JP2023507981A - 生物医薬組成物および関連の方法 - Google Patents

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Abstract

本明細書に記載される発明は、抗ＰＤ－１抗体を含んでなる組成物ならびにＰＤ－１拮抗作用に応答する癌およびその他の障害を治療するための関連の方法を提供する。

Description

配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子提出された配列表を含み、その全内容は参照により本明細書の一部とされる。
発明の分野
本開示は、抗ＰＤ－１抗体を含んでなる組成物および癌または感染性病態および障害を治療するための関連の方法に関する。
発明の背景
プログラム死１(ＰＤ－１）（プログラム細胞死１としても知られる）は、アポトーシスを受けているマウスＴ細胞株のサブトラクティブハイブリダイゼーションによって最初に同定された２６８アミノ酸のＩ型膜貫通タンパク質である。ＰＤ－１はＴ細胞レギュレーターのＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４ファミリーのメンバーであり、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄系細胞で発現する。
ＰＤ－１の２つのリガンド、ＰＤリガンド１（ＰＤ－Ｌ１）とＰＤリガンド２（ＰＤ－Ｌ２）が同定されており、どちらもＢ７タンパク質スーパーファミリーに属する。ＰＤ－Ｌ１は、肺、心臓、胸腺、脾臓、および腎臓の細胞を含む様々な細胞種で発現する。ＰＤ－Ｌ１の発現は、リポ多糖（ＬＰＳ）およびＧＭ－ＣＳＦ処理に応答してマクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）で、またＴ細胞およびＢ細胞受容体を介したシグナル伝達時にＴ細胞およびＢ細胞でアップレギュレートされる。ＰＤ－Ｌ１はまた、様々なマウス腫瘍細胞株でも発現する。これに対して、ＰＤ－Ｌ２はより限定された発現パターンを示し、主に抗原提示細胞（例えば、樹状細胞またはマクロファージ）および一部の腫瘍細胞株によって発現される。腫瘍における高いＰＤ－Ｌ１発現は、腫瘍細胞、ストロマ、または腫瘍微小環境内の他の細胞のいずれにおいても、おそらくエフェクターＴ細胞を阻害し、腫瘍内の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）をアップレギュレートすることにより、臨床的予後不良と相関する。
ＰＤ－１は、Ｔ細胞の活性化に負の調節を行い、この阻害機能は細胞質ドメインの免疫受容体チロシンに基づくスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）に結びついている。ＰＤ－１欠乏症は、自己免疫にもつながる可能性がある。ヒトでは、ＰＤ－１遺伝子の一塩基多型は、全身性紅斑性狼瘡、１型糖尿病、関節リウマチ、および多発性硬化症の進行の高い発生率に関連している。異常なＰＤ－１発現は、腫瘍免疫回避および慢性ウイルス感染などのいくつかの病状におけるＴ細胞機能障害にも関連付けられている。
従前の研究は、ＰＤ－１によって誘導されるＴ細胞抑制が抗腫瘍免疫の抑制にも役割を果たすことを示している。例えば、ＰＤ－Ｌ１は様々なヒトおよびマウスの腫瘍で発現し、ＰＤ－１が腫瘍上のＰＤ－Ｌ１に結合すると、Ｔ細胞の抑制と腫瘍の免疫回避および保護がもたらされる。腫瘍細胞によるＰＤ－Ｌ１の発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗腫瘍Ｔ細胞による溶解に対する耐性と直接関連している。ＰＤ－１ノックアウトマウスは腫瘍チャレンジに耐性があり、ＰＤ－１ノックアウトマウス由来のＴ細胞は、担癌マウスに養子移入すると腫瘍拒絶において極めて効果的である。モノクローナル抗体を使用してＰＤ－１阻害シグナルをブロックすると、マウスの宿主の抗腫瘍免疫を増強することができ、腫瘍での高レベルのＰＤ－Ｌ１発現は、多くのヒトの癌種の予後不良と関連している。
上記の点から、ＰＤ－１活性を阻害して様々な種類の癌を治療し、免疫増強のため（例えば、感染症を治療するため）の戦略が開発されてきた。これに関して、ＰＤ－１を標的とするモノクローナル抗体が癌の治療のために開発された。例えば、ニボルマブ（オプジーボとしても知られる）は、ＰＤ－１に対するヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、黒色腫、非小細胞肺癌、または腎臓（腎細胞）癌を治療するために市販されている。別の例として、ペムブロリズマブ（キートルーダ）は、ＰＤ－１に対するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、非小細胞肺癌、頭頸部癌、黒色腫、およびホジキンリンパ腫を含む、ある範囲の癌を治療するために市販されている。さらに、最近の証拠は、ＰＤ－１を標的とする治療法がＨＩＶなどの病原体に対する免疫応答を増強し得ることを示唆する。抗ＰＤ－１抗体は、ＷＯ２０１４／１７９６６４、ＷＯ２０１８／０８５４６８およびＷＯ２０１８／１２９５５９に記載されている。
発明の概要
本発明の１つの側面によれば、抗ＰＤ－１抗体の酸化変異体を含んでなる組成物が提供され、前記酸化変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、抗ＰＤ－１抗体の凝集変異体を含んでなる組成物が提供され、前記凝集変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖配列を含み；組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含んでなる組成物が提供され、組成物は、（ｉ）６５％以下の酸化変異体；および／または（ｉｉ）３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含んでなる組成物が提供され；組成物は、１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含んでなる組成物が提供され；組成物は、１０～９７％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体電荷変異体を含んでなる組成物が提供され；組成物は、３５％以下の酸性変異体；および／または５％以下の塩基性変異体；および／または５５％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含んでなる組成物が提供され、組成物は、６４％以下の酸化変異体を含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含んでなる組成物が提供され、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
本発明のさらなる側面によれば、抗ＰＤ－１抗体の変異体を含んでなる組成物が提供され、前記変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる組成物の少なくとも６０％の効力、１０～９７％の酸性変異体、０．１～３５％の塩基性変異体、２～８０％の主要アイソフォーム、４．８％以下の軽鎖Ｗ５０酸化変異体、１％以下の重鎖Ｍ３４酸化変異体、１．２％以下の重鎖Ｍ１０３酸化変異体、１５．２％以下の凝集変異体、１６．７％以下の重鎖Ｍ３５４酸化変異体、２９．０％以下の重鎖Ｍ４２４酸化変異体、４７．１％以下の重鎖Ｍ２４８酸化変異体、２０．８％以下の重鎖Ｄ１４７異性化変異体、１３．１％以下の重鎖Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、３．１％以下の重鎖Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体、４．６％以下の断片化変異体、２７．８％以下の重鎖Ｎ３８０脱アミド化変異体、２７．２％以下の重鎖Ｎ３８５脱アミド化変異体、約７．４％以下の重鎖Ｎ３１１脱アミド化変異体、約２．０％以下の重鎖Ｎ４３０脱アミド化変異体、９０％以上の重鎖Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および１％以下の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を有する。
本発明のさらなる側面によれば、本明細書に記載の組成物および少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体およびｐＨ約５．５～約６．５の緩衝剤を含んでなる、本明細書に記載の医薬組成物を含んでなる処方物が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約１０ｍＭ～約４０ｍＭのクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファー、（ｃ）約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのアルギニンまたは約２～約１０％ｗ／ｖのトレハロース、（ｄ）約２０ｍＭ～約４０ｍＭの塩化ナトリウム、および（ｅ）約０．０１％～約０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０をｐＨ約５．５～約６．５で含んでなる、本明細書に記載の医薬組成物を含んでなる処方物が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、本明細書に記載の組成物を含んでなる注射装置が提供される。本発明のさらなる側面によれば、本明細書に記載の医薬組成物を含んでなる注射装置が提供される。本発明のさらなる側面によれば、本明細書に記載の処方物を含んでなる注射装置が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、本明細書に記載の組成物を含んでなる細胞培養培地が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、本明細書に記載の組成物を含んでなる溶出液が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の本明細書に記載の組成物を投与することを含んでなる方法が提供される。本発明のさらなる側面によれば、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含んでなる方法が提供される。本発明のさらなる側面によれば、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の本明細書に記載の処方物を投与することを含んでなる方法が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、療法における使用のための本明細書に記載の組成物が提供される。本発明のさらなる側面によれば、療法における使用のための本明細書に記載の組成物が提供される。本発明のさらなる側面によれば、療法における使用のための本明細書に記載の処方物が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、癌の治療における使用のための本明細書に記載の組成物が提供される。本発明のさらなる側面によれば、癌の治療における使用のための本明細書に記載の医薬組成物が提供される。本発明のさらなる側面によれば、癌の治療における使用のための本明細書に記載の処方物が提供される。
本発明のさらなる側面によれば、癌の治療における使用のための薬剤の製造における本明細書に記載の組成物の使用が提供される。本発明のさらなる側面によれば、癌の治療における使用のための薬剤の製造における本明細書に記載の医薬組成物の使用が提供される。本発明のさらなる側面によれば、癌の治療における使用のための薬剤の製造における本明細書に記載の処方物の使用が提供される。
ドスターリマブの代表的なｃＩＥＦエレクトロフェログラム（Ａ：フルスケール、およびＢ：ズームスケール）
発明の詳細な説明
一般定義
本明細書に記載の発明は、抗プログラム死１（ＰＤ－１）抗体を含んでなる組成物およびＰＤ－１活性の阻害を介した関連の治療方法を提供する。「プログラム死１（ＰＤ－１）抗体」とは、プログラム死１タンパク質（ＰＤ－１）に特異的に結合する抗体を意味する。本明細書に記載されるように抗ＰＤ－１抗体を含んでなる組成物は、本明細書に記載されるような抗ＰＤ－１抗体の集団を呼称することもあり、このような句は互換的であることが理解されるであろう。１つの実施形態において、ＰＤ－１抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでなる。
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、広義において、免疫グロブリン様ドメインを有する分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を指し、この種のモノクローナル、組換え、ポリクローナル、キメラ、ヒト、およびヒト化分子を含む。
完全抗体、全抗体または無傷抗体という用語は、本明細書では互換的に使用され、およその分子量が１５０，０００ダルトンであるヘテロ四量体糖タンパク質を指す。無傷抗体は、共有ジスルフィド結合によって結合された２つの同一の重鎖（ＨＣ）と２つの同一の軽鎖（ＬＣ）で構成されている。このＨ２Ｌ２構造は折りたたまれて、「Ｆａｂ」フラグメントおよび「Ｆｃ」結晶化可能フラグメントとして知られる２つの抗原結合フラグメントを含んでなる３つの機能的ドメインを形成する。Ｆａｂフラグメントは、アミノ末端の可変領域、可変重鎖（ＶＨ）または可変軽鎖（ＶＬ）、およびカルボキシル末端の定常領域、ＣＨ１（重鎖）およびＣＬ（軽鎖）から構成される。Ｆｃフラグメントは、対合したＣＨ２領域とＣＨ３領域の二量体化によって形成された２つのドメインから構成される。Ｆｃは、免疫細胞上の受容体に結合するか、古典的補体経路の最初の成分であるＣ１ｑに結合することによって、エフェクター機能を誘発し得る。抗体ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、およびＩｇＤの５つのクラスは、それぞれμ、α、γ、εおよびδと呼ばれる異なる重鎖アミノ酸配列によって定義され、各重鎖はκまたはλ軽鎖のいずれかと対合することができる。血清中の抗体の大部分はＩｇＧクラスに属し、ヒトＩｇＧにはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の４つのアイソタイプがあり、その配列は主にヒンジ領域が異なる。
完全ヒト抗体は、様々な方法を使用して、例えば、ヒト抗体のレパートリーを産生することができる酵母ベースのライブラリーまたはトランスジェニック動物（例えば、マウス）を使用して得ることができる。目的の抗原に結合するヒト抗体を表面に提示する酵母は、ＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）に基づく方法を使用するか、または標識された抗原を使用することによりビーズに捕捉することによって選択することができる。ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するように改変されたトランスジェニック動物を目的の抗原で免疫化し、Ｂ細胞選別技術を使用して抗原特異的ヒト抗体を単離することができる。次に、これらの技術を使用して生産されたヒト抗体は、親和性、開発可能性および選択性などの所望の特性に関して特性決定を行うことができる。
モノクローナル抗体は、１つの抗体を発現する真核細胞クローンまたは原核細胞クローンによって産生され得る。モノクローナル抗体はまた、細胞に導入されたこれらをコードする核酸配列を有することにより、抗体の重鎖および軽鎖を組換え的に発現することができる真核細胞株によって生産することもできる。チャイニーズハムスター卵巣細胞、ハイブリドーマ、または動物（例えば、ヒト）に由来する不死化抗体細胞などの異なる真核細胞株から抗体を産生するための例示的な方法は当業者によく知られている。
抗体は、例えば、ラット、マウス、霊長類（例えば、カニクイザル、旧世界ザルまたは大型類人猿）、ヒト、または当業者に知られている分子生物学的技術を用いて作製される、抗体分子をコードする核酸などの他の供給源に由来し得る。
抗体は、定常領域を含んでよく、これはいずれのアイソタイプまたはサブクラスであってもよい。定常領域は、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの変異体であり得る。１つの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４に由来する定常領域を含んでなる。１つの実施形態では、単一のセリンからプロリンへの点突然変異が、ヒンジの安定化の目的で、ＩｇＧ４重鎖のヒンジ領域に存在する。この変異は、連続番号を付けた場合に（配列番号９）全長重鎖配列の残基２２４に相当するカノニカルなＳ２２８位（Ｋａｂａｔナンバリング）にある。
抗体は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体のいずれかであり得る。１つの実施形態において、抗体はヒト化抗体である。１つの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。
抗体は、例えば、抗体が増強されたエフェクター機能／ＡＤＣＣおよび／または補体活性化を有するように、変異した定常ドメインを含む１つまたは複数の修飾を含んでいてもよい。
抗体は、２つの免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖（「ＨＣ」）および２つのＩｇ軽鎖（「ＬＣ」）を含んでいてもよい。基本的な抗体構造単位は、例えば、サブユニットの四量体を含んでいてもよい。各四量体は、２対のポリペプチド鎖を含んでいてもよく、各対は、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）および１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う約１００～１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を含み得る。この可変領域は、最初に、切断可能なシグナルペプチドに連結したものが発現され得る。シグナルペプチドのない可変領域は、成熟可変領域と呼ばれることがある。従って、一例では、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドのない軽鎖可変領域を含んでいてもよい。各鎖のカルボキシ末端部分は定常領域を画定し得る。１つの実施形態において、本明細書に記載の組成物の抗体は、全長抗体である。
「ＶＨ」および「ＶＬ」という用語は、本明細書では、それぞれ抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を指して使用される。
各軽鎖／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位（抗原結合部位とも呼ばれる）を形成し得る。「抗原結合部位」は、抗原に特異的に結合することができる抗体上の部位を指し、これは、単一の可変ドメインであり得るか、または標準的な抗体に見られるような対合したＶＨ／ＶＬドメインであり得る。従って、無傷抗体は、例えば、２つの結合部位を有し得る。二機能性または二重特異性抗体を除いて、２つの結合部位は同じであり得る。鎖は総て、相補性決定領域または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域によって連結された比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の、同じ一般構造を示し得る。各対の２つの鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によって整列され、特定のエピトープへの結合を可能にする。従って、一例では、軽鎖および重鎖の両方が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含んでなる。
許容可能な重鎖可変領域および軽鎖可変領域フレームワーク１、フレームワーク２およびフレームワーク３の領域は、当業者によって容易に認識される。許容可能な重鎖定常領域（ヒンジを含む）領域および軽鎖定常領域も同様に当業者によって容易に認識される。許容可能な抗体アイソタイプも同様に当業者によって容易に認識される。
「ＣＤＲ」は、抗体の相補性決定領域のアミノ酸配列として定義される。これらは免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）がある。従って、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用される場合、３つ総ての重鎖ＣＤＲ、３つ総ての軽鎖ＣＤＲ、総ての重鎖および軽鎖ＣＤＲ、または少なくとも２つのＣＤＲを指す。
本明細書を通して、「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」という用語は、Ｋａｂａｔのナンバリング規則に従う。可変領域配列および全長抗体配列のアミノ酸残基は、任意の抗体変異体位置または酸化変異体（例えば、Ｗ５０）、脱アミド化変異体（例えば、Ｎ３８０）もしくは異性化変異体（例えば、Ｄ１４７）などの翻訳後修飾変異体位置を表すために連続番号が付けられている。
可変領域配列および全長抗体配列のアミノ酸残基には別のナンバリング規則があることは、当業者には明らかであろう。ＣＤＲ配列には、例えばChothia et al. (1989) Nature 342: 877-883によって示されているものなどの別のナンバリング規則もある。抗体の構造およびタンパク質折り畳みは、他の残基がＣＤＲ配列の一部と見なされ、当業者によってそのように理解されることを意味し得る。熟練者が利用できるＣＤＲ配列の他のナンバリング規則には、「ＡｂＭ」（バース大学）および「ｃｏｎｔａｃｔ」（ロンドン大学）方式が含まれる。以下の表１は、各ＣＤＲまたは結合単位の各ナンバリング規則を使用した１つの定義を表す。表１では、可変領域のアミノ酸配列をナンバリングするためにＫａｂａｔナンバリングスキームを使用している。ＣＤＲの定義の一部は、使用する個々の刊行物によって異なる場合があることに留意されたい。
Figure 2023507981000001
「変異体」、「抗体変異体」、「ＣＤＲ変異体」および「翻訳後修飾変異体」という用語は、例えば、翻訳後修飾、化学変化、または少なくとも１つの欠失、置換、もしくは付加による配列変化による抗体配列に対して少なくとも１つのアミノ酸配列が変更されている変異体抗体配列を指す。一部の翻訳後修飾には、配列を変更しない化学変化をもたらすもの（例えば、Ｍｅｔと酸化Ｍｅｔ；またはＡｓｐと異性化／イソＡｓｐ；または凝集）と、１つのアミノ酸残基の別のアミノ酸残基への変換などの配列変化をもたらすものがある（例えば、脱アミド化によるＡｓｎからＡｓｐへの変換、またはリジンの欠失）。さらなる翻訳後修飾変異体を以下に記載する。配列変化を含んでなる変異抗体配列は、設計された配列変化または翻訳後修飾の結果であり得る。
アミノ酸の置き換えまたは置換は、保存的、半保存的、または非保存的であり得る。アミノ酸は、「芳香族」または「脂肪族」として大まかに分類される。芳香族アミノ酸には、芳香環（例えば、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン）が含まれる。非芳香族アミノ酸は、「脂肪族」として大きく分類される。
１つの実施形態において、置換は保存的置換である。特定のアミノ酸置換が「保存的」であると見なされることは当技術分野でよく認識されている。アミノ酸は、共通の側鎖特性に基づいて群にさらに分割することができ、抗体の結合親和性の総てまたは実質的に総てを維持する群内の置換は保存的置換と見なされる。例えば、アミノ酸群には、メチオニン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンなどの疎水性側鎖を有するアミノ酸残基；システイン、セリンおよびトレオニンなどの中性、親水性側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン酸およびグルタミン酸などの酸性側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、リジンおよびアルギニンなどの塩基性側鎖を有するアミノ酸；グリジンおよびプロリンなどの鎖の配向に影響を及ぼす残基を有するアミノ酸；ならびにトリプトファン、チロシンおよびフェニルアラニンなどの芳香族側鎖を有するアミノ酸が含まれる。本明細書に開示される抗体は、そのような「保存的」アミノ酸置換を含んでいてもよい。別の実施形態において、抗体変異体は、抗体のカノニカル性を保持しながら、少なくとも１つの置換を含む。
「半保存的変異」には、広い群（すなわち、芳香族または脂肪族）内のアミノ酸のアミノ酸置換が含まれるが、同じ側鎖サブグループ内には含まれない。例えば、アスパラギン酸のアスパラギンへの置換、またはアスパラギンのリジンへの置換は、同じ群（つまり、脂肪族）内のアミノ酸を含むが、サブグループは異なる。「非保存的変異」には、異なる群間のアミノ酸置換、例えば、リジンのトリプトファンへの、フェニルアラニンのセリンへの置換を含む。
１つの実施形態において、抗体変異体は、抗体一次配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％同一の（すなわち、配列同一性を有する）抗体である。別の実施形態では、抗体変異体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％もしくは約９９％の同一の重鎖アミノ酸配列および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％もしくは約９９％同一の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗体を含んでなる。
クエリ核酸配列と対象核酸配列の間の「同一性パーセント」は、パーセンテージとして表される「同一性」値であり、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴ、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅ、およびＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅなどの適切なアルゴリズムまたはソフトウェアを使用してペアワイズグローバルシーケンスアラインメントが実行された後、クエリ配列の全長にわたって、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ、ＧｅｎｅＤｏｃ、Ｂｉｏｅｄｉｔ、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅまたはＥＭＢＯＳＳ ｉｎｆｏａｌｉｇｎなどの適切なアルゴリズムまたはソフトウェアを使用して計算される。重要なこととして、クエリ配列は、本明細書の１つまたは複数の請求項で特定された核酸配列によって記載され得る。
クエリアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間の「同一性パーセント」は、パーセンテージとして表される「同一性」値であり、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴ、ＥＭＢＯＳＳ Ｎｅｅｄｌｅ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅ、およびＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅなどの適切なアルゴリズム／ソフトウェアを使用してペアワイズグローバルシーケンスアラインメントが実行された後、クエリ配列の全長にわたって、ＢＬＡＳＴＰ、ＦＡＳＴＡ、ＤＮＡＳＴＡＲ Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ、ＧｅｎｅＤｏｃ、Ｂｉｏｅｄｉｔ、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅまたはＥＭＢＯＳＳ ｉｎｆｏａｌｉｇｎなどの適切なアルゴリズムまたはソフトウェアを使用して計算される。重要なこととして、クエリ配列は、本明細書の１つまたは複数の請求項で特定されたアミノ酸配列によって記載され得る。
クエリ配列は、サブジェクト配列と１００％同一である場合もあるし、またはサブジェクト配列と比較して特定の整数までのアミノ酸もしくはヌクレオチドの変化を含む、従って同一性％が１００％未満となる場合もある。例えば、クエリ配列は、サブジェクト配列と少なくとも５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９％同一である。そのような変更には、少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換（保存的置換および非保存的置換を含む）、または挿入が含まれ、前記変更は、クエリ配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置に存在してもよいし、あるいはそれらの末端の位置の間のどこかにクエリ配列内のアミノ酸もしくはヌクレオチド間、またはクエリ配列内の１以上の連続した群に個々に散在して存在してもよい。
同一性％は、ＣＤＲを含むクエリ配列の全長にわたって決定することができる。あるいは、同一性％は、ＣＤＲの１以上または総てを除外してもよく、例えば、ＣＤＲの総てがサブジェクト配列と１００％同一であり、同一性％の変動はクエリ配列の残りの部分例えば、フレームワーク配列にあり、従って、ＣＤＲ配列は固定され、そのままである。
本開示の組成物および関連する方法において有用であり、含まれ得るアミノ酸配列は、本開示で特定されたアミノ酸配列（例えば、抗体重鎖または抗体軽鎖）と約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％および約１００％の同一性を有し得る。本開示において、記載されたアミノ酸配列間の同一性パーセントは、上記のパーセント同一性範囲の任意の離散下位範囲（例えば、特定の範囲内の整数値の任意の範囲または特定の範囲内の離散下位値）を含み得る。
抗体は、標的抗原であるヒトＰＤ－１に特異的に結合する。例示的な抗ＰＤ－１抗体およびそれを作製する方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第ＷＯ２０１４／１７９６６４号に開示されている。さらなる例示的な抗ＰＤ－１抗体には、ＷＯ２０１８／０８５４６８およびＷＯ２０１８／１２９５５９に記載されているものが含まれ、これらのそれぞれは、参照によりその全内容が本明細書の一部とされる。
「特異的に結合する」という用語は、抗体に関して本明細書で使用される場合、抗体が標的抗原ならびに標的抗原内の別個のドメインまたは別個のアミノ酸配列に結合し、他の（例えば、無関係の）タンパク質に対する結合がないかまたはわずかであることを意味する。しかしながら、この用語は、抗体が密接に関連する分子（例えば、高度の配列同一性を有するものまたは別の属もしくは種に由来するもの）とも交差反応性であり得るという事実を排除するものではない。本明細書に記載の抗体は、密接に関連する分子に結合するよりも少なくとも２、５、１０、５０、１００、または１０００倍高い親和性でヒトＰＤ－１に結合し得る。
「結合親和性」とも呼ばれる親和性は、単一の相互作用部位、すなわち１つの分子、例えば、抗体の、別の分子、例えばその標的抗原に対する単一の結合部位での結合の強さである。抗体のその標的に対する結合親和性は、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）もしくはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥもしくは同様の機器を使用する表面プラズモン共鳴分析）によって決定され得る。
抗体－標的抗原相互作用の結合親和性（ＫＤ）は、例えば、約１ピコモル（ｐＭ）～約１００マイクロモル（ｍＭ）（例えば、約１ピコモル（ｐＭ）～約１ナノモル（ｎＭ））、約１ｎＭ～約１マイクロモル（μＭ）、または約１μＭ～約１００μＭ）であり得る。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、１ナノモル以下（例えば、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、または前述の値のいずれか２つで定義される範囲）のＫＤでＰＤ－１タンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、２００ｐＭ以下（例えば、１９０ｐＭ、１７５ｐＭ、１５０ｐＭ、１２５ｐＭ、１１０ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０ｐＭ、７５ｐＭ、６０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、１ｐＭ、または前述の値のいずれか２つで定義される範囲）のＫＤでＰＤ－１に結合することができる。
あるいは、ＫＤは、１ｐＭ～１０００ｐＭ、例えば、１０ｐＭ～５００ｐＭ、例えば、約３００ｐＭであり得る。抗体の結合親和性は、結合定数（Ｋａ）と解離定数（Ｋｄ）によって決定される（ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ）である。結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（表面プラズモン共鳴）によって、例えば、プロテインＡでコーティングされたセンサー表面に試験抗体を捕捉し、この表面に標的抗原を流すことによって測定することができる。あるいは、結合親和性は、例えば、プロテインＡでコーティングされた針に試験抗体受容体を捕捉し、この表面に標的抗原を流すことで、ＦＯＲＴＥＢＩＯによって測定することができる。
Ｋｄは１×１０-３Ｍｓ－１以下であり得る。Ｋｄは、１×１０-５Ｍｓ－１～１×１０-３Ｍｓ－１；または１×１０-４Ｍｓ－１～１×１０-３Ｍｓ-１であり得る。Ｋｄが遅いと、抗体－標的抗原複合体の解離が遅くなり、標的抗原の中和が改善され得る。
「特異的抗原結合活性」という用語は、本明細書で使用される場合、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるような抗原結合活性を意味する。ＰＤ－１特異的結合活性は、例えば、結合モードで実行されるＢＩＡＣＯＲＥ機器を使用したＳＰＲによって決定することができる。これは、結合活性をサンプル中の総タンパク質（例えば、ドスターリマブ）含有量で割ったものである。「ＦｃＲｎ結合活性」という用語は、本明細書で使用される場合、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されるような新生児Ｆｃ（ＦｃＲｎ）受容体結合活性を意味する。ＦｃＲｎ結合は、ＢＩＡＣＯＲＥ機器を使用して決定することができる。これは、ＦｃＲｎ受容体への結合活性を、サンプルの総タンパク質濃度で割ったものである。
特異的抗原結合およびＦｃＲｎ結合のＳＰＲ法では、ドスターリマブの参照標準を使用する。ドスターリマブ参照標準をアッセイで使用して、システムの適合性とサンプルの比較可能性データを取得し、メソッドが適切に実行されていることを確認することができる。参照標準により、検量線を作成でき、その検量線からサンプルの濃度が補間される。
効力は、本明細書では、抗ＰＤ－１抗体、または本明細書に記載されるような組成物の、ＰＤ－１へのリガンド（ＰＤ－Ｌ１）の結合を阻害する阻害活性として定義される。これは、抗原ＰＤ－１への特異的結合によるか、効力アッセイ（例えば、ＭＳＤアッセイ）によるか、または効力バイオアッセイ（例えば、細胞アッセイ）によって測定され得る。効力アッセイは、細胞によって構成的に発現されるＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１リガンドの結合を阻害する抗体または組成物の用量依存的能力を測定する、細胞競合結合アッセイであり得る。効力のバイオアッセイは、細胞系の細胞内シグナル伝達バイオアッセイであり得、これは、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１リガンドの結合を阻害してＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の活性化および活性化されたＴ細胞応答要素（ＮＦＡＴ－ＲＥ）の活性化の核因子をもたらす抗体または組成物の用量依存性能力を測定する。結果は、参照物質（例えば、対照サンプル）に対する効力のパーセントとして報告することができる。
ＰＤ－１タンパク質を構成的に発現する操作されたＣＨＯ Ｋ１細胞を含んでなるＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）効力アッセイを使用することができる。抗体または組成物の活性は、ＣＨＯ Ｋ１細胞上のＰＤ－１へのリガンド結合を阻害する抗体の用量依存的能力を測定する競合的結合を使用して評価することができる。リガンド（ＰＤ－Ｌ１）は、アッセイ（ＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ）のリガンドとして使用される。読み取り値は、定量可能な電気化学発光（ＥＣＬ）シグナルを放出する特定の検出抗体混合物を使用して測定することができる。結果は、参照物質（例えば、対照サンプル）に対する効力のパーセントとして報告することができる。
Ｐｒｏｍｅｇａ ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓａｙ（カタログ番号Ｊ１２５０またはＪ１２５５）を使用して開発された細胞効力バイオアッセイを使用することができる。具体的には、ヒトＰＤ－１および活性化Ｔ細胞応答エレメント（ＮＦＡＴ－ＲＥ）の核因子によって駆動されるルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するＰＤ－１エフェクター細胞（Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｊ１１５５））を、ＰＤ－Ｌ１を発現するＰＤ－Ｌ１人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）（ＣＨＯ－Ｋ１細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｊ１０９５））と共培養することができる。２つの細胞種を共培養すると、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用によってＴＣＲシグナル伝達および結果としてのＮＦＡＴ－ＲＥの発光が阻害される。抗体または組成物の添加は、阻害シグナルを放出し、ＴＣＲの活性化およびＮＦＡＴ－ＲＥ媒介発光をもたらす。この阻害シグナルのブロックは用量に依存し、結果として生じる発光はプレートリーダーを使用して定量可能である。シグナル応答から、ｙ軸に相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）を、ｘ軸にｌｏｇ２変換濃度をプロットすることにより、参照物質と抗体／組成物サンプルの両方について４パラメーター曲線を生成することができる。有効濃度（ＥＣ５０）値の中央値を補間し、参照物質（例えば、対照サンプル）の効力と比較した抗体／組成物サンプルの効力を計算することができる。
