JP2023510928A - 抗ｂｔｌａ抗体医薬組成物及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、安定的な抗ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ）抗体の医薬組成物及びその医薬的使用を提供する。当該医薬組成物は、抗ＢＴＬＡ抗体、緩衝液を含み、少なくとも１つの安定剤を更に含み、任意に更に界面活性剤を含むことができる。【選択図】なし

Description

本発明は治療性医薬組成物の分野に関する。特に、本発明は医薬製剤分野に関し、当該医薬組成物がＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）と特異的に結合するヒト化抗体を含む。
正と負の共刺激シグナルはＢ細胞とＴ細胞活性の調整において決定的な役割を果たし、且つこれらのシグナルを媒介する分子が免疫調整剤の有効な標的であることが証明された。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の関与のほか、ナイーブＴ細胞の最適な活性化にも正の共刺激が必要であり、負の共刺激は、自己免疫耐性の獲得及びエフェクターＴ細胞機能の終止に必要なものとみなされる。抗原提示細胞（ＡＰＣ）表面上のＢ７．１又はＢ７．２と相互作用するときに、原型Ｔ細胞共刺激分子ＣＤ２８はＴＣＲの関与に応答してＴ細胞増殖と分化を促進するシグナルを発するが、ＣＤ２８ホモログの細胞毒性Ｔリンパ球抗原‐４（ＣＴＬＡ‐４）はＴ細胞増殖及びエフェクター機能の抑制（非特許文献１、非特許文献２）を媒介する。Ｂ７ファミリーと相同性のある幾つかの新しい分子（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６）が既に発見されており、且つそれらＴ細胞活性化における作用が説明されている。
Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）はＣＤ２８ファミリーのメンバーであり、当該ファミリーはＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ‐４及びＰＤ‐１を更に含む。モノクローナル抗体の添加によりＴ細胞増殖を向上させるという機能から、当該ファミリーの最初のメンバーＣＤ２８及びＩＣＯＳが免疫活性化作用（Ｈｕｔｌｏｆｆら，１９９９）を有することが発見される。ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ‐４及びＰＤ‐１などは負の調節タンパク質として記述されている。幾つかのインビボ研究からＢＴＬＡのリンパ球応答における抑制効果が証明されている。Ｍｕｒｐｈｙと同僚（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）により調製されたＢＴＬＡ欠損マウスでは、Ｔ依存性抗原に応答した時に産生するＩｇＧが３倍増加する。また、ＢＴＬＡ‐マウスから分離したＴ細胞とＢ細胞はそれぞれ、ＣＤ３‐と抗ＩｇＭを使用して抗原‐受容体刺激を行うと、大きな増殖応答を示す（Ｗａｔａｎａｂｅ，２００３）。過剰発現研究において、ＢＴＬＡがＢ細胞受容体複合体及びＴ細胞受容体と会合することが発見される。当該研究結果と一致し、ＢＴＬＡ欠損リンパ球では、ＣｏｎＡ（Ｔ細胞）又はＬＰＳ（Ｂ細胞）を使用して抗原‐受容体非依存性刺激を行うと、影響を受けず、且つ抗ＢＴＬＡ抗体を使用しても調整されない。ＢＴＬＡノックアウトマウスでは、経時的には自発性自己免疫疾患が発症し、且つ寿命が短縮されることが明らかになる（Ｏｙａ，２００８）。ＢＴＬＡノックアウトマウスでは、自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）とアレルギー性気道炎症のモデルにおいて疾患の重症度が進行し、その２つのモデルのいずれもＴ細胞活性に依存することが示されている（Ｗａｔａｎａｂｅ，２００５；Ｄｅｐｐｏｎｇ，２００６）。
ヘルペスウイルスエントリーメディエータ（ＨＶＥＭ）はＢＴＬＡのリガンドであることが明らかになる（Ｓｃｕｌｌｙら，２００５）。ＨＶＥＭはＩ型膜貫通糖タンパク質であり、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、４個の細胞外システインリッチ領域（ＣＤＲｓ）を有し、６個の擬似反復システインを含む。ＢＴＬＡ及びＨＶＥＭは主に細胞表面での動的発現によりＴ細胞とＡＰＣの機能を調整する。ＢＴＬＡは、リガンドと結合すると、Ｔ細胞増殖を抑制し、Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ２５をダウンレギュレートするだけでなく、ＩＦＮ‐γ、ＩＬ‐２、ＩＬ‐４、及びＩＬ‐１０などの産生を抑制するが、細胞アポトーシスを誘導できない。ＨＶＥＭは、ＢＴＬＡと結合すると、Ｔ細胞活性化と増殖のダウンレギュレートを引き起こす（Ｓｅｄｙ，２００５）。これらの研究結果から明らかなように、ＢＴＬＡの発現又はＢＴＬＡ‐ＨＶＥＭ結合の状況は、Ｔ細胞の活性化と増殖に緊密に関連している。
抗体は治療薬として使用することができる。一部の抗体は、生体内で治療薬として用いられる場合、不要な抗体免疫原性を引き起こすことができる。ほとんどのモノクローナル抗体が齧歯動物に由来するため、ヒトにおいて繰り返して使用すると、治療用抗体（例えば、ヒト抗マウス抗体又はＨＡＭＡ）に対する免疫応答を招く。このような免疫応答は、少なくとも治療が効かないことを引き起こし、最悪な場合、潜在的で致命的なアレルギー反応を引き起こす。齧歯動物抗体の免疫原性を低減させる方法の１つは、キメラ抗体の産生を含み、ここで、マウス可変領域（Ｆｖ）とヒト定常領域とを融合する（非特許文献７）。しかしながら、ヒト可変領域とマウス定常領域とのヘテロ接合体を注射したマウスには、ヒト可変領域に対する強い抗体応答が発生し、このことから、このようなキメラ抗体における完全な齧歯動物Ｆｖ領域の保留は依然として患者で有害な免疫原性を引き起こすことができることが明らかになる。
また、齧歯動物の可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）ループをヒトのフレームワークに移植する（即ちヒト化）ことは、齧歯動物配列を最低に低減させることに用いられている（非特許文献８）。しかしながら、ＣＤＲループを交換しても、開始抗体と相同な結合性質を有する抗体を均一に産生することができない。ヒト化抗体では、抗原結合の親和力を維持するために、フレームワーク残基（ＦＲ）（ＣＤＲループ支持に関わる残基）を変える必要がある場合は多い（非特許文献９）。多数のヒト化抗体構築体においてＣＤＲ移植とフレームワーク残基維持が使用されていることが報告されているが、特定配列が所望の結合性質及び／又は生物学的性質を有する抗体を発生できるか否かは予測しにくい。例えば非特許文献１０、非特許文献１１及び非特許文献１２を参照する。なお、従来の研究のほとんどでは動物の軽鎖と重鎖可変配列に異なるヒト配列が使用されることにより、このような研究の予測性には問題が生じる。既知の抗体の配列が使用されており、又はより一般的には既知のＸ線結晶構造を有する抗体、例えば抗体ＮＥＷ、及びＫＯＬの配列が使用されている。例えばＪｏｎｅｓら，同上；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，同上；及びＧｏｒｍａｎなど，同上を参照する。少数のヒト化構築体の正確な配列情報が報告されている。
ヒト障害（例えば炎症障害、自己免疫障害や増殖性障害）を治療するための抗ＢＴＬＡ抗体、特に抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体への需要が存在している。このような抗体は、好ましくはヒト受検者において低免疫原性を有し、有害な免疫応答を引き起こさずに繰り返し投与を可能にする。
そのため、本分野において、高安定性タンパク質製剤を必要とされている。
Ｃｈａｍｂｅｒｓら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９：５６５‐５９４，２００１ Ｅｇｅｎら，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ，３：６１１‐６１８，２００２ Ａｂｂａｓら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，５：１３４５‐６，１９９９ Ｃｏｙｌｅら，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２：２０３‐９，２００１ Ｃａｒｒｅｎｏら，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０：２９‐５３，２００２ Ｌｉａｎｇら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４：３８４‐９０，２００２ Ｌｉｕら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９‐４３ Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４ Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７０９ Ｑｕｅｅｎら，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９ Ｇｏｒｍａｎら，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：４１８１ Ｈｏｄｇｓｏｎ，（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ），９：４２１‐５
本発明に係る医薬組成物は、ＢＴＬＡと特異的に結合するヒト化抗体を含む高安定性医薬組成物である。特に、本発明において、トレハロースと塩化ナトリウムの組合せにより医薬組成物の安定性を明らかに向上させることができることが発見された。
本発明は、（１）緩衝液と、（２）抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントと、を含む医薬組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、を有する。
幾つかの実施形態において、前記医薬組成物における抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は、約１～２００ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは約５～１００ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは約１０～５０ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は、約１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ又は５０ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは、約１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬである。
幾つかの実施形態において、上記緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液の１種又は２種以上から選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記緩衝液は、ヒスチジン緩衝液であり、好ましくは、前記ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジン‐塩酸塩緩衝液又はヒスチジン‐酢酸塩緩衝液から選ばれ、好ましくは、ヒスチジン‐塩酸塩緩衝液である。
幾つかの実施形態において、上記ヒスチジン‐塩酸塩緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩により調製され、好ましくは、Ｌ‐ヒスチジンとＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、１～２０ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１～２０ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：１～１：４で調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：１で調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：３で調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン製剤は、４．５ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１５．５ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製されたｐＨ値５．５のヒスチジン緩衝剤である。幾つかの実施形態において、ヒスチジン製剤は、１５ｍＭのヒスチジンと１５ｍＭのヒスチジン塩酸塩により調製されたｐＨ値６．０のヒスチジン緩衝液である。
幾つかの実施形態において、上記ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジン‐酢酸緩衝液であり、好ましくは、両者のモル比は１：１～１．５：１であり、好ましくは、これらの緩衝液のｐＨ値は５．５±０．３であり、好ましくは約５．５であり、好ましくは、これらの緩衝液は１５～２０ｍＭのヒスチジンと１２～１５ｍＭの酢酸を含む。
幾つかの実施形態において、上記緩衝液は酢酸緩衝液であり、好ましくは、前記酢酸緩衝液は酢酸‐酢酸ナトリウム緩衝液又は酢酸‐酢酸カリウム緩衝液であり、好ましくは酢酸‐酢酸ナトリウム緩衝液である。
幾つかの実施形態において、上記緩衝液はクエン酸緩衝液であり、好ましくは、前記クエン酸緩衝液はクエン酸‐クエン酸ナトリウム緩衝液である。
