力调节剂(优选80-170mM氯化钠)。
K16.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和80-120mM张力调节剂(优选80-120mM氯化钠)，优选其中还存在糖组分(最优选海藻糖)。
K17.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和120-170mM张力调节剂(优选120-170mM mM氯化钠)，优选其中不存在糖组分(最优选海藻糖)。
K18.一种药物组合物，其包含65-115mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和100-200mM张力调节剂(优选100-200mM氯化钠)。
K19.如K1至K18中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
K20.如K1至K19中任一项所述的药物组合物，其特征在于如E1至E5中任一项所定义的pH。
K21.如K1至K20中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
K22.如K1至K21中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
K23.如K1至K22中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
K24.如K1至K23中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
K25.如K1至K24中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
K26.如K1至K25中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
K27.如K1至K26中任一项所述的药物组合物，其为液体药物组合物。
融合蛋白浓度和pH
已发现，一般而言，较高浓度的融合蛋白倾向于最好由稍高的pH支持，不过pH仍比正常预期的值更接近TGFβR部分的pI。
以下编号的段落L1至L17公开了本发明的特定实施方式。
L1.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH5.0-7.5，优选pH为pH 5.0-7.0。
L2.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为5.3-6.3，并且进一步特征在于不存在乙酸盐缓冲液和乙酸盐。
L3.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、组氨酸缓冲体系，其特征在于pH为pH 5.3-6.3。
L4.一种药物组合物，其包含5-25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH5.0-6.5，优选pH为pH 5.0-5.7。
L5.一种药物组合物，其包含25-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH5.0-7.5，优选pH 5.3-6.2。
L6.一种药物组合物，其包含至少25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH 5.3-6.5。
L7.一种药物组合物，其包含至少35 mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH 5.4-7.0。
L8.一种药物组合物，其包含45-65 mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH 5.5-6.5。
L9.一种药物组合物，其包含65-115mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征在于pH为pH 5.0-8.0，优选pH为pH 5.8-6.8。
L10.如L1至L9中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
L11.如L1至L10中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
L12.如L1至L11中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
L13.如L1至L12中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
L14.如L1至L13中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
L15.如L1至L14中任一项的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
L16.如L1至L15中任一项的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
L17.如L1至L16中任一项所述的药物组合物，其为液体药物组合物。
融合蛋白浓度、离子强度和pH
如上所述，较高浓度的融合蛋白往往最好由稍高的pH和稍高的离子强度来支持。
以下编号的段落M1至M28公开了本发明的具体实施方式。
M1.一种药物组合物，其包含5-150 mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于5-250 mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-7.0。
M2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于离子强度与融合蛋白的摩尔比为1000∶1至70∶1且pH为pH 5.0-6.5。
M3.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于离子强度与融合蛋白的摩尔比为375∶1至150∶1，pH为pH 5.3-6.3。
M4.一种药物组合物，其包含5-25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于20-50mM的离子强度(任选非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-6.5，优选pH为pH 5.0-5.7。
M5.一种药物组合物，其包含25-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于40-80mM的离子强度(任选非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-7.5，优选pH 5.3-6.2。
M6.一种药物组合物，其包含至少25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于至少50mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-7.5，优选地pH为pH 5.3-6.5。
M7.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于80-170mM的离子强度(任选非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.5-6.5。
M8.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于80-120mM的离子强度(任选非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.5-6.5，优选其中还存在糖组分(最优选海藻糖)。
M9.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于120-170mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)，pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.5-6.5，优选在不存在糖组分(最优选海藻糖)的情况下。
M10.一种药物组合物，其包含65-115mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白，其特征还在于100-200mM的离子强度(任选地非缓冲离子强度)和pH为pH 5.0-8.0，优选地pH为pH 5.8-6.8。
M11.一种药物组合物，其包含5-150mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和10-200mM张力调节剂(优选10-200mM氯化钠)，其特征还在于pH为pH 5-7。
M12.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和张力调节剂(优选氯化钠)，且张力调节剂(优选氯化钠)与融合蛋白的摩尔比为910∶1至200∶1，进一步特征在于pH为pH5-7.0。
M13.一种药物组合物，其包含5-25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和20-50mM张力调节剂(优选20-50mM氯化钠)，其进一步特征在于pH为pH 5.0-6.5，优选pH为pH 5.0-5.7。
M14.一种药物组合物，其包含25-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和40-80mM张力调节剂(优选40-80mM氯化钠)，其特征还在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH 5.3-6.2。
M15.一种药物组合物，其包含至少25mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和至少50mM张力调节剂(优选至少50mM氯化钠)，其特征还在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.3-6.5。
M16.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和80-170mM张力调节剂(优选80-170mM氯化钠)，其特征还在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.5-6.5。
M17.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和80-120mM张力调节剂(优选80-120mM氯化钠)，进一步特征在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.5-6.5，优选其中还存在糖组分(最优选海藻糖)。
M18.一种药物组合物，其包含45-65mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和120-170mM张力调节剂(优选120-170mM氯化钠)，其特征还在于pH为pH 5.0-7.5，优选pH为pH 5.5-6.5，优选在不存在糖组分(最优选海藻糖)的情况下。
M19.一种药物组合物，其包含65-115mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白和100-200mM张力调节剂(优选100-200mM氯化钠)，其特征还在于pH为pH 5.0-8.0，优选pH为pH 5.8-6.8。
M20.如M1至M19中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
M21.如M1至M20中任一项所述的药物组合物，还包含张力调节剂，优选氯化钠。
M22.如M1至M21中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
M23.如M1至M22中任一项所述的药物组合物，还包含糖组分，优选海藻糖。
M24.如M1至M23中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
M25.如M1至M24中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
M26.如M1至M25中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
M27.如M1至M26中任一项所述的药物组合物，其进一步特征在于不存在乙酸盐缓冲液和乙酸盐。
M28.如M1至M27中任一项所述的药物组合物，其为液体药物组合物。
糖组分
实验研究通常表明包含糖组分是有利的，尤其是选自非还原二糖和非还原糖多元醇的糖组分，其中海藻糖似乎优于所有其它糖组分。
以下编号的段落N1至N24公开了本发明的具体实施方式。
N1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和糖组分。
N2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-300mM糖组分。
N3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和40-110mM糖组分。
N4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和100-200mM糖组分。
N5.一种药物组合物，其以下述糖组分与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和糖组分：3700∶1至70∶1。
N6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇。
N7.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-300mM糖组分，所述糖组分选自下组：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇。
N8.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和40-110mM糖组分，所述糖组分选自下组：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇。
N9.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和100-200mM的选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇。
N10.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，糖组分与融合蛋白的摩尔比为3700∶1至70∶1。
N11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和海藻糖。
N12.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-300mM海藻糖。
N13.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和40-110mM海藻糖。
N14.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和100-200mM海藻糖。
N15.一种药物组合物，其以下述海藻糖与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和海藻糖：3700∶1至70∶1。
N16.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和二糖。
N17.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和40-200mM二糖。
N18.如N1至N17中任一项所述的药物组合物，其进一步特征在于E1至E5、F1至F5、G1至G12、H1至H24、I1至I6、J1至J4、K1至K18、L1至L9和M1到M19中任一项所述的特征。
N19.如N1至N18中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
N20.如N1至N19中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
N21.如N1至N20中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
N22.如N1至N21中任一项所述的药物组合物，还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
N23.如N1至N22中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
N24.如N1至N23中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
氨基酸组分
实验研究通常显示包含氨基酸组分是有利的，尤其是选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸，其中精氨酸且在某种程度上赖氨酸，似乎优于所有其它氨基酸组分。
以下编号的段落O1至O20公开了本发明的具体实施方式。
O1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和氨基酸组分。
O2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和10-300mM氨基酸组分。
O3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-110mM氨基酸组分。
O4.一种药物组合物，其以下述氨基酸组分与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和氨基酸组分：5500∶1至18∶1。
O5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸及其任意组合。
O6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和10-300mM氨基酸组分，所述氨基酸组分选自下组：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸及其任意组合。
O7.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-110mM氨基酸组分，所述氨基酸组分选自下组：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸及其任意组合。
O8.一种药物组合物，其以下述氨基酸组分与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸、甘氨酸及其任何组合：5500∶1至18∶1。
O9.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和精氨酸。
O10.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和10-300mM精氨酸。
O11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-110mM精氨酸。