「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」および「ペプチド鎖」という用語はそれぞれ、２つ以上のアミノ酸残基を含む分子を指す。ペプチドは、単量体または高分子であり得る。
量、期間などの測定可能な値などを指すときに本明細書で使用される「約」という言及は、開示された方法を実行するためにそのような変動が適切である場合、特定の値からの±５％、±１％、および±０．１％を含む±２０％または±１０％の変動を包含することを意味する。
抗ＰＤ－１抗体
組成物は、本明細書に記載の発明による１以上のＣＤＲ、または本明細書に記載の発明による重鎖もしくは軽鎖可変領域の一方もしくは両方、または本明細書に記載の発明による重鎖もしくは軽鎖の一もしくは両方を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含んでいてもよい。
１つの側面において、組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖配列、ならびに配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ１、配列番号５のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖配列を有する抗体を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して１つまたは２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＨ１」）（「ＣＤＲ変異体」）を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して５つ以下、例えば、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＨ２」）（「ＣＤＲ変異体」）を含んでなる。さらなる実施形態において、ＣＤＲＨ１は、配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して１つまたは２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して１つまたは２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＨ３」）（「ＣＤＲ変異体」）を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して３つ以下、例えば、１つまたは２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ１（「ＣＤＲＬ１」）（「ＣＤＲ変異体」）を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して１つまたは２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ２（「ＣＤＲＬ２」）（「ＣＤＲ変異体」）を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して３つ以下、例えば、１つまたは２つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域ＣＤＲ３（「ＣＤＲＬ３」）（「ＣＤＲ変異体」）を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して１つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ１；配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して５つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ２；配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して１つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３；配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して３つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ１；配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して１つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ２；および／または配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して３つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ３を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（「ＶＨ」）を含んでなる。１つの実施形態において、ＶＨは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異、例えば、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して１～５つ、例えば、１～３つ、特に、２つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含んでなる。１つの実施形態において、ＶＬは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異、例えば、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して１～５つ、例えば、１～３つ、特に、２つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ；および配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＶＨ；および配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる重鎖配列（「ＨＣ」）を含んでなる。１つの実施形態において、ＨＣは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異、例えば、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して１～１０、例えば、１～７つ、特に、６つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる。さらなる実施形態において、ＨＣは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたは７つのアミノ酸変異を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる軽鎖領域（「ＬＣ」）を含んでなる。１つの実施形態において、ＬＣは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸変異、例えば、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して１～１０、例えば、１～５つ、特に、３つまでのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含んでなる。さらなる実施形態において、ＬＣは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して１つ、２つまたは３つのアミノ酸変異を含んでなる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＨＣ；および配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＬＣを含んでなる。従って、抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖および／または配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖を有する抗体である。
１つの実施形態において、抗体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる。１つの実施形態において、抗体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなるドスターリマブである。
翻訳後修飾生成物
当業者は、抗体の産生時に、翻訳後修飾が起こり、それが翻訳後修飾生成物を産生し得ることを認識するであろう。本明細書に記載の抗体の「翻訳後修飾変異体」は、組成物の全部または一部が「翻訳後修飾」を含んでなる抗体組成物である。翻訳後修飾は、宿主細胞での抗体の産生、上流および／または下流の製造プロセス、および／または保存の長さおよび保存条件（例えば、温度、ｐＨ、水、光への曝露の影響、または賦形剤および／もしくは即時容器閉鎖システムとの反応による）から起こり得る抗体の化学変化である。従って、本発明の組成物は、本発明の抗体の製造または保存」から形成され得る。例示的な翻訳後修飾は、抗体配列の変化（上記のような「抗体変異体」）、特定のリーダー配列の切断、非酵素的グリコシル化または糖化を含む様々なグリコシル化パターンにおける様々な糖部分の付加；脱アミド化；酸化；ジスルフィド結合スクランブリングおよび他のシステイン変異体、例えば、遊離スルフヒドリル、ラセミ化ジスルフィド、チオエーテルおよびトリスルフィド結合；異性化；Ｃ末端リジンの切断またはクリッピング；および／またはＮ末端グルタミン環化を含む。
一例では、翻訳後修飾生成物は、機能および／または活性の低下をもたらす化学変化を含んでなる「生成物関連不純物」を含んでなる。別の例では、翻訳後修飾生成物は、機能および／または活性の低下をもたらさない化学変化を含んでなる「生成物関連物質」を含んでなる。本明細書に記載の抗ＰＤ－１抗体の生成物関連不純物には、酸化変異体および凝集変異体が含まれる。本明細書に記載の抗ＰＤ－１抗体の生成物関連物質には、脱アミド化変異体、異性化変異体、Ｃ末端切断変異体およびＮ末端ピログルタミン酸変異体が含まれる。
１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖を、その総ての機能的翻訳後修飾を含めて含んでなるドスターリマブである。
本明細書で提供される変異体パーセントは、組成物（例えば、抗体の「集団」）中の抗体の総量のパーセンテージとして表される。例えば、６５％以下の酸化変異体は、組成物中の全抗体が１００％であり、そのうち６５％以下が酸化されているという文脈において、これはその組成物中に存在する他のいずれの非抗体物質も含まず、それらは酸化されていても酸化されていなくてもよい。
抗体変異体は一般に、抗体の組成を等電点電気泳動（ＩＥＦ）ゲル電気泳動、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）ゲル電気泳動、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）、陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）などの電荷に基づく分離技術によって分析する場合に見られる。
翻訳後修飾は、抗体の正味電荷の増加または減少をもたらし、ｐＩ値の減少または増加を引き起こし、それにより、主要アイソフォームに関して酸性変異体および塩基性変異体（「電荷変異体」と総称）をもたらし得る。「主要アイソフォーム」とは、クロマトグラムに主要ピークとして溶出する抗体集団である。抗体がＩＥＦに基づく方法を使用して分析される場合、酸性種は見かけのｐＩが低い変異体であり、塩基性種は見かけのｐＩが高い変異体である。クロマトグラフィーに基づく方法によって分析する場合、酸性種と塩基性種は、主要ピークと比較したそれらの保持時間に基づいて定義される。酸性種は、ＣＥＸの主要ピークよりも早く、またはＡＥＸの主要ピークよりも遅く溶出する変異体であり、塩基性種は、ＣＥＸの主要ピークよりも遅く、またはＡＥＸの主要ピークよりも早く溶出する変異体である。これらの方法は、抗体の主要アイソフォームを酸性アイソフォーム（酸性変異体）および塩基性アイソフォーム（塩基性変異体）から分離する。
電荷変異体は、イオン交換クロマトグラフィー、例えば、ＷＣＸ－１０ＨＰＬＣ（弱陽イオン交換クロマトグラフィー）またはＩＥＦ（等電点電気泳動）などの様々な方法によって検出することができる。電荷変異体パーセントは、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して決定することができる。キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して、ドスターリマブのｐＩを測定し、電荷変異体を分離した（図１参照）。この方法を使用して、酸性種と塩基性種を総面積ピークのパーセンテージとして定量することができる。「種」、「アイソフォーム」、「フォーム」および「ピーク」という用語は、主要アイソフォームおよび電荷変異体（酸性変異体および塩基性変異体）を指して互換的に使用される。
１つの側面において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の酸性変異体を含み、前記酸性変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の酸性変異体を含み、前記酸性変異体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体を含んでなる。
別の実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の酸性変異体を含み、前記酸性変異体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体を含んでなる。なおさらなる実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の酸化変異体を含み、前記酸性変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸性変異体を含み、前記酸性変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、１００％以下の酸性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、９５％以下、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下または２５％以下の酸性変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、５～１００％、５～９０％、５～８０％、５～７０％、５～６０％、５～５０％、５～４０％、５～３５％、５～３０％または５～２５％の酸性変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、１０～１００％、１０～９７％、１０～９０％、１０～８０％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５０％、１０～４０％、１０～３５％、１０～３０％または１０～２５％の酸性変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、２０～１００％、２０～９７％、２０～９０％、２０～８０％、２０～７０％、２０～６０％、２０～５０％、２０～４０％、２０～３５％、２０～３０％または２０～２５％の酸性変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、約６０％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％または約１０％の酸性変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の塩基性変異体を含み、前記塩基性変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、３５％以下の塩基性変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の塩基性変異体を含み、前記塩基性変異体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含み；組成物、３５％以下の塩基性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、参照標準バイオアッセイ効力の少なくとも６０％のバイオアッセイ効力を有する。
別の実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の塩基性変異体を含み、前記塩基性変異体は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖を含み；組成物は、３５％以下の塩基性変異体を含んでなる。なおさらなる実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の塩基性変異体を含み、前記塩基性変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、３５％以下の塩基性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの塩基性変異体を含み、塩基性変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、３５％以下の塩基性変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、３５％以下の塩基性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、８％以下、７．５％以下、７％以下、６％以下または５％以下の塩基性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、０．１～３５％、０．１～３０％、０．１～２５％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～８％、０．１～７．５％、０．１～７％、０．１～６％または０．１～５％の塩基性変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～８％、１～７．５％、１～７％、１～６％または１～５％の塩基性変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約７．５％または約５％の塩基性変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の主要アイソフォームを含み、主要アイソフォームは、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の主要アイソフォームを含み、主要アイソフォームは、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含み；組成物は、１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
別の実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の主要アイソフォームを含み、主要アイソフォームは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含み；組成物は、１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。なおさらなる実施形態において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の主要アイソフォームを含み、主要アイソフォームは、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの主要アイソフォームを含み、主要アイソフォームは、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
１つの側面において、組成物は、１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、２．６％以上、３％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上または９０％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、２～９０％、２～８０％の、２～７５％、５～９０％、１０～９０％、２０～９０％、３０～９０％、４０～９０％、５０～９０％または６０～９０％の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、５～８０％、１０～８０％、２０～８０％、３０～８０％、４０～８０％、５０～８０％または６０～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。あるいは、組成物は、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５０％または約５５％の主要アイソフォームを含んでなる。
酸性変異体パーセント、塩基性変異体パーセントおよび主要アイソフォームパーセントは、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して決定することができる。これらのアイソフォーム／電荷変異体実施形態は、本明細書に記載の抗体変異体のいずれか１つまたは組合せと組み合わせてもよいと理解される。
１つの側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
別の側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；組成物は、１０～９７％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。
別の側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；組成物は、３５％以下の酸性変異体；および／または５％以下の塩基性変異体；および／または５５％以上の主要アイソフォームを含んでなる。
別の側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；組成物は、１０～３０％の酸性変異体；および／または０．１～１０％の塩基性変異体；および／または６０～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号７のＶＨを含んでなる重鎖アミノ酸配列、および配列番号８のＶＬを含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、１０～９７％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。別の実施形態において、組成物は、１０～３０％の酸性変異体；および／または０．１～１０％の塩基性変異体；および／または６０～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。さらなる実施形態において、組成物は、３５％以下の酸性変異体；および／または５％以下の塩基性変異体；および／または５５％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列、および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、１０～９７％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。別の実施形態において、組成物は、１０～３０％の酸性変異体；および／または０．１～１０％の塩基性変異体；および／または６０～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。さらなる実施形態において、組成物は、３５％以下の酸性変異体；および／または５％以下の塩基性変異体；および／または５５％以上の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、参照標準バイオアッセイ効力の少なくとも６０％のバイオアッセイ効力を有する。
酸化は、製造および／または保存中に（すなわち、酸化条件の存在下で）生じる可能性があり、反応性酸素種によって直接または酸化ストレスの二次副生成物との反応によって間接的に誘導されるタンパク質の共有結合的修飾をもたらす。酸化は主としてメチオニン残基によって起こり得るが、トリプトファンおよび遊離システイン残基でも起こる場合がある。酸化は、ＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ）領域、またはＦｃ領域で起こり得る。
１つの側面において、組成物は、本明細書において「酸化変異体」とも呼ばれる酸化翻訳後修飾を含んでなる（「酸化」または「酸化された」）抗体を含んでなる。変異体は、重鎖配列および／または軽鎖配列、例えば、重鎖配列のＣＤＲおよび／または軽鎖配列のＣＤＲに酸化アミノ酸残基を含んでいてもよい。酸化変異体は、重鎖または軽鎖の一方または両方の鎖に存在し得る。
１つの側面において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、
配列番号１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２（ＣＤＲＨ２）、および配列番号３（ＣＤＲＨ３）を含んでなる重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号４（ＣＤＲＬ１）、配列番号５（ＣＤＲＬ２）および配列番号６（ＣＤＲＬ３）を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、ならびに
それらの酸化変異体、
を含む抗ＰＤ－１抗体の集団を含み、ここで、抗体集団の６５％以下が酸化変異体から構成される。
１つの実施形態において、酸化変異体は、重鎖配列のＣＤＲおよび／または軽鎖配列のＣＤＲ内のメチオニンおよび／またはトリプトファン残基に酸化を含んでなる。１つの実施形態において、酸化変異体は、配列番号１～６のいずれか１つのメチオニンおよび／またはトリプトファン残基に酸化を含んでなる。さらなる実施形態において、抗体は、ＣＤＲＨ１および／またはＣＤＲＨ３などの重鎖配列のＣＤＲ内のメチオニン残基に酸化を含んでなる。さらなる実施形態において、抗体は、ＣＤＲＬ２などの軽鎖配列のＣＤＲ内のトリプトファン残基に酸化を含んでなる。いくつかの実施形態において、酸化変異体は、ＣＤＲＨ１のＭ３４、ＣＤＲＨ３のＭ１０３および／またはＣＤＲＬ２のＷ５０における１つの酸化または酸化の組合せを含んでなる。
ＣＤＲ内の位置の参照（例えば、Ｍ３４、Ｍ１０３またはＷ５０）は、抗体配列全体に対する位置番号を与える（連続ナンバリング）と理解される。従って、ＣＤＲＨ１のＭ３４は、配列番号１の４番目の残基、すなわち、下線部ＳＹＤＭＳ（配列番号１）を指すと理解される。同様に、ＣＤＲＨ３のＭ１０３は、配列番号３の４番目の残基、すなわち、下線部ＰＹＹＡＭＤＹ（配列番号３）を指し、ＣＤＲＬ２のＷ５０は、配列番号５の最初の残基、すなわち、下線部ＷＡＳＴＬＨＴ（配列番号５）を指す。
１つの実施形態において、抗体は、重鎖配列のＦｃ領域および／または軽鎖配列のＦｃ領域内のメチオニンおよび／またはトリプトファン残基に酸化を含んでなる。いくつかの実施形態において、酸化変異体は、重鎖配列のＦｃ領域のＭ２４８、Ｍ３５４および／またはＭ４２４における１つの酸化または酸化の組合せを含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、かつ／または配列番号１０の軽鎖配列と少なくとも約９０％同一である抗体を含み、かつ、重鎖配列における酸化、例えば、ＣＤＲＨ１のアミノ酸Ｍ３４、ＣＤＲＨ３のＭ１０３、Ｆｃ領域のＭ２４８、Ｆｃ領域のＭ３５４および／またはＦｃ領域のＭ４２４における酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、かつ／または配列番号１０の軽鎖配列と少なくとも約９０％同一である抗体を含み、かつ、軽鎖配列における酸化、例えば、ＣＤＲＬ２のアミノ酸Ｗ５０における酸化を含んでなる。
１つの実施形態において、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含んでなる。さらなる実施形態において、抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、かつ／または配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である。なおさらなる実施形態において、抗体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖配列、ならびに配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ１、配列番号５のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖配列を有する抗ＰＤ－１抗体を含み；組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。さらなる態様において、組成物は、配列番号７の重鎖可変領域および／または配列番号８の軽鎖可変領域を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、
配列番号７に示されるような重鎖可変領域および配列番号８に示されるような軽鎖可変領域を有する抗体、ならびに
それらの酸化変異体
を含む抗ＰＤ－１抗体の集団を含み、ここで、抗体集団の６５％以下が酸化変異体から構成される。
１つの側面において、組成物は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖配列および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、０．１％～６５％の範囲の量の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、（ａ）配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体、ならびに（ｂ）配列番号９と少なくとも９０％同一の重鎖配列および配列番号１０と少なくとも９０％同一の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、
配列番号９に示されるような重鎖アミノ酸配列および配列番号１０に示されるような軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、ならびに
それらの酸化変異体
を含む抗ＰＤ－１抗体の集団を含み、ここで、抗体集団の６５％以下が酸化変異体から構成される。
１つの側面において、組成物は、（ａ）配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体、ならびに（ｂ）配列番号９と少なくとも９０％同一の重鎖配列および配列番号１０少なくとも９０％同一の軽鎖配列を有する抗体；ならびに（ｃ）（ａ）および／または（ｂ）の抗体の酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、軽鎖のＷ５０における３４％以下の酸化、重鎖のＭ３４における２１％以下の酸化、および／または重鎖のＭ１０３における６４％以下の酸化のいずれか１つまたは組合せから選択される。
１つの側面において、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、６５％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、または３％以下の酸化変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、または０．０１～３％の酸化変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、または０．０５～３％の酸化変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、または０．５～３％の酸化変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、または２～３％の酸化変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化変異体を含んでなる。これらの酸化変異体の実施形態は、本明細書に記載の抗体変異体のいずれと組み合わせてもよいことが理解されるであろう。
１つの実施形態において、組成物は、ＣＤＲＨ１のＭ３４における２１％以下の酸化、ＣＤＲＨ３のＭ１０３における６４％以下の酸化、および／またはＣＤＲＬ２のＷ５０における３４％以下の酸化の１つまたは組合せを含んでなる。別の実施形態において、組成物は、ＣＤＲＨ１のＭ３４における１６％以下の酸化、ＣＤＲＨ３のＭ１０３における４７％以下の酸化、および／またはＣＤＲＬ２のＷ５０における２５％以下の酸化の１つまたは組合せを含んでなる。