幾つかの実施形態において、上記緩衝液の濃度は約１～１００ｍＭであり、好ましくは約５～５０ｍＭであり、好ましくは約１０～３０ｍＭであり、好ましくは約２０～３０ｍＭであり、好ましくは約１０～２０ｍＭであり、上記緩衝液の濃度の非限定的な実施例は約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ又はこれらの範囲内の任意の２つの数値を端点とする範囲であり、好ましくは１０ｍＭ、２０ｍＭ又は３０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記緩衝液のｐＨ値は約５．０～６．５であり、好ましくは約５．０～６．０であり、好ましくは約５．５～６．５であり、好ましくは約５．０～５．５であり、好ましくは約５．５～６．０であり、好ましくは約６．０～６．５であり、上記緩衝液のｐＨ値の非限定的な実施例は約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５であり、好ましくは約５．０、５．５又は６．０である。
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は安定剤を更に含み、前記安定剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、マルトース、キシリトール、トレハロースの１種又は２種以上から選ばれる。好ましくは、前記安定剤は、トレハロースと塩化ナトリウムの組合せである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤の濃度は約２０ｍＭ～３００ｍＭであり、好ましくは５０ｍＭ～３００ｍＭであり、より好ましくは１２０ｍＭ～２５０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤は濃度が約５０～２００ｍＭである塩化ナトリウムであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるマンニトールであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるソルビトールであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるショ糖であり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるトレハロースであり、又は前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せであり、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのソルビトールの組合せであり、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのショ糖の組合せであり、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤は塩化ナトリウムである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は濃度が約５０～２００ｍＭである塩化ナトリウムであり、上記塩化ナトリウムの濃度は好ましくは約１００～１９０ｍＭであり、好ましくは約１２０～１８０ｍＭであり、好ましくは約１３０～１７０ｍＭであり、好ましくは約１３０～１５０ｍＭであり、上記塩化ナトリウムの濃度の非限定的な実施例は約１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭであり、好ましくは１３５ｍＭ又は１４０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤はマンニトールである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるマンニトールであり、上記マンニトールの濃度は好ましくは約１５０～３００ｍＭであり、好ましくは約２００～２８０ｍＭであり、上記マンニトールの濃度の非限定的な実施例は約２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭであり、好ましくは２４０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤はソルビトールである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるソルビトールであり、上記ソルビトールの濃度は好ましくは約１５０～３００ｍＭであり、好ましくは約２００～２８０ｍＭであり、上記ソルビトールの濃度の非限定的な実施例は約２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭであり、好ましくは２４０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤はショ糖である。幾つかの実施形態において、上記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるショ糖であり、上記ショ糖の濃度は好ましくは約１５０～３００ｍＭであり、好ましくは約２００～２８０ｍＭであり、上記ショ糖の濃度の非限定的な実施例は約２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭであり、好ましくは２２０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤はトレハロースである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるトレハロースであり、上記トレハロースの濃度は好ましくは約１５０～３００ｍＭであり、好ましくは約２００～２８０ｍＭであり、上記トレハロースの濃度の非限定的な実施例は約１８０ｍＭ、２００ｍＭ、２１０ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭであり、好ましくは２２０ｍＭである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤は塩化ナトリウムとマンニトールの組合せである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せであり、好ましくは約４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと約１００～１８０ｍＭのマンニトールの組合せであり、好ましくは約４０～６０ｍＭの塩化ナトリウムと約１２０～１６０ｍＭのマンニトールの組合せであり、上記安定剤の非限定的な実施例は約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１４４ｍＭのマンニトールの組合せ、約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのマンニトールの組合せである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤は塩化ナトリウムとソルビトールの組合せである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのソルビトールの組合せであり、好ましくは約４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと約１００～１８０ｍＭのソルビトールの組合せであり、好ましくは約４０～６０ｍＭの塩化ナトリウムと約１２０～１６０ｍＭのソルビトールの組合せであり、上記安定剤の非限定的な実施例は約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１４４ｍＭのソルビトールの組合せ、約４０ｍＭの塩化ナトリウムと約１６０ｍＭのソルビトールの組合せである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤は塩化ナトリウムとショ糖の組合せである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのショ糖の組合せであり、好ましくは約４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと約１００～１８０ｍＭのショ糖の組合せであり、好ましくは約４０～６０ｍＭの塩化ナトリウムと約１２０～１６０ｍＭのショ糖の組合せであり、上記安定剤の非限定的な実施例は約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１３２ｍＭのショ糖の組合せ、約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１５０ｍＭのショ糖の組合せである。
幾つかの実施形態において、上記安定剤は塩化ナトリウムとトレハロースの組合せである。幾つかの実施形態において、上記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せであり、好ましくは約４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと約１００～１８０ｍＭのトレハロースの組合せであり、好ましくは約４０～６０ｍＭの塩化ナトリウムと約１２０～１６０ｍＭのトレハロースの組合せであり、上記安定剤の非限定的な実施例は約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１３２ｍＭのトレハロースの組合せ、約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのトレハロースの組合せ、約６０ｍＭの塩化ナトリウムと約１２０ｍＭのトレハロースの組合せであり、好ましくは約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１３２ｍＭのトレハロースの組合せ、又は約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのトレハロースの組合せである。
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は界面活性剤を更に含み、前記界面活性剤はポリソルベート８０、ポリソルベート２０又はポロキサマー１８８から選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記界面活性剤はポリソルベート８０から選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記界面活性剤はポリソルベート２０から選ばれる。
幾つかの実施形態において、ｗ／ｖで計算する場合、上記界面活性剤の濃度は約０．００１％～０．１％であり、好ましくは約０．０１％～０．０５％であり、好ましくは約０．０２％～０．０４％であり、非限定的な実施例として、上記界面活性剤の濃度は約０．０２％、０．０３％又は０．０４％であり、好ましくは０．０２％である。
幾つかの実施形態において、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントはマウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体から選ばれ、好ましくはヒト化抗体である。
幾つかの実施形態において、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域と、を有する。
幾つかの実施形態において、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域と、を有する。
幾つかの実施形態において、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域と、を有する。
幾つかの実施形態において、上記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示される重鎖アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示される軽鎖アミノ酸配列と、を有する。
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、下記（１）～（８）の何れか１項に示される成分を含み、或いは下記（１）～（８）の何れか１項に示される成分により調製されるものであって、抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは本発明の何れか１つの実施形態に記載される通りである。
（１）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（２）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（３）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのショ糖の組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（４）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのソルビトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（５）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭのトレハロース、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（６）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５～６．５である約１０～３０ｍＭのクエン酸緩衝液、（ｃ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭのトレハロース、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（７）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５～６．５である約１０～３０ｍＭのクエン酸緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、又は