O12.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和30-80mM精氨酸。
O13.一种药物组合物，其以下述的精氨酸与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和精氨酸：5500∶1至18∶1。
O14.如O1至O13中任一项所述的药物组合物，其进一步特征在于E1至E5、F1至F5、G1至G12、H1至H24、I1至I6、J1至J4、K1至K18、L1至L9、M1到M19和N1到N17中任一项所述的特征。
O15.如O1至O14中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
O16.如O1至O15中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
O17.如O1至O16中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
O18.如O1至O17中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
O19.如O1至O18中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
O20.如O1至O19中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
糖组分和氨基酸组分
研究表明精氨酸、海藻糖和赖氨酸都有助于制剂稳定性。尽管精氨酸有可能替代或至少部分替代海藻糖，但发现海藻糖和精氨酸的联合使用特别稳定。
以下编号的段落P1至P18公开了本发明的具体实施方式。
P1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、糖组分和氨基酸组分。
P2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、30-300mM糖组分和10-300mM氨基酸组分。
P3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、40-110mM糖组分和30-110mM氨基酸组分。
P4.一种药物组合物，其以下述糖组分与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、糖组分：3700∶1至70∶1，且还以下述氨基酸组分与融合蛋白的摩尔比包含氨基酸组分：5500∶1至18∶1。
P5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，以及选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸。
P6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、30-300mM选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，和10-300mM选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸。
P7.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、40-110mM选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，和30-110mM选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸。
P8.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，其中糖组分与融合蛋白的摩尔比为3700∶1至70∶1，以及选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸，其中氨基酸组分与融合蛋白的摩尔比为5500∶1至18∶1。
P9.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖和精氨酸。
P10.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、30-300mM海藻糖和10-300mM精氨酸。
P11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、40-110mM海藻糖和30-110mM精氨酸。
P12.一种药物组合物，其以下述海藻糖与融合蛋白摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白、海藻糖：3700∶1至70∶1，且以下述精氨酸与融合蛋白摩尔比包含精氨酸：5500∶1至18∶1。
P13.如P1至P12中任一项所述的药物组合物，其特征还在于E1至E5、F1至F5、G1至G12、H1至H24、I1至I6、J1至J4、K1至K18、L1至L9和M1至M19中任一项所述的特征。
P14.如P1至P13中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
P15.如P1至P14中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
P16.如P1至P15中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
P17.如P1至P16中任一项所述的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
P18.如P1至P17中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
糖组分和氨基酸组分作为氯化钠的替代物
后来的研究表明，精氨酸以及在一定程度上海藻糖可能潜在地替代或部分替代NaCl作为离子强度的来源。
以下编号的段落Q1至Q17公开了本发明的特定实施方式。
Q 1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠、糖组分和氨基酸组分中的一种或多种或全部。
Q2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠和氨基酸组分中的一种或多种或全部。
Q3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠、糖组分和氨基酸组分中的一种或多种或全部；其中氯化钠、糖组分和氨基酸组分中的一种或多种或全部的组合的总摩尔浓度为150mM至250mM。
Q4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠、糖组分、氨基酸组分中的一种或多种或全部；其中氯化钠、糖组分和氨基酸组分中的一种或多种或全部的组合的总摩尔浓度为180mM至220mM。
Q5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及下述中的一种或多种或全部：氯化钠、选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，和选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸。
Q6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、氯化钠和选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸。
Q7.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及下述中的一种或多种或全部：氯化钠、选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，和选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸；其中氯化钠、糖组分和氨基酸组分中的一种或多种或全部的组合的总摩尔浓度为150mM至250mM。
Q8.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，和下述中的一种或多种或全部：氯化钠、选自下组的糖组分：海藻糖、蔗糖、甘露醇和山梨糖醇，以及选自下组的氨基酸组分：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸和甘氨酸；其中氯化钠、糖组分和氨基酸组分中的一种或多种或全部的组合的总摩尔浓度为180mM至220mM。
Q9.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠、海藻糖和精氨酸中的一种或多种或全部。
Q10.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、氯化钠和精氨酸。
Q11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠、海藻糖和精氨酸中的一种或多种或全部；其中氯化钠、海藻糖和精氨酸中的一种或多种或全部的组合的总摩尔浓度为150mM至250mM。
Q12.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白，以及氯化钠、海藻糖和精氨酸中的一种或多种或全部；其中氯化钠、海藻糖和精氨酸中的一种或多种或全部的组合的总摩尔浓度为180mM至220mM。
Q13.如Q1至Q12中任一项所述的药物组合物，其特征还在于E1至E5、F1至F5、G1至G12、H1至H24、I1至I6、J1至J4、K1至K18、L1至L9、M1至M19和N1至N17中任一项所述的特征。
Q14.如Q1至Q13中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
Q15.如Q1至Q14中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
Q16.如Q1至Q15中任一项的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
Q17.如Q1至Q16中任一项的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
表面活性剂
研究表明表面活性剂是期望的，其中聚山梨醇酯表面活性剂，尤其是聚山梨醇酯20，是表现最好的。表面活性剂对于减轻聚集特别有用。
以下编号的段落R1至R34公开了本发明的特定实施方式。
R1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和表面活性剂。
R2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.01-2mg/mL表面活性剂。
R3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.05-1.5mg/mL表面活性剂。
R4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.4-1.2mg/mL表面活性剂。
R5.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.4-0.6mg/mL表面活性剂。
R6.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和约0.5mg/mL表面活性剂。
R7.一种药物组合物，其以下述表面活性剂与融合蛋白摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和表面活性剂：30∶1至1∶70。
R8.一种药物组合物，其以下述表面活性剂与融合蛋白摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和表面活性剂：12∶1至1∶3。
R9.一种药物组合物，其以下述表面活性剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和表面活性剂：8∶1至1∶2。
R10.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂。
R11.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.01-2mg/mL选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂。
R12.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.05-1.5mg/mL选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂。
R13.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.4-1.2mg/mL选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂。
R14.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.4-0.6mg/mL选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂。
R15.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和约0.5mg/mL选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂。
R16.一种药物组合物，其以下述表面活性剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂：30∶1至1∶70。
R17.一种药物组合物，其以下述表面活性剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂：12∶1至1∶3。
R18.一种药物组合物，其以下述表面活性剂与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂：8∶1至1∶2。
R19.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和聚山梨醇酯20。
R20.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.01-2mg/mL聚山梨醇酯20。
R21.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.05-1.5mg/mL聚山梨醇酯20。
R22.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.4-1.2mg/mL聚山梨醇酯20。
R23.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和0.4-0.6mg/mL聚山梨醇酯20。
R24.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和约0.5mg/mL聚山梨醇酯20。
R25.一种药物组合物，其以下述聚山梨醇酯20与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和聚山梨醇酯20：30∶1至1∶70。
R26.一种药物组合物，其以下述聚山梨醇酯20与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和聚山梨醇酯20：12∶1至1∶3。
R27.一种药物组合物，其以下述聚山梨醇酯20与融合蛋白的摩尔比包含IgG：TGFβR融合蛋白和聚山梨醇酯20：8∶1至1∶2。
R28.如R1至R27中任一项所述的药物组合物，其特征还在于E1至E5、F1至F5、G1至G12、H1至H24、I1至I6、J1至J4、K1至K18、L1至L9、M1至M19、N1至N17、O1至O13、P1至P12和Q1到Q12中任一项所述的特征。
R29.如R1至R28中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
R30.如R1至R29中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
R31.如R1至R30中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
R32.如R1至R31中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
R33.如R1至R32中任一项的药物组合物，其还包含缓冲体系，优选组氨酸缓冲体系。
R34.如R1至R33中任一项的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
缓冲剂
由于不含缓冲剂的组合物似乎不如包含缓冲剂的组合物受青睐，因此本发明的药物组合物优选包含缓冲体系。尽管许多缓冲体系可用于在适当的pH(合适地如本文所定义)下缓冲本发明的药物组合物，但某些缓冲剂似乎比其它缓冲剂更优选。然而，研究表明缓冲剂浓度似乎不太重要。
总体而言，组氨酸缓冲体系表现最好。尽管可以使用乙酸盐缓冲液，但由于可能对皮肤有刺激作用，因此应将其适当排除。类似地，柠檬酸盐缓冲剂可有利地不存在于本发明的药物组合物中，尽管柠檬酸盐缓冲剂可用于较高的pH。
以下编号的段落S1至S18公开了本发明的具体实施方式。
S1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和缓冲体系。
S2.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自下组的缓冲体系：组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液及其任意组合。
S3.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和选自下组的缓冲体系：组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液。
S4.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白和组氨酸缓冲体系。
S5.如S1至S4中任一项所述的药物组合物，其中缓冲体系以2-70mM的浓度存在。
S6.如S1至S4中任一项所述的药物组合物，其中缓冲体系以4-30mM的浓度存在。
S7.如S1至S4中任一项所述的药物组合物，其中缓冲体系以5-15mM的浓度存在。
S8.如S1至S4中任一项所述的药物组合物，其中缓冲体系以下述缓冲体系与融合蛋白的摩尔比存在：1280∶1至3∶1。
S9.如S1至S4中任一项所述的药物组合物，其中缓冲体系以下述缓冲体系与融合蛋白的摩尔比存在：370∶1至9∶1。
S10.如S1至S4中任一项所述的药物组合物，其中缓冲体系以下述缓冲体系与融合蛋白的摩尔比存在：100∶1至15∶1。
S11.如S1至S4中任一项所述的药物组合物；其中所述组合物的进一步特征在于不存在乙酸盐缓冲剂和乙酸盐。
S12.如S1至S11中任一项所述的药物组合物，其进一步特征在于E1至E5、F1至F5、G1至G12、H1至H24、I1至I6、J1至J4、K1至K18、L1至L9、M1至M19、N1至N17、O1至O13、P1至P12、Q1至Q12以及R1至R27中任一项所述的特征。
S13.如S1至S12中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，优选具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列。