１つの側面において、組成物は、（ａ）配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体、ならびに（ｂ）軽鎖のＷ５０における３４％以下の酸化、重鎖のＭ３４における２１％以下の酸化、および／または重鎖のＭ１０３における６４％以下の酸化のいずれか１つまたは組合せから選択される抗体の酸化変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に３４％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に３４％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、７．５％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に０～３４％、０～３０％、０～２５％、０～２０％、０～１５％、０～１０％、０～７．５％、０～５％、０～４％、０～３％、０～２％または０～１％の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に０．０１～３４％、０．０１～３０％、０．０１～２５％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～７．５％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、または０．０１～１％の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に０．０５～３４％、０．０５～３０％、０．０５～２５％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～７．５％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、または０．０５～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に０．５～３４％、０．５～３０％、０．５～２５％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～７．５％、０．５～５％、０．５～４％、または０．５～３％、０．５～２％または０．５～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に０．１％以上および３４％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化を含んでなる。本明細書に提供されるデータによって示されるように、Ｗ５０において最大４．８％の酸化を生じる光分解強制分解は、バイオアッセイで９０％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、Ｗ５０において最大３８．９％の酸化を生じる２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）強制分解は、４４％の効力をもたらす（バイオアッセイ）。ＬＣ Ｔｒｐ ５０における酸化のＡＡＰＨ強制分解データから推定すると、最大３４％の酸化で少なくとも６０％の効力が得られ、最大２５％の酸化で少なくとも７０％の効力が得られ得る。これは、＜１％（対照）、＜１％（Ｔ０）、３８．９％（１日目）、７４．３％（３日目）、および８６．８％（５日目）のＡＡＰＨ酸化サンプルの直線勾配を使用して計算され、それぞれ９８％、１０２％、４４％、１４％および５％の効力を有する（バイオアッセイ）。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、軽鎖配列のＷ５０に３４％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、軽鎖配列のＷ５０に３４％以下の酸化を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ３４に２１％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ３４に２１％以下、２０％以下、１６％以下、１５％以下、１２．５％以下、１０％以下、７．５％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３４に０～２１％、０～２０％、０～１６％、０～１５％、０～１２．５％、０～１０％、０～７．５％、０～５％、０～４％、０～３％、０～２％または０～１％の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ３４に０．０１～２１％、０．０１～２０％、０．０１～１６％、０．０１～１５％、０．０１～１２．５％、０．０１～１０％、０．０１～７．５％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、または０．０１～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３４に０．５～２１％、０．５～２０％、０．５～１６％、０．５～１５％、０．５～１２．５％、０．５～１０％、０．５～７．５％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％または０．５～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３４に０．１％以上および２１％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３４に約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化を含んでなる。本明細書に提供されるデータによって示されるように、Ｍ３４において最大２８．８％の酸化を生じるＨ２Ｏ２強制分解は、バイオアッセイにおいて４７％の効力を与える。ＨＣ Ｍｅｔ ３４における酸化のＨ２Ｏ２強制分解データから推定すると、最大２１％の酸化で少なくとも６０％の効力が得られ、最大１６％の酸化で少なくとも７０％の効力が得られ得る。これは、＜１％（対照）、＜１％（Ｔ０）および２８．８％（２週間目のＨ２Ｏ２）のＨ２Ｏ２酸化サンプルの直線勾配を使用して計算され、それぞれ９８％、９４％および４７％の効力を有する（バイオアッセイ）。１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、重鎖配列のＭ３４に２１％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、重鎖配列のＭ３４に２１％以下の酸化を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に６４％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に６４％以下、６０％以下、５０％以下、４７％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、２％以下、または１％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に０～６４％、０～６０％、０～５０％、０～４７％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、０～１５％、０～１０％、０～５％、０～４％、０～３％、０～２％、または０～１％の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に０．０１～６４％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４７％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、または０．０１～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に０．５～６４％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４７％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％または０．５～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に０．１％以上６４％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化を含んでなる。本明細書に提供されるデータによって示されるように、Ｍ１０３において最大８６．１％の酸化を生じるＨ２Ｏ２強制分解でバイオアッセイにおいて４７％の効力が得られる。ＨＣ Ｍｅｔ １０３における酸化のＨ２Ｏ２強制分解データから推定すると、最大６４％の酸化で少なくとも６０％の効力が得られ、最大４７％の酸化で少なくとも７０％の効力が得られ得る。これは、＜１％（対照）、１．２％（Ｔ０）および８６．１％（２週目のＨ２Ｏ２）のＨ２Ｏ２酸化サンプルの直線勾配を使用して計算され、それぞれ９８％、９４％および４７％の効力を有する（バイオアッセイ）。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、重鎖配列のＭ１０３に６４％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸化変異体を含み、酸化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、重鎖配列のＭ１０３に６４％以下の酸化を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に６５％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に６５％以下、６０％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、または３％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％または０．０１～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、または０．５～３％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、または２～３％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に１％以上および６５％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ２４８に約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化を含んでなる。本明細書に提供されるデータによって示されるように、Ｍ２４８において最大４７．１％の酸化を生じるＨ２Ｏ２強制分解は、バイオアッセイで９４％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、Ｍ２４８において最大３３．４％の酸化を生じる光分解強制分解は、バイオアッセイで９０％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与える。従って、Ｍ２４８における酸化は相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく４７．１％より高くなり得ると予想される。
１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ３５４に６５％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ３５４に６５％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、２％以下、または１％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ３５４に０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％または０．０１～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３５４に０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、または０．５～３％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３５４に０．１％以上６５％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ３５４に約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化を含んでなる。本明細書に提供されるデータによって示されるように、Ｍ３５４において最大１６．７％の酸化を生じるＨ２Ｏ２強制分解は、バイオアッセイで９４％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、Ｍ３５４における最大１０．９％の酸化の光分解強制分解は、バイオアッセイで９０％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与える。従って、Ｍ３５４における酸化は相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく１６．７％より高くなり得ると予想される。
１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ４２４に６５％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ４２４に６５％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、２％以下、または１％以下の酸化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＭ４２４に０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％または０．０１～１％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ４２４に０～６５％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、０～１５％、０～１０％、０～５％、０～４％、または０～３％の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ４２４に０．１％以上６５％以下の酸化を含んでなる。あるいは、組成物は、重鎖配列のＭ４２４に約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の酸化を含んでなる。本明細書に提供されるデータによって示されるように、Ｍ４２４に最大２９．０％の酸化を生じるＨ２Ｏ２強制分解は、バイオアッセイで９４％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、Ｍ４２４における最大２７．０％の酸化の光分解強制分解は、バイオアッセイで９０％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与える。従って、Ｍ４２４における酸化は相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく２９．０％より高くなり得ると予想される。
１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの酸化変異体を含み、前記酸化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、重鎖配列のＭ２４８および／またはＭ３５４および／またはＭ４２４に６５％以下の酸化を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォーム；および／または６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
別の側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み；組成物は、５～６０％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２０～９０％の主要アイソフォーム；および／または６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
一例において、酸化は、トリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定することができる。一例において、本明細書に記載の組成物を含んでなるサンプルは、塩酸グアニジンで変性され、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元され、ヨードアセトアミドでアルキル化され、エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃ（Ｌｙｓ－Ｃ）またはトリプシンで消化され得る。Ｌｙｓ－Ｃまたはトリプシンのいずれかによる酵素消化は、３７℃で４時間行うことができる。タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析を伴う液体クロマトグラフィーの前に、サンプルの消化をトリフルオロ酢酸で急冷することができる。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析システムは、Ｃ１８カラムを備えた逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）、２１４ｎｍでのＵＶ検出、およびエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）を採用してもよい。次に、ペプチドをＵＶ検出器と質量分析計（例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＬＴＱ Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＸＬ）で検出することができる。非修飾ペプチドおよび修飾ペプチドの抽出したイオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドの曲線下面積を修飾ペプチドと非修飾ペプチドの両方の合計曲線下面積で割ることにより、酸化レベルを計算する。
１つの側面において、組成物は、本明細書で「凝集変異体」とも呼ばれる凝集した抗体（高分子量（ＨＭＷ）種）である抗体を含んでなる。凝集した抗体は、抗体単量体およびそのサブユニットから形成される二量体またはより高次の構造を含んでいてもよい。従って、高分子量（ＨＭＷ）種は、二量体化された抗体と、付加的サブユニットを有する単量体（例えば、２つの軽鎖サブユニットを有する単量体、または単量体に非共有結合的に結合しているＬＣ－ＬＣ二量体）からなってもよい。凝集変異体は、例えば、本明細書に開示される抗体の共有結合または非共有結合、還元可能または還元不能、および目に見えるまたは見えない凝集体であり得る。凝集変異体または断片化変異体は、それらのサイズに基づいて特徴づけられ、抗体と区別できる。例えば、抗体組成物のサイズ分布は、ＳＥ－ＨＰＬＣなどのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して検出することができる。１つの側面において、組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ１、配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＨ３含んでなる重鎖配列、ならびに配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ１、配列番号５のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲＬ３含んでなる軽鎖配列を有する抗ＰＤ－１抗体を含み；組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。これらの凝集変異体の実施形態は、本明細書に記載の抗体変異体のいずれと組み合わせてもよいことが理解されるであろう。
１つの側面において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の凝集変異体を含み、前記凝集変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖配列を含み；組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、
配列番号１（ＣＤＲＨ１）、配列番号２（ＣＤＲＨ２）、および配列番号３（ＣＤＲＨ３）を含んでなる重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号４（ＣＤＲＬ１）、配列番号５（ＣＤＲＬ２）および配列番号６（ＣＤＲＬ３）を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、ならびに
それらの凝集変異体
を含む抗ＰＤ－１抗体の集団を含み、ここで、抗体集団の３６％以下が凝集変異体から構成される。
１つの実施形態において、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含んでなる。さらなる実施形態において、抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、かつ／または配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である。なおさらなる実施形態において、抗体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。さらなる態様において、組成物は、配列番号７の重鎖可変領域および／または配列番号８の軽鎖可変領域を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、
配列番号７に示されるような重鎖可変領域および配列番号８に示されるような軽鎖可変領域を有する抗体、ならびに
それらの凝集変異体
を含む抗ＰＤ－１抗体の集団を含み、抗体集団の３６％以下が凝集変異体から構成される。
１つの側面において、組成物は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖配列および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体、ならびに配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖配列および／または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの凝集変異体を含み、前記凝集変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの凝集変異体を含み、前記凝集変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、０．０１％～３６％凝集変異体の範囲で凝集変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、
配列番号９に示されるような重鎖アミノ酸配列および配列番号１０に示されるような軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、ならびに
それらの凝集変異体
を含む抗ＰＤ－１抗体の集団を含み、ここで、抗体集団の３６％以下が凝集変異体から構成される。
抗体組成物は、３６％以下の凝集変異体、例えば、３５％以下、３０％以下、２６％以下、２５％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の凝集変異体を含んでいてもよい。別の実施形態において、組成物は、０．０１～３６％、０．０１～３５％、０．０１～３０％、０．０１～２６％、０．０１～２５％、０．０１～２０％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、または０．０１～１％の凝集変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、１％を超え３６％未満の凝集変異体を含んでなる。あるいは、組成物は、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％の凝集変異体を含んでいてもよい。本明細書に提供されるデータによって示されるように、凝集抗体を含んでなる最大１１．２％の組成物を生じる温度強制分解は、バイオアッセイで８６％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与える。凝集抗体を含んでなる最大１５．２％の組成物を生じる酸処理サンプルは、バイオアッセイで１２５％の効力またはＭＳＤで８８％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与える。凝集変異体の温度強制分解データから推定すると、最大３６％で少なくとも６０％の効力が得られ、および最大２６％で少なくとも７０％の効力が得られ得る。これは、０．９％（対照）、１．４％（３週目の４０℃）および１１．２％（３週目の５０℃）の凝集変異体温度処理サンプルの直線勾配を使用して計算され、それぞれ９８％、９４％および８６％の効力を有する（バイオアッセイ）。
１つの側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み；組成物は、１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォーム；および／または６５％以下の酸化変異体；および／または３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
別の側面において、組成物は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体を含み；組成物は、５～６０％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２０～９０％の主要アイソフォーム；および／または６５％以下の酸化変異体；および／または３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
断片化変異体（「断片変異体」）は、全長抗体の一部を含んでなる変異体である。例えば、このような断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、ダイアボディ、直鎖抗体、単鎖抗体分子および免疫グロブリン単一可変ドメインが挙げられる。抗体組成物は、１０％以下断片化抗体、例えば、５％以下、４．６％以下、４．５％以下、４．４％以下、４．３％以下、４．２％以下、４．１％以下、４％以下、３．５％以下、３％以下、２．５％以下、２％以下、１．５％以下、１％以下、０．５％以下または０．０５％以下の断片化抗体を含んでいてもよい。別の実施形態において、組成物は、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４．６％、０．０１～４．５％、０．０１～４％、０．０１～３．５％、０．０１～３％、０．０１～２．５％、０．０１～２％、０．０１～１．５％、０．０１～１％、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、または０．０１～０．０５％の断片化抗体を含んでいてもよい。別の実施形態において、組成物は、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４．６％、０．５～４．５％、０．５～４％、０．５～３．５％、０．５～３％、０．５～２．５％、０．５～２％、０．５～１．５％、０．５～１％、０．６－１．５％、または０．６－１．０％の断片化抗体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％、または約０．５％の断片化抗体を含んでいてもよい。これらの断片化変異体実施形態は本明細書に記載の抗体変異体いずれと組み合わせてもよいことが理解されるであろう。
例えば製造および／または保存中に起こり得る脱アミド化は、酵素反応または化学反応であり得る。脱アミド化は、分子内環化による単純な化学反応によって起こる可能性があり、鎖内の次のアミノ酸のアミド窒素が求核的にアミドに作用（Ｎ＋１がＮに作用）してスクシンイミド中間体を形成する。脱アミド化は、主としてアスパラギン（Ｎ）をおよそ３：１の比率でイソアスパラギン酸（イソアスパラギン酸基）およびアスパラギン酸（アスパラギン酸基）（Ｄ）に変換し得る。従って、この脱アミド化反応は、アスパラギン酸基（Ｄ）のイソアスパラギン酸基への異性化に関連している可能性がある。アスパラギンの脱アミド化とアスパラギン酸基の異性化は、どちらにも中間体のスクシンイミドが関与し得る。程度ははるかに低いが、同様の方法でグルタミン残基による脱アミド化も起こり得る。脱アミド化は、ＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ領域）、またはＦｃ領域で起こり得る。異性化は、アスパラギン酸基（Ｄ）からイソアスパラギン酸基への変換であり、中間体のスクシンイミド（スクシンイミド－アスパラギン酸残基）が関与する。
１つの側面において、組成物は、本明細書で「脱アミド化変異体」とも呼ばれる脱アミド化翻訳後修飾（「脱アミド化」または「脱アミド化された」）を含んでなる抗体を含んでなる。
１つの実施形態において、抗体は、重鎖配列のＣＤＲおよび／または軽鎖配列のＣＤＲにおけるアスパラギン残基の脱アミド化を含んでなる。さらなる実施形態において、抗体は、重鎖配列のＣＤＲにおけるアスパラギン残基の脱アミド化を含んでなる。１つの実施形態において、抗体は、重鎖配列のＦｃ領域におけるアスパラギン残基の脱アミド化および／または軽鎖配列のＦｃ領域を含んでなる。脱アミド化変異体は、重鎖または軽鎖の一方または両方の鎖に存在し得る。これらの脱アミド化変異体の実施形態は、本明細書に記載の抗体変異体のいずれと組み合わせてもよいことが理解されるであろう。いくつかの実施形態において、脱アミド化変異体は、重鎖配列のＦｃ領域のＮ３８０および／またはＮ３８５における脱アミド化の１つまたは組合せを含んでなる。
１つの実施形態において、脱アミド化変異体は、アスパラギン酸残基、スクシンイミド－アスパラギン酸残基、またはイソアスパラギン酸残基から選択される脱アミド化残基を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含み（および場合により、配列番号１０の軽鎖配列と少なくとも９０％同一である配列を含み）、かつ重鎖配列における脱アミド化、例えば、Ｆｃ領域のアミノ酸残基Ｎ３８０および／またはＮ３８５における脱アミド化を含んでなる抗体を含んでなる。いくつかの実施形態において、脱アミド化変異体は、配列番号９のＮ３８０および／またはＮ３８５における最大１００％の脱アミド化を含んでなる。
脱アミド化は、アスパラギン残基（Ｎ）がアスパラギン酸残基（Ｄ）に変換される配列変化をもたらし得る。従って、１つの実施形態において、脱アミド化変異体は、配列番号１１の重鎖配列（すなわち、Ｎ３８０Ｄを有する重鎖配列）を含んでなる。別の実施形態において、脱アミド化変異体は、配列番号１２の重鎖配列（すなわち、Ｎ３８５Ｄを有する重鎖配列）を含んでなる。なおさらなる別の実施形態において、脱アミド化変異体は、配列番号１３の重鎖配列（すなわち、Ｎ３８０ＤおよびＮ３８５Ｄを有する重鎖配列）を含んでなる。
組成物は、最大１００％の脱アミド化変異体を含んでいてもよい。１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、最大１００％の脱アミド化変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＮ３８０および／またはＮ３８５に最大１００％の脱アミド化を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、Ｎ３８０に０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、または０～１０％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８０に０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、または０．１～１０％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８０に１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、または１～１０％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８０に２～１００％、３～１００％、４～１００％、５～１００％、６～１００％、７～１００％、８～１００％、９～１００％、２～３０％、３～３０％、４～３０％、５～３０％、２～４０％、３～４０％、４～４０％、５～４０％、２～１０％、３～１０％、４～１０％、または５～９％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８０に１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、または１０％以上の脱アミド化を含んでなる。本明細書に提供されるデータに示されるように、Ｎ３８０に最大２７．８％の脱アミド化を生じる塩基処理サンプルは、バイオアッセイで９６％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、従って、Ｎ３８０における脱アミド化は、相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく、報告されているレベル２７．８％よりも高くなり得ると予想される。
１つの実施形態において、組成物は、Ｎ３８５に０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、または０～１０％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８５に０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、または０．１～１０％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８５に１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、または１～１０％の脱アミド化を含んでなる。あるいは、組成物は、Ｎ３８５に０．５％以上、１％以上、または２％以上の脱アミド化を含んでなる。本明細書に提供されるデータに示されるように、Ｎ３８５に最大２７．２％の脱アミド化を生じる塩基処理サンプルは、バイオアッセイで９６％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、従って、Ｎ３８５における脱アミド化は、相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく、報告されているレベル２７．２％よりも高くなり得ると予想される。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、重鎖のＮ３８０および／またはＮ３８５に最大１００％の脱アミド化を含んでなる。
いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号９のＮ８４に約０．５～２％、約０．５％、約１％、約１．５％または約２％の脱アミド化を含んでなる。いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号９のＮ１３７に約０．５～２％、約０．５％、約１％、約１．５％または約２％の脱アミド化を含んでなる。いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号９のＮ３１１に約５～８％、約５％、約６％、約７％、または約８％の脱アミド化を含んでなる。いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号９のＮ４３０に約０．５～３％、約０．５％、約１％、約１．５％、約２％、約２．５％または約３％の脱アミド化を含んでなる。
一例において、脱アミド化は、本明細書に前記されているようにＬｙｓ－Ｃおよび／またはトリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定することができる。
１つの側面において、組成物は、本明細書において「異性化変異体」とも呼ばれる異性化翻訳後修飾（「異性化」または「異性化された」）を含んでなる抗体を含んでなる。この変異体は、重鎖配列および／または軽鎖配列、例えば、重鎖配列のＣＤＲおよび／または軽鎖配列のＣＤＲに異性化されたアミノ酸残基を含んでいてもよい。異性化変異体は、重鎖および／または軽鎖の一方または両方お鎖に存在し得る。異性化翻訳後修飾は、イソアスパラギン酸および／またはスクシンイミド－アスパラギン酸残基をもたらし得る。一例において、アスパラギン酸（Ａｓｐ）の異性化は、本明細書に前記されているようにＬｙｓ－Ｃおよび／またはトリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を用いて決定することができる。これらの異性化変異体の実施形態は本明細書に記載の抗体変異体のいずれと組み合わせてもよいことが理解されるであろう。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、最大１００％の異性化変異体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、ドスターリマブの異性化変異体を含み、異性化変異体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含み；組成物は、１００％以下の異性化変異体を含んでなる。
いくつかの実施形態において、組成物は、異性化変異体を含んでなる。いくつかの実施形態において、組成物は、最大１００％の異性化変異体を含んでなる。組成物は、０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～１５％、０～２０％、または０～１０％の異性化変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％または０．１～１０％の異性化変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％または１～１０％の異性化変異体を含んでいてもよい。
１つの実施形態において、組成物は、配列番号９のＤ１４７に最大１００％の異性化を含んでなる。組成物は、重鎖配列のＤ１４７に０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、０～１５％または０～１０％の異性化を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、重鎖配列のＤ１４７に０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０～１５％または０．１～１０％の異性化を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、組成物は、重鎖配列のＤ１４７に１％以上の異性化を含んでなる。本明細書に提供されるデータに示されるように、Ｄ１４７において２０．８％の異性化を生じる塩基処理サンプルは、バイオアッセイで９６％の効力（すなわち、アッセイの変動～完全な機能の範囲内）を与え、従って、Ｄ１４７における異性化は、相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく、報告されているレベル２０．８％よりも高くなり得ると予想される。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、重鎖のＤ１４７に最大１００％の異性化を含んでなる。
いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号９のＤ１５１、Ｄ１６７、Ｄ２６１、Ｄ２６６、Ｄ２７６、Ｄ３９５ Ｄ３９７および／または４０９に０～１５％、０．１～１５％、１～１５％、１％以上の、１．５％以上、または２％以上の異性化を含んでなる。例えば、組成物は、配列番号９のＤ６２に約２．３％の異性化を含んでなる。例えば、組成物は、配列番号９のＤ２６１／２６６／２７６に約１３．１％の異性化を含んでなる。例えば、組成物は、配列番号９のＤ１５１／１６７に約３．１％の異性化を含んでなる。例えば、組成物は、配列番号９のＤ３９５／３９７／４０９に約２．７％の異性化を含んでなる。
抗体組成物は、（ｉ）抗体（本明細書に記載の通り、例えば、配列番号９の重鎖アミノ酸配列および配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗体）；ならびに（ｉｉ）アミノ酸配列変異体（例えば、脱アミド化またはＣ末端リジンクリッピング変異体）、酸化変異体、異性化変異体、凝集変異体、および／または断片化変異体の１または複数または組合せを含む抗体変異体を含んでいてもよい。
従って、１つの側面において、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含んでなる組成物が提供され、組成物は、（ｉ）６５％以下の酸化変異体；および（ｉｉ）３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含み、組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含み、組成物は、３６％以下の凝集変異体を含んでなる。
別の実施形態において、変異体を含んでなる組成物は、１００％の効力を有する参照標準の効力の少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を有する。１つの側面において、組成物は、抗ＰＤ－１抗体の変異体を含み、変異体は、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる組成物の少なくとも６０％効力、１０～９７％の酸性変異体、０．１～３５％の塩基性変異体、２～８０％の主要アイソフォーム、４．８％以下のＬＣ Ｗ５０酸化変異体、１％以下のＨＣ Ｍ３４酸化変異体、１．２％以下のＨＣ Ｍ１０３酸化変異体、１５．２％以下の凝集変異体、１６．７％以下のＨＣ Ｍ３５４酸化変異体、２９．０％以下のＨＣ Ｍ４２４酸化変異体、４７．１％以下のＨＣ Ｍ２４８酸化変異体、２０．８％以下のＨＣ Ｄ１４７異性化変異体、１３．１％以下のＨＣ Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、３．１％以下のＨＣ Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体、４．６％以下の断片化変異体、２７．８％以下のＨＣ Ｎ３８０脱アミド化変異体、２７．２％以下のＨＣ Ｎ３８５脱アミド化変異体、約７．４％以下のＨＣ Ｎ３１１脱アミド化変異体、約２．０％以下のＮ４３０脱アミド化変異体、９０％以上の重鎖（ＨＣ）Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および１％以下のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を有する。効力は本明細書に記載のバイオアッセイを用いて決定することができる。