（８）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭの酢酸緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０。
幾つかの実施形態において、上記医薬組成物は、下記（９）～（１３）の何れか１項に示される成分を含み、或いは下記（９）～（１３）の何れか１項に示される成分により調製されるものである。
（９）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約６．０である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１３２ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、又は
（１０）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約２２０ｍＭのトレハロース、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、又は
（１１）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、又は
（１２）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、又は
（１３）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０。
幾つかの実施形態において、前記医薬組成物は液体製剤又は凍結乾燥製剤である。
幾つかの実施形態において、前記医薬組成物は液体製剤であり、例えば、水溶液製剤である。
幾つかの実施形態において、上記液体製剤又は凍結乾燥製剤は、２～８℃で、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間又は少なくとも２４ヶ月間安定である。
幾つかの実施形態において、上記水溶液又は凍結乾燥製剤は、４０℃で、少なくとも７日間、少なくとも１４日間又は少なくとも２８日間安定である。
本発明は、ＢＴＬＡ媒介疾患を治療又は予防するための薬物の調製における上記医薬組成物の使用を更に提供する。
幾つかの実施形態において、上記疾患は腫瘍、感染症、炎症又は自己免疫疾患を含む。前記腫瘍は、メラノーマ、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、骨癌、皮膚癌、頭癌又は首癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、睾丸癌、食道癌、小腸癌、子宮頸癌、膣癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副腎癌、軟部組織癌、尿道癌、慢性又は急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期固形腫、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系の新生物、原発性中枢神経系リンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、石綿により誘発されるものを含む環境誘発癌、前記癌の組合せを含む。前記自己免疫疾患は、器官特異的自己免疫疾患及び全身性自己免疫疾患を含み、前記器官特異的自己免疫疾患は、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性結腸炎、慢性萎縮性胃炎を伴う悪性貧血、肺出血腎炎症候群、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性脳脊髄硬化症、急性特発性多神経炎などを含み、前記全身性自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性血管炎、強皮症、天胞瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、自己免疫性溶血性貧血、潰瘍性結腸炎などを含む。
ヒト化抗体ｈｕ１７と様々な種のＢＴＬＡとの結合の比較試験である。 ｈｕ１８によるＭＣ３８-ｈＨＶＥＭ細胞移植Ｂ-ｈＢＴＬＡマウスの腫瘍体積への影響である。 試験品によるＭＣ３８-ｈＨＶＥＭ細胞移植Ｂ-ｈＢＴＬＡマウスの体重への影響である。
＜定義及び説明＞
本発明をより容易に理解できるように、技術と科学用語を以下のように定義する。
本明細書で明確に別途定義しない限り、本明細書で使用されるその他の全ての技術と科学用語は、本発明の当業者が通常理解する意味を有する。本発明は具体的な方法、試薬、化合物、組成物又は生体系に限らず、当然、上記に対して変化を行うことができる。本願で使用される用語は、具体的な実施形態を説明するためのものに過ぎず、限定を加えるためのものではない。
別途で明確な説明がない限り、本明細書及び添付の請求項で使用される「１つ」、「１種」及び「当該」の単数表現は複数の意味を含む。従って、例えば、「１種のポリペプチド」は、２種以上のポリペプチドなどの組合せを含む。
「医薬組成物」又は「製剤」という用語は、１種又は複数種の本明細書に係る化合物又はその薬学的に許容される塩又は前駆体薬物とその他の成分を含む混合物を意味し、前記その他の成分は例えば生理学的に薬学的に許容されるベクター及び賦形剤である。医薬組成物は、生体への投与を促進し、活性成分の吸収を高め、更に生理活性を発揮することを目的とする。
「液体製剤」という用語は、液体状態である製剤であり、再懸濁される凍結乾燥製剤ではない。本発明に係る液体製剤は安定的に保存できるとともに、その安定性が凍結乾燥（又は例えば噴霧乾燥などのその他の状態変換方法）によるものではない。
「水性液体製剤」という用語は、水を溶媒とする液体製剤である。幾つかの実施形態において、水性液体製剤とは、凍結乾燥、噴霧乾燥及び／又は冷凍を必要とせず、安定性（例えば、化学的及び／又は物理的安定性及び／又は生理活性）が維持できる製剤である。
「賦形剤」という用語は、必要な特性（例えば、コンシステンシー、高安定性）の提供、及び／又は浸透圧の調節のために製剤に添加できる試薬である。一般的に使われる賦形剤の実例は、糖類、ポリオール、アミノ酸、界面活性剤及びポリマーを含むが、これらに限定されない。
本願で使用される「約」は、測定可能な数値（例えば、数量、持続時間など）を表す場合、開示された方法に適用できる変化であって、具体的な数値に対する±２０％又は±１０％の変化、例えば、±５％、±１％、±０．１％などの変化を含むことを意味する。
「緩衝液ｐＨ値が約５．０～６．５である」という用語は、その酸／塩基共役成分によりそれを含む溶液がｐＨ値の変化に耐性のある試薬である。本発明に係る製剤で使用される緩衝液は、ｐＨ値が約５．０～約６．５の範囲内、又は約５．５～約６．５の範囲内、又は約５．０～約６．０の範囲内であってもよい。
本明細書において、ｐＨ値を当該範囲内に制御する「緩衝液」の実例は、酢酸塩（例えば、酢酸ナトリウム）、コハク酸塩（例えば、コハク酸ナトリウム）、グルコン酸、ヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩、メチオニン、クエン酸塩、リン酸塩、クエン酸塩／リン酸塩、イミダゾール、酢酸、酢酸塩、クエン酸塩、これらの組合せ及びその他の有機酸緩衝剤を含む。
「ヒスチジン緩衝液」はヒスチジンイオンを含む緩衝液である。ヒスチジン緩衝液の実例は、ヒスチジン及びヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン酢酸塩、ヒスチジンリン酸塩、ヒスチジン硫酸塩などのヒスチジンの塩を含み、例えば、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩を含むヒスチジン緩衝液である。本発明のヒスチジン緩衝液はヒスチジンと酢酸塩（例えば、ナトリウム塩又はカリウム塩）を含むヒスチジン緩衝液を含んでもよい。
「クエン酸塩緩衝液」はクエン酸イオンを含む緩衝液である。クエン酸塩緩衝液の実例は、クエン酸‐クエン酸ナトリウム、クエン酸‐クエン酸カリウム、クエン酸‐クエン酸カルシウム、クエン酸‐クエン酸マグネシウムなどを含む。好ましいクエン酸塩緩衝液はクエン酸‐クエン酸ナトリウム緩衝液である。
「酢酸塩緩衝液」は酢酸イオンを含む緩衝液である。酢酸塩緩衝液の実例は、酢酸‐酢酸ナトリウム、酢酸‐酢酸カリウム、酢酸‐酢酸カルシウム、酢酸‐酢酸マグネシウムなどを含む。好ましい酢酸塩緩衝液は酢酸‐酢酸ナトリウム緩衝液である。
「安定剤」という用語は薬学的に許容される賦形剤を意味し、調製、保存及び適用の過程において活性薬物成分及び／又は製剤が化学的及び／又は物理的に分解されないように保護する。安定剤は、下記に定義される糖、アミノ酸、塩、ポリオール及びこれらの代謝産物、例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロース、塩酸アルギニン、アルギニン、グリシン、アラニン（α‐アラニン、β‐アラニン）、ベタイン、ロイシン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、４‐ヒドロキシプロリン、サルコシン、γ‐アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、オパイン（ｏｐｉｎｅｓ）（アラノピン、オクトピン、ストロンビン（ｓｔｒｏｍｂｉｎｅ））、トリメチルアミンのＮ‐酸化物（ＴＭＡＯ）、ヒト血清アルブミン（ｈｓａ）、ウシ血清アルブミン（ｂｓａ）、α‐カゼイン、グロブリン、α‐ラクトアルブミン、ＬＤＨ、リゾチーム、ミオグロビン、オボアルブミン、ＲＮＡａｓｅＡを含むが、これらに限定されない。塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖などの一部の安定剤は、浸透圧の制御効果を果たすことができる。本発明で具体的に使用される安定剤はポリオール、塩、糖の１種又は２種以上から選ばれる。好ましい塩は塩化ナトリウムであり、好ましい糖はショ糖、トレハロースであり、好ましいポリオールはソルビトール、マンニトールである。好ましい安定剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロース、塩化ナトリウム‐ソルビトール、塩化ナトリウム‐マンニトール、塩化ナトリウム‐ショ糖、塩化ナトリウム‐トレハロースであり、より好ましくは塩化ナトリウム‐ソルビトール、塩化ナトリウム‐マンニトール、塩化ナトリウム‐ショ糖、塩化ナトリウム‐トレハロースであり、より好ましくは塩化ナトリウム‐トレハロースである。
「界面活性剤」という用語は、一般的に、抗体凝集の低減又は製剤における粒状物の形成の最小化を図るために、例えば抗体などのタンパク質を空気／溶液界面により誘導される応力、溶液／表面により誘導される応力の影響から保護する試薬を含む。例示された界面活性剤は、例えば、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０）、ポリエチレン‐ポリプロピレン共重合体、ポリエチレン‐ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン‐ステアリン酸エステル、ポリオキシエチレンモノラウリルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ‐Ｘ）、ポリオキシエチレン‐ポリプロピレンオキシド共重合体（ポロキサマー、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの、非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
「等張」という用語は、当該製剤がヒト血液とほぼ同じ浸透圧を有することである。等張製剤は一般的に約２５０～３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。蒸気圧式又は氷点降下方式の浸透圧計で等張性を測定することができる。
「安定的な」製剤という用語は、製造期間及び／又は保存期間において含まれる抗体の物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生理活性が基本的に保持される製剤である。たとえ、一定の期間で保存した後、含まれる抗体の化学構造又は生理機能が１００％保持できなくても、医薬製剤も安定し得る。一定の期間で保存した後、抗体構造又は機能が約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％保持できると、「安定的」と見なされる場合がある。タンパク質安定性を測定するための各解析技術が本技術分野において利用可能であり、「ペプチド及びタンパク質の薬物送達」（Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）２４７‐３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ編集長，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）、及びＪｏｎｅｓ，Ａ．（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９‐９０に記載されている（両者を参考として引用）。
製剤は、一定の温度及び期間で保存した後、その中に残された天然抗体のパーセンテージを測定すること（及びその他の方法）により、その安定性を測定することができる。その他の方法以外に、天然抗体のパーセンテージはサイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー［ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ］）により測定できるが、「天然の」とは凝集されていない、及び分解されていないことである。幾つかの実施形態において、タンパク質の安定性は、分解した（例えば、断片化）及び／又は凝集したタンパク質を低いパーセンテージで有する溶液における、タンパク質単体のパーセントにより決められる。幾つかの実施形態において、製剤は、室温、約２５～３０℃又は４０℃で、少なくとも２週間、少なくとも２８日間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、又は更に長期間で、多くとも約６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．１％を超えない範囲で凝集した抗体を、安定的に保存できる。