S14.如S1至S13中任一项所述的药物组合物，其还包含张力调节剂，优选氯化钠。
S15.如S1至S14中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂，优选聚山梨醇酯20。
S16.如S1至S15中任一项所述的药物组合物，其还包含糖组分，优选海藻糖。
S17.如S1至S16中任一项所述的药物组合物，其还包含氨基酸组分，优选精氨酸和/或赖氨酸。
S18.如S1至S17中任一项所述的药物组合物，其还包含抗氧化剂，优选甲硫氨酸。
根据实验研究，T1至T19中公开的以下药物组合物被证明是特别稳定的：
T1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、缓冲体系、NaCl；糖组分、非离子表面活性剂和任选的氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.0-6.0。
T2.如T1所述的药物组合物，其包含2-30mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、2-30mM缓冲体系、20-70mM NaCl；100-200mM糖组分、0.1-1.1mg/mL非离子表面活性剂和任选的1-20mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为pH 5.0-6.0。
T3.如T1所述的药物组合物，其包含5-15mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、30-50mM NaCl；150-170mM糖组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为pH 5.3-5.7。
T4.如T1所述的药物组合物，其包含约10mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、约10mM缓冲体系、约40mM NaCl；约159mM糖组分、约0.5mg/mL非离子表面活性剂和任选约5mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于约5.5的pH。
T5.如T1所述的药物组合物，其包含25-100mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、2-30mM缓冲体系、40-100mM NaCl；100-200mM糖组分、0.1-1.1mg/mL非离子表面活性剂和任选的1-20mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为pH 5.0-6.0。
T6.如T1所述的药物组合物，其包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM NaCl；150-170mM糖组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为pH 5.3-5.7。
T7.如T1所述的药物组合物，其包含约40mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、约10mM缓冲体系、约60mM NaCl；约159mM糖组分、约0.5mg/mL非离子表面活性剂和任选约5mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于约5.5的pH。
T8.如T1至T7中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列，缓冲体系为组氨酸缓冲体系，糖组分为海藻糖，非离子型表面活性剂为聚山梨醇酯20，氨基酸抗氧化剂为甲硫氨酸。
T9.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、缓冲体系、NaCl；糖组分、氨基酸组分、非离子表面活性剂和任选的氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.4-6.4。
T10.如T9所述的药物组合物，其包含25-100mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、2-30mM缓冲体系、40-100mM NaCl；40-160mM糖组分、10-100mM氨基酸组分、0.1-1.1mg/mL非离子表面活性剂和任选的1-20mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.4-6.4。
T11.如T9所述的药物组合物，其包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM NaCl；90-110mM糖组分、40-60mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为pH 5.7-6.1。
T12.如T9所述的药物组合物，其包含约40mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、约10mM缓冲体系、约60mM NaCl；约100mM糖组分、约50mM氨基酸组分、约0.5mg/mL非离子表面活性剂和任选约5mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于约5.9的pH。
T13.如T9所述的药物组合物，其包含25-100mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、2-30mM缓冲体系、40-100mM NaCl；25-125mM糖组分、25-125mM氨基酸组分、0.1-1.1mg/mL非离子表面活性剂和任选的1-20mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.4-6.4。
T14.如T9所述的药物组合物，其包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM NaCl；65-85mM糖组分、65-85mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.7-6.1。
T15.如T9所述的药物组合物，其包含约40mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、约10mM缓冲体系、约60mM NaCl；约75mM糖组分、约75mM氨基酸组分、约0.5mg/mL非离子表面活性剂和任选约5mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于约5.9的pH。
T16.如T9所述的药物组合物，其包含35-120mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、2-30mM缓冲体系、50＝150mM NaCl；10-100mM糖组分、10-100mM氨基酸组分、0.1-1.1mg/mL非离子表面活性剂和任选的1-20mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.4-6.4。
T17.如T9所述的药物组合物，其包含45-55mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、90-110mM NaCl；40-60mM糖组分、40-60mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于pH为5.7-6.1。
T18.如T9所述的药物组合物，其包含约50mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、约10mM缓冲体系、约100mM NaCl；约50mM糖组分、约50mM氨基酸组分、约0.5mg/mL非离子表面活性剂和任选约5mM氨基酸抗氧化剂，其特征在于约5.9的pH。
T19.如T1至T18中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白具有与bintrafusp alfa的氨基酸序列相同的氨基酸序列，缓冲体系为组氨酸缓冲体系，糖组分为海藻糖，氨基酸组分为精氨酸，非离子表面活性剂为聚山梨醇酯20，氨基酸抗氧化剂为甲硫氨酸。
除上述之外，以下实施方式U1至U21是特别优选的：
U1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、离子性张力调节剂，以及二糖和氨基酸组分中的一或两者。
U2.如U1所述的药物组合物，其中所述组合物包含二糖。
U3.如U1或U2所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂是氯化钠。
U4.如U1至U3中任一项所述的药物组合物，其中所述二糖为海藻糖或蔗糖。
U5.如U1至U4中任一项所述的药物组合物，其中二糖是海藻糖。
U6.如U1至U5中任一项所述的药物组合物，其中，氨基酸组分为精氨酸或赖氨酸。
U7.如U1至U6中任一项所述的药物组合物，其中，氨基酸组分为精氨酸。
U8.如U1至U7中任一项所述的药物组合物，其中，所述离子张力调节剂为氯化钠，所述二糖为海藻糖，所述氨基酸组分为精氨酸。
U9.如U1至U8中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂。
U10.如U1至U9中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物具有5.0至6.5的pH。
U11.如U1至U10中任一项所述的药物组合物，其中所述IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-1(IgG)：TGFβR融合蛋白或抗PD-L1(IgG)：TGFβR融合蛋白，优选抗PD-1(IgG)：TGFβR融合蛋白。
U12.如U11所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白是抗PD-L1(IgG)：TGFβR融合蛋白，且抗PD-L1(IgG)选自下组：(1)抗PD-L1(IgG)其包含具有下述氨基酸序列的三个重链CDR：SEQ ID NO：19(CDR1)，SEQ ID NO：20(CDR2)和SEQ ID NO：21(CDR3)和具有下述氨基酸序列的三个轻链CDR：SEQ ID NO：22(CDR1)，SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ ID NO：24(CDR3)，(2)抗PD-L1(IgG)其包含具有下述氨基酸序列的三个重链CDR：SEQ ID NO：1(CDR1)，SEQ ID NO：2(CDR2)和SEQ ID NO：3(CDR3)和具有下述氨基酸序列的三个轻链CDR：SEQ ID NO：4(CDR1)，SEQ ID NO：5(CDR2)和SEQ ID NO：6(CDR3)，和(3)抗PD-L1(IgG)其包含具有下述氨基酸序列的三个重链CDR：SEQ ID NO：27(CDR1)，SEQ ID NO：28(CDR2)和SEQID NO：29(CDR3)和具有下述氨基酸序列的三个轻链CDR：SEQ ID NO：30(CDR1)，SEQ ID NO：31(CDR2)和SEQ ID NO：32(CDR3)。
U13.如U12所述的药物组合物，其中抗PD-L1(IgG)的轻链序列和重链序列分别对应于(1)SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：16，(2)SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：14，或(3)SEQ IDNO：33和SEQ ID NO：35。
U14.如U1至U13中任一项所述的药物组合物，其中所述IgG：TGFβR融合蛋白的TGFβR为TGFβR2的可溶性胞外域或其能够结合TGF-β的片段。
U15.如U14所述的药物组合物，其中TGFβR2包含选自下组的序列或由其组成：SEQID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13。
U16.如U1至U15中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白的轻链序列和重链序列分别对应于(1)SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，(2)SEQ ID NO：ID NO：15和SEQ IDNO：17，(3)SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18，或(4)SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。
U17.如U1至U16中任一项所述的药物组合物，其中所述IgG：TGFβR融合蛋白具有bintrafusp alfa的氨基酸序列。
U18.如U1至U17中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的特征在于5.0至6.5的pH并且包含缓冲体系、离子张力调节剂、二糖、非离子表面活性剂、任选的氨基酸组分和进一步任选的抗氧化剂。
U19.如U18所述的药物组合物，其中缓冲体系为组氨酸缓冲体系，离子张力调节剂为氯化钠，二糖为海藻糖，氨基酸组分为精氨酸，抗氧化剂为甲硫氨酸，非离子表面活性剂为聚山梨醇酯20。
U20.如U18或U19所述的药物组合物，其中所述组合物选自以下组合物组成的组：
a.一种药物组合物，其特征在于pH为5.3-5.7并且包含5-15mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、30-50mM离子张力调节剂；150-170mM二糖、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
b.一种药物组合物，其特征在于pH为5.3-5.7并且包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM离子张力调节剂；150-170mM二糖、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
c.一种药物组合物，其特征在于βH为5.7-6.1并且包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM离子张力调节剂；90-110mM二糖、40-60mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
d.一种药物组合物，其特征在于βH为5.7-6.1并且包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM离子张力调节剂；65-85mM二糖、65-85mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；和
e.一种药物组合物，其特征在于βH为5.7-6.1并且包含45-55mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、90-110mM离子张力调节剂；40-60mM二糖、40-60mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂。
U21.如U1至U20中任一项所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂是非缓冲离子张力调节剂。
容器
本发明提供一种容器，所述容器包含本文定义的药物组合物。优选地，所述容器包括如本文所定义的药物递送装置，优选地多个药物递送装置。
本发明提供一种制造容器的方法，所述方法包括将本文定义的药物组合物纳入容器中。优选地，这通过将所述药物组合物纳入一种或多种药物递送装置中，然后将一种或多种预填充药物递送装置纳入容器中来实现。
药物递送装置
本发明提供了一种药物递送装置，其包含本文定义的药物组合物。优选地，药物递送装置包括腔室，其中驻留有所述、优选液体(最优选水性)药物组合物。优选地，药物递送装置是无菌的。
药物递送装置可以是小瓶、安瓿、注射器、注射笔(例如基本上纳入注射器)、自动注射器或静脉输注袋。最优选地，药物递送装置是注射器。优选地，注射器是玻璃注射器。优选地，注射器包括针头。
本发明提供一种制造优选如本文所定义的药物递送装置的方法，所述方法包括将如本文所定义的药物组合物纳入药物递送装置中。这种制造通常包括将本文定义的药物组合物装入注射器，优选通过固定在其上的针头。此后针可以被移除、更换或保留。
多部件试剂盒
本发明提供一种试剂盒，其包括药物递送装置(其中未纳入药物组合物)、本文定义的药物组合物(任选地包含在单独的包装或容器中)和任选地一组带有关于药物组合物的给药(例如静脉内、皮下)说明的说明书。然后，用户可以在给药之前用药物组合物(可以在小瓶或安瓿等中提供)填充药物递送装置。
制造方法
本发明提供一种制造如本文所定义的药物组合物的方法。所述方法优选包括以任何认为合适的具体顺序将形成本文定义的组合物所需的任何相关组分混合在一起。本领域技术人员可以参考本领域熟知的实例或技术来形成药物组合物(尤其是那些通过注射器进行注射的那些，尤其是那些用于静脉内注射的那些)。不同的实施方式将优选地需要以可能不同的量混合的组分的不同组合。技术人员可以通过参考与药物组合物有关的前述公开内容容易地推断出这样的组合和量。
优选地，所述方法包括将相关组分混合在一起，优选在稀释剂(例如水)中，优选使得所有组分(基本上或完全)溶解在稀释剂中。
所述方法可以包括首先制备具有包括融合蛋白在内的一些或全部组分(任选地与一些或全部稀释剂)的浓缩预混合物(或预溶液)，然后所述预混合物(或预溶液)可以用稀释剂(优选水)稀释，以提供药物组合物，或随后向其添加最终组分以提供最终药物组合物的组合物。优选地，上述预混合物制备成具有最终制剂所需的pH。
所述方法可替代地或另外地包括，首先制备具有不包括融合蛋白的一些或所有组分(任选地与一些或所有稀释剂)的预混合物(或预溶液)，然后融合蛋白可以自身(任选地随一些稀释剂或预溶解在一些稀释剂中)与预混合物(或预溶液)混合以提供药物组合物，或随后向其添加最终组分以提供最终药物组合物的组合物。优选地，预混合物包含除融合蛋白之外的所有组分且任选地还包含一些稀释剂(其可用于预溶解融合蛋白)，优选地从而使得融合蛋白被添加到混合物中，该混合物提供融合蛋白的最佳稳定性。优选地，上述预混合物制备成具有最终制剂所需的pH。
优选地，所述方法包括形成缓冲体系，优选地包括如本文所定义的缓冲剂的缓冲体系。缓冲体系可优选具有如本文关于缓冲体系本身所定义的pH。缓冲体系优选在添加融合蛋白之前在预混合物中形成，尽管缓冲体系可以任选地与存在的融合蛋白一起形成。缓冲体系可以通过简单地混合缓冲剂(现成提供的)与其酸/碱共轭物(优选以适当的相对量，以提供所需的pH——这可以由技术人员在理论上或实验上确定)来形成。在乙酸盐缓冲体系的情况下，这意味着将乙酸钠与乙酸混合。或者，可以通过将强酸(例如HCl)添加到缓冲剂(例如乙酸钠)中来形成缓冲体系，以便在原位形成酸/碱共轭物(例如乙酸)(同样优选以适当的相对量提供所需的pH)。或者，可以通过向缓冲剂(例如乙酸钠)的酸/碱共轭物(例如乙酸)中添加强碱(例如氢氧化钠)来形成缓冲体系，以便在原位形成缓冲剂(再次优选以适当的相对量提供所需的pH)。通过添加所需量的强碱或强酸，或者甚至添加一定量的缓冲剂或酸/碱共轭物，可以合理地调节最终组合物的预混合物的pH。相同的方案可用于其它缓冲体系，例如组氨酸缓冲体系，其可使用游离(中性)组氨酸与咪唑形式的组氨酸组合形成，或使用相应调节pH(例如根据需要使用碱或酸)。