糖化は、グルコースなどの還元糖とタンパク質中の遊離アミン基との非酵素的化学反応を含んでなる翻訳後修飾であり、一般にリジン側鎖のεアミンまたはタンパク質のＮ末端に見られる。糖化は、還元糖の存在下での製造および／または保存中に起こり得る。
ジスルフィド結合のスクランブル化は、製造および／または保存条件中に起こり得る。ある特定の環境下で、ジスルフィド結合は破断するか、または不適切に形成して不対システイン残基（－ＳＨ）をもたたす。これらの遊離（不対）スルフヒドリル（－ＳＨ）は、シャッフリングを促進し得る。
チオエーテルの形成およびジスルフィド結合のラセミ化は、デヒドロアラニンおよびペルスルフィド中間体を介してシステイン残基に戻るジスルフィド架橋のβ脱離を介して、製造または貯蔵中の塩基性条件下で起こり得る。その後のデヒドロアラニンとシステインの架橋により、チオエーテル結合の形成が起こり得るか、または遊離システイン残基がＤ－システインとＬ－システインの混合物でジスルフィド結合を再形成し得る。
三硫化物は、硫黄原子のジスルフィド結合への挿入から生じる可能性があり（Ｃｙｓ－ＳＳ－Ｓ－Ｃｙｓ）、生産細胞培養における硫化水素の存在により形成される可能性もある。
重鎖および／または軽鎖のＮ末端グルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）およびグルタミン酸基（グルタミン酸）（Ｅ、Ｇｌｕ）は、環化を介してピログルタミン酸基（ｐＧｌｕ）を形成し得る。ｐＧｌｕの形成は、生産バイオリアクター内で形成され得るが、それはまた、例えば、処理および保存条件のｐＨおよび温度に応じて、非酵素的に形成される場合もある。Ｎ末端のＱまたはＥの環化は、天然のヒト抗体で一般的に見られる。
Ｃ末端リジンクリッピング（Ｃ末端リジン切断とも呼ばれる）は、カルボキシペプチダーゼによって触媒される酵素反応であり、組換えおよび天然のヒト抗体で一般的に見られる。このプロセスの変形には、組換え宿主細胞からの細胞酵素による一方または両方の重鎖からのリジンの除去が含まれる。ヒト対象／患者への投与は、残っているＣ末端リジンの除去をもたらす可能性がある。
１つの実施形態において、翻訳後修飾は、抗体変異体（例えば、配列変異体）である。例示的翻訳後修飾抗体変異体は、アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）のアスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）へのスイッチ（「脱アミド化」）、Ｎ末端ピログルタミン酸基および／またはＣ末端リジンの切断を含んでなる。一例において、抗体変異体、例えば、重鎖配列中のＮ３８０ＤまたはＮ３８５Ｄは、本明細書に前記されているようにＬｙｓ－Ｃおよび／またはトリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を用いて決定することができる。非修飾ペプチドおよび修飾ペプチドの抽出したイオンクロマトグラムを使用して、修飾ペプチドと非修飾ペプチドの両方の合計曲線下面積で割ることにより、抗体変異体、例えばＮ３８０ＤまたはＮ３８５Ｄのレベルを計算する。
１つの側面において、組成物は、重鎖アミノ酸配列にＮ末端ピログルタミン酸（「ピログルタミン酸」）翻訳後修飾（「Ｎ末端ピログルタミン酸変異体」）を含んでなる抗体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含んでなる（および場合により、配列番号１０の軽鎖配列と少なくとも９０％同一である配列を含んでなる）、および重鎖のＮ末端にピログルタミン酸を含んでなる抗体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、最大１００％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでなる。組成物は、０～１００％、０～９０％、０～８０％、０～７０％、０～６０％、０～５０％、０～４０％、０～３０％、０～２０％、または０～１０％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、または０．１～１０％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、または１～１０％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、１０％以下、９％以下、８％以下、７％以下、６％以下、５％以下の、２％以下または１％以下の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでいてもよい。
１つの側面において、組成物は、重鎖アミノ酸配列にＣ末端リジン（Ｋ４４３）の欠失を含んでなる抗体を含んでなる。１つの実施形態において、組成物は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含んでなる（および場合により、配列番号１０の軽鎖配列と少なくとも９０％同一である配列を含んでなる）、および重鎖のＣ末端のリジン残基（Ｋ４４３）の欠失を含んでなる抗体を含んでなる。
１つの実施形態において、組成物は、最大１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる。別の実施形態において、組成物は、１０％以上の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる。別の実施形態において、組成物は、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上または９５％以上の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる。組成物は、１～１００％、１０～１００％、２０～１００％、３０～１００％、４０～１００％、５０～１００％、６０～１００％、７０～１００％、８０～１００％または９０～１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでいてもよい。あるいは、組成物は、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９５～９９％、約９６～９９％または約９７～９９％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでいてもよい。
１つの実施形態において、組成物は、最大１００％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体および最大１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、最大１００％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体、および／または最大１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる。
一例において、Ｎ末端ピログルタミン酸およびＣ末端リジン切断は、本明細書に前記されているようにＬｙｓ－Ｃおよび／またはトリプシンペプチドマッピングタンデム質量分析（ペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して決定することができる。
新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）の抗ＰＤ－１抗体への結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して測定することができる。この抗体は、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）センサーチップに固定化されているＦｃＲｎによって捕捉され得る。サンプルのＦｃＲｎ結合濃度は、検量線上の結合応答の補間によって決定することができる。特異的結合活性（％）は、ＦｃＲｎ結合濃度を総タンパク質濃度で割ることによって計算される。
上記の抗体および抗体変異体を含んでなる抗体組成物は、特異的抗原結合および／またはＦｃＲｎ結合および／または効力を保持する。例えば、上記の抗体および抗体変異体および翻訳後修飾変異体を含んでなる抗体組成物は、０．７０を超えるＰＤ－１特異的抗原結合；および／または７０％を超えるＦｃＲｎ結合および／または７０％を超える効力を有する。従って、これらのレベル（％）の変異体は、機能に大きな影響を与えることなく（すなわち、活性の低下をもたらすことなく）抗体組成物中で許容され得る。１つの実施形態において、「機能低下」または「活性低下」は、ＰＤ－１への結合、またはＦｃＲｎへの結合、または効力が参照標準と比較してパーセンテージとして低下し、アッセイの変動性に対して有意であることを意味する。例えば、機能または活性または効力の低下は、５％以上、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、または５０％以上の低下と記載することができる。
例えば、参照標準（または参照物質または対照または非ストレス対照）は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる組成物である。１つの側面において、参照標準は、１０～９７％の酸性変異体、および／または０．１～３５％の塩基性変異体、および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる。１つの実施形態において、参照標準は、４．８％以下のＬＣ Ｗ５０酸化変異体を含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、１％以下のＨＣ Ｍ３４の酸化変異体を含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、１．２％以下のＨＣ Ｍ１０３酸化変異体を含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、１０～９７％の酸性変異体、および／または０．１～３５％の塩基性変異体、および／または２～８０％の主要アイソフォーム、および／または４．８％以下のＬＣ Ｗ５０酸化変異体、および／または１％以下のＨＣ Ｍ３４酸化変異体、および／または１．２％以下のＨＣ Ｍ１０３酸化変異体を含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、１５．２％以下の凝集変異体を含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列、１０～９７％の酸性変異体、および／または０．１～３５％の塩基性変異体、および／または２～８０％の主要アイソフォーム、および／または４．８％以下のＬＣ Ｗ５０酸化変異体、および／または１％以下のＨＣ Ｍ３４酸化変異体、および／または１．２％以下のＨＣ Ｍ１０３酸化変異体、および／または１５．２％以下の凝集変異体を含んでなる。
別の実施形態において、参照標準は、１６．７％以下のＨＣ Ｍ３５４酸化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、２９．０％以下のＭ４２４酸化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、４７．１％以下のＨＣ Ｍ２４８酸化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、２０．８％以下のＨＣ Ｄ１４７異性化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、１３．１％以下のＨＣ Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、３．１％以下のＨＣ Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、４．６％以下の断片化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、２７．８％以下のＨＣ Ｎ３８０脱アミド化変異体および／または２７．２％以下のＨＣ Ｎ３８５脱アミド化変異体をさらに含んでなる。さらなる実施形態において、参照標準は、約７．４％以下のＨＣ Ｎ３１１脱アミド化変異体および／または約２．０％以下のＮ４３０脱アミド化変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、９０％以上の重鎖（ＨＣ）Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および１％以下のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体をさらに含んでなる。別の実施形態において、参照標準は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列、１０～９７％の酸性変異体、および／または０．１～３５％の塩基性変異体、および／または２～８０％の主要アイソフォーム、および／または４．８１％以下のＬＣ Ｗ５０酸化変異体、および／または１％以下のＨＣ Ｍ３４酸化変異体、および／または１．２％以下のＨＣ Ｍ１０３酸化変異体、および／または１５．２％以下の凝集変異体、１６．７％以下のＨＣ Ｍ３５４酸化変異体、および／または２９．０％以下のＨＣ Ｍ４２４酸化変異体、および／または４７．１％以下のＨＣ Ｍ２４８酸化変異体、および／または２０．８％以下のＨＣ Ｄ１４７異性化変異体、および／または１３．１％以下のＨＣ Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、および／または３．１％以下のＨＣ Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体、および／または４．６％以下の断片化変異体、および／または２７．８％以下のＨＣ Ｎ３８０脱アミド化変異体、および／または２７．２％以下のＨＣ Ｎ３８５脱アミド化変異体、および／または約７．４％以下のＨＣ Ｎ３１１脱アミド化変異体、および／または約２．０％以下のＮ４３０脱アミド化変異体、および／または９０％以上の重鎖（ＨＣ）Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および／または１％以下のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでなる。
１つの実施形態において、参照標準は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列、１０～３０％の酸性変異体；および／または０．１～１０％の塩基性変異体；および／または６０～８０％の主要アイソフォーム、および／または約１％以下のＬＣ Ｗ５０酸化変異体、および／または約１％以下のＨＣ Ｍ３４酸化変異体、および／または約１％以下のＨＣ Ｍ１０３酸化変異体、および／または約１％凝集変異体、約１％以下のＨＣ Ｍ３５４酸化変異体、および／または約１％以下のＨＣ Ｍ４２４酸化変異体、および／または約２～３％のＨＣ Ｍ２４８酸化変異体、および／または約１％以下のＨＣ Ｄ１４７異性化変異体、および／または約１％のＨＣ Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、および／または約０．６～１％の断片化変異体、および／または５～９％のＨＣ Ｎ３８０脱アミド化変異体、および／または約１％以下のＨＣ Ｎ３８５脱アミド化変異体、および／または約５．８％のＨＣ Ｎ３１１脱アミド化変異体、および／または約１．２％のＮ４３０脱アミド化変異体、および／または約９７～９９％の重鎖（ＨＣ）Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および／または約１％以下のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでなる。
本明細書に提議されるような参照標準は、抗ＰＤ－１抗体を含んでなる組成物である。
組成物は、抗体変異体と翻訳後修飾変異体の混合物を含んでいてもよい。例えば、抗体組成物は、酸性変異体、塩基性変異体、酸化変異体、脱アミド化変異体、異性化変異体、凝集変異体、断片化変異体、Ｎ末端ピログルタミン酸変異体、およびＣ末端リジン切断変異体のうち２つ以上を含んでいてもよい。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、（ｉ）最大１００％の酸性変異体、（ｉｉ）最大３５％の塩基性変異体、（ｉｉｉ）軽鎖のＷ５０における３４％以下の酸化、（ｉｖ）重鎖のＭ３４における２１％以下の酸化、（ｖ）重鎖のＭ１０３における６４％以下の酸化、（ｖｉ）Ｍ２４８における６５％以下の酸化、（ｖｉｉ）Ｍ３５４における６５％以下の酸化、（ｖｉｉｉｉ）Ｍ４２４における６５％以下の酸化、および／または（ｉｘ）３６％以下の凝集変異体のいずれか１つまたは組合せを含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、（ｉ）最大１００％の酸性変異体、（ｉｉ）最大３５％の塩基性変異体、（ｉｉｉ）重鎖のＭ１０３における６４％以下の酸化、（ｉｖ）軽鎖のＷ５０における３４％以下の酸化、（ｖ）重鎖のＭ３４における２１％以下の酸化、（ｖｉ）Ｍ２４８における６５％以下の酸化、（ｖｉｉ）Ｍ３５４における６５％以下の酸化、（ｖｉｉｉ）Ｍ４２４における６５％以下の酸化；（ｉｘ）３６％以下の凝集変異体、（ｘ）重鎖のＤ１４７における最大１００％の異性化；（ｘｉ）Ｎ３８０における最大１００％の脱アミド化、（ｘｉｉ）Ｎ３８５における最大１００％の脱アミド化、（ｘｉｉｉ）最大１００％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体、および／または（ｘｉｖ）最大１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体のいずれか１つまたは組合せを含んでなる。
１つの側面において、組成物は、配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、組成物は、（ｉ）最大１００％の酸性変異体、（ｉｉ）最大３５％の塩基性変異体、（ｉｉｉ）軽鎖のＷ５０における３４％以下の酸化、（ｉｖ）重鎖のＭ３４における２１％以下の酸化、（ｖ）重鎖のＭ１０３の６４％以下の酸化、（ｖｉ）Ｍ２４８における６５％以下の酸化、（ｖｉｉ）Ｍ３５４における６５％以下の酸化、（ｖｉｉｉ）Ｍ４２４における６５％以下の酸化、および／または（ｉｘ）３６％以下の凝集変異体のいずれか１つまたは組合せを含んでなる。
本発明は、本明細書に記載の翻訳後修飾のうちの１つまたは複数を受けた可能性のある、または受けた抗体を包含する。例示的な組成物は、１）本明細書に記載される翻訳後修飾（１以上、または２以上）を伴うおよび伴わない、抗体の混合物またはブレンドを含んでいてもよい。従って、組成物は、翻訳後修飾を有する抗体の集団と、翻訳後修飾を伴わない抗体の集団とを含んでいてもよい。
記載されている組成物は、１つまたは複数の翻訳後修飾を受けていた可能性のある、または受けていた。修飾は、ＣＤＲ、可変フレームワーク領域、または定常領域で起こり得る。修飾は、分子の電荷の変化をもたらし得る。
１つの実施形態において、本明細書に記載の翻訳後修飾は、生成物関連の不純物として指定および記載されている場合を除き、抗原結合親和性、生物活性、薬物動態（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）、凝集、免疫原性、および／またはＦｃ受容体への結合に有意な変化をもたらさない。
製造方法
本明細書に記載の抗体および組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ供給源（例えば、ハイブリドーマまたは抗体を組換え的に生産する細胞株）およびｉｎ ｖｉｖｏ供給源（例えば、齧歯類）を介するものを含むいずれかの手段によって得ることができる。抗体を作出するための方法は当技術分野で公知であり、例えば、ＷＯ２０１８／０８５４６８に記載されている。
例えば、組成物は、組換え発現系において発現され、それから精製することができる。１つの実施形態において、組成物は、配列番号９および配列番号１０を含んでなる抗体の発現に好適な条件下で宿主細胞を培養する方法によって生産され、組成物は、発現され、場合により精製され、場合により医薬組成物内に処方される。
いくつかの異なる発現系および精製法をこれらの組成物を生産するために使用することができる。一般に、宿主細胞を、抗体をコードする組換え発現ベクターで形質転換させる。哺乳動物起源の真核細胞株（例えば、ＣＨＯ、Ｐｅｒｃ６、ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａ、ＮＳ０）を含む広範な宿主細胞が使用可能である。好適な宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣ＣＨＯ細胞（例えば、ＣＨＯＫ１およびＣＨＯ－ＤＧ４４）などの哺乳動物細胞が含まれる。１つの実施形態において、抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞によって生産される。
宿主細胞は、単離された宿主細胞であり得る。宿主細胞は、通常、多細胞生物（例えば、植物または動物）の一部ではない。宿主細胞は、非ヒト宿主細胞であり得る。
真核生物または哺乳動物細胞宿主とともに使用するために適当なクローニングおよび発現ベクターならびにクローニング方法は当技術分野で公知である。
宿主細胞を培養して抗体をコードする組換え発現ベクターを発現させる。
組成物は、従来のタンパク質精製手順によって回収および精製することができる。例えば、組成物は、培養培地から直接採取可能である。細胞培養培地の採取は、例えば、遠心分離および／または深層濾過による清澄化によるものであり得る。組成物の回収の後に精製を行って十分な純度を確保する。従って、１つの側面において、本明細書に記載の組成物を含んでなる細胞培養培地が提供される。１つの実施形態において、細胞培養培地は、ＣＨＯ細胞を含んでなる。
次に、組成物を細胞培養培地から精製することができる。これは、細胞培養上清を採取すること、細胞培養上清を精製媒体（例えば、抗体分子を結合させるためのプロテインＡ樹脂またはプロテインＧ樹脂）と接触させること、および精製媒体から抗体分子を溶出させて溶出液を得ることを含んでいてもよい。従って、１つの側面において、本明細書に記載の組成物を含んでなる溶出液が提供される。
精製には１以上のクロマトグラフィー工程、例えば、１以上のクロマトグラフィー樹脂；および／または１以上の濾過工程が使用され得る。組成物を精製するために、例えば、プロテインＡ、Ｇ、またはＬなどの樹脂を使用するアフィニティークロマトグラフィーを使用することができる。その代わりに、またはそれに加えて、組成物を精製するために陽イオン交換などのイオン交換樹脂を使用することができる。
あるいは、精製工程は、アフィニティークロマトグラフィー樹脂工程と、その後の陽イオン交換樹脂工程を含んでなる。
医薬組成物および処方物
本明細書に記載の組成物は、医薬組成物の形態であり得る。
１つの側面において、組成物および少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物が提供される。
「医薬組成物」は、本明細書に記載の組成物（すなわち、有効成分）、および１種類以上の薬学上許容可能な賦形剤を含んでいてもよい。賦形剤は、処方物の他の成分に適合し、製剤が可能であり、そのレシピエントに有害ではなく、かつ／または有効成分の有効性を妨害しないという意味で許容可能でなければならない。従って、本発明の医薬組成物は、患者への投与に適している。
本明細書で使用される場合、「薬学上許容可能な賦形剤」は、緩衝剤、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１以上ならびにそれらの組合せを含み得る。多くの場合、等張剤、例えば、ポリオール、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、もしくは塩化ナトリウム、保存剤；補助溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属錯体（例えば、Ｚｎ２＋－タンパク質錯体）；生分解性ポリマー；および／またはナトリウムもしくはカリウムなどの塩形成対イオンを含むことが好ましい。
賦形剤または他の材料の厳密な性質は投与経路によって異なり、投与経路は例えば、経口、直腸、鼻腔、局所（口内および舌下を含む）、膣、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内の、くも膜下腔内、および硬膜外を含む）、ならびに腫瘍内であり得る。好ましい賦形剤は例えば、レシピエントの状態および治療する疾患によって異なり得ることが認識されるであろう。
賦形剤の混合物とそれぞれの濃度は、一緒に「医薬処方物」（または「処方物」）を形成する。このような組成物は、好適には目に見える粒子状物質を含まない。処方物は、液体形態または凍結乾燥形態であり得る。液体処方物中の組成物は、容器に充填され、凍結され得る。特定の実施形態において、組成物を含む凍結処方物のアリコートは、凍結乾燥され得る。凍結乾燥物は、水または他の水溶液を添加することによって再構成されて、組成物を含んでなる再構成処方物を生成し得る。
１つの実施形態において、組成物は、液体処方物である。いくつかの実施形態において、処方物は、約１０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体を含んでなる。さらなる実施形態において、処方物は、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ、例えば、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬ、特に、約２０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含んでなる。さらなる実施形態において、処方物は、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体を含んでなる。別の実施形態において、処方物は、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体を含んでなる。
１つの側面において、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬ（例えば、約２０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬ）の抗体およびｐＨ約５．５～約６．５の緩衝剤を含んでなる本明細書に記載の医薬組成物を含んでなる処方物が提供される。１つの実施形態において、組成物は、液体処方物である。
いくつかの実施形態において、組成物は、無菌の液体として処方される。いくつかの実施形態において、組成物は、目に見える粒子を含まない。いくつかの実施形態において、組成物は、バッファー（例えば、クエン酸バッファー）中に処方される。いくつかの実施形態において、組成物は、ＰＤ－１抗体ならびに以下の２つ以上を含んでなる：クエン酸バッファー、ヒスチジンバッファー アルギニン、トレハロース、塩化ナトリウムおよびポリソルベート８０。
特定の実施形態では、緩衝剤は、クエン酸バッファーである。クエン酸バッファーは、例えば、共役酸／共役塩基系（クエン酸ナトリウム／クエン酸）に使用によるか、またはクエン酸ナトリウム溶液のＨＣｌ滴定によって達成され得る。１つの実施形態において、クエン酸バッファーは、ｐＨ約５．０～約６．５、例えば、約５．５～約６．０、特に、約５．５または約６．０である。
別の実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジンバッファーである。１つの実施形態において、ヒスチジンバッファーは、ｐＨ約５．５～約７．０、約５．５～約６．５、例えば、約６．０～約６．５、特に、約６．０または約６．５である。
いくつかの実施形態において、処方物は、界面活性剤を含んでなる。「界面活性剤」は、親水性基と疎水性基の両方を含む化学組成のために、固－固、固－液、液－液、および液－空気界面の表面で効果を発揮し得る界面活性剤である。界面活性剤は、希薄な溶液において、空気－水および／または水－固体界面でタンパク質濃度を低下させる可能性があり、ここでタンパク質が吸着され凝集する場合がある。界面活性剤は、タンパク質処方物の疎水性界面に結合する可能性がある。いくつかの非経口的に許容される非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート基またはポリエーテル基のいずれかを含んでなる。ポリソルベート２０および８０、特にポリソルベート８０（ＰＳ８０）は、本発明の処方物における適切な界面活性剤安定剤である。１つの実施形態において、処方物はさらにＰＳ８０を含んでなる。いくつかの実施形態において、処方物は、約０．０１％～約０．１％、例えば、約０．０１％～約０．０５％または約０．０１～約０．０３％ｗ／ｖのＰＳ８０またはＰＳ２０を含んでなる。いくつかの実施形態において、処方物は、約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０またはＰＳ２０を含んでなる。好ましい実施形態では、処方物は、約０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０を含んでなる。
いくつかの実施形態において、処方物は、処方物の約２９０～３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度に調整するような濃度の塩化ナトリウムをさらに含んでなる。１つの実施形態において、処方物は、約２０ｍＭ～約４０ｍＭ、例えば約２５ｍＭ～約３５ｍＭの塩化ナトリウムを含んでなる。さらなる実施形態において、処方物は、約３１ｍＭの塩化ナトリウムを含んでなる。
処方物はまた、可溶化剤、例えば、アルギニン、例えば、Ｌ－アルギニン－ＨＣｌも含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、処方物は、約８０ｍＭ～約１２０ｍＭ、例えば、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、特に、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭの範囲のアルギニンを含んでなる。いくつかの実施形態において、処方物は、約１００ｍＭのアルギニンを含んでなる。
いくつかの実施形態において、処方物はポリオールを含んでなる。いくつかの実施形態において、ポリオールは、糖、好ましくは、非還元糖である。いくつかの実施形態において、非還元糖はトレハロースである。いくつかの実施形態において、処方物は、約２％～約１０％ｗ／ｖの範囲のトレハロースを含んでなる。いくつかの実施形態において、処方物は、約５％ｗ／ｖのトレハロースを含んでなる。
いくつかの実施形態において、処方物は、アルギニンおよび／またはトレハロース、例えば、約８０ｍＭ～約１２０ｍＭ（特に、１００ｍＭ）のアルギニンまたは約２％～約１０％ｗ／ｖ（特に、５％ｗ／ｖ）のトレハロースを含んでなる。
１つの側面において、約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体、約１０ｍＭ～約４０ｍＭのクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファー、約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのアルギニンまたは約２％～約１０％ｗ／ｖのトレハロース、約２０ｍＭ～約４０ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０１％～約０．０３％ｗ／ｖのポリソルベート８０を、ｐＨ約５．５～約６．５で含んでなる医薬組成物を含んでなる処方物が提供される。
１つの側面において、約２０～１２５ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン（例えば、Ｌ－アルギニン－ＨＣｌ）、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を、約ｐＨ６でを含んでなる処方物が提供される。
１つの側面において、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を、約ｐＨ６で含んでなる処方物が提供される。
１つの側面において、約５０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０を、約ｐＨ６で含んでなる処方物が提供される。
「安定」処方物は、その中のタンパク質が製造、輸送、保存、および投与中にその物理的および／または化学的安定性を本質的に保持するものである。安定性は、選択された温度、選択された期間で測定することができる。例えば、２℃～８℃の推奨温度で保存される製品では、処方物は、室温、約３０℃、または４０℃で少なくとも１か月安定であり、かつ／または約２～８℃で少なくとも１年間、好ましくは、少なくとも２年間安定である。例えば、保存中の凝集、酸性変異体、および／または塩基性変異体の程度が、タンパク質の安定性の指標として使用可能である。よって、「安定」処方物は、処方物中に存在する抗体の凝集変異体が約１０％以下、約５％以下、例えば、約４％以下であるものであり得る。「安定」処方物は、処方物中に存在する抗体の酸性変異体が約６０％以下、約５０％以下、例えば、約３５％以下であるものであり得る。「安定」処方物は、処方物中に存在する抗体の塩基性変異体が約３５％以下、約１０％以下、例えば、約１５％以下であるものであり得る。
本発明のある特定の側面において、処方物は、組成物を約２～８℃で少なくとも１８か月の保存、冷凍、解凍、および／または混合に対して安定なままとすることを可能とする。１つの実施形態において、「安定」処方物は、処方物中に存在する抗体の凝集変異体が約４％以下、酸性変異体が約３５％以下、および塩基性変異体が約１５％以下であるものであり得る。
さらに別の態様では、本発明は、製品、例えば、本明細書に記載の処方物中に組成物を保持する容器を含んでなるキットを対象とする。１つの側面では、処方物を含でなる注射装置が提供される。注射装置は、ペン注射器装置または自動注射器装置を含んでいてもよい。１つの実施形態では、処方物は、充填済みシリンジに含まれる。
治療方法および使用のための組成物
本発明はさらに、ＰＤ－１タンパク質の不適切な発現（例えば、過剰発現）または活性の増加が、疾患の病理学的影響を引き起こすもしくは寄与する、またはＰＤ－１タンパク質のレベルもしくは活性の低下が哺乳動物、好ましくはヒトにおいて治療利益を有する任意の疾患または障害を治療する方法を提供する。
１つの側面において、療法における使用のための本明細書に記載の組成物が提供される。このような療法は、ＰＤ－１タンパク質の不適切な発現（例えば、過剰発現）または活性の増加が疾患の病理学的影響を引き起こすもしくは寄与する、またはＰＤ－１タンパク質のレベルもしくは活性の低下が哺乳動物、好ましくはヒトにおいて治療利益を有する任意の疾患または障害に関し得る。
組成物は、対象においてＴ細胞の活性化またはＴ細胞のエフェクター機能を増強する方法で使用することができ、この方法は、ＰＤ－１シグナル伝達を阻害することができる薬剤の治療上有効な量を投与することを含んでなる。組成物は、対象において免疫応答を誘導する方法で使用することができ、この方法は、ＰＤ－１シグナル伝達を阻害することができる治療上有効な量の薬剤を投与することを含んでなる。組成物は、免疫応答を増強するか、または対象における免疫細胞の活性を増加させる方法で使用することができ、この方法は、ＰＤ－１シグナル伝達を阻害することができる薬剤の治療上有効な量を投与することを含んでなる。
１つの側面において、癌の治療における使用のための組成物が提供される。あるいは、感染性疾患の治療における使用のための組成物が提供される。
１つの側面において、癌の治療における使用のための本明細書に記載の薬剤の製造における組成物の使用が提供される。あるいは、感染性疾患の治療おける使用のための薬剤の製造における本明細書に記載の組成物が提供される。
本明細書において使用される場合「治療する」という用語およびその文法的変形は、治療的療法を意味する。特定の状態に関して、治療とは、（１）病態の１以上の生物学的徴候の状態を改善すること、（２）ａ）病態をもたらす、もしくは病態の原因となる生物学的カスケードの１以上の点、またはｂ）病態の生物学的徴候の１以上に干渉すること、（３）病態またはその治療に関連する症状、影響または副作用の１以上を軽減すること、（４）病態または病態の生物学的徴候の１以上の進行を緩徐化すること、あるいは（５）病態の生物学的徴候の１以上の発症を防ぐことを意味する。
治療は、治療的、予防的、または防止的であり得る。対象はそれを必要としている者である。治療を必要とする者には、今後疾患を発症する可能性のある者に加えて、特定の医学的疾患にすでに罹患している者を含み得る。
従って、予防的処置も企図される。当業者は、「防止」が絶対的な用語ではないことを認識するであろう。医学において、「防止」は、病態またはその生物学的徴候の可能性もしくは重症度を実質的に低減するため、またはそのような病態もしくはその生物学的徴候の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を指すと理解される。予防的療法は、例えば、対象が癌の強い家族歴を有する場合、または対象が発癌物質に曝露された場合など、対象が癌を発症する高いリスクがあると考えられる場合に適切である。
従って、本明細書に記載の方法、抗体および組成物は、指定されている場合、予防的処置または防止的処置に使用することができる。この場合、記載された方法、抗体および組成物を使用して、疾患の１以上の側面または症状の発症を防止するまたは遅延させることができる。対象は無症候性であってもよい。対象は、疾患に対する遺伝的素因を有していてもよい。予防上有効な量の組成物がそのような個体に投与される。予防上有効な量は、本明細書に記載の疾患の１以上の側面または症状の発症を防止するまたは遅延させる量である。