イオン交換期間における、この抗体の主要留分（「主要荷電形態」）よりやや酸性である留分で遷移する抗体（「酸性形態」）のパーセンテージを測定すること（及びその他の方法）により、安定性を測定することができるが、安定性は酸性形態の抗体のパーセンテージに反比例する。その他の方法以外に、「酸化された」抗体のパーセンテージは、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、カチオン交換高速液体クロマトグラフィー［ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ］）により測定できる。幾つかの実施形態において、許容可能な安定性とは、製剤を一定の温度及び期間で保存した後、検出可能な酸性形態の抗体が多くとも約４９％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．１％を超えないことである。安定性を測定する前に保存された一定の期間は、少なくとも２週間、少なくとも２８日間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、又は更に長期間である。安定性を評価する際に、医薬製剤を保存できる一定の温度は、約‐８０℃～約４５℃範囲内の任意の温度であってもよく、例えば、約‐８０℃、約‐３０℃、約‐２０℃、約０℃、約２～８℃、約５℃、約２５℃、又は約４０℃で保存される。
抗体に対して色及び／又は清澄度の肉眼観察、又はＵＶ光散乱又はサイズ排除クロマトグラフィーによる測定を行う場合、例えば、凝集、沈殿及び／又は変性の兆候が基本的に現れなければ、前記抗体は当該医薬組成物において「その物理的安定性が保持される」。凝集とは、単一の分子又は複合体が共有結合又は非共有結合により結合して凝集体を形成する過程である。凝集は沈殿物が見られるまで行わてもよい。
製剤の、例えば、物理的安定性などの安定性は、サンプルの表面消衰係数（吸光度又は光学濃度）の測定など、本技術分野における周知の方法により評価することができる。この消衰係数の測定は製剤の濁度と関わる。製剤の濁度の一部は溶液に溶解したタンパク質の固有性質によるものであり、通常、比濁法により測定され、比濁法の濁度単位（ＮＴＵ）で測定される。
例えば、溶液における１種又は複数種の成分の濃度（例えば、タンパク質及び／又は塩の濃度）に応じて変化する濁度レベルは、製剤の「混濁」又は「混濁外観」とも呼ばれる。濁度レベルは濁度が既知の懸濁液を用いて作成された検量線を参照することによって算出することができる。医薬組成物の濁度レベルを測定するための参照標準品は「欧州薬局方」基準に従ってもよい（「欧州薬局方」（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）、第四版、「欧州薬品品質委員会指令」（Ｄｉｒｅｃｔｏｒａｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｆ Ｅｕｒｏｐｅ）（ＥＤＱＭ）、Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ、Ｆｒａｎｃｅ）。「欧州薬局方」基準によれば、清澄溶液は「欧州薬局方」基準に基づく約３の参照懸濁液より低い又は同じ濁度を有する溶液と定義される。比濁法による濁度測定は、結合が発生しない又は非理想効果の場合におけるレイリー散乱を測定することができるが、レイリー散乱が一般的に濃度に従って直線的に変化する。物理的安定性を評価するためのその他の方法は本技術分野において周知である。
所定の時点における抗体の化学的安定性により抗体が下記に定義されるその生理活性を依然として保持すると考えられると、前記抗体は医薬組成物において「その化学的安定性が保持される」。例えば、抗体の化学的変化を検出又は定量化することで化学的安定性を評価すことができる。サイズ変化（例えば、短く切断）を含むことができる化学的変化は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ及び／又はマトリックス補助レーザー脱離イオン化法／飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ ＭＳ）により評価することができる。電荷変化（例えば、脱アミド又は酸化の結果として発生）を含むその他の化学的変化は、例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより評価することができる。
医薬組成物における抗体がその予期目的に対して生理活性を有すると、前記抗体は医薬組成物において「その生理活性が保持される」。例えば、製剤を、例えば、５℃、２５℃、４５℃などの温度で一定の期間（例えば、１～１２ヶ月）保存した後、当該製剤に含まれる抗ＢＴＬＡ抗体のＢＴＬＡへの結合の親和力が保存前の前記抗体の結合親和力の少なくとも９０％、９５％又はそれ以上であると、本発明に係る製剤は安定的である。結合親和力は例えばＥＬＩＳＡ又はプラズマ共鳴技術により測定することができる。
本発明の実施形態において、薬理学の観点から、抗体の「治療有効量」又は「有効量」とは、抗体が効果的に治療できる障害の症状の予防、治療又は軽減に対して有効である量である。本発明において、薬物の「治療有効量」又は「治療有効用量」とは、単独で使用するか又はその他の治療剤とを組み合わせて使用する場合、受検者疾患発作から保護するか又は疾患退行を促進する薬物の任意の量であり、前記疾患退行は、疾患症状の重症度低下、疾患無症候期の頻度及び持続期間の増加、又は疾患苦痛による損傷又は機能障害の予防によって証明される。薬物の疾患退行促進効果は当業者に既知の複数の方法により評価することができるが、例えば、臨床試験期間におけるヒト受検者において、ヒトに対する効果を予測するための動物モデル系において、又はインビトロ測定法により前記薬剤の活性を測定する。薬物治療有効量は「予防有効量」を含み、即ち、単独で又はその他の治療薬物との組合せで疾患罹患リスクに曝される受検者又は疾患再発の受検者に投与する場合、疾患の進行又は再発を抑制する薬物の任意の量である。
「受検者」又は「患者」という用語は哺乳類動物の生体を含むことを意味する。受検者／患者の実例は、ヒト、及び、例えば、ヒト以外の霊長類、イヌ、乳牛、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット及びヒト以外の遺伝子組換え動物などのヒト以外の哺乳類動物を含む。本発明の特定の実施形態において、受検者はヒトである。
「施用」、「投与」及び「処理」という用語は、当業者に既知の様々な方法又は送達システムの何れか１種により治療剤が含まれる組成物を受検者に導入することである。抗ＰＤ‐１抗体の投与経路は、静脈内、筋肉内、皮下、腹膜、脊髄又は例えば注射又は輸注などのその他の非経口の投与経路を含む。「非経口投与」とは、経腸又は局部投与を除く、一般的に注射による投与方式であり、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、リンパ内、損傷内、嚢内、眼窩内、心筋内、皮内、腹膜内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、クモ膜下、脊椎内、硬膜内、胸骨内の注射及び注入、並びにインビボエレクトロポレーションを含むが、これらに限定されない。
＜抗ＢＴＬＡ抗体＞
本明細書で使用される「抗体」という用語は完全な抗体分子及びその抗原結合フラグメントを含むと理解されるべきである。本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」又は「抗原結合フラグメント」（或いは「抗体部分」又は「抗体フラグメント」と略称される）という用語は、ヒトＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ）又はそのエピトープと特異的に結合する能力が保持されている、抗体における１つ又は複数のフラグメントである。
本明細書で使用される「全長抗体」又は「完全な抗体分子」という用語は４本のペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子であり、２本の重（Ｈ）鎖（全長の場合は約５０～７０ｋＤａ）と２本の軽（Ｌ）鎖（全長の場合は約２５ｋＤａ）はジスルフィド結合により互いに連結される。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略される）と重鎖定常領域（本明細書においてＣＨと略される）からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略される）と軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨ領域とＶＬ領域は、高可変性を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）と、その間にフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存される領域と、更に細かく区分することができる。各ＶＨ領域又はＶＬ領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順でアミノ基端末からカルボキシル基端末まで配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。重鎖と軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの宿主組織又は因子（免疫系の各細胞（例えば、エフェクター細胞）と古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）を含む）への結合を媒介することができる。
本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は抗体可変配列における相補性決定領域である。各重鎖と軽鎖の可変領域に３つのＣＤＲが存在するが、各重鎖と軽鎖の可変領域に対して、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と名づけられる。これらのＣＤＲは系によってそれぞれの正確な境界が定義される。
本発明に記載の抗体の可変領域ＣＤＲにおける精確なアミノ酸配列の境界は、多くの周知の形態の任意の形態により決定することができ、抗体の立体構造とＣＤＲリングのトポロジーに基づくＣｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７‐８８３，Ａｌ‐Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２７３，９２７‐９４８（１９９７））、抗体配列の可変性に基づくＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７）），ＡｂＭ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ），Ｃｏｎｔａｃｔ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ），国際的ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＭＧＴ）（１９９９ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２７，２０９‐２１２）、及び大量の結晶構造が利用されるアフィニティ伝播クラスタリング（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づくＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義を含む。本発明に係る抗体のＣＤＲは、当業者が本分野の任意形態（例えば、異なる割り当てシステム又は組合せ）により境界を決定することができる。
本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」は抗体のフラグメント又はその誘導体を含み、通常、親抗体の抗原結合領域又は可変領域（例えば、１つ又は複数のＣＤＲ）の少なくとも１つのフラグメントを含み、親抗体の少なくとも一部の結合特異性を保持している。抗原結合フラグメントの実例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント、二重抗体、線形抗体、ｓｃ‐Ｆｖなどの一本鎖抗体分子、抗体フラグメントから形成されるナノ抗体（ｎａｎｏｂｏｄｙ）及び多重特異性抗体を含むが、これらに限定されない。抗体の結合活性がモル濃度で示される場合、結合フラグメント又はその誘導体は、通常、親抗体の抗原結合活性の少なくとも１０％を保持する。結合フラグメント又はその誘導体が親抗体の抗原結合親和力の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％又はより高い親和力を保持することは好ましい。抗体の抗原結合フラグメントは、その生理活性を明らかに変えない保存又は非保存アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」又は「機能保存的変異体」をいう）を含むことが期待される。
本発明に記載の抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントは、出願番号ＣＮ２０１８１０８７０５１４．０に説明された何れか１つの抗ＢＴＬＡ抗体を含み、その開示された全ての内容は引用の形で本明細書に組み込まれる。幾つかの実施形態において、本発明に係る方法及び組成物で使用される抗体のＣＤＲ配列はＣＮ２０１８１０８７０５１４．０に記載の抗体ｈｕ１８由来のＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、本発明に係る方法及び組成物で使用される抗体のＣＤＲ配列はＣＮ２０１８１０８７０５１４．０にに記載の抗体ｈｕ１７由来のＣＤＲ配列を含む。幾つかの実施形態において、本発明に係る方法及び組成物で使用される抗体のＣＤＲ配列はＣＮ２０１８１０８７０５１４．０に記載の抗体ｈｕ１９由来のＣＤＲ配列を含む。