在某些实施方式中，缓冲剂和/或缓冲体系预先另形成单独的混合物，并且缓冲体系通过缓冲液交换(例如使用渗滤直到达到相关浓度或重量渗透摩尔浓度)被转移到组合物的前体(包括除了缓冲剂和/或缓冲体系之外的一些或所有组分，优选包含融合蛋白)。必要时，此后可以添加附加赋形剂以产生最终组合物。pH可以一次调节或在所有组分存在之前调节。
任何、一些或所有组分可以在与其它组分混合之前与稀释剂预溶解或预混合。
最终的组合物可以被过滤，优选地去除颗粒物质。优选地通过尺寸为或小于1μm、优选0.22μm的滤器进行过滤。优选地，过滤通过PES滤器或PVDF滤器，优选使用0.22μm PES滤器。
应理解，本发明的药物组合物可以液体(优选水性)药物组合物形式提供，并且优选合适地储存。然而，本发明的药物组合物可以冻干药物组合物形式提供，并且优选适当储存。这种冻干的药物组合物可以通过冻干本文定义的液体(例如水性)药物组合物来形成。然而，最优选地，任何此类冻干药物组合物将在使用、给药或甚至(可能短期)储存之前重建，以提供本文定义的液体或水性药物组合物。这种重建优选地包括将冻干的组合物溶解在水(用于注射)中，优选地提供具有所需浓度的融合蛋白的溶液。
治疗方法
本发明提供通过给予本文定义的药物组合物来治疗疾病或医学病症的方法。所述方法优选包括向有需要的对象给予治疗有效量的药物组合物。给予可优选包括肠胃外给予，其优选包括不同于肠内和局部给予的任何形式的给予，通常通过注射，并且优选包括但不限于静脉内、玻璃体内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下腔、脊柱内和胸骨内注射和输注。所述方法优选包括皮下或静脉内递送治疗有效量的药物组合物。所述方法优选包括静脉内给予治疗有效量的药物组合物，优选通过静脉输注，最好与其它静脉输液(例如盐水)一起使用。
在药物组合物是冻干药物组合物的情况下，在给予之前，优选将所述组合物在注射用水或合适的静脉内流体中重建，优选地提供如本文所定义的水性药物组合物。然后优选地如本文所定义地给予含水药物组合物，优选地通过静脉内注射，优选地与其它静脉内流体(例如盐水)一起给予。
本发明提供了本文定义的药物组合物，用于治疗需要这种治疗的患者的疾病或医学病症。本发明还提供了本文定义的药物组合物在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途。
本发明提供治疗疾病或医学病症的方法、用于治疗疾病或医学病症的药物组合物，以及药物组合物在制备用于治疗如本文所定义的疾病或医学病症的药物中的用途，其中所述疾病或医学病症是PD-L1-和/或TGFβ-相关疾病，优选PD-L1-和/或TGFβ-相关增殖性疾病，更优选PD-L1-和/或TGFβ相关的癌症。在本发明的这些方面，抗-LD-L1(IgG)：TGFβR融合蛋白的抗-PD-L1抗原结合部分可以结合肿瘤携带的PD-L1，从而破坏PD-1/PD-L1通路，同时将融合蛋白的TGFβ受体部分定位在肿瘤微环境中，它可以最有效地靶向和/或隔离自分泌或旁分泌TGFβ。以这种方式，多种作用机制被破坏，从而阻断癌细胞的生长和/或存活途径。
本发明提供治疗疾病或医学病症的方法、用于治疗疾病或医学病症的药物组合物、以及药物组合物在制备用于治疗如本文所定义的疾病或医学病症的药物中的用途，其中所述疾病或医学病症是增殖性疾病或病症。增殖性疾病或病症优选是癌症。癌症优选地表现在一种或多种实体瘤中。优选地，癌症选自癌瘤、淋巴瘤、白血病、母细胞瘤和肉瘤。这些癌症更具体的例子包括鳞状细胞癌，骨髓瘤，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，神经胶质瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，急性髓性白血病，多发性骨髓瘤，胃肠(道)癌，肾癌，卵巢癌，肝癌，成淋巴细胞性白血病，淋巴细胞性白血病，结直肠癌，子宫内膜癌，肾癌，前列腺癌，甲状腺癌，黑素瘤，软骨肉瘤，神经母细胞瘤，胰腺癌，胶质母细胞瘤，宫颈癌，脑癌，胃癌，膀胱癌，肝癌，乳腺癌，结肠癌，胆道癌和头颈癌。所讨论的疾病或医学病症可以优选地选自WO2015118175、WO2018029367、WO2018208720、PCT/US18/12604、PCT/US19/47734、PCT/US19/40129、PCT/US19/36725、PCT/US19/732271、PCT/US19/38600和PCT/EP2019/061558中公开的任何那些。
本发明提供治疗疾病或医学病症的方法、用于治疗疾病或医学病症的药物组合物、以及药物组合物在制备用于治疗如本文所定义的疾病或医学病症的药物中的用途，其中所述疾病或医学病症优选如本文所定义，并且其中所述治疗或疗法涉及联合疗法，由此所述药物组合物与一种或多种其它药物或生物药物活性物质联合给予；其中所述联合疗法涉及治疗的各组分的同时、顺序或分开给药。在一些实施方式中，附加药物活性物质或生物药物活性物质可存在于本文定义的任何药物组合物中。
本文援引的所有参考文献通过引用纳入本发明的公开内容。
实施例
抗PD-L1生物活性测定方案
抗PD-L1(IgG)：TGFβRII融合蛋白的生物活性通过基于细胞的测定法进行评估，该测定法能够测量其结合重组HEK-293(hPD-L1)细胞系上过表达的人PD-L1受体的能力。为此，使抗-PD-L1(IgG)：TGFβRII融合蛋白在室温于涡旋下与包被蛋白A的96孔板结合30分钟。然后，在抗PD-L1(IgG)：TGFβRII包被板的各孔中加入50,000个HEK-293(hPD-L1)细胞，并在37℃，5％CO2条件下与抗PD-L1(IgG)：TGFβRII结合1小时。洗去未结合的细胞，并通过ATPlite一步(帕金埃尔默公司(Perkin Elmer))确认各孔中结合细胞的存在。然后将每秒计数与对数转化的抗PD-L1(IgG)：TGFβRII浓度作图，并通过4PL(S型剂量反应曲线)拟合。对于各数据集，计算抗PD-L1(IgG)：TGFβRII能够发挥最大可能的PDL-1结合能力的50％结合的浓度(EC50)。样品的生物活性表示为相对于参比材料的％活性，亦即效力比的百分比表示(即，等效剂量的标准品与未知制剂的EC50比)。效力是来自三个独立测定的平均结果。
TGFβRII生物活性测定方案
用报告细胞系4T1 pSmad sLuc评估抗PD-L1(IgG)：TGFβRII融合蛋白的TGFβ结合活性，所述报告细胞系用受SMAD结合元件控制的荧光素酶报告基因稳定转染。在TGFβ与细胞系细胞表面上的TGFβ受体结合后，会引发信号级联反应，导致SMAD复合物的形成。SMAD复合物随后易位到细胞核中，在彼处它与SMAD结合元件结合并诱导荧光素酶基因的转录。
对于各生物测定，将50,000个4T1细胞/孔加载到96孔板中，并在37℃、5％CO2条件下持续4小时使其贴壁到板上。然后，将板在37℃、5％CO2、不同浓度的抗PD-L1(IgG)：TGFβRII融合蛋白和固定量的人TGFβ下孵育过夜，以产生剂量反应曲线。此后通过使用基于荧光素的检测染料评估荧光素酶表达。发射的光与抗PD-L1(IgG)：TGFβRII融合蛋白的TGFβ结合活性呈负相关，因为抗PD-L1(IgG)：TGFβRII融合蛋白会捕获并中和可溶性TGFβ。
对于各数据集，计算抗PD-L1(IgG)：TGFβRII能够发挥最大可能的TGFβ结合能力的50％结合的的浓度(EC50)。样品的生物活性表示为相对于参比材料的％活性，亦即效力比的百分比表示(即，等效剂量的标准品与未知制剂的EC50比)。效力是来自三个独立测定的平均结果。
压力测试方案
在以下实施例中使用了下述压力测试方案，不过其变化形式从上下文中将是显而易见的。
热稳定性
在40±2℃(75％RH)储存一段时间(例如8、9或13周)期间检查制剂的热稳定性。不仅在时间＝0和时间＝全期间(例如8周)，而且在中间间隔(例如时间＝2周，时间＝4周)分析样品。有时，备用样品会在25±5℃放置类似的时间长度，以便分析在40±2℃降解过快或产生异常结果的样品。通常对热稳定性样品进行以下分析：
·通过光密度进行蛋白质含量检测
·聚集指数：通过光密度计算以跟踪HMW杂质的聚集和形成
·通过SE-UPLC进行HMW含量检测(以跟踪HMW杂质的产生并因此监控聚集)
·通过浊度法测定浊度(也与溶解度和聚集体形成有关)
·目视检查可见颗粒的存在和/或着色程度的变化
·通过等电毛细管电泳进行荷电同种型检测(监测电荷变体)
·pH
·通过生物分析仪或CGE-NR进行LMW含量检测(跟踪片段化)
·通过遮光法进行亚可见颗粒检测
·荧光(选定样品)检测以监测分子三级结构的变化
光压力
还研究了各制剂中的IgG：TGFβR2融合蛋白的光敏性。制剂通常暴露于7小时的765W/m2的强度的光照下，这满足ICHQ1B指南的要求。通常通过以下技术分析受光压力的制剂：
·通过光密度进行蛋白质含量检测
·聚集指数：由OD计算，衡量光压力导致的聚集形成程度
·浊度通过比浊法测量
·目视检查：是否存在因聚集而产生的可见颗粒
·SE-UPLC：对聚集产生的HMW杂质进行定量
·通过等电毛细管电泳进行荷电同种型检测(监测电荷变体)
·荧光(选定样品)：观察可能由芳族氨基酸侧链氧化引起的任何三级结构变化
振荡压力
归因于溶液中蛋白质的自缔合(self-association)和疏水区域之间的相互作用，机械(振荡)压力通常与聚集体的产生有关。研究IgG：TGFβR2融合蛋白的各种制剂的抗振荡压力，通常为200mg/小瓶和600mg/小瓶，在室温以200rpm(或300rpm)在直立和倾斜位置搅拌24小时。振荡压力制剂一般分析如下：
·通过光密度进行蛋白质含量检测
·聚集指数：通过光密度计算以跟踪HMW杂质的聚集和形成
·通过浊度法测定浊度(也与溶解度和聚集体形成有关)
·目视检查是否存在可见颗粒和/或着色程度
·通过SE-UPLC进行HMW含量检测(以跟踪HMW杂质的产生并因此监控聚合)
·通过生物分析仪或CGE-NR进行LMW含量检测(跟踪片段化)
·通过遮光法进行亚可见颗粒检测
·pH
冷冻/解冻压力
当蛋白质制剂冻结时，随着溶液中的微区域开始凝固而形成界面。在这些微环境中，随着制剂缓冲液的不同成分被排除或包含在正在固化的液体基质中，极性会发生变化。结果是蛋白质沉淀，因为在这些变化的微环境中，亲水/疏水相互作用被强加在分子上。为了确定各种赋形剂和条件的有效性，将IgG：TGFβR2融合蛋白的各制剂暴露于三个冻融循环(各循环从-25℃到RT)，通常为200mg/瓶或600mg/瓶样品。然后通常通过以下分析检查样品，以确定它们对冻融沉淀/聚集/降解的抗性：
·通过光密度进行蛋白质含量检测
·聚集指数：通过光密度计算以跟踪HMW杂质的聚集和形成
·通过等电毛细管电泳进行荷电同种型检测(监测电荷变体)
·通过浊度法测定浊度(也与溶解度和聚集体形成有关)
·目视检查是否存在视觉可见颗粒
·通过SE-UPLC进行HMW含量检测(以跟踪HMW杂质的产生并因此监控聚合)
·通过生物分析仪或CGE-NR进行LMW含量检测(跟踪片段化)
·亚可见颗粒
·pH
结果分析和数据处理方案
使用Design-Expert软件中的响应面模型(Response Surface Model)选项设置一些DoE，选择具有三数字因子(缓冲液强度、pH、表面活性剂强度)和一分类因子(赋形剂类型)的D-最优设计。为了确定对给定压力是否有积极响应，数据通过方差分析使用响应面线性模型进行了统计评估。采用设计专家(Design expert)软件探索DoE中所有变量之间的关系，结果以3D曲面图说明，以说明响应给定压力的重要影响因素。通过该方式，可以在给定因素和对压力的响应之间建立具有统计学意义的联系。
制剂制备方案
bintrafusp alfa药物物质(IgG：TGFβR2融合蛋白的示例)可以如WO2015118175中所述制造，其实施例描述了其生产。通过接头与TGFβR2胞外结构域连接的IgG的完整重链如SEQ ID NO：3所示。TGFβR2胞外结构域对应于SEQ ID NO：10，而接头对应于SEQ ID NO：11。bintrafusp alfa的轻链对应于WO2015118175的SEQ ID NO：1。
图1A显示了一半的bintrafusp alfa融合蛋白，其包含通过指定的接头连接至TGFβ受体II的细胞外结构域(ECD)的轻链(具有指定的VL和CL区)和重链(具有指定的VH、CH1、CH2和CH3区)。
图1B也显示了一半的bintrafusp alfa融合蛋白的序列，其包含通过指定的接头连接至TGFβ受体II的细胞外结构域(ECD)的轻链(具有指定的VL和CL区)和重链(具有指定的VH、CH1、CH2和CH3区)(参见上文关于图1A和1B的进一步信息)。
纯化的bintrafusp alfa以预先配制的状态在-70℃储存，并在使用前解冻。
在一种方法中，通过将预先制备的含有赋形剂的溶液(在适用时在指定的pH下)与合适称重量的bintrafusp alfa混合来制备水性制剂，以提供根据bintrafusp alfa和赋形剂的浓度的所需制剂。在某些情况下会进行最终的pH调节，以确保pH符合期望。在其它方法中，可以通过将bintrafusp alfa溶解或混合在水中来生产水性制剂，任选地包含一些赋形剂，然后添加更多的赋形剂(任选地预先溶解在水中)以提供最终所需制剂——可以再次进行最终的pH调节。
在一些方法中，制备了(例如通过上述方法)bintrafusp alfa的储液并且在使用/加工之前可能储存在降低的温度下。然后可以处理所述储液，以提供所需的制剂，例如通过进行缓冲液交换、浓缩、稀释等。
在下述实施例中，如何生产相关制剂对于技术人员来说是不言而喻的。
实施例1-IgG：TGFβR2融合蛋白的冻干和液体制剂
一般概述
制备用于IgG：TGFβR2融合蛋白的稳定制剂特别具有挑战性，部分归因于两个融合的实体，IgG部分和TGFβR2部分，在pI和胶体稳定性方面不合适——TGFβR2区域的pI与IgG部分的pI完全不同，但通常认为采用距各主要蛋白质部分的pI至少1-2个pH单位的pH是很重要的。
测试制剂列表
进行初筛以建立可行的pH和最佳pH，其集中于胶体和构象稳定性。此初筛的制剂显示在表1A中。
表1A-用于初始pH筛选的制剂
Figure BDA0003807020880000751
Figure BDA0003807020880000761
*本实施例中使用的缓冲剂是包含10mM磷酸钠、10mM TRIS和10mM柠檬酸盐的复合缓冲体系
进行进一步的实验以确定氯化钠对溶解度和透析回收率的影响。这些制剂显示在表1B中。
表1B用于初始氯化钠和溶解度筛选的制剂
Figure BDA0003807020880000762
Figure BDA0003807020880000771
然后对含有不同浓度的氯化钠和海藻糖(海藻糖的重量％相对于海藻糖二水合物的重量％)的18种pH 5.5制剂进行可冻干性和重量渗透摩尔浓度的进一步筛选，以评估冻干性能。API被排除在这些制剂之外，因为它对所观察的因素(冻干物的外观)几乎没有影响，因为它对重量渗透摩尔浓度的影响可以忽略不计。这样的安慰剂制剂因此可以被认为是关于冻干物外观的最坏情况。这些制剂显示在表1C中。
表1C-用于可冻干性和重量渗透摩尔浓度筛选的氯化钠和冻干保护剂的制剂
Figure BDA0003807020880000772
Figure BDA0003807020880000781
然后对含有精调浓度的氯化钠和海藻糖的6种基本等张的pH 5.5制剂进行可冻干性和重量渗透摩尔浓度的进一步筛选。这些制剂显示在表1D中。同样，根据表1C，API出于同样的原因被排除在外。
表1D-用于可冻干性和重量渗透摩尔浓度筛选的氯化钠和冻干保护剂的其它制剂
Figure BDA0003807020880000791
然后对两种基本等张的pH 5.5制剂进行进一步筛选，其含有10mg/mL bintrafuspalfa和精调浓度的氯化钠和海藻糖。这些制剂显示在表1E中。
表1E-用于快速稳定性筛选的制剂
Figure BDA0003807020880000792
1A制剂-结果和分析
对制剂1A.1-1A.8(参见上面的表1A)进行纳米DSC测量以测量这些制剂的构象稳定性，结果呈现在下表1F中。
表1F-DSC结果显示Tm1和Tm2温度峰值处的蛋白质去折叠事件
Figure BDA0003807020880000801
上述Tm测量表明，从构象稳定性的角度来看，最佳pH在5.5和9之间。此外，同样从构象稳定性的角度来看，NaCl的添加不是有害的，但其本身不会改善构象稳定性。在pH4和5时，无任何NaCl，Tm值略低，表明构象稳定性降低。
1B制剂-结果和分析
对以上表1B的制剂(制剂1B.1-1B.18)进行溶解度测定，其中在重新配制/再缓冲后测量％蛋白质回收率以确定这些制剂的胶体稳定性。结果示于下表1G中。
表1G-溶解度测定：结果显示重新配制/再缓冲后蛋白质回收
Figure BDA0003807020880000802
Figure BDA0003807020880000811
总体而言，pH 5.5在1-10mg/mL的浓度显示比pH7更好的溶解度曲线。然而，NaCl对蛋白质的回收率有显著影响——这在较高的pH尤其明显。
1C制剂-结果和分析
表1C的制剂(制剂1C.1至1C.18)均具有5.5的pH并包含10mg/mL bintrafuspalfa，在冻干(通过标准冻融循环)情况下进行测试，并且测试当以10mg/mL bintrafuspalfa构成时的重量渗透摩尔浓度(使用制药行业常用的冰点降低法)。
结果示于下表1H中。
表1H-可冻干性和重量渗透摩尔浓度测定
Figure BDA0003807020880000821
Figure BDA0003807020880000831
Figure BDA0003807020880000832
-这是添加bintrafusp alfa之前制剂的重量渗透摩尔浓度。
Figure BDA0003807020880000833
-外观按1-5分(从好到坏)，其中：1＝完全完好的冻干物；2-底部直径轻微收缩(超过Tg’)；3-底部直径收缩更明显(超过Tg’)；4-底部塌陷(初级干燥可能不完全)；5-彻底塌陷。
图2显示了，通过纳米差示扫描量热法测定，含有8％海藻糖(菱形)、4％海藻糖(正方形)和2％海藻糖(三角形)的制剂的Tg’(以℃表示)和NaCl浓度之间关系的图示。从冷冻干燥时的实用性的角度来看，不希望Tg′值低于-40℃。
数据表明，从平衡冻干活力和重量渗透摩尔浓度(即基本上等张的制剂)的角度来看，在40mM NaCl附近存在有希望的窗口。此外，从冻干的角度来看，4％和6％之间的海藻糖浓度似乎是可取的。更一般地，10∶1至1∶2，更优选5∶1至2∶1的张力调节性冻干保护剂与离子张力调节剂的摩尔比似乎在冻干性方面特别合适。
1D制剂-结果和分析
在对制剂1A-1C的实验之后，确定了在等张性、溶解度和可冻干性方面提供有利平衡的制剂窗口。表1D的制剂(制剂1D.1-1D.6)，所有这些制剂的pH为5.5并含有10mg/mL的bintrafusp alfa，以与制剂1C相同的方式测试可冻干性和重量渗透摩尔浓度，结果如下表1I所示。
表1I-进一步的可冻干性和重量渗透摩尔浓度测定(微调)
Figure BDA0003807020880000834
Figure BDA0003807020880000841
Figure BDA0003807020880000842
-这是添加bintrafusp alfa之前制剂的重量渗透摩尔浓度。
Figure BDA0003807020880000843
-外观按1-5分(从好到坏)，其中：1＝完全完好的冻干物；2-底部直径轻微收缩(超过Tg’)；3-底部直径收缩更明显(超过Tg’)；4-底部塌陷(初级干燥可能不完全)；5-彻底塌陷。
结果表明具有约40mM NaCl或20-50mM NaCl的制剂对于10mg/mL bintrafuspalfa制剂是最佳的，因为可冻干性在60mM NaCl时有所损害，而bintrafusp alfa在约20mMNaCl时开始沉淀，如用于分析目的的样品稀释过程中所观察到的那样。此外，糖，如海藻糖(蔗糖也是有效的替代物)在6％(w/v)左右(当然≥4.4％(w/v)是优选的)显示不同作用模式，可用于将10mg/mL的bintrafusp alfa配制成冻干剂型。
1E制剂-结果和分析