方法、抗体および組成物は、完全な治癒に影響を与える必要はなく、または疾患の総ての症状または徴候を根絶して、実行可能な治療的処置を構成する必要もない。当技術分野で認識されているように、治療法で治療薬として使用される薬物は、所与の病状の重症度を軽減する可能性があるが、有用な治療薬と見なされるために、疾患の総ての徴候を排除する必要はない。同様に、予防的に投与される治療は、実行可能な予防薬を構成するために、疾患の発症の防止に完全に有効である必要はない。単に疾患の影響を軽減すること（例えば、その症状の数もしくは重症度を減らす、または別の治療の有効性を高める、または別の有益な効果を生み出すことによる）、あるいは対象において疾患が発生する可能性を減らすこと（例えば、疾患の発症を遅延させることによる）または増悪する可能性を減らすことで十分である。
「個人」、「対象」および「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、治療を必要とする任意の人、例えば、癌治療を必要とする人を含むように広く定義され得る。対象は通常、ヒトである。対象はまた、マウス、ラット、または霊長類（例えば、マーモセットまたはサル）などの哺乳動物であり得る。対象は非ヒト動物であってもよい。本開示の抗体、組成物および方法はまた、獣医学的用途を有する。治療される対象は、農用動物、例えば、牛または雄牛、羊、豚、雌牛、山羊もしくは馬、または犬もしくは猫などの飼育動物であり得る。動物は、任意の齢、または成熟した成体動物であり得る。
本発明はまた、哺乳動物における癌、感染性疾患または自己免疫疾患を治療する方法も提供する。
癌治療
本開示は、対象における腫瘍を減少させるか、または腫瘍細胞の増殖を阻害する方法を提供し、この方法は、ＰＤ－１シグナル伝達を阻害することができる薬剤の治療上有効な量を投与することを含んでなる。この方法は、癌または感染性疾患を有する哺乳動物に前述の組成物を投与することを含んでなってもよく、その後、その哺乳動物において癌または感染性疾患は治療される。本明細書で論じられるように、ＰＤ－１は様々な癌で異常に発現され、一部の癌（例えば、腎細胞癌）患者でのＰＤ－Ｌ１発現は腫瘍の侵襲性と相関している。この方法は、例えば、腺癌、肺腺癌、急性骨髄性白血病（「ＡＭＬ」）、急性リンパ芽球性白血病（「ＡＬＬ」）、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、Ｂ細胞由来白血病、Ｂ細胞由来リンパ腫、膀胱癌、脳癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ））、ファロピウス管癌、精巣癌、脳癌、頸部癌、脈絡膜癌、慢性骨髄性白血病、ＣＮＳ腫瘍、結腸腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、びまん性橋膠腫（ＤＩＰＧ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（「ＤＬＢＣＬ」）、胚性横紋筋肉腫（ＥＲＭＳ）、子宮内膜癌、上皮癌、食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫（「ＦＬ」）、胆嚢癌、胃癌、胃腸癌、神経膠腫、頭頸部癌、血液癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、腎臓癌、腎臓明細胞癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、単球性白血病、多発性骨髄腫、骨髄腫、神経芽細胞由来ＣＮＳ腫瘍、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、卵巣癌腫、膵臓癌、腹膜癌、原発性腹膜癌、前立腺癌、再発性または難治性古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）、腎細胞癌、直腸癌、唾液腺癌（例えば、唾液腺腫瘍）、肉腫、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、肛門性器領域の扁平上皮癌（例えば、肛門、陰茎、子宮頸部、膣、または外陰部の扁平上皮癌）、食道扁平上皮癌、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＨＮＣ）、肺扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞由来白血病、Ｔ細胞由来リンパ腫、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、ブドウ膜黒色腫、尿路上皮細胞癌、子宮癌、子宮内膜癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、またはウィルムス腫瘍など、当技術分野で知られている任意の種類の癌を治療するために使用することができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物で治療される癌は、マイクロサテライト不安定性またはその欠如を特徴とする。マイクロサテライト不安定性（「ＭＳＩ」）は、特定の細胞（例えば、腫瘍細胞）のＤＮＡの変化であるか、またはそれを含み、マイクロサテライトの反復（ＤＮＡの短い反復配列）の数が、それが遺伝により受け継がれたＤＮＡに含まれていたものとは異なる。マイクロサテライト不安定性は、欠陥のあるＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）系による複製関連エラーの修復の失敗から生じる。この失敗が、ゲノム全体、特にマイクロサテライトとして知られる反復ＤＮＡの領域でミスマッチ変異を持続させ、変異負荷の増大をもたらす。ＭＳＩ－Ｈを特徴とする少なくともいくつかの腫瘍は、特定の抗ＰＤ－１剤に対する応答が改善されていることが実証されている(Le et al., (2015) N. Engl. J. Med. 372(26):2509-2520; Westdorp et al., (2016) Cancer Immunol. Immunother. 65(10): 1249-1259)。
いくつかの実施形態において、癌は、高いマイクロサテライト不安定性のマイクロサテライト不安定性状態（例えば、ＭＳＩ－Ｈ状態）を有する。いくつかの実施形態において、癌は、低いマイクロサテライト不安定性のマイクロサテライト不安定性状態（例えば、ＭＳＩ－Ｌ状態）を有する。いくつかの実施形態において、癌は、マイクロサテライト安定のマイクロサテライト不安定性状態（例えば、ＭＳＳ状態）を有する。いくつかの実施形態において、マイクロサテライト不安定性状態は、次世代シークエンシング（ＮＧＳ）に基づくアッセイ、免疫組織化学（ＩＨＣ）に基づくアッセイ、および／またはＰＣＲに基づくアッセイによって評価される。いくつかの実施形態において、マイクロサテライト不安定性は、ＮＧＳによって検出される。いくつかの実施形態において、マイクロサテライト不安定性は、ＩＨＣによって検出される。いくつかの実施形態において、マイクロサテライト不安定性は、ＰＣＲによって検出される。
複数の実施形態において、癌は、高い腫瘍突然変異負荷（ＴＭＢ）と関連している。いくつかの実施形態において、癌は、高いＴＭＢおよびＭＳＩ－Ｈに関連している。いくつかの実施形態において、癌は、高ＴＭＢおよびＭＳＩ－ＬまたはＭＳＳに関連している。いくつかの実施形態において、癌は、高ＴＭＢに関連する子宮内膜癌である。いくつかの関連する実施形態において、子宮内膜癌は、高いＴＭＢおよびＭＳＩ－Ｈに関連している。いくつかの関連する実施形態において、子宮内膜癌は、高いＴＭＢおよびＭＳＩ－ＬまたはＭＳＳに関連している。
いくつかの実施形態において、癌は、ミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌である。マイクロサテライト不安定性は、欠陥のあるＤＮＡミスマッチ修復（ＭＭＲ）系による複製関連エラーの修復の失敗から生じ得る。この失敗は、ゲノム全体、特にマイクロサテライトとして知られる反復ＤＮＡの領域でミスマッチ変異を持続させ、特定の抗ＰＤ－１剤への応答を改善し得る変異負荷の増大をもたらす。
いくつかの実施形態において、癌は、超変異癌である。いくつかの実施形態において、癌は、ポリメラーゼε（ＰＯＬＥ）に突然変異を有する。いくつかの実施形態において、癌は、ポリメラーゼδ（ＰＯＬＤ）に突然変異を有する。
いくつかの実施形態において、癌は、子宮内膜癌（例えば、ＭＳＩ－ＨまたはＭＳＳ／ＭＳＩ－Ｌ子宮内膜癌）である。いくつかの実施形態において、癌は、ＰＯＬＥまたはＰＯＬＤに突然変異を含んでなるＭＳＩ－Ｈ癌（例えば、ＰＯＬＥまたはＰＯＬＤに突然変異を含んでなるＭＳＩ－Ｈ非子宮内膜癌）である。
１つの側面において、必要とする対象に本明細書に記載の治療上有効な量の組成物（医薬組成物または処方物を含む）を投与することを含んでなる、癌を治療する方法が提供される。
本明細書で使用される場合、「癌」および「腫瘍」という用語は互換的に使用され、単数形または複数形で、それらを宿主生物に対して病的にする悪性形質転換などの形質転換を受けた細胞を指す。原発性癌細胞は、十分に確立された技術、特に、組織学的検査によって非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義は、原発性癌細胞だけでなく、癌細胞の祖先に由来するいずれの細胞も含む。これには、転移した癌細胞、および癌細胞に由来するｉｎ ｖｉｔｒｏ培養物および細胞株が含まれる。通常固形腫瘍として現れる癌のタイプに言及する場合、「臨床的に検出可能な」腫瘍は、例えばコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、Ｘ線、超音波もしくは身体検査での触診などの手順によって腫瘍の質量に基づいて検出可能な腫瘍、および／または患者から取得可能なサンプル中の１以上の癌特異的抗原の発現のために検出可能な腫瘍である。
複数の実施形態において、癌は、頭頸部癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、腎臓癌、膀胱癌、黒色腫、メルケル細胞癌（例えば、Bhatia et al., Curr. Oncol. Rep., 13(6): 488-497 (2011)）、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、子宮癌、子宮内膜癌、卵巣癌、卵管癌、乳癌、前立腺癌、唾液腺腫瘍、胸腺腫、副腎皮質癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、虫垂癌、尿路上皮細胞癌、または扁平上皮癌（例えば、肺；肛門、陰茎、子宮頚、膣、または外陰を含む肛門性器領域；または食道のもの）である。
いくつかの実施形態において、癌は、血液癌である。いくつかの実施形態において、血液癌は、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫（「ＤＬＢＣＬ」）、ホジキンリンパ腫（「ＨＬ」）、非ホジキンリンパ腫（「ＮＨＬ」）、濾胞性リンパ腫（「ＦＬ」）、急性骨髄性白血病（「ＡＭＬ」）、急性リンパ芽球性白血病（「ＡＬＬ」）、または多発性骨髄腫（「ＭＭ」）から選択される。複数の実施形態において、癌は、急性リンパ芽球性白血病（「ＡＬＬ」）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病（「ＡＭＬ」）、急性前骨髄球性白血病（「ＡＰＬ」）、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ球性白血病、急性未分化白血病、慢性骨髄球性白血病（「ＣＭＬ」）、慢性リンパ球性白血病（「ＣＬＬ」）、有毛細胞白血病および多発性骨髄腫などの血行性癌；リンパ芽球性、骨髄性、リンパ球性、および骨髄球性白血病などの急性および慢性白血病である。
いくつかの実施形態において、癌は、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病および真性赤血球増加症などのリンパ腫である。
いくつかの実施形態において、癌は、扁平上皮癌である。いくつかの実施形態において、癌は、肺の扁平上皮癌である。いくつかの実施形態において、癌は、食道の扁平上皮癌である。いくつかの実施形態において、癌は、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である。いくつかの実施形態において、癌は、肛門性器領域（例えば、肛門、陰茎、子宮頚、膣、または外陰）の扁平上皮癌である。
いくつかの実施形態において、癌は、膀胱癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ））、卵管癌、胆管癌、結腸腺癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング肉腫、胃癌、腎臓明細胞癌、肺癌（例えば、肺腺癌または肺扁平上皮細胞癌）、中皮腫、卵巣癌、膵臓癌、腹膜癌、前立腺癌、子宮内膜癌、またはブドウ膜黒色腫である。いくつかの実施形態において、癌は、卵巣癌、卵管癌、または腹膜癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌（例えば、ＴＮＢＣ）である。いくつかの実施形態において、癌は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）である。いくつかの実施形態において、癌は、前立腺癌である。
いくつかの実施形態において、癌は、ＣＮＳまたは脳癌、例えば、神経芽腫（ＮＢ）、神経膠腫、びまん性橋膠腫（ＤＩＰＧ）、毛様細胞性星状細胞腫、星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、多形性膠芽腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、前庭神経鞘腫、腺腫、転移性脳腫瘍、髄膜腫、脊髄腫瘍、または髄芽細胞腫である。複数の実施形態において、癌は、ＣＮＳ腫瘍である。
いくつかの実施形態において、癌は、固形腫瘍である。複数の実施形態において、癌は、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑液膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膵臓癌、骨癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻腔癌、咽頭癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胚性癌腫、ビルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、皮膚癌、黒色腫、神経芽腫（ＮＢ）、または網膜芽細胞腫などの固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、腫瘍は、進行期の固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、腫瘍は、転移性固形腫瘍である。
いくつかの実施形態において、癌は、婦人科癌（すなわち、卵巣癌、卵管癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、子宮癌、または原発性腹膜癌、または乳癌などの女性生殖器系の癌）である。いくつかの実施形態において、女性生殖器系の癌としては、限定するものではないが、卵巣癌、卵管癌、腹膜癌、および乳癌が挙げられる。
いくつかの実施形態において、癌は、卵巣癌（例えば、血清または明細胞卵巣癌）である。いくつかの実施形態において、癌は、卵管癌（例えば、血清または明細胞卵管癌）である。いくつかの実施形態において、癌は、原発性腹膜癌（例えば、血清または明細胞原発性腹膜癌）である。
いくつかの実施形態において、卵巣癌は、上皮癌である。上皮癌は、卵巣癌の８５％～９０％を占める。歴史的には卵巣の表面から発生すると考えられていたが、新しい証拠は、少なくとも一部の卵巣癌が卵管の一部の特殊な細胞で発生することを示唆している。卵管は、女性の生殖器系の一部である子宮に女性の卵巣をつなぐ小さな管である。通常の女性の生殖器系では、子宮の両側に１つずつ２つの卵管がある。卵管で始まる癌細胞は、早い段階で卵巣の表面に行く可能性がある。「卵巣癌」という用語は多くの場合、卵巣、卵管、および腹膜と呼ばれる腹腔の内層に発生する上皮癌を表すために使用される。いくつかの実施形態において、癌は、胚細胞腫瘍であるか、またはそれを含んでなる。胚細胞腫瘍は、卵巣の卵産生細胞で発生する卵巣癌の一種である。いくつかの実施形態において、癌は、間質性腫瘍であるか、またはそれを含んでなる。間質性腫瘍は、卵巣を一緒に保持する結合組織細胞で発生し、それはエストロゲンと呼ばれる女性ホルモンを作る組織である場合がある。いくつかの実施形態において、癌は、顆粒膜細胞腫瘍であるか、またはそれを含んでなる。顆粒膜細胞腫瘍はエストロゲンを分泌し、診断時に異常な膣出血を引き起こす可能性がある。いくつかの実施形態において、婦人科癌は、相同組換え修復欠損／相同修復欠損（「ＨＲＤ」）および／またはＢＲＣＡ１／２突然変異に関連している。いくつかの実施形態において、婦人科癌は白金感受性である。いくつかの実施形態において、婦人科癌は、白金に基づく治療に応答していた。いくつかの実施形態において、婦人科癌は、白金に基づく治療に対する耐性を生じていた。いくつかの実施形態において、婦人科癌は、白金に基づく治療に対して部分的または完全な応答を一度（例えば、最後の白金に基づく治療または最後から２番目の白金に基づく治療に対する部分的または完全な応答）示していた。いくつかの実施形態において、婦人科癌は現在、白金に基づく治療に耐性がある。
いくつかの実施形態において、癌は乳癌である。通常、乳癌は、小葉として知られる乳汁産生腺の細胞または乳管のいずれかで発生する。あまり一般的ではないが、乳癌は間質組織で発生する可能性もある。これらには、乳房の脂肪組織および線維性結合組織が含まれる。時間の経過とともに、乳癌細胞は、転移として知られるプロセスで、腋窩リンパ節または肺などの近傍組織に侵入する可能性がある。乳癌の病期、腫瘍の大きさ、およびその成長速度は総て、提供される治療の種類を決定する要因である。治療の選択肢には、腫瘍を切除する手術、化学療法とホルモン療法を含む薬物治療、放射線療法および免疫療法が含まれる。予後および生存率は大きく異なり、５年相対生存率は、発生する乳癌の種類に応じて９８％～２３％まで変化する。乳癌は世界で２番目に多い癌であり、２０１２年には約１７０万の新症例があり、癌による死亡原因は５番目に多く、約５２万１千人が死亡している。これらの症例のうち、約１５％がトリプルネガティブであり、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体（ＰＲ）、またはＨＥＲ２を発現していない。いくつかの実施形態において、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）は、エストロゲン受容体発現陰性（細胞の１％未満）、プロゲステロン受容体発現陰性（細胞の１％未満）、およびＨＥＲ２陰性である乳癌細胞として特徴付けられる。
いくつかの実施形態において、この癌は、ＥＲ陽性乳癌、ＥＲ陰性乳癌、ＰＲ陽性乳癌、ＰＲ陰性乳癌、ＨＥＲ２陽性乳癌、ＨＥＲ２陰性乳癌、ＢＲＣＡ１／２陽性乳癌、ＢＲＣＡ１／２陰性癌、またはＴＮＢＣである。複数の実施形態において、癌はＴＮＢＣである。
いくつかの実施形態において、乳癌は転移性乳癌である。いくつかの実施形態において、乳癌は進行乳癌である。いくつかの実施形態において、癌は、ステージＩＩ、ステージＩＩＩまたはステージＩＶ乳癌である。いくつかの実施形態において、癌は、ステージＩＶ乳癌である。
いくつかの実施形態において、癌は、子宮内膜癌（「ＥＣ」）である。いくつかの実施形態において、子宮内膜癌は、転移性子宮内膜癌である。
子宮内膜癌は、女性生殖管で最も一般的な癌である。子宮内膜癌（ＥＣ）の年間新症例数は、世界で約３２，５０００人と推定される。さらに、ＥＣは閉経後の女性で最も多く発生する癌である。子宮内膜癌症例の約５３％が先進国で発生している。２０１５年には、米国で約５５，０００例のＥＣが診断され、現在ＥＣでの使用が承認されている標的療法はない。第１選択（１Ｌ）および第２選択（２Ｌ）の治療設定において、進行ＥＣおよび再発ＥＣの生存率を改善する薬剤およびレジメンが必要である。最も一般的な組織型は類内膜腺癌であり、診断された症例の約７５～８０％を占める。他の組織学的形態には、子宮乳頭状漿液性（１０％未満）、明細胞４％、粘液性１％、扁平上皮１％未満、および混合型約１０％が含まれる。
病因の観点から、ＥＣは２つの異なるタイプ、いわゆるＩ型とＩＩ型に分類される。Ｉ型腫瘍は低悪性度のエストロゲン関連類内膜癌（ＥＥＣ）であり、ＩＩ型は非類内膜（ＮＥＥＣ）（主に漿液性および明細胞）癌である。世界保健機関は最近、ＥＣの病理学的分類を更新し、ＥＣの９つの異なるサブタイプを認識したが、ＥＥＣと漿液性癌（ＳＣ）が症例の大部分を占める。ＥＥＣは、閉経周辺期の患者に発生し、前病変（子宮内膜増殖症／子宮内膜上皮内腫瘍）が先行するエストロゲン関連の癌である。微視的には、低悪性度ＥＥＣ（ＥＥＣ １－２）には管状腺が含まれ、増殖性子宮内膜にある程度類似しているが、腺と篩状型の融合による構造の複雑さを有する。高悪性度ＥＥＣは、充実型を示す。対照的に、ＳＣは高エストロゲン血症のない閉経後の患者に発生する。顕微鏡で、ＳＣは、腫瘍細胞、細胞出芽、および大きな好酸球性細胞質を有する未分化細胞の顕著な層化を伴う、厚い、線維性または浮腫性の乳頭を示す。ＥＥＣの大部分は低悪性度腫瘍（グレード１および２）であり、子宮に限局している場合は良好な予後と関連している。グレード３のＥＥＣ（ＥＥＣ３）は進行性腫瘍であり、高頻度のリンパ節転移を伴う。ＳＣは極めて侵襲的で、エストロゲン刺激とは無関係で、主に高齢の女性に発生する。ＥＥＣ３およびＳＣは高悪性度腫瘍と見なされ、ＳＣおよびＥＥＣ３は、１９８８年～２００１年の監視、疫学、および最終結果（ＳＥＥＲ）プログラムデータを使用して比較されている。それらはそれぞれＥＣの１０％および１５％を占め、癌による死亡のそれぞれ３９％および２７％を占めていた。
いくつかの実施形態において、癌は肺癌である。いくつかの実施形態において、肺癌は、肺の扁平上皮細胞癌である。いくつかの実施形態において、肺癌は小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）である。いくつかの実施形態において、肺癌は、扁平上皮ＮＳＣＬＣなどの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。いくつかの実施形態において、肺癌は、ＡＬＫ転座肺癌（例えば、ＡＬＫ転座ＮＳＣＬＣ）である。いくつかの実施形態において、肺癌は、ＥＧＦＲ変異肺癌（例えば、ＥＧＦＲ変異ＮＳＣＬＣ）である。
いくつかの実施形態において、この癌は転移癌である。
いくつかの実施形態において、この癌は再発癌（例えば、再発性婦人科癌、例えば、再発性上皮性卵巣癌、再発性卵管癌、再発性原発性腹膜癌、または再発性子宮内膜癌である）。
癌治療を必要とする対象には、新たに診断された、再発した、難治性、進行性疾患、寛解およびその他を含む様々な段階の患者が含まれ得る。癌治療を必要とする対象には、幹細胞移植を受けた患者または移植不適格と見なされた患者も含み得る。
感染症の治療
この方法は、任意のタイプの感染性疾患（すなわち、細菌、ウイルス、真菌、または寄生虫により引き起こされた疾患または障害）を治療するために使用することができる。この方法によって治療することができる感染性疾患の例としては、限定するものではないが、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウイルス、デング熱ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ、またはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ））により引き起こされる疾患が挙げられる。
組成物の投与は、哺乳動物において癌または感染性疾患に対する免疫応答を誘導し得る。「免疫応答」は、例えば、抗体生産および／または免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化を伴い得る。
自己免疫疾患の治療
この方法用いて、例えば、MacKay I.R. and Rose N.R.編, The Autoimmune Diseases, Fifth Edition, Academic Press, Waltham, MA (2014)に記載されているものなどの、いずれのタイプの自己免疫疾患（すなわち、身体が自身の組織を攻撃し、傷害する免疫系の過剰活性によって引き起こされる疾患または障害）も治療することができる。これらの組成物によって治療することができる自己免疫疾患の例としては、限定するものではないが、多発性硬化症、１型真性糖尿病、関節リウマチ、硬皮症、クローン病、乾癬、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、および潰瘍性大腸炎が挙げられる。この方法が自己免疫疾患を治療する場合、抗ＴＩＭ－３抗体薬を、例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよびフルチカゾン）および非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、アスピリン、イブプロフェン、およびナプロキセン）を含む抗炎症薬と組み合わせて使用することができる。
投与経路
対象は、本発明の組成物で治療される前に、少なくとも１回の以前の癌療法を受けていた場合がある。１つの実施形態において、対象は、本発明の組成物で治療される前に、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、または少なくとも７つの以前の癌療法で処置されていた。別の実施形態において、対象は、新たに癌と診断され、本発明の組成物で治療される前に、以前の療法を受けていなかった。
本発明の組成物は、いずれの適当な経路によって投与されてもよい。いくつかの組成物に関して、好適な経路としては、経口、直腸、鼻腔、局所（口内および舌下を含む）、膣、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内の、くも膜下腔内、および硬膜外を含む）、および腫瘍内が挙げられる。好ましい経路は、例えば、レシピエントの状態および治療される癌によって異なり得ることが認識されるであろう。
いくつかの実施形態において、組成物は、静脈内に（例えば、静脈内（ＩＶ）注入によって）投与される。さらなる実施形態において、組成物は、３０分のＩＶ注入注射によって投与される。
いくつかの実施形態において、組成物は、注射によって投与される。従って、１つの側面において、本発明の組成物、医薬組成物または処方物を含んでなる注射装置が提供される。注射装置は、ペン注射器装置または自動注射器装置を含んでいてもよい。
１つの実施形態において、組成物は、充填済みシリンジ中に含まれる。
所望の用量は、組成物の単回ボーラス投与によるか、組成物の複数回のボーラス投与によるか、または組成物の持続的注入投与によって送達することができる。
特定の実施形態では、本発明の組成物は、医薬組成物として投与される。
「投与すること」という用語は、本明細書で使用される場合、治療目的を達成するために本明細書に記載の組成物の送達を指すものとする。組成物は、臨床利益を達成するために十分な期間、投与間隔で投与することができる。
組成物は、療法を特定の部位に標的化するような方法で対象に投与することができる。
特定の実施形態では、組成物は、１以上の付加的治療薬とともに対象に併用投与することができる。別の実施形態において、組成物は、１以上の付加的癌治療薬と対象に併用投与することができる。付加的癌治療薬としては、限定するものではないが、他の免疫調節薬、治療抗体、ＣＡＲ－Ｔ治療薬、ＢｉＴＥ、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、抗炎症化合物、および免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）を含み得る。
「併用投与する」とは、同じ医薬組成物または別個の医薬組成物の組合せによって対象に投与される２種類以上の異なる医薬組成物または治療（例えば、放射線治療）の投与を意味する。従って、併用投与は、２種類以上の医薬剤を含んでなる単一の医薬組成物の同時投与、または同じもしくは異なる時点での同じ対象への２種類以上の異なる組成物の投与を含む。
例えば、抗ＰＤ－１抗体は、癌細胞に対して細胞毒性であるか、癌細胞の免疫原性を調節するか、または癌細胞に対する免疫応答を促進する薬剤など、本明細書に開示される疾患の治療または予防のための他の薬剤と組み合わせて投与することができる。これに関して、例えば、組成物は、例えば、当技術分野で知られている任意の化学療法剤、イオン化放射線、小分子抗癌剤、癌ワクチン、生物学的療法（例えば、他のモノクローナル抗体、癌死滅化ウイルス、遺伝子治療、および養子Ｔ細胞移植）、および／または手術を含む、少なくとも１つの他の抗癌剤と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体による治療のための対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、化学療法（例えば、白金に基づく化学療法）で治療されているか、または治療される予定である。いくつかの実施形態において、化学療法薬は、アクチノマイシン、オールトランスレチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、イリノテカン、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、バルルビシン、ベムラフェニブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである。いくつかのこのような実施形態において、化学療法薬は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、フェナントリプラチン、ピコプラチン、またはサトラプラチンなどの白金に基づく化学療法薬である。いくつかのこのような実施形態において、化学療法薬は、ペメトレキセドなどのギ酸代謝拮抗物質である。いくつかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体による治療のための対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、抗血管新生薬、例えば、ベバシズマブ、イトラコナゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ－４７０、フマギリン、ＣＭ１０１、ＩＬ－１２、血小板因子－４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、血管新生抑制ステロイド、ヘパリン、軟骨由来血管新生阻害因子または（例えば、ペプチドトロポニンＩおよびコンドロモジュリンＩ）、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、アンギオスタチン、エンドスタチン、２－メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、トロンボスポンジン、サリドマイド、プロラクチン、ανβ３阻害剤、レナリドマイド、リノミド、ラムシルマブ、タスキニモド、ラニビズマブ、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、メタロプロテアーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ１およびＴＩＭＰ２）、ｂＦＧＦ可溶性受容体、トランスフォーミング増殖因子β、インターフェロンα、インターフェロンβ、可溶性ＫＤＲおよびＦＬＴ－１受容体、胎盤プロリフェリン関連タンパク質、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、ポナチニブ、カボザンチニブ、レゴラフェニブ、バンデタニブ、レンバチニブ、セマキサニブ、ＳＵ６６６８、バタラニブ、チボザニブ、セディラニブ、プロタミン、ヘパリン、ステロイド、アスコルビン酸エーテル、硫酸多糖ＤＳ ４１５２、ＡＧＭ １２４７０、ネオバスタット、ＲＯ４９２９０９７、ＭＲＫ－００３、ＭＫ－０７５２、ＰＦ０３０８４０１４、ＭＥＤＩ０６３９、クルクミン、３，３’－ジインドリルメタン（ＤＩＭ）、レスベラトロール、３，５－ビス（２，４－ジフルオロベンジリデン）－４－ピペリドン（ＤｉＦｉＤ）およびエピガロカテキン－３－ガレート（ＥＧＣＧ）、ホノキオール、Ｆｌｔ２－１１、ＣＢＯ－Ｐ１１、Ｊｅ－１１、Ｖ１、およびそれらの任意の組合せで治療されているか、または治療される予定である。いくつかの実施形態において、組成物は、例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよびフルチカゾン）および非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、アスピリン、イブプロフェン、およびナプロキセン）を含む抗炎症薬と組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施形態において、組成物は、感染性疾患を治療するために使用される。本発明の方法が感染性疾患を治療する場合、抗ＰＤ－１抗体薬は、少なくとも１つの抗菌薬または少なくとも１つの抗ウイルス薬と組み合わせて投与することができる。これに関して、抗菌薬は、当技術分野で公知のいずれの好適な抗生物質であってもよい。抗ウイルス薬は、特定のウイルス（例えば、弱毒生ワクチン、サブユニットワクチン、組換えベクターワクチン、および小分子抗ウイルス療法（例えば、ウイルス複製阻害剤およびヌクレオシド類似体）を特異的に標的とする好適ないずれのタイプのいずれのワクチンであってもよい。
いくつかの実施形態において、組成物は、免疫チェックポイント経路を阻害する他の薬剤と組み合わせて投与することができる。例えば、組成物は、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３またはＬＡＧ－３経路を阻害するまたは前記経路に拮抗する薬剤と組み合わせて投与することができる。これらの免疫チェックポイント経路の２つ以上を同時に標的とする組合せ治療は、改善された潜在的に相乗的な抗腫瘍活性を示した。いくつかの実施形態において、組成物は、ＴＩＭ－３に結合する抗体および／またはＬＡＧ－３に結合する抗体と組み合わせて投与される。これに関して、哺乳動物の癌または感染性疾患を治療する本発明の方法は、（ｉ）ＴＩＭ－３タンパク質に結合する抗体および／または（ｉｉ）ＬＡＧ－３タンパク質に結合する抗体を含んでなる組成物を、場合により薬学上許容可能な担体と組み合わせて哺乳動物に投与することをさらに含んでいてもよい。ＬＡＧ－３およびＴＩＭ－３に特異的な例示的抗体薬は、それぞれＷＯ２０１６／１２６８５８およびＷ０２０１６／１６１２７０に記載されており、これらは両方とも参照により本明細書の一部とされる。いくつかの実施形態において、抗ＴＩＭ－３抗体薬は、例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよびフルチカゾン）ならびに非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、アスピリン、イブプロフェン、およびナプロキセン）を含む抗炎症薬と組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施形態において、対象は、１種類以上の付加的治療薬を抗ＰＤ－１抗体薬と組み合わせて受容しているか、または受容する予定である。いくつかの実施形態において、付加的療法は、ＰＡＲＰ阻害剤である。ＰＡＲＰ阻害剤は、例えば、ＡＢＴ－７６７、ＡＺＤ ２４６１、ＢＧＢ－２９０、ＢＧＰ １５、ＣＥＰ ８９８３、ＣＥＰ ９７２２、ＤＲ ２３１３、Ｅ７０１６、Ｅ７４４９、フルゾパリブ（ＳＨＲ ３１６２）、ＩＭＰ ４２９７、ＩＮＯ１００１、ＪＰＩ ２８９、ＪＰＩ ５４７、モノクローナル抗体Ｂ３－ＬｙｓＰＥ４０コンジュゲート、ＭＰ １２４、ニラパリブ（ゼジュラ）（ＭＫ－４８２７）、ＮＵ １０２５、ＮＵ １０６４、ＮＵ １０７６、ＮＵ１０８５、オラパリブ（ＡＺＤ２２８１）、ＯＮＯ２２３１、ＰＤ １２８７６３、Ｒ ５０３、Ｒ ５５４、ルカパリブ（ルブラカ）（ＡＧ－０１４６９９、ＰＦ－０１３６７３３８）、ＳＢＰ １０１、ＳＣ １０１９１４、シムミパリブ(simmiparib)、タラゾパリブ（ＢＭＮ－６７３）、ベリパリブ（ＡＢＴ－８８８）、ＷＷ ４６、２－（４－（トリフルオロメチル）フェニル）－７，８－ジヒドロ－５Ｈ－チオピラノ［４，３－ｄ］ピリミジン－４－オール、およびその塩または誘導体から選択され得る。いくつかの実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤は、ニラパリブ、オラパリブ、ルカパリブ、タラゾパリブ、およびベリパリブからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤は、ニラパリブ（例えば、ニラパリブ遊離塩基、トシル酸ニラパリブ、またはトシル酸ニラパリブ一水和物、またはそれらの任意の組合せ）から選択される。
いくつかの実施形態において、付加的な療法には、ＴＩＭ－３またはＬＡＧ－３を阻害する薬剤を送達する組成物による治療、および対象が３種類総てで治療を受けるようなＰＡＲＰ阻害剤による治療が含まれる。いくつかの実施形態において、付加的な療法は、ＴＩＭ－３を阻害する薬剤を送達する組成物による治療、ＬＡＧ－３を阻害する薬剤を送達する組成物による治療、および対象が４種類総てで治療を受けるようなＰＡＲＰ阻害剤による治療を含む。
いくつかの実施形態において、この方法は、組成物をニラパリブと組み合わせて投与することを含んでなる。このような方法は、場合により、ベバシズマブなどの抗血管新生薬の投与を含み得る。いくつかの実施形態において、この組合せは、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、腎臓癌、膀胱癌、黒色腫、メルケル細胞癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、子宮癌、子宮内膜癌、卵管癌、乳癌、前立腺癌、唾液腺腫瘍、胸腺腫、副腎皮質癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、虫垂癌、尿路上皮細胞癌、または扁平上皮癌（例えば、肺；肛門、陰茎、子宮頚、膣、または外陰を含む肛門性器領域；または食道のもの）を有する患者に投与するためのものである。さらなる実施形態において、癌は、卵巣癌または肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ）から選択される。