本明細書の実施例で使用される非限定的、例示的な抗体はＣＮ２０１８１０８７０５１４．０に記載のｈｕ１７、ｈｕ１８及びｈｕ１９から選ばれ、いずれもヒトＢＴＬＡと特異的に結合するヒト化完全抗体である。抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８及びｈｕ１９は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、を有する。好ましくは、抗体ｈｕ１７は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを有する。抗体ｈｕ１８は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを有する。抗体ｈｕ１９は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域とを有する。好ましくは、抗体ｈｕ１８は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示される重鎖アミノ酸配列とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示される軽鎖アミノ酸配列とを有する。上記ヒト化抗体のＣＤＲアミノ酸配列はＩＭＧＴシステムにより定義される。
＜医薬製剤＞
本発明に係る医薬組成物は、ＢＴＬＡと特異的に結合するヒト化抗体を含む高安定性医薬組成物である。特に、本発明において、トレハロースと塩化ナトリウムの組合せにより医薬組成物の安定性を明らかに向上させることができることが発見された。
本発明は、（１）緩衝液と、（２）抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントと、を含む医薬組成物を提供する。
本発明に係る医薬組成物における抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体であってもよく、好ましくはヒト化抗体であり、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２及びＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ：３に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、を有してもよい。好ましくは、本発明に係る医薬組成物における抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示される軽鎖可変領域とを有し、又はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示される軽鎖可変領域とを有し、又はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示される重鎖可変領域とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示される軽鎖可変領域とを有する。より好ましくは、本発明に係る医薬組成物における抗体は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示される重鎖アミノ酸配列とＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示される軽鎖アミノ酸配列とを有する。
本発明に係る医薬組成物において、抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は約１～２００ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは約５～１００ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは約１０～５０ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは１５～２５ｍｇ／ｍＬである。非限定的な実施例として、抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は約１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ又は５０ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ又は４０ｍｇ／ｍＬである。
本発明に係る医薬組成物における緩衝液は、本発明に係る医薬組成物に５．０～６．５、好ましくは５．０～６．０のｐＨ値を提供するために、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液から選ばれてもよい。一方、本発明に係る医薬組成物で使用される緩衝液のｐＨ値は５．０～６．５であってもよいが、好ましくは５．０～６．０である。
本発明に係る医薬組成物において、特に好ましい緩衝液はヒスチジン緩衝液である。好ましくは、本発明で使用されるヒスチジン緩衝液のｐＨ値は５．０～６．０であり、より好ましくは５．５±０．３であり、好ましくは約５．５である。好ましくは、前記ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジン‐塩酸塩緩衝液又はヒスチジン‐酢酸塩緩衝液を含み、好ましくはヒスチジン‐塩酸塩緩衝液である。より好ましくは、前記ヒスチジン‐塩酸塩緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩により調製され、好ましくはＬ‐ヒスチジンとＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、１～２０ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１～２０ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：１～１：４で調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：１で調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン緩衝液は、ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：３で調製される。幾つかの実施形態において、ヒスチジン製剤は、４．５ｍＭのＬ‐ヒスチジンと１５．５ｍＭのＬ‐ヒスチジン一塩酸塩により調製されたｐＨ値５．５のヒスチジン緩衝剤である。幾つかの実施形態において、ヒスチジン製剤は、１５ｍＭのヒスチジンと１５ｍＭのヒスチジン塩酸塩により調製されたｐＨ値６．０のヒスチジン緩衝液である。
本発明に係る医薬組成物におけるヒスチジン緩衝液はヒスチジン‐酢酸塩緩衝液であり、好ましくは、両者のモル比は１：１～１．５：１であり、好ましくは、このような緩衝液のｐＨ値は５．５±０．３であり、好ましくは約５．５であり、好ましくは、これらの緩衝液は１５～２０ｍＭのヒスチジンと１２～１５ｍＭの酢酸を含む。
そのため、本発明に係る医薬組成物は、ｐＨ値が５．０～６．０であり、医薬組成物における濃度が１０～３０ｍＭであるヒスチジン‐ヒスチジン塩酸塩緩衝液と、前記の何れか１つの実施形態に記載の１５～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、特に本明細書に記載のｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９又はその抗原結合フラグメントと、を含んでもよい。
幾つかの実施形態において、本発明に係る医薬組成物は安定剤を更に含む。好ましくは、前記安定剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、マルトース、キシリトール、トレハロースの１種又は２種以上から選ばれる。好ましくは、医薬組成物における安定剤は少なくとも塩化ナトリウムを含み、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロースの１種又は複数種を任意に含む。例えば、医薬組成物は、塩化ナトリウムとマンニトール、塩化ナトリウムとソルビトール、塩化ナトリウムとショ糖、又は塩化ナトリウムとトレハロースを含んでもよい。含む場合、医薬組成物における安定剤の濃度は約２０～３００ｍＭであり、好ましくは５０～３００ｍＭであり、より好ましくは１２０～２５０ｍＭである。幾つかの実施形態において、安定剤は濃度が約５０～２００ｍＭである塩化ナトリウムであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるマンニトールであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるソルビトールであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるショ糖であり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるトレハロースであり、又は前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せであり、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのソルビトールの組合せであり、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのショ糖の組合せであり、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せである。
そのため、幾つかの実施形態において、本発明に係る医薬組成物は、ｐＨ値が５．０～６．０であり、医薬組成物における濃度が１０～３０ｍＭであるヒスチジン‐ヒスチジン塩酸塩緩衝液と、前述何れか１つの実施形態に記載の１５～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、特に本明細書に記載のｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９又はその抗原結合フラグメントと、２０～３００ｍＭの安定剤と、を含む。好ましくは、前記安定剤は少なくとも塩化ナトリウムを含み、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロースの１種を任意に含み、好ましくは５０～１５０ｍＭの塩化ナトリウム、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのマンニトール、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのソルビトール、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのショ糖、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのトレハロースである。幾つかの実施形態において、前記安定剤は２００～３００ｍＭのトレハロースである。
幾つかの実施形態において、本発明に係る医薬組成物は界面活性剤を更に含む。好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８から選ばれる。最も好ましい界面活性剤はポリソルベート８０である。ｗ／ｖで計算する場合、本発明に係る医薬組成物における界面活性剤の濃度は約０．００１％～０．１％であり、好ましくは約０．０１％～０．０５％であり、好ましくは約０．０２％～０．０４％である。非限定的な実施例として、本発明に係る医薬組成物における界面活性剤の濃度は約０．０２％、０．０３％又は０．０４％であり、好ましくは０．０２％である。
そのため、幾つかの実施形態において、本発明に係る医薬組成物は、ｐＨ値が５．０～６．０であり、医薬組成物における濃度が１０～３０ｍＭであるヒスチジン‐ヒスチジン塩酸塩緩衝液と、前記の何れか１つの実施形態に記載の１５～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、特に本明細書に記載のｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９又はその抗原結合フラグメントと、２０～３００ｍＭの安定剤と、ｗ／ｖで計算する場合、０．０２％～０．０４％のポリソルベート８０と、を含む。好ましくは、前記安定剤はトレハロースであり、又は少なくとも塩化ナトリウムを含み、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、トレハロースの１種を任意に含み、好ましくは２００～３００ｍＭのトレハロース、又は５０～１５０ｍＭの塩化ナトリウム、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのマンニトール、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのソルビトール、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのショ糖、又は４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと１２０～１５０ｍＭのトレハロースである。特に好ましい実施形態において、本発明に係る医薬組成物は、ｐＨ値が５．５±０．３であり、濃度が２０±５ｍＭであるヒスチジン‐ヒスチジン塩酸塩緩衝液と、４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと、１２０～１５０ｍＭのトレハロースと、ｗ／ｖで計算する場合、０．０２～０．０４％のポリソルベート８０と、１５～２５ｍｇ／ｍＬの抗体ｈｕ１８又はその抗原結合フラグメントと、を含み、又はこれらの成分により調製される。
本発明に係る医薬組成物は液体製剤又は凍結乾燥製剤であってもよい。液体製剤に関して、本明細書に記載の緩衝液、安定剤、抗体又はその抗原結合フラグメント、界面活性剤のほかに、当該医薬組成物を調製するための水を更に含むと理解すべきである。
＜医薬的使用及び方法＞