根据制剂1A-1D的实验建立了在等张性和可冻干性方面提供有利平衡的制剂窗口，进一步研究了这种窗口是否也为蛋白质提供足够的稳定性。为此，对表1E中的两种制剂进行了短期(3周)稳定性测试(在5℃、25℃和40℃)，结果表明，尽管两种制剂(在冻干和液态)通过了稳定性测试，但具有75mM NaCl和4％海藻糖(pH 5.5)的制剂对于冻干制剂来说不能充分冻干。药物的液体制剂(10mg/mL bintrafusp alfa、10mM L-组氨酸、5mM甲硫氨酸、40mM NaCl、6％(w/v)海藻糖、0.05％(w/v)聚山梨醇酯20，pH 5.5)确实显示良好的稳定性(5℃3个月，质量属性没有显著变化；虽然在6个月时可见颗粒有所增加，但其它质量属性仍保持在预期范围内)。
然而，这些早期稳定性测试表明，即使在5℃冷却时，bintrafusp alfa的液体制剂也可能不显示长期稳定性，因此设想冻干制剂将提供该问题的解决方案。然而，已知使用增加量的NaCl来溶解高浓度的bintrafusp alfa会对冻干产生不利影响，因此为了允许更高药物浓度的制剂，仍然存在许多问题。
也即是说，这些研究表明冻干制剂提供了一种潜在的解决方案，其中制剂显示某些溶液相储存稳定性挑战。
本实施例的结论
如果将pH和/或NaCl浓度保持在对于给定浓度的bintrafusp alfa的适当窗口内，其它制剂参数，例如缓冲体系、表面活性剂和其它赋形剂，显然可以显著变化，而不会不利地损害基本稳定性、溶解度、可冻干性和重量渗透摩尔浓度。对于10mg/mL bintrafuspalfa，确认以下制剂特别合适：
Figure BDA0003807020880000851
出人意料地，最佳pH(pH 5.5)在TGFβR2部分的pI的1个pH单位内。然而，较宽的pH范围，例如在pH 5-9之间，似乎是可接受的，特别是在添加氯化钠时。
氯化钠促进药物物质的溶解，但过多的NaCl会损害可冻干性。
然而，在该阶段，冻干制剂被认为最有可能成功。事实上，冻干制剂提供了一种潜在的解决方案，其中制剂显示某些溶液相储存稳定性挑战。然而，如果选择氯化钠作为离子强度的提供者，那么冻干制剂的最大药物浓度可能会受到限制，因为药物浓度越高，就需要越多的NaCl以促进溶解性和稳定性，但高浓度的盐对可冻干性有所损害。
实施例2-IgG：TGFβR2融合蛋白的高浓度液体制剂
一般概述
尽管实施例1提供了可行的药物组合物，但希望增加IgG：TGFβR2融合蛋白的浓度，无论是用于冻干组合物还是液体组合物，并研究这些能否承受更长时间的储存。为此，进行了进一步的制剂研究。
测试制剂列表
稳定性结果表明来自实施例1(2A.1)的候选制剂在液体形式中也是稳定的，因此该制剂用作实施例2中的参考样品。然后对4个另外的制剂(2A.2-2A.5)进行制剂筛选，以评估上浓缩(upconcentrating)bintrafusp alfa的可行性。这些制剂显示在表2A中。
表2A-上浓缩的制剂
Figure BDA0003807020880000861
Figure BDA0003807020880000871
结果与分析
表2A中列出的制剂是长期稳定性研究(在5℃下长达12个月)、加速稳定性研究(在25℃下长达6个月)和压力稳定性研究(在40℃下长达3个月)的对象。表2B显示了与药物浓度为20mg/mL的制剂2A.2的长期稳定性研究(在5℃)有关的分析结果。
表2B-制剂2A.2的长期稳定性研究结果
Figure BDA0003807020880000872
Figure BDA0003807020880000881
表2C显示了与药物浓度为35mg/mL的制剂2A.3的长期稳定性研究(在5℃下)有关的分析结果。
表2C-制剂2A.3的长期稳定性研究结果
Figure BDA0003807020880000882
Figure BDA0003807020880000891
表2D显示了与药物浓度为40mg/mL的制剂2A.4的长期稳定性研究(在5℃下)有关的分析结果。
表2D-制剂2A.4的长期稳定性研究结果
Figure BDA0003807020880000892
Figure BDA0003807020880000901
表2E显示了与长期稳定性研究(在5℃)和加速稳定性研究(在25℃)相关的分析结果，采用制剂2A.5，具有40mg/mL的药物浓度，但氯化钠浓度升高至60mM。
表2E-制剂2A.5的长期和加速稳定性研究结果
Figure BDA0003807020880000902
Figure BDA0003807020880000911
表2F显示在长期稳定性测试(5℃)、加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同的时间间隔内(从时间＝0到12个月)，表2A中所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的蛋白质稳定性，通过光学密度测量。在这些稳定性研究中，对任何分析批次都没有观察到蛋白质浓度的特别下降。
表2F-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃下储存后不同时间点的光学密度测量的蛋白质浓度
Figure BDA0003807020880000921
表2G显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的高分子量物质百分比(％HMW)，通过SE-UPLC测量。浓度越高，％HMW越高，除了2A.5(60mM NaCl)，它似乎比具有40mM NaCl的相应制剂(也含有40mg/mL bintrafusp alfa)更稳定。这表明较高的API浓度需要更多的NaCl来减轻聚集。
表2G-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％HMW
Figure BDA0003807020880000931
表2H显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的低分子量物质百分比(％LMW)，通过CE-SDS测量。在所有稳定性条件下，2A.5的％LMW都较低，这可能表明NaCl可以减轻较高药物浓度样品中的片段化。
表2H-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％LMW
Figure BDA0003807020880000932
Figure BDA0003807020880000941
表2I显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的％氧化水平，通过RP-UPLC测量。对于所有批次，在5℃±3℃和25℃±2℃观察到相似的氧化水平(％)相对稳定性(考虑了在各节段中作为比较报告的IRS氧化水平)，而在40℃±2℃观察到增加。由于分析节段(session)的可变性，5℃和25℃2-6M的高值可能会产生误导。
表2I-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％氧化
Figure BDA0003807020880000942
Figure BDA0003807020880000951
表2J显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的脱氨基形式(LC)百分比，通过IEX-HPLC测量。在5℃±3℃和25℃±2℃，所有测试样品随时间保持稳定，最后一个时间点2A.5仅略有增加。在40℃±2℃，％LC随时间增加。所有样品的脱酰胺水平相当，并且显然与制剂中的API浓度无关。
表2J-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％脱酰胺(LC)
Figure BDA0003807020880000952
表2K显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的％纯度，通过CE-SDS RED测量。在25℃±2℃观察到纯度略有下降，在40℃±2℃下降更明显。然而，所有制剂的趋势是相当的，并且似乎与浓度无关。
表2K-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％纯度
Figure BDA0003807020880000961
表2L显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的％主削波，通过CE-SDS RED测量。在所有条件下，所有制剂在所有时间点的％主削波的增加都相似，因此似乎与浓度无关。
表2L-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％主削波
Figure BDA0003807020880000962
Figure BDA0003807020880000971
表2M显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的％抗PD-L1生物活性。在所有稳定性条件下，随着时间的推移，没有观察到抗PD-L1部分的生物活性有显著变化。
表2M-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％抗PD-L1生物活性
Figure BDA0003807020880000972
Figure BDA0003807020880000981
表2N显示了在长期稳定性测试(5℃)，加速稳定性测试(25℃)和压力稳定性测试(40℃)下，在不同时间间隔(从时间＝0到12个月)，表2A中的所有4种上浓缩制剂(2A.2-2A.5)的％TGF-β生物活性。在40℃±2℃观察到TGF-β部分的生物活性随时间显著降低，所有制剂的程度相似。
表2N-制剂2A.2-2A.5在5℃、25℃和40℃储存后不同时间点的％TGF-β生物活性
Figure BDA0003807020880000982
Figure BDA0003807020880000991
结论
表2O总结了在上述稳定性研究中观察到的趋势。
表2O-用于测试表2A制剂的分析方案和一般观察结果
Figure BDA0003807020880000992
Figure BDA0003807020880001001
再次设想，如果将pH和/或NaCl浓度保持在对于给定浓度的bintrafusp alfa的适当窗口内，其它制剂参数，例如缓冲体系、表面活性剂和其它赋形剂，可以显著变化，而不会不利地损害基本稳定性、溶解度、可冻干性和重量渗透摩尔浓度。对于40mg/mL bintrafuspalfa，确认以下制剂特别合适：
Figure BDA0003807020880001002
与实施例1中确定的先导候选物的主要区别在于更高浓度的bintrafusp alfa，为40mg/mL而不是10mg/mL，以及增加的氯化钠量，从40mM至60mM。此外，这些研究表明实施例1和本实施例的液体制剂实际上是可行的，并且如果认为液体制剂的储存更实用，则冻干/重建可能不是严格必需的。
进一步的研究还显示，对于给定浓度的bintrafusp alfa，NaCl的最佳量如下：
·10-20mg/mL API可用40mM NaCl稳定
·40mg/mL，一般优选60mM NaCl
·60mg/mL有海藻糖，一般优选100mM NaCl
·60mg/mL无海藻糖，一般优选150mM NaCl
这些研究还表明，具有高浓度IgG：TGFβR2的液体制剂确实可行，甚至可能比冻干制剂更优选，尤其是在使用更高浓度氯化钠的情况下。
实施例3A——进一步的筛选研究——步骤1A(pH、离子强度和蛋白质浓度筛选)
一般概述
进行进一步的制剂研究以评估pH(pH 5.0-7.5)、离子强度(40-150mM离子盐，例如氯化钠)和蛋白质浓度(20、40和60mg/mL)的变化，在作为示例性缓冲体系的10mM组氨酸缓冲体系中。
测试制剂列表
对20种制剂进行初筛，以确定可行的pH和最佳pH、可行的和最佳的离子强度，以及可行的和最佳的蛋白质浓度。此初筛的制剂显示在表3A中。
表3A-用于初始pH、离子强度和蛋白质浓度筛选的制剂
Figure BDA0003807020880001011
Figure BDA0003807020880001021
结果与分析
表3A中的制剂在DoE研究中进行了评估。具体地，检验了它们的去折叠温度。此外，将它们暴露于热压力(40℃，4周)和光压力(765W/m2下7小时)，并通过各种分析技术分析受压力的样品。
关于受热压力的样品，可以通过参考以下分析来构建重要的模型，尽管在初步分析期间也使用了其它附加分析技术：
·HMW，通过SE-UPLC
·同种型概况，通过ICE3
·纯度/LMW，通过CGE-SDS(Red/NoRed)
·氧化形式，通过RP-UPLC
·脱酰胺形式，通过IEX-HPLC
·去折叠温度，通过纳米-DSC
关于受光压力的样品，可以通过参考以下分析来构建重要的模型，尽管在初步分析期间也再次使用了其它附加分析技术：
·HMW，通过SE-UPLC
·氧化形式，通过RP-UPLC
·同种型概况，通过iCE3
去折叠温度
图3和图4一起表明，从去折叠温度的角度来看，5.7-6.2范围内的pH可能是最佳的，并且更高的蛋白质浓度需要更高的离子强度来提供构象稳定性。
表3B显示了通过纳米DSC测量的表3A的制剂的去折叠温度。
表3B-表3A制剂的去折叠温度(Tm1-Tm4)
Figure BDA0003807020880001022
Figure BDA0003807020880001031
热压力
表3C显示浊度，其特征在于表3A的制剂的热压力测试时的高乳光值(范围从7NTU到18NTU)。在+40℃±2℃孵育4周后，任何样品均未观察到显著变化。
表3C-表3A的制剂在40℃热压力4周之前和之后的浊度
Figure BDA0003807020880001032
Figure BDA0003807020880001041
表3D显示了在表3A的制剂的热压力测试中脱酰胺形式的百分比。在T0时，与标准品相比，没有观察到任何样品的显著差异，除了具有高pH和相对于API浓度相对较低的离子强度的样品——例如样品#15，其％脱酰胺形式的值比其它样品高，这可能归因于高蛋白质浓度、高pH和低离子强度的协同作用。同时，在+40℃±2℃下4周热压力增加pH与增加％脱酰胺形式相关。总体而言，离子强度和蛋白质浓度对脱酰胺百分比几乎无影响。5.0-6.2范围内的pH似乎是最佳的，而pH在7.1和7.5之间的制剂在这种情况下表现不佳。
表3D——在40℃热压力4周之前和之后表3A的制剂的％脱酰胺形式
Figure BDA0003807020880001051
Figure BDA0003807020880001061
图5和图6一起表明离子强度和蛋白质浓度对热压力后的％LMW物质几乎没有影响，而pH具有显著影响，在这种情况下，pH 5.3-6.7之间的pH区域显然是最佳的。然而，低离子强度与在相似pH水平下的片段化相关。
图7和图8一起表明离子强度应随蛋白质浓度的增加而增加，以避免聚集体形成并最终导致蛋白质沉淀。此外，在热压力后％HMW物质的情况下，pH 5.0-6.6之间的pH显然是最佳的。
在时间＝0时，在CGE监测的所有物质中(在还原条件下)，样品之间在纯度方面没有显著差异，除了样品#19，其主削波略有增加。
在40℃热压力4周后，所有具有pH＞7或pH＜5.5的样品都显示出较低的总体纯度，与离子强度或蛋白质浓度无关。在低pH条件下(＜pH 5.5)，低pH(pH 5.0和较小程度的pH5.3)导致峰7杂质增加，并且还观察到主削波(峰6)增加。
在时间＝0时，cIEF显示样品之间没有显著差异。
图9和他处的数据表明离子强度和蛋白质浓度对同种型的影响在热压力后不显著，而同种型分布受pH影响。来自图9的数据表明5.3-5.9的pH在同种型的情况下是最佳的。
表3E显示了在40℃热压力4周后的同种型簇。
表3E-40℃热压力4周后的同种型簇
Figure BDA0003807020880001062
Figure BDA0003807020880001071
Figure BDA0003807020880001081
图10和图11一起表明离子强度和蛋白质浓度对氧化水平几乎没有影响，只有高于7.0的pH对氧化水平有显著影响。然而，在热促进氧化的情况下，5.3-6.6(最优选5.7-6.2)范围内的pH似乎是最有利的。
光压力
表3F显示了光压力之前和之后的％HMW物质。尽管在pH 5.2和6.6之间似乎存在较低水平的聚集体和离子强度的显著影响，但光压力会增加所有样品的％HMW。
表3F-光压力(7小时，765W/m2)之前和之后的％HMW物质
Figure BDA0003807020880001082
Figure BDA0003807020880001091
暴露于光压力的样品的cIEF测量表明与参考标准品相比没有显著差异，除了样品8、15、16、18和19。
表3G显示了光压力后的同种型簇。
表3G-光压力(7小时，765W/m2)后的同种型簇
Figure BDA0003807020880001092
Figure BDA0003807020880001101
Figure BDA0003807020880001111
图12、图13和图14一起表明，在光压力条件下，离子强度、蛋白质浓度和pH都不会对％氧化产生显著影响。
结论
图15是2D和3D等值线图，其中合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为具有可变pH和离子强度(以mM NaCl给出)的制剂空间(具有固定蛋白质浓度：20mg/mL)内的等值线(2D图中)和曲面(3D图中)。这表明在这种IgG：TGFβR2浓度下的最佳条件是pH5.4-6.1，例如pH 5.7，和40-60mM NaCl，例如40mM NaCl的离子强度。因此，对于包含10-30mg/mL IgG：TGFβR2融合蛋白的药物组合物，需要5.2-6.3的pH以及最小的离子强度，例如10mM NaCl，优选10-80mM NaCl范围内的离子强度。
图16是2D和3D等值线图，其中合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为具有可变pH和离子强度(以mM NaCl给出)的制剂空间(具有固定蛋白质浓度：40mg/mL)内的等值线(2D图中)和曲面(3D图中)。这表明该浓度的IgG：TGFβR2的最佳条件是pH 5.7-6.1，例如pH 5.9，和50-70mM NaCl，例如60mM NaCl的离子强度。因此，对于包含30-50mg/mLIgG：TGFβR2融合蛋白的药物组合物，需要5.5-6.5的pH以及最小的离子强度，例如20mMNaCl，优选30-90nM NaCl范围内的离子强度。
图17是2D和3D等值线图，其中合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为具有可变pH和离子强度(以mM NaCl给出)的制剂空间(具有固定蛋白质浓度：60mg/mL)内的等值线(2D图中)和曲面(3D图中)。这表明在这种IgG：TGFβR2浓度下的最佳条件是pH5.7-6.1，例如pH 5.9，和130-150mM NaCl，例如150mM NaCl的离子强度。在这种浓度的IgG：TGFβR2下的最佳条件也在pH 5.7-6.1(例如pH 5.9)和80-90mM NaCl(例如80mM NaCl)的离子强度下发现。因此，对于包含50-70mg/mL IgG：TGFβR2融合蛋白的药物组合物，需要5.5-6.5的pH以及最小的离子强度，例如50mM NaCl，优选60-200nM NaCl范围内的离子强度。
实施例3B——进一步的筛选研究——步骤1B(缓冲剂筛选)
一般概述
跟随实施例3A的结果，进行实验以确认实施例3A的结果并探索替代缓冲剂。因此，选择了三种缓冲剂类型，以覆盖5.7-6.2的pH范围。根据实施例3A的结果，基于蛋白质浓度优化离子强度。
测试制剂列表
表3H显示了在该具体筛选中测试的的12种制剂，加上参考制剂。
表3H-测试制剂
Figure BDA0003807020880001121
Figure BDA0003807020880001131