いくつかの実施形態において、この方法は、ニラパリブと組み合わせた組成物を、特に、再発性および／または白金感受性癌を有する患者に投与することを含んでなる。いくつかの実施形態において、再発性および／または白金感受性癌は、卵巣癌、頭頸部癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、腎臓癌、膀胱癌、黒色腫、メルケル細胞癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、子宮癌、子宮内膜癌、卵管癌、乳癌、前立腺癌、唾液腺腫瘍、胸腺腫、副腎皮質癌、食道癌、胃癌、結腸直腸癌、虫垂癌、尿路上皮細胞癌、または扁平上皮癌（例えば、肺；肛門、陰茎、子宮頚、膣、または外陰を含む肛門性器領域；または食道のもの）である。いくつかの特定の実施形態において、再発性および／または白金感受性癌は、卵巣癌、肛門癌、卵管癌、または肺癌である。いくつかの特定の実施形態において、再発性および／または白金感受性癌は、子宮内膜癌、トリプルネガティブ乳癌、卵巣癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺の扁平上皮癌または肛門性器領域の扁平上皮癌（例えば、肛門、陰茎、子宮頚、膣、または外陰の扁平上皮癌）である。さらなる実施形態において、再発性および／または白金感受性癌は、卵巣癌である。このような方法は、場合により、ベバシズマブなどの抗血管新生薬の投与を含み得る。
用量
本明細書に記載の組成物は、治療上有効な量で投与され得る。
組成物の「治療上有効な量」または「治療上有効な用量」は、本明細書で使用される場合、治療される病態の１以上の症状の治療または管理において治療利益を提供する薬剤（例えば、抗体または医薬組成物）の量を指す。
治療上有効な量および治療レジメンは、一般に、経験的に決定され、患者の年齢、体重、および健康状態、ならびに治療される疾患または障害などの因子に依存し得る。そのような因子は主治医の範囲内である。
本明細書で提供される範囲は、いずれのタイプのものも、記載されている特定の範囲内の総ての値、および特定の範囲の終点に関する値を含む。
いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、均一用量約１００～２０００ｍｇ（例えば、均一用量約１００ｍｇ；均一用量約２００ｍｇ；均一用量約３００ｍｇ；均一用量約４００ｍｇ；均一用量約５００ｍｇ；均一用量約６００ｍｇ；均一用量約７００ｍｇ；均一用量約８００ｍｇ；均一用量約９００ｍｇ；均一用量約１０００ｍｇ；均一用量約１１００ｍｇ；均一用量約１２００ｍｇ；均一用量約１３００ｍｇ；均一用量約１４００ｍｇ；均一用量約１５００ｍｇ；均一用量約１６００ｍｇ；均一用量約１７００ｍｇ；均一用量約１８００ｍｇ；均一用量約１９００ｍｇ；または均一用量約２０００ｍｇ）である。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、約１ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、約３ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、約１０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、均一用量約５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、約８００ｍｇである。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、約１０００ｍｇである。
１つの実施形態において、組成物は、２～６週間（例えば、２、３または４週間、特に、３週間）毎に１回投与される。
１つの実施形態において、組成物は２～６回の投与サイクル（例えば、最初の３、４、または５回の投与サイクル、特に、最初の４回のサイクル）の間に３週間毎に１回投与される。
１つの実施形態において、組成物は、４用量の間、３週間毎に５００ｍｇで、その後、疾患の進行まで６週間毎に１０００ｍｇで投与される。
所望により、（治療）組成物の有効一日用量は、１日を通して適当な間隔で別個に投与される２、３、４、５、６以上の用量として、場合により、単位投与形で投与されてよい。
本開示は、治療を必要とする患者に、第１の期間、第１の間隔で第１の用量の組成物を投与すること、および第２の期間、第２の間隔で第２の用量の組成物を患者に投与することを含んでなる、癌を治療する方法を提供する。
いくつかの実施形態において、第１の用量と第２の用量は異なる。いくつかの実施形態において、第１の用量は約５００ｍｇであり、第２の用量は約１０００ｍｇである。
いくつかの実施形態において、第１の間隔と第２の間隔は異なる。いくつかの実施形態において、第１の間隔は３週間毎に１回であり、第２の間隔は６週間毎に１回である。いくつかの実施形態において、組成物は、５００ｍｇの第１の用量で、３週間毎に１回、２～６回の投与サイクル（例えば、最初の３、４、または５回の投与サイクル、特に、最初の４回の投与サイクル）の第１の期間投与され、そして、１０００ｍｇの第２の用量で、６週間毎に１回、療法が中止されるまで（例えば、疾患の進行、有害事象による、または医師により判断された場合）投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、５００ｍｇの第１の用量で、３週間毎に１回、最初の３回の投与サイクルの間、そして、１０００ｍｇの第２の用量で、６週間以上毎に１回、療法が中止されるまで（例えば、疾患の進行、有害事象による、または医師により判断された場合）投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、５００ｍｇの第１の用量で、３週間毎に１回、最初の４回の投与サイクルの間、そして、１０００ｍｇの第２の用量で、６週間以上毎に１回、療法が中止されるまで（例えば、疾患の進行、有害事象による、または医師により判断された場合）投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、５００ｍｇの第１の用量で、３週間毎に１回、最初の５回の投与サイクルの間、そして、１０００ｍｇの第２の用量で、６週間以上毎に１回、療法が中止されるまで（例えば、疾患の進行、有害事象による、または医師により判断された場合）投与される。いくつかの実施形態において、第２の用量は、６週間毎に１回投与される。
いくつかの実施形態において、組成物は、１週間に１回（Ｑ１Ｗ）、２間毎に１回（Ｑ２Ｗ）、３週間毎に１回（Ｑ３Ｗ）、４週間毎に１回（Ｑ４Ｗ）、５週間毎に１回（Ｑ５Ｗ）、または６週間毎に１回（Ｑ６Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、１週間に１回（Ｑ１Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、２週間毎に１回（Ｑ２Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、３週間毎に１回（Ｑ３Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、４週間毎に１回（Ｑ４Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、５週間毎に１回（Ｑ５Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、６週間毎に１回（Ｑ６Ｗ）の投与間隔（または治療サイクル）で投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０週間またはそれを超える期間投与される。いくつかの実施形態において、組成物は、治療サイクルの初日に、または治療サイクル初日の１、２、または３日以内に投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、患者において臨床利益を達成するために示された投与計画に従って投与される。いくつかの実施形態において、臨床利益は、安定（「ＳＤ」）、部分奏功（「ＰＲ」）および／または完全奏功（「ＣＲ」）である。いくつかの実施形態において、臨床利益は、安定（「ＳＤ」）である。複数の実施形態において、臨床利益は、部分奏功（「ＰＲ」）である。複数の実施形態において、臨床利益は、完全奏功（「ＣＲ」）である。いくつかの実施形態において、ＰＲまたはＣＲは、固形腫瘍における応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）に従って決定される。いくつかの実施形態において、組成物は、臨床的利益を維持するために、より長期間投与される。
本明細書に開示される総ての特許および文献参照は、明示的かつ全内容が参照により本明細書の一部とされる。
ドスターリマブは、２本の重鎖と２本の軽鎖から構成され、各重鎖に単一のＮ結合グリコシル化部位を有する、ＩｇＧ４κアイソタイプのヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。
商業的工程および規模で製造されたドスターリマブ原薬（ＤＳ）バッチ（２バッチ）を使用して、ドスターリマブ抗体の集団を十分に特徴付けた。一次、二次、および高次の構造が、物理化学的特性、不均一性、生物活性、免疫化学的特性、および分解経路とともに評価された。結果は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｍａｔｅｒｉａｌ（ＣＲＳ）の以前の特性評価結果と一致している。特性評価データの概要を以下に示す。特性評価方法は、最初に言及された節で簡単に説明されている。
１．ペプチドマップによるアミノ酸配列の確認
タンパク質の特性評価を目的とした特定のペプチドマッピング法を使用して、アミノ酸配列を確認した。ドスターリマブサンプルを塩酸グアニジンで変性させ、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元し、ヨードアセトアミドでアルキル化し、エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃ（Ｌｙｓ－Ｃ）またはトリプシンで消化した。Ｌｙｓ－Ｃまたはトリプシンのいずれかによる酵素消化は、３７℃で４時間行った。サンプルの消化をトリフルオロ酢酸で急冷した後、タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析を伴う液体クロマトグラフィーを行った。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析システムは、Ｃ１８カラム、２１４ｎｍでのＵＶ検出、およびエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ－ＭＳ）を備えた逆相超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）を用いた。
Ｌｙｓ－Ｃペプチドマップの結果により、軽鎖および重鎖の予測される全アミノ酸配列の９８．３％が確認された。いくつかの小ペプチド（ＬＬ１２：Ｈ１８９－Ｋ１９０、ＬＨ９：Ｖ２１０－Ｋ２１２、ＬＨ１７：Ｃ３１７－Ｋ３１８、ＬＨ１８：Ｖ３１９－Ｋ３２２）は同定されず、これは、ＭＳシグナルデータ収集前の早期溶出による可能性がある。これらの小ペプチドを同定するために、ドスターリマブのトリプシン消化物をＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析によって分析した。誤って切断されたトリプシンペプチド（ＴＬ１６－１７：Ｈ１８９－Ｋ２０７、ＴＨ１３－１５：Ｔ１９６－Ｒ２１３、ＴＨ２４－２５：Ｃ３１７－Ｋ３２２）が特定され、Ｌｙｓ－Ｃペプチドマップで欠落しているペプチドの配列のカバレッジが完了した。
合わせたＬｙｓ－Ｃおよびトリプシンペプチドマップデータによって、予測アミノ酸配列が１００％確認された。
１．１ 末端アミノ酸配列
Ｎ末端およびＣ末端アミノ酸配列は、トリプシンペプチドマップを使用して確認した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析の前に、ドスターリマブサンプルに変性、還元、アルキル化、およびトリプシン消化を行った。
ペプチドのＮ末端またはＣ末端アミノ酸はＭＳ／ＭＳでは検出されなかった。これは、末端アミノ酸配列の確認には影響しない。ＭＳ／ＭＳデータのフラグメンテーションパターンと測定された分子量（ＭＷ）の組合せは、末端アミノ酸の他の置換を排除するのに十分である。従って、ドスターリマブ軽鎖および重鎖のＮ末端およびＣ末端配列は、理論上の配列と一致する。
２．翻訳後修飾
２．１ グリカン分析
ドスターリマブの単一のグリコシル化は、Ｌｙｓ－ＣペプチドマップのペプチドＬＨ１４－１５：Ｔ２８５－Ｋ３１３をその脱グリコシル化形態と比較することによって決定した。ＰＮＧａｓｅ Ｆで脱グリコシル化すると、ＬＨ１４－１５：Ｔ２８５－Ｋ３１３ペプチドのピークのシグナルが増大し、ＭＳデータにより、ピークとグリコシル化部位がアスパラギン２９３であることが確認された。Ｎ－グリカンを含む場合と含まない場合のＬＨ１４－１５：Ｔ２８５－Ｋ３１３ペプチドのピーク面積（抽出イオン）を使用して、９９％のグリコシル化占有率を計算した。
２．２ その他の翻訳後修飾
Ｌｙｓ－Ｃおよびトリプシンペプチドマップから抽出されたイオンピーク面積を使用して、ドスターリマブタンパク質に対する翻訳後修飾（ＰＴＭ）を定量した。
３．不均一性分析
３．１ サイズの不均一性の特性評価
ドスターリマブのサイズ変異体は、分取サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって評価した。ＳＥ－ＨＰＬＣフラクションの特性評価は、分析用ＳＥ－ＨＰＬＣ、還元および非還元キャピラリー電気泳動（還元ＣＥ－ＳＤＳおよび非還元ＣＥ－ＳＤＳ）、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）、ＭＳＤ結合アッセイ、光散乱法、および分析用超遠心沈降速度（ＡＵＣ－ＳＶ）を使用して行った。結果を以下にまとめる。
３．１．１ サイズ排除クロマトグラフィー
ＳＥ－ＨＰＬＣ分析により、ドスターリマブは主として単量体として溶出するが、単量体ピークよりも早く溶出する低レベルの高分子量種（ＨＭＷ）も観察された（表２）。単量体ピークより遅く溶出する低分子量種（ＬＭＷ）は、方法定量限界未満であった。
Figure 2023507981000002
３．１．２ ＳＥＣ－ＭＡＬＳ
ドスターリマブは、ＳＥ－ＨＰＬＣおよびマルチアングル光散乱（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）によって分析した。測定されたＭＷは、ＨＭＷ種が二量体化したドスターリマブタンパク質とそれに結合している５０ｋＤａを超える分子を有する単量体（おそらく２つの軽鎖（ＬＣ）サブユニットを有する単量体、またはその単量体に非共有結合的に結合されているＬＣ－ＬＣ二量体）から構成されることを示す。
３．１．３ ｃＩＥＦ
キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して、ドスターリマブのｐＩを測定し、電荷変異体を分離した。この方法は、酸性種と塩基性種を総面積ピークのパーセンテージとして定量化する。代表的なエレクトロフェログラムと電荷変異体分布をそれぞれ図１および表３に示す。
Figure 2023507981000003
４．機能活性（効力）
ドスターリマブは、プログラム死タンパク質１（ＰＤ－１）とそのリガンドであるプログラム死－リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）およびプログラム死－リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）の間の相互作用をブロックするＩｇＧ４ ｍＡｂである。ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１への、および程度は低いがＰＤ－Ｌ２への結合を介してＴ細胞の活性化を制限する、Ｔ細胞上に発現する細胞表面受容体である。ＰＤ－１はまた、Ｔ細胞抗原受容体および共刺激受容体からのチロシンキナーゼシグナル伝達も制限する。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイントは、局所的な炎症反応を制御し自己免疫寛容を維持する助けをするためにＴ細胞活性の負のレギュレーターとして機能する。ドスターリマブの生物活性および結合特性を、下記のように、ＭＳＤ効力アッセイ、細胞効力アッセイ（バイオアッセイ）およびＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）結合を含む種々の分析方法を用いて評価した。
４．１ ＭＳＤ結合
Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）効力アッセイは、ＰＤ－１タンパク質を構成的に発現する操作されたＣＨＯＫ１細胞を使用する。ドスターリマブの活性は、ＣＨＯＫ１細胞上のＰＤ－１へのリガンド結合を阻害するドスターリマブの用量依存的能力を測定する競合的結合を使用して評価される。リガンド（ＰＤ－Ｌ１）は、アッセイ（ＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ）においてリガンドとして使用される。読み取り値は、定量化可能な電気化学発光（ＥＣＬ）シグナルを放出する特定の検出抗体混合物を使用して測定される。結果は、参照物質（例えば、対照サンプル）に対する効力のパーセントとして報告される。
４．２ 細胞バイオアッセイ
細胞効力バイオアッセイは、ドスターリマブの作用機序を厳密に模倣するＰｒｏｍｅｇａ ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｂｉｏａｓｓａｙ（カタログ番号Ｊ１２５０またはＪ１２５５）を開発していた。具体的には、ヒトＰＤ－１および活性化Ｔ細胞応答エレメントの核因子（ＮＦＡＴ－ＲＥ）により駆動されるルシフェラーゼリポーター遺伝子を発現するＰＤ－１エフェクター細胞（Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｊ１１５５））を、ＰＤ－Ｌ１を発現するＰＤ－Ｌ１ ａＡＰＣ（人工抗原提示細胞）（ＣＨＯ－Ｋ１細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｊ１０９５））と共培養する。これら２つの細胞種を共培養すると、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用がＴＣＲのシグナル伝達および結果としてのＮＦＡＴ－ＲＥ媒介発光を阻害する。ドスターリマブ（ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用をブロックする抗ＰＤ－１抗体）を添加すると阻害シグナルが放出され、ＴＣＲの活性化、およびＮＦＡＴ－ＲＥ媒介発光がもたらされる。このドスターリマブの阻害シグナルのブロッキングは用量依存的であり、結果として生じる発光はプレートリーダーを使用して定量することができる。これらのシグナル応答から、ｙ軸に相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）を、ｘ軸にｌｏｇ２変換濃度をプロットすることにより、参照物質とドスターリマブサンプルの両方に対して４パラメーター曲線を作成する。有効濃度（ＥＣ５０）中央値を補間し、これを使用して参照物質の効力と比較したドスターリマブサンプルの効力を計算する。
４．２．１ ＦｃＲｎ結合
新生児のＦｃＲｎ結合は、体内のＩｇＧ分子の代謝運命に役割を果たす。ＩｇＧのＦｃＲｎへの弱い結合は、血清中の持続性を大幅に低下させる。
ＦｃＲｎ結合は、ＢＩＡＣＯＲＥ分析によって評価した。ドスターリマブ参照物質とハーセプチン（ＩｇＧ１）をそれぞれセンサーチップに固定化した。会合および解離特性の分析のために様々な濃度の分析物（ＦｃＲｎ）を注入した。分析された３つのサンプルのＦｃＲｎ結合強度は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４ｓで予想されるように類似していた（表４を参照）。
Figure 2023507981000004
５．分解生成物および経路
ドスターリマブの分解経路を評価するために、商業規模（バッチ＃１）で作製されたＤＳに対して強制分解試験を行った。分解されたサンプルは、ＳＥ－ＨＰＬＣ、ｃＩＥＦ、還元ＣＥ－ＳＤＳおよび非還元ＣＥ－ＳＤＳによって純度を評価した。さらに、サンプルは、ＭＳＤ結合アッセイ、細胞バイオアッセイおよびＦｃＲｎ結合アッセイによって機能に関して評価した。ＰＴＭは、還元Ｌｙｓ－Ｃまたはトリプシンペプチドマップによって評価した。試験結果を以下の節にまとめる。
５．１ 熱分解条件
ドスターリマブサンプルを４０℃または５０℃で最大３週間インキュベートした。サンプルは試験時まで凍結保存した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ結果は、サンプルを４０℃で３週間インキュベートした後にＨＭＷ
に種のわずかな増加を示した（表５）。
還元ＣＥ－ＳＤＳと非還元ＣＥ－ＳＤＳの両方は、４０℃条件での分析変動以外の変化を示さなかった。これらには、還元ＣＥ－ＳＤＳではＬＭＷ、中分子量（ＭＭＷ）、およびＨＭＷ；非還元ＣＥ－ＳＤＳでは「プレピーク」領域および「ポストピーク」領域を含む（データは示されていない）。
ｃＩＥＦデータは、５０℃で最大３週間インキュベートしたサンプルでの非ストレス対照と比較して、酸性種の増加（最大５９．１％）を示した（表６）。
ペプチドマップデータは、Ａｓｐ２６１／２６６／２７６における異性化（異性化の特定の部位は確認されなかった）、Ａｓｎ３８０およびＡｓｎ３８５における脱アミド化、ならびに４０℃条件でのＭｅｔ２４８およびＭｅｔ３５４における酸化のわずかな上昇を示した（表７）。これらの小さな変化はまだ分析のばらつきの範囲内であるが、この傾向は５０℃のデータによって確認された。５０℃で３週間の熱分解は、４０℃の条件で示されたものと同じ傾向を示したが、変化はより顕著であった。凝集物と断片のより速い増加速度も見られた（データは示されていない）。
５０℃の条件下で見られたＨＭＷ種は、主としてより高次の凝集物であり、これは非ストレスサンプルおよび４０℃条件のサンプルで見られた二量体化とは異なる。還元ＣＥ－ＳＤＳまたは非還元ＣＥ－ＳＤＳは、ＨＭＷレベルの変化を示さなかったが、断片のわずかな増加が見られた（データは示されていない）。
上記のように、５０℃の条件では、ペプチドマップデータは、ＨＣ Ａｓｐ２６１／２６６／２７６における異性化、ＨＣ Ａｓｎ３８０およびＨＣ Ａｓｎ３８５における脱アミド化、ならびにＨＣ Ｍｅｔ２４８、ＨＣ Ｍｅｔ３５４およびＨＣ Ｍｅｔ４２４における酸化の増加を示した。これらのＰＴＭの増加は、対応する酸性種パーセントの増加をもたらし、これは、塩基加水分解および酸化条件から生じる強制的分解の結果と一致している。他の総ての翻訳後修飾レベルは、分析のばらつきの範囲内であった。
相対効力およびＦｃＲｎ結合は、最大３週間の４０℃および５０℃の熱分解条件で見られた変化によって影響を受けなかった（表８）。観察されたわずかな違いは、予想される分析のばらつきの範囲内であった。
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Figure 2023507981000006
Figure 2023507981000007
Figure 2023507981000008
要約すると、熱分解条件下で見られた分解生成物は、ＨＭＷ種、断片、Ａｓｐ２６１／２６６／２７６における異性化、Ａｓｎ３８０およびＡｓｎ３８５おける脱アミド化、およびＭｅｔ２４８、Ｍｅｔ３５４およびＭｅｔ４２４における酸化である。以下の属性の組合せは、ドスターリマブの相対効力（ＭＳＤ結合（７６％）およびバイオアッセイ（８６％））ならびにＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさない。
・最大１１．２％のＨＭＷ（ＳＥ－ＨＰＬＣから）
・４．５～４．６％の断片レベル（還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるＬＭＷ％＋ＭＭＷ％および非還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるプレピーク％から）
・ＨＣ Ａｓｐ２６１／２６６／２７６における最大１３．１％の異性化（ペプチドマップから）
・ＨＣ Ａｓｎ３８０における最大１４．７％の、およびＨＣ Ａｓｎ３８５における最大５．９％の脱アミド化（ペプチドマップから）
・ＨＣ Ｍｅｔ２４８における最大７．６％の、ＨＣ Ｍｅｔ３５４における最大４．２％の、およびＨＣ Ｍｅｔ４２４における最大３．５％の酸化（ペプチドマップから）
・最大５９．１％の酸性種（ｃＩＥＦから）
ＨＭＷおよび効力（バイオアッセイ）のデータから推定する最大７．１％のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸、最大３６％のＨＭＷは、少なくとも６０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。最大２６％のＨＭＷは、少なくとも７０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。これは、０．９％（対照）、１．４％（４０℃、３週間）および１１．２％（５０℃、３週間）のＨＭＷサンプルの直線の傾きを使用して計算され、それぞれ９８％、９４％および８６％の効力（バイオアッセイ）を有する。
５．２ 酸および塩基加水分解
５．２．１ 酸加水分解
ドスターリマブサンプルをＨＣｌでｐＨ４．０に滴定し、２５℃で最大３週間インキュベートした。完了時に、サンプルは試験時まで凍結保存した。最初の時点のサンプルであるＴ０は、低ｐＨに曝されたが、高温でのインキュベーションは行わなかった。サンプルで目標条件のｐＨが確立されたところで、分解を阻止するためにすぐに凍結した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ結果は、最初の低ｐＨ曝露時にＨＭＷ種の増加を示した（表９）。ＨＣＩをサンプルに添加すると、最初に局所的に極端に低いｐＨに曝され、これがドスターリマブにより高次の凝集物を形成させた。ＨＭＷ種は３週間のインキュベーション中に約２％増加し、ＬＭＷ種は３週間のインキュベーション中に微量のままであった。酸加水分解下で見られたＨＭＷ種は主としてより高次の凝集物であり、これは非ストレスサンプルで見られた二量体化とは異なる。
ｃＩＥＦデータは、非ストレスサンプルとｐＨ４．０で最大３週間インキュベートしたサンプルの間で酸性ピークのパーセンテージに変化がないことを示した（表１０）。観察されたわずかな違いは、予想される分析のばらつきの範囲内であった。主要ピークのパーセンテージの減少は、最初の低ｐＨへの曝露時に見られ、その傾向はインキュベーション時間の延長とともに継続した。主要ピークのパーセンテージが減少すると、塩基性ピークのパーセンテージは比例して増加した。基本種の主成分の１つはタンパク質凝集物であるため、これらの酸処理サンプルのＳＥ－ＨＰＬＣ結果で示されたＨＭＷレベルの増加は、この所見を裏付けている。還元および非還元のＣＥ－ＳＤＳデータは変化を示さなかった（示されていない）。ペプチドマップデータは、酸加水分解に関連するＰＴＭレベルの違いを示さず、観察されたわずかな違いは、予想される分析のばらつきの範囲内であった（表１１）。
相対効力およびＦｃＲｎ結合は、最大３週間のｐＨ４．０で見られた変化の影響を受けず（表１２）、観察された違いは予想される分析のばらつきの範囲内であった。
Figure 2023507981000009
Figure 2023507981000010
Figure 2023507981000011
Figure 2023507981000012
要約すると、酸加水分解条件下で見られる分解生成物は、ＨＭＷ種（主としてより高次の凝集物）である。結論として、最大１５．２％のＨＭＷ（ＳＥ－ＨＰＬＣによる）および最大３４．１％の塩基性種は、相対効力およびＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさない。
５．２．２ 塩基加水分解
ドスターリマブサンプルをＮａＯＨでｐＨ９．０に力価調整し、４０℃で最大３週間インキュベートした。４０℃の条件は、有意なレベルの分解を確実に観察できるように、初期条件スクリーニングに基づいて選択された。完了後、試験時まで分解劣化を阻止するためにサンプルを凍結保存した。最初のサンプルＴ０も高ｐＨに曝されたが、高温でのインキュベーションは行わなかった。Ｔ０サンプルは、サンプルで目標のｐＨが確立されたところですぐに凍結した。
ＳＥ－ＨＰＬＣの結果は、最初の高ｐＨ曝露時にＨＭＷ種の増加を示した（表１３）。サンプルにＮａＯＨを添加すると、最初は極端に高いｐＨに局所的に曝され、これがドスターリマブにより高次の凝集物を形成させた。ＨＭＷ種は、３週間のインキュベーション中に約４％増加した。塩基加水分解下で見られるＨＭＷ種は主としてより高次の凝集物であり、これは非ストレスサンプルで見られる二量体化とは異なる。ＬＭＷ種はわずかに上昇し、３週間のインキュベーション中に１％未満のままであった。ＳＥ－ＨＰＬＣの図では、主要ピークとして表示されるピークが単量体であることに留意されたい。
ｃＩＥＦデータは、最初の高ｐＨ曝露時に主要ピークのパーセンテージの減少を示し、その傾向はインキュベーション時間の延長とともに継続した（表１４）。主要ピークのパーセンテージは減少したが、酸性ピークのパーセンテージはそれに応じて増加した。塩基性ピークのパーセンテージはわずかに減少しているように思われたが、変化は依然として分析のばらつきの範囲内であった。還元および非還元ＣＥ－ＳＤＳデータはいずれも、最初の高ｐＨ曝露時に化がないことを示した（示されていない）。３週間のインキュベーション後、断片およびＨＭＷレベルの増加が見られた。ドスターリマブを高ｐＨ条件に３週間曝露した後、ペプチドマップ分析はＨＣ Ａｓｐ １４７における異性化、ＨＣ Ａｓｎ３８０およびＨＣ Ａｓｎ３８５における脱アミド化、ＬＣ Ａｓｐ１５１／１６７における異性化およびＭｅｔ ２４８における酸化の上昇を示した（表１５）。他の総てのＰＴＭレベルは分析のばらつきの範囲内であった。凝集物、断片、異性化、および脱アミド化の組合せは、高ｐＨで処理されたドスターリマブサンプルの電荷プロファイルを、優勢種として酸性種にシフトさせた。
ドスターリマブの電荷プロファイルがシフトしたとしても、相対効力およびＦｃＲｎ結合は、最大１週間ｐＨ９．０で見られた変化によって影響を受けなかった（表１６）。
Figure 2023507981000013
Figure 2023507981000014
Figure 2023507981000015
Figure 2023507981000016
要約すると、塩基加水分解条件下で見られた分解生成物は、ＨＭＷ種、断片、Ａｓｐ１４７およびＡｓｐ１５１／１６７における異性化、Ａｓｎ３８０およびＡｓｎ３８５における脱アミド化、ならびにＭｅｔ２４８における酸化であった。以下の属性の組合せは、相対効力およびＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさない。
・最大９．２％のＨＭＷ種（ＳＥ－ＨＰＬＣから）
・断片２．０～４．２％（還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるＬＭＷ％＋ＭＭＷ％および非還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるプレピーク％から）
・ＨＣ Ａｓｐ１４７における最大２０．８％の異性化（ペプチドマップから）
・ＨＣ Ａｓｎ３８０における最大２７．８％の、およびＨＣ Ａｓｎ３８５における最大２７．２％の脱アミド化（ペプチドマップから）
・ＬＣ Ａｓｐ１５１／１６７における最大３．１％の異性化（ペプチドマップから）
・ＨＣ Ｍｅｔ２４８における最大７．１％の酸化（ペプチドマップから）
・最大９６．８％の酸性種（ｃＩＥＦから）
・最大５．２％のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体
ＨＣ Ａｓｐ１４７における異性化は、相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく、報告されているレベル２０．８％よりも高くなる可能性があると予想される。
ＨＣ Ａｓｎ３８０およびＨＣ Ａｓｎ３８５における脱アミド化は、相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく、報告されているレベル２７．８％および２７．２％よりも高くなる可能性があると予想される。
５．３ 酸化条件
５．３．１ Ｈ２Ｏ２処理
過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）をドスターリマブサンプルに添加して、終濃度を０．１％（ｖ：ｖ）Ｈ２Ｏ２とした。Ｈ２Ｏ２を添加したサンプルを２５℃で最大３週間インキュベートした。完了時に、Ｈ２Ｏ２処理をメチオニンでク急冷し、試験時までサンプルを凍結保存した。Ｔ０サンプルはＨ２Ｏ２に曝されたが、高温でのインキュベーションは行わなかった。Ｈ２Ｏ２の直後にＴ０サンプルにメチオニンを添加した（反応を急冷し、分解を阻止するため）。
Ｈ２Ｏ２処理サンプルのＳＥ－ＨＰＬＣの結果は、ＨＭＷ種とＬＭＷ種のレベルに違いがないことを示した（表１７）。１週間のインキュベーション時間から開始し、ｃＩＥＦデータは、酸性種のパーセンテージの対応する増加とともに、主要ピークのパーセンテージの減少を示した（表１８）。主要ピークはまた、Ｈ２Ｏ２処理サンプルでもフロントショルダーを示した。
総ての処理サンプルのＣＥ－ＳＤＳ減少データに違いは見られなかった（示されていない）。非還元ＣＥ－ＳＤＳデータは、３日間のインキュベーション時間から開始して断片レベルの増加を示した（示されていない）。ＳＥ－ＨＰＬＣの図では、主要ピークとして表示されるピークが単量体であることに留意されたい。
ｃＩＥＦおよび非還元ＣＥ－ＳＤＳデータは、Ｈ２Ｏ２によって生じた断片がｃＩＥＦで酸性種として移動したことを示した。ペプチドマップデータは、Ｈ２Ｏ２暴露時にＨＣのＦｃ領域のＭｅｔ２４８、Ｍｅｔ３５４、およびＭｅｔ４２４においてわずかに上昇した酸化レベルを示した。３つ総てのＭｅｔ部位の酸化レベルは、２週間のインキュベーション後にほぼ１００％に達した（表１９）。ＨＣのＣＤＲのＭｅｔ３４およびＭｅｔ１０３における酸化は、１週間のインキュベーション後に増加を示し始めた。他の総てのＰＴＭレベルは、分析のばらつきの範囲内であった。
Ｈ２Ｏ２処理サンプルのｃＩＥＦは、主要ピークの形状の変化を示し、電荷プロファイルはより酸性種にシフトした。これは、酸化種が酸性ピーク領域に位置し、ｃｌＥＦがドスターリマブの過剰な酸化を監視できることを示した。
ＭＳＤ結合アッセイによるドスターリマブの相対効力は、Ｈ２Ｏ２処理サンプルで見られた変化の影響を受けず、見られた差異は、予想される分析のばらつきの範囲内であった（表２０）。しかしながら、細胞バイオアッセイは、２週間後に相対効力が５０％未満に低下することを示した。ドスターリマブ結合領域（リガンド、ＰＤ－１）がＣＤＲにあるため、この効力の低下はＣＤＲの酸化に関連している。さらに、ドスターリマブの作用機序は、低いことが実証されているエフェクター機能を伴わないため、Ｆｃ領域での酸化が効力に影響を与えるとは思えない。従って、ＣＤＲの変化は結合に、従って効力に最も影響を与えたであろう。
ＦｃＲｎ結合分析は、即時のＨ２Ｏ２曝露に影響を受けなかったが、酸化レベルがインキュベーション時間とともに増加するにつれて減少した（表２０）。２週間のインキュベーション後、ＣＤＲ領域（約２９％のＨＣ Ｍｅｔ３４および約８６％のＨＣ Ｍｅｔ １０３）ならびにＦｃ領域（１００％に近い）で酸化が見られた。ＦｃＲｎ結合はＦｃ領域を介して起こるため、Ｆｃ領域での酸化が、見られたＦｃＲｎ結合の減少に寄与したと推定できる。
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Figure 2023507981000018
Figure 2023507981000019
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要約すると、Ｈ２Ｏ２酸化条件下で見られた分解生成物は、断片、Ｆｃ領域（Ｍｅｔ２４８、Ｍｅｔ３５４およびＭｅｔ４２４）ならびにＣＤＲ（Ｍｅｔ３４およびＭｅｔ１０３）における酸化である。以下の属性の組合せは、相対的な効力またはＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさない。
・０．５～１．０％の断片（還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるＬＭＷ％＋ＭＭＷ％および非還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるプレピーク％）
・ＨＣのＦｃ領域の酸化：Ｍｅｔ２４８は最大４７．１％、Ｍｅｔ３５４は最大１６．７％およびＭｅｔ４２４は最大２９．０％（ペプチドマップから）
・ＨＣのＣＤＲ領域の酸化：Ｍｅｔ３４は１．０％未満およびＭｅｔ１０３は最大１．２％（ペプチドマップから）
ＨＣ Ｍｅｔ３４での酸化と効力（バイオアッセイ）のデータから推定すると、最大２１％の酸化は少なくとも６０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。Ｍｅｔ３４における最大１６％の酸化は少なくとも７０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。これは、＜１％（対照）、＜１％（Ｔ０）、および２８．８％（Ｈ２Ｏ２ ２週間）の酸化サンプルの直線勾配を使用して計算され、これらはそれぞれ９８％、９４％および４７％の抗力を有する（バイオアッセイ）。
ＨＣ Ｍｅｔ１０３における酸化と効力（バイオアッセイ）のデータから推定すると、最大６４％の酸化は少なくとも６０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。Ｍｅｔ１０３における最大４７％の酸化は少なくとも７０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。これは、＜１％（対照）、１．２％（Ｔ０）、および８６．１％（Ｈ２Ｏ２ ２週間）の酸化サンプルの直線勾配を使用して計算され、これらはそれぞれ９８％、９４％および４７％の抗力を有する（バイオアッセイ）。