本発明は、ＢＴＬＡ媒介疾患を治療又は予防するための本発明の何れか１つの実施形態に記載の医薬組成物、ＢＴＬＡ媒介疾患を治療又は予防するための薬物の調製における本発明の何れか１つの実施形態に記載の医薬組成物の使用、及びＢＴＬＡ媒介疾患を治療又は予防するために、本発明の何れか１つの実施形態に記載の医薬組成物を必要とされる個体又は患者に治療有効量で投与する方法、を更に提供する。
本発明において、ＢＴＬＡ媒介疾患とは、ＢＴＬＡが疾患の発生及び進行に関与する疾患であり、腫瘍、感染症、炎症又は自己免疫疾患を含むが、これらに限定されない。本発明において、本発明に係る医薬組成物による治療及び予防に適用できる腫瘍は、メラノーマ、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、骨癌、皮膚癌、頭癌又は首癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、睾丸癌、食道癌、小腸癌、子宮頸癌、膣癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副腎癌、軟部組織癌、尿道癌、慢性或いは急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期固形腫、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系の新生物、原発性中枢神経系リンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、石綿により誘発されるものを含む環境誘発癌、前記癌の組合せを含む。本発明に係る医薬組成物による治療及び予防に適用できる自己免疫疾患は、器官特異的自己免疫疾患及び全身性自己免疫疾患を含み、前記器官特異的自己免疫疾患は、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性結腸炎、慢性萎縮性胃炎を伴う悪性貧血、肺出血腎炎症候群、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性脳脊髄硬化症、急性特発性多神経炎などを含み、前記全身性自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性血管炎、強皮症、天胞瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、自己免疫性溶血性貧血、潰瘍性結腸炎などを含む。
以下、具体的な実施例により本発明を説明する。なお、これらの実施例は、説明するためのものであり、本発明の範囲を意図的に制限するものではない。特に断りのない限り、実施例で使用される方法及び材料は本分野における従来の方法及び材料である。
＜実施例１：緩衝液系及びｐＨ値のスクリーニング試験＞
液体型医薬組成物において、緩衝液系及びｐＨ値が抗体の安定性に大きな影響を与えており、特別な物理的及び化学的性質を有する各抗体はそれぞれ最適な緩衝液の種類及びｐＨ値を持っている。本実施例は臨床適用に適用できるために本発明に開示された抗ＢＴＬＡ抗体が最適な安定性を持つように、最適な緩衝液系及びｐＨ値をスクリーニングすることを目的とする。
本実施例は濃度が約１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ及び４０ｍｇ／ｍＬの抗体ｈｕ１８で実施した。サンプルに対してＶＩＶＡＦｌｏｗ２００で限外濾過、濃縮及び液交換を行い、液交換後のサンプルを対応する処方に置き、サンプルを密封された遠心管に入れて緩衝液をスクリーニングした。酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液及びヒスチジン緩衝液をスクリーニングし、ｐＨ値を５．０～６．５に調整した（例えば、表１に示される）。サンプルを４０℃の環境に置き、それぞれ０週目、２週目及び４週目に取り出して分析と測定を行った。タンパク質分解の主要経路は凝集物、分解製品及び電荷変異体の形成である。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）により天然形態（タンパク質単体）と凝集形態の抗体のパーセンテージを測定し、カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ）により酸性と塩基性形態の抗体のパーセンテージを測定した。試験開始（０Ｗ）、静置２週間（２Ｗ）及び静置４週間（４Ｗ）のＳＥＣ‐ＨＰＬＣ単体含有量及びＣＥＸ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量を使って直線当てはめを行い、下降傾斜度（％／週間）を計算し、抗体ｈｕ１８の抗体安定性への各緩衝液系及び各ｐＨ値による影響を考察し、結果は表２及び表３に示される。
Figure 2023510928000001
Figure 2023510928000002
 注：「‐」は未添加を示す。
Figure 2023510928000003
Figure 2023510928000004
表２及び表３に示されるように、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ試験により測定されたところ、高温４０℃で４週間静置した後、タンパク質濃度が高いほど、単体含有量の下降傾斜度が大きくなるが、ｐＨ値が５．５～６．０のヒスチジン緩衝系において、各タンパク質濃度の単体含有量の下降傾斜度がいずれも小さく、平均下降傾斜度≦０．２７％／週間である。ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ試験により測定されたところ、ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量の下降傾斜度とｐＨ値とが一定の相関性を有し、ｐＨ値が高いほど、主ピーク含有量の下降傾斜度が大きくなるが、ｐＨ値が５．０～６．０の緩衝系において、主ピーク含有量の下降傾斜度が比較的に小さく、主ピーク含有量の下降傾斜度とタンパク質濃度との相関性が明確ではないことが分かった。
製品仕様及び製品の目標品質属性（ポリマー含有量レベル）を総合的に考慮したところ、タンパク質濃度が２０ｍｇ／ｍｌで、ｐＨ値が５．５又は６．０のヒスチジン緩衝液を選択して添加物（安定剤）の処方をスクリーニングした。
＜実施例２：安定剤のスクリーニング試験＞
抗体安定性への各添加物による影響を更に研究するために、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖又はトレハロースの１種又はその組合せの製剤を選択して比較試験を実施した。即ち、上記各添加物又はその組合せを、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体ｈｕ１８が含まれる２０ｍＭのヒスチジン緩衝液又はクエン酸緩衝液にそれぞれ加え、具体的な処方情報が表４に示される。各処方製剤を分注してから４０℃で静置し、それぞれ０週目、２週目、４週目に取り出して分析と測定を行った。分子排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）により抗体ｈｕ１８単体含有量の変化を測定し、弱カチオン高速液体クロマトグラフィー（ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ）により抗体ｈｕ１８の電荷主ピーク含有量を測定した。結果を表５に示す。
安定性の考察結果によれば、各添加物の製剤処方サンプルを４０℃高温で２週間静置した後、抗体はいずれも比較的に強い熱安定性を有する。
各データを総合的に分析し、Ｆ１３～Ｆ１７とＦ１８～Ｆ２１とを比較したところ、マンニトール、ソルビトール、ショ糖及びトレハロースと塩化ナトリウムの添加物組合せがマンニトール、ソルビトール、ショ糖及びトレハロースの単一添加物よりも優れ、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣの単体含有量及びＣＥＸ‐ＨＰＬＣの主ピーク含有量の下降傾斜度がより小さいことが分かった。トレハロースが含まれる添加物の場合、ｐＨ値が５．５のヒスチジン緩衝系において最も安定的であり、抗体単体純度の下降傾斜度が０．１１％／週間と小さく、抗体主要電荷の下降傾斜度が僅か３．７２％／週間であり、ｐＨ値６．０の場合よりも明らかに小さい。
そのため、ｐＨ値が５．５の、トレハロースと塩化ナトリウムの添加物組合せを使う場合、製品の安定性の観点からより有利である。それと同時に、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ単体含有量の下降について、ｐＨ値が６．０のヒスチジン緩衝系（Ｆ１７）がｐＨ値が６．０のクエン酸緩衝系（Ｆ２３）よりも明らかに優れる。
Figure 2023510928000005
Figure 2023510928000006
 注：「‐」は未添加を示す。
Figure 2023510928000007
＜実施例３：界面活性剤のスクリーニング試験＞
液体製剤に添加される界面活性剤は、一般的に、例えば、抗体凝集の低減又は製剤における粒状物の形成の最小化を図るために、保存中に例えば抗体などのタンパク質を空気／溶液界面により誘導される応力、溶液／表面により誘導される応力の影響からを保護するための試薬であり、抗体の物理的及び化学的性質の安定化に有利である。２０ｍのＭヒスチジン緩衝液（ヒスチジンとヒスチジン塩酸塩のモル比が１：１で、ｐＨ値が６．０）と２０ｍｇ／ｍｌの抗体ｈｕ１８が含まれる製剤に異なる濃度のポリソルベート２０又はポリソルベート８０をそれぞれ加え、４０℃で４週間静置した後、分析と測定を行った。結果を表６に示す。
総合的に分析したところ、界面活性剤のスクリーニング試験（Ｆ１７、Ｆ２４、Ｆ２５及びＦ２６）の結果によれば、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ単体含有量とＣＥＸ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量への異なる濃度のポリソルベート８０又はポリソルベート２０の添加による影響が明確ではない。
Figure 2023510928000008
以上をまとめ、各緩衝系、各ｐＨ値、各抗体濃度及び各添加物と界面活性剤成分について考察して、組換えヒト化抗ＢＴＬＡモノクローナル抗体抗体ｈｕ１８の安定性を研究するとともに、最適な液体製剤のレシピを決定する。抗体ｈｕ１８は、ヒスチジン緩衝液によりｐＨ値を調節し、トレハロースと塩化ナトリウムにより製剤の浸透圧を調節し、ポリソルベート８０を添加して製剤の溶解性を向上させる。
＜実施例４：製剤の長時間安定性の研究＞
通常、治療性抗体が含まれる液体薬物製品を２～８℃の条件で保存する必要があるため、製剤が長時間保存において高安定性を保持できることは、非常に重要である。上記のスクリーニング結果に基づき、前の２６個の処方を基に２７番の処方を設計して製剤の長時間安定性について研究した。
４ロットの原液を選択し、表７に示される２７番の処方製剤を調製して透明な小瓶にそれぞれ保存し、２～８℃の条件で６ヶ月静置した後、各サンプルに対して分析と測定を行った。（ａ）肉眼観察による外観、（ｂ）光遮蔽法により測定される不溶性微粒子（ＯＤ４０５ｎｍ）、（ｃ）ｐＨ値、（ｄ）ＣＥ‐ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動）法により測定される抗体の分子量、（ｄ）ＳＥＣ‐ＨＰＬＣにより測定される抗体単体（品質標準：≧９７．０％）、ポリマー（品質標準：≦３．０％）、又はフラグメントの含有量（品質標準：≦１．０％）、（ｅ）ＣＥＸ‐ＨＰＬＣにより測定される抗体の主要電荷（品質標準：≧７０．０％）、酸性電荷（品質標準：≦３０．０％）、又は塩基性電荷の含有量（品質標準：≦１５．０％）、（ｆ）ＥＬＩＳＡ法により測定される抗体の結合活性（品質標準：対比品の７０％～１３０％）、（ｇ）タンパク質の含有量（品質標準：１８～２２ｍｇ／ｍｌ）などのパラメータにより、安定性を評価した。
結果によれば、４ロットの原液を２７番の製剤処方に使用する場合、その外観、ｐＨ値、不溶性微粒子、タンパク質の含有量、純度（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ（分子排除高速液体クロマトグラフィー）、ＣＥＸ‐ＨＰＬＣ（弱カチオン交換高速液体クロマトグラフィー）、Ｒ‐ＣＥ‐ＳＤＳ（還元電気泳動法）、ＮＲ‐ＣＥ‐ＳＤＳ（非還元電気泳動法）及び生物活性において明らかな変化がないことを示し、具体的には表８にいずれも示される。結果によれば、上記４ロットの原液は、２７番の製剤処方を２～８℃の条件で０～２４ヶ月保存する間に非常に良好な安定性を有する。
Figure 2023510928000009
 注：ヒスチジン緩衝液がヒスチジンとヒスチジン塩酸塩によりモル比１：３で調製される。
Figure 2023510928000010
Figure 2023510928000011
Figure 2023510928000012
Figure 2023510928000013
 注：表に記載されるＮＡは、この時点で重要でない検出項目であり、当該サンプリング時点で検出しないことを示す。ＮＲは、当該時点に到達していないことを示す。下記同様。
＜実施例５：製剤の加速安定性の研究＞
４ロットの原液を選択し、表７に示される２７番の処方製剤を調製して透明な小瓶にそれぞれ保存し、２５±２℃、６０±５％相対湿度（ＲＨ）の条件で０～１２ヶ月静置した後、各サンプルに対して分析と測定を行った。
表９に示されるように、２７番の処方製剤はタンパク質分解に対して更なる高安定性を有し、２５±２℃で測定される分解動力学パラメータが室温環境における１２ヶ月保存の要求を満たした。
Figure 2023510928000014
Figure 2023510928000015
Figure 2023510928000016
 注：表に記載されるＮＡは、この時点で重要でない検出項目であり、当該サンプリング時点で検出しないことを示す。ＮＲは、当該時点に到達していないことを示す。
＜実施例６：ＥＬＩＳＡによるヒト化抗体とｈＢＴＬＡとの結合の検出＞