结果与分析
在热压力条件(40℃下4周)和光压力条件(765W/m2下7小时)下研究表3H中列出的制剂。通过以下方法检验受热压力的样品，尽管只有粗体标示的方法显示出显著差异：
Figure BDA0003807020880001132
同时通过以下方式检测受光压力样品：
·HMW，通过SE-UPLC
·同种型概况，通过ICE3
·氧化形式，通过RP-UPLC
·纯度/LMW，通过CGE-SDS(Red/NoRed)
结合热和光压力条件的定性结果显示在下表3I中。
表3I显示了对表3H的所有制剂的热压力和光压力测试的定性结果(通过或失败)。
表3I-结合表3H制剂的热压力和光压力的定性结果(N.T.＝未测试)
Figure BDA0003807020880001133
Figure BDA0003807020880001141
Figure BDA0003807020880001151
结论
结果表明组氨酸是三种测试缓冲剂中最稳定的缓冲剂，包括在高蛋白质浓度下，尽管其它缓冲剂，尤其是琥珀酸盐缓冲剂，在适当条件下也适用。此外，这些测试强调了在更高蛋白质浓度(例如40和60mg/ml)下操作的可行性。
实施例3C——进一步的筛选研究——步骤2A(赋形剂筛选)
一般概述
根据实施例3B的结果，进行赋形剂筛选，保持缓冲剂固定为10mM组氨酸，pH 5.9，同时仍然在60mM和100mM之间变化离子强度且在40-60mg/mL之间变化蛋白质(bintrafuspalfa)浓度。本实施例中的所有制剂中还包含5mM甲硫氨酸，以减轻先前分析中不言而喻的氧化效应。
待筛选的赋形剂是：
·糖多元醇，如甘露醇、海藻糖、山梨糖醇；
·氨基酸，如：精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酸；和
·表面活性剂，如：吐温20和Kolliphor 188
相关制剂在进行进一步分析之前将以下列方式进行压力测试：
·热压力(40℃长达12周)
·光压力(在765W/m2下7小时后)
·F/T压力(3X循环-25℃至RT后)
·机械压力(在300rpm下3天后)
测试制剂列表
表3J显示了在该具体筛选中测试的48种制剂
表3J-测试制剂
Figure BDA0003807020880001161
Figure BDA0003807020880001171
Figure BDA0003807020880001181
Figure BDA0003807020880001191
Figure BDA0003807020880001201
结果与分析
在热压力条件(40℃下4周和8周)、光压力条件(765W/m2下7小时)、冻融压力(3个F/T循环，-25℃至室温)和机械压力(3天300rpm)下研究表3J中所列制剂。
通过以下方法检测经热压力样品：
Figure BDA0003807020880001211
通过以下方法检查经光压力样品：
Figure BDA0003807020880001212
通过以下方法检查F/T和经机械压力样品：
·HMW，通过SE-UPLC
·纯度/LMW，通过CGE-SDS(Red/NoRed)
热压力
图18和图19一起表明，蛋白质浓度对热压力下的％HMW有显著影响，但50mM精氨酸和100mM赖氨酸是4周内表现最好的“各种赋形剂”，而100mM精氨酸和100mM赖氨酸是8周热压力内表现最好者。
图20和图21表明山梨糖醇(蛋白质浓度为40和50mg/mL)和甘露醇(蛋白质浓度为60mg/mL)显示出最高的主削波，100mM精氨酸的％LMW最高，海藻糖最低，并且蛋白质浓度在热压力下4周后没有显著影响。
图22表明海藻糖和50mM精氨酸在热压力下显示最低的％脱酰胺，而L-谷氨酸、赖氨酸和脯氨酸显示最高值。
图23和24一起表明聚山梨醇酯20显示优于Kolliphor 188的性能，并且山梨醇实际上在4周热压力后显示最低的％氧化形式。同时，50mM L-精氨酸在8周的热压力下似乎显示出最高的氧化形式(蛋白质浓度是固定的，因为它显示没有影响)。
图25表明脯氨酸在热压力下最接近目标％簇1，即52％(蛋白质浓度是固定的，因为它显示没有影响)。
图26表明甘露醇和赖氨酸在热压力下显示比目标更低的％簇2，其为12％。
光压力
图27表明100mM精氨酸和赖氨酸显示最低的％HMW，并且在受光压力条件下，蛋白质浓度对％HMW有显著影响。
图28和图29一起表明100mM精氨酸、山梨糖醇和甘露糖醇(后两者仅在60mg/mL蛋白质浓度下)显示最高的％主削波，而50mM精氨酸在光压力条件下显示最高的％LMW。
图30表明100mM精氨酸在光压力条件下提供最低的％氧化。
冻融压力
图31表明甘露醇显示最高的％HMW，并且在冻融压力下蛋白质浓度对％HMW没有显著影响。
机械压力
图32和图33一起表明聚山梨醇酯20在防止机械压力下的聚集方面优于kolliphor188(特别是与山梨糖醇、精氨酸和赖氨酸组合)。
总体合意性
基于因素、压力测试和结果的平衡计算不同赋形剂的总体合意性。
图34表明蛋白质浓度为40或50mg/mL的制剂相对于60mg/mL的制剂总体上更合意。
对于具有40mg/mL蛋白质浓度的制剂，特别理想的多元醇是海藻糖，特别理想的氨基酸是50mM精氨酸和赖氨酸。
对于具有50mg/mL蛋白质浓度的制剂，特别理想的多元醇是海藻糖，特别理想的氨基酸是50mM精氨酸和赖氨酸。
对于具有60mg/mL蛋白质浓度的制剂，特别理想的多元醇是海藻糖，特别理想的氨基酸是50mM精氨酸和赖氨酸。
图35表明，与kolliphor 188相比，在几乎所有条件下，聚山梨醇酯20的合意性略高。
实施例3D-步骤2B(赋形剂组合和微调)
一般概述
基于步骤2A的总体合意性结果，决定继续使用40和50mg/mL的蛋白质浓度并研究糖和氨基酸之间的协同作用，制备组合海藻糖和精氨酸/赖氨酸的制剂。
测试制剂列表
表3K显示了在该具体筛选中测试的12种制剂(+参考)。
表3K-测试制剂
Figure BDA0003807020880001241
Figure BDA0003807020880001251
结果与分析
在热压力条件(40℃下4周、8周和12周)、光压力条件(765W/m2下7小时)和机械压力(300rpm 3天)下研究表3K所列的制剂。
通过以下方法检测经热压力样品：
Figure BDA0003807020880001261
通过以下方法检查经光压力样品：
Figure BDA0003807020880001262
通过以下方法检查机械压力样品：
·HMW，通过SE-UPLC
·纯度/LMW，通过CGE-SDS(Red/NoRed)
表3L显示了在该具体筛选中测试的12种制剂(+参考)的纳米-DSC结果。
表3L-制剂的Nano-DSC结果
Figure BDA0003807020880001263
Figure BDA0003807020880001271
表3L表明制剂#89和#91具有更高的Tm值，表明这些制剂的构象稳定性更高。比较#89和#90，似乎增加的吐温20浓度会产生稳定效果。
图36表明：％HMW的增加在含有L-精氨酸和含有L-赖氨酸的组合中是相当的；在50mg/ml蛋白质浓度的制剂中观察到略高的值，其结合了赋形剂(#96，#97)；仅含1种赋形剂(#100和#101)的制剂获得了甚至更高的值，而含EDTA的制剂则获得了较大增幅。制剂#89-#95的结果优于表2A的2A.5(相同蛋白质浓度)。
图37表明几乎所有制剂中％LMW的增加是相当的，在含有EDTA的制剂中显示略高的值。
图38表明在13周的热压力后氧化没有显著差异，仅含EDTA的制剂的值略低。
图39表明所有制剂在热压力后都显示相似的脱酰胺作用。
图40表明所有制剂的纯度略有下降，尽管各制剂是相当的。
图41表明在热压力后所有制剂中的主削波(峰6)增加，观察到的增加最高的是含有EDTA的制剂(#98)和仅含有海藻糖和较低量NaCl的制剂(#99和参考)。这些相同制剂的特征还在于峰7杂质的较高值。
图42表明在对制剂施加光压力后观察到更高的％HMW增加：制剂具有赖氨酸于50mg/ml的较高蛋白质浓度下；具有EDTA；和仅有1种赋形剂。
图43表明，在所有制剂经历光压力后，％氧化都会增加，在含有EDTA的制剂中观察到的值略高，而在仅含有海藻糖的制剂中观察到的值略低(#101)。
图44表明所有制剂在光压力后的LMW水平没有显著差异。
图45表明在光压力后纯度没有显著变化，除了制剂#99在压力后显示稍大的下降。
图46表明在光压力后主削波水平没有发生显著变化。
图47表明机械压力后％HMW只有非常轻微的变化，尽管含EDTA的制剂的起始值相对较高，并且在制剂#91和#95的情况下观察到更显著的增加。
图48表明机械压力后％LMW没有显著变化，在制剂#89和#94中仅观察到适度的LMW增加。
图49表明制剂#95在机械压力后％纯度显著降低，而其它制剂仅观察到轻微变化。
图50表明机械压力后的％主削波没有显著变化，除了含有最高量赖氨酸的制剂#95。
结论
从在该制剂筛选中收集的数据来看，在所有条件下表现最佳的制剂是具有赋形剂组合的那些制剂，特别是具有与L-精氨酸组合的海藻糖的那些。蛋白质浓度为50mg/ml的2种制剂显示与40mg/ml相当的性能，表明更高的浓度确实是可行的。表2A的2A.5，含有40mg/mL bintrafusp alfa和60mM NaCl，用作热压力测试中的比较，似乎在很大程度上与具有赋形剂组合的制剂相当。
总体而言，表2A的2A.5、制剂#89、制剂#91和制剂#96被认为是特别有希望的候选制剂。
实施例4-进一步的制剂研究
一般概述
该实施例的总体计划是浓度为20-25mg/mL的bintrafusp alfa的初筛样品，以评估pH、缓冲剂和赋形剂。此后，在随后的表面活性剂筛选之前，对选择的制剂进行了上浓度和短期稳定性测试，最终对4-5种高浓度制剂进行了短期稳定性测试。
测试制剂列表
表4A显示了20种制剂(F1-F20)，包括要在该具体筛选中测试的参考制剂(F1)。
表4A-测试制剂
Figure BDA0003807020880001291
Figure BDA0003807020880001301
Figure BDA0003807020880001311
结果与分析
根据表4B中列出的以下概要储存和测试制剂(进行的测试用“x”标记)。
表4B
Figure BDA0003807020880001312
Figure BDA0003807020880001321
在这种情况下，T0在时间0；T-FT在3个冻融循环后(图51)；T-2w和T-4w分别表示在25℃或40℃保持2周和4周后。
图52是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的pH如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
各制剂的目标pH列于表4A中，图52说明了这种变化。
对于所有制剂，目标pH值(±0.1)在T0达到。
在储存4周后，大多数制剂的pH值没有变化。
对于蛋白质浓度为50mg/ml的三种制剂，检测到较低的pH值：
·F12(His缓冲剂pH 5.7)在40℃下储存4周。
·F17(无缓冲剂pH 5.7)在40℃下储存4周。
·F19(含山梨糖醇，pH6.0)在25℃下储存2和4周。
图53是显示制剂F1-F20中各自的重量渗透摩尔浓度的柱状图。
除F15(检测到254mOsmol/kg的较低重量渗透摩尔浓度值)外，所有制剂均达到了260-340mOsmol/kg(绿线)的规格范围内的重量渗透摩尔浓度值。
图54是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的浊度如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
浊度似乎取决于蛋白质浓度——在更高蛋白质浓度的样品中检测到更高的浊度值。大多数制剂的浊度值通常没有变化，但观察到以下制剂的浊度值增加了0.5至2.0：
·F3(His缓冲剂pH 5.7)于T4w-25℃
·F13(His缓冲剂pH 6.0)于T2w-25℃和T2w-40℃
·F17(无缓冲剂pH 5.7)于T2w-25℃和T4w-25℃
对于以下制剂，观察到4.1至7.4的增加：
·F19(含山梨糖醇，pH 6.0)于T2w-25℃和T4w-25℃
视检根据表4C和表4D中列出的代码进行并报告。
表4C-颗粒可见性代码
可见颗粒分数 描述
0 5秒内无颗粒可见
1 5秒内几乎看不到颗粒
2 5秒内可见中等数量的颗粒
10 大量颗粒直接可见
表4D-可见特征的代码
Figure BDA0003807020880001331
在各种上述压力条件和时间点下的视检结果列于下表4E、表4F和表4G中。
表4E-时间＝0和3个FT循环后的视检结果
Figure BDA0003807020880001332
Figure BDA0003807020880001341
表4F-在25℃和40℃下两周后视检结果
Figure BDA0003807020880001342
Figure BDA0003807020880001351
表4G——在25℃和40℃下四周后视检结果
Figure BDA0003807020880001352
Figure BDA0003807020880001361
根据表4A进行的分析结果示于表4H中。
表4H表4A的制剂在压力之前和之后的分析结果(各结果的分类根据表4J显示为上标)
Figure BDA0003807020880001371
Figure BDA0003807020880001381
Figure BDA0003807020880001382
Figure BDA0003807020880001391
Figure BDA0003807020880001401
Figure BDA0003807020880001402
Figure BDA0003807020880001411
Figure BDA0003807020880001412
Figure BDA0003807020880001421
Figure BDA0003807020880001431
Figure BDA0003807020880001432
Figure BDA0003807020880001441
Figure BDA0003807020880001442
Figure BDA0003807020880001451
Figure BDA0003807020880001461
Figure BDA0003807020880001462
Figure BDA0003807020880001471
Figure BDA0003807020880001481
表4H的分析结果基于表4J中定义的阈值进行分类(参见表4H中的上标数字)。
表4I-适用于表4H中分类的阈值
Figure BDA0003807020880001482
Figure BDA0003807020880001491
就确定bintrafusp alfa浓度的UV光谱(SoloVPE)分析而言，注意到在时间＝0时达到所有目标浓度。在施压后未观察到显著变化。
对于所有制剂，检测到的粘度相对较低，约为1.0-1.7mPa*s，对于含有50mg/ml蛋白质浓度的制剂(F9-F20)观察到较高粘度值(1.6-1.7mPa*s)。
在T0，在所有制剂中检测到最小的亚可见颗粒。2周和4周后，在25℃储存的F17(无缓冲体系，pH 5.7)和F19(含山梨糖醇的制剂)和在40℃储存的F8(含山梨糖醇的制剂)观察到亚可见颗粒的增加。在25℃和40℃储存4周后，F5显示出最大的可见颗粒增加。对于大多数制剂，检测到低颗粒浓度(低于1,000个≥5μm的颗粒)。
就HP-SEC结果而言，注意到在25℃储存4周后，F19的LMW肩峰正在演变。然而，与HMW不同，LMW并未被整合到整体单体含量结果中。一般而言，对于所有制剂，在25℃和40℃储存长达4周后，观察到单体含量的降低和HMW含量的增加。与具有较高蛋白质浓度的其它制剂相比，含有精氨酸的制剂显示较少的单体含量降低。在较高的蛋白质浓度下，pH6.0似乎优于pH 5.5和5.7(测试His作为缓冲体系)。F16和F20的比较表明，更多的精氨酸和更少的NaCl可能对蛋白质具有稳定作用。
在脱酰胺方面(通过IEX-HPLC评估，峰2含量％-峰2是最大峰，峰2大小的任何减小都表明脱酰胺)，对于所有制剂，对于T0峰2，测量>93％的相对峰面积。在储存后观察到所有制剂的峰2的相对峰面积减小，这在40℃比在25℃时更明显——因此，观察到“LC Deam峰”组(这是不同于峰2的所有峰的合并)的峰面积增加。
在FT之后，还观察到“LC Deam峰”的相对峰面积略有增加，这与在25℃储存2周相当。对于更高浓度的制剂，在以下方面获得了最有希望的结果：
·25mg/ml蛋白质浓度：
οHis缓冲体系pH 5.5和5.7(F2和F3)
ο含有精氨酸和山梨糖醇的制剂(F7和F8)
·50mg/ml蛋白质浓度：His缓冲体系pH 5.5和5.7(F11和F12)
图55是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的纳米DSC迹线的Tm2峰的温度如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
图56是显示所有制剂F1-F20在压力测试的不同时间点的纳米DSC迹线的起始温度Tm如何变化的柱状图，包括(各制剂从左到右列出的柱)：时间＝0；3个FT周期后；25℃2周后，40℃2周后，25℃4周后，40℃4周后。
图55和图56一起表明所有制剂的Tm2值均高于66℃，并且在压力或储存期间未观察到显著变化。
就同种型概况而言，没有显著变化。在时间＝0时，检测到以下相对峰面积：
→簇1约56％
→簇2约11％
→簇3约21％
→簇4约12％
冻融似乎对样品的同种型概况没有影响。在40℃储存4周后，请注意以下几点：
→簇2的相对峰面积减少
→簇4的相对峰面积增加
cGE在还原和非还原条件下进行，其结果列于表4H中。在还原条件下，所有制剂在时间＝0时都获得了非常相似的结果(最大和最小纯度[％]之间的差异为0.6％)。所有制剂的纯度在40℃储存4周后均有所下降，尽管这种下降对F16、F18和F20最不显著，而对F1、F8、F12和F17最显著。纯度的降低主要伴随着主削波[％]的增加。此外，虽然其它杂质的含量增加，但这些对制剂的整体纯度影响很小。
对于非还原条件下的cGE，在时间＝0，所有制剂都观察到非常相似的结果(完整分子的最大和最小校正面积[％]之间的差异为1.1％)。所有制剂的完整分子的相对峰面积在40℃储存4周后均有所下降，尽管这种下降对F5、F6、F14和F15最不显著，而对F2、F19和F12最显著。完整分子的校正峰面积的减少伴随着LMW物质的相对峰面积的增加(T4w_40℃)。
通过RP-UPLC测量的氧化记录在表4H中。在40℃储存4周后，大多数样品观察到完整的Met516含量降低，同时氧化的Met516含量增加，但F4、F9和F15最明显。
结论
在时间＝0时，所有制剂F1-F20均达到目标pH、浓度和重量渗透摩尔浓度值。观察到少量可见和亚可见颗粒，且所有制剂的粘度都相对较低。通过HP-SEC，所有制剂中主峰占98％。通过cGE，还原条件下所有制剂的纯度约为94％，非还原条件下所有制剂的纯度均大于96％。
冻融(FT)压力对制剂的稳定性没有显著影响。此外，在FT压力后，pH、浓度、可见和亚可见颗粒的数量、浊度和单体含量基本保持不变。
在25℃和40℃储存长达4周的样品显示以下特征：
·pH基本不变
·浊度值增加，与储存在40℃的样品相比，储存在25℃的样品观察到更高的值
·在25℃和40℃储存4周后观察到更多可见颗粒
·蛋白质浓度不变
·在F5、F8、F17和F19中观察到相对大量的亚可见颗粒
·含有精氨酸的制剂随着时间的推移单体含量减少较少(HP-SEC)
·cGE：所有制剂的纯度(％，还原条件)以及完整分子的含量(％，非还原条件)在40℃储存4周后均下降→F12的这两个参数表现最差。
最后，通过RP-UPLC测量的％氧化表明，在时间＝0时，对于所有制剂，完整的Met516介于96-97％之间，并且在40℃储存持续4周后观察到完整的Met516的减少和氧化的Met516的增加。