ＨＣのＦｃ領域の酸化は、相対効力またはＦｃＲｎ結合に影響を及ぼすことなく、報告されているレベルＭｅｔ２４８で最大４７．１％、Ｍｅｔ３５４で最大１６．７％、Ｍｅｔ４２４で最大２９．０％よりも高くなる可能性があると予想される。
５．３．２ ＡＡＰＨ処理
Ｈ２Ｏ２で処理したドスターリマブは、ＣＤＲ領域のＴｒｐ残基の酸化を示さなかったため、２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）を使用してＴｒｐ酸化の影響を評価した。ＡＡＰＨをドスターリマブサンプルに添加して、終濃度を５ｍＭ ＡＡＰＨとした。ＡＡＰＨを添加したサンプルを４０℃で最大７日間インキュベートした。４０℃の条件は、有意なレベルの分解を確実に観察できるように、初期条件のスクリーニングに基づいて選択された。完了したら、ＡＡＰＨ処理をメチオニンで急冷し、試験時までサンプルを凍結保存した。Ｔ０サンプルは、高温でのインキュベーションを行うことなくＡＡＰＨに曝した。ＡＡＰＨ添加直後にメチオニンをサンプルに添加して、反応を急冷し、分解を阻止した。
ＳＥ－ＨＰＬＣの結果は、ＡＡＰＨ処理サンプルのＨＭＷ種の増加が１日のインキュベーションから始まることを示した。ＬＭＷ種はわずかに上昇したが、７日間のインキュベーション期間中は１％未満のままであった（表２１）。
ｃＩＥＦデータは、１日のインキュベーションから始まる主要ピークパーセンテージの減少を示し、その傾向はインキュベーション時間の延長とともに継続した（表２２）。主要ピークが減少するにつれて、酸性種と塩基性種の両方が増加した。さらに、ｃＩＥＦにおける主要ピークも同様にわずかに酸性側にシフトした。還元ＣＥ－ＳＤＳと非還元ＣＥ－ＳＤＳはいずれも、ＨＭＷの種および断片の増加を示した（示されていない）。この変化は、非還元ＣＥ－ＳＤＳデータでは１日目に、還元ＣＥ－ＳＤＳデータでは３日目に現れた。ペプチドマップデータは、ＨＣ Ｍｅｔ２４８、ＨＣ Ｍｅｔ３５４、ＨＣ Ｍｅｔ４２４およびＬＣ Ｔｒｐ５０で１日目から始まる酸化の上昇を示した。Ｍｅｔ１０３における酸化レベルも、１日目にわずかな増加傾向を示し、これは、３日目のデータで見られた増加によって確認された（表２３）。他の総てのＰＴＭレベルは、分析のばらつきの範囲内であった。
ＡＡＰＨ処理サンプルのｃＩＥＦは、主要ピークの形状の変化を示し、電荷プロファイルはより酸性種にシフトした。これは、酸化種が酸性ピーク領域に位置し、ｃＩＥＦがドスターリマブの過剰な酸化を監視できることを示している。
３日間のインキュベーションサンプルから開始して、相対効力（ＭＳＤ結合アッセイ）は、ＡＡＰＨ処理サンプルで見られた変化によって減少した（表２４）。相対効力は、インキュベーションの１日後の細胞バイオアッセイおよびインキュベーションの３日後のＭＳＤ結合アッセイによって減少し始めた。Ｔ０ Ｈ２Ｏ２サンプルと同様に、ＡＡＰＨ（Ｔ０）への即時曝露は、ドスターリマブサンプルの効力低下を誘発せず、両方のＴ０サンプルはＣＤＲの酸化レベルが低い。例外として、Ｆｃ酸化のレベルはＨ２Ｏ２ Ｔ０サンプルではるかに高かった。この発見は、Ｆｃ酸化の増加が効力に影響を及ぼさないことを実証している。
ＡＡＰＨの１日目のサンプルは、ＣＤＲ領域とＦｃ領域の両方でＴ０ Ｈ２Ｏ２サンプルと同等のメチオニン酸化を有した。しかしながら、ＡＡＰＨの１日目のサンプルは 効力の低下を示した。Ｔ０ Ｈ２Ｏ２サンプルと１日目のＡＡＰＨ処理サンプルの主な違いは、ＣＤＲ ＬＣ Ｔｒｐ５０の酸化レベルであった。従って、ＣＤＲ Ｔｒｐ５０の酸化の増加は、相対効力を低下させる。過酸化物処理サンプルとＡＡＰＨ処理サンプルからの効力結果の比較を表２５に示す。
３日目のＡＡＰＨインキュベーションサンプルから開始して、ＦｃＲｎ結合が減少した。従って、ＦｃＲｎ結合は酸化の増加とともに減少し、これはＨ２Ｏ２処理サンプルでの知見と一致している。３日後、ＣＤＲ領域のＭｅｔ（ＨＣ Ｍｅｔ１０３が約７％）およびＦｃ領域のＭｅｔ（Ｍｅｔ２４８が約８９％、Ｍｅｔ３５４が約４５％、Ｍｅｔ４２４が約７８％）が過剰に酸化された。ＦｃＲｎ結合の減少は、ＦｃＲｎ結合に関与するＦｃ領域の酸化のためである可能性がある。
Figure 2023507981000021
Figure 2023507981000022
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Figure 2023507981000024
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要約すると、ＡＡＰＨ酸化条件下で見られる分解生成物は、ＨＭＷ種、断片、Ｆｃ領域Ｍｅｔ（ＨＣ Ｍｅｔ２４８、ＨＣ Ｍｅｔ３５４およびＨＣ Ｍｅｔ４２４）、ＣＤＲ領域Ｍｅｔ（ＨＣ Ｍｅｔ１０３）、ならびにＬＣ ＣＤＲ Ｔｒｐ５０における酸化である。以下の属性の組合せは、相対効力とＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさない。
・最大０．９％のＨＭＷ種（ＳＥ－ＨＰＬＣから）
・断片０．８～１．２％（還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるＬＭＷ％＋ＭＭＷ％および非還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるプレピーク％）
・Ｆｃ領域 ＨＣのＭｅｔ２４８における最大３．３％の、ＨＣ Ｍｅｔ３５４における１．０％未満の、およびＨＣ Ｍｅｔ４２４における１．０％未満の酸化（ペプチドマップから）
・ＣＤＲ領域における１．０％未満のＨＣ Ｍｅｔ１０３、１．０％未満のＬＣ Ｔｒｐ５０の酸化（ペプチドマップから）
ＬＣ Ｔｒｐ５０における酸化と効力（バイオアッセイ）のデータから推定すると、最大３４％の酸化は少なくとも６０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。Ｔｒｐ５０における最大２５％の酸化は少なくとも７０％の効力（バイオアッセイ）をもたらし得る。これは、＜１％（対照）、＜１％（Ｔ０）、３８．９％（１日目）、７４．３％（３日目）および８６．８％（５日目）の酸化サンプルの直線勾配を使用して計算され、これはそれぞれ９８％、１０２％、４４％、１４％および５％の効力（バイオアッセイ）を有する。
ＬＣ Ｔｒｐ５０の酸化は、ＡＡＰＨ酸化条件下での主要な酸化変異体であるため、Ｈ２Ｏ２酸化条件は、ＣＤＲ領域ＨＣ Ｍｅｔ３４、ＨＣ Ｍｅｔ１０３およびＦｃ領域ＨＣ Ｍｅｔ２４８、ＨＣ Ｍｅｔ３５４およびＨＣ Ｍｅｔ４２４の許容酸化レベルをより反映する。
５．４ 光分解
ドスターリマブサンプルは、２５℃で１週間、白色光（可視光、１００００ルクス時間）に曝した後、２５℃で１週間、ＵＶ光に曝した。完了後、サンプルは試験時まで凍結保存した。
ＳＥ－ＨＰＬＣの結果は、光分解条件の終了時にＨＭＷ種の増加を示した（表２６）。ｃＩＥＦデータは、酸性種のパーセンテージの増加と主要ピークのパーセンテージの減少を示した（表２７）。還元ＣＥ－ＳＤＳの結果は、分析のばらつきを超える変化を示さなかった。非還元ＣＥ－ＳＤＳデータは、主要ピークの減少と、断片およびＨＭＷ種の両方のわずかな増加を示した。
ペプチドマップデータは、光分解試験の最後に、Ｆｃ領域Ｍｅｔ（ＨＣ Ｍｅｔ２４８、ＨＣ Ｍｅｔ３５４およびＨＣ Ｍｅｔ４２４）ならびにＬＣ ＣＤＲ Ｔｒｐ５０における酸化の上昇を示した（表２８）。他の総てのＰＴＭレベルは、分析のばらつきの範囲内であった。
相対効力およびＦｃＲｎ結合は、光分解条件によって影響を受けなかった（表２９）。従って、Ｆｃ領域Ｍｅｔ（３３％未満のＨＣ Ｍｅｔ２４８、１１％未満のＨＣ Ｍｅｔ ３５４、２７％未満のＨＣ Ｍｅｔ４２４）ならびにＬＣ ＣＤＲ Ｔｒｐ５０（５％未満）において見られた中程度の酸化レベルは、相対効力およびＦｃＲｎ結合に影響を及ぼさなかった。
Figure 2023507981000026
Figure 2023507981000027
Figure 2023507981000028
Figure 2023507981000029
要約すると、光分解条件下で見られる分解生成物は、ＨＭＷ種、断片、Ｆｃ領域Ｍｅｔ（Ｍｅｔ２４８、Ｍｅｔ３５４およびＭｅｔ４２４）ならびにＬＣ ＣＤＲ Ｔｒｐ５０における酸化である。以下の属性の組合せは、相対効力およびＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさなかった。
・最大３．３％のＨＭＷ種（ＳＥ－ＨＰＬＣから）
・断片１．１～１．５％（還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるＬＭＷ％＋ＭＭＷ％および非還元ＣＥ－ＳＤＳにおけるプレピーク％から）
・Ｆｃ領域 ＨＣ Ｍｅｔ ２４８における最大３３．４％の、ＨＣ Ｍｅｔ３５４における最大１０．９％の、およびＭｅｔ４２４における最大２７．０％の酸化（ペプチドマップから）
・ＣＤＲ ＬＣ Ｔｒｐ５０における最大４．８％の酸化（ペプチドマップから）
５．５ 持続的振盪
ドスターリマブサンプルを、２５℃で最大３週間、毎分３００回転（ｒｐｍ）での振盪に曝した。完了後、サンプルは試験時まで凍結保存した。
ＳＥ－ＨＰＬＣ、ｃＩＥＦ、還元ＣＥ－ＳＤＳおよび非還元ＣＥ－ＳＤＳでの製品品質の変化は見られなかった。
相対効力およびＦｃＲｎ結合は、持続的振盪による影響を受けなかった。ペプチドマップデータは、総てのＰＴＭレベルが分析のばらつきの範囲内にあることを示した。
要約すると、持続的攪拌条件下では、有意な分解物は見られず、相対効力およびＦｃＲｎ結合への影響は見られなかった。
５．６ 分解生成物の概要
ドスターリマブの効力に影響を及ぼさない、異なる強制分解条件下で見られた分解生成物の発生率を以下にまとめる（表３０）。
Figure 2023507981000030
６．処方物試験
６．１ 分析方法
６．１．１ 外観
ＹＢ－２ライトボックスを使用して、白黒の背景の下で、透明度と色を含むサンプルの外観を検査した。
６．１．２ ｐＨ
ｐＨ値は、Ｓｅｖｅｎ Ｍｕｌｔｉ ｐＨメーターによって測定した。
６．１．３ ＵＶ２８０
タンパク質濃度は、ＮＡＮＯＤＲＯＰ２０００分光光度計を使用して２８０ｎｍの吸光度により決定し、吸光係数は１．６１５である。サンプルは重量測定により希釈した。
６．１．４ ＳＥＣ－ＨＰＬＣ
サイズ排除クロマトグラフィーは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＩｎｆｉｎｉｔｙシステムおよびＴＳＫＧｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（３００×７．８ｍｍ、５μｍ）を使用して実施した。移動相は５０ｍＭリン酸バッファー（ＰＢ）、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０±０．１で、流速は１．０ｍｌ／分に設定した。注入用にサンプルを１ｍｇ／ｍｌに希釈し、２８０ｎｍで検出した。
６．１．５ ｃＩＥＦ
２０μｇの参照標準またはサンプルを、０．５μｌのｐＩ５．８５マーカー、０．５μｌのｐＩ８．４０マーカー、２μｌのＰｈａｒｍａｌｙｔｅ ３－１０、２μＩのＰｈａｒｍａｌｙｔｅ ５－８、３５μｌの１％メチルセルロース（ＭＣ）、および精製水と混合して最終容量を１００μｌとした。次に、この混合物をフルオロカーボン（ＦＣ）でコーティングされた全カラム検出キャピラリーを備えたｉＣＥ３キャピラリー等電点電気泳動分析装置で分析した。電気泳動は、（１）１．５ｋＶで１分間、および（２）３ｋＶで８分間の２段階で行った。実験中、オートサンプラートレイは５℃に維持した。
６．１．６ 動的光散乱（ＤＬＳ）
マイクロピペットを使用して、４０μｌの未希釈サンプルのアリコートを安全フード内で４０μｌの使い捨てキュベットに移した。各サンプルに対して３反復の測定を行った。データはＺｅｔａｓｉｚｅｒソフトウェアにより自動分析した。
６．１．７ ＤＳＣ
キャピラリー細胞示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、温度の関数としてサンプルおよび参照の温度を上げるために必要とされる熱量の違いを検出することにより、タンパク質の熱安定性を測定するために使用される。具体的には、それは溶液中のタンパク質の相対安定性の指標である熱遷移中点（Ｔｍ）を測定するために使用される。サンプルを参照バッファーで約１ｍｇ／ｍｌに希釈した。４００μｌの参照バッファーを９６ウェルプレートの奇数ウェルに加え、４００μｌのサンプルを９６ウェルプレートの偶数ウェルに加えた。サンプルを２０～１１０℃でスキャンし、データ分析はＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰＣａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣ自動データ分析ソフトウェアで実行した。
６．２ ｐＨ／バッファースクリーニング試験
それぞれ３つの異なるｐＨの４種類のバッファー系を調製し、これらは、２５ｍＭの酢酸バッファーｐＨ４．５、２５ｍＭの酢酸バッファーｐＨ５．０、２５ｍＭの酢酸バッファーｐＨ５．５、クエン酸バッファーｐＨ５．０、２５ｍＭのクエン酸バッファーｐＨ５．５、２５ｍＭのクエン酸バッファーｐＨ６．０、２５ｍＭのヒスチジンバッファーｐＨ５．５、２５ｍＭのヒスチジンバッファーｐＨ６．０、２５ｍＭのヒスチジンバッファーｐＨ６．５、２５ｍＭのリン酸バッファーｐＨ６．５、２５ｍＭのリン酸バッファーｐＨ７．０、および２５ｍＭのリン酸バッファーｐＨ７．５であった（表３１に要約）。
Figure 2023507981000031
バルク原薬に、遠心ダイアフィルトレーションを介して表２１の１２のバッファー系にバッファー交換を行った。続いて、サンプルタンパク質濃度を対応するバッファーで２０ ｍｇ／ｍｌに調整した。次に、各サンプルを濾過除菌し、ガラスバイアルに充填し、すぐに栓をして蓋をした。
サンプルは４０℃にて静止状態で保存し、３０℃、２５０ｒｐｍで最大４週間振盪した。サンプルは、外観、ｐＨ、ＵＶ２８０、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、ｃＩＥＦ、ＤＬＳ、および粒子状物質に関して検査した。
総てのサンプルは、４０℃で４週間保存し、２５０ｒｐｍ、３０℃で２週間振盪した際、無色透明またはわずかに乳光のある無色のままであった。
１２のバッファー系の総てのｐＨ値は、４０℃での振盪および保存中に安定していると思われた。
総てのサンプルのタンパク質濃度は、２０ｍｇ／ｍｌ前後で安定であった。
１２のバッファー系の総ての粒子状物質数は、４０℃での振盪および保存中に安定であった。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果：４０℃で４週間保存した場合、候補１、４、１１および１２は主要ピーク含量のより速い減少速度を示し、候補５、６および７が最も安定していると思われた。２５０ｒｐｍ、３０℃で４週間攪拌した場合、候補１０、１１および１２は主要ピークのより速い減少速度を示し、候補７および８が最も安定していると思われた。４０℃で４週間保存した場合、候補４、８、９、１０、１１および１２は、より速い酸性ピーク形成速度を示し、３０℃にて４週間２５０ｒｐｍで振盪した場合、候補９、１１および１２は、より速い酸性ピーク形成速度を示した。
ＤＬＳの結果：候補１、２および４は、サンプルを４０℃で４週間保保存した場合、流体力学的半径（Ｚ平均）のシフトを示した。これは、タンパク質がおそらくバッファー系中で不安定であり、折り畳みおよび／または表面電位の変化が分子間相互作用の変化を引き起こした可能性があることを示し、これは期間中、ＤＬＳの読み取り値に見られたように、異なる会合または凝集パターンにつながった。候補２、３および１２は、サンプルを２５０ｒｐｍ、３０℃で４週間振盪した場合、Ｚ平均で同じ不安定な性能を示した。多分散度指数（ＰＤＩ）値は、ＤＬＳによるサンプルの安定性性能を反映するもう１つの指標である。候補６、７および１０は、試験中、適度に小さいＰＤＩ値を維持したが、候補１、２、３、４および１２は、不安定で比較的大きなＰＤＩ値を示した。
従って、結果は、ｐＨ５．５または６．０のクエン酸バッファーおよびｐＨ６．０または６．５のヒスチジンバッファーが最も安定しバッファー系であることを示す。
６．３ 賦形剤のスクリーニング
好ましいバッファー系を、ある範囲の賦形剤（表３２にまとめられている種々の候補製剤）を使用して試験した。
Figure 2023507981000032
サンプルは４０℃にて静止状態で保存し、３０℃、２５０ｒｐｍで最大４週間振盪した。サンプルは、外観、ｐＨ、ＵＶ２８０、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、ｃＩＥＦ、ＤＬＳ、および粒子状物質について検査した。
総てのサンプルは、４０℃で４週間保存し、２５０ｒｐｍ、３０℃で２週間振盪した際に、わずかに乳光のある無色のままであった。
１１種類総ての処方物（Ｆ１～Ｆ１１）のｐＨ値およびオスモル濃度は、４０℃での振盪および保存中に安定していると思われた。
総てのサンプルのタンパク質濃度は、２０ｍｇ／ｍｌ前後で安定であった。
１１の処方物の総ての粒子状物質数は、４０℃での振盪および保存中に安定であった。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果：４０℃で４週間保存し、２５０ｒｐｍ、３０℃で４週間振盪した場合、１１の候補の中で候補Ｆ２が最も安定な処方物であると思われた。
ｃＩＥＦの結果：４０℃で４週間保存し、２５０ｒｐｍ、３０℃で４週間振盪した場合、１１の候補の中で候補Ｆ２およびＦ３が最も安定な処方物であると思われた。
サンプルを４０℃で４週間保存し、２５０ｒｐｍ、３０℃で４週間振盪した場合、１１の候補の総てが安定した流体力学的半径（Ｚ平均）を維持していた。
候補者４と１１を除き、他の総ての候補が、試験の間、適度に小さいＰＤＩ値を維持していた。
６．４ 高濃度試験
ドスターリマブは現在、２５ｍＭのクエン酸塩、１００ｍＭのＬ－アルギニン－ＨＣＩ、３１ｍＭのＮａＣｌ、０．０２％（ｗ／ｖ）のＰＳ８０、ｐＨ６．０中に２０または５０ｍｇ／ｍＬで処方されている。高濃度処方物中のタンパク質の安定性を評価するために、抗体濃度を１２５ｍｇ／ｍＬまで濃縮する試験を行った。この試験では、タンパク質濃度２５ｍｇ／ｍＬ刻みで５０～１２５ｍｇ／ｍＬの範囲の５種類のタンパク質濃度を評価した。試験結果は、ドスターリマブが１２５ｍｇ／ｍＬに濃縮可能であり、一般的に安定であることを示した。
抗体は原薬段階で処方される。医薬品（ＤＰ）は原薬（ＤＳ）と同じ強度および処方剤であるため、上記の強制分解試験は医薬品に適用可能である。
６．５ 有効期間の安定性
ドスターリマブ５０ｍｇ／ｍＬ医薬品（ＤＰ）は、推奨される長期保存条件下、選択される処方物中で安定である。結論は、実施された試験に基づくものであり得る。
・５℃の長期安定保存条件では、最大１８か月間製品品質に変化は見られなかった。
・２５±５℃の加速条件で６か月間保存した後、総ての医薬品バッチで製品品質にわずかな変化が見られるに過ぎなかった。
・ドスターリマブ医薬品は、周囲光条件で３０日に相当する光安定性を示す。
これまでの安定性プログラムから得られた結果は、ドスターリマブＤＰが推奨される長期保存条件（５±３℃）で保存された場合に安定していることを示す。最大１８か月の保存の分析試験で評価した場合、識別可能な変化は見られない。加速条件（２５±２℃／６０±５％相対湿度（ＲＨ））で最大６か月間保存されたＤＰの傾向分析では、製品の品質属性にわずかな変化が見られるに過ぎなかった。現時点では、リアルタイムの実温度データは、５±３℃で最大１８か月間の医薬品の推奨長期保存を実証しているが、必要に応じて有効期間をさらに延長するために安定性データの収集および評価を継続する。
Figure 2023507981000033
本発明は、以下の項目を含む。
１．抗ＰＤ－１抗体の酸化変異体を含んでなる組成物であって、前記酸化変異体が配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；前記組成物は、６５％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、または３％以下の酸化変異体を含んでなる、組成物。
２．組成物中の酸化変異体の量が酸化変異体を同定するために使用される方法の検出下限～６５％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、４％または３％である、項目１に記載の組成物。
３．前記酸化変異体を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．１～６５％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、および２～３％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１または項目２に記載の組成物。
４．前記酸化変異体が配列番号１～６のいずれか１のメチオニン残基および／またはトリプトファン残基に酸化を含んでなる、項目１～３のいずれか一項に記載の組成物。
５．前記酸化変異体がＣＤＲＨ１のＭ３４、ＣＤＲＨ３のＭ１０３および／またはＣＤＲＬ２のＷ５０における１つの酸化または酸化の組合せを含んでなる、項目１～４のいずれか一項に記載の組成物。
６．（ｉ）ＣＤＲＨ１のＭ３４における２１％以下、２０％以下、１６％以下、１５％以下、１２．５％以下、１０％以下、７．５％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、もしくは１％以下の酸化；
（ｉｉ）ＣＤＲＨ３のＭ１０３における６４％以下、６０％以下、５０％以下、４７％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、２％以下、もしくは１％以下の酸化；および／または
（ｉｉｉ）ＣＤＲＬ２のＷ５０における３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、７．５％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の酸化
を含んでなる、項目１～５のいずれか一項に記載の組成物。
７．ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を、ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を同定するために使用される方法の検出下限～２１％、２０％、１６％、１５％、１２．５％、１０％、７．５％、５％、４％、３％、２％、または１％の量で含んでなる、項目１～６のいずれか一項に記載の組成物。
８．ＣＤＲＨ１のＭ３４における酸化を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～２１％、０．０１～２０％、０．０１～１６％、０．０１～１５％、０．０１～１２．５％、０．０１～１０％、０．０１～７．５％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、０．０１～１％、０．０５～２１％、０．０５～２０％、０．０５～１６％、０．０５～１５％、０．０５～１２．５％、０．０５～１０％、０．０５～７．５％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、０．０５～１％、０．１～２１％、０．１～２０％、０．１～１６％、０．１～１５％、０．１～１２．５％、０．１～１０％、０．１～７．５％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、０．５～２１％、０．５～２０％、０．５～１６％、０．５～１５％、０．５～１２．５％、０．５～１０％、０．５～７．５％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、および０．５～１％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１～７のいずれか一項に記載の組成物。
９．ＣＤＲＨ３のＭ１０３における酸化を、ＣＤＲＨ３のＭ１０３における酸化を同定するために使用される方法の検出下限～６４％、６０％、５０％、４７％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、２％、または１％の量で含んでなる、項目１～８のいずれか一項に記載の組成物。
１０．ＣＤＲＨ３のＭ１０３における酸化を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６４％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４７％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、０．０１～１％、０．０５～６４％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４７％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、０．０５～１％、０．１～６４％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４７％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、０．５～６４％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４７％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％および０．５～１％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１～９のいずれか一項に記載の組成物。
１１．ＣＤＲＬ２のＷ５０における酸化を、ＣＤＲＬ２のＷ５０における酸化を同定するために使用される方法の検出下限～３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、７．５％、５％、４％、３％、２％、または１％の量で含んでなる、項目１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
１２．ＣＤＲＬ２のＷ５０における酸化を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～３４％、０．０１～３０％、０．０１～２５％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～７．５％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、０．０１～１％、０．０５～３４％、０．０５～３０％、０．０５～２５％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～７．５％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、０．０５～１％、０．１～３４％、０．１～３０％、０．１～２５％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～７．５％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、０．５～３４％、０．５～３０％、０．５～２５％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～７．５％、０．５～５％、０．５～４％、または０．５～３％、０．５～２％および０．５～１％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１～１１のいずれか一項に記載の組成物。
１３．前記抗体が配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含んでなる、項目１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
１４．前記抗体が配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、かつ／または配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、項目１～１３のいずれか一項に記載の組成物。
１５．前記抗体が配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる、項目１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
１６．配列番号９のＭ２４８における酸化、配列番号９のＭ３５４における酸化および／または配列番号９のＭ４２４における酸化の１つまたは組合せを含んでなる、項目１４または項目１５に記載の組成物。
１７．（ｉ）配列番号９のＭ２４８における６５％以下、６０％、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、もしくは３％以下の酸化、
（ｉｉ）配列番号９のＭ３５４における６５％以下、６０％、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、もしくは３％以下の酸化；および／または
（ｉｉｉ）配列番号９のＭ４２４における６５％以下、６０％、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、または３％以下の酸化
を含んでなる、項目１４～１６のいずれか一項に記載の組成物。
１８．組成物中のＭ２４８における酸化の量がＭ２４８における酸化を同定するために使用される方法の検出下限～６５％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、４％または３％である、項目１４～１７のいずれか一項に記載の組成物。
１９．Ｍ２４８における酸化を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．１～６５％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、および２～３％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１４～１８のいずれか一項に記載の組成物。
２０．組成物中のＭ３５４における酸化の量がＭ３５４における酸化を同定するために使用される方法の検出下限～６５％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、４％または３％である、項目１４～１９のいずれか一項に記載の組成物。
２１．Ｍ３５４における酸化を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．１～６５％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、および２～３％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１４～２０のいずれか一項に記載の組成物。
２２．組成物中のＭ２４２における酸化の量がＭ４２４における酸化を同定するために使用される方法の検出下限～６５％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、４％または３％である、項目１４～２１のいずれか一項に記載の組成物。
２３．Ｍ４２４における酸化を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．１～６５％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、および２～３％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目１４～２２のいずれか一項に記載の組成物。
２４．特定の位置における酸化変異体または酸化を同定するための使用される方法が、場合により、実施例１に示されるようなペプチドマッピングタンデム質量分析である、項目２、７、９、１１、１８、２０または２２のいずれか一項に記載の組成物。
２５．前記方法が、
（ｉ）抗ＰＤ－１抗体を変性させ、還元し、アルキル化し、および消化すること；ならびに
（ｉｉ）タンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィーを行うこと
を含んでなる、項目２４に記載の組成物。
２６．前記方法が、
（ｉ）抗ＰＤ－１抗体を塩酸グアニジンで変性させ、ジチオトレイトールで還元し、ヨードアセトアミドでアルキル化し、エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃまたはトリプシンで３７℃にて４時間消化し、トリフルオロ酢酸で急冷すること；ならびに
（ｉｉ）タンデムエレクトロスプレーイオン化質量分析を伴う超高速液体クロマトグラフィーを行うこと
を含んでなる、項目２４または項目２５に記載の組成物。
２７．抗ＰＤ－１抗体の凝集変異体を含んでなる組成物であって、前記凝集変異体が、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖配列を含み；前記組成物は、３６％以下、３５％以下、３０％以下、２６％以下、２５％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の凝集変異体を含んでなる、組成物。
２８．組成物中の凝集変異体の量が凝集変異体を同定するために使用される方法の検出下限～３６％、３５％、３０％、２６％、２５％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、または１％である、項目２７に記載の組成物。
２９． 前記凝集変異体を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～３６％、０．０１～３５％、０．０１～３０％、０．０１～２６％、０．０１～２５％、０．０１～２０％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、０．０１～１％、０．０５～３６％、０．０５～３５％、０．０５～３０％、０．０５～２６％、０．０５～２５％、０．０５～２０％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、０．０５～１％；０．１～３６％、０．１～３５％、０．１～３０％、０．１～２６％、０．１～２５％、０．１～２０％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、０．５～３６％、０．５～３５％、０．５～３０％、０．５～２６％、０．５～２５％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、および０．５～１％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目２７または項目２８に記載の組成物。
３０．前記抗体が配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる、項目２７～２９のいずれか一項に記載の組成物。
３１．前記凝集変異体を同定するために使用される方法がサイズ排除クロマトグラフィーである、項目２７～３０のいずれか一項に記載の組成物。
３２．前記凝集変異体を同定するために使用される方法が、場合により、実施例５．１に示されるようなＳＥ－ＨＰＬＣである、項目２７～３１のいずれか一項に記載の組成物。
３３．配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含んでなる組成物であって、（ｉ）６５％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下もしくは３％以下の酸化変異体；および／または（ｉｉ）３６％以下、３５％以下、３０％以下、２６％以下、２５％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、もしくは１％以下の凝集変異体を含んでなる、組成物。
３４．組成物中の酸化変異体の量が酸化変異体を同定するために使用される方法の検出下限～６５％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、４％または３％である、項目３３に記載の組成物。
３５．前記酸化変異体を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．１～６５％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、および２～３％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目３３または項目３４に記載の組成物。
３６．前記酸化変異体を同定するために使用される方法が、場合により、実施例１に示されるようなペプチドマッピングタンデム質量分析である、項目３４または項目３５に記載の組成物。
３７．前記方法が、
（ｉ）抗ＰＤ－１抗体を変性させ、還元し、アルキル化し、および消化すること；ならびに
（ｉｉ）タンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィーを行うこと
を含んでなる、項目３４～３６のいずれか一項に記載の組成物。
３８．前記方法が、
（ｉ）抗ＰＤ－１抗体を塩酸グアニジンで変性させ、ジチオトレイトールで還元し、ヨードアセトアミドでアルキル化し、エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃまたはトリプシンで３７℃にて４時間消化し、トリフルオロ酢酸で急冷すること；ならびに
（ｉｉ）タンデムエレクトロスプレーイオン化質量分析を伴う超高速液体クロマトグラフィーを行うこと
を含んでなる、項目３４～３７のいずれか一項に記載の組成物。
３９．組成物中の凝集変異体の量が凝集変異体を同定するために使用される方法の検出下限～３６％、３５％、３０％、２６％、２５％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、または１％である、項目３３～３８のいずれか一項に記載の組成物。