従来のＥＬＩＳＡ検出方法によりヒト化抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９とｈＢＴＬＡとの結合特異性を検出した。０．５μｇ／ｍｌのｈＢＴＬＡで９６ウェルマイクロプレートを被覆し、３７℃の恒温で６０分間インキュベートした。次に、ウェル内の溶液を捨てて、洗浄緩衝液で３回洗浄し、２％ＢＳＡを含有するＰＢＳ溶液を加えて６０分間ブロックした。洗浄緩衝液で３回洗浄した後、勾配希釈した抗体溶液（溶液における抗体を除くその他の成分が処方番号２７と同じ）を加え、３７℃で６０分間インキュベートした後、洗浄緩衝液で３回リンスし、その後、１：１００００倍で希釈したＨＲＰ標識のマウス抗ヒトＩｇＧ４二次抗体を加え、３７℃で１時間インキュベートし、洗浄緩衝液で３回リンスした後、１００μｌＴＭＢ基質溶液を加えて発色させ、室温で３０分間反応させた後、１００μｌ、２Ｍの塩酸溶液で反応を停止して、４５０ｎｍに吸光度を読み出した。
そのＥＣ５０値を下記表１０に示す。結果によれば、ヒト化抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９は、ｈＢＴＬＡと特異的に結合することができる。
Figure 2023510928000017
＜実施例７：ＦＡＣＳによるヒト化抗体と２９３Ｆ細胞上のｈＢＴＬＡとの結合の検出＞
細胞に基づくフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により、ヒト化抗ＢＴＬＡ抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９と細胞で発現させたｈＢＴＬＡとの結合能力を測定した。ｈＢＴＬＡを発現させた２９３Ｆ細胞を消化した後、遠心分離してＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、細胞量が２．５×１０4で、体積が５０μｌとなるように、９６ウェル丸底プレートのウェルに加え、５０μｌの異なる濃度の抗体希釈液（開始濃度１０μｇ／ｍｌ、３倍で滴定、希釈液における抗体を除くその他の成分が処方番号２７と同じ）を加えて均一に混合し、室温で３０ｍｉｎインキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で細胞を２回洗浄した後、１００μｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ‐ＰＥ抗体を加え、遮光で３０ｍｉｎインキュベートし、ＦＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒで２回洗浄した後、ＦＡＣＳ検出を行った。洗浄した細胞を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）及び受容体内在化を防止する０．０２％アジ化ナトリウムを含有する４℃緩衝剤に再懸濁させた後、フローサイトメトリーにより分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートからＰＩ陽性細胞を排除し、生細胞に対してゲート制御を行い、その幾何学的平均蛍光を計測した。ＰｒｉｓｍＴＭソフトウェアのＳ形用量‐応答モデルを用いてデータを分析した。
各抗体のＥＣ５０値を下記表１１に示す。結果によれば、ヒト化抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９は、２９３Ｆ細胞上のｈＢＴＬＡと効果的に結合できることを示す。
Figure 2023510928000018
＜実施例８：ＦＡＣＳによるＢＴＬＡとＨＶＥＭとの結合に対するヒト化抗体の遮断作用の検出＞
細胞に基づくフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）により測定し、ｈＢＴＬＡと２９３Ｆ細胞に発現されたｈＨＶＥＭとの結合に対するヒト化抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９の遮断能力を検出した。ｈＨＶＥＭ‐２９３Ｆを安定的に発現させた細胞を消化した後、遠心分離してＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させ、細胞量が２．５×１０4個で、体積が５０μｌとなるように、９６ウェル丸底プレートのウェルに加え、事前にビオチン標識を実施したｈＢＴＬＡ（１μｇ／ｍｌ）タンパク質を加えて混合し、４℃で１５分間インキュベートし、５０μｌの異なる濃度のヒト化抗体希釈液（開始５μｇ／ｍｌ、３倍で滴定、希釈液における抗体を除くその他の成分が処方番号２７と同じ）を更に加えて均一に混合し、室温で３０ｍｉｎインキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で細胞を２回洗浄した後、１００μｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ‐ＰＥ抗体を加え、避光で３０ｍｉｎインキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、ＦＡＣＳ検出を行った。洗浄した細胞を、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）及び受容体内在化を防止する０．０２％アジ化ナトリウムを含有する４℃緩衝剤に再懸濁させた後、フローサイトメトリーにより分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートからＰＩ陽性細胞を排除し、生細胞に対してゲート制御を行い、その幾何学的平均蛍光を計測した。ＰｒｉｓｍTMソフトウェアのＳ形用量‐応答モデルを用いてデータを分析した。
各抗体のＩＣ５０値を下記表１２に示す。結果によれば、ヒト化抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９は、ＢＴＬＡと細胞表面のＨＶＥＭとの結合を効果的に遮断できることを示す。
Figure 2023510928000019
＜実施例９：ヒト化抗ＢＴＬＡ抗体によるＴ細胞活性化の促進＞
ｈＰＤ‐Ｌ１／ｈＨＶＥＭを安定的に発現させたＣＨＯ細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、各ウェルの細胞量が５×１０4であり、３７℃、７％ＣＯ2で一晩培養し、細胞上清を除去し、ウェルごとに４０μｌのヒト化抗ＢＴＬＡ抗体希釈液（開始濃度６０μｇ／ｍｌ、３倍濃度勾配で希釈し、希釈液における抗体を除くその他の成分が処方番号２７と同じ）を加え、ｈＰＤ‐１／ｈＢＴＬＡ／ＮＦＡＴ‐ルシフェラーゼを持続的に発現できる４０μｌのＪｕｒｋａｔレポーター細胞を加え、全細胞数を１×１０5細胞とし、３７℃、７％ＣＯ2で６時間培養し、ルシフェラーゼ試薬を加え、マイクロプレートリーダーにより発光値を検出した。
各抗体のＥＣ５０値を下記表１３に示す。結果によれば、ヒト化抗ＢＴＬＡ抗体ｈｕ１７、ｈｕ１８、ｈｕ１９は、Ｔ細胞活性化を効果的に促進できることを示す。
Figure 2023510928000020
＜実施例１０：ヒト化抗ＢＴＬＡ抗体とｈＢＴＬＡとの親和力＞
ＧＥヘルスケアライフサイエンス社製のＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器を用いて検出試験を行い、Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５チップを機器にセットし、系の緩衝液としてＨＢＳ‐ＥＰ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０）を用いた。ＢＴＬＡ‐Ｆｃ抗原をチップ検出チャンネルにおいて結合し、４００ｍＭのＥＤＣと１００ｍＭのＮＨＳの混合液を１０μＬ／ｍｉｎで４２０ｓ活性化されたチップの表面に注入し、最終濃度が２０μｇ／ｍＬになるまで、ＢＴＬＡ‐Ｆｃ抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム／酢酸（ｐＨ ５．５）緩衝液に希釈し、１０μＬ／ｍｉｎで注入して結合し、１Ｍのエタノールアミン‐塩酸溶液（ｐＨ８．５）を１０μＬ／ｍｉｎで４２０ｓ注入してブロックした。
Ｂｉａｃｏｒｅ系緩衝液を用いて抗体を２倍で勾配希釈し（希釈液における抗体を除くその他の成分が処方番号２７と同じ）、合計６個の濃度点がある。濃度勾配は、２４ｎＭ、１２ｎＭ、６ｎＭ、３ｎＭ、１．５ｎＭ、及び０．７５ｎＭであり、２４ｎＭは反復試験である。データ分析には、ＧＥヘルスケアライフサイエンス社製のバージョン番号３．０のデータ分析ソフトウェアＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅが使用された。データフィッティングには、モデル１：１ Ｂｉｎｄｉｎｇが使用される。フィッティングにより抗体と抗原との間の結合の反応速度定数結合速度Ｋａ（１／Ｍｓ）、解離速度Ｋｄ（１／ｓ）、親和力定数ＫＤ（Ｍ）が得られ、結果は表１４に示される。
Figure 2023510928000021
＜実施例１１：ヒト化抗体と様々な種ＢＴＬＡとの結合の反応速度の特性決定＞
キメラ抗体とカニクイザル由来及びマウス由来のＢＴＬＡとの間の交差反応を検出するために、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ検定が使用された。簡単に言えば、ヒトＢＴＬＡ、カニクイザルＢＴＬＡ又はマウスＢＴＬＡを活性化させたＣＭ５生物学的センサチップに結合して、約１００～２００個の応答単位（ＲＵ）を実現し、その後、ＩＭエタノールアミンで未反応基をブロックした。３０回／分間でＳＰＲ作動緩衝液に、０．１２ｎＭから９０ｎＭまで濃度が増加していくヒト化抗体サンプル（サンプルにおける抗体がｈｕ１７であり、その他の成分が処方番号２７と同じ）を注射し、空白流動室からのＲＵを減算することにより異なる種ＢＴＬＡの場合の結合応答を計算した。
結果を図１に示す。ｈｕ１７と様々な種ＢＴＬＡとの結合の比較結果から明らかなように、ｈｕ１７は、ヒトＢＴＬＡと高親和力を有するだけでなく、カニクイザル由来のＢＴＬＡと類似した親和力を有するが、マウスＢＴＬＡとはほぼ結合しなかった。
＜実施例１２：ヒト化抗体（処方番号：２７）によるマウス腫瘍成長への抑制効果＞
マウス結腸癌（ＭＣ３８）細胞（ＡＴＣＣ）にＨｘｐ‐ｈＨＶＥＭプラスミドをエレクトロトランスフェクションして、ＭＣ３８‐ｈＨＶＭＥ細胞バンクを構築し、その後、限界希釈法により細胞サブクローンを行い、フローサイトメーターにより単一クローンをスクリーニングし、ＭＣ３８‐ＨＶＥＭ細胞を得て、次に、ＭＣ３８‐ｈＨＶＥＭ細胞を１×１０6個／０．１ｍＬの濃度でＢ‐ｈＢＴＬＡヒト化雌マウスの右側の皮下に接種し、腫瘍が約１１８ｍｍ3まで成長すると、腫瘍の体積に応じてランダムに群分けし、１群を８匹とし、合計５群に分け、それぞれ、０．９％塩化ナトリウム注射液溶剤対照群Ｇ１、ＫＬＨ（抗キーホールリンペットヘモシアニン抗体）（１０ｍｇ／ｋｇ）陰性対照群Ｇ２、ｈｕ１８（１ｍｇ／ｋｇ）群Ｇ３、ｈｕ１８（３ｍｇ／ｋｇ）群Ｇ４及びｈｕ１８（１０ｍｇ／ｋｇ）群Ｇ５とした。すべての群の投与経路は腹腔内注射とし、１週間ごとに２回投与し、連続的に７回投与し、最後回の投与４日間後、試験を終了した。腫瘍の体積及び体重を週に２回測定し、マウスの体重と腫瘍の体積を記録した。試験終了時、動物を安楽死させ、腫瘍を摘出して重量を測り、写真を撮り、相対腫瘍抑制率（ＴＧＩ％、ＴＧＩ％＝（１‐（Ｔi‐Ｔ0）／（Ｖi‐Ｖ0））×１００％、Ｔi治療群の投与終了時の腫瘍体積、Ｔ0治療群の投与開始時の腫瘍体積、Ｖi空白群の投与終了時の腫瘍体積、Ｖ0空白群の投与開始時の腫瘍体積）を計算した。
各群の試験品によるＭＣ３８‐ｈＨＶＥＭ細胞移植Ｂ‐ｈＢＴＬＡマウスの腫瘍体積への影響の結果を表１５及び図２に示す。初回投与してから２１日間後、ＫＬＨ（１０ｍｇ／ｋｇ）陰性対照群の平均腫瘍体積は１５６０±２５６ｍｍ3であり、他の投与群の平均腫瘍体積はそれぞれ１０７３±２２４ｍｍ3、７４７±２６８ｍｍ3、及び８６８±２１１ｍｍ3である。各投与群とＫＬＨ陰性対照群とを比較すると、ＴＧＩ％はそれぞれ３３．７％、５６．４％、及び４８．０％であり、Ｐ値はそれぞれ０．１７５、０．０４６、及び０．０５６であることから、試験薬物ｈｕ１８は、腫瘍成長に対して一定の抑制効果を有することが示される。
Figure 2023510928000022
 注：ａ：平均数±標準誤差；ｂ：投与群の腫瘍体積とＫＬＨ陰性対照群の腫瘍体積とを、投与２１日間後に統計学的に比較し、ｔ‐ｔｅｓｔを行った。
各群の試験品によるＭＣ３８‐ｈＨＶＥＭ細胞移植Ｂ‐ｈＢＴＬＡマウスの体重への影響結果を表１６と図３に示す。すべての試験動物は、投与期間に亘って、活動及び摂食の状態が良好であり、各投与群の動物の体重には一定の程度の上昇が認められた。試験期間には試験動物の死亡がなかった。投与してから２１日間後、ＫＬＨ陰性対照群のマウスの体重と比べ、各投与群のマウスの体重には有意な変化がない（Ｐ＞０．０５）ことから、試験動物の試験品への耐性が良好であることは分かった。
Figure 2023510928000023
 注：ａ：平均数±標準誤差；ｂ：投与群体重とＫＬＨ陰性対照群の体重とを投与してから２１日間後に統計学的に比較し、ｔ‐ｔｅｓｔを行った。
＜実施例１３：ヒト化抗体ｈｕ１８（処方番号：２７）はＡＤＣＣエフェクター機能がなかった＞
抗体が細胞表面の標的タンパク質に結合され、その後、エフェクター細胞に発現されたＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に連結されると、ＡＤＣＣを開始させた。ヒトＩｇＧ１はＦｃγＲに対し、特にＦｃγＲ‐Ｉ及びＦｃγＲ‐ＩＩＩＡに対して、ＩｇＧ４よりも明らかに高い結合親和力を示すことが明確に記載されている。この親和力はＡＤＣＣを活性化するＩｇＧ１の強度と関わっている。ＡＤＣＣに関しては、抗体が細胞表面標的及びＣ１ｑタンパク質と架橋し、次に、補体複合体形成及び標的細胞分解のカスケード反応時、ＣＤＣが活性化された。ＡＤＣＣ及びＣＤＣの代理として、抗体のＦｃγＲ及びＣ１ｑへの結合の検出は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣＣの基本指標として機能できる。したがって、本発明は、ｂｉａｃｏｒｅＴ２００（ＧＥ）を用いて、モノクローナル抗体の主なＦｃγＲへの結合の速度論的親和力を評価した。