含有25mg/mL bintrafusp alfa的制剂(F2-F8)似乎在5.5的pH下表现最好，尽管注意到柠檬酸盐缓冲剂在pH 6.0下表现最好。当精氨酸包含在制剂中时，在该浓度下也观察到有益效果。
含有50mg/mL bintrafusp alfa的制剂(F9-F20)似乎在5.5的pH下表现最好，尽管在这个浓度下，组氨酸缓冲剂相对于其它缓冲剂在pH 6.0下表现最好。根据较低的浓度，精氨酸也被认为是有益的。
目前正在对下述有希望的候选者F13、F16、F20和F21-F23进行进一步测试，如表4K中详述。
表4K-该实施例产生的候选制剂
Figure BDA0003807020880001521
Figure BDA0003807020880001531
实施例5-进一步的制剂研究
一般概述
为了进一步检查离子张力调节剂与糖和/或氨基酸组分联合稳定IgG：TGFβR融合蛋白的适用性，在此类制剂中测试了不同的IgG：TGFβR融合蛋白。具体而言，测试了具有不同IgG类别、不同互补位和不同TGFβR部分的IgG：TGFβR融合蛋白。
测试的IgG：TGFβR融合蛋白列表
测试了以下三种抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白：
·bintrafusp alfa(轻链和重链序列分别对应于SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8)
·融合蛋白2(轻链和重链序列分别对应于SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34)
·融合蛋白3(轻链和重链序列分别对应于SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18)
测试制剂列表
比较了表5A中所示的制剂(所有制剂另含有40mg/ml融合蛋白、10mM组氨酸缓冲剂、0.05％吐温20、5mM甲硫氨酸，pH 5.9)：
表5A测试制剂
Figure BDA0003807020880001532
Figure BDA0003807020880001541
结果与分析
表5A中列出的制剂是压力稳定性研究的对象(在40℃4周)。
图57是通过SE-UPLC显示％高分子量(％HMW)物质的柱状图。与上述结果一致并通过统计评估进一步证实，精氨酸可减少聚集，增加NaCl的量同样可以稳定蛋白质(即使在没有精氨酸的情况下)。
图58是显示通过CGE-NRED测量的％低分子量(％LMW)物质的柱状图。与较早的结果一致并通过统计评估进一步证实，虽然海藻糖可以防止片段化，但精氨酸往往会增加片段化，尽管精氨酸的作用可以被海藻糖的稳定作用所掩盖。
表5B显示了通过微型-DSC测量的去折叠温度。对于任何测试的制剂，未观察到去折叠温度的显著变化。
表5B制剂的微型-DSC结果
Figure BDA0003807020880001542
Figure BDA0003807020880001551
*无材料余下供测量
样品的三级结构通过荧光测量并且在任何样品中都没有观察到三级结构的损失。
结论
通过合意性图进一步分析所收集的各融合蛋白的数据。
例如，图59显示了3D等值线图，其中的合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为制剂空间内的曲面，其中对于测试的抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，海藻糖浓度和离子强度(以mM NaCl给出)可变。在这些图中，精氨酸保持在100mM的恒定浓度，因为发现这是最合意的(也参见图60和61)。
图60显示了3D等值线图，其中的合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为制剂内的曲面，其中对于测试的抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，精氨酸浓度和离子强度(以mM NaCl给出)可变。在这些图中，海藻糖保持在200mM的恒定浓度，因为发现这是最合意的(也参见图59和61)。
图61显示了3D等值线图，其中的合意性参数(反映总体响应评估中的因素平衡)表示为制剂内的曲面，其中对于测试的各抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白，精氨酸浓度和海藻糖浓度可变。在这些图中，离子强度(以mM NaCl给出)保持在100mM的恒定浓度，因为发现这是最合意的(也参见图59和60)。
总体而言，发现对于测试的抗PD-L1(IgG)：TGFβR2融合蛋白使用增加量的离子强度、氨基酸组分和二糖是合意的，这也由合意性图反映，这表明使用增加浓度的所有三种组分是可取的。
结论总体概要
实施例1表明：
·相对接近关键蛋白质结构域之一(即TGFβR2部分)的pI的pH对于蛋白质溶解度和稳定性出人意料地有利。
·最小离子强度(合适地由氯化钠提供)是优选的，以促进蛋白质的溶解。
·至少从蛋白质溶解度的角度来看，通常需要更高的离子强度来支持高蛋白质浓度。
·冻干有助于长期储存制剂，并且冻干制剂可以很容易地重建。
·海藻糖有助于冻干，但可能会考虑替代品。
·如果使用过多的氯化钠来获得更高的离子强度，例如支持更高的蛋白质浓度，则冻干变得更具挑战性。在这种情况下，可以考虑替代离子强度提供者。
实施例2表明：
·实施例1的制剂，当以液体形式配制时，从长期储存稳定性的角度来看实际上是可行的。
·可以增加蛋白质浓度，特别是在液体制剂中，同时保持长期储存稳定性方面的活力。
·具有较高浓度相关蛋白质的制剂往往受益于较高的离子强度(例如较高的NaCl浓度)。
·令人吃惊的是，NaCl还支持蛋白质溶解度和蛋白质稳定性。
·组氨酸显然是这些制剂的良好缓冲剂，尽管可以考虑替代品。
实施例3表明：
·更高的蛋白质浓度通常需要更高离子强度的支持，这加强了先前的发现。
·较高的蛋白质浓度可能受益于稍高的pH，尽管仍比通常预期的更接近TGFβR2组的pI。
·各种缓冲剂都是可行的，只要pH适合蛋白质和缓冲剂，尽管不同缓冲剂的最佳pH可能略有不同。组氨酸缓冲剂似乎提供了最佳性能。
·对于不同的压力条件(热、光、机械、冻融)，某些赋形剂优于其它赋形剂，这可能会因片段化、构象稳定性、聚集、同种型、脱酰胺、氧化、混浊等不同因素而改变。
·精氨酸、海藻糖和赖氨酸似乎是表现最好的赋形剂，尽管它们的相对排名因蛋白质浓度而异。
·海藻糖的性能通常优于其它糖组分，例如甘露醇和山梨糖醇。
·精氨酸被证明是一种极好的稳定剂，尤其是防止聚集。
·聚山梨醇酯20似乎略优于kolliphor 188表面活性剂，特别是在减少聚集方面。
·总体而言，海藻糖和精氨酸在不同相对摩尔比的组合证明是有利的。
实施例4表明：
·精氨酸可能(部分)替代NaCl，作为离子强度的来源。
·无缓冲体系似乎不太有利。
·对于高蛋白质浓度，稍高的pH似乎效果更好。
实施例5进一步证实增加量的离子强度、氨基酸组分和糖有利于稳定IgG：TGFβR融合蛋白。
序列表
<110> 阿雷斯贸易股份有限公司(ARES TRADING SA)
葛兰素史克知识产权（第四）有限公司(Glaxosmithkline Intellectual Property(No. 4) Ltd.)
<120> IgG:TGFβRII融合蛋白组合物
<130> P19-242 WO-PCT
<150> EP19219008.0
<151> 2019-12-20
<150> EP20186428.7
<151> 2020-07-17
<150> EP20194928.6
<151> 2020-09-07
<160> 35
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 1
Ser Tyr Ile Met Met
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 2
Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 3
Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 4
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 5
Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 6
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Val
1 5 10
<210> 7
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 7
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 8
<211> 607
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 8
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
465 470 475 480
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
485 490 495
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
500 505 510
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
515 520 525
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
530 535 540
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
545 550 555 560
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
565 570 575
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
580 585 590
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
595 600 605
<210> 9
<211> 592
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp
20 25 30
Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn
35 40 45
Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
50 55 60
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
65 70 75 80
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
85 90 95
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
100 105 110
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
115 120 125
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
130 135 140
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
145 150 155 160
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
165 170 175
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln Val
180 185 190
Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu Gly Val Ala Ile Ser Val Ile
195 200 205
Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser
210 215 220
Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys Leu Met Glu Phe Ser Glu His
225 230 235 240
Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys
245 250 255
Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp
260 265 270
Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu
275 280 285
Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu Thr Val Ala Val Lys Ile Phe
290 295 300
Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser
305 310 315 320
Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu
325 330 335
Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe
340 345 350
His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Thr Arg His Val Ile Ser
355 360 365
Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala
370 375 380
His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile
385 390 395 400
Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu
405 410 415
Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr
420 425 430
Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg
435 440 445
Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser Arg Met Asn Leu Glu Asn Val
450 455 460
Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr Ser Met Ala Leu Val Leu Trp
465 470 475 480
Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu
485 490 495
Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu His Pro Cys Val Glu Ser Met
500 505 510
Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe
515 520 525
Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu
530 535 540
Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala
545 550 555 560
Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser
565 570 575
Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
580 585 590
<210> 10
<211> 567
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
20 25 30
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
115 120 125
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
130 135 140
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu
145 150 155 160
Leu Leu Val Ile Phe Gln Val Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu
165 170 175
Gly Val Ala Ile Ser Val Ile Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn
180 185 190
Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys
195 200 205
Leu Met Glu Phe Ser Glu His Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg
210 215 220
Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu
225 230 235 240
Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala
245 250 255
Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu
260 265 270
Thr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys
275 280 285
Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile
290 295 300
Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln
305 310 315 320
Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr
325 330 335
Leu Thr Arg His Val Ile Ser Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser
340 345 350
Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys
355 360 365
Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn
370 375 380
Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu
385 390 395 400
Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser
405 410 415
Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser
420 425 430
Arg Met Asn Leu Glu Asn Val Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr
435 440 445
Ser Met Ala Leu Val Leu Trp Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val
450 455 460
Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu
465 470 475 480
His Pro Cys Val Glu Ser Met Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly
485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu
530 535 540
Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp
545 550 555 560
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
1 5 10 15
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
20 25 30
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
35 40 45
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
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85 90 95
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Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
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<211> 117
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe
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Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr
20 25 30
Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys
35 40 45
Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu
50 55 60
Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile
65 70 75 80
Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys
85 90 95
Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn
100 105 110
Thr Ser Asn Pro Asp
115
<210> 13
<211> 115
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr
1 5 10 15
Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile
20 25 30
Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp
35 40 45
Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr
50 55 60
His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys
65 70 75 80
Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser
85 90 95
Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser
100 105 110
Asn Pro Asp
115
<210> 14
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Ala
435 440 445
<210> 15
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<400> 15
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His
20 25 30
Gly Thr His Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Glu Asp Thr Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 16
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<400> 16
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Ala
450
<210> 17
<211> 584
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Ala Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
450 455 460
Gly Ser Gly Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
465 470 475 480
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
485 490 495
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
500 505 510
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
515 520 525
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
530 535 540
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
545 550 555 560
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
565 570 575
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
580
<210> 18
<211> 587
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Gly Pro Asn Ser Gly Phe Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Ala Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
450 455 460
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys
465 470 475 480
Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met
485 490 495
Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys
500 505 510
Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val
515 520 525
Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala
530 535 540
Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr
545 550 555 560
Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile
565 570 575
Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
580 585
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 19
Ser Tyr Trp Met His
1 5
<210> 20
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述: 合成多肽
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> His或Gly
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Gly或Phe
<400> 20
Arg Ile Xaa Pro Asn Ser Gly Xaa Thr Ser Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 21
Gly Gly Ser Ser Tyr Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 15
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 22
Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ile His Gly Thr His Leu Met His
1 5 10 15
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 23
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 24
Gln Gln Ser Phe Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 25
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 25
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 26
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人Fab文库
<400> 26
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 27
Asp Ser Trp Ile His
1 5
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 28
Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 29
Arg His Trp Pro Gly Gly Phe
1 5
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 30
Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5
<210> 31
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 31
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 32
Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr
1 5
<210> 33
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 34
<211> 605
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
450 455 460
Gly Gly Gly Ser Gly Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn
465 470 475 480
Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu
485 490 495
Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser
500 505 510
Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu
515 520 525
Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu
530 535 540
Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu
545 550 555 560
Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly
565 570 575
Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn
580 585 590
Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
595 600 605
<210> 35
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 序列为合成
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala
435 440 445

Claims (15)

1.一种药物组合物，其包含IgG：TGFβR融合蛋白、离子性张力调节剂，以及二糖和氨基酸组分中的一或两者。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述组合物包含二糖。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述离子张力调节剂是氯化钠。
4.如权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中所述二糖为海藻糖或蔗糖。
5.如权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中，所述二糖是海藻糖。
6.如权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中，所述氨基酸组分为精氨酸或赖氨酸。
7.如权利要求1至6中任一项所述的药物组合物，其中，所述氨基酸组分为精氨酸。
8.如权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中，所述离子张力调节剂为氯化钠，所述二糖为海藻糖，所述氨基酸组分为精氨酸。
9.如权利要求1至8中任一项所述的药物组合物，其还包含表面活性剂。
10.如权利要求1至9中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物具有5.0至6.5的pH。
11.如权利要求1至10中任一项所述的药物组合物，其中IgG：TGFβR融合蛋白的轻链序列和重链序列分别对应于(1)SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，(2)SEQ ID NO：ID NO：15和SEQID NO：17，(3)SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：18，或(4)SEQ ID NO：33和SEQ ID NO：34。
12.如权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中所述IgG：TGFβR融合蛋白具有bintrafusp alfa的氨基酸序列。
13.如权利要求1至12中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物的特征在于5.0至6.5的pH并且包含缓冲体系、离子张力调节剂、二糖、非离子表面活性剂、任选的氨基酸组分和进一步任选的抗氧化剂。
14.如权利要求13所述的药物组合物，其中缓冲体系为组氨酸缓冲体系，离子张力调节剂为氯化钠，二糖为海藻糖，氨基酸组分为精氨酸，抗氧化剂为甲硫氨酸，非离子表面活性剂为聚山梨醇酯20。
15.如权利要求13或14所述的药物组合物，其中所述组合物选自以下组合物的组：
a.一种药物组合物，其特征在于pH为5.3-5.7并且包含5-15mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、30-50mM离子张力调节剂；150-170mM二糖、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
b.一种药物组合物，其特征在于pH为5.3-5.7并且包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM离子张力调节剂；150-170mM二糖、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
c.一种药物组合物，其特征在于pH为5.7-6.1并且包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM离子张力调节剂；90-110mM二糖、40-60mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
d.一种药物组合物，其特征在于pH为5.7-6.1并且包含35-45mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、50-70mM离子张力调节剂；65-85mM二糖、65-85mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
e.一种药物组合物，其特征在于pH为5.7-6.1并且包含45-55mg/mL IgG：TGFβR融合蛋白、5-15mM缓冲体系、90-110mM离子张力调节剂；40-60mM二糖、40-60mM氨基酸组分、0.3-0.7mg/mL非离子表面活性剂和任选的2-8mM抗氧化剂；
f.一种药物组合物，其特征在于pH为5.5并且包含10mg/mL bintrafusp alfa、10mM组氨酸、40mM氯化钠、159mM海藻糖、0.5mg/ml聚山梨醇酯20、5mM甲硫氨酸；
g.一种药物组合物，其特征在于pH为5.5并且包含40mg/mL bintrafusp alfa、10mM组氨酸、60mM氯化钠、159mM海藻糖、0.5mg/ml聚山梨醇酯20、5mM甲硫氨酸；
h.一种药物组合物，其特征在于pH为5.9并且包含40mg/mL bintrafusp alfa、10mM组氨酸、60mM氯化钠、100mM海藻糖、50mM精氨酸、0.5mg/ml聚山梨醇酯20、5mM甲硫氨酸；和
i.一种药物组合物，其特征在于pH为5.9并且包含50mg/mL bintrafusp alfa、10mM组氨酸、100mM氯化钠、50mM海藻糖、50mM精氨酸、0.5mg/ml聚山梨醇酯20、5mM甲硫氨酸。
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