４０．前記凝集変異体を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～３６％、０．０１～３５％、０．０１～３０％、０．０１～２６％、０．０１～２５％、０．０１～２０％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、０．０１～１％、０．０５～３６％、０．０５～３５％、０．０５～３０％、０．０５～２６％、０．０５～２５％、０．０５～２０％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、０．０５～１％；０．１～３６％、０．１～３５％、０．１～３０％、０．１～２６％、０．１～２５％、０．１～２０％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、０．５～３６％、０．５～３５％、０．５～３０％、０．５～２６％、０．５～２５％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、および０．５～１％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目３３～３９のいずれか一項に記載の組成物。
４１．前記凝集変異体を同定するために使用される方法がサイズ排除クロマトグラフィーである、項目３９または項目４０に記載の組成物。
４２．前記凝集変異体を同定するために使用される方法が、場合により、実施例５．１に示されるようなＳＥ－ＨＰＬＣである、項目３９～４１のいずれか一項に記載の組成物。
４３．配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含んでなる組成物であって；
（ｉ）１００％以下、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下もしくは２５％以下の酸性変異体；および／または
（ｉｉ）３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、８％以下、７．５％以下、７％以下、６％以下もしくは５％以下の塩基性変異体；および／または
（ｉｉｉ）１％以上、２．６％以上、３％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上または９０％以上の主要アイソフォーム
を含んでなる、組成物。
４４．組成物中の酸性変異体の量が酸性変異体を同定するために使用される方法の検出下限～１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３５％、３０％または２５％である、項目４３に記載の組成物。
４５．酸性変異体を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：５～１００％、５～９０％、５～８０％、５～７０％、５～６０％、５～５０％、５～４０％、５～３５％、５～３０％、５～２５％、１０～１００％、１０～９７％、１０～９０％、１０～８０％、１０～７０％、１０～６０％、１０～５０％、１０～４０％、１０～３５％、１０～３０％、１０～２５％、２０～１００％、２０～９７％、２０～９０％、２０～８０％、２０～７０％、２０～６０％、２０～５０％、２０～４０％、２０～３５％、２０～３０％および２０～２５％から選択される；または
（ｉｉ）約６０％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％もしくは約１０％
の量で含んでなる、項目４３または４４に記載の組成物。
４６．組成物中の塩基性変異体の量が塩基性変異体を同定するために使用される方法の検出下限～３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、８％、７．５％、７％、６％または５％である、項目４３～４５のいずれか一項に記載の組成物。
４７．塩基性変異体を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．１～３５％、０．１～３０％、０．１～２５％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～８％、０．１～７．５％、０．１～７％、０．１～６％、０．１～５％、１～３５％、１～３０％、１～２５％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～８％、１～７．５％、１～７％、１～６％および１～５％から選択される；または
（ｉｉ）約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約７．５％もしくは約５％
の量で含んでなる、項目４３～４６のいずれか一項に記載の組成物。
４８．主要形態を、
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：２～９０％、２～８０％の、２～７５％、５～９０％、１０～９０％、２０～９０％、３０～９０％、４０～９０％、５０～９０％、６０～９０％、５～８０％、１０～８０％、２０～８０％、３０～８０％、４０～８０％、５０～８０％および６０～８０％から選択される；または
（ｉｉ）約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５０％もしくは約５５％
の量で含んでなる、項目４３～４７のいずれか一項に記載の組成物。
４９．配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含んでなる組成物であって；１０～９７％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる、組成物。
５０．配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含んでなる組成物であって；３５％以下の酸性変異体；および／または５％以下の塩基性変異体；および／または５５％以上の主要アイソフォームを含んでなる、組成物。
５１．配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含んでなる組成物であって；１０～３０％の酸性変異体；および／または０．１～１０％の塩基性変異体；および／または６０～８０％の主要アイソフォームを含んでなる、組成物。
５２．組成物の酸性変異体パーセント、塩基性変異体パーセントおよび主要アイソフォームパーセントがキャピラリー等電点電気泳動を用いて決定される、項目４３～５１のいずれか一項に記載の組成物。
５３．脱アミド化変異体を含んでなる、項目１～５２のいずれか一項に記載の組成物。
５４．前記脱アミド化変異体が、アスパラギン酸残基、スクシンイミド－アスパラギン酸残基、およびイソアスパラギン酸残基から選択される脱アミド化残基を含んでなる、項目５３に記載の組成物。
５５．前記脱アミド化変異体が配列番号９のＮ３８０および／またはＮ３８５に最大１００％の脱アミド化を含んでなる、項目５４に記載の組成物。
５６．前記脱アミド化変異体がＮ３８０に０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１０％、１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、２～１００％、３～１００％、４～１００％、５～１００％、６～１００％、７～１００％、８～１００％、９～１００％、２～３０％、３～３０％、４～３０％、５～３０％、２～４０％、３～４０％、４～４０％、５～４０％、２～１０％、３～１０％、４～１０％、または５～９％の脱アミド化を含んでなる、項目５４に記載の組成物。
５７．前記脱アミド化変異体がＮ３８０に１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、または１０％以上の脱アミド化を含んでなる、項目５４に記載の組成物。
５８．前記脱アミド化変異体がＮ３８５に０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１０％、１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、２～１００％、３～１００％、４～１００％、５～１００％、６～１００％、７～１００％、８～１００％、９～１００％、２～３０％、３～３０％、４～３０％、５～３０％、２～４０％、３～４０％、４～４０％、５～４０％、２～１０％、３～１０％、４～１０％、または５～９％の脱アミド化を含んでなる、項目５４～５７のいずれか一項に記載の組成物。
５９．前記脱アミド化変異体がＮ３８５に０．５％以上、１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、７％以上、８％以上、９％以上、または１０％以上の脱アミド化を含んでなる、項目５４～５８のいずれか一項に記載の組成物。
６０．前記脱アミド化変異体が配列番号１１、配列番号１２または配列番号１３の配列を含んでなる、項目５３～５９のいずれか一項に記載の組成物。
６１．異性化変異体を含んでなる、項目１～６０のいずれか一項に記載の組成物。
６２．配列番号９のＤ１４７に最大１００％の異性化を含んでなる、項目６１に記載の組成物。
６３．０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％または１～１０％の異性化変異体を含んでなる、項目６１または項目６２に記載の組成物。
６４．最大１００％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体および／または最大１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる、項目１～６３のいずれか一項に記載の組成物。
６５．０．１～１００％、０．１～９０％、０．１～８０％、０．１～７０％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１０％、０．１～９％、０．１～８％、０．１～７％、０．１～６％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、１～１００％、１～９０％、１～８０％、１～７０％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１０％、１～９％、１～８％、１～７％、１～６％、１～５％、１～４％、１～３％、または１～２％重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでなる、項目１～６４のいずれか一項に記載の組成物。
６６．１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上または９５％以上の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる、組成物。
６７．１～１００％、１０～１００％、２０～１００％、３０～１００％、４０～１００％、５０～１００％、６０～１００％、７０～１００％、８０～１００％、９０～１００％、９５～９９％、９６～９９％または９７～９９％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる、項目１～６６のいずれか一項に記載の組成物。
６８．配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含んでなる組成物であって、６４％以下、６０％以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、または３％以下の酸化変異体を含んでなる、組成物。
６９．組成物中の酸化変異体の量が酸化変異体を同定するために使用される方法の検出下限～６５％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１５％、１０％、５％、４％または３％である、項目６８に記載の組成物。
７０．前記酸化変異体が
（ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～６５％、０．０１～６０％、０．０１～５０％、０．０１～４０％、０．０１～３０％、０．０１～２０％、０．０１～１５％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０５～６５％、０．０５～６０％、０．０５～５０％、０．０５～４０％、０．０５～３０％、０．０５～２０％、０．０５～１５％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．１～６５％、０．１～６０％、０．１～５０％、０．１～４０％、０．１～３０％、０．１～２０％、０．１～１５％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．５～６５％、０．５～６０％、０．５～５０％、０．５～４０％、０．５～３０％、０．５～２０％、０．５～１５％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、１～６５％、１～６０％、１～５０％、１～４０％、１～３０％、１～２０％、１～１５％、１～１０％、１～５％、１～４％、１～３％、２～４％、および２～３％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％
の量で含んでなる、項目６８または項目６９に記載の組成物。
７１．酸化変異体を同定するために使用される方法が、場合により、実施例１に示されるようなペプチドマッピングタンデム質量分析である、項目６８～７０のいずれか一項に記載の組成物。
７２．前記方法が、
（ｉ）抗ＰＤ－１抗体を変性させ、還元し、アルキル化し、および消化すること；ならびに
（ｉｉ）タンデム質量分析を伴う液体クロマトグラフィーを行うこと
を含んでなる、項目６８～７１のいずれか一項に記載の組成物。
７３．前記方法が、
（ｉ）抗ＰＤ－１抗体を塩酸グアニジンで変性させ、ジチオトレイトールで還元し、ヨードアセトアミドでアルキル化し、エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃまたはトリプシンで３７℃にて４時間消化し、トリフルオロ酢酸で急冷すること；ならびに
（ｉｉ）タンデムエレクトロスプレーイオン化質量分析を伴う超高速液体クロマトグラフィーを行うこと
を含んでなる、項目６８～７２のいずれか一項に記載の組成物。
７４．配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含んでなる組成物であって、３６％以下、３５％以下、３０％以下、２６％以下、２５％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、または１％以下の凝集変異体を含んでなる、組成物。
７５．組成物中の凝集変異体の量が凝集変異体を同定するために使用される方法の検出下限～３６％、３５％、３０％、２６％、２５％、２０％、１０％、５％、４％、３％、２％、または１％である、項目７４に記載の組成物。
７６．前記凝集変異体が、
ｉ）以下の範囲のいずれか１つ：０．０１～３６％、０．０１～３５％、０．０１～３０％、０．０１～２６％、０．０１～２５％、０．０１～２０％、０．０１～１０％、０．０１～５％、０．０１～４％、０．０１～３％、０．０１～２％、０．０１～１％、０．０５～３６％、０．０５～３５％、０．０５～３０％、０．０５～２６％、０．０５～２５％、０．０５～２０％、０．０５～１０％、０．０５～５％、０．０５～４％、０．０５～３％、０．０５～２％、０．０５～１％；０．１～３６％、０．１～３５％、０．１～３０％、０．１～２６％、０．１～２５％、０．１～２０％、０．１～１０％、０．１～５％、０．１～４％、０．１～３％、０．１～２％、０．１～１％、０．５～３６％、０．５～３５％、０．５～３０％、０．５～２６％、０．５～２５％、０．５～２０％、０．５～１０％、０．５～５％、０．５～４％、０．５～３％、０．５～２％、および０．５～１％から選択される；または
（ｉｉ）約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、もしくは約１％の
量で含んでなる、項目７４または項目７５に記載の組成物。
７７．凝集変異体を同定するために使用される方法がサイズ排除クロマトグラフィーである、項目７４～７６のいずれか一項に記載の組成物。
７８．凝集変異体を同定するために使用される方法が、場合により、実施例５．１に示されるようなＳＥ－ＨＰＬＣである、項目２７～３１のいずれか一項に記載の組成物。
７９．抗ＰＤ－１抗体の変異体を含んでなる組成物であって、前記変異体が配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる組成物の少なくとも６０％の効力、１０～９７％の酸性変異体、０．１～３５％の塩基性変異体、２～８０％の主要アイソフォーム、４．８％以下の軽鎖Ｗ５０酸化変異体、１％以下の重鎖Ｍ３４酸化変異体、１．２％以下の重鎖Ｍ１０３酸化変異体、１５．２％以下の凝集変異体、１６．７％以下の重鎖Ｍ３５４酸化変異体、２９．０％以下の重鎖Ｍ４２４酸化変異体、４７．１％以下の重鎖Ｍ２４８酸化変異体、２０．８％以下の重鎖Ｄ１４７異性化変異体、１３．１％以下の重鎖Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、３．１％以下の重鎖Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体、４．６％以下の断片化変異体、２７．８％以下の重鎖Ｎ３８０脱アミド化変異体、２７．２％以下の重鎖Ｎ３８５脱アミド化変異体、約７．４％以下の重鎖Ｎ３１１脱アミド化変異体、約２．０％以下の重鎖Ｎ４３０脱アミド化変異体、９０％以上の重鎖Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および１％以下の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を有する、組成物。
８０．抗ＰＤ－１抗体の変異体を含んでなる組成物であって、前記変異体が、配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる組成物の少なくとも６０％の効力、１０～９７％の酸性変異体、０．１～３５％の塩基性変異体、２～８０％の主要アイソフォーム、０．０１～４．８％の軽鎖Ｗ５０酸化変異体、０．０１～１％重鎖Ｍ３４酸化変異体、０．０１～１．２％の重鎖Ｍ１０３酸化変異体、０．０１～１５．２％の凝集変異体、０．０１～１６．７％の重鎖Ｍ３５４酸化変異体、０．０１～２９．０％の重鎖Ｍ４２４酸化変異体、０．０１～４７．１％の重鎖Ｍ２４８酸化変異体、０．０１～２０．８％の重鎖Ｄ１４７異性化変異体、０．０１～１３．１％の重鎖Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、０．０１～３．１％の重鎖Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体、０．０１～４．６％の断片化変異体、０．０１～２７．８％の重鎖Ｎ３８０脱アミド化変異体、０．０１～２７．２％の重鎖Ｎ３８５脱アミド化変異体、約０．０１～７．４％の重鎖Ｎ３１１脱アミド化変異体、約０．０１～２．０％の重鎖Ｎ４３０脱アミド化変異体、９０％以上の重鎖Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および０．０１～１％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を有する。
８１．前記抗体が全長抗体である、項目１～８０のいずれか一項に記載の組成物。
８２．前記抗体がヒト化されている、項目１～８１のいずれか一項に記載の組成物。
８３．前記抗体の製造または保存中に形成される、項目１～８２のいずれか一項に記載の組成物。
８４．項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物および少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
８５．約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体およびｐＨ約５．５～約６．５の緩衝剤を含んでなる、項目８２に記載の医薬組成物を含んでなる、処方物。
８６．前記緩衝剤がクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファーから選択される、項目８５に記載の処方物。
８７．前記緩衝剤がｐＨ約６．０のクエン酸バッファーである、項目８５または項目８６に記載の処方物。
８８．アルギニンおよび／またはトレハロースをさらに含んでなる、項目８５～８７のいずれか一項に記載の処方物。
８９．ポリソルベート８０をさらに含んでなる、項目８５～８８のいずれか一項に記載の処方物。
９０．約２９０～３２５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度に調整するような濃度の塩化ナトリウムをさらに含んでなる、項目８５～８９のいずれか一項に記載の処方物。
９１．（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約１０ｍＭ～約４０ｍＭのクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファー、（ｃ）約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのアルギニンまたは約２～約１０％ｗ／ｖのトレハロース、（ｄ）約２０ｍＭ～約４０ｍＭの塩化ナトリウム、および（ｅ）約０．０１％～約０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０をｐＨ約５．５～約６．５で含んでなる、項目８４に記載の医薬組成物を含んでなる処方物。
９２．約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０を約ｐＨ６で含んでなる、項目９１に記載の処方物。
９３．約５０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を約ｐＨ６で含んでなる、項目９１に記載の処方物。
９４．項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物、項目８４に記載の医薬組成物または項目８５～９４のいずれか一項に記載の処方物を含んでなる、注射装置。
９５．項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、細胞培養培地。
９６．項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、溶出液。
９７．癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物、項目８４に記載の医薬組成物、または項目８５～９３のいずれか一項に記載の処方物を投与することを含んでなる、方法。
９８．前期組成物が約５００ｍｇの用量で投与される、項目９７に記載の方法。
９９．前期組成物が３週間毎に１回投与される、項目９８に記載の方法。
１００．前記組成物が４サイクル投与される、項目９８または項目９９に記載の方法。
１０１．前記組成物が約５００ｍｇの第１の用量で３週間毎に１回、４サイクル、次いで、約１０００ｍｇの第２の用量で６週間以上毎に１回投与される、項目９７に記載の方法。
１０２．臨床利益を維持するために６週間以上毎に１回の約１０００ｍｇの第２の用量が継続される、項目１０１に記載の方法。
１０３．療法における使用のための、項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物、項目８４に記載の医薬組成物、または項目８４～９３のいずれか一項に記載の処方物。
１０４．癌の治療における使用のための、項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物、項目８４に記載の医薬組成物、または項目８５～９３のいずれか一項に記載の処方物。
１０５．癌の治療における使用のための薬剤の製造における、項目１～８３のいずれか一項に記載の組成物、項目８４に記載の医薬組成物、または項目８５～９３のいずれか一項に記載の処方物の使用。
配列表
配列番号1 - CDRH1
SYDMS
配列番号2 - CDRH2
TISGGGSYTYYQDSVKG
配列番号3 - CDRH3
PYYAMDY
配列番号4 - CDRL1
KASQDVGTAVA
配列番号5 - CDRL2
WASTLHT
配列番号6 - CDRL3
QHYSSYPWT
配列番号7 - 重鎖可変領域 (CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000034
配列番号8 - 軽鎖可変領域 (CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000035
配列番号9 - 全重鎖配列 (CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000036
配列番号10 - 全軽鎖配列 (CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000037
配列番号11 - N380D修飾を有する全重鎖配列(CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000038
配列番号12 - N385D修飾を有する全重鎖配列 (CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000039
配列番号13 - N380DおよびN385D修飾を有する全重鎖配列 (CDRを下線で示す)
Figure 2023507981000040
配列番号14 -- CDRL3代替
QHYNSYPWT

Claims (52)

  1. 抗ＰＤ－１抗体の酸化変異体を含んでなる組成物であって、前記酸化変異体が配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；前記組成物は、６５％以下の酸化変異体を含んでなる、組成物。
  2. 前記酸化変異体が配列番号１～６のいずれか１つのメチオニンおよび／またはトリプトファン残基に酸化を含んでなる、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記酸化変異体がＣＤＲＨ１のＭ３４、ＣＤＲＨ３のＭ１０３および／またはＣＤＲＬ２のＷ５０における酸化の１つまたは組合せを含んでなる、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物。
  4. ＣＤＲＨ１のＭ３４における２１％以下の酸化、ＣＤＲＨ３のＭ１０３における６４％以下の酸化、および／またはＣＤＲＬ２のＷ５０における３４％以下の酸化の１つまたは組合せを含んでなる、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. 前記抗体が配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の重鎖可変領域および／または配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９０％同一の軽鎖可変領域を含んでなる、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. 前記抗体が配列番号９の重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、かつ／または配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列と少なくとも約９０％同一である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記抗体が配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 配列番号９のＭ２４８における６５％以下の酸化、配列番号９のＭ３５４における６５％以下の酸化および／または配列番号９のＭ４２４における６５％以下の酸化の１つまたは組合せを含んでなる、請求項６または請求項７に記載の組成物。
  9. 抗ＰＤ－１抗体の凝集変異体を含んでなる組成物であって、前記凝集変異体が配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含む重鎖配列、および配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖配列を含み；前記組成物は３６％以下の凝集変異体を含んでなる、組成物。
  10. 前記抗体が配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる、請求項９に記載の組成物。
  11. 配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を有する抗体を含み、（ｉ）６５％以下の酸化変異体；および／または（ｉｉ）３６％以下の凝集変異体を含んでなる、組成物。
  12. 配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；１００％以下の酸性変異体；および／または３５％以下の塩基性変異体；および／または１％以上の主要アイソフォームを含んでなる、組成物。
  13. 配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；１０～９７％の酸性変異体；および／または０．１～３５％の塩基性変異体；および／または２～８０％の主要アイソフォームを含んでなる、組成物。
  14. 配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含んでなる抗ＰＤ－１抗体の電荷変異体を含み；３５％以下の酸性変異体；および／または５％以下の塩基性変異体；および／または５５％以上の主要アイソフォームを含んでなる、組成物。
  15. 組成物の酸性変異体パーセント、塩基性変異体パーセントおよび主要アイソフォームパーセントがキャピラリー等電点電気泳動を用いて決定される、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の組成物。
  16. 脱アミド化変異体を含んでなる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
  17. 前記脱アミド化変異体がアスパラギン酸残基、スクシンイミド－アスパラギン酸残基、またはイソアスパラギン酸残基から選択される脱アミド化残基を含んでなる、請求項１６に記載の組成物。
  18. 脱アミド化変異体が配列番号９のＮ３８０および／またはＮ３８５に最大１００％の脱アミド化を含んでなる、請求項１７に記載の組成物。
  19. 前記脱アミド化変異体が配列番号１１、配列番号１２または配列番号１３の配列を含んでなる、請求項１７または請求項１８に記載の組成物。
  20. 異性化変異体を含んでなる、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物。
  21. 配列番号９のＤ１４７に最大１００％の異性化を含んでなる、請求項２０に記載の組成物。
  22. 最大１００％の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体および／または最大１００％の重鎖Ｃ末端リジン切断変異体を含んでなる、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物。
  23. 配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含み、６４％以下の酸化変異体を含んでなる、組成物。
  24. 配列番号９、配列番号１１、配列番号１２および／または配列番号１３から選択される配列の１つまたは組合せを有する重鎖配列、ならびに配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる抗体を含み、３６％以下の凝集変異体を含んでなる、組成物。
  25. 抗ＰＤ－１抗体の変異体を含んでなる組成物であって、前記変異体が配列番号１のＣＤＲＨ１、配列番号２のＣＤＲＨ２、および配列番号３のＣＤＲＨ３を含んでなる重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号４のＣＤＲＬ１、配列番号５のＣＤＲＬ２、および配列番号６のＣＤＲＬ３を含んでなる軽鎖アミノ酸配列を含み；前記組成物は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含んでなる組成物の少なくとも６０％の効力、１０～９７％の酸性変異体、０．１～３５％の塩基性変異体、２～８０％の主要アイソフォーム、４．８％以下の軽鎖Ｗ５０酸化変異体、１％以下の重鎖Ｍ３４酸化変異体、１．２％以下の重鎖Ｍ１０３酸化変異体、１５．２％以下の凝集変異体、１６．７％以下の重鎖Ｍ３５４酸化変異体、２９．０％以下の重鎖Ｍ４２４酸化変異体、４７．１％以下の重鎖Ｍ２４８酸化変異体、２０．８％以下の重鎖Ｄ１４７異性化変異体、１３．１％以下の重鎖Ｄ１５１またはＤ１６７異性化変異体、３．１％以下の重鎖Ｄ２６１、Ｄ２６６またはＤ２７６異性化変異体、４．６％以下の断片化変異体、２７．８％以下の重鎖Ｎ３８０脱アミド化変異体、２７．２％以下の重鎖Ｎ３８５脱アミド化変異体、約７．４％以下の重鎖Ｎ３１１脱アミド化変異体、約２．０％以下の重鎖Ｎ４３０脱アミド化変異体、９０％以上の重鎖Ｃ末端リジン欠失変異体（ΔＫ４４３）、および１％以下の重鎖Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を有する、組成物。
  26. 前記抗体が全長抗体である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の組成物。
  27. 前記抗体がヒト化されている、請求項１～２６のいずれか一項に記載の組成物。
  28. 前記抗体の製造または保存中に形成される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の組成物。
  29. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物および少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
  30. 約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体およびｐＨ約５．５～約６．５の緩衝剤を含んでなる、請求項２９に記載の医薬組成物を含んでなる、処方物。
  31. 前記緩衝剤がクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファーから選択される、請求項３０に記載の処方物。
  32. 前記緩衝剤がｐＨ約６．０のクエン酸バッファーである、請求項３０または請求項３１に記載の処方物。
  33. アルギニンおよび／またはトレハロースをさらに含んでなる、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の処方物。
  34. ポリソルベート８０をさらに含んでなる、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の処方物。
  35. 塩化ナトリウムを、処方物のオスモル濃度を約２９０～３２５ｍＯｓｍ／ｋｇに調整するような濃度でさらに含んでなる、請求項３０～３４のいずれか一項に記載の処方物。
  36. （ａ）約２０ｍｇ／ｍＬ～約１２５ｍｇ／ｍＬの抗体、（ｂ）約１０ｍＭ～約４０ｍＭのクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファー、（ｃ）約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのアルギニンまたは約２～約１０％ｗ／ｖのトレハロース、（ｄ）約２０ｍＭ～約４０ｍＭの塩化ナトリウム、および（ｅ）約０．０１％～約０．１％ｗ／ｖのポリソルベート８０を、ｐＨ約５．５～約６．５で含んでなる、請求項２９に記載の医薬組成物を含んでなる処方物。
  37. 約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０を約ｐＨ６で含んでなる、請求項３６に記載の処方物。
  38. 約５０ｍｇ／ｍＬの抗体、約２５ｍＭのクエン酸バッファー、約１００ｍＭのアルギニン、約３１ｍＭの塩化ナトリウム、および約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０を約ｐＨ６で含んでなる、請求項３６に記載の処方物。
  39. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物を含んでなる、注射装置。
  40. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、細胞培養培地。
  41. 請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、溶出液。
  42. 癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物を投与することを含んでなる、方法。
  43. 前記組成物が約５００ｍｇの用量で投与される、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記組成物が３週間毎に１回投与される、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記組成物が４サイクル投与される、請求項４３または請求項４４に記載の方法。
  46. 前記組成物が約５００ｍｇの第１の用量で３週間毎に１回、４サイクル、次いで、約１０００ｍｇの第２の用量で６週間以上毎に１回投与される、請求項４２に記載の方法。
  47. 臨床利益を維持するために６週間以上毎に１回の約１０００ｍｇの第２の用量が継続される、請求項４６に記載の方法。
  48. 療法における使用のための請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物。
  49. 癌の治療における使用のための、請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物。
  50. 癌の治療における使用のための薬剤の製造における、請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物の使用。
  51. 自己免疫疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物を投与することを含んでなる、方法。
  52. 感染性疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に治療上有効な量の請求項１～２８のいずれか一項に記載の組成物、請求項２９に記載の医薬組成物、または請求項３０～３８のいずれか一項に記載の処方物を投与することを含んでなる、方法。
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