ＧＥの抗‐Ｈｉｓ抗体はセンサウェハに固定されている。組換えヒトＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）Ｖ１７６、組換えヒトＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）Ｖ１６７、組換えヒトＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、及び組換えヒトＦｃＲｎを含む各種のＦｃ受容体がキャプチャーされた後、一連の希釈した組換えヒト抗‐ＢＴＬＡ抗体（即ちｈｕ１８）を注射するし、相互作用の結合性質を測定して分析した。ｈｕ１８はＩｇＧ４サブタイプ抗体であり、ｈｕ１８‐ＩｇＧ１はＩｇＧ１サブタイプであり、ｈｕ１８とは同じＦａｂを共有し、陽性対照とされた。
結果として、表１７に示すように、ＩｇＧ１サブタイプの対照抗体に比べて、ＩｇＧ４サブタイプの組換えヒト抗‐ＢＴＬＡ抗体は、Ｆｃ受容体との結合が弱く、ｈｕ１８抗体は、ＩｇＧ１サブタイプ対照抗体に比べて、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）Ｖ１７６との相互作用が４００倍弱くなった。このことからｈｕ１８はＡＤＣＣエフェクターが低く又はなかったことが分かった。表１７に示されるように、ｈｕ１８抗体はＣ１ｑと結合せず、一方、ｈｕ１８‐ＩｇＧ１抗体はＣ１ｑと結合できる。
Figure 2023510928000024
Figure 2023510928000025

Claims (13)

  1. （１）緩衝液と、
    （２）それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３に示されるアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示されるアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と、を有する抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントと、を含む医薬組成物。
  2. 前記緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液から選ばれ、好ましくは、前記緩衝液はヒスチジン緩衝液であり、より好ましくは、前記緩衝液はヒスチジン‐塩酸塩緩衝液であり、より好ましくはヒスチジン‐ヒスチジン塩酸塩緩衝液である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記緩衝液の濃度は約１０～３０ｍＭであり、好ましくは、前記緩衝液のｐＨ値は約５．０～６．５であり、好ましくは約５．０～６．０である、請求項２に記載の医薬組成物。
  4. 安定剤を更に含み、前記安定剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、ショ糖、マルトース、キシリトール、トレハロースの１種又は２種以上から選ばれ、好ましくは、前記安定剤はトレハロースと塩化ナトリウムの組合せである、請求項１～３の何れか１項に記載の医薬組成物。
  5. 前記安定剤は濃度が約５０～２００ｍＭである塩化ナトリウムであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるマンニトールであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるソルビトールであり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるショ糖であり、又は前記安定剤は濃度が約１００～３００ｍＭであるトレハロースであり、又は前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せであり、又は前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのソルビトールの組合せであり、又は前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのショ糖の組合せであり、又は前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せであり、好ましくは、前記安定剤は約３０～１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せである、請求項４に記載の医薬組成物。
  6. 界面活性剤を更に含み、前記界面活性剤はポリソルベート８０、ポリソルベート２０、又はポロキサマー１８８から選ばれ、好ましくは、前記界面活性剤はポリソルベート８０である、請求項１～５の何れか１項に記載の医薬組成物。
  7. 前記界面活性剤の濃度は約０．０１％～０．１％であり、好ましくは、前記界面活性剤の濃度は約０．０１％～０．０５％である、請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 前記抗ＢＴＬＡ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域と、を有し、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域と、を有し、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示されるアミノ酸配列の重鎖可変領域と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列の軽鎖可変領域と、を有する、請求項１～７の何れか１項に記載の医薬組成物。
  9. 前記抗ＢＴＬＡ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示される重鎖アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示される軽鎖アミノ酸配列と、を有する、請求項１～７の何れか１項に記載の医薬組成物。
  10. 前記抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントの濃度は約５～１００ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは約１０～５０ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは１５～２５ｍｇ／ｍＬである、請求項１～９の何れか１項に記載の医薬組成物。
  11. 下記（１）～（１３）の何れか１項に示される成分を含み、或いは下記（１）～（１３）の何れか１項に示される成分により調製され、即ち、
    （１）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （２）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （３）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのショ糖の組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （４）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのソルビトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （５）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭのトレハロース、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （６）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５～６．５である約１０～３０ｍＭのクエン酸緩衝液、（ｃ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭのトレハロース、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （７）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５～６．５である約１０～３０ｍＭのクエン酸緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （８）（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約１０～３０ｍＭの酢酸緩衝液、（ｃ）約３０ｍＭ～約１００ｍＭの塩化ナトリウムと約５０～２００ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０１％～０．０５％のポリソルベート８０、
    （９）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約６．０である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５４ｍＭの塩化ナトリウムと約１３２ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、
    （１０）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約２２０ｍＭのトレハロース、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、
    （１１）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのマンニトールの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、
    （１２）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．５である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、
    （１３）（ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメント、（ｂ）ｐＨ値が約５．０～６．０である約２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、（ｃ）約５０ｍＭの塩化ナトリウムと約１４０ｍＭのトレハロースの組合せ、（ｄ）約０．０２％のポリソルベート８０、である、請求項１～９の何れか１項に記載の医薬組成物。
  12. 下記成分を含み、或いは下記成分により調製され、即ち、ｐＨ値が５．５±０．３であり、濃度が２０±５ｍＭであるヒスチジン‐ヒスチジン塩酸塩緩衝液と、４０～８０ｍＭの塩化ナトリウムと、１２０～１５０ｍＭのトレハロースと、ｗ／ｖで計算する場合、０．０２～０．０４％のポリソルベート８０と、１５～２５ｍｇ／ｍＬの抗ＢＴＬＡ抗体又はその抗原結合フラグメントであり、前記抗ＢＴＬＡ抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１に示される重鎖アミノ酸配列と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２に示される軽鎖アミノ酸配列と、を有することを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
  13. ＢＴＬＡ媒介疾患を治療又は予防するための薬物の調製における請求項１～１２の何れか１項に記載の医薬組成物の使用であって、好ましくは、前記疾患は腫瘍、感染症又は自己免疫疾患であり、好ましくは、前記腫瘍は、メラノーマ、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、骨癌、皮膚癌、頭癌又は首癌、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部癌、胃癌、睾丸癌、食道癌、小腸癌、子宮頸癌、膣癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系癌、甲状腺癌、副腎癌、軟部組織癌、尿道癌、慢性或いは急性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期固形腫、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系の新生物、原発性中枢神経系リンパ腫、腫瘍血管形成、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘発癌を含み、前記自己免疫疾患は、器官特異的自己免疫疾患及び全身性自己免疫疾患を含み、前記器官特異的自己免疫疾患は、慢性リンパ球性甲状腺炎、甲状腺機能亢進症、インスリン依存性糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性結腸炎、慢性萎縮性胃炎を伴う悪性貧血、肺出血腎炎症候群、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性脳脊髄硬化症、急性特発性多神経炎を含み、前記全身性自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性血管炎、強皮症、天胞瘡、皮膚筋炎、混合性結合組織病、自己免疫性溶血性貧血、潰瘍性結腸炎を含む、使用。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8546541B2 (en) * 2002-06-20 2013-10-01 Washington University Compositions and methods for modulating lymphocyte activity
WO2011014438A1 (en) * 2009-07-31 2011-02-03 N.V. Organon Fully human antibodies to btla
CA3013333A1 (en) * 2016-02-26 2017-08-31 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Antibodies having specificity for btla and uses thereof
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